Teknik Isolasi Untuk Kultur Murni

Laboratory equipment, Medium and Sterilization

Raissya Adinda
Raissyaadinda.bio18@fkip.unsyiah.ac.id

Abstrak
Mikroorganisme terdapat dualam umumnya merupakan campuran dari bermacam-macam
spesies. Oleh karena itu untuk memperoleh biakan murni dilakukan isolasi. Isolasi bertujuan
memperoleh biakan murni. Untuk mengisolasi mikroorganisme, ada dua cara yang umum
dilakukan yaitu dengan cawan gores dan cawan sebar. Pratikum tentang “Teknik Isolasi Untuk
Kultur Murni” dium atau media pertumbuhan adalah suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi
atau zat-zat hara (nutrient) telah dilaksanakan pada tanggal 10 Maret 2020 bertempat di
Laboratorium Pendidikan Biologi FKIP Universitas Syiah Kuala, Banda Aceh. Tujuan dari
pratikum ini adalah untuk mempelajari teknik cawan gores dan sebar guna memperoleh biakan
murni. Metode yang digunakan adalah dengan cara eksperimen secara langsung. Hasil pengamatan
yang diperoleh dapat mengetahui teknik cawan gores dan cawan sebar.
Kata Kunci : Isolasi, mikroorganisme, cawan gores, cawan sebar.

Abstract
Microorganisms found generally are a mixture of various species. Therefore, to obtain pure
culture, isolation was carried out. Isolation aims to obtain pure culture. To isolate
microorganisms, there are two common methods, namely by scratch plates and scatter plates.
Practicum on "Isolation Technique for Pure Culture" dium or growth media is a material
consisting of a mixture of nutrients or nutrients (nutrient) which was carried out on March 10,
2020 at the Biology Education Laboratory of the FKIP Syiah Kuala University, Banda Aceh. The
purpose of this practice is to learn the techniques of scratch and scatter plates in order to obtain
pure cultures. The method used is a direct experiment. The observations obtained can determine
the technique of scratch plates and scatter plates.
Keywords: Isolation, microorganisms, scratch plates, scatter plates.

