Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

LAPORAN Kedokteran Molekuler 27: 45, 2023

Glycyrrhizin mengatur HMGB1/P38MAPK

jalur pensinyalan pada status epileptikus
ZHong luo*, Meng Xu*, linHai ZHanG, HaiQinG ZHanG, Zucai Xu and ZHonGXianG Xu

Departemen Neurologi, Rumah Sakit Afiliasi Universitas Kedokteran Zunyi, Zunyi, Guizhou 563003, PR China

diterima 15 Juli 2022; diterima 7 Desember 2022

doi: 10.3892/mmr.2023.12932

Abstrak.dalam beberapa dekade terakhir, penelitian telah melaporkan bahwa peradangan memainkan peran kunci dalam epilepsi Perkenalan
dan bahwa protein kotak kelompok mobilitas tinggi-1 (HMGB1) mungkin terlibat dalam status epileptikus. Namun, belum dilaporkan

apakah HMGB1 berpartisipasi dalam patogenesis status epileptikus melalui regulasi jalur pensinyalan protein kinase teraktivasi epilepsi adalah sindrom kompleks dari sistem saraf yang
mitogen p38 (p38MaPK). dalam penelitian ini, tikus Sprague‑dawley secara acak dibagi menjadi empat kelompok sebagai berikut: disebabkan oleh pelepasan neuron abnormal yang terlalu sinkron.
kontrol, status epileptikus (Se), perlakuan dimetil sulfoksida (dMSo + Se), dan kelompok perlakuan glycyrrhizin (Gl + Se). Perubahan Ada sekitar 70 juta pasien epilepsi (PWe) di seluruh dunia yang
perilaku kemudian dievaluasi menggunakan skor rasin. di hippocampus, tingkat ekspresi protein HMGB1 dinilai menggunakan sebagian besar tinggal di negara berpenghasilan rendah (1). di
western blotting, kerusakan saraf dievaluasi menggunakan pewarnaan hematoksilin dan eosin dan mikroskop elektron transmisi, Cina, jumlah PWe hampir 10 juta (2). Baik dari perspektif individu
dan aktivasi mikroglia dinilai menggunakan imunokimia dan fluoresensi imun. Hasilnya menunjukkan bahwa, di wilayah dan masyarakat, tingkat morbiditas yang tinggi dan masa terapi
hippocampal, HMGB1 ada di neuron dan astrosit dan tingkat ekspresi protein HMGB1, p38MaPK, dan p38MAPK yang dilapisi fosfor epilepsi yang panjang memberikan beban yang sangat besar
secara signifikan dihambat setelah pengobatan dengan Gl. Selanjutnya, Gl dapat meringankan cedera saraf di daerah ca1 pada kesehatan masyarakat, ekonomi dan kesejahteraan mental
hippocampus dan mencegah translokasi HMGB1 dari nukleus ke dalam sitoplasma di daerah ini. Temuan ini memperluas (3-5). Namun, mekanisme epilepsi masih belum jelas. Dalam
pemahaman tentang bagaimana HMGB1 dapat berpartisipasi dalam Se dan meletakkan dasar untuk evaluasi HMGB1 sebagai target beberapa dekade terakhir, penelitian ilmiah baru telah
obat. Hasilnya menunjukkan bahwa, di wilayah hippocampal, HMGB1 ada di neuron dan astrosit dan tingkat ekspresi protein melaporkan bahwa aktivasi sel dan molekul inflamasi, dan
HMGB1, p38MaPK, dan p38MAPK yang dilapisi fosfor secara signifikan dihambat setelah pengobatan dengan Gl. Selanjutnya, Gl pengaturan oleh dekomposisi cedera berperan penting dalam
dapat meringankan cedera saraf di daerah ca1 hippocampus dan mencegah translokasi HMGB1 dari nukleus ke dalam sitoplasma di epilepsi (6).
daerah ini. Temuan ini memperluas pemahaman tentang bagaimana HMGB1 dapat berpartisipasi dalam Se dan meletakkan dasar Protein kotak kelompok mobilitas tinggi-1 (HMGB1) adalah
untuk evaluasi HMGB1 sebagai target obat. Hasilnya menunjukkan bahwa, di wilayah hippocampal, HMGB1 ada di neuron dan protein nuklir dengan struktur asam nukleat stabil yang
astrosit dan tingkat ekspresi protein HMGB1, p38MaPK, dan p38MAPK yang dilapisi fosfor secara signifikan dihambat setelah diproduksi oleh monosit atau makrofag teraktivasi. Ketika sel
pengobatan dengan Gl. Selanjutnya, Gl dapat meringankan cedera saraf di daerah ca1 hippocampus dan mencegah translokasi terpapar pada sinyal berbahaya tertentu, HMGB-1 dapat
HMGB1 dari nukleus ke dalam sitoplasma di daerah ini. Temuan ini memperluas pemahaman tentang bagaimana HMGB1 dapat diproduksi di nukleus dan kemudian ditransfer ke sitoplasma, di
berpartisipasi dalam Se dan meletakkan dasar untuk evaluasi HMGB1 sebagai target obat. Gl dapat meringankan cedera saraf di mana ia berikatan dengan reseptor untuk membentuk produk
wilayah ca1 hippocampus dan mencegah translokasi HMGB1 dari nukleus ke dalam sitoplasma di area ini. Temuan ini memperluas akhir glikasi akhir (raGe), Toll-like receptor 2 dan Toll-like receptor
pemahaman tentang bagaimana HMGB1 dapat berpartisipasi dalam Se dan meletakkan dasar untuk evaluasi HMGB1 sebagai target 4 (Tlr4) (7). Studi sebelumnya telah melaporkan bahwa HMGB1
obat. Gl dapat meringankan cedera saraf di wilayah ca1 hippocampus dan mencegah translokasi HMGB1 dari nukleus ke dalam adalah agen proinflamasi, yang terkait dengan produksi dan
sitoplasma di area ini. Temuan ini memperluas pemahaman tentang bagaimana HMGB1 dapat berpartisipasi dalam Se dan pelepasan beberapa faktor proinflamasi pada berbagai penyakit,
meletakkan dasar untuk evaluasi HMGB1 sebagai target obat. termasuk interleukin‑1b, tumor necrosis factor‑α, dan molekul
adhesi sel antar sel‑1 , dan memainkan peran yang sangat
diperlukan dalam pemeliharaan respon inflamasi pada tahap
akhir peradangan (8). Sebuah studi baru-baru ini melaporkan
bahwa HMGB1 secara signifikan diekspresikan secara berlebihan
di hippocampus dalam model tikus status epileptikus (Se) yang
diinduksi oleh obat, yang menunjukkan bahwa HMGB1 terlibat
dalam proses patofisiologis dan perkembangan penyakit (9).
Namun, kemungkinan keterlibatan HMGB1 dalam Se belum
Korespondensi ke:Profesor Zucai Xu atau Profesor Zhongxiang Xu, diklarifikasi sebelumnya.
departemen neurologi, Rumah Sakit berafiliasi dengan universitas
p38 mitogen-activated protein kinase (p38MaPK) berperan
Medis Zunyi, 149 dalian road, Zunyi, Guizhou 563003, Pr china e‑mail:
penting dalam keluarga MaPK serin-lisin, mengatur produksi
docxzc@126.com
email: xuzhongxiang1@163.com
sel inflamasi dan stres oksidatif pada banyak penyakit (10).
P38MaPK dapat diaktifkan oleh rangsangan ekstraseluler yang
*
berkontribusi secara merata berbeda dan berhasil diubah menjadi terfosforilasi (p)-
p38MAPK oleh fosforilasi serin atau treonin spesifik dan
Kata kunci:status epileptikus, Glycyrrhizin, protein kotak kelompok kemudian ditransfer dari sitoplasma ke dalam nukleus, di
mobilitas tinggi‑1, protein kinase teraktivasi mitogen p38 mana ia mengaktifkan ekspresi faktor transkripsi, mengatur
gen terkait dan berpartisipasi dalam berbagai proses biologis,
seperti perkembangan jaringan,
2 luoet al: GlycYrrHiZin mengatur HMGB1/P38MaPK SIGNALING PATHWaY DI STATUS ePilePTicuS
reproduksi sel atau apoptosis, peradangan dan metastasis
kanker (11-15). dalam studi sebelumnya tentang cedera
reperfusi isch-emia-miokard, asma dan cedera usus, HMGB1
telah dilaporkan terkait dengan jalur pensinyalan p38MaPK
(16-18). Namun, belum pernah dilaporkan sebelumnya apakah
HMGB1 berpartisipasi dalam patogenesis epilepsi dengan
mengatur jalur pensinyalan p38MaPK.
Epilepsi yang diinduksi pilocarpine adalah model hewan
yang mapan untuk Se (19). injeksi pilocarpine pada tikus
