Bahan Ajar Biotek

STRUKTUR GEN
DAN
FUNGSINYA
Dr. Jumsu Trisno; Jur. HPT Faperta Unand

Gradien perkembangan bioteknologi (Doyle dan
Presley, 1996 dimodifikasi Gunadi 2003)
Peningkatan biaya
Bioteknologi moderen
Genomik
Rekayasa genetika hewan
Rekayasa genetika tanaman
Rekayasa genetika mikroba
DNA Rekombinan
Produksi antibodi monoklonal
Transfer embrio pada hewan
Kultur jaringan
Pengendalian hayati
Pupuk hayati
Biodekomposer
Fermentasi mikroba
Bioteknologi tradisional
Peningkatan efisiensi

Tabel 1.1. Perkembangan bioteknologi tanaman sejak
abad ke 20 (Chawla, 2002, dimodifikasi)
No. Tahun Invensi Inventor
1. 1902 Percobaan pertama kultur jaringan Haberlandt
2. 1904 Percobaan kultur embrio tanaman kubis-kubisan Hannig

(Cruciferae)
3. 1922 a. Perkecambahan asimbiotik benih anggrek secara in Knudson
vitro
b. Kultur ujung akar secara in vitro Robbins
4. 1925 Penggunaan teknik kultur embrio dalam persilangan Laibach
interspesifik tanaman Linum
5. 1934 a. Kultur in vitro jaringan kambium beberapa jenis pohon Gautheret
dan perdu, meskipun gagal dalam pembelahan sel yang
berkelanjutan
b. Keberhasilan kultur akar tomat White
6. 1939 Keberhasilan penumbuhan kultur kalus Gautheret,
Nobecourt,
and White
7. 1940 Kultur in vitro jaringan kambium Ulmus untuk mempelajari Gautheret
pembetukan pucuk tambahan
8. 1941 a. Penggunaan air kelapa pertama kali yang van Overbeek

mengandung faktor pembelahan sel pada Datura Braun
b. Kultur in vitro jaringan crown gall
9. 1944 Pembentukan akar tambahan tanaman Skoog
tembakau secara in vitro
10. 1946 Pembentukan tanaman Lupinus dan Ball

Tropaeolum melalui kultur ujung akar
11. 1950 Regenerasi organ dari jaringan kalus Sequoia Ball

sempervirens
12. 1952 a. Penggunaan kultur meristem untuk Morel dan Martin

memperoleh tanaman dahlia bebas virus
b. Aplikasi pertama cangkokan mikro
(micrografting)
13. 1953 Produksi kalus haploid tanaman gymnospermae Tulecke
Ginkgo biloba dari serbuk sari (polen)
14. 1954 Tanaman pertama dari sel tunggal Muir et al

15. 1955 Penemuan kinetin sebagai hormon pembelahan Miller et al.
sel
16. 1957 Penemuan pengatur pembentukan organ melalui Skoog dan Miller
prubahan perbandingan auksin : sitokinin
17, 1958 Regenerasi embrio somatik nucellus dari ovul Maneshwari dan
Citrus secara in vitro Rangas-wamy
18. 1959 a. Regenerasi embrio dari gumpalan kalus dan Reinert, Steward
suspensi sel wortel (Daucus carota)
b. Publikasi pertama buku panduan mengenai
kultur jaringan tanaman
19. 1960 a. Keberhasilan pertama fertilisasi Ppapaver rhoeas Kanta
dalam test tube Jones et al.
b. Penggunaan metoda mikrokultur untuk Cocking
menumbuhkan sel tunggal dalam tetesan bergantung Bergmann
(hanging drops) dalam medium yang terkondisi
c. Perombakan dinding sel secara enzimatik untuk
memperoleh protoplas dalam jumlah banyak
d. Filtrasi suspensi sel dan isolasi sel tunggal
melalui cawan tuang (plating)
20. 1962 Pengembangan medium nutrisi Murashige dan Murashige dan
Skoog Skoog
21. 1968 Meslson dan Yuan Meslson dan Yuan
22. 1970 a. Seleksi mutan biokimia secara in vitro melalui Carlson

penggunaan kutur jaringan yang menghasilkan Power et al.
keragaman Smith
b. Keberhasilan pertama fusi protoplas
c. Penemuan pertama endonuklease restriksi dari
Haemophillus influenzae Rd., kemudian dimurnikan
dan dinamakan HindII
23. 1971 a. Penyiapan peta restriksi pertama menggunakan Nathans

enzim HindII untuk memotong DNA sirkular dari SV 40 Takebe et al.
menjadi 11 fragmen yang spesifik
b. Regenerasi tanaman pertama dari protoplas
24. 1972 a. Laporan pertama mengenai hibridisasi interspesifik melalui Carlson
fusi protoplas dalam 2 spesies Nicotiana
b. Molekul DNA rekombinan pertama pertama menggunakan Berg et al.
enzim restriksi
c. Penggabungan 2 fragmen restriksi tanpa Mertz dan Davis
mempertimbangkan asalnya yang dihasilkan melalui aksi DNA
ligase
d. Pengembangan prosedur enzim yang cocok dapat Lobban dan Kaiser
ditambahkan untuk mengisi kesenjangan dalam beberapa DNA
untai tunggal dan penggunaan DNA ligase untuk
menggabungkan 2 fragmen sehingga menghasilkan DNA
rekombinan
e. Penemuan enzim reverse transkriptase (bolak balik): Temin
penentuan virus hewan penyebab kanker, alur informasi
genetik dalam bentuk bolak balik (reverse)
25. 1973 a. Penggunaan teknik Lobban dan Kaiser untuk Herbert Boyer dan Stanley
pengembangan plasmid hibrid – insersi fragnen molekul DNA Cohen
EcoRl ke dalam DNA plasmid sirkular dari bakteri
menggunakan enzim DNA ligase. Gen dari penyu Afrika
diselipkan ke dalam DNA plasmid bakteri
b. Sitokinin ditemukan mampu memecah dormansi
menggunakan eksplan capitulum dari Gerbera Pierik et al.
26. 1978 Hibridisasi somatik dari tomat dan kentang Melchers et al.
menghasilkan pomato
27. 1979 Pengembangan prosedur kokultivasi untuk transformasi Marton et al

