Teknik Isolasi Untuk Membuat Kultur Murni

Isolation technique to make pure culture

Sartiyana
email: sartiayana.bio14@fkip.unsyiah.ac.id

Abstrak
Isolasi bertujuan untuk memperoleh biakan murni. Teknik isolasi diawali dengan mengurangi
jumlah inoculum dan pengurangan lebih lanjut akan memisahkan sel hingga jarak tertentu. Tujuan
praktikum ini adalah untuk mempelajari teknik gores dan cawansebar untuk memisahkan sel dari
kultur campuran sehingga diperoleh koloni terpisah. Praktikum ini dilakukan di Laboratorium
Pendidikan Biologi Darussalam Universitas Syiah Kuala Banda Aceh pada tanggal 17 Oktober 2016.
Alat yang digunakan pada praktikum ini adalah jarum ose, dan lampu spiritus sedangkan bahan yang
digunakan adalah suspense bakteri dan medium agar lempeng serta agar miring. Hasil yang didapat
dari praktikum ini adalah mengetahui cara isolasi menggunakan teknik cawan gores dan cawan sebar.

Kata kunci: isolasi, mikroorganisme, media.

Abstract
Isolation is to obtain pure cultures. Isolation techniques starts with reducing the amount of
inoculum and further reductions will separate the cells to a certain distance. The purpose of this lab is
to learn the techniques of scratch and cawansebar to separate the cells from the culture mix in order
to obtain a separate colony. Practicum is conducted at the Laboratory of Biology Education
Darussalam Syiah Kuala University in Banda Aceh on 17 October 2016. The tools used in this lab is
loopful, and light spirits, while the materials used are suspense bacteria and agar plates and agar
slant. The results of this lab is to know how to use the techniques of isolation cup and saucer scatter
scratch.
Keywords: isolation, microorganism, medium.

1
Nonong Noviasyah: Medium dan Sterilisasi
Pendahuluan
Media yang umum digunakan untuk
menganalisis kapang pada produk makanan
adalah Potatao Dextrosa Agar (PDA). Masalah
yang dihadapi dalam penggunaan PDA sebagai
mediu untuk menghitung jumlah kapang
adanya pertumbuhan yang melebar pada jenis
kapang tertentu sehingga memenuhi cawan
petri dan menghambat pertumbuhan kapang
lain (Indriati dkk, 2010, p.117).
Media agar merupakan substrat yang
sangat baik untuk memisahkan campuran
mikroorganisme sehingga masing-masing
jenisnya menjadi terpisah-pisah. Teknik yang
digunakan untuk menumbuhkan
mikroorganisme pada media agar
memungkinkannya tumbuh dengan agak
berjauhan dari sesamanya, juga memungkinkan
setiap selnya berhimpun membentuk koloni,
yaitu sekelompok massa sel yang dapat dilihat
dengan mata telanjang. Bahan yang
diinokulasikan pada medium disebut inoculum,
dengan menginokulasi medium agar nutrient
dengan metode cawan gores atau media cawn
tuang, sel-sel mikroorganisme akan terpisah
sendiri-sendiri. Setelah inkubasi, sel-sel
mikroba individu memperbanyak diri secara
cepat sehingga dalam waktu 18-24 jam
terbentuklah massa sel yang dapat dilihat dan
dinamakan koloni. Koloni dapat terlihat oleh
mata telanjang. Setiap koloni merupakan
biakan murni satu macam mikroorganisme
(Joddi, 2006, p.83).
Tiga teknik isolasi diuji coba dalam
kegiatan ini, yaitu pelepasan spontan dilakukan
dengan membuka petal dan mengambil anther
yang saling berpasangan menggunakan jarum
ent yang dilakukan dibawah mikroskop. Anther
yang terisolasi dipotong secara melintang pada
bagian pangkalnya dan dikultur dalam media
semi padat MMS (Winarto, 2007, p. 129).
Pengamatan yang dilakukan meliputi
pengamatan makroskopis dan mikroskpis
isolate bakteri selulotik termofilik dengan
indeks selulotik tertinggi dengan mengamati
bentuk koloni, ukuran koloni, tepian koloni,
warna (pigmen atau tidak), elevasi, permukaan
koloni (licin atau kasar), pewarnaan gram
(Mela, 2012, p.167).
Pertumbuhan mikroba dapat dilakukan
dalam medium padat, karena dalam medium
padat sel-sel mikroba akan terbentuk suatu
koloni sel yang tetap pada tempatnya, ada
beberapa teknik isolasi mikroba yakni metode
gores atau streak plate, metode tuang atau pour
plate dan metode sebar atau spread plate
(Wati,dkk. 2013, p. 105).
Metode
Waktu dan tempat
Praktikum dilakukan di Laboratorium
Pendidikan Biologi FKIP Universitas Syiah
Kuala (Unsyiah) Darussalam Banda Aceh pada
tanggal 17 Oktober 2016.
Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam praktikum ini
adalah jarum ose dan lampu spiritus. Bahan
yang digunakan dalam praktikum ini adalah
suspense bakteri dan medium agar lempeng
serta agar miring.
Prosedur
Disterilkan jarum ose diatas nyala lampu
spiritus lalu dibiarkan beberapa saat supaya
dingin. Kemudian diambil suspense bakteri
dengan jarum ose (dilakukan diatas nyala api).
Digoreskan inoculum tersebut secara zigzag
pada agar miring, sedangkan pada agar
lempeng dapat dilakukan dengan goresan T,
goresan kuadran, goresan radian dan goresan
sinambung pelaksaannya tetap diatas api. Lalu
ditutup medium yang telah diinokulasi sambil
melewatkan diatas api, lalu diinkubasikan pada
suhu kamar. Diamati biakan yang tumbuh.
Teknik pengumpulan data
Praktikum ini dilakukan dengan metode
pengamatan langsung. Dengan langsung
melakukan sesuai prosedur yang telah
dituliskan .
2
Nonong Noviasyah: Medium dan Sterilisasi