menginduksi Se, yang memicu rangkaian peristiwa molekuler
dan seluler, yang menyebabkan kematian sel saraf dan
akhirnya menjadi epilepsi. Glycyrrhizin (GL) adalah komponen
anti‑inflamasi alami dan dapat diekstraksi dari akar manis,
obat tradisional Cina, atau disintesis secara kimiawi (20). itu
adalah penghambat langsung HMGB1 dan mengikat langsung
ke kedua kotak HMG. Gl memberikan efek neuroprotektif
melalui pemblokiran pelepasan HMGB1 ke ruang ekstraseluler
melalui interaksi dengan kotak HMG (21). Berdasarkan data
tersebut, dihipotesiskan bahwa HMGB1 berpartisipasi dalam
status epileptikus melalui jalur pensinyalan p38MaPK dan,
bahwa Gl mengatur serangan epilepsi dengan menghambat
aktivitas HMGB1 dan p‑p38MaPK. Untuk mengevaluasi
hipotesis ini, model tikus kejang epilepsi yang diinduksi
litium‑pilocar‑ pinus dibuat dan tingkat ekspresi protein
HMGB1 di hippocampus selama serangan epilepsi dinilai.
Keefektifan Gl dalam pengobatan status epileptikus yang
diinduksi litium‑pilocarpine pada tikus juga dievaluasi.
Bahan dan metode
Hewan percobaan.total 50 tikus Sprague‑dawley (Sd) jantan
dewasa yang sehat, dengan berat 250‑280 g (umur, 6‑8 minggu),
dibeli dari Hunan SJa laboratory animal co., ltd. semua tikus
dipelihara secara terpisah di ruangan dengan rata-rata 12 jam
siklus terang / gelap pada suhu kamar (24 ± 2 C̊ dan kelembaban
55 ± 5%) dan menyediakan makanan dan airad libitum. setelah
model Se telah berhasil sepenuhnya ditetapkan selama 24 jam,
tikus dibius menggunakan natrium pentobarbital 1% (40 mg / kg)
sebelum dikorbankan. Semua upaya dilakukan untuk
meminimalkan penderitaan tikus dan jumlah hewan yang
digunakan (misalnya, pencegahan asfiksia, pneumonia, dan
trauma). semua prosedur telah disetujui oleh komite perawatan
dan penggunaan hewan universitas Kedokteran Zunyi
[persetujuan no. KllY(a)‑2020‑009].
LiCl-pilocarpine akut menginduksi model status epileptikus tikus.Tikus
Sd secara acak dibagi menjadi empat kelompok (n = 12) sebagai
berikut: kontrol (Con), status epilepticus (SE), kelompok perlakuan
dimetil sulfoksida 2% (dMSo + Se) dan kelompok perlakuan Gl (Gl + Se).
lithium klorida (licl) dan pilocarpine disiapkan menggunakan salin
normal 0,9%. Tikus dalam kelompok SE diberikan lithium klorida 127
mg/kg dengan injeksi intraperitoneal dan Se diinduksi menggunakan
pilocarpine 40 mg/kg dengan injeksi intraperitoneal setelah
menunggu selama 18-20 jam, efek samping perifer dari gejala mirip
muskarinik/M dicegah menggunakan injeksi intraperitoneal dengan 1
mg/kg atropin sulfat 30 menit sebelum fase induksi, sedangkan
kelompok kontrol disuntik dengan volume yang sama dari salin
normal 0,9%. Perilaku tikus kemudian dievaluasi menggunakan skala
rasin (22), singkatnya: 0, Tikus tidak menunjukkan reaksi abnormal; 1,
itu
tikus menunjukkan kumis gemetar, kejang wajah dan
mengunyah tetapi tidak ada gerakan tubuh; 2, tikus
menunjukkan wajah berkedut, kram dan mengangguk tanpa
sadar; 3, tikus menunjukkan kedutan ekstremitas paroksismal
satu sisi; 4, tikus berdiri dengan dua kaki depan berkedut; 5,
tikus mendemonstrasikan serangan jatuh termasuk perilaku
serangan level 4. hanya tikus dengan Se parah persisten (skala
rasin 4-5) yang digunakan dalam penelitian lebih lanjut. Tiga
puluh menit setelah induksi Se, pilocarpine disuntikkan lagi ke
tikus dengan skor di bawah grade 4 sampai skor mencapai
setidaknya grade 4 (20). jika jumlah injeksi melebihi 5 dan
masih belum mencapai grade 4, pemodelan dianggap gagal.
Jumlah kejang dan periode latensi dicatat. Se diakhiri 60 menit
kemudian dengan injeksi intraperitoneal 5 mg/ml diazepam (1
mg/kg). jika Se dilanjutkan, suntikan diazepam lebih lanjut
(maksimum, n=3) diberikan. jika salah satu dari hal berikut
terjadi, Se dihentikan lebih awal dari 60 menit: kejang terus
menerus tahap 5 (naik dan turun) berlangsung lebih lama dari
5 menit, dispnea berat atau hipotermia.
Untuk tikus dalam kelompok Gl + Se, 100 mg/kg Gl (disiapkan
menggunakan DMSO 2% segar) disuntikkan 30 menit sebelum injeksi
pilokar‑ pinus dan kelompok lain disuntik dengan DMSO 2% segar
dalam volume yang sama.
blotting Barat.Setelah anestesi menggunakan natrium
pentobarbital 1% (40 mg/kg), enam tikus dipilih secara acak dari
masing-masing kelompok untuk ekstraksi jaringan otak. Tikus
dikorbankan dengan cara pemenggalan kepala, otak dibedah
pada piring yang didinginkan dan hippocampus dipisahkan dari
jaringan otak. Sampel jaringan otak yang terkumpul
dihomogenkan dalam buffer presipitasi radioim‑ mune yang
mengandung 1% phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) (kucing no.
HY‑B0496, MedChemExpress), inhibitor protease serin/sistein
ireversibel yang digunakan untuk menyiapkan lisat sel. dalam
penelitian ini, PMSF digunakan untuk menghambat degradasi
protein selama ekstraksi protein. Konsentrasi supernatan
diperkirakan menggunakan Kit Pengujian Protein BCA instan
(kucing no. ZJ101, epiZyme, inc.). Protein 30 µg per jalur dimuat ke
gel SdS‑PaGe (penumpukan, 5%; pemisahan, 10%). Sampel
kemudian dipindahkan ke membran PVDF dan diblokir
menggunakan susu bubuk skim 5% pada suhu kamar selama 1
jam. Selaput diinkubasi semalaman pada suhu 4˚C dengan
antibodi anti‑HMGB1‑spesifik (1:1.300; kucing no. 10829‑1‑aP,
Wuhan Sanying Biotechnology) dan kemudian diinkubasi pada
suhu kamar selama 2 jam dengan kambing affinipure
terkonjugasi HrP anti‑rabbit igG (H+l) (1:8.000; kucing no.
Sa00001‑2, Wuhan Sanying Biotechnology). setelah dibilas dengan
buffer yang sesuai, pita protein dikembangkan menggunakan kit
ecl Western lightning Plus (kucing no. P0018FS; Institut
Bioteknologi Shanghai Beyotime), sesuai dengan protokol
pabrikan. Bercak dicitrakan menggunakan Sistem pencitraan
chemicdoc™ (laboratorium Bio-rad, inc.). imageJ 1.52a (lembaga
kesehatan nasional) digunakan untuk menilai nilai skala abu-abu
dan SPSS 19.0 (iBM corp.
Imunofluoresensi.Tikus dibius menggunakan natrium pentobarbital
1% (40 mg/kg) dan kemudian diberi perfusi intrakardial dengan salin
0,9%, diikuti dengan paraformaldehida 4%. tidak ada detak jantung,
tidak adanya pernapasan spontan selama 2-3 menit dan tidak ada
refleks kedip dianggap sebagai indikasi
 LAPORAN Kedokteran Molekuler 27: 45, 2023
kematian. Kemudian, jaringan otak diisolasi dan disimpan dalam paraformaldehyde 4%
semalaman pada suhu 4̊ C. Jaringan otak didehidrasi menggunakan larutan sukrosa 20 dan 30%.
Akhirnya, sampel dipotong menjadi bagian 10 µm. Bagian-bagian tersebut diperbaiki
menggunakan microwave antigen retrieval set pada high selama 5 menit sebanyak 3 kali
dengan buffer asam sitrat (pH, 6,0), sedangkan membran di-permeabilisasi menggunakan
Triton X‑100 0,4% pada suhu 37˚C selama 15 menit. . Setelah inaktivasi enzim endogen
menggunakan 3% H2Hai2pada suhu kamar selama 30 menit, serum kambing (kucing no. ar0009,
Wuhan Boster Biological Technology, ltd.) digunakan untuk memblokir membran pada suhu
kamar selama 20 menit. setiap langkah sebelum pemblokiran dengan serum kambing harus
