JKK, Tahun 2015, Volume 4(1), halaman 75-83 ISSN 2303-1077

UJI TOKSISITAS DENGAN METODE BSLT (Brine Shrimp Lethality Test)

TERHADAP HASIL FRAKSINASI EKSTRAK KULIT BUAH TAMPOI
(Baccaurea macrocarpa)

Arimbi Wahyu Ningdyah1*, Andi Hairil Alimuddin1, Afghani Jayuska1

1
Program Studi Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Tanjungpura,
Jln. Prof. Dr. H. Hadari Nawawi 78124,
*e-mail: mbi_arimbi@yahoo.co.id

ABSTRAK
Tampoi (Baccaurea macrocarpa) dari family Euphorbiaceae adalah tumbuhan hutan endemik
yang tersebar di Kalimatan hingga Semenanjung Malaya.Tampoi juga tanaman hutan yang
rentan terhadap kepunahan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui bioaktifitas toksisitas
pada kulit buah tampoi dengan berbagai tahapan metode diantaranya partisi, uji fitokimia, KLT,
Fraksinasi Kromatografi Vakum Cair (KVC) dan Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Hasil uji
fitokimia pada ekstrak metanol, fraksi metanol dan fraksinasi KVC metanol mengandung
senyawa fenol dan terpenoid. Kemudian diuji menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test
(BSLT) dengan hewan uji dari larva artemia salina tahap napuli. Nilai LC5O dari hasil uji pada
ekstrak etil asetat yaitu sebesar 78,458 ppm, fraksi metanol sebesar 111,985 ppm, pada fraksi
n-heksan 1000,207 ppm dan ekstrak kasar metanol 1146,764 ppm. Fraksi aktif dan terbanyak
berupa fraksi metanol yang difraksinasi dengan KVC 371,415 ppm. Berdasarkan tingkat
toksisistas nilai LC5O dari fraksi metanol, fraksi etila setat, fraksinasi KVC metanol berpotensi
sebagai sitotoksik.

Kata kunci : Baccaurea macrocarpa, Euphorbiaceae, KVC, toksisitas, BSLT, sitotoksik

PENDAHULUAN
Tampoi tanaman endemik yang
banyak ditemukan di daerah Kalimantan,
Sumatra dan Semenanjung Malaya. Tampoi
merupakan tanaman dari genus Baccaurea
macrocarpa dari family Euphorbiaceae.
Penelitan tentang tanaman tampoi yang
telah dilakukan adalah uji aktivitas sebagai
antioksidan dengan nilai IC50 sebesar 33,11
µg/mg (Tirtana dkk., 2013). Fraksi etil asetat
dari kulit buah tampoi menunjukkan aktivitas
sebagai antibakteri E. Coli dan S. aureus
secara berturut turut mampu menghambat
pertumbuhan sebesar 22,01 mm dan 23,92
mm pada konsentrasi 20%. Fraksi etil asetat
dari kulit batang tampoi juga memiliki
aktivitas sitotoksik saat diuji metode BSLT
dengan nilai LC50 sebesar 310,443 ppm
(Dwijayanti dkk., 2014).
Berdasarkan kajian literatur dari
genus yang sama Baccaurea, daging buah
dan kulit buah dari B. Lanceolata yang
dibandingkan aktivitas sitotoksik dengan
metode BSLT memiliki nilai LC50 sebesar
23,2190 ppm dari fraksi etil asetat pada kulit
buah (Manullang dkk., 2013). Daun dan
batang B. Ramiflora yang diuji siotoksiknya
menggunakan metode BSLT memiliki
aktivitas LC50 tertinggi pada fraksi n-heksan
sebesar 23,2190 ppm serta mengandung
senyawa melation (Howlader et al., 2012;
Padumanonda et al., 2014). B. Motleyana
(Rambai) merupakan tanaman obat herba
yang dikenal olah masyarakat, pada buah
dan kulit yang diekstrak lalu difraksi dengan
n-heksan dan diklorometan mampu
menghambat cell lines kanker sel usus
(Ismail dkk., 2012; Ramasamy et al., 2011).
Daun B. javanic memiliki sitotoksik ketika
diuji menggunakan cell lines MCF-7 sel
kanker payudara(Subarnas et al., 2012).
B. Lanceolata, B. Ramiflora dan B.
Motleyana (Rambai) yang sama-sama satu
genus dengan tampoi (B. macrocarpa),
sehingga kemungkinan memiliki aktivitas
toksisitas yang sama. Maka dari itu, perlu
dilakukan penelitian lebih lanjut pada ekstrak
kulit buah B. macrocarpa, mengingat
tanaman ini rentan terhadap kepunahan,
sehingga perlu dilakukan kajian lebih lanjut
tentang aktivitas toksisitas dan senyawa aktif

