Chapter 17

Neuroprotection of Heat Shock Proteins

(HSPs) in Brain Ischemia

Jong Youl Kim, Jong Eun Lee, and Midori A. Yenari

Abstrak Heat shock protein (HSPs) adalah di antara gen awal pertama yang
diakui diregulasi setelah iskemia otak. Peningkatan regulasi ini dianggap
sebagai bagian dari respons endogen terhadap stres, tetapi signifikansi
protein ini tidak sepenuhnya dipahami sampai manipulasi genetik untuk
mengekspresi atau menghapus gen-gen ini menunjukkan bahwa mereka
memang berpartisipasi dalam pencegahan kematian sel. Mekanisme dimana
HSP mencegah kematian sel berlipat ganda. Selain sifat pendamping mereka
di mana mereka dapat membantu dalam pelipatan protein yang baru lahir
dan pencegahan agregasi protein, HSP tampaknya juga berpartisipasi dalam
jalur kematian sel spesifik dan peradangan. Yang paling banyak dipelajari
dari protein-protein ini adalah HSP yang diinduksi 70 kDa juga dikenal
sebagai HSP70. Ketersediaan beberapa penginduksi farmakologis telah
menunjukkan bahwa efek neuroprotektif yang sama ini dapat direkapitulasi
dalam model hewan jenis liar. Lebih lanjut, beberapa dari penginduksi ini
telah dipelajari pada manusia untuk perawatan kondisi lain. HSP harus
diselidiki lebih lanjut untuk relevansi translasi mereka dalam pengobatan
stroke dan kondisi terkait.

Keywords Heat shock protein • Chaperone • Cerebral ischemia • Apoptosis •

Inflammation • Geldanamycin

J.Y. Kim
Department of Anatomy Yonsei, University College of Medicine,
Seoul 03722, Republic of Korea
J.E. Lee
BK21 Plus Project for Medical Science and Brain Research Institute, Yonsei University
College of Medicine, Seoul 03722, Republic of Korea
Department of Anatomy Yonsei, University College of Medicine,
Seoul 03722, Republic of Korea
M.A. Yenari (*)
Department of Neurology, University of California, San Francisco & the San Francisco
Veterans Affairs Medical Center, Neurology (127) VAMC 4150 Clement St.,
San Francisco, CA, USA
e-mail: yenari@alum.mit.edu

© Springer Nature Singapore Pte Ltd. and Shanghai Jiao Tong University Press 2017 383
P.A. Lapchak, G.-Y. Yang (eds.), Translational Research in Stroke, Translational
Medicine Research, https://doi.org/10.1007/978-981-10-5804-2_17
 2 J.Y. Kim et al.

Abbreviations

17- AAG 17-(Allylamino)geldanamycin

AIF Apoptosis-inducing factor
Apaf-1 Apoptosis protease activating factor-1
ATP Adenosine triphosphate
BBB Blood-brain barrier
DIABLO/smac Direct IAP-binding mitochondrial protein/second mitochondria-
derived activator of caspases
HO-1 Heme oxygenase-1
HSC Heat shock cognate
HSE Heat shock element
HSF Heat shock factor
HSP Heat shock protein
IkB Inhibitor of kappaB
IKK IkB kinase
IL-1 Interleukin-1
iNOS Inducible nitric oxide synthase
JNK c-Jun N-terminal kinase
MCA Middle cerebral artery
MMP Matrix metalloproteinase
NADPH Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate
NF-kB Nuclear factor-kappaB
NOS Nitric oxide synthase
OGD Oxygen glucose deprivation
PKB Protein kinase B
STAT-1 Signal transducer and activator of transcription factor-1
TLR Toll-like receptor
TNF Tumor necrosis factor

17.1 Introduction

Setelah berbagai cedera otak termasuk iskemia, otak mengalami respons stres
terkoordinasi yang memungkinkannya melindungi diri dari bahaya. Pada otak yang
terluka, protein yang paling banyak dipelajari di sekitar pelindung saraf adalah protein
heat shock (HSP), yang pada awalnya dijelaskan ketika sel-sel terpapar pada stres
panas sublethal. HSP adalah keluarga yang sangat terkonservasi dari ATP yang
tergantung, fungsi pendamping sitosol yang terutama dalam memfasilitasi pelipatan
protein, degradasi, perakitan kompleks, dan translokasi, akibatnya mencegah agregasi
protein berbahaya dan perakitan polipeptida protein baru yang disintesis [1]. Anggota
yang diekspresikan secara konstan ada dalam semua kompartemen subseluler dan
tampak penting untuk perkembangan normal dan fungsi seluler. Bentuk diinduksi
meningkat mengikuti berbagai
stres eksternal, termasuk cedera otak, tetapi pada awalnya dijelaskan setelah stres panas
[2]. Pekerjaan selama dua dekade terakhir juga telah menetapkan bahwa beberapa HSP
berfungsi sebagai sitoprotektan. HSP telah lama dikenal berfungsi sebagai pemburu
protein dalam arti bahwa mereka membantu dalam pelipatan protein dan pencapaian
 17 Neuroprotection of Heat Shock Proteins (HSPs) in Brain Ischemia 3

yang benar dari konfigurasi tiga dimensi fungsional sambil mencegah pelipatan yang
salah dan agregasi protein [3]. Mereka juga telah terbukti mempengaruhi pensinyalan
seluler dan telah dipelajari secara ekstensif untuk memberikan perlindungan terhadap
berbagai jenis model cedera otak eksperimental.