dicuci 5 menit, 3 kali dengan larutan PBS. Bagian-bagian tersebut diinkubasi semalaman pada
suhu 4̊ C dengan antibodi anti‑HMGB1 (1:100, kucing no. 10829‑1‑aP dan 66525‑1‑ig, Wuhan
Sanying Biotechnology), antibodi nukleus (neun) antineuronal (1:200 , kucing no. a11954-1,
Wuhan Boster Biological Technology, ltd.) dan antibodi anti‑glial fibrillary fibrillary acid protein
(GFAP) (1:300, kucing no. BM0055, Wuhan Boster Biological Technology, ltd.). Sampel kemudian
dihangatkan kembali selama 1 jam pada suhu 37 C̊, dicuci dengan larutan PBS dan diinkubasi
pada suhu 37 C̊ selama 1 jam dalam lingkungan gelap dengan antibodi fluoresen kedua anti-
kelinci terkonjugasi 488 (1:200, kucing no. ab150077, abcam) dan antibodi fluoresen kedua anti-
tikus terkonjugasi cy3 (1:200, kucing no. A0507, Institut Bioteknologi Beyotime). Bagian
kemudian dicuci menggunakan larutan PBS, diinkubasi dengan larutan daPi selama 5 menit.
Terakhir, bagian siap untuk pencitraan setelah disegel dengan larutan anti-pudar (cat no. S3023,
dako, agilent Technologies, inc.) pada suhu kamar. Kemudian wilayah hippocampal dari bagian
tersebut dinilai dan dicitrakan menggunakan mikroskop confocal pemindaian laser (perusahaan
nikon) dalam waktu 48 jam. Analisis colocalization dilakukan dengan menggunakan niS‑viewer
(nikon corporation). bagian siap untuk pencitraan setelah disegel dengan larutan anti-pudar (cat
no. S3023, dako, agilent Technologies, inc.) pada suhu kamar. Kemudian wilayah hippocampal
dari bagian tersebut dinilai dan dicitrakan menggunakan mikroskop confocal pemindaian laser
(perusahaan nikon) dalam waktu 48 jam. Analisis colocalization dilakukan dengan menggunakan
niS‑viewer (nikon corporation). bagian siap untuk pencitraan setelah disegel dengan larutan
anti-pudar (cat no. S3023, dako, agilent Technologies, inc.) pada suhu kamar. Kemudian wilayah
hippocampal dari bagian tersebut dinilai dan dicitrakan menggunakan mikroskop confocal
pemindaian laser (perusahaan nikon) dalam waktu 48 jam. Analisis colocalization dilakukan
dengan menggunakan niS‑viewer (nikon corporation).
Imunohistokimia.Tikus dibius menggunakan natrium pentobarbital 1%
(40 mg/kg). Setelah anestesi, otak dikeluarkan dari rongga tengkorak
setelah perfusi dengan saline dan kemudian paraformaldehyde 4%
sesuai dengan protokol yang disebutkan di atas. Jaringan difiksasi
menggunakan poliformaldehida 4% pada suhu 4̊ C semalam, tertanam
dalam parafin dan dipotong setebal 5 µm. Secara singkat, potongan
spesimen dideparafinisasi menggunakan xylene selama 20 menit, dua
kali, dan kemudian direhidrasi menggunakan seri etanol bertingkat
(100, 95, 80 dan 70%) selama 5 menit pada suhu kamar. Pemulihan
antigen dilakukan dengan menggunakan microwave antigen retrieval
set high selama 5 menit, 3 kali, dengan buffer asam sitrat (pH, 6,0).
setelah inaktivasi enzim endogen menggunakan 3% H2Hai2selama 10
menit pada suhu kamar, bagian diblokir menggunakan albumin serum
sapi (kucing no. ar1006, Wuhan Boster Biological Technology, ltd.)
selama 30 menit pada suhu kamar. Kemudian bagian diinkubasi pada
suhu 4̊ C semalam dengan antibodi primer yang diencerkan terhadap
HMGB1 (1:200, kucing no. 10829‑1‑aP, Wuhan Sanying Biotechnology)
dan iba1 (1:1.000, kucing no. 012‑26723, FuJiFilM Wako Pure
perusahaan kimia). Mereka kemudian dihangatkan kembali dalam
inkubator pada suhu 37 C̊ selama 1,5 jam. Menurut protokol pabrikan
untuk kit imunohistokimia (kucing no. PV9001, oriGene Technologies,
inc.), bagian diinkubasi pada suhu 37 C̊ selama 30 menit dengan
larutan igG anti-kelinci dan streptavidin-Pod Bio‑goat (1: 100),
kemudian dicuci menggunakan PBS. Bagian diwarnai menggunakan
cairan warna daB
3
(cat. no. B1072, applyGen Technologies, inc.) sesuai dengan
protokol pabrikan, di lingkungan gelap pada suhu kamar dan
reaksi pewarnaan dihentikan ketika partikel cokelat sedang
diamati di bawah mikroskop. Irisan dibedakan dengan larutan
diferensiasi alkohol asam klorida (0,5%) selama 2 detik,
didehidrasi selama 5 menit dengan masing-masing
konsentrasi spesifik alkohol (70, 80, 95 dan 100%) dan gusi
netral disegel setelah pewarnaan hematoxylin selama 40 detik
di kamar. suhu. Akhirnya, gambar imunohistokimia ditangkap
menggunakan mikroskop cahaya cX43 (perusahaan olympus).
Tingkat ekspresi protein HMGB1 dan aktivasi mikroglia dinilai
menggunakan imageJ 1.52a (lembaga kesehatan nasional).
Mikroskop elektron transmisi (TEM).Tiga tikus dalam setiap kelompok dibius
menggunakan natrium pentobarbital 1% (40 mg/kg) sebelum pemenggalan
kepala. Daerah ca1 di hippocampus dipisahkan, jaringan ca1 dipotong kecil-
kecil berukuran kurang lebih 1 mm3dan ditempatkan ke dalam 4%
glutaraldehid. Sampel difiksasi menggunakan larutan pengikat campuran
glutaral‑dehyde‑paraformaldehyde 2,5% (pH, 7,2) selama 2 jam pada suhu
kamar, dicuci dengan PBS selama 10 menit, 3 kali dan difiksasi dalam asam
osmat 1% selama 2 jam pada suhu kamar. Sampel kemudian didehidrasi
menggunakan etanol bertingkat (50, 70, 80, 90 dan 100%) selama 10 menit
dan aseton 100% selama 15 menit. Sampel kemudian disematkan setelah
direndam dalam resin epoksi, dipolimerisasi dalam oven pada suhu 60 C̊
selama 46 jam, dipotong menjadi beberapa bagian dengan ketebalan 70
nm dan diwarnai selama 15 menit menggunakan larutan alkohol jenuh
uranium asetat 2% dan timbal sitrat pada suhu kamar, berurutan. Sampel
dipindahkan dan ditempatkan di tempat berventilasi untuk dikeringkan
semalaman dan kemudian dinilai menggunakan TeM dan gambar diambil
untuk evaluasi.
Pewarnaan hematoksilin dan eosin (H&E).Untuk pewarnaan H&e, jaringan
otak diperoleh dengan menggunakan metode yang disebutkan di atas yang
digunakan untuk pewarnaan imunohistokimia. Irisan difiksasi
menggunakan seri alkohol bertingkat (100, 95, 85 dan 70%) selama 5 menit
dan dihidrasi dengan perendaman dalam alkohol asam klorida 1% selama
30 detik pada suhu kamar. Irisan kemudian diwarnai menggunakan
hematoxylin selama 5 menit dan dibilas dengan air selama 1 menit pada
suhu kamar. Irisan kemudian diwarnai dengan eosin 0,5% selama 3 menit,
dan didehidrasi menggunakan seri alkohol bertingkat (70, 85, 95 dan 100%)
selama 5 menit pada suhu kamar. Terakhir, bagian-bagian ditutup
menggunakan kaca penutup dan dicitrakan menggunakan mikroskop
elektron pemindaian Hd‑2700 (perusahaan Hitachi High‑Technologies).
Analisis statistik.data dari penelitian ini dianalisis menggunakan
SPSS 19.0 (iBM corp.) untuk analisis statistik. data disajikan
sebagai rata-rata ± standar deviasi, perbandingan
> 2 kelompok dilakukan dengan menggunakan anoVa 1 arah diikuti
dengan uji post hoc Bonferroni dan P<0,05 dianggap menunjukkan
perbedaan yang signifikan secara statistik.
Hasil
Lokasi HMGB1 di h ippocampus tikus SE yang diinduksi
LiCl-pilocarpine.evaluasi tingkat ekspresi protein
HMGB1 di neuron hippocampal dari kelompok Se
menunjukkan bahwa HMGB1 sangat diekspresikan
4 luoet al: GlycYrrHiZin mengatur HMGB1/P38MaPK SIGNALING PATHWaY DI STATUS ePilePTicuS