75
JKK, Tahun 2015, Volume 4(1), halaman 75-83
yang berpengaruh dalam ekstrak kulit buah
B. macrocarpa.
Uji toksisitas B. macrocarpa
dilakukan dengan menggunakan metode
Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Metode
BSLT merupakan salah satu metode untuk
skrining tanaman obat yang berpotensi
sebagai antikanker karena lebih murah,
singkat, mudah dikembangkan serta tidak
ada aturan etika dalam penggunaan bahan
uji (Anderson, 1991). Nilai mortalitas
ditentukan dengan menggunakan analisa
probit untuk menentukan nilai toksisitas
menggunakan Lethal Consentration (LC50)
pada semua fraksi serta fraksi yang paling
aktif dan terbanyak dilakukan pemisahan
lebih lanjut dengan metode Kromatografi
Vakum Cair (KVC) dan tiap fraksi
diidentifikasi dengan Kromatografi Lapis
Tipis (KLT) dengan panjang gelombang 254
nm dan 366 nm. Kemudian hasil fraksi yang
baik dan aktif diuji BSLT dengan tujuan
mengetahui LC50 sebelum dan setelah
dilakukan proses KVC serta senyawa aktif
yang berpengaruh di dalamnya.
METODOLOGI PENELITIAN
Bahan dan Alat
Bahan Kimia dan Bahan Uji
Bahan-bahan yang akan digunakan
pada penelitian yaitu akuades, amoniak
(merck), asam sulfat(merck), asam klorida
(merck), kulit buah dari B. macrocarpa, asam
asetat glacial (merck), DMSO (merck), etil
asetat (teknis), bubuk Mg (Merck), plat KLT
G60 F245 (merck), FeCl3 (merck), n-heksana
(teknis), pereaksi Mayer, Dragendorff,
Wagner, air laut dan methanol (teknis).
Alat
Alat-alat yang digunakan berupa alat-
alat gelas, plat KLT (merck), bejana KLT,
lampu UV 254 nm dan 366 nm, neraca
analitik, evaporator (Heidolph), termomoter,
toples, kotak plastik, gabus, aerator (Amara)
dan lampu neon akuarium.
Prosedur Kerja
Ekstraksi
Ekstrak metanol kasar dari kulit buah
B. macrocarpa ditimbang sebanyak 43,7747
gr, dimasukkan ke dalam bejana dan
ditambahkan pelarut metanol sampai semua
sampel terendam oleh pelarut dan
dihomogenkan menggunakan pengadukan.
Ekstrak methanol dievaporasi sehingga
76
ISSN 2303-1077
diperoleh ekstrak pekat metanol. Ekstrak
pekat yang diperoleh diekstraksi partisi
dengan n-heksan hingga terbentuk dua
lapisan. Lapisan atas dipisahkan (partisi n-
heksan), lapisan bawah ditambah etil asetat
dan dikocok sampai terbentuk dua lapisan.
Lapisan atas dipisahkan (fraksi etil asetat)
dan lapisan bawah dicuci dengan akuades
hingga diperoleh fraksi metanol ( Zuhra dkk,
2002).
Uji Fitokimia
Pada setiap ekstrak dan fraksi
terlebih dahulu dilarutkan dan
dihomogenkan, kemudian disiapkan
lempeng silika gel F254 yang berfungsi
sebagai fase diam. Fasa gerak berupa eluen
yang akan digunakan berupa n-
heksan:metanol:etil asetat (5:2,5:2,5)%.
a. Uji Senyawa alkaloid
Lempeng silika yang telah dielusi disemprot
dengan menggunakan reagen Dragendrof.
Perubahan warna yang terjadi diamati pada
cahaya UV 254 dan 366 nm serta di
panaskan dan amati perubahan yang terjadi.
Jika timbul warna coklat hingga jingga maka
senyawa yang ada mengandung alkaloid
(Haryanti dkk, 2012).
b. Senyawa Triterpenoid dan Steroid
Lempengan plat yang telah ditotolkan dan
dielusi kemudian disemprot dengan
menggunakan reagen liberman buchard.
Perubahan warna yang terjadi dapat diamati
pada UV 254 dan 366nm kemudian
dipanaskan lampengan di pemanas, diamati
setiap perubahan yang warna. Senyawa
triterpenoid dinyatakan ada jika warna merah
ungu(violet), coklat, ungu tua. Sedangkan
warna hijau biru untuk senyawa steroid
(Sukadana, 2011).
c. Senyawa flavanoida
Lempengan plat yang telah ditotolkan dan
dielusi kemudian disemprot dengan
menggunakan reagen AlCl3. Perubahan
warna yang terjadi dapat diamati pada UV
254 dan 366 nm, kemudian diamati setiap
perubahan yang terbentuk warna kuning
(Arianti dkk, 2013).
d. Senyawa Polifenol
Lempengan plat yang telah ditotolkan dan
dielusi kemudian disemprot dengan
menggunakan reagen FeCl3. Perubahan
warna yang terjadi diamati jika terbentuk
warna hitam, biru, hijau pekat (Sari dkk,
2010).
JKK, Tahun 2015, Volume 4(1), halaman 75-83 ISSN 2303-1077