Hasil dan Pembahasan Indriati, Ninoek,dkk. (2010). Penggunaan

Berdasarkan pengamatan yang telah
dilakukan dapat diketahui bahwa isolasi
mikroorganisme mengandung arti proses
pengambilan mikroorganisme dari
lingkungannya untuk kemudian ditumbuhkan
dalam suatu medium di laboratorium. Prinsip
dari isolasi mikroba adalah memisahkan satu
jenis mikroba dengan mikroba lain yang berasal
dari campuran bermacam-macam mikroba. Hal
ini dapat dilakukan dengan menumbuhkannya
dalam media padat, sel-sel mikroba akan
membentuk koloni sel yang tetap pada
tempatnya.
Tujuan dari pemindahan biakan untuk
menguasai teknik pemindahan biakan bakteri
dari satu wadah ke wadah lain secara aseptik,
sehingga hanya biakan murni yang diharapkan
akan tumbuh. Kegagalan dalam hal
pemindahan biakan dapat menyebabkan
kontaminasi dari pertumbuhan mikroba yang
tidak diharapkan.
Beberapa cara atau metode yang
dikenal untuk memperoleh biakan murni dari
suatu biakan campuran. Dua diantaranya yang
paling sering digunakan adalah metode cawan
gores dan metode cawan tuang. Metode
tersebut didasarkan pada prinsip pengenceran
dengan maksud untuk memperoleh spesies
individu, dengan anggapan bahwa setiap koloni
dapat terpisah dari suatu jenis sel yang diamati.
Dichloran Rose Bengal Chlorampenicol
Agar (DRBC) Sebagai Media Tumbuh
Kapang Pada Produk Perikanan. Jurnal
Pascapanen dan Bioteknologi Kelautan
dan Perikanan. 5(12): 117-122.
Joddi, Candra Iryadi. (2006). Isolasi dan
Karakteristik Bakteri Asam Laktat Dari
Produk Bekasam Ikan Bandeng (Chanos
chanos). Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Mela, Uci Sari, dkk. (2012). Penampisan dan
Karakteristisasi Bakteri Selulotik Sumber
Air Panas Sungai Medang, Kerinci, Jambi.
Jurnal Biologi Universitas Andalas 1(2):
166-171.
Wati, Dwi Setiana, dkk. (2013). Pembuatan
Biogas dari Limbah Cair Industri
Bioetanol Melalui Proses Anaerob
(Fermentasi). Semarang: Universitas
Diponegoro.
Winarto, B dan F. Rachlumwati. (2007).
Teknik Kultur Anther pada Pemuliaan
Anthurium. Jurnal Hort. 17(2): 127-137.
.

Simpulan

Prinsip dari isolasi mikroba adalah

memisahkan satu jenis mikroba dengan
mikroba lain yang berasal dari campuran
bermacam-macam mikroba. Tujuan dari
pemindahan biakan untuk menguasai teknik
pemindahan biakan bakteri dari suatu wadah
lain secara aseptic, sehingga hanya biakan
murni yang diharapkan akan tumbuh. Beberapa
cara atau metode yang dikenal untuk
memperoleh biakan murni dari suatu biakan
campuran antara lain yaitu metode cawan
gores dan metode cawan tuang.

Daftar pustaka
3
Nonong Noviasyah: Medium dan Sterilisasi