Gambar 1. Deteksi imunofluoresensi dari tingkat ekspresi protein HMGB1 di wilayah CA1, CA3 dan DG hippocampal dari tikus SE yang diinduksi pilocarpine. ( a ) panah
menunjukkan sel positif neun, HMGB1 dan daPi. (B) panah menunjukkan sel positif GFaP, HMGB1 dan daPi. Bilah skala=30 µm (10 µm dalam tampilan inset yang
diperbesar). HMGB1, protein kotak kelompok mobilitas tinggi-1; DG, dentate gyrate; NeuN, inti saraf; SE, status epileptikus; GFAP, protein asam fibrillar glial.

di daerah hippocampal yang berbeda. pewarnaan
imunofluoresensi neuron menggunakan penanda spesifik neun,
menunjukkan bahwa HMGB1 diekspresikan bersama dengan
neuron (Gbr. 1a). Selanjutnya, pewarnaan imunofluoresensi
neuron dengan penanda spesifik GFAP menunjukkan bahwa
HMGB1 juga diekspresikan bersama dengan astrosit (Gbr. 1B).
Tingkat ekspresi protein HMGB1, p38MAPK dan p‑p38MAPK di
hippocampus tikus SE yang diinduksi LiCl‑pilocarpine.Tingkat
ekspresi protein HMGB1, p38MaPK dan p‑p38MaPK di
hippocampus tikus Se yang diinduksi pilocarpine dinilai
menggunakan western blotting. dibandingkan dengan kelompok
kontrol, tingkat ekspresi protein HMGB1 secara signifikan
 LAPORAN Kedokteran Molekuler 27: 45, 2023 5

Gambar 2. Gl mempengaruhi tingkat ekspresi protein HMGB1, p38MaPK dan p‑p38MaPK di hippocampus tikus Se yang diinduksi pilocarpine. gambar representatif dari
( a ) HMGB1, ( c ) p38MaPK dan ( e ) tingkat ekspresi protein p-p38MaPK di hippocampus tikus Se yang diinduksi pilocarpine. perbandingan rasio intensitas western
blotting ( B ) HMGB1 / GaPdH dan ( d ) p-p38MaPK / p38MaPK di hippocampus tikus Se yang diinduksi pilocarpine. Tingkat ekspresi protein dasar HMGB1, p38MaPK dan
p‑p38MaPK dinilai pada kelompok con. data yang disajikan adalah rata-rata empat ulangan teknis (n = 6 di setiap kelompok).*P<0,05 dan**P <0, 01 vs kelompok Se. Gl,
glycyrrhizin; HMGB1, protein kotak kelompok mobilitas tinggi-1; MaPK, protein kinase teraktivasi mitogen; p, terfosforilasi; SE, status epileptikus; Con, kontrol; n, tidak
signifikan.

diregulasi dalam kelompok Se. Namun, dibandingkan dengan
kelompok Se, tingkat ekspresi protein HMGB1 pada kelompok
dMSo+Se tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan.
Dibandingkan dengan kelompok dMSo + Se, tingkat ekspresi protein
HMGB1 pada kelompok GL + SE menurun secara signifikan (rasio
intensitas rata-rata: 0,57±0,15 pada kelompok kontra, 1,09±0,20 pada
kelompok Se, 1,08±0,20 pada kelompok dMSo+ kelompok Se dan 0,8 ±
0,17 pada kelompok Gl + Se; Gambar 2a dan B). Western blotting juga
dilakukan untuk mengevaluasi tingkat ekspresi protein p38MaPK dan
p-p38MaPK di hippocampus tikus Se yang diinduksi pilocarpine. Rasio
p‑p38MaPK/p38MaPK dievaluasi dan menunjukkan tren yang sama
dengan tingkat ekspresi protein HMGB1 di hippocampus tikus Se yang
diinduksi pilocarpine (rasio rata-rata p‑p38MaPK/p38MaPK: 0,39±0,09
pada kelompok kontrol, 0,71± 0,08 pada kelompok Se, 0,69±0,13 pada
kelompok dMSo+Se dan 0,49±0,09 pada kelompok Gl+Se; Gambar
2c‑e).
GL memengaruhi latensi kejang pertama dan jumlah serangan
epilepsi pada tikus SE yang diinduksi LiCl-pilocarpine. Hasil
perilaku menunjukkan bahwa kelompok kontrol tidak mengalami
kejang. Latensi kejang pertama pada kelompok SE dan dMSo+Se
adalah 14,14±3,08 dan 13,29±1,9 menit,
masing-masing, dan latensi kejang pertama pada kelompok
GL + Se adalah 13,57±2,23 menit. Jumlah kejang dalam 1 jam
setelah kejang pertama pada kelompok Se dan dMSo + Se
masing-masing adalah 7,1 ± 2,13 dan 7,6 ± 1,72, dan jumlah
kejang dalam 1 jam setelah kejang pertama pada kelompok Gl
+ Se adalah 2,9 ±1,35. Hasilnya menunjukkan tidak ada
perbedaan yang signifikan antara latensi atau jumlah kejang
dalam 1 jam antara kelompok Se dan dMSo + Se.
dibandingkan dengan kelompok Se dan dMSo + Se, kelompok
GL + SE tidak menunjukkan efek signifikan pada latensi kejang
(Tabel i; Gambar 3a). Namun, kelompok Gl + Se memang
menunjukkan penurunan jumlah kejang yang signifikan
dibandingkan dengan kelompok Se (Tabel 1; Gambar 3B).
GL mengubah translokasi dan pelepasan HMGB1 dari
nukleus sel di hippocampus tikus SE yang diinduksi
LiCl‑pilocarpine.imunohistokimia digunakan untuk menilai
tingkat ekspresi protein dan tingkat translokasi HMGB1
dalam jaringan hippocampal. ditunjukkan bahwa sel positif
HMGB1 pada kelompok con (Gbr. 4a) sebagian besar
terletak di nukleus dan sitoplasma neuron, sedangkan
pada kelompok Se (Gbr. 4B), translokasi sitoplasma nuklir
6 luoet al: GlycYrrHiZin mengatur HMGB1/P38MaPK SIGNALING PATHWaY DI STATUS ePilePTicuS

Gambar 3. Efek GL pada kejang. (A) GL tidak secara signifikan mempengaruhi latensi kejang pertama; namun, (B) jumlah kejang berkurang secara signifikan (n=12 pada
setiap kelompok).**P<0,01 vs Se. Gl, glycyrrhizin; Se, status epileptikus; con, kontrol.