dengan sinar UV pada panjang gelombang

Prosedur Uji Toksisitas dengan Metode 254 nm dan 366 nm. Hasil fraksinasinya
BSLT yang aktif dan berpendar, diuji kembali
Telur udang ditetaskan di dalam toksisitasnya dengan BSLT.
bejana gelap dan terang. Zona gelap letak
telur dan aerator, sedangkan zona terang HASIL DAN PEMBAHASAN
diletakkan lampu untuk memberi
Uji alkaloid dilakukan dengan
pencahayaan dalam penetasan serta
perekasi Dragendrof yang mampu
memisahkan antara kista. Pada bejana diisi
mendeteksi adanya senyawa yang
dengan ±50-100 mg telur udang yang akan
mengandung basa nitrogen dan alkaloid.
ditetaskan, selanjutnya pada bejana dibagi
Hasil pengujian KLT dengan reagen semprot
menjadi 2 bagian zona gelap dan zona
dragendrof tidak tampak adanya noda yang
terang yang diberi lampu yang dinyalakan
berwarna coklat-jingga, sehingga bahwa
selama 48 jam. Kemudian larva dipipet
semua sampel uji tidak mengandung alkaloid
sebanyak 10 ekor pada 2500 μL air laut .
(Haryanti dkk, 2012).
Agar Sampel larut tambahkan 2 tetes
Penentuan kandungan senyawa
DMSO. Ekstrak yang akan diuji dibuat dalam
flavonoid menggunakan reagen semprot
konsentrasi 20, 200, 400, 1000 dan 2000
AlCl3. Plat KLT yang telah dielusi disemprot
ppm. Selanjutnya di pipet larutan sampel
di bawah lampu 254 dan 366 nm dengan
yang akan diuji masing-masing sebanyak 2,5
tujuan agar tampak noda hasil pemisahan
ml atau 2500 μL dan ditepatkan hingga 5 ml
serta memudahkan proses identifikasi.
atau 5000 μL sehingga didapat konsentrasi
Kandungan senyawa flavonoid yang dapat
10, 100, 200, 500 dan 1000 ppm. Untuk
diidentifikasi ketika terbentuk noda berwarna
setiap konsentrasi dilakukan 3 kali
kuning. Plat yang telah disinari dengan UV
pengulangan. Untuk kontrol dilakukan tanpa
254 dan 366nm tidak terdapat perubahan
penambahan sampel hanya ditmbahkan 2
warna noda yang terbentuk (Arianti dkk,
tetes DMSO sebagai kontrol negatif. Larutan
2013).
dibiarkan selama 24 jam, kemudian dihitung
Uji senyawa terpenoid dan steroid
jumlah larva yang mati dan masih hidup dari
diidentifikasi dengan menyemprotkan
tiap vial kemudian dihitung dengan analisa
perekasi liberman buchard (asam sulfat
probit untuk mentukan LC50(Meyer et al.,
pekat dan asam asetat anhidrat) pada
1982; Juniarti dkk, 2009; McLaughlin et al.,
lempeng plat yang telah dielusi. Perubahan
1998).
warna yang terjadi pada UV panjang
gelombang 366 nm terbentuk warna hijau
Kromatografi cair vakum (KCV)
pada ekstrak kasar, fraksi etil asetat, fraksi
Pemisahan senyawa aktif
metanol dan M9 (hasil KVC), warna biru
menggunakan teknik KVC dari Deny dkk,
pada fraksi n-heksana. Sedangkan saat
2013 dengan sedikit modifikasi. Fraksi yang
dilihat visual ekstrak kasar, fraksi etil asetat,
terbanyak dan aktif setelah proses uji BSLT
fraksi metanol dan M9 berwarna ungu
dilajutkan ke proses KVC. Sejumlah kecil
hingga coklat gelap dan fraksi n-heksana
fraksi aktif dianalisis dengan KLT silika G 60
berwarna coklat muda, senyawa steroid
F254 (tebal 0,2mm; jarak elusi 4,5 cm) untuk
dengan pereaksi reagen liberman buchard
menentukan eluen yang sesuai digunakan
menunjukkan warna noda hijau sedangkan
dalam KVC. Fraksi aktif difraksinasi dengan
warna hijau biru hingga coklat menujukan
KCV menggunakan silika gel 60 F254 sebagai
adanya kandungan senyawa triterpenoid
fasa diam. Sampel dielusi dengan kombinasi
(Syamsudin dkk, 2007; Hayati dkk, 2012;
pelarut bergradien hasil KLT. Variasi eluen
Sulistijowati dan Didik, 1999).
yang digunakan perbandingan metanol: etil
Uji polifenol dengan pereaksi FeCl3
asetat (1:9; 2:8; 3:7; 4:6; 5:5; 6:4; 7:3; 8:2;
yang disemprotkan pada plat yang telah
9:1) %. Eluen hasil KVC ditampung dalam
dielusi. Sample fraksi etil asetat
botol dengan volume masing-masing 50 mL
mengandung senyawa tanin atau polifenol
dengan total pelarut 100 ml dengan 2 kali
karena menghasilkan warna hijau kehitaman
elusi. Selanjutnya eluen hasil fraksi tersebut
sedangkan pada fraksi metanol mengasilkan
di-KLT. Fraksi yang memiliki pola noda yang
noda abu-abu yang samar-samar. Warna
sama dapat digabungkan .Fraksi yang
yang dihasilkan ini diakibatkan karena
pemisahan senyawa yang baik dideteksi

