LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI

TENTANG
MEDIA PERTUMBUHAN DAN STERILISASI
OLEH:
INA AULIA ROHMAH (2030106012)
T. BIO – 5A

DOSEN PENGAMPU:
AIDHYA IRHASH PUTRA, S.Si.M.P

ASISTEN DOSEN
1. AYUNI PUSPITA SARI
2. RUSYDIATI SALMII ADDIN

JURUSAN TADRIS BIOLOGI

FAKULTAS TARBIYAH DAN ILMU KEGURUAN
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI MAHMUD YUNUS
BATUSANGKAR
2022
 FAKTOR LINGKUNGAN YANG MEMPENGARUHI TERHADAP
PERTUMBUHAN MIKROORGANISME
Oleh kelompok 1 : Ina aulia rohma, Elmia juwita putri, ismila
putri isyani, muhamad noval akbari
Jurusan Tadris Biologi, Fakultas Tarbiyah dan Ilmu Keguruan
Universitas Islam Negeri Mahmud Yunus Batusangkar
Batusangkar
Email: inaauliarohmah69@gmail.com

ABSTRACT
Pada pratikum Isolasi, Inokulasi , Inkubasi Mikroorganisme ini bertujuan untuk
memisahkan mikroba dari campurannya menjadi kultur murni dan mengetahui teknik isolasi
dan inokulasi mikroba serta lama waktu inkubasi. Isolasi atau tindakan mengisolasi suatu
mikroba ialah memisahkan mikroba tersebut dari lingkungannya di alam dan
menumbuhkannya sebagai biakan murni dalam medium buatan. Inokulasi adalah proses
pemindahan mikroorganisme dari medium campuran menjadi biakan murni, baik berupa
bakteri maupun jamur dari tempat atau sumber asalnya ke medium baru yang telah dibuat
dengan tingkat ketelitian yang sangat tinggi dan aseptis..
Key Word : Isolasi, Inokulasi , Inkubasi

I. Pendahuluan suatu biakan campuran, (T. Silvia .

Mikroba merupakan organisme
berukuran kecil yang sulit untuk dilihat
tanpa menggunakan peralatan bantu.
Banyak diantara mikroba yang
memiliki kemiripan bentuk dan sifat
sehingga tidak mudah untuk
mempelajarinya. Diperlukan ketelitian
dan kesabaran untuk mempelajari
mikroba. Salah satu cara yang dapat
dilakukan untuk mempelajari
mikroba adalah
denganmengidentifikasinya. Ada empat
tahapan yang harus dilaksanakan
apabila hendak melakukanidentifikasi
mikroba, yaitu inokulasi, inkubasi, isolasi
dan identifikasi. Keempat tahapan ini
dilaksanakan secara sistimatis dan
benar sehingga mikroba dapat
teridentifikasi. Biakan murni ialah biakan
yang sel-selnya berasal dari
pembelahan satu sel tunggal.
Sesungguhnya ada beberapa metode
untuk memperoleh biakan murni dari
2008.).
Isolasi merupakan suatu cara
untuk memisahkan
mikroorganisme dari sampel atau
alam dan menumbuhkan dalam
media kultur secara in vitro
sehingga diperoleh biakan
murni. Inokulasi merupakan suatu
cara untuk memindahkan biakan
murni dari suatu media ke media
lain yang sama atau berbeda.
Biakan murni (pure culture),
inokulum, merupkan biakan hasil
isolasiyang terdiri dari satu jenis
mikroorganisme pada waktu
dan temperatur tertentu
(Sumarsih, S., 2003).
