2.

3 Enzim Inulase

Indonesia merupakan negara tropis yang subur dan kaya akan sumberdaya
alam flora, fauna maupun mikroorganisme, yang tentunya dapat dijadikan sebagai
obyek penelitian yang cukup potensial. Terkadang, karena banyaknya obyek
penelitian yang tersedia masih banyak pula hal-hal yang bermanfaat, namun luput
dari pengamatan dan belum tersentuh untuk dijadikan obyek penelitian. Seperti
kekayaan alam yang dapat digunakan sebagai sumber enzim yang saat ini
aplikasinya semakin banyak diminati. Namun ironisnya sampai saat ini Indonesia
masih belum dapat memproduksi sendiri dan sepenuhnya masih tergantung
kepada impor. Salah satunya adalah inulinase.
Inulinase adalah enzim hidrolitik yang mengkatalisis reaksi hidrolisis

polisakarida inulin menjadi fruktosa dan atau fruktooligosakarida. Saat ini

inulinase belum ada tersedia di pasaran dan masih merupakan dalam

pengembangan riset. Enzim ini dapat dihasilkan oleh bakteri, jamur, maupun

tumbuhtumbuhan. Namun demikian penggunaan enzim mikroba dan aplikasi

biokatalisnya banyak mendapatkan perhatian khususnya pada bidang bioteknologi

mikroba saat ini (Vandamme & Derycke 1983).

Inulinase merupakan enzim yang mampu menghidrolisis polimer inulin

menjadi bentuk oligosakarida melalui aktivitas endoinulinase dan monomer

fruktosa melalui aktivitas eksoinulinase (Wijanarka, 2002). Enzim inulinase dapat

diperoleh dari bakteri termofilik pendegradasi inulin yang bersumber dari

beberapa mata air panas di Solok dan dari rizosfer umbi dahlia. Enzim ini dapat

digunakan untuk pembuatan fruktosa dan FOS (fructooligosacharides) (Azhar,

2014).

Aktivitas inulinase dapat dipengaruhi oleh beberapa faktor diantaranya pH,

suhu, dan konsentrasi substrat. Setiap enzim memiliki pH dan suhu optimum
untuk bekerja paling aktif. Umumnya aktivitas inulinase yang dihasilkan

berhubungan erat dengan jumlah gula pereduksi yang dihasilkan. Semakin banyak

jumlah gula pereduksi yang dihasilkan, maka semakin tinggi aktivitas inulinase

dan begitu juga sebaliknya. Penentuan aktivitas inulinase dapat dilakukan dengan

pereaksi asam Dinitrosalisilat(DNS) (Miller, 1959).

Hidrolisis inulin menjadi fruktosa dapat dilakukan dengan inulinase.

sedangkan hidrolisis parsialnya akan menghasilkan fruktooligosakarida, yaitu

suatu oligosakarida yang tidak dapat dicerna oleh usus manusia namu sangat baik

untuk menjaga kestabilan flora normal usus dan juga berperan sebagai serat yang

larut (soluble dietary fiber). Menurut Pool-Jobel (2005), senyawa polifruktan juga

dapat berperan sebagai prebiotik dan memiliki sifat antikarsinogenik. Produksi

sirup fruktosa secara konvensional dari pati memerlukan tiga tahap reaksi

enzimatik dengan rendemen hanya 45% sementara produksi sirup fruktosa dari

hidrolisis.

