Pengujian Escherichia Coli Air dan air limbah (Metode MPN)

No Tahap Pengujian Hasil Gambar

1 Uji Pendugaan E. Coli

Pipet 10 ; 1 ; 0,1 mL contoh air ke LB (5 seri) Keruh dan bergelembung

yang berisi tabung durham terbalik (+)
Bening & tdk gelembung (-)
Inkubasi 24 ± 2 jam, suhu 35 ± 0,5 oC

2 Uji Penegasan E. Coli Keruh dan bergelembung

Pindahkan 1 ose dr tabung LB positif ke EC. (+)
Broth yang berisi tabung durham terbalik Bening & tdk gelembung (-)

Inkubasi 24 ± 2 jam, suhu 45 ± 0,5 oC

3 Uji Lengkap E. Coli

a. Kocok perlahan EC. Broth positif, ambil 1 ose koloni yang berwarna gelap
kemudian goreskan ke media EMBA. dengan atau tanpa kilat
logam
Inkubasi 18-24 jam, suhu 35 ± 1 oC

b. Ambil 5 koloni terduga E. Coli kemudian

goreskan ke PCA miring

c. Pewarnaan gram
- Ambil 1 ose kultur pada permukaan kaca Merah atau merah jambu
preparate dan berbentuk batang
- Ratakan dengan aquades dengan jarum
ose
- Fiksasi 3x dengan melewatkan diatas api
Bunsen
- Teteskan kristal violet, diamkan 20 detik
kemudian bilas
- Teteskan lugol iodine, diamkan 60 detik
kemudian bilas
 - Teteskan safranin, diamkan 20 detik
kemudian bilas
- Tutup kaca preparate dan baca
menggunakan mikroskop

d. Indol
Ambil 1 ose kultur dr PCA miring, inkubasi ke Terbentuk cincin merah
Tryptone broth selama 24 ± 2 jam suhu 35 ± 1 bagian atas (+)
o
C, tambah 0,2 -0,3 mL pereaksi kovaks.
Terbentuk cincin kuning
bagian atas (-)

e.Inokulasi 1 ose kultur dr PCA miring ke MRVP Warna merah muda eosin
broth inkubasi 48 ± 2 jam suhu 35 ± 1 oC, sampai merah delima (+)
Pindahkan 1 mL dr MRVP broth yang tumbuh
ke tabung reaksi steril dan tambahkan 0,6 mL
alpha naphtol dan 0,2 mL 40% KOH. Kocok dan
diamkan 2 jam

f. Inkubasi Kembali MRVP broth selama 48 ± 2 Warna merah (+)

jam suhu 35 ± 1 oC. tambahkan 5 tetes
indicator methyl merah Warna kuning (-)

g.Simon Citrat agar Terjadi pertumbuhan dan

h.Goreskan 1 ose dari PCA miring ke permukaan
simmon citrate agar inkubasi 96 ± 2 jam suhu
35 ± 1 oC,
media berubah warna biru
(+)
Tidak terjadi pertumbuhan
dan media tetap hijau (-)

Intrepetasi Hasil
 Kriteria Biotipe 1 Biotipe 2
Gas pada tabung LTB + +
Indol + -
MR + +
VP - -
Citrat - -
Uji Morfologi Gram negatif, bentuk batang Gram negatif, bentuk batang
pendek tidak berspora pendek tidak berspora