77
 JKK, Tahun 2015, Volume 4(1), halaman 75-83 ISSN 2303-1077

terbentuknya senyawa kompleks Fe3+-tanin/ sinar UV 366 yang berenergi menyinari

polifenol. Senyawa polifenol mempunyai senyawa yang memiliki ikatan
ciri-ciri yaitu cincin aromatis yang rangkap(ikatan π) akan ada pendar warna
mengandung satu atau dua gugus hidroksil. yang dihasilkan akibat adanya elekton
Pada atom O pada tanin/polifenol mampu tereksitasi (Chang, 2003).
mendonorkan pasangan elektron bebasnya
ke Fe3+ yang memiliki orbital d kosong Uji Aktivitas Sitotoksis Dan Pembiakan
membentuk ikatan kovalen koordinat untuk Larva Udang Artemia Salina
menjadi suatu senyawa kompleks. Daur hidup pertumbuhan Artemia
(Harborne, 1987). salina terdiri atas 3 tahap yaitu kista, napuli
dan dewasa. Tahap napuli adalah tahap
Tabel 1. Hasil Fitokimia Kulit Buah Tampoi uang digunakan sebagai larva uji untuk uji
M9 toksistas dengan menggunakan metode
Ekstrak n- Etil
Methanol (Ektrak
metanol heksan asetat
KVC) BSLT. Kadar salinitas air garam yang
Alkaloid - - - - - digunakan untuk pembiakan sebesar 32 ppt,
Flavonoid - - - - - ini memenuhi kriteria kadar penetasan telur
Steroid - + - - -
Terpenoid - - + + + udang menjadi kista antara 5 ppt hingga 70
Polifenol - - + + - ppt, ketika dalam kondisi kadar garam yang
lebih dari 70 ppt maka telur udang tidak akan
Senyawa terpenoid cukup menetas sedangkan kondisi kurang dari 5
mendominasi disetiap sampel kecuali fraksi ppt akan hidup dalam waktu singkat. Telur
n-heksan. Senyawa terpenoid dapat terikat udang ketika dalam kondisi kering akan
pada glikosida sehingga dapat terlarut dalam berbentuk pipih sedangkan ketika berada di
polar dan semi polar (Harborne, 1987). dalam air laut telur berubah menjadi bulat
Triterpenoid merupakan rantai panjang dengan cara menyerap air laut yang ada di
hidrokarbon C30 yang bersifat non-polar, sekelilingnya.
namun dapat bersifat polar ketika didominasi Perubahan telur Artemia salina saat
gugus –OH. Gugus –OH (Harbone, 1987). kondisi basah dan kering menjadi bahan uji
Gugus –OH bersifat polar karena memiliki yang cukup menarik dan praktis ditinjau dari
sifat elektronegatifan yang cukup tinggi. praktis dalam penyimpanan dengan jangka
Elektrongatifan yaitu kemampuan untuk lama serta mudah perawatan. Selain itu
menarik eletron dalam ikatan kimia. Ketika tingkat sensitifitasnya terhadap konsisi
gugus yang memiliki elektronegatifitas yang lingkungan cukup tinggi (Nunes et al., 2006).
tinggi berhubungan dengan afinitas elektron Telur larva yang sudah berbentuk
dan energi ionisasi. Pada gugus OH bulat akan menentas kurang lebih 48 jam
membentuk ikatan kovalen polar yang mana akan menentas dan berenang disebut
ikatan ini yang menyebabkan senyawa dapat napuli. Tahap napuli merupakan tahap
berubah sifat secara ketika ada kedua dari proses kehidupan dari Artemia
penambahan gugus OH (Chang, 2003). salina yang hanya memiliki hanya memiliki 1
Inilah yang menyebabkan terpenoid dapat mata (fotoreseptor). Bentuk napuli yang ada
bersifat polar akibat adanya gugus OH pada diliteratur identik dengan napuli yang
ikatannya. Senyawa terpenoid dapat digunakan untuk uji. Napuli ini akan tumbuh
berpendar hijau biru hingga coklat akibat dan mengembangkan dua mata, tapi mata
senyawa yang ada di dalam plat menyerap awal tetap, sehingga tiga mata. Napuli yang
energi dan mengeksitasinya dalam bentuk phototactic, sementara orang dewasa tidak.
warna komplemanter. Senyawa di dalam plat Mereka berenang melalui kolom air
(terpenoid) memiliki ikatan π dan ikatan σ. (fototaksis) menggunakan antena. Rahang
Ikatan σ adalah yang terbentuk akibat yang digunakan untuk menyaring air dan
tumpang tindih antar orbital yang fitoplankton (Mioara, 2011).
terkonsentrasi pada satu titik serta jenis
ikatan ini lebih kuat. Sedangkan ikatan π Uji Aktivitas Toksisitas Dengan
merupakan ikatan yang terbentuk akibat Menggunakan Metode BSLT
tumpang tindih secara menyamping dan Sampel uji yang digunakan adalah
terkonsentasi di atas dan di bawah bidang hasil dari setiap fraksi dan hasil proses KVC
inti (ikatan rangkap). Ikatan π lebih mudah dengan menggunakan hewan uji Larva
lepas dan mengalami eksitasi, pada saat di artemia karena memiliki sensitifitas yang

