Praktikum Teknik Analisa Mikroorganisme

“Analisis Mikrobiologi Minuman Ringan”

Alat dan Bahan

Alat

 Cawan petri  Penjepit kayu  Illuminator

 Jarum ose  Mikropipet  Bunsen
 Spreader  Tabung reaksi  Autoklaf
 Mikroskop  Tabung durham
 Slide glass  Tip

Bahan

 NaCl 0,9%  Eosin Methylene Blue (EMB) Agar

 Plate Count Agar (PCA)
 Baird Parker Agar (BPA)
 Lactose Broth (LB)
 Brilliant Green Lactose Bile
Broth (BGLBB)
 Sabouraud Dextrose Agar (SDA)
 H2O2 3%
 Eosin Methylene Blue (EMB)
 Sampel 1 = sari buah biasa
 Sampel 2 = sari buah kemasan

Mekanisme kerja

Uji yang akan dilakukan yakni terdiri atas:

1. Uji bakteri mesofilik  menggunakan ALT dengan media PCA

2. Uji bakteri Staphylococcus aureus  menggunakan ALT dengan media BPA
3. Uji coliform  menggunakan MPN
4. Uji kapang  menggunakan pour plate dengan media SDA
Metode uji bakteri mesofil

1 ml sampel sari
buah

Diencerkan berseri dengan diinokulasikan pada

9 ml NaCl 0,9% secara bertahap

1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6

Masing-masing diinokulasikan ke media Plate

Count Agar (PCA) dengan metode spread plate

Diinkubasi pada 37℃ selama ±24 jam

Menghitung jumlah koloni yang tumbuh pada
permukaan media PCA secara langsung

Angka Lempeng Total (ALT)

Metode uji bakteri Staphylococcus aureus

1 ml sampel sari
buah

Diencerkan berseri dengan diinokulasikan pada

9 ml NaCl 0,9% secara bertahap

1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6

Masing-masing diinokulasikan ke media Baird

Parker Agar (BPA) dengan metode spread plate

Diinkubasi pada 37℃ selama ±24 jam

Menghitung jumlah koloni yang tumbuh pada
permukaan media PCA secara langsung

Angka Lempeng Total (ALT)

 Koloni yang tumbuh pada permukaan media BPA

Diinokulasikan pada slide glass

H2O2 3%

Terbentuk Tidak terbentuk

gelembung, gelembung,
positif (+) negatif (-)

Metode Most Probable Number (MPN) Coliform

a) Uji Pendugaan (Presumptive Test)

Sampel sari
buah

10 ml 1 ml 0,1 ml
sampel sampel sampel

Diinokulasikan ke Diinokulasikan ke Diinokulasikan ke

3 tabung media 3 tabung media 3 tabung media
Lactose Broth 3x Lactose Broth 1x Lactose Broth 1x
kuat kuat kuat
Diinkubasi pada 37℃ selama ±24 jam

Media berwarna Media berwarna merah

kuning dan ada gas dan tidak ada gas
dalam tabung durham, dalam tabung durham,
coliform positif (+) coliform negatif (-)
 b) Uji Penguat (Confirmed Test)

1 ose tabung positif uji pendugaan

Diinokulasikan ke Brilliant Green Lactose Bile Broth (BGLBB)

Diinkubasi pada 37℃ selama ±24 jam

Ada gas dalam tabung Tidak ada gas dalam

durham, coliform tabung durham,
positif (+) coliform negatif (-)

c) Uji Pelengkap (Completed Test)

1 ose tabung positif uji penguat

Diinokulasi ke Eosin Methylene Blue (EMB) Broth

Diinkubasi pada 37℃ selama ±24 jam

Koloni berwarna Koloni tidak berwarna

hijau metalik, fecal hijau metalik, fecal
coliform positif (+) coliform negatif (-)

Metode Uji Kapang

1 ml sampel sari
buah

Diinokulasikan ke media Sabouraud Dextrose Agar

(SDA) dengan metode pour plate

Dihomogenkan

Diinkubasi pada 25℃ selama ±5 hari

Hifa berwarna Koloni berwarna

tertentu, kapang tertentu, khamir
positif (+) positif (+)
Aturan batas cemaran SNI