UJI KUANTITATIF DAN

KUALITATIF AIR
(BAKTERI COLIFORM)
Mikrobiologi
Pendidikan Biologi A 2020
2022
 Dosen Pengampu:
Dr. Hj. Any Fitriani, M.Si.
Dr. Hj. Peristiwati, M.Kes.

Kelompok 5A - Pendidikan Biologi A 2020

Fadia Firdaus 2002825 Lairani Olsiara 2004100

Fitriyyatul Hasanah 2001669 Nadimah Mukhsin 2001502

Indri Nuraida 2007031 Raden`M. Nafhan 2007676

 Tujuan Uji Kuantitatif dan Kualitatif Air (Bakteri Coliform)

Untuk menentukan kehadiran bakteri coliform dalam

sampel air

Untuk memperkirakan jumlah bakteri coliform dalam sampel

air dengan metode Jumlah Perkiraan Terdekat (JPT).
Prsinsip DasarUji Kuantitatif dan Kualitatif Air (Bakteri Coliform)

Bakteri golongan coliform

Bakteri Coliform dinyatakan sebagai bakteri
Pemeriksaan air secara indikator pencemaran air.
mikrobiologis sangat penting dan
dapat dilakukan terhadap semua
Coliform non fekal berasal
jenis air yang ada, terutama dari hewan atau tanaman
dilakukan untuk menentukan yang sudah mati, misalnya
standar kualitas air.. Mengingat Enterobacter aerogenes.
bahwa air merupakan sumber
kehidupan yang utama bagi
coliform fekal berasal dari
semua makhluk hidup. kotoran manusia dan hewan,
misalnya Escherichia coli.
 Prsinsip Dasar Uji Kuantitatif dan Kualitatif Air (Bakteri Coliform)
Untuk mengetahui jumlah coliform dalam suatu sampel dapat digunakan metode Jumlah
perkiraan terdekat (JPT) bakteri coliform. Prinsip dari metode ini adalah :

1. Fermentasi laktosa selama 24 jam oleh bakteri coliform yang akan menghasilkan asam
dan gas yang tertangkap oleh tabung Durham dalam tabung uji.

2. Bakteri coliform memilIki kemampuan menguraikan laktosa sebagai sumber karbon

sedangkan kelompok mikroba usus yang lain tidak.

3. Sebagai indikator adanya proses penguraian laktosa menjadi asam, maka ke dalam
medium ditambahkan indikator bromcressol purple (Bcp) yang berwarna ungu dalam
keadaan netral dan berwarna kuning dalam suasana asam

4. Uji kualitatif coliform secara lengkap terdiri dari tiga tahap, yaitu uji penduga, uji
ketetapan, dan uji kelengkapan. Pada hasil pengujian uji kelengkapan, selain membuktikan
uji pertama juga dapat menentukan jenis bakteri coliform yang terdapat dalam sampel.
 Prosedur
Pengambilan Air
Keran
Prosedur Pengambilan Air Kran

Pilih keran yang Nyalakan keran dan Sterilkan mulut keran

sering digunakan. Lap biarkan air mengalir selama 1 - 5 menit
keran menggunakan dengan aliran dengan nyala api
kain untuk maksimum selama 1 - 2 (pembakar bunsen)
menghilangkan menit, kemudian
kotoran matikan.
Prosedur Pengambilan Air Kran

Nyalakan keran lagi Buka botol yang di Segera pegang botol di

dan biarkan air sudah disterilkan bawah pancaran air dan isi.
mengalir selama 1 - 2 dengan membuka Saat mengisi, pegang
menit dengan tutupnya dengan tutupnya menghadap ke
kecepatan aliran hati-hati. bawah untuk mencegah
sedang. masuknya debu yang dapat
mencemari sampel.
Prosedur Pengambilan Air Kran
Contoh botol sampel

Isi botol dengan air Botol ditutup rapat

keran sampai ¾ dan diberi label,
volume botol sampel air siap
(sumber: petrolab.co.id)
diamati
Pembuatan Media
Kaldu Laktosa
(Lactose Broth)
 ALAT YANG DIBUTUHKAN

Tabung Reaksi Kaca Pengaduk Mikropipet Tabung Durham Sumbat Kapas

Autoclave Neraca Analitik Beaker Glass Hotplate

 BAHAN YANG DIBUTUHKAN

Air Kaldu 1000 ml Pepton (10 gr)

NaCl (5 gr) Laktosa (5 gr)

