LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI

“TEKNIK ISOLASI ”

Disusun Oleh :

Kelompok 4

Erni Ronauli Tresia ( A1D017058 )

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN BIOLOGI

JURUSAN PENDIDIKAN MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

FAKULTAS KEGURUAN DAN ILMU PENDIDIKAN

UNIVERSITAS BENGKULU
2020/2021
 Isolasi Mikroba Menggunakan Teknik Cawan Gores

Erni Ronauli Tresia

Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan, Universitas Bengkulu

email: ernisilitonga28@gmail.com

Abstrak

Populasi Mikroorganisme di alam tidak terpisah menjadi spesies- spesies tersendiri, untuk
mempermudah pengamatan atau identifikasi mikroba dalam laboratorium perlu dilakukan isolasi
mikroba dari koloninya sehingga didapat satu spesies saja . Prinsip dari isolasi mikroba ini adalah
memisahkan satu jenis mikroba dari mikroba lainya yang ada dalam satu koloni. Percobaan kali ini
bertujuan untuk mengetahui teknik isolasi mikroba hingga mendapatkan kultur murni dan juga
untuk mengetahui teknik memindahkan mikroorganisme pada suatu medium ke medium yang lain.
Metode isolasi yang digunakan adalah metode Cawan Gores. Medium agar (NA) dalam cawan petri
dibagi menjadi 4 ruang , Inokulum digoreskan dipermukaan agar nutien dari bagian satu kebagian ke
4 yang membentuk garis zigzag. Kemudian Medium yang telah di isolasi mikroba diinkubasi kembali
selama kurang lebih 72 jam dan kemudian diamati hasilnya. Dari proses isolasi yang telah dilakukan
didapatlah satu jenis mikroba yang telah terpisah dari koloninya.

Kata Kunci : Isolasi , Cawan gores , koloni mikroba

Abstrack

Population Microorganisms in nature are not separated into individual species, to facilitate the
observation or identification of microbes in the laboratory needs to be isolated from the colony so
that microbes get one species only. The principle of this microbial isolation is to separate one type of
microbes from other microbes that exist in one colony . This experiment aims to know microbial
isolation techniques to obtain pure culture and also to know the technique of moving
microorganisms on a different medium to other medium. The method of isolation used is the Scratch
Grail method. Medium Nutrien Agar (NA) in the Petri dish is divided into 4 chambers, the inoculum is
scratched surface for nutien from part one gets to 4 that form zigzag line. Then the microbial
isolated medium was incubated again for approximately 72 hours and then observed the results.
From the isolation process that has been done got one type of microbe that has been separated
from the colonies.