Bakteri yang ditumbuhkan di
laboratorium dalam sebuah larutan yang
bisa ditumbuhkan dalam suatu kaldu
(Broth) atau medium kultur cair atau pada
medium yang dipadatkan dengan
penambahan agar. Sebagai tambahan termasuk yang digunakan untuk mengi -
kebanyakan bakteri tidak bisa mencerna dentifikasi mikroba. Untuk mengamati
agar, namun bisa mencerna gelatin. karakteristik budaya morfologi, fisiologi,
Teknik isolasi mikroba adalah upaya dan serologi, mikroba dari satu spesies
menumbuhkan mikroorganisme di luar diperlukan Lestari, Purwaning.
lingkungan alaminya.Pemisahan mikroba di 2017
luar lingkungan bertujuan untuk
memperoleh kultur mikroba yang tidak lagi II. Waktu dan Tempat
bercampur dengan mikroba lain yang Adapun waktu pelaksanaan pratikum
disebut kultur murni.Prinsip isolasi mikroba mikrobiologi tentang media
adalah memisahkan satu jenis mikroba pertumbuha,sterilisasi,dan
dengan mikroba lain yang berasal dari isolasi,inokulasi dan inkubasi m
campuran berbagai mikroba. Ini bisa
ikroorganisme yaitu
dilakukan dengan menumbuhkannya
isolasi,inokulasi dan inkubasi
dimedia padat, sel mikroba akan
membentuk koloni sel yang tetap di mikroorganisme yaitu pada hari jumat 7
tempatnya Lestari, Purwaning. 2017 oktober Oktober 2022 di laboratorium
Pentingnya mengisolasi mikrobiologi UIN Mahmut Yunus
mikroba dari lingkungan, seperti Batusangkar
makanan (substrat padat), III. Alat dan Bahan
minuman (substrat cair), dan diri Anda Adapun alat dan bahan
sendiri karena banyaknya mikroba yang yang digunakan dalam
sulit diamati atau dibedakan secara
langsung menggunakan panca indera. pelakssanaan pratikum ini yaitu
Sehingga isolasi akan membuat :Alat: cawan petri, gelas beker,
lebih mudah untuk melihat dan
mengamati bentuk-bentuk pertumbuhan autoklaf,hot plate, tabung
mikroba dalam beberapa media dan enlemeyer, batang pengaduk ,
dapat melihat morfologi mikroba, yaitu
inokulasi yang merupakan teknik neraca , spatula, Bahan : nutrient
mentransfer budaya tertentu dari agar, potatodextrose agar
medium lama ke medium baru dengan
tujuan mendapatkan kultur murni tanpa IV. Langkah kerja
kontaminasi dari mikroba tidak Adapun langkah kerja
diinginkan. Beberapa metode diketahui
atau metode untuk memperoleh kultur dalam pratikum ini adalah
murni dari kultur campuran.Dua :
metode yang paling umum digunakan
adalah metode cup scratch dan metode
a. Timbang komponen
pour cup. Haltersebut didasarkan pada
media menggunakan
prinsip pengenceran dengan maksud
untuk memperoleh spesies individu. timbangan analitik.
Dengan asumsi bahwa setiap koloni Sesuai volume yang
dapat dipisahkan dari jenis sel yang diinginkan dan
dapat diamati. Kultur murni diperlukan berdasarkan komposisi
dalam berbagai metode mikrobiologis, berikut : NA 6 gram dan
 PDA 11,7 gram tepi petridish dengan plastik
b. Akuades sebanyak wrap.