 Langkah Kerja Pembuatan Media Lactose Broth

Sumber: youtube.com/enviroitsyoutu.be/4vHZZztxEm8

Timbang bahan yang Masukkan semua bahan yang Larutkan dan panaskan
dibutuhkan sebelumnya sudah ditimbang menggunakan hotplate sambil
ke dalam beaker glass. diaduk menggunakan kaca
pengaduk sampai homogen.Atur
agar pH 7-7,2
 Langkah Kerja Pembuatan Media Lactose Broth
Masukkan medium lactose
broth ke dalam tabung
reaksi masing-masing 10 ml
bersama tabung durham
yang terbalik dan berisi
media (tidak boleh ada
gelembung udara dalam
tabung durham)

Sumber:
youtube.com/enviroitsyoutu.be/4vH
ZZztxEm8
Langkah Kerja Pembuatan Media Lactose Broth

Tutup rapat semua tabung Sterilkan menggunakan

dengan sumbat kapas. autoclave pada suhu 121°C
selama 15 menit, angkat dan
dinginkan.
Pembuatan Media
Eosin methylene-Blue
Agar (EMB Agar)
 ALAT DAN BAHAN YANG DIBUTUHKAN

Kaca Pengaduk Cawan Petri Labu Erlenmeyer

Autoclave

Neraca Analitik Hotplate stirrer Aquades Bubuk EMB Agar

Langkah Kerja Pembuatan Eosin methylene-Blue Agar

Sumber: https://www.youtube.com/watch?v=LOUFE-UpW6Y

Timbang bubuk EMB Masukkan bubuk EMB agar Masukkan aquades

Agar 7,2 gr yang sudah ditimbag ke sebanyak 200 ml
dalam labu erlenmeyer
Langkah Kerja Pembuatan Eosin methylene-Blue Agar

Sumber: https://www.youtube.com/watch?v=LOUFE-UpW6Y

Homogenkan di atas Masukkan ke dalam Jika selesai di

Hotplate Stirrer Autoclave untuk di sterilisasi sterilisasi,tuang media
121˚ C selama 15 menit pada cawan petri
Langkah Kerja Pembuatan Eosin methylene-Blue Agar

Sumber: https://www.youtube.com/watch?v=LOUFE-UpW6Y

Jika agar telah memadat bissa langsung di gunakan atau di masukkan ke

dalam lemari pendingin
 Uji Kualitas Air
1 2 3
Uji Uji Uji
Penduga Penguat Pelengkap
01 Uji Penduga
 Prinsip Dasar
Uji dugaan juga memungkinkan ahli mikrobiologi untuk
memperoleh beberapa gagasan tentang jumlah organisme
coliform yang ada melalui uji angka yang paling mungkin
(MPN).
Hasil uji penduga menunjukkan reaksi positif ditandai dengan
terbentuknya asam (perubahan warna media/menjadi keruh)
dan gas pada tabung durham. Mikroba penghasil gas yang
tumbuh pada tabung adalah kelompok mikroba yang mampu
memfermentasikan laktosa.
 ALAT YANG DIGUNAKAN

Shopee.co.id Goalkes.com Tokopedia.com

Mikropipet Tip Mikropipet Bunsen

4 unit 4 unit 1 unit

Medicalogy.com Tokopedia.com Ibs.co.id Medicalogy.com

Rak Tabung Tabung reaksi Inkubator Tabung Durham

3 buah 10 unit 1 unit 10 unit
 BAHAN YANG DIGUNAKAN

Tulisankimia.co.id Klikmro.com
Medicalogy.com

Media cair lactose broth Sampel air yang diuji

Aquades
steril (air keran)
Secukupnya Secukupnya
90 ml
 Langkah Kerja Uji Penduga
Seri Nama Label Sampel 1. Siapkan tiga seri terpisah
yang terdiri dari tiga
Seri A A1 Air keran 10 ml
A2
kelompok, total 3 tabung per
A3 seri, di rak tabung reaksi;
untuk setiap tabung, beri
Seri B B1 Air keran 1 ml label sumber air dan volume
B2
B3
sampel. Tambahkan 1 tabung
reaksi sebagai kontrol.
Seri C C1 Air keran 0,1 ml
C2
C3

Kontrol X Aquades
 Langkah Kerja Uji Penduga
Seri A Seri B Seri C

2. Isi 9 tabung tersebut dengan

media cair lactose broth steril
sebanyak 10 ml. Lengkapi dengan
A1 A2 A3 B1 B2 B3 C1 C2 C3 tabung durham didalamnya.

(Cappuccino, 2019)
 Langkah Kerja Uji Penduga
3. Mulut tabung reaksi difiksasi 4. Sampel dimasukan ke tabung
menggunakan bunsen. reaksi sesuai dengan label.