17.2 Heat Shock Proteins

Pada permulaan cedera otak, sintesis sebagian besar protein seluler ditekan dengan
pengecualian pada kelas kecil protein. Protein ini termasuk HSP. HSP
diklasifikasikan menurut massa molekulnya dan termasuk HSP100, HSP90,
HSP70, HSP60, HSP40, dan keluarga HSP kecil. HSP konstitutif, seperti HSP90,
HSP40, dan HSC70, melakukan fungsi tata graha dalam sel [4]. HSP terinduksi
terlibat dalam melipat protein dengan benar dan mencegah agregasi protein yang
tidak dilipat [4]. Dalam sel-sel otak, hipertermia memicu ekspresi kuat dari HSP
yang diinduksi, seperti HSP70, HSP32, dan HSP27 [5]. Kelas HSP neuroprotektif
yang paling banyak dipelajari adalah HSP70 atau kelas 70-kDa yang mencakup
bentuk yang dapat diinduksi yang juga dikenal sebagai HSP72, HSP70i, atau
sekadar HSP70. HSP70 berinteraksi dengan segmen peptida hidrofobik dari
protein yang tidak terstruktur dengan cara yang bergantung pada ATP. HSP70
juga mengandung domain pengikat substrat terminal-C yang mengidentifikasi
segmen polipeptida yang tidak terstruktur dan domain ATPase terminal N yang
membantu dalam pelipatan protein, bergantian antara keadaan terbuka yang terikat
ATP, dengan afinitas substrat rendah dan ikatan ADP yang ditutup. negara dengan
afinitas substrat tinggi [1]. Dalam studi iskemia serebral, HSP70 diamati diinduksi
di daerah otak yang relatif resisten terhadap penghinaan iskemik. Oleh karena itu,
gagasan "penumbra molekuler" diperkenalkan dan menimbulkan pertanyaan
apakah ekspresi ini adalah epiphenomena dari cedera atau peserta aktif dalam
kelangsungan hidup sel [3]. Penelitian selanjutnya menggunakan strategi untuk
meningkatkan atau menghambat ekspresi HSP70 secara konsisten menunjukkan
bahwa HSP70 melindungi otak dan sel-sel otak terhadap iskemia serebral
eksperimental, model penyakit neurodegeneratif, epilepsi, dan trauma. Melalui
sifat pendampingnya, telah terbukti mengurangi agregat protein dan inklusi
intraseluler [2]. Dua protein stres lainnya yang dipelajari dalam iskemia otak
termasuk HSP27 dan HSP32 (juga dikenal sebagai heme oxygenase atau HO-1)
[6]. Selain fungsinya dalam pemrosesan protein, HSP tampak melindungi otak
dengan memengaruhi beberapa kematian sel dan jalur respons imun [1, 7].
 4 J.Y. Kim et al.

17.2.1 The Heat Shock Response

HSP diduga berperan dalam menandakan kaskade yang melibatkan pertumbuhan sel
dan diferensiasi dalam kondisi non-cedera. Mereka dengan cepat diregulasi dalam
menanggapi stres sel termasuk cedera otak. Mekanisme molekuler untuk regulasi
ekspresi berlebih HSP tergantung pada aktivitas faktor transkripsi unik - faktor kejut
panas 1 (HSF1) yang dapat mengikat 5 daerah promotor dari semua gen HSP dan
memicu transkripsi [8]. Dalam kondisi homeostatis, HSP terletak intraseluler dan
terikat pada HSF1 [7]. Mengikuti tekanan yang tepat seperti panas, iskemia dan
penyebab lain dari akumulasi protein yang tidak dilipat, HSP terlepas dari HSF,
membuat HSP bebas untuk mengikat protein target. Dalam sel yang ditekan, HSF
terdisosiasi diangkut ke nukleus di mana ia difosforilasi, kemungkinan oleh protein
kinase C, untuk membentuk trimers yang diaktifkan. Trimers ini mengikat urutan
regulasi yang sangat terkonservasi pada gen kejut panas yang dikenal sebagai elemen
kejut panas (HSE). Setelah terikat dengan HSE, HSF terikat ke wilayah promoter gen
HSP, yang mengarah ke lebih banyak generasi HSP [8]. HSP yang baru dihasilkan
kemudian dapat mengikat protein terdenaturasi dan bertindak sebagai pendamping
molekuler dengan berkontribusi untuk memperbaiki, menahan, dan
memperdagangkan protein yang rusak di dalam sel. HSP90 juga dapat
mempengaruhi HSP70. HSP90 terikat ke HSF1 di mana ia bertindak untuk mencegah
HSF1 dari memasuki inti. Ketika HSP90 memisahkan diri dari HSF1, HSF1
dibebaskan dan mengikat HSE, yang mengarah ke lebih banyak induksi HSP70.

17.2.2 HSP in Cell Death Signaling Pathways

HSP dalam Jalur Signaling Kematian Sel

HSP mempengaruhi beberapa langkah berbeda dalam jalur kematian sel, seperti
apoptosis (Gbr. 17.1). HSP70 berinteraksi dengan komponen dari mesin kematian
sel yang diprogram hulu [9, 10] dan berpotensi hilir peristiwa mitokondria [11].
HSP70 mampu mengganggu pelepasan sitokrom c dalam model stroke
eksperimental [12, 13] dan menghambat translokasi faktor penginduksi apoptosis
(AIF) ke nukleus [14] sambil mengurangi cedera otak iskemik pada model stroke
eksperimental. Penelitian sebelumnya mengamati bahwa HSP70 berlebih oleh
tikus transgenik telah terbukti mengganggu perekrutan procaspase-9 ke dalam
apoptosome dan untuk menyita AIF [15]. HSP70 juga menghambat pelepasan
protein proapoptosis Smac / DIABLO dari mitokondria miosit [16]. Mitokondria
HSP70 / HSP75 / mortalin, asisten untuk menjaga potensi membran mitokondria
dapat menyebabkan pelestarian fungsi mitokondria76 dan impor protein
mitokondria [17]. HSP27 juga dapat mengurangi aktivasi pro-pase-9 dengan
mengganggu pembentukan apoptosome dan interaksi dengan sitokrom c dan dapat
menghambat pelepasan sitokrom c dari mitokondria [18]. HSP27 dapat langsung
berinteraksi dengan procaspase-3 dan menghambat aktivasi caspase-3 [18].
Ekspresi HSP70 yang berlebihan dalam astrosit mengurangi kerentanannya
terhadap cedera seperti iskemik in vitro (kekurangan glukosa oksigen, OGD) dan
mempertahankan level ATP yang lebih tinggi dalam sel yang mengalami stres
[19]. Hasil ini dikaitkan dengan berkurang
17 Neuroprotection of Heat Shock Proteins (HSPs) in Brain Ischemia 5