Gambar 4. penilaian imunohistokimia tingkat ekspresi protein HMGB1 di hippocampus tikus dalam kelompok (a) con, (B) Se dan (c) Gl + Se. panah
menunjukkan sel positif HMGB1. ( d ) Gl menurunkan translokasi HMGB1 di daerah ca1, ca3 dan dG hippocampus (n = 9 pada setiap kelompok).*P <0,05.
Bilah skala=50 µm (3 µm dalam tampilan inset yang diperbesar). Gl, glycyrrhizin; Se, status epileptikus; con, kontrol; dG, dentate gyrate; HMGB1, protein
kotak kelompok mobilitas tinggi-1.
 LAPORAN Kedokteran Molekuler 27: 45, 2023
Tabel I. Glycyrrhizin mempengaruhi latensi kejang pertama dan
jumlah serangan epilepsi pada tikus.
Latensi pertama Jumlah kejang
Grup kejang (min) dalam satu jam
menipu 0 0
Se 14,14±3,08 7.1±2.13
dMSo + Se 13,29±1,90 7,6 ± 1,72
Gl + Se 13,57±2,23 2,9 ± 1,35A
Jumlah serangan epilepsi ditampilkan sebagai rata-rata ± standar
deviasi (n=12 pada masing-masing kelompok).AP<0,001 vs Se. con,
kontrol; Se, status epileptikus; Gl, glycyrrhizin.
dan pelepasan ekstraseluler terjadi pada sel positif HMGB1.
dibandingkan dengan kelompok Se, translokasi sitoplasma
nuklear dan pelepasan ekstraseluler secara nyata dihambat
dalam sel positif HMGB1 (Gbr. 4c). Tingkat translokasi HMGB1
pasca perawatan Se dihitung (Gbr. 4d). Tingkat translokasi
HMGB1 pada kelompok SE secara signifikan lebih tinggi
dibandingkan dengan kelompok con dan Gl + Se. Data
menunjukkan bahwa translokasi HMGB1 dari nukleus ke
sitoplasma secara signifikan dihambat pada kelompok GL + SE
(Gbr. 4d) dibandingkan dengan kelompok Se.
GL melemahkan cedera saraf di wilayah CA1 hippocampal dari
tikus SE yang diinduksi LiCl-pilocarpine.Pewarnaan H&e
menunjukkan bahwa neuron hippocampal pada kelompok con
(Gbr. 5a) tersusun rapi dengan kontur sel jernih dan
nukleolus, dan kromatin pada neuron transparan dan merata
di sekitar nukleus. Neuron di Se (Gbr. 5B) dan dMSo
+ Kelompok Se (Gbr. 5c) tersusun tidak beraturan dan terganggu,
dan neuron pada kedua kelompok adalah piroptotik dan vakuola
sitoplasma yang didemonstrasikan. Susunan saraf pada kelompok
Gl + Se (Gbr. 5d) sedikit tidak teratur, dengan lisis dan nekrosis
saraf; Namun, tingkat kerusakan saraf secara nyata lebih sedikit
dibandingkan pada kelompok Se dan dMSo + Se.
GL mengurangi kerusakan mitokondria di wilayah CA1 hippocampal
dari tikus SE yang diinduksi LiCl-pilocarpine.Ultrastruktur mitokondria
neuron di wilayah ca1 hippocampi tikus dinilai menggunakan TeM.
Ultrastruktur mitokondria jelas dan membran dalam dan luarnya
berbentuk diskoid atau batang pendek yang kontinu dan utuh serta
memiliki kepadatan matriks yang tinggi pada kelompok con (Gbr. 6a).
Ultrastruktur mito-chondria pada tiga kelompok lainnya rusak pada
tingkat yang berbeda-beda: Kelompok Se (Gbr. 6B) dan dMSo + Se
(Gbr. 6c) memiliki struktur mitokondria yang tidak jelas,
pembengkakan yang jelas, kepadatan matriks yang berkurang, dan
degradasi sebagian atau seluruhnya dari membran dalam dan luar.
Selain itu, pada kelompok Gl + Se (Gbr. 6d), sebagian struktur
mitokondria rusak dan bengkak, dan sebagian membran rusak;
namun, tingkat kerusakannya lebih kecil dibandingkan kelompok Se
dan dMSo+Se.
GL mengubah aktivasi mikroglial di hippocampus tikus SE
yang diinduksi LiCl-pilocarpine.Tingkat aktivasi glial dinilai
menggunakan pewarnaan imunohistokimia dengan
7
Iba‑1, yang secara khusus memberi label sel mikroglia. Di kampus
kuda nil, ditunjukkan bahwa mikroglia dalam kelompok con (Gbr.
7a) dicirikan oleh ukuran sel kecil, sitoplasma padat, dendrit
memanjang multipel, dan fagositosis saat istirahat. dibandingkan
dengan kelompok con, mikroglia pada kelompok Se (Gbr. 7B)
berada dalam tahap aktivasi dan terutama bermanifestasi dengan
pembesaran sel tubuh, pengenceran sitoplasma, penebalan dan
pemendekan dendrit, dan fagositosis. dibandingkan dengan
kelompok con, meskipun badan sel masih membesar, dendrit
memendek dan sebagian menebal pada kelompok Gl + Se (Gbr.
7c) yang menunjukkan bahwa Gl secara nyata menghambat
aktivasi mikroglia.
Diskusi
banyak penelitian telah melaporkan patogenesis epilepsi,
termasuk namun tidak terbatas pada pertumbuhan akson,
morfologi dendritik, infiltrasi sel inflamasi, proliferasi sel glial,
pertumbuhan vaskular, dan perubahan degeneratif (23-28), yang
menunjukkan potensi besar untuk pengobatan epilepsi. epilepsi.
Namun, mekanisme patogenik epilepsi yang tepat masih belum
jelas.
HMGB1 adalah target intervensi baru dan menarik untuk
epilepsi. meskipun pemahaman tentang HMGB1 telah meningkat,
sedikit yang diketahui tentang mekanisme pasti dimana HMGB1
berpartisipasi dalam perkembangan serangan epilepsi. Studi
sebelumnya telah melaporkan bahwa HMGB1 berpartisipasi
dalam perkembangan epilepsi terutama dengan interaksi dengan
kemarahan (29) atau Tlr4 (30), kerusakan pada penghalang darah-
otak dan induksi kaskade inflamasi. Selanjutnya, HMGB1 telah
dilaporkan berkontribusi secara signifikan terhadap respon
inflamasi dan berhubungan dengan inflamasi steril dan, penyakit
autoimun dan neurodegeneratif (31). selama perkembangan
epilepsi, HMGB1 mentranslokasi dari nukleus ke sitoplasma
setelah cedera dan dilepaskan ke ruang ekstraseluler untuk
bertindak sebagai faktor proinflamasi yang menginduksi respon
inflamasi (32). Karena wilayah ca1 hippocampus sangat rentan
terhadap hipoksia dan iskemia, penelitian ini berfokus pada
pengaturan jalur pensinyalan HMGB1/p38MaPK oleh Gl.
Kurangnya daerah ca3 dan dentate gyrus di beberapa bagian
penelitian merupakan keterbatasan penelitian ini yang
memerlukan evaluasi lebih lanjut di masa depan. Penelitian ini
menunjukkan bahwa di antara tikus epilepsi akut yang diinduksi
licl-pilocarpine, protein HMGB1 secara signifikan diregulasi
setelah kejang. Pada kelompok kontrol, hasil imunohistokimia
mengilustrasikan bahwa sel-sel HMGB1-positif terutama ada di
nukleus neuron dan jumlah yang sangat berkurang ada di
sitoplasma. Selama total 24 jam setelah kejang, sel positif HMGB1
mengalami translokasi nuklir ke sitoplasma dan beberapa HMGB1
dilepaskan ke ruang ekstraseluler. evaluasi imunofluoresensi
berlabel HMGB1, menunjukkan bahwa HMGB1 diekspresikan
pada neuron hippocampal dan astrosit. Selanjutnya, metode
eksperimental yang berbeda digunakan untuk menunjukkan
bahwa HMGB1 dapat berpartisipasi dalam pengembangan
serangan epilepsi, yang sesuai dengan penelitian yang dilaporkan
sebelumnya.
HMGB1, seperti agen inflamasi lainnya, dapat menyebabkan
serangan epilepsi dengan merusak sawar darah-otak (BBB).
HMGB1 dapat menginduksi dan mempertahankan cedera BBB
8 luoet al: GlycYrrHiZin mengatur HMGB1/P38MaPK SIGNALING PATHWaY DI STATUS ePilePTicuS