protoplas tanaman dengan Agrobacterium
28. 1980 a. Pengembangan teknik restriction fragment length Eli Lily and Co
polymorphism (RFLP)
b. Studi mengenai struktur T-DNA melalui pengklonan Zambryski et al.
complete EcoRl digest dari DNA crown gall pada
tembakau dalam vektor-fag, sehingga memungkinkan
isolasi dan kajian rinci T-DNA border sequences
29. 1981 Introduksi istilah variasi somaklonal Larkin dan Scowcroft
30. 1982 Inkorporasi dari naked DNA oleh protoplas Krens et al.
menghasilkan transformasi dengan isolated DNA
31 1983 Polymerase chain Reaction (PCR) merupakan ide Kary Mullis

dari suatu proses amplifikasi DNA kimia
32. 1864 a.Transformasi tembakau dengan Agrobacterium, De Block et al.,
pengembangan tanaman transgenik Horsch et al.
b. Pengembangan teknik sidik jari genetik (finger
printing) untuk mengidentifikasi individu melalui Jeffreys
analisis polymorphism pada tingkat sekuens DNA
33. 1986 Pengembangan tanaman tembakau dan tomat Powell-Abel et al
transgenik cDNA dari gen mantel protein dari TMV
34. 1987 a. Pengembangan metoda pemindahan gen biolistik Sanford et al., Klein et
untuk transformasi tanaman al.
b. Isolasi gen Bt dari bakteri Bacillus thuringiensis Barton et al
35. 1990 Pengembangan teknik random amplified Welsh and
polymorphic DNA (RAPD) McClelland
36 1991 Pengembangan sistim microarray DNA Fodor

menggunakan cahaya langsung sistim sintesis kimia
37. 1995 a. Pelaporan oleh Institut for Genome Research Fleischmann et al.
mengenai gugus (sequence) DNA dari Haemophilus
influenzae
b. Pengembangan sidik jari (fingerprinting) DNA Vos et al.
melalui teknik amplified length polymorphism
(AFLP)
38. 1997 Penggugusan (Sequencing) genom E. coli Blattner et al
39 1998 Penggugusan (Sequencing) genom organisme Sequencing

multiseluler (Caenorhabditis elegans) Consortium C.
elegans

Dasar-Dasar Bioteknologi Untuk Pemuliaan Tanaman
Potensi Bioteknologi dalam Bidang Pertanian

1. Memberikan efisiensi produksi yang lebih tinggi
2. Pengurangan pencemaran lingkungan
3. Diperolehnya tanaman yang lebih adaptif pada kondisi

lingkungan marjinal
4. Peningkatan kualitas produk pertanian
5. Menjadikan tanaman sebagai pengganti sumber energi

dan bahan baku alternatif
6. Memperoleh tanaman tahan hama dan penyakit tumbuhan

7. Mendapatkan dan meningkatkan kemampuan biopestisida
8. Mendapatkan pupuk-pupuk hayati

Keuntungan potensial bioteknologi pertanian
Menurut Jones (2003)
• mengurangi penggunaan pupuk dan
pestisida sintetik,
• toleran terhadap cekaman lingkungan,
• pemanfaatan lahan marjinal,
• identifikasi dan eliminasi penyakit di dalam
makanan ternak,
• kualitas makanan dan gizi yang lebih baik
dan
• perbaikan defisiensi mikronutrien
Peningkatan kualitas tanaman
melalui bioteknologi
Menurut Huttner (2003 dimodifikasi)
• kualitas pangan,
• resistensi terhadap hama atau
penyakit,
• toleransi terhadap cekaman lingkungan
(kekeringan, kemasaman tanah, kadar
Al-dd)
• dan pengelolaan budidaya (gulma,
naungan)
GEN
Unit molekul DNA atau RNA dengan panjang minimum
tertentu yang membawa informasi mengenai urutan
asam amino yang lengkap suatu protein.

STRUKTUR HALUS MATERI GENETIK
Panjang rata-rata sebuah

gen ~ 1,2 kb
< 1 kb = 1000 bp
> 32 kb = 10.000 bp
Prokaryot: tidak mengandung intron

Eukaryot : Mengandung Intron
Dr. Jamsari, Prog. Studi Dr.

Pemuliaan Tanaman
Jumsu Trisno; Jurusan
Jur. BDP-FPUA
HPT Faperta Unand
DNA RNA PROTEIN
transkripsi translasi
replikasi replikasi
Struktur lengkap Gen:

1. Promotor: pengatur proses ekspresi genetik
2. Struktural (coding rgion): bagian yang membawa kode genetik
3. Terminator: penghentian transkripsi

2. Struktur Halus Materi Genetik
Gen A
Exon Intron Exon Intron Exon
5‘ 5‘
3‘
E P Sekuens DNA
3‘
Titik start Titik stop
Transkripsi
m-RNA sementara
Pemisahan intron
Nukleus m-RNA matang
Translasi
Protein
Sitoplasma
Dr. Jamsari, Prog. Studi

Dr.Pemuliaan Tanaman
Jumsu Trisno; Jurusan
Jur. HPT BDP-FPUA
Faperta Unand
Identifikasi Penyakit Virus
(Berdasarkan Karakter Molekuler)
Dr. Jumsu Trisno; Jur. HPT Faperta

Unand
Unand
Unand
Unand
I. Identifikasi dan karakterisasi patogen : VIRUS
1. Isolasi DNA
 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6
A B
2. Amplifikasi PCR
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 M 1 2 3 4 5 6
1600 bp 1500 bp
1000 bp
500 bp 560 bp
250 bp

Unand
Primer yang digunakan adalah:
1). PAL1v 1978 (5’-GCATCTGCAGGCCCACATYGTCTTYCCNGT-3’) dan
PAR1c 715 (5’-GATTTCTGCAGTTDATRTTYTCRTCCATCCA-3’) yang
dirancang untuk mengamplifikasi gen yang menyandikan protein untuk
replikasi, common region dan protein selubung.
2). PAV494 [5’-GCC(C/T)AT(G/A)TA(T/C)AG(A/G) AAGCC(A/C)AG-3’] dan
PAC1048 [GG(A/G)TT(A/G/T)GA(G/A)GCATG (T/A/C)GTACATG-3’] yang
didesain untuk mengamplifikasi target gen coat protein (CP) dari
kelompok geminivirus (Wyatt dan Brown, 1996).