Fig. 17.1 Pengaruh HSP pada apoptosis. Stroke iskemik menginduksi kematian sel apoptosis
oleh beberapa jalur berbeda, dan protein heat shock (HSP70 dan HSP27) memengaruhi jalur ini
pada beberapa tingkatan. Stroke iskemik dapat memicu apoptosis melalui jalur intrinsik
(mitokondria) dan ekstrinsik (dimediasi reseptor). Iskemik menyebabkan stres mitokondria, yang
menyebabkan pelepasan faktor proapoptosis seperti sitokrom c, Smac / DIABLO, dan AIF.
Sitokrom c menginduksi oligorisasi Apaf-1, yang merekrut dan mengaktifkan procaspase-9
menjadi caspase-9. Caspase-9 kemudian mengaktifkan efektor caspase-3. Iskemia juga mengarah
pada pelepasan faktor-faktor yang dapat mengikat reseptor kematian seperti Fas yang mengarah
ke apoptosis melalui aktivasi JNK stress kinase. HSP70 dan HSP27 telah terbukti menghambat
apoptosis di situs yang ditunjukkan. Ini termasuk pencegahan pelepasan faktor-faktor
proapoptotik mitokondria, penghambatan aktivasi caspase-3, dan downregulasi Bax sambil
meningkatkan molekul anti-apoptosis Bcl-2. HSP juga mengganggu apoptosis yang dimediasi
reseptor dengan menurunkan regulasi Fas dan menghambat JNK (AIF apoptosis factor, Akt
protein kinase B, Apaf-1 apoptosis protease, faktor pengaktif-1, Cyt C cytochrome c, JNK c-Jun
N-terminal kinase)

pembentukan spesies oksigen reaktif (ROS) dan mempertahankan potensi

membran mitokondria yang lebih baik dalam model stroke iskemik in vitro
[20] dan dengan pelestarian kadar glutathione yang lebih baik [21]. Dalam
sel-sel miokard, ekspresi berlebih dari HSP70 terbukti meningkatkan
aktivitas enzim antioksidan mitokondria superoksida dismutase mangan
[22].
Bcl-2 dikenal sebagai protein anti-apoptosis, yang fungsinya dalam apoptosis
adalah untuk memblokir pelepasan sitokrom c dan AIF, sehingga mencegah aktivasi
caspase efektor. Ekspresi berlebih HSP70 menggunakan vektor virus menyebabkan
peningkatan kadar protein Bcl-2 dalam neuron hippocampal [7]. Keseimbangan
antara anggota pro-dan anti-apoptosis dari keluarga Bcl-2 menentukan apakah sel
menjalani apoptosis dengan mengatur transisi permeabilitas membran mitokondria
[23]. Dengan demikian, HSP70 berlebih dapat menurunkan induksi apoptosis hulu
mitokondria pada stroke iskemik baik secara langsung maupun melalui peningkatan
 6 J.Y. Kim et al.

kadar Bcl-2. HSP70 mengurangi apoptosis yang disebabkan panas terutama dengan
memblokir translokasi anggota keluarga Bcl-2 proapoptotik Bax, sehingga
mencegah pelepasan faktor proapoptosis dari mitokondria [10]. Studi terbaru
menunjukkan bahwa HSP27 secara tidak langsung dapat menekan oligomerisasi
Bax yang diinduksi stres dan translokasi ke mitokondria [24]. Aktivitas anti-
apoptosis HSP27 telah dibuktikan untuk mengaktifkan kinase pelindung Akt / PKB
[25] atau untuk menonaktifkan jalur pro-kematian c-Jun N-terminal kinase (JNK)
[26]. HSP70 juga mengganggu aktivitas apoptosis protease activating factor-1
(Apaf-1), yang diperlukan untuk pembentukan apoptosome dan aktivasi caspase-9
[15], tetapi juga Steel et al. menunjukkan kurangnya interaksi langsung dengan
Apaf-1 [9]. Baru-baru ini, laboratorium kami menunjukkan bahwa dynamin
trafficks Fas ke permukaan sel saraf dan HSP70 overexpression mencegah
perdagangan ini setelah stroke iskemik [27]. Studi ini menunjukkan bahwa HSP70
juga mencegah jalur apotik ekstrinsik atau yang dimediasi reseptor melalui interaksi
pendamping tertentu