Keywords: Isolation, Scratch Grille, microbial colonies

PENDAHULUAN adalah organisme yang berukuran sangat

Mikroorganisme (meliputi virus,
archae, bakteri, jamur, dan protozoa)
merupakan makhluk tertua sekaligus
penghuni pertama yang berada di bumi
dengan diversitas terbanyak di planet
bumi. Mikroorganisme atau mikrobia
kecil sehingga untuk mengamatinya
diperlukan alat bantuan, mikroorganisme
disebut juga organisme mikroskopik.
Mikroorganisme dapat diperoleh dari
lingkungan air, tanah, udara, substrat
yang berupa bahan pangan, tanaman,
hewan dan pada tubuh manusia. Pada
umumnya dalam mempelajari
mikroorganisme tidak bisa dilakukan
dengan kasat mata. Sedangakan pada
suatu lokasi yang menurut manusia sudah
kecil, disana masih terdapat
mikroorganisme dalam jumlah yang besar.
Di alam populasi mikroba tidak
terpisah sendiri menurut jenisnya, tetapi
terdiri dari campuran berbagai macam sel.
Di dalam laboratorium populasi bakteri ini
dapat diisolasi menjadi kultur murni yang
terdiri dari satu jenis yang dapat dipelajari
morfologinya, sifat dan kemampuan
biokimiawinya.
Dalam mempelajari mikroba tidak
bias dilakukan secara kasat mata.
Sedangkan dalam suatu lokasi yang
menurut manusia sudah cukup kecil,
disana masih terdapat bakteri dalam
jumlah besar dan juga bermacam– macam
jenisnya. Selain itu, di alam mikrobia pada
umumnya tidak hidup tersendiri sebagai
individu tunggal dan terlepas dari spesies
yang lain, Mikroba lebih sering ditemukan
dalam bentuk koloni dan bersama-sama
dengan mikroba yang lain.
Mikroorganisme terdapat dimana-
mana didalam lingkungan kita mereka ada
pada tubuh kita, didalam tubuh kita, dan
disekeliling kita. Mereka merupakan
komponen penting dalam ekosistem. Di
habitat alamiahnya, mereka hidup dalam
suatu komunitas yang terdiri dari berbagai
jenis mokroorganisme, bersama spesies-
spesies biologi lainnya.
Didalam komunitas ini, satu spesies
mikroba dapat mempengaruhi spesies lain
dengan berbagai cara-cara beberapa
bersifat menguntungkan beberapa
merugikan. Oeh karena itu, dalam
mempelajarinya, bakteri harus diambil
dari alam lalu diisolasikan dalam suatu
biakan murni.
METODE PENELITIAN
Waktu dan Tempat
Penelitian ini dilakukan di
Laboratorium Pembelajaran FKIP
Universitas Bengkulu. Waktu
pelaksanaannya pada hari Senin tanggal
10 Maret 2020 pada pukul 15. 00 – 17.00
WIB.
Alat dan Bahan
Bahan yang digunakan antara lain
medium NA dan kultur campuran bakteri
(dari percobaan sebelumnya) . Alat-alat
yang digunakan dalam praktikum ini
adalah cawan petri, pena/spidol
snowman, pemanas bunsen, dan jarum
ose.
Cara Kerja
1. Pemurnian Mikroorganisme
a. Siapkan cawan petri yang telah
berisi kultur campuran bakteri (dari
percobaaan sebelumnya). Siapkan
dua cawan petri yang berisi medium
NA. Bagi dasar petri menjadi 4
sektor.
b. Pilih satu koloni yang akan
dimurnikan.
c. Secara aseptis, pindahkan satu
koloni yang dipisahkan ke medium
NA baru yang telah disiapkan
menggunakan jarum ose menurut
pola zig-zag.
d. Inkubasi selama 72 jam.
e. Foto proses pemurnian , dan catat
hasil pengamatan.
Teknik Pengumpulan dan Analisis Data
Teknik pengumpulan data pada
penelitian ini dengan menggunakan
metode eksperimen, dan dokumentasi.
Untuk mengetahui teknik mengisolasi
mikroorganisme dari kultur campuran
bakteri menjadi satu jenis kultur bakteri
saja dilakukanlah menggunakan metode
gores dengan pola zig-zag. Pengamatan
yang dilakukan adalah mengamati pola
pertumbuhan bakteri setelah diinkubasi
selama 72 jam. Analisis data dilakukan secara deskriptif kualitatif.