Gambar 5. Gl mempengaruhi tingkat cedera neuron di daerah ca1 hippocampal tikus (n = 3) pada kelompok (a) con, (B) Se, (c) dMSo + Se dan (d) Gl + Se. cedera neuron
ditunjukkan oleh neuron yang menyusut dengan inti pyknotic (ditunjukkan oleh panah kuning). Bilah skala=50 µm (15 µm dalam tampilan inset yang diperbesar). con,
kontrol; Gl, glycyrrhizin; Se, status epileptikus.

melalui regulasi persimpangan ketat endotel dan membran dasar atau mempromosikan kejang
epilepsi melalui regulasi rangsangan saraf dan ambang epilepsi selama epilepsi (32,33). selama
kejang, kerusakan BBB dapat memfasilitasi invasi parenkim otak oleh HMGB1 dan molekul
inflamasi lainnya, yang dapat memperburuk serangan epilepsi (34). BBB dapat dirusak oleh
masuknya kalium ekstraseluler, yang dapat mendepolarisasi neuron secara langsung atau
menyebabkan konsekuensi serius lainnya, seperti cedera pada kapasitas buffer kalium dan
aktivasi sel glial, yang kemudian menginduksi peradangan, sinaptogenesis, cedera fungsi
keseimbangan dinamis mitokondria. dan akhirnya menginduksi SE (35,36). Studi sebelumnya
telah melaporkan bahwa HMGB1 dilepaskan ke aliran darah pusat dan perifer setelah tikus
diobati dengan pilocarpine, yang dapat berkontribusi pada perkembangan epilepsi dengan
memfasilitasi kerusakan BBB dan aktivasi agen inflamasi (37). Penelitian ini menunjukkan bahwa
mikroglia diaktifkan selama serangan epilepsi dan terutama ditandai oleh badan sel yang
membesar dan, dendrit yang lebih tebal dan lebih pendek. Mitokondria di neuron hippocampal
berubah secara signifikan, terutama ditandai dengan edema, kerusakan membran, dan
penurunan kepadatan matriks. Perubahan ini menunjukkan bahwa mitokondria sangat parah
Penelitian ini menunjukkan bahwa mikroglia diaktifkan selama serangan epilepsi dan terutama
ditandai oleh badan sel yang membesar dan, dendrit yang lebih tebal dan lebih pendek.
Mitokondria di neuron hippocampal berubah secara signifikan, terutama ditandai dengan
edema, kerusakan membran, dan penurunan kepadatan matriks. Perubahan ini menunjukkan
bahwa mitokondria sangat parah Penelitian ini menunjukkan bahwa mikroglia diaktifkan selama
serangan epilepsi dan terutama ditandai oleh badan sel yang membesar dan, dendrit yang lebih
tebal dan lebih pendek. Mitokondria di neuron hippocampal berubah secara signifikan,
terutama ditandai dengan edema, kerusakan membran, dan penurunan kepadatan matriks.
Perubahan ini menunjukkan bahwa mitokondria sangat parah
rusak. Hasil yang disebutkan di atas sesuai dengan penelitian
yang dilaporkan sebelumnya.
Jalur transduksi sinyal MaPK berperan penting dalam
terjadinya dan perkembangan penyakit sistem saraf; lebih
lanjut, penghambatan jalur pensinyalan MaPK dapat secara
signifikan mengurangi kerusakan sel saraf (38). Jalur
pensinyalan JnK dan p38, sebagai dua jalur transduksi sinyal
terpenting dari MaPK, terutama terlibat dalam regulasi
proliferasi sel, diferensiasi, apoptosis, nekrosis, dan siklus sel
(39,40). Penelitian ini menunjukkan bahwa p38MaPK
diaktifkan dalam model status epileptikus, disertai dengan
berbagai tingkat kehilangan neuron dan sklerosis
hippocampal. Oleh karena itu, dihipotesiskan Gl dapat
menghambat jalur pensinyalan p38MaPK dengan menekan
HMGB1, yang dapat mengurangi kerusakan saraf dan
mengubah perkembangan epilepsi setelah kejang. Penelitian
ini menunjukkan bahwa injeksi GL intraperito-neal 30 menit
sebelum kejang secara signifikan mengurangi jumlah kejang
tetapi tidak memiliki pengaruh yang signifikan pada latensi
kejang pertama, yang mungkin terkait dengan penghambatan
translokasi dan pelepasan Gl. dari HMGB1. GL memiliki efek
anti-inflamasi, hepatoprotektif dan neuroprotektif (41-43).
sebelumnya dilaporkan bahwa Gl menghasilkan efek
neuroprotektif pada postischemic
 LAPORAN Kedokteran Molekuler 27: 45, 2023 9

Gambar 6. efek Gl pada ultrastruktur mitokondria di wilayah ca1 hippocampal tikus dalam kelompok (a) con, (B) Se, (c) dMSo + Se dan (d) Gl + Se. Lingkaran kuning
menunjukkan mitokondria (n = 3 di setiap kelompok). Bilah skala = 1 µm. con, kontrol; Gl, glycyrrhizin; Se, status epileptikus.

Gambar 7. penilaian imunohistokimia mikroglia di hippocampus dari kelompok (a) con, (B) Se dan (c) Gl + Se. panah menunjukkan sel positif iba1. Bilah skala=50 µm (20
µm dalam tampilan inset yang diperbesar). con, kontrol; Gl, glycyrrhizin; Se, status epileptikus.