300 ml pada masing- j. 1 petridish NA dan 1
masing larutan NA dan petridish PDA dibawa ke
PDA tempat pembuangan
c. Bungkus petridrish sampah di bukik gombak
dengan hvs yang masih (kelompok 2). 2 petridish
bersih dan di ikat yang tersisa masukkan ke
dengan karet gelang. dalam freezer
Beri label penanda k. Di TPS bukik gombak,
pada masing- masing petridish dibuka
petridis dengan pensil sepertiga tutupnya dan
d. Masukkan ke autoklaf diangkat diatas kepala
petridish yang sudah selama 3 menit dan
di bungkus. Tunggu ditutup kembali dengan
hingga suhu naik setelah plastik wrap dan bawa ke
itu suhu turun lagi laboratorium
hingga 80℃ l. Di loboratorium,
e. Larutkan NA dan PDA masukkan kedua petridish
dan aduk secara ke dalam BSC dalam
konstan di atas keadaan suhu ruang
pemanas. Bisa m. Hitung jumlah mikroba
menggunakan hoteplate dalam 2×48 jam
hingga terbentuk busa n. Masukkkan petridish yang
dan memuai sudah dihitung mikrobanya
f. Keluarkan petridish kedalam freezer
dari autoklaf dan
tunggu hingga V. Hasil dan Pembahasan
agak dingin (kira-kira A. Pembahasan
bisa dipegang) Adapun pembahsan
g. Lalu pindahkan larutan NA pada praktikum kali imi
dan PDA yang sudah adalah
larut menggunakan kedua Gambar ket
tangan. Satu tangan Waktupenga
memindahkan larutan dari matan 8 dan
enlemeyer, satu tangan 9Oktober
2022 pada
lagi memutar petridish agar
jam 15.00
tetap panas dan steril WIB
h. Tunggu hingga larutan NA 1X48 jam
dan PDA dingin dan Hasil :NA
mengeras dengan bunsen pda
yang masihmenyala kuadran
i. Setelah dingin, bungkus satu
 terdapat area serta media agar yang
bentuk baru yang dipergunakan untuk
berwarna praktikum sangatlah penting
putih untuk dilakukan. Setelah itu ambil
pudar dan inokulan yang telah di inkubasi
sed - dalam inkubator. Jarum yang
angkan pada digunakan untuk memindahkan
PDA banyak inokulan kedalam media baru
nya muncul yaitu dengan menggunakan
becak putih jarum ose.
berbentuk Jarum ose terlebih
bintik bintik dahulu distelirkan dengan cara
memanaskannya pada api Bunsen
sa,pai warnanya kemerahan lalu
tunggu sampai hangat (di tandai
dengan warna berubah kembali
menjadi hitam). Proses pemindahan
dilakukan degan cara memasukan
jarum ose kedalam media inokulan
untuk mengambil mikroba dengan
B. Pembahasan teknik menggoreskannya. Goresan
Adapun prtama dilakukan pada mikroba
pembahasan dari praktikum kali ini yang berbentuk lingkaran kecil,
adalah kemudian memindahkannya
Beragam jenis mikroba tersebar kedalam media baru dengan teknik
penggoresan secara zigzag pada
pada lingkungan, dengan bentuk,
salah sattu sisi media baru.
ukuran dan sifat yang berbeda-
Kemudian sterilkan kembali ose
beda, untuk menganalisa, untuk penggorean kedua pada
mempelajari maupun melakukan lingkaran Menurut Suriawiria U.
suatu percobaan pada suatu 2005.
mikroba maka akan diperlukan Menurut Lestari &Hartati
mikroba yang bebas dari (2017), Teknik isolasi mikroba adalah
campuran bahan atau mikroba upayamenu mbuhkan
lainnya.Proses untuk mikroorganisme diluarlingkungan
mendapatkan mikroba dapat alaminya. Pemisahan
dilakukan dengan teknik isolasi mikroorganisme di luar lingkungan
dan inokulasi. Proses isolasi bertujuan untuk memperoleh kultur
digunakan untuk memperoleh bakteri yang tidak lagi bercampur
mikroba murni dari lingkungan dengan bakteri lain yang disebut
sedangkan inokulasi digunakan kultur murni. Prinsip isolasi mikroba
adalah memisahkan satu jenis
untuk memperoleh mikroba
mikroba dengan mikroba lain yang
murni dan media biakan mikroba
berasal dari campuran berbagai
itu sendiri. mikroba. Ini bisa dilakukan dengan
Sterilisasi alat, tangan dan menumbuhkannya di media padat,
sel mikroba akan membentuk koloni
sel yang tetap di tempatnya. Isolasi
yang dilakukan menggunakandengan konversi
bentuknya media ini termasuk
dalam media padat atau agar
karena mengandung agar yang
memadatkan media.
Identifikasi morflogi
mikroba yang tumbuh
menggunakan bantuan flash.