HASIL DAN PEMBAHASAN

HASIL
Sumber
No Medium Sebelum Setelah
Bakteri

1 PDA WC

PEMBAHASAN akan sulit mengamati sifat-siat setiap jenis

Praktikum kali ini bertujuan untuk bakteri yang diinginkan dan ketika kita
mengetahui teknik mengisolasi bakteri biakkan, kita tidak mendapatkan kultur
dari alam hingga mendapatkan kultur murni dari satu jenis bakteri saja.
murni. Selain itu praktikum kali ini juga Menurut Dewi (2008), isolasi bakteri
bertujuan untuk mengetahui teknik merupakan pengambilan atau
memindahkan bakteri pada suatu medium memindahkan mikroba dari
ke medium yang lain. lingkungannya di alam dan
Sebelumnya, telah didapatkan menumbuhkannya sebagai biakan murni
bakteri dari alam yang masih mengandung dalam medium buatan. Pemurnian isolat
berbagai macam jenis bakteri. bertujuan untuk mendapatkan biakan
Pengisolasian ini, akan memisahkan jenis murni, pada penelitian ini pemurnian
bakteri yang ingin kita biakkan, dengan isolat dilakukan sebanyak dua kali
jenis bakteri yang lain yang masih sehingga diperoleh isolat yang benar-
tercampur. Ini dikarenakan di alam, benar murni. Lay (1994) menyatakan
populasi bakteri di alam tidak terpisah bahwa biakan murni merupakan biakan
menjadi spesies-spesies tersendiri, yang hanya mengandung satu jenis
melainkan hidup secara bersama-sama bakteri.
dalam beraneka jenis. Jika bakteri masih Ada berbagai teknik dalam
bercampur dalam beraneka jenis, kita mengisolasi untuk mendapatkan biakkan
bakteri yang murni. Dari sekian banyak
teknik isolasi yang ada, praktikum kali ini
menggunakan teknik cawan gores. Ini
dikarenakan,, teknik isolasi dengan cawan
gores lebih mudah diaplikasikan.
Sebelum melakukan praktikum, kita
harus mensterilkan, tangan dengan
alkohol, serta alat-alat dan medium yang
akan dipakai menggunakan autoklaf.
Autoklaf ini merupakan alat pensteril yang
menggunakan prinsip panas basah/uap
pana . pensterilan ini dilakukan karena,
pada telapak tangan, alat-alat, medium,
dan pada udara bebas, banyak sekali
mikroorganisme lain yang tidak kita
kehendaki. Jika tidak disterilkan,
mikroorganisme ini akan bercampur
dengan bakteri yang ingin kita biakkan.
Jika semakin banyak mikroorganisme yang
tercampur, akan semakin sulit untuk
mengisolasi dan menginkubasi bakteri
yang ingin kita biakkan nantinya. Setelah
semua disterilkan, barulah kita dapat
memulai untuk mengisolasi dan
menginkubasi bakteri. Pensterilan jarum
ose, menggunakan teknik pembakaran,
jarum ose dibakar hingga berpijar. Lalu
didingkan, baru dapat digunakan. Setiap
langkah isolasi dan inkubasipun harus
dilakukan didaerah panas, untuk
menghindari mikroba dari udara bebas
masuk ke dalam medium. Namun, proses
percobaan ini tidak dilakukan terlalu dekat
dengan api, karena akan mengakibatkan
bakteri yang kita biakkan akan ikut mati.
Dalam praktikum ini, medium pada
cawan petri akan dibagi menjadi 4 bagian
atau 4 daerah kuadran. Dan bakteri yang
masih tercampur, yang diambil dari alam,
yang ditumbuhkan pada suatu medium,
diambil menggunakan jarum ose.
Pengambilan bakteri ini, cukup digorekan
pada permukaan mediumnya saja. Karena
dengan digoreskan saja, bakteri akan
menempel pada jarum ose. Lalu jarum
ose digoreskan secara zigzag ke masing-
masing kuadran pada medium yang telah
dibagi menjadi 4 kuadran tadi, tanpa
terputus.
Alasan mengapa teknik cawan gores
dapat diterapkan dalam isolasi bakteri
adalah, ketika kita menggoreskan bakteri
dengan jarum ose pada medium, semakin
lama, goresan yang kita buat semakin
tipis. Tipisnya goresan membuktikan
bahwa bakteri pada goresan terakhir akan
memiliki posisi yang jarang atau berjarak,
bakteri tersebut akan terpisah satu sama
lain. Jika posisi bakteri terpisah satu sama
lain, maka kita akan dengan mudah
mengambil bakteri mana yang akan kita
biakkan.
Setelah di goreskan, medium
diinkubasi selama 72 jam, ini bertujuan
agar bakteri memperbanyak diri. Jika
bakteri memperbanyak diri dan
mengalami pertumbuhan, akan tampak
jejak goresan kita pada medium tadi, yang