Unand
Unand
Sekuensing
>PYK 1
GAATTATATATGTATGGGATGGACGAAAGATCAACTGCGGAGATCAGCGG
CTTCCTTCACATTTTCACTAGCCCATTGTCGTAGTTCCTCTGGAACTTGG
TCAAACGACGACGACGGATATGGTGAAGCAAATGTATCTACAGGTTTAGC
AAATATTTTATCGAAATTAACACTTAAATTGTGGTACTGTAGAACGTAGT
CTTTTGGAGCAAGCTCTTTAATCAATTGAAGAGCATCGGACTTACTTCCA
CAATTTAGGGCCTGCGCGTAAACATCGTTTACGGCGTGCTGACCACCTCG
TGCAGATCGGCCATCTATCTGAAATTCTCCCCATTCGGTGGTATCACCGT
CTTTGTCCATGTACGCCTTGACATCGGAACTTGATTTAGCTCCCTGAATG
TTCGGATGGAAATGTGCTGACCTGGTTGGGGATACCAGGTCGAAGAATCT
GTTGTTCGTGCAGACGTATTTCCCTTCGAATTGTATGAGCACATGGAGAT
GAGGGCTCCCATCTTCGTGAAGTTCTCTACAGATCTTGACAAACAGCTTG
TTGACAGGAGTGATGAGGGATTTTAATTGTTCGAGGGCCTCTTCTTTGGT
TAGAGAACAATGTGGGGTATGTTAAGAAATAGTTTTTGCTCTGTAACTTA
AAACGACGTGGGGGGAGGCATTTGGAGTGTCGTTTTGTATTGGAGACAAT
CACTTCTATCCCTATGTATTGGAGACAGGAGACAATATATATAACTCCTA
TATGGGCCTTACTACTTATTGGGCCTATCCCCGGGGTAAAGCGGCACTCG
TATAATATTACCGAGTGCCGCGAAAAATTTTTGAGAAGGGGGGCCCAGAA
ACCAAAACTTTGGACTGACCAATCCCGTTGGCATCTCCAAAGCTTAAANT
TATGGGGGCGCCCAATTAAAAAGAAAAGGGGACCACCCCTCCCCCT

Unand
A–T T
T A A T A A A–T
A A A A A T A A
A T T T T T A T
A T A A
T T A T T T T T
A A T A A A T C A A
Karakterisasi T C T C T C G–C T C
G–C G–C G–C C–G G–C
Common Region C–G
T–A
C–G
T–A
C–G T–A C–G
T–A
T–A C–G
C–G C–G C–G A–T C–G
A–T A–T C–G C–G C–G
C–G C–G G–C G–C C–G
G–C G–C G–C G–C G–C
1: PYK1, Ag2-1, Ag2-4, G–C G–C 5’-C – G-3’ C–G G–C
PYLCIV C–G C–G G–C 5’-C – G-3’
5’-G – C-3’ 5’-G – C-3’ 5’-C – G-3’
2: So2-1; 3: So3-5 1 2 3 4 5
4: TD1-3; 5: TD2-1
6: PSS1-1; 7:PSS2-3 T T
A A A A
T A A T
T A T T T
8: PSBT1 ; 9: Ag 1-4 A A A–T C T A A
A T A A
T T A T C–G T C
A A T T C–G
A A G–C
T C C–G
T C C–G
G–C G–C C–G T–A
C–G C–G T–A C–G
T–A T–A G–C A–T
C–G C–G T–A C–G
A–T A–T T–A G–C
C–G C–G C–G G–C
G–C G–C T–A C–G
G–C G–C T–A G–C
5’-G – C-3’ 5’-G – C-3’ 5’-G – C-3’ 5’-G – C-3’
6 7 8 9
Gambar 6: Hairpin loop region Geminivirus Isolat Sumatera Barat

Unand
A T T
A–T A A A A
A A T T A T A T
A T A T T T T T
T T A A A A
A A A A T C T C
T C T C
G–C G–C G–C G–C
C–G C–G C–G C–G
T–A T–A T–A T–A
C–G T–A C–G C–G
A–T A–T A–T A–T
C–G C–G C–G C–G
G–C C–G G–C G–C
5’-G – C-3’ G–C C–G C–G
C–G G–C 5’-G – C-3’
5’-G – C-3’ 5’-C – G-3’
(a) (b) (a) (b)
PSS TD
T
T A A T- A
A A T- A A T A T
A T A T T T T T
T T T T A A A A
A A A A T C T C
T C T C
G–C G–C
G–C G–C C–G C–G
C–G C–G T–A T–A
T–A T–A C–G C–G
C–G C–G A–T A–T
A–T A–T C–G C–G
C–G C–G G–C G–C
G–C G–C C–G C–G
C–G C–G 5’-G – C-3’ 5’-G – C-3’
G–C 5’-G – C-3’
5’-G – C-3’ (a) (b)
(a) AG (b) PYK
Unand
Tabel 3. Perbandingan iteron gen C1 dari 11 isolat geminivirus Sumatera Barat dengan
PepYLCIDV dan ToLCIDV
Isolat Iteron (5’ – 3’) Posisi*

PepYLCIDV1) GGAGACA -86 s/d -80, -93 s/d-87, -122 s/d-116
ToLCIDV1) GGAGACA -134 s/d -128, -196 s/d -190
TLCJAV1) GGGTCTCAA -102 s/d -94, -137 s/d -129
Isolat musim tanam 2007
PYK1 GGAGACA -82 s/d -76, -89 s/d-83, -118 s/d-112
So2-1 GGAGACA -89 s/d -83, -97 s/d-91, -125 s/d-119
So3-5 GGAGACA -84 s/d -78, -91 s/d-85, -119 s/d-113
TD1-3 GGAGACA -87 s/d -81, -94 s/d-88, -123 s/d-117
TD2-1 GGAGACA -83 s/d -77, -90 s/d-84, -117 s/d-111
PSS1-1 GGAGACA -88 s/d -82, -95 s/d-89, -122 s/d-116
PSS2-3 GGAGACA -85 s/d -79, -93 s/d-87, -121 s/d-115
PBST2-3 GGAGACA -125 s/d -119
Ag1-4 GGAGACA -90 s/d -84, -97 s/d-91, -125 s/d-119
Ag2-1, Ag2-4 GGAGACA -89 s/d -83, -96 s/d-90, -124 s/d-118
Isolat musim tanam 2008
PSS1-1(08) GGCGTC -99 s/d -94, -106 s/d -101, -133 s/d -128
TD1-2(08) GGAGACA -85 s/d -80, -92 s/d -86, -119 s/d -114
Ag1-3(08) GGAGACA -85 s/d -80, -92 s/d -86, -119 s/d -114
PYK1-1(08) Dr. Jumsu Trisno;-88
GGAGACA Jur.
s/dHPT Faperta
-82, -95 s/d 89, -125 s/d -119
Unand
Sequence Characterization of Begomoviruses
PBST2-3 GGTATTGGGAGACAATCCCTTCTTGTCCCCCATATAATTGGGGACAAGAAGACCACGATT 767