otak serta dalam model epilepsi yang diinduksi asam kainic
pada tikus (44,45). Selain itu, Gl juga dilaporkan telah
mencegah efek eksitotoksik pada kultur primer (46).
Mekanisme Gl dalam perlindungan terhadap cedera neuron
dan cedera mitokondria telah dilaporkan sebelumnya
termasuk supresi stres oksidatif dan sitokin proinflamasi (44).
studi tertentu melaporkan bahwa Gl dapat bergabung dengan
HMGB1 secara langsung, yang menghalangi interaksi antara
residu serin utama HMGB1 dan protein kinase c, yang dengan
demikian menghambat fosforilasi HMGB1
dan translokasi selanjutnya dari HMGB1 (47), yang sesuai
dengan hasil penelitian ini. Western blotting digunakan untuk
menilai tingkat ekspresi protein p38MaPK dan p‑p38MaPK
setelah injeksi dengan Gl untuk menghambat HMGB1. Hasil
penelitian ini menunjukkan bahwa tingkat ekspresi protein
p38MaPK dan p-p38MaPK diturunkan secara signifikan dalam
jaringan hippocampal 24 jam setelah kejang, yang
menunjukkan bahwa HMGB1 berpartisipasi dalam serangan
epilepsi melalui jalur pensinyalan p38MaPK. Penelitian ini juga
menunjukkan bahwa mikroglia teraktivasi
10 luoet al: GlycYrrHiZin mengatur HMGB1/P38MaPK SIGNALING PATHWaY DI STATUS ePilePTicuS
dihambat setelah downregulasi HMGB1 dan penelitian
sebelumnya melaporkan bahwa salah satu mekanisme p38MaPK
mempromosikan perkembangan peradangan adalah untuk
mengatur aktivasi mikroglia (48), yang secara tidak langsung
menunjukkan bahwa HMGB1 dapat mengatur partisipasi jalur
pensinyalan p38MaPK dalam serangan epilepsi.
Singkatnya, hasil penelitian ini menunjukkan bahwa
tingkat ekspresi protein HMGB1 diregulasi secara signifikan
selama serangan epilepsi. Setelah penghambatan HMGB1
spesifik glycyrrhizin, neuron hippocampal dan cedera
mitokondria dapat dikurangi, tingkat ekspresi protein
p38MaPK dan p38MaPK secara nyata diturunkan dan aktivasi
mikroglial dihambat, yang secara nyata mengurangi jumlah
serangan epilepsi dalam satu jam. Mekanismenya mungkin
melalui regulasi jalur pensinyalan p38MaPK oleh HMGB1 dan
partisipasi dalam epileptogenesis. Namun, ada batasan
tertentu untuk penelitian ini: Penelitian ini hanya
menggunakan dosis tunggal dan rute pemberian (injeksi
intraperitoneal 100 mg/kg) Gl pada tikus dan tidak memiliki
percobaan seluler; lebih-lebih lagi, kemungkinan keterlibatan
jalur pensinyalan inflamasi lainnya dalam penelitian ini tidak
dapat dikesampingkan dan ini dapat mengganggu hasil. Studi
lebih lanjut tentang efek dosis dan rute pemberian Gl yang
berbeda dari pengaruhnya terhadap paroxysm serangan
epilepsi diperlukan. Selanjutnya, mekanisme rinci aktivasi
HMGB1 cedera neuron dan aktivasi astrosit perlu dinilai
menggunakan percobaan kultur sel.
pemahaman yang lebih baik tentang mekanisme yang
tepat dimana HMGB1 berpartisipasi dalam serangan epilepsi
sangat penting untuk pengobatan epilepsi. Obat baru yang
menargetkan HMGB1, yang dapat digunakan dalam bidang
ilmu saraf akan memberikan jalur baru untuk terapi epilepsi.
sebagai kesimpulan, Gl dapat meringankan cedera saraf di
daerah ca1 hippocampus dan mencegah translokasi HMGB1
dari nukleus ke sitoplasma di daerah ini. Gl dapat memberikan
efek neuroprotektif melalui penekanan ekspresi p38MaPK dan
p‑p38MaPK. Penelitian ini meningkatkan pemahaman tentang
mekanisme dimana HMGB1 dapat berpartisipasi dalam status
epileptikus dan meletakkan dasar untuk eksplorasi
kemungkinan penggunaan Gl sebagai obat antiseizure baru.
Terima kasih
tak dapat diterapkan.
Pendanaan
Studi ini didukung oleh The Zunyi city Science and
Technology Foundation [hibah no. (2018)64], Stasiun
Kerja Pascasarjana Neurologi Zunyi Medical College
(hibah no. GZZ2017004), Proyek Sains dan Teknologi di
Provinsi Guizhou [hibah no. ZK (2022) Umum 656] dan
Proyek Sains dan Teknologi komisi Kesehatan Guizhou
(hibah no. gzwkj2021.017 dan gzwjkj2020‑1‑010).
Ketersediaan data dan bahan
Kumpulan data yang digunakan dan/atau dianalisis selama penelitian ini
tersedia dari penulis terkait berdasarkan permintaan yang masuk akal.
Kontribusi penulis
ZcX dan ZXX menyusun dan merancang studi tersebut. Zl, MX, lHZ
dan HQZ melakukan percobaan. MX dan HQZ melakukan analisis
statistik, Zl, MX dan HQZ menulis naskahnya. Zl, MX, lHZ, ZcX dan
ZXX meninjau dan mengedit naskah. Semua penulis membaca
dan menyetujui naskah akhir. ZL dan MX mengonfirmasi keaslian
semua data mentah.
Persetujuan etika dan persetujuan untuk berpartisipasi
semua prosedur eksperimental telah disetujui oleh komite
perawatan dan penggunaan hewan dari Universitas Medis Zunyi
(persetujuan no. KllY(a)‑2020‑009).
Persetujuan pasien untuk publikasi
tak dapat diterapkan.
Kepentingan yang bersaing
Para penulis menyatakan bahwa mereka tidak memiliki kepentingan bersaing.
Referensi
1. Mallok a, Vaillant Jd, Soto MT, Viebahn‑Hänsler r, Viart Mde l,
Pérez aF, cedeño ri dan Fernández oS: efek perlindungan ozon
terhadap kejang umum yang diinduksi PTZ dimediasi oleh
pembentukan kembali keseimbangan redoks seluler dan a1
reseptor adenosin. neurol res 37: 204-210, 2015.
2. ding d, Zhou d, Sander JW, Wang W, li S dan Hong Z: epilepsi di
cina: Kemajuan besar dalam dua dekade terakhir. lancet
neurol 20: 316-326, 2021.
3. Shangguan Y, Xu X, Ganbat B, li Y, Wang W, Yang Y, lu X, du c,
Tian X dan Wang X: cnTnaP4 berdampak pada epilepsi melalui
regulasi reseptor GaBaa: bukti dari pasien epilepsi lobus
temporal dan model tikus. korteks serebral 28: 3491-3504,
2018.
4. Xu X, Shangguan Y, lu S, Wang W, du c, Xiao F, Hu Y, luo J, Wang l,
He c,et al: Tubulin β‑iii memodulasi aktivitas kejang pada epilepsi. J
Pathol 242: 297-308, 2017.
5. Zhao Y, li X, Zhang K, Tong T dan cui r: Perkembangan epilepsi
setelah stroke. curr neuropharmacol 16: 71-78, 2018.
6. Rana A dan Musto AE: Peran peradangan dalam
perkembangan epilepsi. J Neuroinflamasi 15: 144, 2018.
7. Yang QW, Wang JZ, li Jc, Zhou Y, Zhong Q, lu Fl dan Xiang J: Kotak protein
kelompok mobilitas tinggi‑1 dan relevansinya dengan iskemia serebral.
J cereb Aliran Darah Metab 30: 243-254, 2010.
8. Yang H, Wang H dan andersson u: Menargetkan peradangan yang
didorong oleh HMGB1. Imunol depan 11: 484, 2020.
9. li YJ, Wang l, Zhang B, Gao F dan Yang cM: Glycyrrhizin,
penghambat HMGB1, menunjukkan efek neuroprotektif pada
tikus setelah status epileptikus yang diinduksi lithium‑pilocarpine. J
Pharm Pharmacol 71: 390-399, 2019.
10. He Y, She H, Zhang T, Xu H, cheng l, Yepes M, Zhao Y dan Mao
Z: p38 MaPK menghambat autophagy dan mendorong
respons inflamasi mikrog-lial dengan memfosforilasi ULK1.
Biol Sel J 217: 315-328, 2018.
11. Moreno‑cugnon l, arrizabalaga o, llarena i dan Matheu a:
peningkatan aktivitas p38MaPK mendorong penuaan sel induk
saraf. penuaan (albany nY) 12: 6030‑6036, 2020.
12. Yeung YT, aziz F, Guerrero‑castilla a, dan argumentelles S.
Jalur pensinyalan dalam terapi inflamasi dan antiinflamasi.
curr Pharm des 24: 1449‑1484, 2018.
13. Martínez‑limón a, Joaquin M, caballero M, Posas F dan de
nadal e: Jalur p38: Dari biologi ke terapi kanker. int J Mol
Sci 21: 1913, 2020.
14. Gaestel M: MaPK-activated protein kinases (MKs): wawasan
dan tantangan baru. Sel depan dev Biol 3: 88, 2016.