78
JKK, Tahun 2015, Volume 4(1), halaman 75-83 ISSN 2303-1077

tinggi terhadap perubahan kondisi
lingkungan dan kontaminasi bahan kimia
yang ada di lingkungan sehingga dapat
digunakan sebagai parameter awal suatu
perubahan kondisi lingkungan.
Ekstrak setiap fraksi diuji dengan
menggunakan larva artemia jumlah kematian
larva LC50 dengan menggunakan aplikasi
SPSS analisa probit. Nilai LC50 (Letal
Consentration) adalah jumlah kadar yang
menyebabkan kematian dari 50% hewan uji
dalam selang beberapa waktu tertentu. LC50
tidak berfokus pada kerusakan organ
tertentu dan spesifik namun pada total
kematian hewan uji itu sendiri sehingga nilai
LC50 digunakan pada uji jangka pendek.
LC50 digunakan untuk menghitung tingkat
kematian kematian artemia mengingat
susunan pencernaannya yang tidak rumit
serta sensitifitas yang yang cukup tinggi (Lu,
1995).

Tabel 2. Hasil uji BSLT dari setiap fraksi pada kulit buah B. Macrocarpa
Konsentrasi Akumulasi Akumulasi Mortalitas
Sampel LC50
ppm Hidup Mati (%)
Ekstrak metanol 10 39 0 0 1146,764
100 29,3332 1 3,296718
200 20,3332 3,3333 14,08447
500 12,6666 5,9999 32,14261
1000 5,3333 10,6665 66,66646
Fraksi n-heksan 10 32,9999 0 0 1.000.207
100 22,9999 1 4,1666
200 13,9999 3,3333 19,2307
500 6,3333 6,9999 52,4997
1000 5,3333 11,6666 68,6275
Fraksi etil asetat 10 16,9999 1 5,5556 78.458
100 7,9999 4 33,3336
200 2,3333 11,6662 83,333
500 0 21,3332 100
1000 0 31,3332 100
Fraksi metanol 10 20,9999 0 0 111.985
100 11,9999 2,3333 16,279
200 5,9999 5,9999 50
500 2,3333 11,9999 83,721
1000 0 20,9999 100
Fraksi KCV (M9) 10 31 0 0 371.415
100 22,3332 1 4,2857
200 13,3332 4 23,0771
500 6,3332 8,3333 56,8186
1000 0,6666 17,6666 96,364

Ekstrak metanol dan fraksinasinya
yang diuji dengan menggunakan metode
BSLT yang mampu mendeteksi tingkat
toksisitas sebagai tahap awal pengujian
aktivitas sebelum digunakan pada sel
kanker. Dengan metode BSLT mampu
mendeteksi tingkat toksisitas pad sampel
khususnya tumbuhan. Berdasarkan nilai
toksisitas dalam senyawa dari tumbuhan
jika LC50 ≤ 30 ppm maka bersifat sangat
toksik, ketika konsentrasi ekstrak 31 ppm ≤
LC50 ≤ 1000 ppm bersifat toksik jika LC50
>1000 ppm maka bersifat tidak toksik. Pada
hasil uji menunjukkan bahwa fraksi etil
asetat adalah fraksi yang paling aktif dengan
nilai LC50 sebesar 78,458 ppm, fraksi
metanol dengan LC50 111,985 ppm.
Berdasarkan tingkat toksisitas bahwa fraksi
etil asetat, fraksi metanol bersifat toksik.
Ekstrak yang bersifat toksik saat diuji
dengan menggunakan metode Brine shrimp
lethality test (BSLT) dapat menyebabkan
kematian 50 % larva artemia dalam waktu 24
jam pada konsentrasi LC50<1000 ppm
menandakan bahwa sampel memiliki potensi
sebagai antikanker, antibakteri, antijamur
dan sebagainya (Mayer, 1982).