AG2-4 -GTAT-AGGAGACAATCCTTCTAT---CCCCATATA--TGGGAGACAGGAGACAA----T 743
PYK1 -GTAT-TGGAGACAATCACTTCTA--TCCCTATGTA-TTGGAGAC-AGGAGACAA----- 735
TD2-1 -GTAT-TGGAGACA-TCCTTCTAT---CCCCATATATTGG-AGACAGG-AGACA-----T 730
PSS2-3 -GTAT-TGGAGACAATCCTTCTAT---CCCCATATATTGG-AGACAGGGAGACAA----T 655
TD1-3 -GTAT-TGGAGACAATCCTTCTAT---CCCCATATATTGGGAGACAGG-AGACAA----T 732
PSS1-1 -GTAT-TGGAGACA-TCCTTCTAT---CCC-ATATATTGGGAGACAGG-AGACAA----T 739
AG2-1 -GTAT-TGGAGACAATCCTTCTAT---CCCCATATATTGG-AGACAGG-AGACAA----T 731
AG1-4 -GTAT-TGGAGACAATCCTTCTAT---CCCCATATATTGG-AGACAGG-AGACAA----T 730
SO3-5 -GTAT-TGGAGACAATCCTTCTAT---CCCCATATATTGG-AGACAGG-AGACA-----T 736
SO2-1 -GTAT-TGGAGACAATCCTTCTAT---CCCCATATATTGG-AGACAGGGAGACAA----T 735
PYLCVI-Co -GTAT-TGGAGACAATCACTTCTA--TCCCTATGTATTGG-AGACAGG-AGACAA----T 2673
**** ******* ** * *** ** ** * * ****
iteron iteron iteron

Unand
PBST2-3 ATTCATTCAGG-TTCTTTAAGAGGGCGTTCTAGGGAAATTTTGGTCCACCCTCTGAAAGG 826
AG2-4 ATATACATAAG-TTCTATAA--GGGCTTTCTAGGTAATTTT--GTAC-CCCCCTGGAATG 797
PYK1 -TATATATAAC-TCCTATATG-GGCCTTACTACTTA---TTGGGCCTATCCCC-----GG 784
TD2-1 ATATACTTAAG-TTCTATAA--GGGC-TTCTAGGTAATTTT---TAC-CCCCTTGAATGA 782
PSS2-3 ATATACATAAG-TTCTATAA--GGGC-TTCTAGGTAATTTT--GTAC-ACCCTTGAATGA 708
TD1-3 ATATACATAAG-TTCTATAA--GGGC-TTCTAGGTAATTTT--GTAC-ACCCTTGAATGA 785
PSS1-1 ATATACATAAG-TTCTATAA--GGGC-TTCTAGGTAATTTT--GTACCCCCCTTGAATGA 793
AG2-1 ATATACATAAG-TTCTATAAA-GGGC-TTCTAGGTAATTTTT-GTACACCCCTTGAATGA 787
AG1-4 ATATACCTAAGGTTCTATAA--GGGC-TTCTAGGTTATTTTT-GTAC-CCCCTTGAATGA 785
SO3-5 ATATACTTAGN-TTCTATAA--GGGC-TTCTAGGTAATTTT--GTAC-NCCCTTGAATGA 789
SO2-1 ATATACATAGG-TTCTATAAA-GGGC-TTCTAGGTAATTTT--GTAC-ACCCTTGAATGA 789
PYLCVI-Co ATATAGATAAG-TTCTATAA--GGGC-TTCTAGGTAATTTT--GTAC-ACCCTTGAATGA 2726
* * * * ** ** ** * * *** ** **
TATA Box
PBST2-3 AAGAAAGGGGGGCACTTCGTAATAATAATAGCCCGAGGGGCCCCGCAAAATTTTTTAGGA 886
AG2-4 ATTAAAGCGGCAC---TCGTA-TAATATTA--CCGAGTGCCGCCGAAAAATTTT----GG 847
PYK1 GGTAAAGCGGCAC---TCGTA-TAATATTA--CCGAGTG-CCGCGAAAAATTTTT---GA 834
TD2-1 TAAA--GCGGCCC---TCGTA-TAA-ATTA--CCGAGGG-CC-CGAAAATTTTGA---AA 828
PSS2-3 TTAA--AGGGCAC---TCGTA-TAA-ATTA--CCGAGTG-CC-CNAAAATTTTGA---GT 754
TD1-3 TTAAC-GCGGCAC---TCGTA-TAATATTA--CCGAGTG-CCGCGAAAAATTTTA---GA 834
PSS1-1 TAAAA-GGGGCAC---TCGTA-TAATATTA--CCGAGTG-CC-CGAAAATTTTTT---GA 841
AG2-1 TTAAA-GCGGCAC---TCGTA-TAATATTA--CCGAGTG-CCGCGAAAATTTTTG---GA 836
AG1-4 TTAAAGGCGGCAC---TCGTA-TAATATTA--CCGAGTG-CCGCCNAAAATTTTG---GA 835
SO3-5 TNAA--GCGGCCT----CGTA-TAATATTA--CCGAGG--CCGCGAAAATTTT------- 831
SO2-1 TTAAA-GCGGCAC---TCGTTATAATATTA--CCGAGTG-CCGCGAAAATTTTT----GA 838
PYLCVI-Co TTAAA-GCGGCAC---TCGTA-TAATATT------------------------------- 2750
* ** *** *** * *
Nanonucleotide
Unand
Phylogeny Analysis of Begomovirus : “Common Region”
Langkah kerja:
1. Data sekuen yang didapatkan dianalisis
2. BANDINGKAN DENGAN DATA GENE BANK: BLAST
(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST), : DIDAPAT HUBUNGAN HOMOLOGI
DNA
3. Analis kekerabatan : ClustalW (www.ebi.ac.uk), Phylip
(www.biowec.pasteur.fr/seqanal/phylogeny/philip-uk.htm),

