Pengembangan Metode TLC dan HPTLC untuk Penentuan α Mangostin

pada Kulit Manggis (Garcinia Mangostana L.,)

ABSTRAK
Tujuan: Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui estimasi jumlah α-mangostin di
pericarp buah Garcinia mangostana L dengan metode TLC dan HPTLC.
Metode: Penentuan α-mangostin dilakukan pada 5 sampel kulit manggis yaitu ekstrak etil
asetat, ekstrak etanol, fraksi etil asetat, fraksi n-hexane, dan residu. Penentuan dilakukan
menggunakan metode Kromatografi Layar Tipis (TLC) pada 5 sampel. Kemudian sampel
dengan kadar α-mangostin tertinggi diuji dengan Kromatogtafi Layar Tipis Kinerja Tinggi
(HPTLC).
Hasil: Jumlah α-mangostin yang diuji dengan metode TLC pada fraksi etil asetat, ekstrak etil
asetat, ekstrak etanol, fraksi n-heksan, dan residu adalah 33,61; 10,25; 8,73; 7,72; 7,50%. Dan
perbandingan jumlah α-mangostin standar dan fraksi etil asetan dengan metode HPTLC
adalah 97,59; 34,17%.
Kesimpulan: Hasil penelitian ini menunjukan kadar α-mangostin tertinggi yang diuji adalah
sampel fraksi etil asetat.
Kata kunci: Garcinia mangostana L, α-mangostin, HPTLC, TLC.

PENDAHULUAN
Garcinia mangostana Linn atau manggis merupakan tanaman tradisional yang banyak
ditemukan di Asia Tenggara seperti Indonesia, Malaysia, Filipina, dan Thailand. Tanaman ini
digunakan untuk obat maupun kosmetik. Ekstrak kulit manggis telah digunakan sebagai obat
tradisional untuk pengobatan sakit perut, diare, disentri, infeksi, dan maag kronis. Dilaporkan
bahwa senyawa fenolik seperti tanin, flavonoid, dan xanthone teridentifikasi pada ekstrak
kulit manggis. Xanthone adalah metabolit sekunder utama dari suatu tumbuhan. Pohon
manggis telah dibudidayakan di daerah tropis di seluruh dunia. Pohon ini berasal dari Asia
Tenggara, terutama di Indonesia, Myanmar, Thailand, Vietnam, dan Malaka. Pohon manggis
dapat tumbuh di dataran rendah dengan ketinggian dibawah 541.000 m dpl. Pertumbuhan
terbaik dicapai pada daerah dengan ketinggian 500-600 m di bawah permukaan laut. Sentra
penanaman pohon manggis dapat ditemukan pada Kalimantan Timur, Kalimantan Tengah,
Jawa Barat (Jasinga, Ciamis, Wanayasa), Sumatera Barat, Sumatera Utara, Riau, Jawa Timur
dan Sulawesi Utara. Sentra produksi manggis di Pulau Jawa antara lain Bogor, Subang,
Purwakarta, Sukabumi, Cilacap, Banjarnegara, Purworejo, Banyuwangi, Terri, dan Blitar.
Garcinia mangostana adalah nama ilmiah dari buah manggis dengan diameter keseluruhan
2,4-7,5cm, ketebalan kulit 0,6-1cm dengan pigmen berwarna ungu. Garcinia mangostana
merupakan buah tropis yang dikenal dengan nama Superfruits karena memiliki karakteristik
rasa, bau, penampilan, dan kualitas yang kaya nutrisi antioksidan. Kulit manggis telah
digunakan secara luas dalam pengobatan tradisional selama bertahun-tahun. Kulit manggis
menghasilkan getah kuning yang kaya akan xanthone. Priya dkk, melaporkan  kandungan
yang terdapat pada ekstrak kulit manggis terdiri dari 95% xanthone, isoflavon, tanin dan
flavonoid. Xanthone, vitamin C, fenolik dan antosianin yang terkandung dalam kulit manggis
merupakan antioksidan yang dapat mencegah penuaan kulit dini. .Xanthone adalah senyawa
polifenol dengan struktur kimia yang mengandung trisiklik aromatik. Struktur tersebut
mempunyai aktivitas biologis seperti antioksidan, antinflamasi, antibakteri, dan antikanker.
Kulit manggis telah digunakan dalam pengobatan tradisional untuk pengobatan infeksi kulit,
luka, disentri, dan diare. TLC dan HPTLC adalah dua teknik modern yang dapat digunakan
untuk pemisahan molekul dan analisis kuantitatif.

