7. IDENTIFIKASI BAKTERI S.

mutans DENGAN RAPID STR

Dr. Retno Indrawati, drg., MSi.
Dr. Ira Arundina, drg., MSi.

TUJUAN :
1. Untuk melakukan uji biokimiawi dan enzimatik suatu spesies bakteri dari genus
Streptococcus secara akurat.
2. Untuk membantu menegakkan diagnosa suatu spesies bakteri
3. RapID STR : Untuk identifikasi Streptococcus dan sejenisnya (Enterococcus, Gemella,
Leuconostoc, Pediococcus, Aerococcus, and L. Monocytogenes

KEGIATAN :
Mahasiswa melakukan preparasi dari suspensi genus Streptococcus yang di-suspect
sebagai S. mutans dan melakukan uji validitas dan akurasi dari genus Streptococcus
tersebut sebagai species Streptococcus mutans secara enzimatik dan biokimiawi.
RapID Systems :
 Sistem untuk identifikasi cepat dari varietas organisme yang luas.
 Menilai sebuah reaksi biokimia tunggal
 'One-step inoculation' yang mudah.
 4-jam inkubasi aerobik.
 Reaksi warna yang tegas dengan hasil pasti
 Database yang luas.

MACAM RapID Systems :

RapID ONE : Untuk oxidase negative, Gram-negative rods (Enterobacteriaceae)
RapID ANA II : Untuk identifikasi bakteri anaerob (Gram pos., Gram neg., and
Cocci)
RapID NF Plus : Untuk Gram-negative, glucose “non-fermenters” dan oxidase
positive Gram-negative rods terpilih yang lain.
RapID NH : Untuk identifikasi Neisseria dan Haemophilus species dan organisme
tertentu lain termasuk Moraxella catarrhalis
 RapID CB Plus : Untuk Corynebacterium spp. Dan Gram-positive rods tak
beraturan yang lain.
RapID Yeast Plus : Untuk yeast dan sejenisnya (kapang, khamir)
RapID STR : Untuk identifikasi Streptococci dan sejenisnya (Enterococcus,
Gemella, Leuconostoc, Pediococcus, Aerococcus, and L. monocytogenes)
RapID SS/u : Untuk identifikasi dari urinary tract pathogens (Gram-positif, Gram-
negatif, dan yeast tertentu)

CARA KERJA :
- Bakteri Streptococccus mutans ditanam pada blood agar dan diinkubasi selama 24 jam
- Bakteri yang menunjukkan hemolisa α, β, atau ə dipanen dan dimasukkan dalam tabung
reaksi yang berisi distilled water dengan volume 2 ml.
- Dilakukan homogenisasi pada suspensi bakteri tersebut dan disetarakan dengan standart
Mc Farland 4
- Kotak inkubasi diisi dengan distilled water pada sumurannya sebanyak 5 ml (untuk
menjaga kelembapan)
- Strip test yang berisi enzim dan gula – gula diletakkan diatas kotak inkubasi
- Kemudian pada strip test tersebut dimasukkan masing – masing 100µl suspensi bakteri
yang telah disesuaikan dengan standar Mc Farland 4 pada 10 sumuran tes enzimatik
yang mengandung enzim – enzim VP; HP; ESC; PYRA; α GAL; β GUR; β GAL; PAL;
LAP; dan ADH dari tepi tabung (jangan sampai terbentuk gelembung).
- Ampul API BP yang berisi 2 ml ditambah dengan 0,5 ml suspensi bakteri dan dilakukan
homogenisasi
- Campuran API GP dan suspensi bakteri tersebut dimasukkan dalam 10 buah susunan tes
fermentasi yaitu yang berisi gula – gula : RIB; ARA; MAN; SOR; LAC; TRE; INU; RAF;
AMD; GLYG; masing – masing sebanyak 100 µl
- Mineral oil diteteskan diatas sumuran enzimatik ADH dan 10 sumuran tes fermentasi.
Kemudian diinkubasi pada suhu 370C selama 4 jam
- Setelah diambil dari inkubator ditambahkan:
 tetes reagen VP1 dan 1 tetes VP2 pada masing – masing sumuran VP dan NIN
 2 tetes reagen VP1 dan 1 tetes VP2 pada sumuran HIP
  1 tetes zym A dan 1 tetes zym B masing – masing pada sumuran PYRA; α Gal; β
GAL; β GUR; PAL dan LAP
- Ditunggu hingga warna berubah (untuk waktu perubahan tes enzimatik sekitar 10 menit,
sedangkan perubahan warna untuk tes fermentasi sekitar 24 jam)
- Dicocokkan dengan software API-web dan diberi skor sesuai dengan perubahan warna
- Jumlah skor dibaca dengan Analitical Profile Index Software (consultBio Merieux)
- Untuk kontrol positif digunakan S.mutans ATTC 25175 dari stok
PEMBACAAN HASIL :
Hasil tes enzimatik dan tes fermentasi dari S.mutans yang menunjukkan perubahan warna
(positif) adalah pada : Bahan enzimatik : VP; ESC; A GAL dan LAP, sedangkan pada bahan
gula – gula yang menunjukkan reaksi positif adalah : MAN; SOR; LAC; TRE; INU; RAF; dan
AMD

Keterangan :
 Perangkat API strep 20 terdiri dari 10 susunan untuk tes enzimatik dan 10 sumuran untuk
tes fermentasi
 Singkatan untuk initial bahan enzim:
- VP = sodium piruvat
- HP = hippuric acid
- ESC = esculin
- PYRA = pyroglutamic acid
- α GAL = 6-Bromo-2-naphtyl-α D-galactopyranoside
- β GUR = napthol ASBI glucoronic acid
- β GAL = 2-naphtyl b D-galactopyraniside
- PAL = 2-naphthyl phosphate
- LAP = L-leucine β-naphtylamide
- ADH = L-arginine

 Singkatan untuk initial bahan gula – gula:

- RIB = D-ribosa
- ARA = L-arabinosa
- MAN = D-manitol
- SOR = D-sorbitol
- LAC = D-lactose
-TRE = D-trehalose
-INU = inulin
- RAF = D-raffinose
- AMD = starch (2)
- GLYG = glycogen

RAPID STR :
Hasil karakterisasi dengan API STREP 20 yang menunjukkan bakteri S.mutans:

Identifikasi S.mutans dengan API STREP 20 menunjukkan perubahan warna positif pada uji
enzimatis dan uji gula : VP, ESC, α GAL, LAP, MAN, SOR, LAC, TRE, INU, RAF dan AMD

LAPORAN DAN PEMBAHASAN