Mikroba diamati setelah 2 hari
masa inkubasi. Disini kami
belum mengetahui spesies dari
mikroba yang tumbuh. Akan
tetapi, berdasarkan ciri-ciri
morfologi yang didapatkan
dapat diprediksi PDA
merupakan mikroba fungi,
sedangkan NA merupakan
golongan mikroba bakteri , dimana
padat dilihat dari ciri pada PDA
terlihat warna putih,dan NA
berwarna ke orenan. Kebutuhan
nutrisi biakan mikroba sangat
penting untuk pertumbu -
hannya . Selain itu, tahapan
mikroba terdiri dari fase lag, fase
exponensial, fase stasioner, dan
fase kematian. Jika mikroba
dipindahkan atau isolasi ke dalam
suatu media, mula-mula akan
mengalami fase lag atau
adaptasi untuk menyesuaikan
dengan kondisi lingkungan di
sekitarnya. Lamanya fase adaptasi
ini dipengaruhi beberapa faktor
yaitu media dan lingkungan
pertumbuhan. Jika media dan
lingkungan pertumbuhan sama
seperti media dan lingkungan
sebelumnya maka bisa saja tidak
diperlukan waktu adaptasi. Tetapi
jika nutrisi yang tersedia dan
kondisi lingkungan yang baru
berbeda dengan sebelumnya maka
diperlukan waktu penyesuaian
untuk mensintesa enzim-enzim.
Fase exponensial mikroba
100.Mikroba
membelah diperoleh
dengandaricepat
lingkungan
dan water closetmenggunakan
konstan mengikuti kurva
logaritmik. Pada fase ini
kecepatan pertumbuhan sangat
dipengaruhi oleh media tempat
tumbuhnya seperti suhu, pH,
nutrisi, kelembaban.Fase
stasioner ini mikroba sudah
mampu memproduksi toksik
terhadap mikroba lainnya. Serta
kadar nutrisi pada media juga
berkurang.Fase kematian
disebabkan karena kondisi nutrisi
media sudah habis sehingga
mikroba mengalami kematian .
Kehadiran mikroba dalam
medium.
menunjukkan bahwa mikroba mampu
memanfaatkan nutrisi yang ada
dalam medium. Kebutuhan sumber
energi bakteri dapat berasal dari
cahaya (fototrof) dan karbon
organik (kemoorganotrof), sumber
karbon dalam bentuk karbon
anorganik (seperti kalium nitrat)
dan nitrogen organik (dalam
bentuk protein dan asam amino),
unsur non-logam seperti belerang
dan fosfor, unsur logam (seperti
potasium, natrium, magnesium,
besi, tembaga, dll.), air untuk
fungsi metabolisme dan
pertumbuhan (Suriawiria U.
2005.).
Seperti yang kita ketahui
bahwa isolasi adalah cara
memisahkan mikroorganisme
tertentu dari lingkungan atau dari
suatu sampel, sehingga diperoleh
biakan yang sifatnya murni dan
dinamakan biakan murni,
sedangkan inokulasi adalah
memindahkan bakteri biakan murni
dari medium yang satu ke
 medium yamg lainnya, maksudnya
dengan proses inkulasi bakteri
biakan murni akan dimurnikan
kembali. Pada praktikum inokulasi
ada tiga yaitu metode agar tegak,
agar cair dan metode agar miring.
Pada metode tegak digunakan
medium yang telah dipadatkan
dalam tabung reaksi. Inokulasi ini
menggunakan ose lurus dengan
cara menusukkan ose yang telah
disentuhkan dengan bakteri atau
jamur ke dalam medium hingga
½ dari tinggi medium. Dalam
setiap perlakuan metode isolasi
dan inokulasi dilakukan secara
aseptis, dimaksudkan agar
kontaminasi oleh mikroba lain yang
tidak dikehendaki dapat dicegah
semaksimal mungkin. Untuk
memindahkan sel-sel mikroba dari
satu medium ke medium lainnya
digunakan jarum ose yang disterilkan
melalui pemijaran dari pangkal
sampai ke ujungnya sampai
berwarna merah sesaat sebelum dan
setelah digunakan. Lamanya
inkubasi bakteri dan jamur
berbeda. Ini dikarenakan
perbedaan waktu yang dibutuhkan
bakteri dan jamur untuk
bereprodiksi (melakukan
pembelahan) berbeda.