BAHAN DAN METODE

Reagen dan bahan kimia
Bahan utama yang digunakan dalam penelitian ini adalah kulit manggis yang diperoleh dari
Kaligesing, Kabupaten Purworejo, Provinsi Jawa Tengah. Standar kualitas HPTLC α-
mangostin (Sigma), kemurnian 98%, methanol (Merck), ethyl acetate (Merck), Chloroform
(Merck), n-hexane (Bratachem), silica gel F254 (Merck), HPTLC plate (Merck ). 
Instrumen dan Kondisi Kromatografi
Aplikasi pada sampel menggunakan instrumen CAMAG Linomat 5. Dengan kondisi
kromatografi yang telah disesuaikan sebagai berikut : Deteksi dengan CAMAG TLC Scanner
3. Panjang gelombang 254, lampu D2 & W, remisi jenis pengukuran, pengukuran mode
absorpsi, filter optik urutan kedua. Mode detektor: otomatis. PM tegangan tinggi: 301 V.
Persiapan Kulit Manggis 
Buah manggis segar yang ditanam di Jawa Tengah Indonesia. Buah yang matang sempurna
(kulit ungu tua) dipilih untuk penelitian. Potongan kulit buah digiling dan dikeringkan dalam
oven pada suhu 40 ± 0,5 ºC.
Pembuatan Ekstrak Tumbuhan 

500 g serbuk kulit manggis diambil dalam lima bidal ekstraksi yang berbeda dan diekstraksi
secara maserasi selama 72 jam menggunakan etanol 70%, etil asetat. Sampel yang telah
diambil diuapkan dengan waterbath hingga menjadi ekstrak yang kental.

Pembuatan Fraksi Tanaman 

Beberapa ekstrak etanol terkondensasi dipartisi dengan n heksana untuk mendapatkan fraksi
dan residu larut n-heksana. Kemudian residu ditambahkan dengan etil asetat untuk
mendapatkan fraksi dan residu etil asetat. Selanjutnya fraksi larut n-heksana, fraksi etil asetat,
dan residu yang telah diekstraksi dikumpulkan dan dipekatkan dengan rotary evaporator dan
waterbath pada suhu 40 ± 0,5 ° C untuk mendapatkan fraksi kental.

Persiapan α-mangostin standar dan Kurva Kalibrasi 

Satu mg α-mangostin standar dilarutkan dalam 10 ml metanol dalam labu ukur dan disonikasi
selama 5 menit untuk homogenisasi sepenuhnya. Kurva kalibrasi diplotkan antara 1 µl sampai
5 µl spot -1. 
Preparasi Plat TLC dan Plat HPTLC 

Plat TLC diaktivasi dengan cara dimasukkan ke dalam oven pada suhu 110 ºC selama 20
menit. Plat telah terisi dengan sampel uji dan standar, dengan jarak pemasangan 8 mm dari
tepi plat TLC. Ini dikembangkan hingga 75 mm di twin trough chamber (chamber dengan dua
kompartemen tempat eluen) menggunakan fase gerak, kemudian dikeringkan didalam oven
dan dilakukan pemindaian TLC dengan panjang gelombang 200-400 nm. 

Analisis kromatografi 

TLC dilakukan pada silika gel F254 (60 F254, E.Merck, Jerman, 20.0 x 10.0 cm). 5μl larutan
standar dan sampel terlihat pada pelat TLC menggunakan linomat 5 (Camag). Plat TLC
ditempatkan ke dalam bejana yang telah jenuh dengan campuran kloroform: etil asetat (85:
15). bejana ditutup dan dibiarkan bercampur dengan fase gerak hingga mencapai batas atas.
Plat TLC distabilkan dengan meletakkannya pada suhu ruangan selama 30 menit kemudian di
scan menggunakan TLC scanner Camag dengan software winCATS. 

