Pengujian Most Probable Number ( MPN) (Yusmaniar et al., 2017).

Uji Penduga. Sebanyak 3 buah tabung disiapkan yang masing-masing berisi Lactose Broth Double
Strength (LBDS) 10 ml (1 s/d 3), disiapkan juga 6 tabung yang masing-masing berisi 5 ml Lactose
Broth Single Strength (LBSS) (tabung 4 s/d 9). Sebanyak 10 ml sampel air diambil dan diinokulasikan
ke dalam tabung 1 s/d 3. Tabung 4 s/d 6 diinokulasikan 1 ml sampel, di dalam tabung 7 s/d 9 d
diinokulasikan 0,1 ml sampel. Tabung divorteks agar sampel air menyebar merata, lalu diinkubasi
pada suhu 37°C selama 2 x 24 jam. Setelah diinkubasi, diamati masing-masing tabung untuk melihat
ada tidaknya gasdalam tabung Durham. Adanya gasmenunjukkan uji penduga positif. Uji Penguat.
Dari tiap-tiap tabung uji penduga positif dipindahkan satu ose ke dalam tabung yang berisi 10 ml
Brilliant Green Lactosa Bile Broth (BGLB), diinkubasi pada suhu 37°C selama 2 x 24 jam. Setelah
diinkubasi diamati masing-masing tabung untuk melihat ada tidaknya gas dalam tabung Durham.
Pembacaan hasil dicocokkan dengan tabel MPN seri 3 tabung sesuai dengan tabung yang
menunjukkan positif gas pada tabung Durham. Uji Pelengkap. Dari hasil positif dari uji pennguat,
diambil satu ose dan digoreskan pada media Eosin Methylene Blue Agar (EMBA), diinkubasi pada
suhu 37°C selama 2 x 24 jam. Hasil positif Escherichia coli ditandai tumbuhnya koloni dengan kilap
logam dan bintik biru kehijauan.

No. Metode Jurnal Metode SNI

2.2.1 Jumlah Koloni
Penghitungan total yang layak dilakukan
dengan menggunakan teknik pelat tuang
menurut yang dijelaskan oleh Harrigan dan
MacCance (1976). 10 ml setiap sampel
dipindahkan ke 90 ml pengencer steril,
sebagai pengenceran pertama 10-1,
pengenceran serial dibuat hingga 10-6 dan
1 ml pengenceran dipindahkan secara
aseptik dalam rangkap dua ke dalam
cawan Petri steril. 10-15 ml agar jumlah
piring meleleh (45-46 oC) dituangkan ke
dalam piring. plate kemudian dicampur
secara menyeluruh untuk memfasilitasi
distribusi sampel di seluruh media, media
dibiarkan mengeras dan piring diinkubasi
pada suhu 37C selama 48 jam. Colony
counter (Labtech) dan hand-tally
digunakan untuk menentukan jumlah
bakteri total dalam hal unit pembentuk
koloni per ml (c.f.u. / ml).
MPN
Pengenceran sampel dapat dilakukan
pada volume pengencer 90 mL atau 9
mL. Banyaknya pengencer bertingkat
dapat disesuaikan dengan kebutuhan.
Memasukkan sampel sebanyak 1 ml dan
media 15 ml pada petri 4 jam pada 45
°C. Campur hati-hati dengan gerakan
memutar pelan-pelan;
biarkan media untuk membeku. Waktu
antara penambahan bahan yang diuji
(atau
pengencerannya) dan penambahan
media cair tidak boleh melebihi 15
menit.
Ketika media sudah beku, cawan
diinkubasi dalam posisi terbalik pada
suhu (36 ± 2) °C selama (44 ± 4) jam;