Sumber:
https://www.youtube.com/watch?v=PnK_l1C
QjIA

PS: Ulangi satu persatu pada tabung reaksi lainnya. (Cappuccino, 2019)
 Langkah Kerja Uji Penduga

Sumber: Myworldfisheries
(Cappuccino, 2019)

5. Sebagai kontrol, masukkan 1 ml aquades 6. Semua medium yang sudah

kedalam 1 ml media cair lactose broth diinokulasi sampel air diinkubasi
steril. Lakukan fiksasi pada tabung tersebut. pada suhu 37°C selama 24-48 jam.
 Langkah Kerja Uji Penduga
6. Mengamati semua tabung, bila terbentuk gas dan asam berarti hasilnya positif.

X A1 A2 A3 B1 B2 B3 C1 C2 C3

(Cappuccino, 2019)

Indikator: Asam dilihat dari perubahan warna menjadi keruh dan gas dapat dilihat
dalam tabung durham berupa gelembung udara.
 Hasil
Hasil Uji Penduga Keterangan

Dalam 3 tabung 10 mL menunjukan hasil uji positif

(terdapat produksi asam dan gas) yang ditandai dengan
perubahan warna media serta terbentuknya gas pada
A1 A2 A3
tabung durham.

Dalam 3 tabung 1 mL menunjukan hasil uji positif

(terdapat produksi asam dan gas) yang ditandai dengan
B1 B2 B3 perubahan warna media serta terbentuknya gas pada
tabung durham.

X Dalam 3 tabung 0,1 mL menunjukan hasil uji positif (tidak

terdapat produksi gelembung dan hanya produksi asam)
yang ditandai dengan perubahan warna media. Hal
(Cappuccino, 2019) C1 C2 C3
tersebut menunjukkan adanya bakteri coliform non
fermentatif.
Uji Kuantitatif Metode JPT
(Berdasarkan data hasil uji
Penduga/Presumptive Test
Uji Kualitatif metode JPT

Hasil Uji Sampel pada Hasil Uji Sampel pada Hasil Uji Sampel pada
Tabung 10 mL Tabung 1 mL Tabung 0,1 mL
Sumber: Cappuccino, 2019 Sumber: Cappuccino, 2019 Sumber: Cappuccino, 2019

Hasil positif pada Hasil positif pada Hasil positif pada

tabung tabung tabung
10 mL ada 3 tabung 1 mL ada 3 tabung 0,1 mL ada 3 tabung
Uji Kuantitatif metode JPT
Berdasarkan contoh hasil data Uji Penduga (Presumptive
Test) maka dapat diurutkan hasil positif dari tabung 10
mL, 1 mL dan 0,1 mL secara berturut-turut yaitu 3, 3, 0

Jumlah tabung yang positif JPT / 100 ml

dalam pengenceran

10 ml 1 ml 0,1 ml

3 2 3 230,0

3 3 3 1200,0

3 3 1 460,0
 Uji Kuantitatif metode JPT
(Berdasarkan data hasil uji Panduga/Presumptive Test)

Tabel data JPT hasil uji penduga (Presumptive Test)

GAS Readi JPT

ng
Tabung 10 ml Tabung 1 ml Tabung 0,1 ml

Water A1 A2 A3 B1 B2 B3 C1 C2 C3
sample

Top + + + + + + + + + 3-3-3 1200

(Air
keran)
02 Uji Ketetapan
 Prinsip Kerja
Tes yang dikonfirmasi mengharuskan media selektif dan
diferensial (misalnya, eosin-methylene blue agar (EMBA))
diluapkan dari tabung kaldu laktosa positif yang diperoleh
dari tes praduga.
Alat dan Bahan
Alat Bahan

1. Jarum inokulum 1. Sampel positif uji

2. Inkubator pendugaan
3. Bunsen 2. Media EMBA

Jarum inokulum Inkubator Media EMBA Sampel Positif

Bunsen
(wordpress.com) (inkubatorbinder.com) (bukalapak.com) (canalmidi.com) Uji Pendugaan
(Cappuccino, 2019)
 Langkah Kerja
+ Gas
Hasil dari uji dugaan kemudian dilanjutkan
dengan uji ketetapan.
Hasil + Hasil -
1. Dari tabung yang positif gas dan asam
(terutama pada inkubasi 1 X 24 jam),
tanamkan suspensi pada medium EMB
agar (Eosin Methylene Blue agar) Inokulasi dari
secara aseptik dengan menggunakan tabung + pada
EMB agar
jarum inokulasi.