17.2.3 HSP in Inflammation

HSP diketahui memiliki peran modulasi yang signifikan baik yang bertindak sebagai
stimulator dan inhibitor proinflamasi. HSP ekstraseluler juga mampu fungsi
imunomodulator yang memicu respons imunologis [2]. HSP70, mungkin yang paling
banyak dipelajari dari HSP sehubungan dengan perannya dalam peradangan,
tampaknya memainkan peran ganda tergantung pada sifat stimulus dan respon
kekebalan yang terjadi. Dalam lingkungan ekstraseluler, HSP telah dipelajari dalam
hal peran mereka dalam imunitas adaptif di mana mereka tampaknya membantu dan
meningkatkan respon imun adaptif. HSP yang dikomplekskan dengan peptida
mendapatkan tanggapan sel-T CD8 + setelah pemberian eksogen [28]. Imunisasi
tikus dengan kompleks yang sama ini dapat menimbulkan tanggapan CD4,
menunjukkan bahwa HSP dapat bertindak sebagai adjuvan [29]. HSP70 ekstraseluler
juga dapat berinteraksi dengan sel makrofag / sel dendritik CD40, CD91, atau LOX-1
dan membantu presentasi antigen [30]. HSP ekstraseluler juga tampak berpartisipasi
dalam respons imun bawaan (Gbr. 17.2). Dalam respon imun bawaan, HSP70 dapat
berinteraksi dengan makrofag, mikroglia, dan sel dendritik melalui reseptor Toll-like
(TLRs) dan mengarah pada aktivasi faktor-kappaB (NF-kB) nuklir dengan
peningkatan regulasi sitokin proinflamasi berikutnya dan nitrat yang dapat diinduksi.
oksida sintase (iNOS) [31]. HSP60 dan HSP70 keduanya dianggap berinteraksi
dengan TLR 2 dan TLR4 [32].
Sebagai molekul anti-inflamasi, HSP juga telah terbukti berinteraksi dengan faktor
pro-inflamasi seperti NF-kB, matrix metalloproteinases (MMPs), dan ROS, yang
mengarah ke keadaan anti-inflamasi. Ekspresi intraseluler HSP70 atau induksi
intraselulernya oleh stres panas telah terbukti mengurangi produksi sel inflamasi dari
oksida nitrat dan ekspresi iNOS sementara mengurangi aktivasi NF-kB dalam astrosit
[33]. Kejutan panas juga berkorelasi dengan penurunan sekresi tumor necrosis factor-
alpha (TNF-α) dan berkurangnya generasi ROS. HSP70 bisa
17 Neuroprotection of Heat Shock Proteins (HSPs) in Brain Ischemia 7

Fig. 17.2 Pengaruh HSPs dalam kekebalan bawaan. Untuk detailnya, lihat Sect. 17.2.3. HSP
telah terbukti memengaruhi respons imun bawaan baik intraseluler dan ekstraseluler dan
mengarah pada respons pro-dan anti-inflamasi tergantung pada kompartemen di mana mereka
berada. Mengikuti penghinaan otak, HSP diperkirakan diregulasi dalam sel-sel otak dan, ketika
sel-sel ini lisis, kemudian dibebaskan ke ruang ekstraseluler. Dalam ruang ekstraseluler, HSP70
muncul untuk mencegah aktivasi MMP dengan mencegah konversi dari bentuk aslinya. HSP,
termasuk HSP70 dan HSP60, juga telah terbukti bertindak sebagai ligan untuk reseptor seperti
Toll 2 dan 4 (TLR 2/4) yang biasanya ditemukan pada sel kekebalan seperti mikroglia. Ketika
diaktifkan, TLR mengarah ke pensinyalan yang mengaktifkan kinase protein penghambat NF-kB
(IKK). Ketika protein inhibitor NF-kB (IKB) difosforilasi, ia membebaskan NF-kB untuk
memasuki nukleus di mana NF-kB dapat mengikat sekuens konsensus dan meningkatkan
berbagai molekul pro-inflamasi. IkB terfosforilasi kemudian terdegradasi dalam proteasome.
Secara intraseluler, HSP telah terbukti menghambat aktivasi IKK, serta mengikat IkB dan NF-kB
dan mencegah aktivasi NF-kB dan translokasi nuklir, masing-masing, sehingga mencegah
regulasi berbagai molekul pro-inflamasi. Induksi farmakologis dari HSP70 dimungkinkan
melalui inhibitor HSP90 (geldanamycin, 17-AAG). HSP90 biasanya menghambat HSF1 dari
translokasi ke nukleus dan meningkatkan HSP70

juga mencegah respons terhadap sitokin inflamasi seperti TNF-α dan

interleukin-1 (IL-1) [34], sementara overekspresi HSP70 dalam makrofag
memblokir peningkatan yang diinduksi LPS pada TNF, IL-1, IL-10, dan IL-12
[35] Dalam model perdarahan intraserebral, peningkatan regulasi HSP70
menurunkan ekspresi TNF-α dan gangguan sawar darah-otak (BBB),
pembentukan edema, dan disfungsi neurologis [36].
Induksi HSP70 oleh peredam panas menghambat aktivitas NADPH oksidase
dalam neutrofil dan meningkatkan superoksida dismutase, yang memulung
superoksida, di-
 8 J.Y. Kim et al.