79
JKK, Tahun 2015, Volume 4(1), halaman 75-83
Sedangkan pada fraksi n-heksan
LC50 1000,207 ppm, dan ekstrak metanol
kasar sebesar LC50 1146,764 ppm yang
memiliki nilai LC50 >1000 maka bersifat tidak
toksik. Selanjutnya ekstrak yang terbanyak
dan aktif (fraksi metanol) dilanjutkan ketahap
KVC adalah fraksi methanol ditinjau dari
massa ektrak. Hasil fraksinasi dengan
metode KVC kemudian diuji BSLT
didapatlah hasil berupa nilai LC50 sebesar
371,415 ppm. Senyawa toksik yang ada
pada ekstrak dapat masuk melalui bagian
mulut A.salina dan diabsorbsi masuk ke
dalam saluran pencernaan terjadi proses
absorbsi melalui membran sel. Setelah
proses absorbsi dilanjutkan dengan proses
distribusi senyawa toksik ke dalam tubuh A.
salina, dan terjadi proses kerusakan reaksi
metabolisme. Struktur anatomi tubuh A.
salina pada tahap naupli masih sangat
sederhana, yaitu terdiri dari lapisan kulit,
mulut, anthena, saluran pencernaan atau
digesti yang masih sederhana, dan calon
thoracopoda (Raineri, 1981). Perubahan
gradien konsentrasi yang drastis antara di
dalam dan di luar sel yang menyebabkan
senyawa toksik mampu menyebar dengan
baik ke tubuh A.salina. Efek kerusakan
metabolisme yang ditimbulkan terjadi secara
cepat dapat dideteksi dalam waktu 24 jam,
hingga menyebabkan 50% kematian A.
salina.
Kromatografi Vakum Cair (KVC)
Hasil fraksinasi diuapkan pelarutnya
dengan cara dikering anginkan. Kemudian
semua fraksi yang ada di KLT untuk melihat
pola noda yang terbentuk. Pola noda yang
terbentuk menjadi dasar untuk
mengabungkan beberapa fraksi yang telah
di peroleh dengan melihat noda yang
terbentuk. Hasil KLT yang ada disinari
dengan lampu UV 254 dan 366 nm serta
diuji dengan serium sulfat untuk melihat hasil
elusi yang ada.
Fraksinasi yang terbanyak kemudian
dilakukan uji lanjut dengan metode BSLT
untuk mengetahui aktivitas toksisitas antara
sebelum proses KVC dan setelah proses
KVC. Fraksi M9 yang digunakan sebagai
sample uji mewakili deretan sample M yang
ada karena jumlah massa yang cukup besar
dan memungkinkan dilakukan proses uji dan
pengulangan. Ekstrak M9 ketika diuji dengan
metode BSLT memiliki nilai LC50 sebesar
371,415 ppm. Nilai LC50 sebelum proses
80
ISSN 2303-1077
KVC dan setelah KVC cukup berbeda,
dengan nilai LC50 pada fraksi metanol lebih
tinggi dibandingkan fraksi M9. Namun kedua
sampel sama-sama memiliki nilai LC50<1000
yang bersifat cukup aktif.
Fraksi metanol dan fraksi etil asetat
memiliki nilai LC50 lebih besar dibandingkan
M9 ini disebabkan adanya interaksi kimia
dari metabolit sekunder yang berpengaruh di
dalamnya adalah senyawa triterpen dan
polifenol sedangkan pada M9 hanya ada
senyawa triterpen. Fraksi etil asetat dan
fraksi metanol cukup aktif karena terdapat 2
komponen senyawa yang saling bekerja
sinergis di dalamnya. Senyawa polifenol
berpengaruh dan berperan aktif dalam
tingkat kematian larva artemia.
Hubungan Tingkat Kematian Larva
Dengan Konsetrasi
Tingkat kematian larva tidak hanya
dipengaruhi oleh komponen kimia yang
terkandung di dalamnya tetapi erat
hubungannnya dengan konsentrasi terhadap
larva artemia. Tingkat kematian larva
terhadap konsentrasi berbanding lurus.
Seperti yang terlihat pada fraksi etil asetat
dan fraksi metanol adalah fraksi yang paling
aktif dimana pada konsetrasi maksimum
mampu membunuh 100% larva yang ada ini
karena pada kedua fraksi terdapat senyawa
polifenol dan triterpen. Hubungan tingkat
kematian larva yang berbanding dengan
konsentrasi pada gambar 1.
Gambar 1. Hubungan Kematian Larva
dengan konsentrasi
Hubungan tingkat kematian larva
sangat erat hubungannya dengan
konsentrasi. Efek sinergis adalah efek dari
gabungan beberapa komponen senyawa