Unand
Unand
Unand
Unand
Unand
Unand
Unand
Phylogeny Analysis of Begomovirus : “Common Region”
Group 1
Group 2
Group 3
Gambar 5. Filogenetik kekerabatan 11 isolat gemenivirus Sumatera Barat terhadap strain-

strain dari daerah dan negara lain yang ada pada GeneBank.
Unand
AYLCV-To
PYLCVI-To
Java Begomoviruses
PYLCVI-Ca
PYLCVI-Ag
TYLCV-Lbg
PBST2-3(07)
SO2-1(07)
SO3-2(07)
AG2-4(07)
West Sumatra,
AG2-1(07) Isolates 2007
AG1-4(07)
TD1-3(07)
PYK1(07)
PSS1-1(07)
TD1-2(08) West Sumatra,

Isolates 2008
AG1-3(08)
SO1-3(08)
TD2-1(07) West Sumatra,
Isolates 2007
PSS2-3(07)
PSS1-8(08) West Sumatra,

Isolates 2008
Figure 1. Phylogeny of Begomovirus isolates from West Sumatera compare to Begomovirus isolates from
Java (from GeneBank data). Number at cladogram branch showed bootstrap value in 100
replication.
Unand
PSS2-3(07)
TD2-1(07)
PYK1(07)
AG2-1(07)
AG1-4(07)
SO3-5(07) West Sumatra, Indonesia
TD1-3(07) Begomoviruses
TD1-2(08)
AG1-3(08)
SO1-3(08)
PSS1-1(07)
AG2-4(07)
SO2-1(07)
PBST2-3(07)
AYLCV-To
PYLCVI-To1 Java, Indonesia
PYLCVI-To2 Begomoviruses
PYLCVI-Co
TLCPaksV
TYLCVetA
TYLCVVit
AYLTaiV
AYLCVIsh
AYVV
TLCVJava Asian Begomoviruses
TLCVMal
AYVChiV
PLCYuV
TYLCVThaiA
TYLCVThai
TLCPhiV
PYLCMaliV
TYLCV
TYLCV
TYLCMaliV
PYLCV-Bgr
PYLCVI-Ag Java, Indonesia
PYLCV-Co Begomoviruses
TYLCV-Lbg
TYLCV-LbgA
PSS1-8(08) Painan-West Sumatra,
Indonesia Begomoviruses
Figure 2. Phylogeny of Begomovirus isolates from West Sumatera compare to Begomovirus isolates from
Indonesia and Asia (from GeneBank data). Number at cladogram branch showed bootstrap value
in 100 replication.
Unand
Unand
Karakterisasi Gen AV1 (Coat Protein): ASAM AMINO
.....+.+.+++++*+++++++.++.+++++.+*.++++++++++*+.++++*++.+++.
PYLCIV 60) GRRTSDVPRGCEGPCKVQSFEQRHDVTHTGKVLCVSDVTRGNGITHRVGKRFCVKSVYII
PYLVIV-2 60) GRRTSDVPRGCEGPCKVQSFEQRHDVTHTGKVLCVSDVTRGNGITHRVGKRFCVKSVYII
PYLCIV-3 60) GRRSSDVPRGCEGPCKVQSFEQRHDITHTGKALCVSDVTRGSGITHRVGKRFCVKSVYII
PYLCIV-to 60) GRRTSDVPRGCEGPCKVQSFEQRHDITHTGKALCVSDVTRGNGITHRVGKRFCVKSVYII
PYLCIV-4 60) GRRTSDVPRGCEGPCKVQSFEQRHDVTHTGKVLCVSDVTRGNGITHRVGKRFCVKSVYII
TYLCKAnV 60) WRRSSDVPRGCEGPCKVQSFEQRHDITHTGKVLCVSDVTRGNGITHRIGKRFCVKSVYVM
TYLCKANV1 60) WRRSSDVPRGCEGPCKVQSFEQRHDITHTGKVLCVSDVTRGNGITHRIGKRFCVKSVYVM
TYLCVTai 60) WRRSSDVPRGCEGPCEVQSFEQRHDITHTGKVLCVSDVTRGNGITHRIGKRFCVKSVYVM
AlYLCV 58) MYRSPDVPYGCEGPCKVQSFEKKHDVSHTGTLLCVSDVTRGNGITHRVGKRFCIKSIYIL
PepSO1-3(08) 10) --------AGCEGPCKVQSFEQRHDITHTGKALCVSDVTRGNGITHRVGKRFCVKSVYII
PepAg1-3(08) 60) AKFGWTKTSSRRTTLTMSCSGWFVTGDLLLRRMASESCSTCMIMNPVQQLSRTIFVIVCR
PepPYK1-9(08) 60) LDGRKHQVEEPHQCHVLVGSPATCYYAVWLRRVVQHVTQYSNYQERSSSCAGVTPFFSYS
PepPDG-III(08) 11) -------PRGCEGPCKVQSFEQRHDITHTGKALCVSDVTRGNGITHRVGKRFCVKSVYII
PepTD1-2(08) 59) LDGRKHQVEEPHQCHVLAGSPATCYYAVWLRRVVQHVTQYSNYQERSSSCAGVTPFFSYS
PepPDG-I(08) 60) AKFGWTKTSSRRTTLTMSCSGWFVTGDLLLRRMASESCSTCMIMNPVQQLSRTIFVIVCR
PepPDG-II(08) 60) AKFGWTKTSSRRTTLTMSCSGWCVTGDLLLRRMASESCSTCMIMNPVQQLSRTIFVIVCR
+++*++++.+.++*++..++*++**++++**+++*++++++++*+++*+++++++.++++
PYLCIV 120) GKVWMDENIKSKNHTNNVMFWLVRDRRPVTTPYGFGELFNMYDNEPSTATIKNDLRDRVQ
PYLVIV-2 120) GKVWMDENIKSKNHTNNVMFWLVRDRRPVTTPYGFGELFNMYDNEPSTATIKNDLRDRVQ
PYLCIV-3 120) GKVWMDENIKSKNHTNNVMFWLVRDRRPVTTPFGFGELFNMYDNEPSTATIKNDLRDRVQ
PYLCIV-to 120) GKVWMDENIKSKNHTNNVMFWLVRDRRPVTTPYCFGELFNMYDNEPSTATIKNDLRDRVQ
PYLCIV-4 120) GKVWMDENIKSKNHTNNVMFWLVRDRRPVTTPYGFGELFNMYDNEPSTATIKNDLRDRVQ
TYLCKAnV 120) GKIWMDENIKLKNHTNTVMFWLVRDRRPVTTPYGFGELFNMYDNEPSTATIKNDLRDRVQ
TYLCKANV1 120) GKIWMDENIKLKNHTNTVMFWLVRDRRPVTTPYGFGELFNMYDNEPSTATVKNDLRDRVQ
TYLCVTai 120) GKIWMDENIKLKNHTNTVMFWLVRDRRPVTTPYGFGELFNMYDNEPSTATIKNDLRDRVQ
AlYLCV 118) GKIWMDENIKSKNHTNTVMFWLVRDRRPVTTPYGFGEAFNMYDNEPSTATIKNDLRDRLQ
PepSO1-3(08) 62) GKVWMDENIKSKNHTNNVMFWLVRDRRPVTTPYGFGELFNMYDNEPSTATIKNDLRDRVQ
PepAg1-3(08) 120) CYTVFQLQSLVVSTQARNK--QSRDFLELTTML-F-IIIRKQQNMKITLKMHYCC-----PepPYK1-9(08)
120) HWWSVRKQGTSNREEIFSQLCCLSSGSSKIKSHKCIIVVYGMYSSSQTQNSALQIFSFFL
PepPDG-III(08) 64) GKVWMDENIKSKNHTNNVMFWLVRDRRPVTTPYGFGELFNMYDNEPSTATIKNDLRDRVQ
PepTD1-2(08) 119) HWWSVRKQGTSNREEIFSQLCCLSSGSSKIKSHKCIIVVYGMYSCLPTPTTIRRSPLFSF
PepPDG-I(08) 120) CYTVFQLQSLVVSTQARNK--QSRDFLELTTML-F-IIIRKQQNMKITLKMHYCCIWHVL
PepPDG-II(08) 120) CYIVFQLQSLVVSTQARNK--QSRDFLELTTML-F-IIIRKQQNMKITLKMHYCCIWHVH

