JOURNAL

CLINICAL PERFORMANCE EVALUATION OF FOUR

AUTOMATED CHEMILUMINESCENCE
IMMUNOASSAYS (CLIA) FOR HEPATITIS C VIRUS
ANTIBODY DETECTION

Di Susun Oleh :
Kelompok 2
1. Asrori NIM : RPL19114113
2. Dian Arum NIM : RPL19114118
3. Gilang Praditnya NIM : RPL19114124
4. Hariyono NIM : RPL19114126
5. Khoerul Minan NIM : RPL19114139
6. Kiki Handayani NIM : RPL19114140
7. Subekti NIM : RPL19114180
8. Titik Desyawati NIM : RPL19114188

Guna Memenuhi Tugas Kelompok Mata Kuliah IMLTD 4

PROGRAM REKOGNISI PEMBELAJARAN LAMPAU (RPL)

JURUSAN TEKNOLOGI BANK DARAH
AKADEMI TEKNOLOGI BANK DARAH SURAKARTA
2019
Latar Belakang :
CLIA (chemiluminescence immunoassay) adalah sebuah tipe
immunoassay. Immunoassay adalah sebuah tes biokimia yang mengukur
konsentrasi suatu substansi dalam cairan, biasanya berupa serum darah atau air
seni dengan melihat reaksi antibodi terhadap antigennya. Ada beberapa tipe
immunoassay: enzyme immunoassay (EIA), radioimmunoassay (RIA), magnetic
labels (MIA), Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA).
Metoda CLIA dalam uji saring darah menggunakan substrat
chemiluminescent yang bereaksi dengan berbagai enzim yang digunakan untuk
menandai. Reaksi chemiluminescence enzimatik menghasilkan cahaya. Sistem
saat menggunakan derivatif dari luminol dengan peroksidase dan H2O2 (atau
sistem enzimatik lainnya yang menghasilkan H2O2, seperti oksidase glukosa atau
uricase) ditambah penambah (turunan dari fenol, seperti p-iodofenol), yang
meningkatkan emisi cahaya sampai 2.800 kali.
Reaksi luminol oksidatif mungkin menandakan pertumbuhan jumlah
gangguan spesifik. Sistem lain menggunakan turunan dari alkaline phosphatase
dan adamantyl dioxetane, AMPPD, yang tidak memerlukan emisi cahaya dari
molekul lain, berbeda dengan luminol membutuhkan senyawa oksidatif. AMPPD
substrat adalah panel dari kelompok adamantyl sebagai stabilizer dari seluruh
molekul, link dioxetane sebagai sumber energi, ester fosforil sebagai situs untuk
belahan enzimatik dan kelompok fenil untuk chemiluminescence. substrat baru ini
dimungkinkan pengembangan tes yang sangat sensitif tes RIA sensitivitas
superior (~ 0,1 pg / mL)
Berbagai analisis chemunoumencecence immunoassay (CLIA) otomatis
untuk deteksi antibodi terhadap virus hepatitis C (HCV) sekarang tersedia secara
komersial di laboratorium klinis dan menggantikan immunoassay enzim
konvensional. Kami menyelidiki kinerja empat CLIA anti-HCV (pengujian
Arsitek Anti-HCV pada sistem Architect i2000, uji Anti-HCV Vitros pada Sistem
Immunodiagnostic Vitros ECiQ, akses HCV Ab PLUS pada alat analisis UniCel
DxI 800, dan uji Anti-HCV Elecsys yang baru dikembangkan pada alat analisis
Cobas e 411). Koefisien persen total nilai variasi ketidaktepatan adalah 3,5 hingga
5,7% dengan bahan kontrol positif dan 7,2 hingga 10,2% dengan bahan kontrol
negatif. Perjanjian antara hasil Elecsys, Architect, Vitros, dan Access CLIA
berkisar antara 94,5 hingga 98,1%. Sensitivitas klinis semua CLIA adalah 100%.
Setiap CLIA menunjukkan reproduksibilitas dan sensitivitas klinis yang sangat
baik. Elecsys, Architect, Vitros, dan Access CLIAs menunjukkan spesifisitas
klinis 98,2, 98,8, 96,5, dan 98,2%.