 LAPORAN Kedokteran Molekuler 27: 45, 2023
15. Zhang HW, ding Jd, Zhang ZS, Zhao SS, duan KY, Zhu BQ, Zhao WF, chai
ZT dan liu XW: peran penting p38 dalam cedera tulang belakang
dengan mengatur peradangan dan apoptosis pada model tikus. Tulang
belakang (Phila Pa 1976) 45: e355‑e363, 2020.
16. Zhang dY, Zhang aX, Zhou YH, Wang lH dan Yao Hc:
Perlindungan HMGB1 intravena pada cedera reperfusi
iskemia miokard. int J cardiol 184: 280-282, 2015.
17. liang Y, Hou c, Kong J, Wen H, Zheng X, Wu l, Huang H dan chen Y:
Pengikatan HMGB1 ke reseptor untuk produk akhir glikasi lanjut
meningkatkan respons inflamasi sel epitel bronkial manusia
dengan mengaktifkan p38 MaPK dan erK1/ 2. Sel mol Biochem
405: 63-71, 2015.
18. liu S, chen HZ, Xu Zd, Wang F, Fang H, Bellanfante o dan chen Xl:
Natrium butirat menghambat produksi HMGB1 dan mengurangi
luka bakar parah ditambah cedera usus akibat resusitasi tertunda
melalui jalur pensinyalan p38. Luka bakar 45: 649-658, 2019.
19. delgado‑escueta aV, Wasterlain c, Treiman dM dan Porter rJ: Status
epilepticus: Ringkasan. adv neurol 34: 537-541, 1983.
20. Musumeci d, roviello Gn dan Montesarchio d: pandangan menyeluruh
tentang penghambat HMGB1 sebagai agen terapi potensial dalam
patologi terkait HMGB1. Pharmacol Ther 141: 347-357, 2014.
21. Mol l ica l, de Marchis F, Spitaler ia, dal lacosta c, Pennacchini d,
Zamai M, agresti a, Trisciuoglio l, Musco G dan Bianchi Me:
Glycyrrhizin berikatan dengan protein kotak 1 kelompok mobilitas
tinggi dan menghambat sitokinnya kegiatan. chem Biol 14:
431-441, 2007.
22. Racine RJ: Modifikasi aktivitas kejang dengan stimulasi listrik.
ii. Kejang motorik. electroencephalogr clin neurophysiol 32:
281-294, 1972.
23. luo Z, Wang J, Tang S, Zheng Y, Zhou X, Tian F, dan Xu Z: inhibitor
protein 1 terkait dinamis memudahkan serangan epilepsi dan
dapat mengatur ekspresi transporter nukleosida 1 ekuilibratif.
BMc neurol 20: 353, 2020.
24. Godal cM dan danzer Sc: Jalur pensinyalan dan mekanisme seluler yang
mengatur pertumbuhan serat berlumut dalam perkembangan epilepsi.
Neurol depan 9: 298, 2018.
25. rossini l, de Santis d, Mauceri rr, Tesoriero c, Bentivoglio M, Maderna e,
Maiorana a, deleo F, de curtis M, Tringali G,et al: patologi dendritik,
keropos tulang belakang dan reorganisasi sinaptik di korteks manusia
dari pasien epilepsi. Otak 144: 251-265, 2021.
26. Vezzani A, Balosso S dan Ravizza T: Neuroinflamatory path-ways
sebagai target pengobatan dan biomarker pada epilepsi. nat rev
neurol 15: 459‑472, 2019.
27. Zhao XF, liao Y, alam MM, Mathur r, Feustel P,
Mazurkiewicz Je, adamo Ma, Zhu Xc dan Huang Y:
Microglial mTor adalah pelindung saraf dan
antiepileptogenik dalam model pilocarpine dari epilepsi
lobus temporal. J neurosci 40: 7593-7608, 2020.
28. ogaki a, ikegaya Y dan Koyama r: Kelainan vaskular dan
peran faktor pertumbuhan endotel vaskular di otak
epilepsi. Farmasi Depan 11: 20, 2020.
29. Sarkis ra, Goksen Y, Mu Y, rosner B dan lee JW: efek samping
kognitif dan kelelahan obat anti-epilepsi: analisis uji coba
tambahan fase iii. J neurol 265: 2137-2142, 2018.
30. Maroso M, Balosso S, ravizza T, liu J, Bianchi Me and Vezzani a:
interleukin‑1 type 1 receptor/Toll‑like receptor signal‑ling in
epilepsi: Pentingnya il‑1beta dan high‑mobility group box 1 J
magang Med 270: 319-326, 2011.
31. Paudel Yn, Semple Bd, Jones nc, othman i dan Shaikh MF: Kelompok
mobilitas tinggi kotak 1 (HMGB1) sebagai perbatasan baru dalam
epileptogenesis: Dari patogenesis hingga pendekatan terapeutik.
J neurochem 151: 542-557, 2019.
32. iori V, Maroso M, rizzi M, iyer aM, Vertemara r, carli M, agresti
a, antonelli a, Bianchi Me, aronica e,et al: reseptor untuk
produk akhir glikasi lanjut diregulasi pada epilepsi lobus
temporal dan berkontribusi pada kejang eksperimental.
neurobiol dis 58: 102-114, 2013.
11
33. nishibori M, Wang d, ousaka d dan Wake H: Kotak kelompok mobilitas
tinggi‑1 dan gangguan penghalang darah‑otak. sel 9: 2650, 2020.
34. Ful, liu K, Wake H, Teshigawara K, Yoshino T, Takahashi H, Mori
S dan nishibori M: Efek terapi antibodi monoklonal anti-
HMGB1 pada status epileptikus yang diinduksi pilocarpine
pada tikus. Sci rep 7: 1179, 2017.
35. devinsky o, Vezzani a, najjar S, de lanerolle nc dan Rogawski
MA: Glia dan epilepsi: Rangsangan dan peradangan. Tren ilmu
saraf 36: 174-184, 2013.
36. Gorter Ja, van Vliet ea dan aronica e: Status epileptikus,
gangguan sawar darah-otak, inflamasi, dan epileptogen-esis.
epilepsi Perilaku 49: 13-16, 2015.
37. Walker le, Frigerio F, ravizza T, ricci e, Tse K, Jenkins re, Sills GJ,
Jorgensen a, Porcu l, Thippeswamy T,et al: Isoform molekuler
kelompok mobilitas tinggi kotak 1 adalah biomarker
mekanistik untuk epilepsi. J clin invest 129: 2166, 2019.
38. Kaminska B, Gozdz a, Zawadzka M, ellert‑Miklaszewska a dan Lipko
M: transduksi sinyal MAPK yang mendasari peradangan otak dan
gliosis sebagai target terapi. anat rec (Hoboken) 292: 1902‑1913,
2009.
39. de los reyes corrales T, losada‑Pérez M dan casas‑Tintó S: jalur
JnK dalam patologi cnS. int J Mol Sains 22: 3883, 2021.
40. Wei TH dan Hsieh cl: efek akupunktur pada jalur pensinyalan p38
pada beberapa penyakit sistem saraf: tinjauan sistematis. int J Mol
Sains 21: 4693, 2020.
41. PastorinoG, cornaral, Soares S, rodrigues F andoliveiraMBPP:
akar manis (Glycyrrhiza glabra): ulasan fitokimia dan
farmakologis. Phytother res 32: 2323-2339, 2018.
42.asl Mn dan Hosseinzadeh H: tinjauan efek farmakologi
Glycyrrhiza sp. dan senyawa bioaktifnya. Phytother res 22:
709-724, 2008.
43. ahmed‑Farid oa, Haredy Sa, niazy rM, linhardt rJ dan Warda M: efek
neuroprotektif yang tergantung dosis dari glycyrrhizin yang
berasal dari fito oriental pada penipisan norepinefrin
neuroterminal eksperimental dalam model otak tikus. chem Biol
berinteraksi 308: 279-287, 2019.
44. Kim SW, Jin Y, Shin JH, Kim id, lee HK, Park S, Han Pl dan lee JK:
Asam Glycyrrhizic memberikan perlindungan saraf yang kuat
di otak postischemic melalui efek anti-inflamasi dengan
menghambat fosforilasi dan sekresi HMGB1. neurobiol dis 46:
147-156, 2012.
45. luo l, Jin Y, Kim id dan lee JK: Glycyrrhizin melemahkan kematian sel
saraf yang diinduksi asam kainic di hippocampus tikus. exp
neurobiol 22: 107-115, 2013.
46. cherng JM, lin HJ, Hung MS, lin Yr, chan MH dan lin Jc:
penghambatan faktor nuklir kappaB dikaitkan dengan efek
perlindungan saraf dari asam glycyrrhizic pada eksitotoksisitas
yang diinduksi glutamat pada neuron primer. eur J Pharmacol 547:
10-21, 2006.
47. Sakamoto r, okano M, Takena H dan ohtsuki TK: efek
penghambatan glycyrrhizin pada kemampuan fosforilasi dan
pengikatan dna protein kelompok mobilitas tinggi 1 dan 2 in vitro.
Biol Pharm Banteng 24: 906-911, 2001.
48. Giovannini MG, Scali c, Prosperi c, Bellucci a, Vannucchi MG,
Rosi S, Pepeu G dan Casamenti F: Peradangan yang diinduksi
beta-amyloid dan hipofungsi kolinergik pada otak tikus in vivo:
keterlibatan jalur p38MaPK. neurobiol dis 11: 257-274, 2002.
Karya ini dilisensikan dengan Lisensi Creative
Commons At tribut ion-NonCommercia l-NoDerivat
ives 4.0 International (CC BY-NC-ND 4.0).