Unand
Tabel 4.3. Persentase kesamaan runutan nukleotida (NT) dan Asam Amino (AA), serta distance matrices dari
gene Coat Protein (CP) isolate Padang (PYLCIV-Padang) dan tujuh isolat Begomovirus dari
database GeneBank. Pepper yellow leaf curl Indonesia virus –asal cabai (PYLCIV-Ca:
BAF02735.1 ), PYLCIV-asal Ageratum conyzoides (BAF02749.1 ), PYLCIV-asal Tomat
(BAF02742.1), Tomato yellow leaf cur virus-Kanchanaburi Thailan isolate 1 (TYLCV-Kan1:
NP_995303.1 ), TYLCV-Kan2(AAO15928.1), Alternanthera yellow veinal virus (AlYVV:
ACH88349.1), Tomato yellow leaf curl Indonesia Virus-Lembang (TYLCIV-Lbg: AF189018.3)
PYLCIV-Padang
Begomovirus database GeneBank
NT(%) AA(%) Distance Matrices (%)
PYLCIV-Ca 95 93 6,78
PYLCIV-Age 94 93 7,10
PYLCIV-To 95 94 6,67
TYLCV-Kan1 74 88 10,68
TYLCV-Kan2 73 87 10,26
AlYVV 77 83 18,10
TYLCIV-Lbg 75 74 24,12

Unand
Phylogeny Analysis of Begomovirus : “Gen AV1 (CP)”
TYLCIV-Lbg
PYLCVI-Ag
PYLCVI
PepSo1-3
PepPDG-III
PYLCIV-2
PYLCIV-3
PYLCIV-To
PYLCIV-4
TYLCKanV
TYLCKanV-1
TLCVTai
AlYLCV
TYLCIV-Lbg
PepAg1-3
PepPDG-I
PepPDG-II
PepPYK1-9
PepTD1-2

Unand
Identifikasi & Deteksi Dini
Patogen (Bakteri)
Dr. Jumsu Trisno, SP., M.Si

Virologis and Bioteknologis
Jurusan HPT Faperta Unand
E-mail ano_trisno@yahoo.co.id
HP. 085274050113
Dr. Jumsu Trisno; Jur HPT Faperta UNAND

Identifikasi & Karakterisasi
Bakteri
 Berdasarkan Gejala dan Tanamannya

Morfologi dan Histopatologi Tanaman
 Berdasarkan organisme penyebab
Morfologi dan Fisiologis
Serologi ( ELISA: Antigen-Antibodi)
Molekuler (Karakter DNA)

ISOLASI DAN PURIFIKASI
DNA

PENDAHULUAN
 DNA: polimer untai ganda yg tersusun dari
dioksiribonukleotida (dari basa purin atau
pirimidin, gula pentosa,dan fosfat).
 Basa purin: A,G

 Basa pirimidin: C,T
 DNA merupakan komponen penyusun

kromosom ( materi penyimpan informasi
genetik)

Komponen DNA
Pasangan
A-T
G-C

DNA berada dalam sel
sehingga untuk
mendapatkanya harus merusak
dinding dan membran sel

TAHAPAN ISOLASI DAN PURIFIKASI DNA
1. Perusakan dinding dan membran sel
2. Inactivasi Enzim DNA-se
3. Purifikasi DNA dari komponen lain

• Ekstraksi/presipitasi
• Kromatografi Adsorpsi

Perusakan dinding dan membran sel
Tahap 1:
Merusak dinding sel:
-mekanik (digerus) atau mesin micro smash
-enzimatik (bakteri: lisozim), (kapang:kitinase &
selulase)
mesin micro smash

Tahap 2:
Ekstraksi dengan buffer ekstraksi/lisis
Buffer ekstraksi/lisis berfungsi:
1. Merusak membran sel

2. Menginaktivasi enzim DNA-se
3. Menghilangkan kontaminan lain
Contoh Buffer ekstraksi/lisis:
-Buffer TES ( Tris-HCl pH 8, EDTA 10 mM, NaCl 0,5M , SDS
1%)
Tahap 3: Purifikasi dg Ekstraksi/Presipitasi
Tahap 1: Ekstraksi dg pelarut organik
Campur sama Aqueous
banyak dg pel.
organik sentrifugasi Fasa air dipisah
e.g. phenol, chloroform,
or phenol:chloroform Interphase
Organic
Hasil sentrifugasi dari Fasa air mengandung DNA, fasa pel. Larutan DNA
ekstrak buffer lisis Organik mengandung protein dan
supernatan :mengandung lemak, debris sel mengendap
DNA dan kontaminan

Tahap 3: Purifikasi dg Ekstraksi/Presipitasi
Tahap 2: Pengendapan DNA
After
Supernatant 70% EtOH
Sentrigugasi Wash Centrifuge
Pellet
Larut pelet (H2O,