Coliform Menyaring air sebanyak 250 ml

Setidaknya 3 lingkaran penuh dari setiap
tabung positif yang dikonfirmasi
disubkultur ke dalam media kaldu EC dan
kemudian dilakukan inkubasi pada 44,5 oC
selama 24 jam. Tabung yang menunjukkan
jumlah produksi gas dianggap positif dan
jumlah yang paling mungkin dicatat
(hasilnya dibandingkan dengan tabel angka
yang paling mungkin)
2.2.3 Ragi dan Jamur
Menggunakan metode pelat tuang, agar
kentang dekstrosa digunakan untuk
mendeteksi ragi / jamur, menggunakan
pengenceran serial dari setiap sampel.
Untuk meningkatkan keasaman media,
ditambahkan 10% asam tartarat selama
media dituang ke dalam pelat. 0,1 ml dari
setiap pengenceran diambil; inkubasi
dilakukan pada suhu 28 oC selama 72 jam.
2.2.4 Tes streptokokus tinja
Kaldu dekstrosa azida digunakan untuk
penghitungan streptokokus tinja. Tabung
diinkubasi pada suhu 35 oC dan diperiksa
kekeruhannya setelah 48-72 jam, dari
pengenceran 10-1, 10-2, 10-3 dari masing-
masing pengenceran dibuat 3 tabung,
kemudian hasilnya dicatat dan
dibandingkan dengan yang paling
memungkinkan. tabel nomor.
2.2.5 Deteksi salmonella
10 ml sampel murni dan memasukkannya
ke dalam labu ukur berisi 100 ml nutrient
dengan kertas saring berukuran 0,45
μm,
Setelah penyaringan, letakkan
penyaring membran pada permukaan
media Chromogenic
Coliform Agar (CCA). Pastikan tidak
terdapat gelembung udara yang
terperangkap di bawah
penyaring membran. Setelah itu,
posisikan cawan Petri pada posisi
terbalik, dan inkubasi
pada suhu (36 ± 2) °C selama (21 ±
3) jam.
Amati penyaring membran dan
hitung semua koloni yang
menunjukkan reaksi positif β-
Dgalaktosidase
dengan ditunjukkan adanya koloni
berwarna merah muda hingga merah,
sebagai terduga bakteri Koliform
yang bukan E. coli.
SNI 2897:2008
Sampel air sebanyak 1 ml diencerkan
dengan larutan pengencer pada volume
pengencer 9 mL. Banyaknya pengencer
bertingkat dapat disesuaikan dengan
kebutuhan. Memasukkan sampel yang
telah diencerkan sebanyak 1 ml kedalam
petri, kemudian menambahkan 15-20
ml media yeast ekstrak agar,
menghomogenkan dengan pelan-pelan.
Menunggu hingga media dalam petri
membeku dan menginkubasi petri
dalam posisi terbalik pada suhu (36 ± 2)
°C selama (44 ± 4) jam;
Tidak ada pengujian
Larutan suspensi penegenceran 10 -4, 10
-5
, dan 10 -6 masing – masing diambil
sebanyak 0,2 ml. Kemudian larutan
suspensi tersebut ditaburkan pada
 broth steril. Menginkubasi selama 24 jam
pada suhu 37 oC. Mengambil sampel
sebanyak 1 ml dan menginokulasi sampel
ke dalam selenite broth dengan metode
streak dan dilakukan inkubasi selama 24
jam pada suhu 37 oC.
permukaan medium spesifik Salmonella
shigella agar (SSA) dan diratakan dengan
menggunakan batang L steril. Tiap seri
pengenceran dibuat 3 kali ulangan.
Setelah semua seri pengenceran
diinokulasikan, medium SSA diionkubasi
pada suhu 370 C selama 24 – 48 jam.
Deteksi cemaran bakteri Salmonella sp.
di lihat dari ada (+) atau tidak ada (-)
pertumbuhan bakteri tersebut. Jika
tumbuh koloni Salmonella sp. koloni
tersebut tidak akan berwarna (colorless)
dengan inti hitam besar ditengah

2.2.2 Tes angka yang paling mungkin

Uji ini memiliki 3 tahap dalam pengujiannya yang terdiri dari

(a) Uji dugaan.

(b) Tes terkonfirmasi.

2.2.2.1 Tes yang dikonfirmasi

Setiap tabung dengan positif gas diinokulasi ke dalam tabung berisi 10 ml media broth green
lactose brilliant. Semua tabung diinkubasi pada suhu 37 oC selama 48 jam untuk pengamatan
produksi gas.

(c) Tes yang sudah selesai.

Teknik fermentasi beberapa tabung dilakukan sebagai uji dugaan untuk total coliform
menggunakan tabung yang mengandung MaCconkey Broth dan tabung Durham terbalik.
Inokulasi dilakukan sebagai berikut:

(i) Untuk masing-masing dari 3 tabung MacConkey broth kekuatan ganda, 10 ml sampel asli
ditambahkan.

(ii) Untuk masing-masing dari 3 tabung MacConkey broth kekuatan tunggal, 1 ml sampel asli
ditambahkan.

(iii) Untuk masing-masing dari 3 tabung MacConkey broth kekuatan tunggal, 0,1 ml sampel
asli ditambahkan.

Semua tabung diinkubasi pada suhu 37 oC selama 48 jam untuk pengamatan produksi gas.
Pembacaan pertama dilakukan setelah 24 jam untuk merekam tabung positif, dan yang
negatif diinkubasi selama 24 jam.

2.2.2.2
(APHA, 1992).

Preparasi sampel

25 ml sampel dipindahkan secara aseptik, pengujian menggunakan seri 3 tabung.

4.2.5.1 Uji pendugaan

Pindahkan 1 ml larutan pengenceran 10-1 tersebut dengan pipet steril ke dalam larutan
9 ml BPW 0,1 % untuk mendapatkan pengenceran 10-2 dan 10-3. Pipet masing-masing 1 ml
dari setiap pengenceran ke dalam 3 seri tabung LSTB yang berisi tabung Durham. Inkubasi
pada temperatur 35 °C selama 24 jam sampai dengan 48 jam. Hasil uji dinyatakan positif
apabila terbentuk gas di dalam tabung Durham.

4.2.5.2 Uji konfirmasi (peneguhan)

Pengujian selalu disertai dengan kontrol positif.

Pindahkan biakan positif dari 4.2.5.1 d) dengan menggunakan jarum inokulasi dari
setiap tabung LSTB ke dalam tabung BGLBB yang berisi tabung Durham. Inkubasikan pada
temperatur 35 °C selama 48 jam ± 2 jam. Perhatikan adanya gas yang terbentuk di dalam
tabung Durham. Hasil uji dinyatakan positif apabila terbentuk gas. Selanjutnya gunakan
tabel Most Probable Number (MPN) untuk menentukan nilai MPN berdasarkan jumlah
tabung BGLBB yang positif sebagai jumlah koliform per mililiter atau per gram.

2.3.1.4 Uji katalase

Pengujian ini dilakukan menurut (William et al, 2001) untuk
membedakan bakteri penghasil enzim katalase dari bakteri penghasil non
katalase. Enzim mengkatalisis degradasi hidrogen peroksida menjadi air dan
oksigen molekuler.
H2 O2 _____ H2O + O2
Organisme katalase positif dengan cepat menghasilkan gelembung
ketika mereka terkena larutan yang mengandung hidrogen peroksida.