Penentuan Senyawa Aktif Menggunakan Metode Densitometri TLC 

Persediaan larutan sampel dan α-mangostin standar disiapkan. α-mangostin standar dengan
konsentrasi 1 mg / 10 ml. Disiapkan larutan standar dengan volume 1 µl, 2 µl, 3 µl, 4 µl, dan
5 µl dan sampel ditotolkan pada plat TLC menggunakan linomat 5 (Camag).

Penentuan Senyawa Aktif Menggunakan Metode Densitometri HPTLC

HPTLC menggunakan plat alumunium (60 F254). Fase gerak kloform: methanol (85:15
v/v) digunakan. Plat dipanaskan dengan suhu 110 °c selama 10 menit. Plat HPTLC telah
distabilkan dengan suhu ruangan selama 30 menit dan kemudian diobservasi menggunakan
camag TLC scanner pada panjang gelombang 200-400nm.

Linearitas  

Untuk evaluasi linieritas lima larutan standar yang berbeda dari α-mangostin. 1 mg α-
mangostin standar dilarutkan dalam 10 ml metanol. Dari larutan stok ini, 1-5 µl terlihat
sebagai tikungan tajam pada pelat KLT yang telah dilapisi. Pelat dikembangkan di dalam
ruangan, sebelumnya dijenuhkan selama 10 menit dengan fase gerak. Plat dikeluarkan dari
ruangan dan dikeringkan di udara panas.  

Presisi dan Akurasi 

Presisi ditentukan dengan menganalisis α mangostin standar pada konsentrasi 5 µl / spot

sebanyak 6 kali. Presisi digunakan untuk mempelajari variabilitas metode. Keakuratan
metode dipelajari dengan menggunakan metode penambahan standar. 
HASIL DAN PEMBAHASAN
Perkembangan Ekstrak dan Fraksi 
Menurut penelitian, untuk mendapatkan kapasitas antioksidan yang tinggi dari ekstrak kulit
manggis perlu diperhatikan cara penyiapan bahan baku dan kondisi ekstraksi. Studi tersebut
mengungkapkan bahwa kulit manggis yang dikeringkan menghasilkan kapasitas antioksidan
yang lebih tinggi daripada kulit segar. Jumlah etanol yang sesuai untuk ekstraksi adalah 6 kali
kulit manggis dengan 12 jam pengikatan. Dalam banyak penelitian, ekstrak manggis
disiapkan dari kulit kering dengan ekstraksi pelarut. Telah ditinjau, bahwa proses
pengeringan berpengaruh berbeda terhadap kandungan polifenol dan kapasitas antioksidan
berbagai bahan tanaman. Pelarut rasio bahan dan waktu Penghubungan juga tercatat sebagai
parameter pengolahan penting untuk ekstraksi tanaman. Optimasi fase gerak seperti n-
heksana-etil asetat, kloroform: metanol, kloroform: etil asetat dicoba untuk pemisahan dan
kami memilih Kloroform: Etil asetat (85:15) (Gambar 2).

Gambar 2: Elusi sampel dan ko-kromatografi standar α-mangostin menggunakan kloroform:

etil asetat (85:15) v / v pada silika gel F254 (a) identifikasi dengan identifikasi UV254 (b)
dengan UV366.
Verifikasi Metode  

Analisis kuantitatif TLC dilakukan dengan menggunakan standar, ekstrak, dan fraksi pada
fase gerak terpilih dan spektrumnya dipindai, yang secara jelas menunjukkan λmax. Pada 317
nm dengan data kemurnian puncak yang memuaskan. Pemisahan kromatografi α-mangostin
(Rf = 0,55). RSD ditemukan kurang dari 2%. Hubungan linier antara luas puncak dan
konsentrasi α-manggis diamati dalam menentukan kisaran  0,1-0,5 µg / mL tetapi linieritas
yang baik diperoleh dari 0,2- 0,5 µg / mL. Persamaan kurva regresi linier yang diperoleh
adalah Y-mX + C, dengan koefisien korelasi (r) = 0,9897. Presisi digunakan untuk
mempelajari variabilitas metode. RSD masing-masing 1,11%, dan pemulihan 91,95-105,3%
(tabel 1).
Tabel 1: Ringkasan parameter validasi untuk standar α mangostin. 