Buffer TE
+ alkohol dan garam • Pellet DNA
(NaOAc &EDTA) untuk • Cuci dg etanol 70% untuk
mengendapkan DNA menghilangkan garam dan kontaminan lain
• Keringkan

Tahap 3: Purifikasi dg Kromatografi adsorpsi

Tahapan kromatografi adsorpsi
DNA dan kontaminan
akan berikatan dengan
silika
Silika dicuci untuk

menghilangkan kontaminan
Silika dielusi untuk mendapatkan DNA

Penentuan kualitas dan kuantitas DNA

Nucleic Acid Analysis via UV Spectrophotometry
DNA Absorption Spectra
DNA mempunyai puncak absorpsi pada panjang

gelombang 260nm.
Absorban 1,0 pada 260 nm sebanding dg 50 µg DNA/ml

Kemurnian DNA
Perbandingan A260/A280 ratio is ~1.8 DNA murni
Kurang dari1,8 terkontaminasi

Elektroforesis Untuk Visualisasi
DNA
Elektroforesis: Perpindahan DNA bermuatan negatif terhadap
medium agarosa atau polakrilamid sebagai aksi dari arus
listrik
Komponen:
 Gel agarosa 0.8-1% untuk mencek genom, 1,5-2%
untuk fragmen DNA berukuran 200bp, poliakrilamid
40% untuk 1-300 pb
 buffer (TAE= Tris-Borat-EDTA;TBE=Tris-Acetat-
EDTA; TPE=Tris-Fosfat-EDTA)
 Loading dye (sukrosa/gliserol dan bromofenol biru)
 dan sampel DNA
Elektroforesis Untuk Visualisasi
DNA
• Aliran listrik untuk elektroforesis 50-100 V dg
arah dari – ke + selama sekitar 30 menit.
• DNA akan bermigrasi berdasarkan ukuran, yg

paling kecil akan lebih cepat bermigrasi.
• Ukuran fragmen DNA ditentukan dg standar yg

sudah diketahui ukurannya.

Visualisasi DNA dg etidium bromida yg
akan berpendar di bawah sinar UV.
EtBr

Isolasi DNA Total (Contoh: Metode
Lazo dan Gabriel 1987)
1. Isolat Bakteri (koloni tunggal) ditumbuhkan

dalam medium LB/NB, diinkubasi suhu
ruang sambil dishaker 80 rpm selama 24
jam
2. Dipanen, pindahkan ke mikrotupe 2 ml dan
disentrifus 10.000 rpm selama 3 menit
3. Pellet diresuspensi dengan 1 ml buffer TE
(1M Tris HCl, 0,5 M EDTA pH 8), disentrifus
12.000 rpm, 5 menit
4. Supernatan dibuang, pellet di resuspensi dg 200 l TE,
tambahkan 40 l SDS 10%, dibolak-balik dan inkubasi 65 0C
selama 30 Menit dan tambah 20 l Proteinase K (2 mg/ml)
5. Campuran diinkubasi suhu 37 oC selama 3-4 jam
6. Tambahkan 200 l Fenol:klorofor (3:5), dibolak-balik 5 menit,
disentrifus 12.000 rpm selama 5 menit
7. Supernatan dipindah ke mikrotupe baru, tambahkan
kloroform 200 l, disentrifus 12.000 rpm selama 5 menit
8. Supernatan dipindah ke tupe baru ditambah 1 ml etanol
absolut dingin dan 50 l NaOAc 3 M, dibolak-balik,
diinkubasi suhu -20 oC
9. Supernatan dibuang ambil pellet, dan diresuspensi
aquades steril
10. DNA disimpan suhu -20 oC sampai digunakan

Amplifikasi gen 16Sr-RNA
dengan PCR
16Sr-RNA, urutan DNA yang digunakan untuk

identifikasi Bakteri
Komposisi reaksi PCR (reaksi total 25 l)
1. DNA template (hasil Isolasi) 1 l (± 200 ng)
2. dNTPs (masing-masing 200 mM)
3. Enzim Taq polimerase 1,5 unit
4. Primer (masing-masing 10 pMol)
5. Ditambahkan aquabides steril sampai vol 25 l

dengan PCR
16Sr-RNA, urutan DNA yang digunakan untuk

identifikasi Bakteri
Dapat menggunakan kit spt Ready -To-Go PCR bead,
hanya menambahakn
1. DNA template (hasil Isolasi) 1 l (± 200 ng)
2. Primer (masing-masing 10 pMol)
3. Ditambahkan aquabides steril sampai vol 25 l

dengan PCR
Protokol PCR yg digunakan:

 Predenaturasi 94 oC, 2 menit
 Denaturasi 94 oC, 30 detik
 Annealing 55 oC, 30 detik
 Elongation 72 oC, 1 menit
 Post PCR 72 oC, 5 menit
Dengan jumlah siklus 30 – 35 kali
1.500 bp

Bioteknologi Untuk Perlindungan Tanaman
Sekuensing
Teknik identifikasi urutan nukleotida-nukleotida dari
susunan DNA
Diperkenalkan pada tahun 70-an oleh

Maxam dan Gilbert, kemudian disusul oleh Sanger
et al (Nobel, 80-an)

Sekuensing
5‘ TGCATTGAATATGACGTTGACTAGCTAACGTTTAACTA 3‘
3‘ ACGTAACTTATACTGCAACTGATCGATTGCAAATTGAT 5‘
+ TGCATTG
5‘ TGCATTGAATATGACGTTGACTAGCTAACGTTTAACTA 3‘
TGCATTG
+ Polymerase; dA, dC, dG, dT, ddT
TGCATTGAAT
TGCATTGAATAT
TGCATTGAATAAGACGT
… dst …
TGCATTGAATATGACGTTGACTAGCTAACGTTTAACT

Bioteknologi Tanaman
Sekuensing
Elektrophoregram hasil pembacaan Megabace yang diolah dengan software
DNAstar. DNA template berasal beet gula
Sumber: Jamsari

Dr. Jamsari, Prog. Studi Pemuliaan Tanaman Jurusan BDP-FPUA
 Sequensing: di kirim kelembaga-lembaga
lain : PT. Charoon Pohpan, Egkman RSCM

 Hasil perunutan DNA dianalisis
menggunakan program NCBI BLAS
(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST) untuk
melihat kesamaan genetiknya dibandingkan
dengan runutan asam nukleat (DNA) yang
ada di GeneBank
 Analisis keragaman berdasarkan runutan
DNA daerah 16Sr-RNA menggunakan
program ClustalW program versi 1.83
European Bioinformatics Institute (EMBL-
EBI: www.ebi.ac.uk/serve/clustalW).