1
Pendahuluan
Laboratorium adalah suatu tempat
dilakukan kegiatan percobaan dan penelitian
Tempat ini dapat merupakan ruangan yang
terbuka kamar atau ruangan tertutup,
(Mastika, 2014, p. 2)
Mikrobiologi adalah ilmu yang
mempelajari tentang mikroba, jasad renik.
Mikrobiologi merupakan salah satu cabang
ilmu dari biologi, dan memerlukan ilmu
pendukung kimia, fisika dan biokimia.
Mikrobilogi sering disebut ilmu praktek dari
hiokimia (Murwani, 2015. p. 1)
Beberapa keterampilan khas atau
spesifik lab mikrobiologi, diantaranya yaitu:
bekerja secara aseptik, mengisolasi mikroba,
menginokulasi mikroba, identifikasi bakteri
(Pewarnaan Gram, KOH String test, uji
biokimia). sterilisasi enumerasi mikroba
(Metode cawan tuang).dan keterampilan
menggunakan mikroskopdengan pembesaran
1000x (Kusnadi, 2015, p.57)
Isolasi mikroba dilakukan sebagai
upaya untuk memilih mikroba yang tepat
dalam menghasilkan produk yang diinginkan.
Isolasi mikroba dapat dilakukan dengan tiga
teknik yaitu teknik gores (streak plate) teknik
tuang (pour plate), dan teknik sebaran(spread
plate) (Istianah, 2018, p. 12)
Pemurnian(purification) bertujuan agar
diperoleh biakan murni yang diinginkan tanpa
ada kontaminan dari mikroba lain.Pemilihan
koloni mikroba yang dimurnikan berdasarkan
perbedaan kenampakan morfologi koloni,
baik dari segi warna, elevasi, tekstur
permukaan, garisgaris radial, lingkaran
konsentris maupun tetes eksudat sehingga
diperoleh isolat murni (Ed-har, 2017, p. 59)
Metode/ Cara Kerja
Waktu dan Tempat
Pratikum ini telah dilakukan pada
Selasa `10 Maret 2020. Bertempat di
Laboratorium Pendidikan Biologi Universitas
syiah kuala.
Target/ Subjek/ Populasi/ Sampel
Pratikum ini dilakukan untuk
mengetahui untuk mempelajari teknik cawan
gores dan sebar guna memperoleh biakan
murni. Pelaksanaan pratikum ini ialah
Mahasiswa yang mengikuti kegiatan
pratikum. Sampel yang digunakan pada
pratikum kali ini ialah kaldu nutrisi/ agar
nutrisi (NA), dan kentang dektrosa/ potato
dekstrosa agar (PDA).
Alat dan bahan
Alat yang diperlukan meliputi Bunsen,
lamina air flow, jarum ose, batang L,
incubator.
Prosedur
Prosedur Terlebih dahulu, dibuat
media untuk melakukan isolasi (dibuat dengan
NA sintetik) lalu menmadat, setelah itu
lakukan teknik isolasi cawan gores yang
dikerjakan di laminar air flow. ditunggu
sampai media memadat, setelah itu dilakukan
teknik isolasi cawan gores yang dikerjakan di
laminar air flow.
Teknik Pengumpulan Data
Data yang diperoleh dalam pratikum ini
menggunakan metode pengamatan langsung.
Teknik Analisis Data
Data yang didapatkan dari metode
pengamatan langsung kemudian dianalisis
secara deskriptif
Hasil dan Pembahasan
Teknik isolasi mikroorganisme adalah
suatu usaha untuk menumbuhkan mikroba
diluar dari lingkungan alamiahnya. Pemisahan
mikroorganisme dari lingkungan ini bertujuan
untuk memperoleh biakan bakteri yang sudah
tidak bercampur lagi dengan bakteri lainnya
dan disebut biakan murni (Yulvizar, 2013).
Suardana (2008) mengemukakan bahwa
dikenal beberapa cara atau metode untuk
memperoleh biakan murni dari suatu biakan
2
campuran. Dua diantaranya yang paling
sering digunakan adalah metode cawan gores
dan metode cawan tuang yang didasarkan
pada prinsip pengenceran dengan maksud
untuk memperoleh spesies individu dengan
anggapan bahwa setiap koloni dapat terpisah
dari satu jenis sel yang dapat diamati.
Medium adalah bahan mengandung Gambar 1. Pensterilan jarum ose
nutrisi untuk menumbuhkan mikroorganisme.
Selain untuk menumbuhkan mikroorganisme, Selah dipanaskan kemudian didinginkan pada
medium dapat digunakan untuk isolasi, media yang tidak ditumbuhi bakteri setelah itu
pengujian sifat-sifat fisiologi, dan perhitungan diambil suspense bakteri dengan
jumlah mikroorganisme (Rakhmawati, 2012). menggunakan jarum ose.
Goresan Kuadran (quadrant streak)
mhampir sama dengan goresan T, namun
berpola goresan yang berbeda yaitu dibagi
empat. Daerah 1 merupakan goresan awal
sehingga masih mengandung banyak sel
mikroorganisma. Goresan selanjutnya
dipotongkan atau disilangkan dari goresan
pertama sehingga jumlah semakin sedikit dan
akhirnya terpisah-pisah menjadi koloni
tunggal (Sabdaningsih, 2013, p. 4)
Gambar 2. Pengambilan suspensi bakteri
Memindahkan bakteri dari medium
lama kedalam medium yang baru diperlukan
Lalu digoreskan inokulom kedalam
ketelitian dan pengsterilan alat-alat yang
medium cawan petri menggunakan teknik
digunakan, supaya dapat dihindari terjadinya
goresan sinambung. Proses penggoresan
kontaminasi. Pada pemindahan bakteri
berhenti pada titik tertuntu, llalu jarum ose
dicawan petri setelah agar baru, maka cawan
dipanaskan kembali dengan tujuan
petri tersebut harus dibalik, hal ini berfungsi
mengurangi koloni bakteri, selanjutnya
untuk menghindari adanya tetesan air yang
menyambung goresan sebelumnya samapai
mungkin melekat pada dinding tutup cawan
selesai. Pelaksanaannya tetap dalam laminar
petri (Panagan, 2011, p. 5).
air flow.
Pada Praktikum ini dilakukan
pengisolasian mikroba dengan menggunakan
teknik isolasi cawan gores (streak plate) yaitu
teknik goresan sinambung. Prinsip
memisahkan suatu jenis mikroba dengan
mikroba lain yang berasal dari campuran
bermacam-macam mikroba. Pratikum teknik
isolasi bakteri pada NA diawali dengan
penyemprotan dengan alcohol 70 %, lalu
dipanaskan ose pada lampu spiritus dengan
tujuan menstrilkan.