VI. Penutup
Dalam praktikum ini dapat
diperoleh kesimpulan bahwa:
1. Dari hasil pengamtan yang
telah dilakukan komposisi
bahan media NA dan PDA
yang dikonversi 100 dapat
menumbuhkan dua jenis koloni
mikroba yang di isolasi pada
ruangan BSC yang ada
disalah satu Jurusan Biologi
UIN MAHMUD YUNUS .NA
memiliki ciri–ciri morfologi
warna putih, size moderate,
form rhizoid,margin
filamentous, elevation convex.
PDA memiliki ciri–ciri morfologi
warna putih, size small, form
circular, margin entire,
elevation convex. Disini kami
belum mengetahui spesies
dari mikroba yang tumbuh.
Akan tetapi, berdasarkan ciri-
ciri morfologi yang didapatkan
dapat diprediksi M1 merupakan
mikroba fungi, sedangkan M2
merupakan golongan mikroba
bakteri. Selanjutnya
diperlukan pengujian untuk
menginditifikasi jenis spesies
mikroba. Seperti uji biokimia
berupa uji katalase dan
koagulas untuk mendapatkan
hasil yang maksimal.
2. Mikroba merupakan
organisme berukuran kecil
yang sulit untuk dilihat
tanpa menggunakan
peralatan bantu. Banyak
diantara mikroba yang
memiliki kemiripan bentuk
dan sifat sehingga tidak
mudah untuk
mempelajarinya.
Diperlukan ketelitian dan
kesabaran untuk
mempelajari mikroba.
Salah satu cara yang
dapat dilakukan untuk
mempelajari mikroba
adalah
denganmengidentifikasiny
a. Ada empat tahapan
yang harus
dilaksanakan apabila
hendak
melakukanidentifikasi
mikroba, yaitu inokulasi,
inkubasi, isolasi dan
 identifikasi. Keempat
tahapan ini dilaksanakan
secara sistimatis dan
benar sehingga mikroba
dapat teridentifikasi
3. Hasil yang kami temukan
bahwa keberhasilan
melakukan isolasi
tehadap satu jenis
mikroba sangat
ditentukan oleh faktor
steril atau tdak sterilnya
alat yang digunakan dan
perlakuan atau cara
yang dilakukan dalam
mengisolasi mikroba. Jika
perlakuan atau alat yang
digunakan tidak steril
maka aka nada mikroba
dari luar yang masuk
kedalam inokulan dan
mengganggu proses
isolasi sehingga dapat
menyebabkan kegagalan
dari isolasi mikroba
VII. References
Dwidjoseputro, D. 2003. Dasar - Dasar
Mikrobiologi. Djambatan. Jakarta
Garry. 2002. Tobacco Mosaic Virus. In:
Plant disease Facts. Departemen of
Plant Phatologhy. University of
Pennsyvania State University. 152
Hal
Hadioetomo, R. S. 1993. Mikrobiologi
Dasar dalam Praktek : Teknik dan
Prosedur Dasar Laboratorium. PT
Gramedia Pustaka Utama. Jakarta.
163 hal
Lestari, Purwaning. 2017. Mikrobiologi
Berbasis Inkuiri. Malang. Gunung
Samudra.
Madigan et al. 2017. Brock Biologi
Mikroorganisme. 14th edition.
Penerbit Buku kedokteran EGC
Nurohaianah, 2007. Media . Jakarta :
UI Press. 266 hal
Pratiwi, T. Silvia . 2008. Mikrobiologi
Farmasi. Yogyakarta. Erlangga.
Radji, M. 2010. Mikrobiologi : Panduan
Mahasiswa Farmasi dan
Kedokteran. Jakarta : Penerbit Buku
Kedokteran EGC
Sumarsih, S., 2003. Mikrobiologi
Dasar. Universitas Pembangunan
Nasional Veteran, Yogyakarta
Suriawiria U. 2005. Mikrobiologi Dasar.
Jakarta : Papas Sinar Sinanti.
Waluyo, L. (2004). Mikrobiologi Umum.
Malang: Universitas
Muhammadiyah. Malang Press.