cytes [37]. Kami sebelumnya menunjukkan bahwa HSP70 berlebih juga

mengganggu fosforilasi IkB, JNK, dan p38 dan menumpulkan DNA yang mengikat
faktor transkripsi mereka, seperti NF-kB, aktivator portien-1, dan transduser sinyal
dan pengaktif faktor transkripsi 1 (STAT -1), efektif meregulasi ekspresi gen
proinflamasi pada astrosit yang dipanaskan sebelumnya [38]. Studi lain juga
menunjukkan bahwa tekanan panas sebelumnya menyebabkan penghambatan
respon inflamasi, dan dikaitkan dengan overekspresi HSP70 yang memblokir trans-
lokasi nuklir NF-kB [39, 40]. Telah berspekulasi bahwa HSP70 dapat berinteraksi
dengan inhibitor kB (IkB) dan mengganggu disosiasi NF-kB dengan menghambat
fosforilasi IkB [33]. Beberapa penelitian telah menunjukkan bahwa HSP70
mengikat dan menghambat NF-kB dan / atau protein pengaturnya [41, 42],
meskipun cara kerjanya tergantung pada sifat stimulus. Dalam model jalur kematian
sel yang diinduksi TNF-α, HSP70 secara langsung menghambat aktivitas IkB
kinase (IKK), sedangkan dalam model stroke iskemik, HSP70 tampaknya terkait
dengan NF-kB dan IkB, sehingga mencegah fosforilasi IkB oleh IKK.
Penghambatan NF-kB oleh HSP70 menyebabkan pemblokiran transkripsi beberapa
gen imun dan meningkatkan perlindungan saraf.
Penelitian kami menunjukkan bahwa MMP-9, salah satu dari beberapa gen imun
yang diatur oleh NF-kB, berkurang dalam astrosit yang diekspresikan HSP70 yang
diekspos terhadap penghinaan seperti iskemia. Konsisten dengan pengamatan bahwa
HSP70 berlebih oleh vektor virus dapat mengatur ekspresi protein inflamasi pada
tingkat transkripsional, MMP-9 mRNA juga lebih rendah pada astrosit yang
ditransfusikan HSP70 [43]. Lebih lanjut, HSP70 yang diekspresikan dalam astrosit
tampaknya tidak hanya menurunkan ekspresi MMP-9 pada level transkripsi dan
translasi tetapi juga menurunkan MMP-2 [43]. Menariknya, ekspresi MMP-9 diatur
oleh NF-kB, sedangkan MMP-2 tidak, menunjukkan bahwa HSP70 dapat
mengganggu respons transkripsi dalam sistem selain NF-kB. Faktanya, penelitian
pada makrofag alveolar menunjukkan bahwa HSP70 yang diinduksi oleh stres panas
dapat menghambat jalur pensinyalan STAT-1 [44], dan jalur ini telah dikaitkan
dengan ekspresi MMP-2 [45]. HSP70 juga muncul untuk mencegah pemrosesan
MMP dari bentuk pro atau tidak aktif ke bentuk yang dibelah atau aktif. Dengan
demikian, jelas bahwa HSP memiliki segudang peran, beberapa di antaranya
memodulasi respons imun, baik adaptif maupun bawaan, terhadap fenotipe pro dan
antiinflamasi.

17.2.4 HSP in Ischemic Stroke

Ekspresi HSP yang berlebihan dalam model eksperimental mengarah ke

perlindungan terhadap berbagai penghinaan akut pada stroke iskemik [6]. Selama
kondisi homeostatis, level HSP yang dapat diinduksi rendah; Namun, ekspresinya
meningkat secara signifikan setelah cedera. Dalam model stroke eksperimental,
HSP telah terbukti mengarah pada proteksi saraf [7].
17 Neuroprotection of Heat Shock Proteins (HSPs) in Brain Ischemia 9

HSP70 adalah HSP paling banyak ditemukan dalam sel. Banyak penelitian
telah menunjukkan hubungan yang luas antara overekspresi HSP70 dan toleransi
pada stroke iskemik. Setelah 10 menit iskemia serebral fokal, protein HSP70
diinduksi di daerah arteri serebral tengah (MCA) 24 jam kemudian. Setelah 1,5
jam oklusi MCA, ada ekspresi HSP70 di zona DAS antara arteri serebral tengah
dan anterior. Dalam penumbra, induksi HSP70 terjadi terutama di neuron [3]. Di
daerah infark, atau daerah yang berdekatan dengan infark, HSP70 dapat diinduksi
dalam sel endotel dan glial, seperti astrosit dan mikroglia [3]. Overekspresi HSP70
yang dimediasi-vektor virus telah terbukti meningkatkan kelangsungan hidup
neuron dan astrosit dari penghinaan seperti iskemik dan iskemia, termasuk
kekurangan glukosa oksigen dan iskemia serebral fokal dan global [1]. Demikian
pula, tikus transgenik yang mengekspresikan HSP70 terlindungi dari penghinaan
iskemik ini, sedangkan defisiensi mereka memperburuk transportasi melintasi [27,
46]. TAT-Hsp70 intravena, Hsp70 yang melekat pada motif TAT untuk
meningkatkan transportasi melintasi BBB, menyebabkan penurunan volume
infark, meningkatkan hasil neurologis, dan meningkatkan kelangsungan hidup
nenek moyang saraf dalam model stroke eksperimental [47]. Perlindungan saraf
ini tidak hanya terkait dengan kematian sel apoptosis yang lebih sedikit dan
peningkatan ekspresi protein anti-apoptosis, tetapi telah terbukti memengaruhi
berbagai jalur dan pensinyalan imun intraseluler.
HSP27 memiliki banyak kemiripan dengan HSP70, dengan pengecualian
bahwa itu tidak memerlukan ATP untuk tindakannya [18]. Tikus transgenik yang
mengekspres HSP27 yang mengalami iskemia serebral menunjukkan manfaat
neuroprotektif karena overekspresi ini [48]. Ekspresi HSP27 yang dimediasi-
vektor virus secara in vitro dan in vivo telah terbukti melindungi terhadap otak
iskemik dan kematian sel saraf yang diinduksi oleh kainate [6]. Mekanisme efek
perlindungan ini sebagian besar dikaitkan dengan kemampuan HSP27 untuk
mengganggu apoptosis. Seperti HSP70, HSP27 telah ditunjukkan untuk mencegah
pelepasan sitokrom c metokrom dan mencegah pembentukan apoptosom. HSP27
juga dapat berinteraksi secara langsung dengan procaspase-3 dan mencegah
translokasi Bax ke mitokondria. Pada stroke iskemik, pelindung saraf Hsp27 juga
telah dilakukan di mana protein fusi PEP-1-Hsp27, dirancang untuk melintasi
BBB, diberikan neuron piramidal hippocampal yang dilindungi secara
intraperitoneal dan dilindungi terhadap kematian dalam model iskemia global
[49].
HSP32 juga dikenal sebagai heme oxygenase 1 (HO-1). Ini adalah enzim yang
terlibat dalam katabolisme heme. HO-1 tidak dapat diinduksi dan dianggap
sebagai anggota keluarga protein stres, karena mengandung HSF dalam
promotornya. Ini mengubah heme menjadi bildivdin, karbon dioksida, dan besi.
Ini diinduksi oleh faktor yang sama dengan HSP lainnya [7]; Namun, literatur
seputar HO-1 di otak iskemik dan kondisi terkait saling bertentangan. Studi
tentang defisiensi HO-1 menunjukkan bahwa tikus knock-out HO-1 telah
memperburuk hasil pada model stroke iskemik tetapi meningkatkan hasil dalam
model pendarahan otak [50]. Alasan untuk perbedaan ini mungkin karena efek
diferensial dari metabolitnya dan pengaturan dan lokasi di mana HO-1 aktif.
 10 J.Y. Kim et al.