Gambar 3. Penggoresan inokulum

3

Setelah selesai menggores ditutup
medium yang telah diinokulasi, kemudian
diinkubasi pada suhu kamar.
Pratikum teknik isolasi pada PDA
dengan menggunakan teknik diawali dengan
penyemprotan dengan alcohol 70 %, lalu
dipanaskan ose pada lampu spiritus dengan
tujuan menstrilkan.
Gambar 4. Pensterilan jarum ose
Selah dipanaskan kemudian
didinginkan pada media yang tidak ditumbuhi
bakteri setelah itu diambil suspense jamur
dengan menggunakan jarum ose bentuk
batang
Gambar 5. Pengambilan suspensi bakteri
Lalu digoreskan inokulom kedalam
medium cawan petri menggunakan teknik
goresan sinambung. Proses penggoresan
berhenti pada titik tertuntu, llalu jarum ose
dipanaskan kembali dengan tujuan
mengurangi koloni bakteri, selanjutnya
menyambung goresan sebelumnya sampai
selesai. Pelaksanaannya tetap dalam laminar
air flow.
Gambar 6. Penggoresan inokulum
Simpulan dan Saran
Simpulan
Isolasi bertujuan untuk memperoleh
biakan murni. Teknik isolasi yang dipakai
pada praktikum ini adalah teknik cawan gores
(streak plate). Ada empat macam teknik
cawan gores, namun pada praktikum ini
teknik cawan gores yang dipakai adalah
goresan sinambung.
Saran
Diharapkan kepada praktikan agar
dapat mengingat kembali fungsi serta cara
menggunakan alat-alat dengan kegiatan
praktikum, serta berhati-hati dalam
menggunakan alat-alat tersebut.
Daftar Pustaka
Ed-har, Adiz Adryan dkk. 2017. Isolasi
Mikroba Tanah Pendegradasi Selulosa
Dan Pektin Dari Rhizosfer Aquilaria.
Jurnal Tanah dan Lahan. 1:1. 58-64.
Istianah, Nur. 2018. Teknologi Bioproses
Malang: Universitas Brawijaya Press.
Kusnadi, dkk. 2012. Analisis Kemunculan
Lab Pembelajaran Mikrobiologi
Berbasis Proyek Inkuiri Biologi. Jurnal
[Versi Elektronik].. 17:1, 53-59.
Mastika, I Nyoman, dkk. (2014). Analisi
Standarisasi Biologi Laboratorium
4
 Dalam Proses Pembelajaran Di Sma
Negeri Elektronik]. Pascasarjana
Universitas Pendidikan Ganesha. e-
Journal 1:4, 1-9.
Murwani, Sri. 2015. Dasar-Dasar
Mikrobiologi Veteriner. Malang: UB
Press.
Panagan, AT. 2011. isolasi mikroba Penghasil
Antibiotika dari Kampus Unsri
Indralaya Menggunakan Media Ekstrak
Tanah. Jurnal Penelitian Sains, 14:3,
37-40
Rakhmawati, Anna. (2012). Penyiapan Media
Mikroorganisme. Biodiversitas. 8:2,
166-175.
Sabdaningsih, Aninditia, dkk. (2013). Isolasi
Dan Karakterisasi Morfologi Koloni
Bakteri Asosiasi (Rhodophyta) Dari
Perairan Kutuh Bali. [Versi Elektronik].
Alga Merah Jurnal Biologi. 2:2. 11-17.
Suardana, Wawan, dkk. 2008. Isolasi dan
Identifikasi Bakteri Asam Laktat dari
Cairan Rumen Sapi Bali sebagai
Kandidat Biopreservatif Jurnal
Veteriner [Versi Elektronik], 8:2. 155-
159.
Yulvizar, Cut. 2013. Isolasi dan Identifikasi
Bakteri Probiotik pada Rastrelliger sp.
Biospesies. [Versi Elektronik]. Jurnal
Biologi. 6:2. 1-7.