inulin hanya memerlukan satu tahap reaksi enzimatik dengan rendemen bisa
mencapai 90-95%. Sirup fruktosa dapat digunakan sebagai pemanis rendah kalori
karena fruktosa dua kali lebih manis dari sukrosa dengan organoleptik yang
disukai (Nakamura et al, 1995; Roberfroid & Dezenne, 1998). Pada kesempatan
ini kami telah melakukan isolasi, pemurnian, dan karakterisasi dari enzim
inulinase dari Aspergillus niger Gmn11.1. Kapang ini diisolasi dari umbi dahlia
yang terdapat di daerah Padang Panjang Sumatra Barat. Strain ini dapat
menghasilkan inulinase yang dapat dikembangkan lebih lanjut untuk diaplikasikan
pada proses hidrolisis inulin.
Teknik ion exchange telah dikembangkan untuk memperkaya fruktosa, tetapi
hanya menambah ongkos produksi. Oleh sebab itu, enzim yang terlibat pada
reaksi hidrolisis inulin adalah pilihan yang paling tepat. Enzim tersebut adalah
inulinase dan levanase. Sejauh ini diketahui bahwa inulinase dan levanase aktif
pada substrat inulin dan levan. Inulinase dari Bacillus polymyxa dapat
menghidrolisis sukrosa, levan, raffinosa and inulin (Kwon et al., 2003).
Exoinulinase dari Aspergillus awamori dapat menghidrolisis inulin dan levan
melalui aksi exo- melepaskan fruktosa (Arand et al., 2002). Levanase dari
Bacillus subtilis yang diekspresikan dalam Escherichia coli aktif pada levan,
inulin and sukrosa (Wanker et al., 1995), sementara exolevanase dari
Gluconacetobacter diazotrophicus SRT4 dapat menghidrolisis levan, inulin, dan
sukrosa (Menendez et al., 2002).
2.3.1 Mikroorganisme yang Dipekerjakan untuk Produksi Inulinase
Sejumlah strain jamur, ragi, dan bakteri telah digunakan untuk produksi
inulinase (lihat Tabel 1). Diantaranya, strain jamur milik Aspergillus sp. (Jamur
berfilamen) dan strain ragi milik Kluyveromyces sp. (ragi diploid) ternyata yang
paling umum dan pilihan pilihan. Viswanathan dan Kulkarni (3) mengisolasi
beberapa jamur dan strain ragi dari rhizosphere dahlia milik Aspergillus,
Penicillium,Sporotrichum, Cladosporium, dan Streptomyces sp. dan melaporkan
A. niger sebagai penghasil inulinase tertinggi (75 U / mL). Ketika budaya tumbuh
disedang dengan inulin dan jagung curam, hasil enzim 1,5 kali lipat lebih dari
yang diperoleh dengan media sintetis (4). Secara umum, jamur strain
menghasilkan inulinase ekstraseluler yang lebih tinggi dalam waktu kurang dari
actinomycetes. Pada radiasi ultraviolet, galur A. niger menghasilkan 3,1 kali lebih
banyak enzim dibandingkan dengan strain induk (5). Nakamura et al. (6) juga
melaporkan titer enzim yang lebih tinggi dari strain mutan A. niger 817. Gupta et
al. (7) membandingkan produksi inulinase termostabil dengan beberapa strain
Aspergillus sp., yaitu, A. fischeri, A. aureus, A. flavus, A. niger, dan A. nidulans.
Semua lima strain menunjukkan produksi maksimum 1000-1200 U / L enzim
ekstraseluler setelah 9 d pertumbuhan. Ongen-Baysal et al. (8) tercapai hasil
inulinase yang sangat tinggi (4600 U / g) dari kultur A. niger A42. Korneeva et al.
(9) melaporkan jenis baru A. awamori yang mampu melakukan sintesis inulinase
intensif. Enzim tersebut melakukan hidrolisis lengkap inulin menjadi fruktosa.
Novo Industries, Denmark, telah mengembangkan persiapan komersial enzim
inulinase dari A. Ficuum (Novozym 230) (10). Kim dan Rhee (11) juga
menggunakan A. ficuum inulinase untuk produksi sirup fruktosa. Elferink et al.
(12) telah menggunakan yang lain strain Aspergillus sp., A. phoenicis, untuk
produksi inulinase.

Gambar 1. Mikroorganisme yang Dipekerjakan untuk Produksi Inulinases

Alexander R. R., J. M. Griffiths & M. L. Wilkinson. 1985. Basic Biochemical

Methods. Singapore: John Willey & Sons. Beatrice, L. Pool_Zobel.

2005. Inulin-type fructan and reduction in colon cancer risk: review

of experimental and human data. British Journal of Nutrition 93:

573-590

Gupta A.K., M.Kaur, N. Kaur, & R. Singh. 1992. A comparison of properties of

Inulinase ofFusarium oxysporumimmobilized on various supports.

Journal Chem. Tech. Biotechnology 53:293-296.

Gilbert A. 1957. Colorimetrict Analysis Of Sugar. Method in Enzymology. Vol.

III. New York: Academic Press, Inc. Kazutomo, H., Hayashi K., &

Kasumi T. 1990. Purification and properties of inulinase from

Arthrobacter globoformis S64- 1. Starch 42(1): 28-30

Lowry, O. H., N. J. Rosenbrough, A. L. Farr & J. R. Randall. 1951. Protein

Measurement with Folin Phenol Reagent. J. Biol. Chem. 193: 265-275. M.

Belmari. 1994. Purification and properties of an extracellular inulinase

like -Fructosidases from Bacillus stearothermophylus . Letter Applied

Microboal 19(6):410- 413

M. manzoni & Cavazzoni V. 1991. Purification and caracterization of

sxtracellular inulinase from Kluyveromices cicerisporus. Lebensm-Wiss

Tecnology, England 24(3):236-240.

Nakamura T., Y. Ogata, A. Shitasa, A. Nakamura & K. Ohta. 1995. Continuous

production of fructose syrups from Inulin by immobilized inulinase

from Aspergillus niger Mutan 817. J. of Fermentation and Bioeng.

80(2): 164-169.