2. Inkubasikan pada suhu 37⁰C selama 1 Tidak ada koloni

X 24 jam. Koloni bakteri E. coli bakteri coliform
(Coliform fekal) tumbuh berwarna Ditumbuhi koloni
merah kehijauan dengan kilat metalik E.coli atau koloni
atau koloni merah muda atau merah coliform lainnya
muda dengan lendir untuk kelompok
coliform lainnya.
Tabel Hasil Uji Ketetapan (confirmed Test)
Uji Konfirmasi (confirmed Test) Keterangan

Koloni merah muda = (+) Coliform non

fekal.

Koloni hijau metalik = (+) Coliform

fekal.

Hasil Uji Sampel pada media EMBA Koloni bening = (+) Coliform non
Sumber: Dr. Gurjeet Kaur, 2020 fermentatif
03 Uji Kelengkapan
 Prinsip Dasar
Uji kelengkapan ini merupakan tahap akhir dari
uji sampel air. Uji ini digunakan untuk memeriksa
koloni coliform yang muncul di medium agar yang
digunakan dalam tes ketetapan.

Uji pelengkap dilakukan dengan

menginokulasikan koloni bakteri pada medium agar
dengan cara digoreskan dan diinkubasi selama 24
jam pada suhu 35°C. agar yang digunakan adalah
endo agar dan Eosin Metil Blue (EMB) (Willey dkk.,
2008).
 ALAT YANG DIBUTUHKAN

Jarum Inokulum Mikrokop Tabung Durham Inkubator Object glass

2 unit 1 unit 1 unit 1 unit 1 unit
1 unit

Pipet Kertas bibolous Bunsen Staining Jar

1 unit
2 unit 1 unit 1 unit
 BAHAN YANG DIBUTUHKAN

Sampel Positif Media Kaldu Laktosa Agar Miring KNA Kristal Violet
1 unit 1 unit 1 unit secukupnya

Safranin Iodin Alkohol 95%

secukupnya
secukupnya secukupnya
 Langkah Kerja Uji Kelengkapan
1. Dari koloni yang Media yang positif
berwarna tadi ditumbuhi oleh E coli
diinokulasikan ke dalam atau koloni coliform
medium kaldu laktosa dan lainnya
medium KNA agar miring,
dengan jarum inokulasi
3. Lakukan pewarnaan
secara aseptik. Inkubasikan
pada suhu 37°C selama
gram dari koloni
1X24 jam. yang tumbuh pada
agar miring KNA.
Bakteri coliform Gram
2. Bila hasilnya positif (gas Kaldu Agar (-) akan menunjukkan
dan asam) sama seperti uji laktosa Miring basil pendek
dugaan maka benar KNA
sampel mengandung menunjukan hasil +
bakteri coliform. Completed test.
 Hasil Uji Kelengkapan
➔ Sampel (a) menunjukkan hasil negatif karena
warna larutan tidak berubah dan tidak
menghasilkan gelembung.

➔ Sampel (b) menunjukkan hasil negatif karena

warna larutan berubah namun tidak
menghasilkan gelembung.

➔ Sampel (c) menunjukkan hasil positif karena

warna larutan berubah dan menghasilkan
Hasil Uji Sampel pada medium gelembung.
Kaldu laktosa Sumber: Pocket
et. Al, 2002.
 Hasil Uji Kelengkapan

Hasil tersebut menunjukan

terdapat bakteri gram negatif
yang berbentuk batang dan
berwarna merah.

Hasil Uji Sampel pada medium

KNA agar miring, Yaitu E. coli
Sumber: Baban, 2017
 Daftar Pustaka
Cappuccino, J.G & Welsh, C. 2019. Microbiologi: A Laboratory Manual (12th ed). New York:
Pearson.
Kusnadi. Petunjuk Mikrobiologi : Uji Kualitatif dan Kuantitatif Bakteri Coliform [Online]. Diakses
dari : http://file.upi.edu/Direktori/FPMIPA/JUR._PEND._BIOLOGI/196805091994031-KUSNADI/B
UKU_COMMON_TEXT_MIKROBIOLOGI%2C_Kusnadi%2Cdkk/petunjuk_mikro.pdf [8 Maret 2022]
Dzikrina, H. (2020). Laporan Praktikum : UJji Kualitatif dan Kuantitas Bakteri Coliform dalam Air
Tri Atmojo, A. Media EMB Agar [Online]. Diakses dari : https://medlab.id/media-emb-agar/ [6
April 2021
Yanti, H. dan Kusnadi. (2020). Petunjuk Praktikum MIKROBIOLOGI. Departemen Pendidikan Biologi –
FPMIPA UPI