Penentuan Senyawa Aktif Menggunakan Metode Densitometri TLC 

Penentuan dengan menggunakan kombinasi metode densitometri TLC cukup ekonomis

karena menggunakan fase gerak yang lebih sedikit, memakan waktu yang relatif singkat dan
dilakukan pengujian secara bersamaan. TLC juga dapat menyelidiki sampel, Rf, nilai dan titik
utama. Larutan sampel dan standar α-manggis diberi titik 5 µl pada plat TLC dengan berbagai
konsentrasi. Hasil TLC ada dalam (Gambar 5). Hasil analisis TLC kuantitatif (tabel 2)
menunjukkan bahwa fraksi etil asetat mencapai α-mangostin tertinggi. Urutan penurunan
perolehan kembali α-mangostin adalah: Fraksi etil asetat> Ekstrak etil asetat> Ekstrak etanol>
n-heksana> Residu. Berdasarkan data densitometri, rerata konsentrasi sampel yang terdeteksi
adalah 7,50-33,61%.

(a) (b)
Gambar 5: Elusi standar α-mangostin dan sampel menggunakan kloroform: etil asetat (85:15)
v / v pada silika gel F254 (a) identifikasi dengan UV254 (b) identifikasi dengan UV366.

Penentuan Senyawa Aktif Menggunakan Metode Densitometri HPTLC 

Penelitian yang dilakukan oleh Misra et al pada tahun 2009 menentukan kadar α-mangostin
pada kulit manggis dengan metode HPTLC. Hasil penelitian menunjukkan bahwa rata-rata
kandungan α-manggis paling banyak digunakan pada ekstraksi dengan pelarut metanol>
kloroform> etanol> aseton> etil asetat. Demikian pula pada penelitian lain analisis kuantitatif
α-mangostin dalam ekstrak kulit buah manggis dan preparat mikropartikelnya dengan metode
HPLC, didapatkan jumlah α-mangostin 49,60% untuk diklorometana, 14,13% untuk etanol
95%, 13,17% untuk ekstrak etanol 50%, dan ekstrak diklorometana mengandung α-mangostin
dengan jumlah yang signifikan. 
HPTLC adalah salah satu teknik modern yang dapat digunakan untuk berbagai aplikasi. Ini
adalah alat yang sederhana dan kuat untuk kromatografi resolusi tinggi dan memungkinkan
analisis jejak kuantitatif. Ini paling banyak digunakan untuk penentuan kualitas, keaslian, dan
kemurnian obat mentah dan formulasi pasar dengan cepat dan mudah. HPTLC adalah metode
sederhana, cepat dan andal yang telah dikembangkan untuk estimasi sampelsecara bersamaan.
Berdasarkan uji α-mangostin dengan metode TLC menunjukkan bahwa fraksi etil asetat
memiliki konsentrasi α-mangostin tertinggi dibandingkan semua sampel lain yang diuji diikuti
oleh HPTLC. Hasil analisis kromatografi lapis tipis (HPTLC) kinerja tinggi menunjukkan
bahwa mangostin α standar memiliki senyawa aktif yang lebih tinggi daripada fraksi etil
asetat. Berdasarkan data didapatkan konsentrasi rata-rata fraksi α-mangostin dan etil asetat
standar yang terdeteksi adalah 97,59; 34,17% b / b.

KESIMPULAN 

Metode TLC yang dikembangkan memiliki presisi yang tepat dan akurat berdasarkan
parameter verifikasi yang ditentukan. Skrining ekstraksi dan fraksi pelarut yang berbeda
terhadap α mangostin menunjukkan fraksi etil asetat sebagai pilihan pelarut untuk
pengembangan analitik serta pengembangan industri berbasis tanaman di masa depan. Hasil
analisis HPTLC menunjukkan bahwa α-mangostin standar memiliki senyawa aktif yang lebih
tinggi dibandingkan fraksi etil asetat pada kulit manggis.