17.3 HSP Therapy for Neuroprotection

Induksi farmakologis dari HSP70 juga dimungkinkan dan telah terbukti

melindungi otak dalam model eksperimental. Induktor Hsp70 yang paling banyak
dipelajari adalah ansami- cins, geldanamycin, dan 17- (allylamino) geldanamycin
(17-AAG). Senyawa ini meningkatkan HSP70 yang dapat diinduksi melalui
kemampuan mereka untuk menghambat HSP90 dan telah terbukti melindungi otak
dari cedera otak [8]. Selain itu, geldanamycin dan 17-AAG telah dipelajari dalam
uji klinis, meskipun untuk indikasi lainnya. Juga, kelompok penginduksi HSP70
lainnya adalah senyawa berbasis purin, resorsinol, dan kemotipe baru lainnya. Seri
purin adalah kelas sintetis yang dimodelkan setelah ansamycins mengkooptasi
ADP untuk mengikat situs pengikatan HSP90 ATP [51]. Induser HSP70 berbasis
purin yang paling terkenal hingga saat ini adalah BIIB021 (juga bernama CNF-
2024), yang telah terbukti sebagai penghambat Hsp90 yang kuat [52]. Beberapa
varian yang dirancang untuk mengatasi kerugian farmasi ini adalah NVP-AUY922
dan AT-13387. Sampai saat ini, belum ada penelitian yang mengevaluasi efek
resorcinol pada cedera otak [52], meskipun seolah-olah fungsinya sebagai
penginduksi HSP70 diharapkan akan memberikan perlindungan. Ada juga
kemotipe baru seperti EC144, inhibitor HSP90 sintetis, yang telah terbukti secara
efektif memblokir jalur respon imun bawaan dan adaptif [53]. Seperti banyak
penginduksi HSP70 lainnya, tidak ada kemotipe novel yang belum diuji
permeabilitas BBB atau diterapkan pada model cedera otak..

Conclusions

Sejumlah penelitian menunjukkan efek neuroprotektif HSP pada cedera otak. HSP
telah menunjukkan efek neuroprotektif yang konsisten dalam model cedera yang
berbeda. Tampaknya memiliki beberapa mekanisme perlindungan dan dapat
diinduksi secara farmakologis dengan agen yang telah diuji pada manusia untuk
indikasi lainnya. Gen stres lain dan protein masing-masing juga menjanjikan
sebagai pelindung endogen yang menguntungkan tetapi mungkin kurang
berkembang dalam hal bagaimana sifat ini dapat diterapkan secara klinis..

Acknowledgments This study was funded by grants from the National Institutes of Health (RO1
NS40516), Department of Defense and the Veteran’s Merit Award (I01 BX000589) to MAY, Basic
Science Research Program through the National Research Foundation of Korea (NRF) funded by
the Ministry of Education (NRF-2016R1D1A1B03933017) to JYK, and a National Research
Foundation of Korea (N12F) grant funded by the Korea government (MEST) (NRF-
2017R1A2B2005350) to JEL. Grants to MAY were administered by the Northern California
Institute for Research and Education and supported by resources of the Veterans Affairs Medical
Center, San Francisco, California.
17 Neuroprotection of Heat Shock Proteins (HSPs) in Brain Ischemia 11