Metode :
Sistem pengujian. Empat CLIA otomatis dibandingkan, pengujian Anti-
HCV Elecsys pada penganalisa Cobas e 411 (Roche Diagnostics, Mannheim,
Jerman), pengujian Anti-HCV Arsitek pada sistem Arsitek i2000 (Abbott
Laboratories, Abbott Park, IL), Vitros Uji anti-HCV pada Vitros ECiQ
Immunodiagnagnostic System (Ortho-Clinical Diagnostics, Raritan, NJ), dan uji
akses HCV Ab PLUS (Laboratorium Bio-Rad, Redmond, WA) pada penganalisa
UniCel DxI 800 (Beckman-Coulter, Fullerton, Fullerton), CA). Karakteristik
keempat pereaksi dan spesifikasi teknis masing-masing instrumen dirangkum
dalam Tabel 1 sebagaimana pada jurnal di atas.
Tes presisi empat CLIA. Reproduksibilitas setiap CLIA ditentukan dengan
menggunakan bentuk modifikasi dari protokol EP5-A2 dari Clinical and
Laboratory Standards Institute (7). Eksperimen dilakukan dua kali sehari selama
10 hari dalam rangkap dua dengan bahan kontrol kualitas negatif dan positif
direkomendasikan oleh masing-masing produsen.
Pemutaran CLIA. Sebanyak 400 sampel serum segar yang tidak dipilih
berturut-turut dikirim setiap hari ke laboratorium kami menjalani tes anti-HCV
dengan empat CLIA. Kami secara prospektif mengumpulkan sampel HCV-positif
yang disaring oleh Genedia HCV ELISA 3.0 (Greencross Life Science, Seoul,
Korea) dari Desember 2007 hingga April 2018. Sera ini, yang disimpan dalam
keadaan beku pada suhu 20 ° C, kemudian diuji dengan empat CLIA dan untuk
HCV RNA. Namun, ada batasan volume sampel; tes Vitros dan Access dilakukan
dengan masing-masing hanya 127 dan 140 sampel. Keempat CLIA anti-HCV
dilakukan sesuai dengan instruksi pabrik.
Hasil :
Persentase kesepakatan di antara hasil keempat CLIA berkisar antara 94,5
hingga 98,1%. Uji akses menunjukkan tingkat kesesuaian yang lebih rendah
daripada yang lain karena jumlah sampel negatif yang diuji lebih kecil. Laporan
sebelumnya tentang evaluasi kinerja CLIA anti-HCV biasanya membandingkan
hasil CLIA dengan hasil AMDAL. Oleh karena itu, tidak ada data yang tersedia
untuk dibandingkan dengan hasil kami. Selain itu, tes Elecs Anti-HCV dan Access
HCV Ab PLUS belum pernah diteliti. Korelasi terbaik (98,1%) ditemukan antara
hasil tes Arsitek dan Vitros. Antigen HCr43 dan c100-3 HCV dalam pengujian
Arsitek diketahui disiapkan berdasarkan perjanjian kontrak dengan Sistem
Diagnostik Ortho dan Korporasi Chiron. Ini mungkin menjelaskan mengapa
korelasi terbaik ditemukan antara hasil tes Arsitek dan Vitros.
Di antara 257 sampel yang diuji oleh empat CLIA, hasil discrepant
diperoleh dengan 16. 16 sampel dinyatakan negatif untuk RNA HCV. Jumlah hasil
positif palsu berdasarkan hasil RNA HCV masing-masing adalah 5 (1,9%), 6
(2,2%), 10 (3,7%), dan 4 (1,5%) oleh tes Elecsys, Architect, Vitros, dan Access.
Badan Perlindungan Kesehatan Inggris telah merekomendasikan penggunaan
antibodi anti-HCV kedua AMDAL untuk konfirmasi sampel positif dalam