yang bersifat saling meningkatkan aktivitas
seperti yang terjadi pada fraksi metanol dan
fraksi etil asetat(Lu, 1995). Pada gambar 2
merupakan hubungan kematian terhadap
konsentrasi.
JKK, Tahun 2015, Volume 4(1), halaman 75-83
Gambar 2. Tingkat persentasi kematian
larva udang terhadap
konsentrasi
Fraksi metanol dan etil asetat
memiliki tingkat persen kematian larva paling
tinggi dibandingkan sampel lain, bahkan
dikonsentrasi 500 ppm mampu mematikan
100% larva udang dalam waktu 24 jam.
Pada ekstrak metanol dengan tingkat
kematian larva yang cukup rendah. Tinggi
rendahnya persentasi kematian larva
berbanding terbalik dengan nilai LC50. Ketika
nilai LC50 besar maka tingkat kematian larva
akan semakin rendah begitu juga
sebaliknya. Fraksi metanol, fraksi etil asetat
dan M9 mampu membunuh larva artemia
cukup signifikan bahkan pada konsentrasi
yang kecil(10 ppm). Sedangkan pada fraksi
n-heksana dan ekstrak metanol memiliki
aktivitas yang rendah.
SIMPULAN
Berdasarkan hasil yang diperoleh
dari penelitian ini, dapat dibuat simpulan
sebagai berikut:
1. Nilai LC5O dari hasil uji BSLT pada ekstrak
etilasetat, hasil fraksi metanol dan KVC
(M9) dan memiliki LC5O < 1000 ppm, pada
fraksi n-heksan dan ekstrak kasar methanol
LC5O > 1000 ppm.
2. Khususnya fraksi Ada perbedaan yang
cukup signifikan antara KVC 371,415 ppm
dan sebelum KVC 111,985 ppm ini
dipengaruhi oleh kandungan senyawa
polifenol dan terpenoid.
3. Bahan aktif yang bersifat sitotoksik
merupakan senyawa semipolar dan polar,
sedangkan nonpolar bersifat tidak aktif.
SARAN
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut
untuk mengetahui senyawa polifenol yang
berperan aktif dalam toksisitas.
DAFTAR PUSTAKA
81
ISSN 2303-1077
Anderson, C. M. Goetz and J. L. McLaughlin.
1991. A Blind Comparison of Simple
Bench-top Bioassays and Human
Tumour Cell Cytotoxici ties as
Antitumor Prescreens .
Phytochemical Analisis. vol. 2, (107)
I-II
Ariyanti, Dyah Arum, Khairul Anam, Dewi
Kusrini. 2013. Identifikasi Senyawa
Flavonoid dari Daun Ketapang
Kencana (Terminalia muelleri Benth.)
dan Uji Aktivitas Sebagai Antibakteri
Penyebab Bau Badan. Journal Chem
Info Vol 1, No 1: 94-100
Chang, Raymond. 2003. Kimia Dasar Jilid.
Penerjemah: Suminar Setiati Achmadi.
Erlangga. Jakarta
Deny, Rudiyansyah dan Puji Ardiningsih.
2013. Isolasi dan Kareakterisasi
Senyawa Triterpenoid dari Fraksi
Klorofom Kulit Batang Durian Kura(D.
testudinarum Becc.). JKK, tahun 2013,
volume 2 (1), halaman 7-12
Dwijayanti. Eka, Andi Hairil Alimuddin dan
Muhamad Agus Wibowo, 2015,
Skrining Fitokimia dan Uji Aktivitas
Sitotoksik pada Kulit Batang Tampoi
(Baccaurea macrocarpa) terhadap
Artemia Salina Leach dengan Metode
BSLT, JKK, Tahun 2015, Volume 4(1):
6-10
Mioara D, 2011, Artemia salin, Research
Journal Balneo, Vol.2 (4) ;119-122
Harborne, J.B., 1987, Metode Fitokimia,
Penuntun Cara Modern Menganalisis
Tumbuhan, Penerjemah: K.
Padmawinata dan I. Soediro, terbitan
ke-2, Penerbit ITB, Bandung
Hayati. Elok Kamilah, Akyunul Jannah,
Rachmawati Ningsih. 2012. Identifikasi
senyawa dan Aktivitas Antimalaria in
Vivo Ekstrak Etil Asetat Tanaman
Anting-anting (Acalypha indica L.).
journal Molekul, Vol. 7. No. (1): 20 - 32
Hayati, Elok karmila dan Nur Halimah. 2010.
Phytochemical test and Brine Shrimnp
Lethality Test Against Artema salina
Leach of Anting-Anting (Acaypha
indica Linn.) Plant Extract. Journal
Alchemy.Vol 1.no 2 hal: 53:103
Howlader Md. A., Apu A. Sarker., Saha R.
Kumer., Rizwan F., Nasrin N., dan
Asaduzzaman M., 2012.,Cytotoxic
Activity Of N-Hexane, Chloroform And
Carbon Tetrachloride Fractions Of The
Ethanolic Extract Of Leaves And
JKK, Tahun 2015, Volume 4(1), halaman 75-83 ISSN 2303-1077