berupa goresan berwarna putih. Bakteri
akan mulai membentuk koloni pada
masing-masing jenisnya. Pada kuadran-I,
goresan putih nampak tebal, lalu menuju
kuadran-II, goresan putih mulai agak
meinipis, lalu pada kuadran ke-III, goresan
putih semaki menipis daripada goresan
pada kuadran II, dan pada kuadran IV,
goresan putih tampak sangat tipis.
Semakin tipis goresan, semakin sedikit
mikroba, semakin terpisah posisi mikroba-
mikroba tersebut, dan semakin mudah
kita mengambilnya atau mengisolasinya.
Untuk hasil yang maksimal, isolasi ini
dilakukan berulang –ulang, agar peluang
untuk mendapatkan bakteri murni akan
semakin besar.
Untuk mendapatkan bakteri murni,
kita mengambil bakteri yang ada pada
kuadran ke-IV. Karena pada kuadran ke-IV,
jejak goresanya adalah yang paling tipis.
Untuk mengambilnya, cukup kita goreskan
saja ujung jarum ose di garis putih pada
kuadran ke-IV tadi. Setelah digores di
kuadran ke-IV, jarum ose digoreskan
kembali pada medium miring yang baru
secara zigzag. Medium miring disini,
bukan untuk mengisolasi bakteri lagi,
tetapi digunakan sebagai media dalam
inkubasi biakkan murni yang sudah
didapat tadi. Medium miirng, tidak dibagi
menjadi 4 daerah seperti medium untuk
isolasi bakteri tadi.
PENUTUP
SIMPULAN
Isolasi bakteri merupakan
pengambilan atau memindahkan mikroba
dari lingkungannya di alam dan
menumbuhkannya sebagai biakan murni
dalam medium buatan
Ada berbagai teknik dalam mengisolasi
untuk mendapatkan biakkan bakteri yang
murni. Dari sekian banyak teknik isolasi
yang ada, praktikum kali ini menggunakan
teknik cawan gores. Sebelum melakukan
praktikum, kita harus mensterilkan,
tangan dengan alkohol, serta alat-alat
dan medium yang akan dipakai
menggunakan autoklaf. Medium pada
cawan petri akan dibagi menjadi 4 bagian
atau 4 daerah kuadran. Setelah di
goreskan, medium diinkubasi selama 72
jam, ini bertujuan agar bakteri
memperbanyak diri.Untuk mendapatkan
bakteri murni, kita mengambil bakteri
yang ada pada kuadran ke-IV. Karena pada
kuadran ke-IV, jejak goresanya adalah
yang paling tipis. Untuk mengambilnya,
cukup kita goreskan saja ujung jarum ose
di garis putih pada kuadran ke-IV tadi.
SARAN
Adapun saran yang terdapat pada
percobaan ini adalah, hendaknya
praktikan tidak banyak berbicara saat
praktikum, serta saat mengisolasi bakteri
harus didekat api hal ini dikarenakan
untuk meminimalisir bakteri lain masuk
kedalam media tersebut. Saat
menggoreskan bakteri ke medium dengan
jarum ose harus dari kuadran I sampai IV
serta tidak terputus.
DAFTAR PUSTAKA
Arsyik Ibrahim, dkk. 2015. Isolasi Dan
Identifikasi Bakteri Asam Laktat (Bal).
https://jurnal.akfarsam.ac.id/index.php/ji
m_akfarsam/article/download/29/28
(diakses pada tanggal 10 Maret 2018)
Dewi, I. M. 2008. Isolasi Bakteri dan Uji
Aktifitas Kitinase Termofilik Kasar dari
Sumber Air Panas Tinggi
Dwidjoseputro, S. 1990. Mikrobiologi
Pangan. Gramedia Pustaka Utama.
Jakarta.
Fajar Diah, dkk.2012. Isolasi dan
Karakterisasi Bakteri Aerob.
http://download.portalgaruda.org/article.
php?article=60861&val=4187 (diakses
pada tanggal 10 Maret 2018)
Hadioetomo. Ratna Siri.
1993. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek.
Jakarta: P.T. Gramedia Pustaka Utama.
Jutono. 1972. Dasar-dasar Mikrobiologi
Umum. Departemen Mikrobiologi Fakultas
Pertanian UGM. Yogyakarta.
Lay, W. B. 1994. Analisis Mikroba di
Laboratorium. PT Raja Grafindo Persada,
Jakarta.
Lenni Fitri dkk.2011. Isolation and
Observation of Morphology of Chitinolytic
Bacteria Colony.
http://download.portalgaruda.org/article.
php?article=60861&val=4187 (diakses
pada tanggal 10 Maret 2018)
Pelczar, Michael, J., E.C.S Chan. 1986.
Dasar – Dasar Mikrobiologi. Jakarta: UI
Press.
Raja, Simalungun, Sumatera Utara. Tesis.
Sekolah Pascasarjana Universitas
Sumatera Utara, Medan.
Ratna, Siri .2000. Mikrobiologi Dasar
dalam Praktek: Teknik dan Prosedur dasar
Laboratorium. PT Gramedia,Jakarta
Talaro K.P. and A. Talaro. 1999.
Foundation in Microbiology Third Edition.
McGraw Hill Company: Boston, p.61