References

1. Giffard RG, Yenari MA. Many mechanisms for hsp70 protection from cerebral ischemia.
J Neurosurg Anesthesiol. 2004;16(1):53–61.
2. Giffard RG, Han RQ, Emery JF, Duan M, Pittet JF. Regulation of apoptotic and inflammatory
cell signaling in cerebral ischemia: the complex roles of heat shock protein 70. Anesthesiology.
2008;109(2):339–48.
3. Sharp FR, Lu A, Tang Y, Millhorn DE. Multiple molecular penumbras after focal cerebral
ischemia. J Cereb Blood Flow Metab. 2000;20(7):1011–32.
4. Saibil H. Chaperone machines for protein folding, unfolding and disaggregation. Nat Rev Mol
Cell Biol. 2013;14(10):630–42.
5. Brown IR. Heat shock proteins and protection of the nervous system. Ann N Y Acad Sci.
2007;1113:147–58.
6. Sharp FR, Zhan X, Liu DZ. Heat shock proteins in the brain: role of Hsp70, Hsp 27, and HO-1
(Hsp32) and their therapeutic potential. Transl Stroke Res. 2013;4(6):685–92.
7. Kelly S, Yenari MA. Neuroprotection: heat shock proteins. Curr Med Res Opin. 2002;18(Suppl
2):s55–60.
8. Kim N, Kim JY, Yenari MA. Anti-inflammatory properties and pharmacological induction of
Hsp70 after brain injury. Inflammopharmacology. 2012;20(3):177–85.
9. Steel R, Doherty JP, Buzzard K, Clemons N, Hawkins CJ, Anderson RL. Hsp72 inhibits apop-
tosis upstream of the mitochondria and not through interactions with Apaf-1. J Biol Chem.
2004;279(49):51490–9.
10. Stankiewicz AR, Lachapelle G, Foo CP, Radicioni SM, Mosser DD. Hsp70 inhibits heat-
induced apoptosis upstream of mitochondria by preventing Bax translocation. J Biol Chem.
2005;280(46):38729–39.
11. Ravagnan L, Gurbuxani S, Susin SA, Maisse C, Daugas E, Zamzami N, et al. Heat-shock
protein 70 antagonizes apoptosis-inducing factor. Nat Cell Biol. 2001;3(9):839–43.
12. Lee SH, Kwon HM, Kim YJ, Lee KM, Kim M, Yoon BW. Effects of hsp70.1 gene knockout on
the mitochondrial apoptotic pathway after focal cerebral ischemia. Stroke. 2004;35(9):2195–9.
13. Tsuchiya D, Hong S, Matsumori Y, Kayama T, Swanson RA, Dillman WH, et al. Overexpression
of rat heat shock protein 70 reduces neuronal injury after transient focal ischemia, transient
global ischemia, or kainic acid-induced seizures. Neurosurgery. 2003;53(5):1179–87. discus-
sion 87–8
14. Matsumori Y, Hong SM, Aoyama K, Fan Y, Kayama T, Sheldon RA, et al. Hsp70 overexpres-
sion sequesters AIF and reduces neonatal hypoxic/ischemic brain injury. J Cereb Blood Flow
Metab. 2005;25(7):899–910.
15. Beere HM, Wolf BB, Cain K, Mosser DD, Mahboubi A, Kuwana T, et al. Heat-shock protein
70 inhibits apoptosis by preventing recruitment of procaspase-9 to the Apaf-1 apoptosome. Nat
Cell Biol. 2000;2(8):469–75.
16. Jiang B, Xiao W, Shi Y, Liu M, Xiao X. Heat shock pretreatment inhibited the release of Smac/
DIABLO from mitochondria and apoptosis induced by hydrogen peroxide in cardiomyocytes
and C2C12 myogenic cells. Cell Stress Chaperones. 2005;10(3):252–62.
17. Geissler A, Krimmer T, Bomer U, Guiard B, Rassow J, Pfanner N. Membrane potential-
driven protein import into mitochondria. The sorting sequence of cytochrome b(2) modulates
the deltapsi-dependence of translocation of the matrix-targeting sequence. Mol Biol Cell.
2000;11(11):3977–91.
18. Stetler RA, Gao Y, Signore AP, Cao G, Chen J. HSP27: mechanisms of cellular protection
against neuronal injury. Curr Mol Med. 2009;9(7):863–72.
19. Voloboueva LA, Duan M, Ouyang Y, Emery JF, Stoy C, Giffard RG. Overexpression of mito-
chondrial Hsp70/Hsp75 protects astrocytes against ischemic injury in vitro. J Cereb Blood
Flow Metab. 2008;28(5):1009–16.
20. Ouyang YB, Xu LJ, Sun YJ, Giffard RG. Overexpression of inducible heat shock protein 70
and its mutants in astrocytes is associated with maintenance of mitochondrial physiology dur-
ing glucose deprivation stress. Cell Stress Chaperones. 2006;11(2):180–6.
21. Xu L, Giffard RG. HSP70 protects murine astrocytes from glucose deprivation injury. Neurosci
Lett. 1997;224(1):9–12.
22. Suzuki K, Murtuza B, Sammut IA, Latif N, Jayakumar J, Smolenski RT, et al. Heat shock
protein 72 enhances manganese superoxide dismutase activity during myocardial ischemia-
12 J.Y. Kim et al.

reperfusion injury, associated with mitochondrial protection and apoptosis reduction.