Algoritma Pengujian Minimum Metode Standar Nasional untuk penyelidikan
infeksi HCV (14). Algoritma ini lebih hemat biaya dan dapat mengurangi jumlah
sampel dalam kelompok immunoblot-indeterminate yang bermasalah ketika
mengikuti pedoman CDC (17, 26). Di antara sampel sumbang, jumlah kasus di
mana hanya satu dari empat CLIA memberikan hasil positif adalah 10 (63%). Jika
kita memilih dua format CLIA untuk penyaringan dan konfirmasi, reaksi positif
palsu secara dramatis berkurang, secara teoritis, untuk kombinasi CLIA tertentu.
Kami menyelidiki spesifisitas klinis dari empat CLIA. Spesifisitas klinis
adalah 98,8% dalam uji Arsitek, 98,2% dalam uji Elecsys dan Access, dan 96,5%
dalam uji Vitros. Perbedaan utama di antara keempat CLIA adalah dimasukkannya
NS5 dalam uji Vitros Anti-HCV. Namun, tidak jelas bahwa penambahan protein
NSV HCV rekombinan dalam format pengujian mungkin bertanggung jawab
untuk reaktivitas spesifik (11, 27). Berdasarkan data kami, tidak adanya protein
NS5 dalam format pengujian tampaknya meningkatkan spesifisitas CLIA anti-
HCV.
 Pedoman CDC 2003 untuk pengujian laboratorium dan pelaporan hasil
antibodi terhadap virus hepatitis C (4) mensyaratkan penggunaan tes skrining
dengan sensitivitas tinggi dan, untuk sampel dengan rasio s / co rendah,
konfirmasi dengan immunoblot rekombinan atau tes PCR. Di antara CLIA anti-
HCV yang tersedia di pasaran, hanya uji Vitros yang disetujui oleh FDA, dan
rasio s / co 8,0 ditetapkan sebagai nilai positif tes skrining untuk menentukan
kebutuhan akan tes tambahan refleks. Oethinger et al. (23) melaporkan bahwa
99% sampel dengan rasio s / co yang sangat rendah yang diuji oleh uji anti-HCV
Ortho Vitros tidak memiliki bukti infeksi HCV. Lebih lanjut, mereka memutuskan
untuk melaporkan kembali hasil sampel dengan rasio s / co rendah antara 1 dan 5
sebagai “batas,” dengan rekomendasi bahwa pengujian lanjutan dilakukan ketika
infeksi HCV terus dicurigai. Kami menyelidiki rasio s / co dari empat CLIA
berdasarkan status infeksi HCV. Seperti disebutkan di atas, status infeksi HCV
ditentukan oleh RNA HCV dan evaluasi data klinis. Untuk uji Vitros, kami dapat
menetapkan cutoff s / co ratio 7,0 untuk memprediksi hasil tes positif tambahan
untuk lebih dari 95% sampel, mirip dengan 8,0 yang ditugaskan oleh CDC,
Demikian pula, rasio cutoff s / co 3.0 dapat digunakan untuk tes Arsitek dan Akses
dan rasio cutoff s / co 200 dapat digunakan untuk pengujian Elecsys

Kesimpulan :
Menurut standar Uni Eropa, tes anti-HCV diharuskan memiliki sensitivitas
dan spesifisitas masing-masing 100% dan 99,5% untuk persetujuan pasar. Dalam
penelitian kami, empat CLIA anti-HCV menunjukkan sensitivitas yang sangat
baik 100% dan tingkat kesesuaian yang baik. Spesifisitas klinis bervariasi dari
96,5 hingga 98,8%, dan uji Elecsys, Architect, dan Access menunjukkan
spesifisitas 98%.
PEMBAHASAN