Stems Of Baccaurea Ramiflora., various human cancer cell Lines.

International Journal of Pharmaceutical Journal of Medicinal Plants Research
Sciences and Researc., Vol. 3(3): 822- Vol. 5(11): 2267-2273
825 Raineri, M. Histochemical Localization of
Ismail Maznah, Gururaj Bagalkotkar, Shahid Chitin in Larvae of Artemia salina
Iqbal dan Hadiza Altine Adamu. 2012. Leach (Phyllopoda). 1981. Italian
Anticancer Properties and Phenolic Journal of Zoology 48 (2): 139 -141.
Contents of Sequentially Prepared Sangi Meiske, Max R. J. Runtuwene, Herny
Extracts from Different Parts of E. I. Simbala dan Veronica M. A.
Selected Medicinal Plants Indigenous Makang. 2008. Analisis Fitokimia
to Malaysia. Article Molecules.17. Tumbuhan Obat di Kabupaten
5745-5756 Minahasa Utara.J Chem. Prog. Vol. 1,
Juniarti, Delvi Osmeli, dan Yuhernita 2009. No. 1:47-53
Kandungan Senyawa Kimia, Uji Sari, Yeni Dianita, Sitti Nur Djannah, Laela
Toksisitas (Brine Shrimp Lethality Test) Hayu Nurani. 2010. Uji Aktivitas
dan Antioksidan (1,1-diphenyl-2- Antibakteri Infusa Daun Sirsak
pikrilhydrazyl) dari Ekstrak Daun Saga (Annona muricata L.) secara in Vitro
(Abrus precatorius L.). journal Makara terhadap Staphylococcus aureus
Sains. Vol. 13, No. 1: 50-54 ATCC 25923 dan Escherichia coli
Lu, Frank C. 1995. Toksikologi dasar : asas, ATCC 35218 serta prodil Kromatografi
organ sasaran, dan penilaian resiok. Lapis Tipisnya. Journal KES MAS Vol.
.Penerjemah: Edi Nugroho dkk, 4 No. 3, : 144 – 239
Jakarta Penerbit UI Syamsudin, Soesanto Tjokrosonto, Subagus
McLaughlin. J. L and Roggers. L. L., 1998, Wahyuono dan Mustofa. 2007.
The Use Of Biological Assays to Aktivitas antiplasmodium dari dua
Evaluate Botanicals, Drug Information fraksi ekstrak n-heksana kulit batang
Journal . vol 32: 513 - 524 asam kandis (Garcinia parvifolia Miq).
Mayer B.N., Ferrigni N.R., Putnam J.E., Majalah Farmasi Indonesia. 18(4):210
Jacobsen L.B., Nichols D.E and – 215,
McLaughlin JL., 1982, Brine shrimp: a Subarnas Anas, Ajeng Diantini, Rizky
convenient general bioassay for active Abdulah, Ade Zuhrotun, Chiho
plant constituents., Planta Medica. vol Yamazaki, Mintao Nakazawa dan
45: 31-34 Hiroshi Koyama. 2012. Antiproliferative
Manullang Lisnawaty, Daniel dan Enos activity of primates-consumed plants
Tangke Arung. 2013. Uji Toksisitas against MCF-7 human breast cancer
Dan Antioksidan Ekstrak Buah cell lines. Journal of Medical Research
Kelepesoh (Baccaurea Lanceolata Vol. 1(4): 038-043
(Miq.) Mull. Arg). Journal Science East Sulistjowati, Asri dan Didik Gunawan. 1999.
Borneo. Volume 1 No.1 Efek Ekstrak Daun Kembang Bulan
Nunes Bruno S., Fe´lix D. Carvalho , Lu´cia (Tithonia diversifolia A.Gray.) terhadap
M. Guilhermino, Gilbert Van Candida albicans Serta Profil
Stappen.2006 . Use of the genus Koramotografinya. Artikel Media
Artemia in ecotoxicity testing. Review Litbangkes Edisi Khusus”Obat Asli
Environmental Pollution. 144: 453-462 Indonesia” Volume VIII (3 -4). hal: 32-
Padumanonda Tanit, Jeffrey Johns, 37.
Autcharaporn Sangkasat dan Sukadana, I Made. 2011.Kandungan
Suppachai Tiyaworanant. 2012. Senyawa steroid –alkaloid pada
Determination of melatonin content in ekstrak n heksan daun beringin (Ficus
traditional Thai herbal remedies used benjamina L). Jurnal Kimia. 5 (2): 169-
as sleeping aids. Daru Journal of 174.
Pharmaceutical Sciences, 22:6
Ramasamy Sujatha, Norhanom Abdul Tirtana Endra., Idiawati Nora., Warsida.,
Wahab, Nurhayati Zainal Abidin dan Jayuska Afghani.,2013.,Analisa
Sugumaran Manickam. 2011. Proksimat, Uji Fitokimia Dan Aktivitas
Cytotoxicity evaluation of five selected Antioksidan Pada Buah Tampoi
Malaysian Phyllanthaceae species on

82
JKK, Tahun 2015, Volume 4(1), halaman 75-83 ISSN 2303-1077

(Baccaurea Macrocarpa), JKK. volume Staphylococcus aureus . JKK, tahun

2 (1): 42-45 2014, volume 3 (3): 19- 24
Yunus Renos, Andi Hairil Alimuddin, Puji Zuhra. Cut.F, Juliati Br. Tarigan. Dan
Ardiningsih . 2014. Uji Aktivitas Herlince Sihotang. 2008. Aktivitas
Antibakteri Ekstrak Kulit Buah Tampoi Antioksidan Senyawa Flavonoid dari
(Baccaurea macrocarpa) Terhadap Daun Katuk (Sauropus Androgunus(L)
Bakteri Escherichia coli dan Merr., Jurnal Biologi Sumatera .Vol. 3,
No.1 hal 7:10.

83