Deteksi Cepat Penyakit Bakteri dg PCR
menggunakan Primer Spesifik
1. Rancang primer dari sequen spesifik (spt

gen patogenesitas), ini dapat juga dari
informasi jurnal
2. Pesan primer spesifik
3. Optimasi kondisi PCR ( kondisi optimum
suhu annealing)
4. Setelah dapat kondisi optimal PCR, dpt
digunakan untuk deteksi penyakit bakteri
Deteksi dari kultur murni bakteri/DNA

Dapat menggunakan kit spt Ready -To-Go PCR bead,
hanya menambahakn
 DNA template (hasil Isolasi) 1 l (± 200 ng)
 Primer (masing-masing 10 pMol)
 Ditambahkan aquabides steril sampai vol 25 l

Protokol PCR yg digunakan:
 Predenaturasi 94 oC, 2 menit
 Denaturasi 94 oC, 30 detik
 Annealing 55 oC, 30 detik
 Elongation 72 oC, 1 menit
 Post PCR 72 oC, 5 menit
Dengan jumlah siklus 30 – 35 kali

Deteksi in situ (Xag pd Kedelai)
Metode Zhao et al (2002)
 0,5 gram daun kedelai yg bergejala disterilkan dg 0,25%
sodium hiperklorit 30 detik
 Digunting kecil dan dimasukkan ke dlm erlenmeyer 100 ml yg
berisi 10 ml Phosfat Buffer Saline (PBS)
 Sampel digoyang dlm waterbath suhu 30 0C selama 6 jam
 Supernatan disaring disentrifus selama 10 menit 10.000 rpm
 Pellert diresuspensi dalam 500 l 0,5 M NaCl disentrifus
10.000 rpm, 5 menit
 Peller ditambahkan 20 l aquades dipanaskan pada air
mendidih 5 menit
 Ambil 2 l untuk dijadikan DNA template
 Reaksi PCR dan komposisi sama yang sudah dijelaskan


Bahan Ajar Biotek

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Bahan Ajar Biotek

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

STRUKTUR GEN

Dr. Jumsu Trisno; Jur. HPT Faperta Unand

Dr. Jumsu Trisno; Jur. HPT Faperta Unand

1. 1902 Percobaan pertama kultur jaringan Haberlandt

2. 1904 Percobaan kultur embrio tanaman kubis-kubisan Hannig

8. 1941 a. Penggunaan air kelapa pertama kali yang van Overbeek

10. 1946 Pembentukan tanaman Lupinus dan Ball

11. 1950 Regenerasi organ dari jaringan kalus Sequoia Ball

12. 1952 a. Penggunaan kultur meristem untuk Morel dan Martin

14. 1954 Tanaman pertama dari sel tunggal Muir et al

21. 1968 Meslson dan Yuan Meslson dan Yuan

22. 1970 a. Seleksi mutan biokimia secara in vitro melalui Carlson

23. 1971 a. Penyiapan peta restriksi pertama menggunakan Nathans

27. 1979 Pengembangan prosedur kokultivasi untuk transformasi Marton et al

29. 1981 Introduksi istilah variasi somaklonal Larkin dan Scowcroft

31 1983 Polymerase chain Reaction (PCR) merupakan ide Kary Mullis

36 1991 Pengembangan sistim microarray DNA Fodor

39 1998 Penggugusan (Sequencing) genom organisme Sequencing

Dr. Jumsu Trisno; Jur. HPT Faperta Unand

Potensi Bioteknologi dalam Bidang Pertanian

2. Pengurangan pencemaran lingkungan

3. Diperolehnya tanaman yang lebih adaptif pada kondisi

4. Peningkatan kualitas produk pertanian

5. Menjadikan tanaman sebagai pengganti sumber energi

6. Memperoleh tanaman tahan hama dan penyakit tumbuhan

Dr. Jumsu Trisno; Jur. HPT Faperta Unand

Dr. Jumsu Trisno; Jur. HPT Faperta Unand

Panjang rata-rata sebuah

Prokaryot: tidak mengandung intron

Dr. Jamsari, Prog. Studi Dr.

Struktur lengkap Gen:

Dr. Jumsu Trisno; Jur. HPT Faperta Unand

2. Struktur Halus Materi Genetik

Nukleus m-RNA matang

Dr. Jamsari, Prog. Studi

Dr. Jumsu Trisno; Jur. HPT Faperta

Dr. Jumsu Trisno; Jur. HPT Faperta

Dr. Jumsu Trisno; Jur. HPT Faperta

Dr. Jumsu Trisno; Jur. HPT Faperta

Gambar 6: Hairpin loop region Geminivirus Isolat Sumatera Barat

Isolat Iteron (5’ – 3’) Posisi*

PBST2-3 GGTATTGGGAGACAATCCCTTCTTGTCCCCCATATAATTGGGGACAAGAAGACCACGATT 767

Dr. Jumsu Trisno; Jur. HPT Faperta

Dr. Jumsu Trisno; Jur. HPT Faperta

Gambar 5. Filogenetik kekerabatan 11 isolat gemenivirus Sumatera Barat terhadap strain-

TD1-2(08) West Sumatra,

PSS1-8(08) West Sumatra,

Dr. Jumsu Trisno; Jur. HPT Faperta

Dr. Jumsu Trisno; Jur. HPT Faperta

Dr. Jumsu Trisno; Jur. HPT Faperta

Dr. Jumsu Trisno, SP., M.Si

Dr. Jumsu Trisno; Jur HPT Faperta UNAND

 Berdasarkan Gejala dan Tanamannya

Dr. Jumsu Trisno; Jur HPT Faperta UNAND

Dr. Jumsu Trisno; Jur HPT Faperta UNAND

 Basa purin: A,G

 DNA merupakan komponen penyusun

Dr. Jumsu Trisno; Jur HPT Faperta UNAND

Dr. Jumsu Trisno; Jur HPT Faperta UNAND

Dr. Jumsu Trisno; Jur HPT Faperta UNAND

1. Perusakan dinding dan membran sel

2. Inactivasi Enzim DNA-se

3. Purifikasi DNA dari komponen lain

Dr. Jumsu Trisno; Jur HPT Faperta UNAND