Circulation. 2002;106(12 Suppl 1):I270–6.
23. Yuan J, Yankner BA. Apoptosis in the nervous system. Nature. 2000;407(6805):802–9.
24. Havasi A, Li Z, Wang Z, Martin JL, Botla V, Ruchalski K, et al. Hsp27 inhibits Bax activa-
tion and apoptosis via a phosphatidylinositol 3-kinase-dependent mechanism. J Biol Chem.
2008;283(18):12305–13.
25. Rane MJ, Pan Y, Singh S, Powell DW, Wu R, Cummins T, et al. Heat shock protein 27 controls
apoptosis by regulating Akt activation. J Biol Chem. 2003;278(30):27828–35.
26. Schepers H, Geugien M, van der Toorn M, Bryantsev AL, Kampinga HH, Eggen BJ, et al.
HSP27 protects AML cells against VP-16-induced apoptosis through modulation of p38 and
c-Jun. Exp Hematol. 2005;33(6):660–70.
27. Kim JY, Kim N, Zheng Z, Lee JE, Yenari MA. 70-kDa heat shock protein downregulates dyna-
min in experimental stroke: a new therapeutic target? Stroke. 2016;47(8):2103–11.
28. Singh-Jasuja H, Toes RE, Spee P, Munz C, Hilf N, Schoenberger SP, et al. Cross-presentation
of glycoprotein 96-associated antigens on major histocompatibility complex class I molecules
requires receptor-mediated endocytosis. J Exp Med. 2000;191(11):1965–74.
29. Haug M, Dannecker L, Schepp CP, Kwok WW, Wernet D, Buckner JH, et al. The heat shock
protein Hsp70 enhances antigen-specific proliferation of human CD4+ memory T cells. Eur
J Immunol. 2005;35(11):3163–72.
30. de Jong PR, Schadenberg AW, Jansen NJ, Prakken BJ. Hsp70 and cardiac surgery: molec-
ular chaperone and inflammatory regulator with compartmentalized effects. Cell Stress
Chaperones. 2009;14(2):117–31.
31. Srivastava P. Roles of heat-shock proteins in innate and adaptive immunity. Nat Rev Immunol.
2002;2(3):185–94.
32. Asea A. Heat shock proteins and toll-like receptors. Handb Exp Pharmacol. 2008;183:111–27.
33. Feinstein DL, Galea E, Aquino DA, Li GC, Xu H, Reis DJ. Heat shock protein 70 suppresses
astroglial-inducible nitric-oxide synthase expression by decreasing NFkappaB activation.
J Biol Chem. 1996;271(30):17724–32.
34. Van Molle W, Wielockx B, Mahieu T, Takada M, Taniguchi T, Sekikawa K, et al. HSP70 pro-
tects against TNF-induced lethal inflammatory shock. Immunity. 2002;16(5):685–95.
35. Ding XZ, Fernandez-Prada CM, Bhattacharjee AK, Hoover DL. Over-expression of hsp-70
inhibits bacterial lipopolysaccharide-induced production of cytokines in human monocyte-
derived macrophages. Cytokine. 2001;16(6):210–9.
36. Manaenko A, Fathali N, Chen H, Suzuki H, Williams S, Zhang JH, et al. Heat shock protein 70
upregulation by geldanamycin reduces brain injury in a mouse model of intracerebral hemor-
rhage. Neurochem Int. 2010;57(7):844–50.
37. Polla BS, Stubbe H, Kantengwa S, Maridonneau-Parini I, Jacquier-Sarlin MR. Differential
induction of stress proteins and functional effects of heat shock in human phagocytes.
Inflammation. 1995;19(3):363–78.
38. Kim JY, Yenari MA, Lee JE. Regulation of inflammatory transcription factors by heat shock
protein 70 in primary cultured astrocytes exposed to oxygen-glucose deprivation. Neuroscience.
2015;286:272–80.
39. Guzhova IV, Darieva ZA, Melo AR, Margulis BA. Major stress protein Hsp70 interacts
with NF-kB regulatory complex in human T-lymphoma cells. Cell Stress Chaperones.
1997;2(2):132–9.
40. Heneka MT, Sharp A, Klockgether T, Gavrilyuk V, Feinstein DL. The heat shock response
inhibits NF-kappaB activation, nitric oxide synthase type 2 expression, and macrophage/
microglial activation in brain. J Cereb Blood Flow Metab. 2000;20(5):800–11.
41. Zheng Z, Kim JY, Ma H, Lee JE, Yenari MA. Anti-inflammatory effects of the 70 kDa heat
shock protein in experimental stroke. J Cereb Blood Flow Metab. 2008;28(1):53–63.
42. Ran R, Zhou G, Lu A, Zhang L, Tang Y, Rigby AC, et al. Hsp70 mutant proteins modu-
late additional apoptotic pathways and improve cell survival. Cell Stress Chaperones.
2004;9(3):229–42.
43. Lee JE, Kim YJ, Kim JY, Lee WT, Yenari MA, Giffard RG. The 70 kDa heat shock protein
suppresses matrix metalloproteinases in astrocytes. Neuroreport. 2004;15(3):499–502.
44. Howard M, Roux J, Lee H, Miyazawa B, Lee JW, Gartland B, et al. Activation of the stress
protein response inhibits the STAT1 signalling pathway and iNOS function in alveolar macro-
phages: role of Hsp90 and Hsp70. Thorax. 2010;65(4):346–53.
45. Johnston JB, Jiang Y, van Marle G, Mayne MB, Ni W, Holden J, et al. Lentivirus infection
17 Neuroprotection of Heat Shock Proteins (HSPs) in Brain Ischemia 13

in the brain induces matrix metalloproteinase expression: role of envelope diversity. J Virol.
2000;74(16):7211–20.
46. Lee SH, Kim M, Yoon BW, Kim YJ, Ma SJ, Roh JK, et al. Targeted hsp70.1 disruption increases
infarction volume after focal cerebral ischemia in mice. Stroke. 2001;32(12):2905–12.
47. Doeppner TR, Nagel F, Dietz GP, Weise J, Tonges L, Schwarting S, et al. TAT-Hsp70-mediated
neuroprotection and increased survival of neuronal precursor cells after focal cerebral isch-
emia in mice. J Cereb Blood Flow Metab. 2009;29(6):1187–96.
48. Latchman DS. Protective effect of heat shock proteins in the nervous system. Curr Neurovasc
Res. 2004;1(1):21–7.
49. An JJ, Lee YP, Kim SY, Lee SH, Lee MJ, Jeong MS, et al. Transduced human PEP-1-heat shock
protein 27 efficiently protects against brain ischemic insult. FEBS J. 2008;275(6):1296–308.
50. Wang J, Dore S. Heme oxygenase-1 exacerbates early brain injury after intracerebral haemor-
rhage. Brain. 2007;130(Pt 6):1643–52.
51. Jones Q, Voegeli TS, Li G, Chen Y, Currie RW. Heat shock proteins protect against isch-
emia and inflammation through multiple mechanisms. Inflamm Allergy Drug Targets.
2011;10(4):247–59.
52. Porter JR, Fritz CC, Depew KM. Discovery and development of Hsp90 inhibitors: a promising
pathway for cancer therapy. Curr Opin Chem Biol. 2010;14(3):412–20.
53. Yun TJ, Harning EK, Giza K, Rabah D, Li P, Arndt JW, et al. EC144, a synthetic inhibitor of
heat shock protein 90, blocks innate and adaptive immune responses in models of inflamma-
tion and autoimmunity. J Immunol. 2011;186(1):563–75.