Nama : Rayen Rifaqih

Kelas : XII-1 Kimia Analisis

Identifikasi S. Aureus Metode APHA 2001

1. Tahap Prapengkayaan
a. Ambil 50 ml/gram sampel lalu encerkan/larutkan dengan 450ml Peptone Water,
homogenkan (Pengenceran 1)
b. Ambil 50ml dari pengenceran 1 lalu campurkan dengan 50ml medium TSB
Konsentrasi ganda
c. Inkubasi pada suhu 35-37℃ selama 3 jam
2. Tahap Pengkayaan Selektif
a. Setelah inkubasi selama 3 jam, tambahkan 100ml medium TSB konsentrasi normal
yang mengandung 20% NaCl
b. Inkubasi pada suhu 35-37℃ selama 24 jam
3. Tahap Konfirmasi
a. Pipet 2ml dari pengkayaan selektif lalu tanam pada 2 medium BPA (masing-masing
1ml setiap cawan petri) menggunakan teknik pour/spread culture
b. Inkubasi pada suhu 35-37℃ selama 48 jam
4. Tahap Purivikasi
a. Ambil suspense bakteri dari BPA ke medium BHIB
b. Inkubasi pada suhu 35-37℃ selama 24 jam
c. Ambil 0,2 ml suspense dari medium BHIB dan tambahkan 0,5ml plasma darah yang
telah di centrifugasi pada medium BHIB
d. Inkubasi pada suhu 35-37℃ dan amati setiap 6 jam
5. Tahap Biokimia
a. Tambahkan suspense bakteri ke dalam TSA
b. Tambahkan H2O2 3%, Amati apakah ada gelembung atau tidak

Pada uji sensitivitas bakteri terhadap lysostaphin :

a. Mencampurkan 0,1 ml kultur medium BHIB dengan 0,1ml reagen Lysostaphin
b. Inkubasi pada suhu 37℃ selama 4 jam
c. Amati apakah terjadi penjernihan pada tabung reaksi, menandakan positif
Pada uji Utilitasi Glukosa dan Manitol secara anaerob :
a. Tanam bakteri dari kultur TSA ke medium Purple Broth dengan 0,5% glukosa dan
Purple Broth dengan 0,5% manitol
b. Hilangkan O2 dengan menggunakan tabung reaksi yang bertutup ulir
c. Tambahkan minyak paraffin steril di permukaan medium dengan tebal 25mm
d. Inkubasi pada suhu 37℃ selama 5 hari
e. Warna kuning pada medium menandakan hasil yang positif
Pada uji Thermostable Nucleus Test:
a. Ambil 5 ml suspense dari BHIB medium
b. Didihkan suspense di BHIB medium selama 15 menit
c. Lalu teteskan pada medium Toluidine Blue DNA Agar
d. Inkubasi pada suhu 37℃ selama 4 jam
e. Apabila menandakan warna pink artinya positif S. Aureus dan positif Nuclues Test