Efek Pemberian Oral Yang Membunuh Lactobacillus Brevis SBC8803 Pada Total Dan

Ovalbumin Spesifik yang Memproduksi Immunoglobulin E Melalui Peningkatan

Keseimbangan Th1 / Th2

Shuichi Segawa a,⁎, Yasukazu Nakakita a, Yoshihiro Takata a, Yoshihisa Wakita a,

Takafumi Kaneko a, Hirotaka Kaneda a, Junji Watari a, Hisako Yasui b
a Frontier Laboratories of Value Creation, Sapporo Breweries Ltd., 10 Okatohme, Yaizu,
Shizuoka 425-0013, Japan
b Sciences of Functional Foods, Graduate School of Agriculture, Shinshu University, 8304
Minami-minowa, Kami-ina, Nagano 399-4598, Japan

Abstrak

Kami memeriksa efek dari 59 strain Lactobacillus brevis yang terbunuh dengan panas pada
interleukin (IL) -12 dan produksi interferon (IFN) -γ dari Sel patch Peyer (PP) tikus. L. brevis
memiliki berbagai jenis strain yang menginduksi produksi sitokin ini. Beberapa strain L.
brevis, yang dipilih karena kemampuan mereka untuk menginduksi respon imun Th1 yang
kuat, menghambat total immunoglobulin E (IgE) dan produksi antigen spesifik IgE, dan
meningkatkan keseimbangan Th1 / Th2 dengan meningkatkan IL-12 dan IFN-γ dan
menghambat produksi IL-4 dari ovalbumin (OVA) –sensitized splenosit tikus. Berdasarkan
hasil skrining ini, kami memilih L. brevis SBC8803 sebagai penghambat potensial produksi
IgE, dan diselidiki pengaruh pemberian oral SBC8803 yang terbunuh dengan panas pada
produksi IgE pada tikus yang peka terhadap OVA. Tikus peka OVA diberi makan SBC8803
0% (kontrol), 0,05%, atau 0,5% ditambahkan pada diet selama 4 minggu selama periode
percobaan. Total dan OVA spesifik Ig E dalam serum tikus, yang diberi makan diet tambahan
0,5%, secara signifikan lebih rendah daripada tikus yang diberi diet kontrol. Nilai IFN-γ / IL-
4, yang mewakili keseimbangan Th1 / Th2, dari 0,5% yang ditambahkan ke dalam makanan
tikus spenosit tikus juga secara signifikan lebih tinggi daripada spenosit kelompok kontrol.

Pelepasan histamin dari tikus yang peka terhadap OVA ke dalam serum yang diinduksi
dengan antigen intraperitoneal menurun setelah pemberian oral SBC8803. Penghambatan
produksi IgE dan sekresi histamin oleh pemberian oral SBC8803 yang terbunuh adalah

mungkin karena peningkatan keseimbangan Th1 / Th2 menuju dominasi Th1.

Kata Kunci: Lactobacillus brevis; Immunogloblin E; keseimbangan Th1 / Th2; Penyakit

alergi; Sitokin
1. PEN DAHULUAN

Banyak penelitian kesehatan tentang efek menguntungkan probiotik pada manusia

telah dilaporkan. Beberapa bakteri asam laktat (LAB) dilaporkan efektif pada pemberantasan
Helicobacter pylori (Sakamoto et al., 2001), induksi dan pemeliharaan remisi penyakit radang
usus kronis (Mach, 2006) dalam uji klinis. Apalagi, Lactobacillus casei dilaporkan
menunjukkan aktivitas penghambatan terhadap transplantasi dan tumor yang diinduksi 3-
methylcholanthrene (Matsuzaki, 1998; Takagi et al., 1999), perlindungan terhadap infeksi
virus influenza (Hori et al., 2002) dan augmentasi natural killer (NK) aktivitas sel (Hori et
al., 2003) dalam percobaan hewan.

Juga telah dilaporkan bahwa beberapa LAB memiliki kemampuan untuk mencegah
dan meringankan penyakit alergi tipe I dengan memodulasi sistem kekebalan tubuh (Vaarala,
2003; Yasui et al., 1999; Shida et al., 1998; Fujiwara et al., 2004; Matsuzaki et al., 1998).
Demam, alergi makanan, dermatitis atopik, asma bronkial, dan sebagainya adalah alergi tipe
I. Gejala alergi tipe I ini disebabkan oleh aktivasi sel mast mukosa dan / atau basofil
(Metcalfe et al., 1997). Ikatan silang imunoglobulin E (IgE) yang dimediasi oleh pengikatan
antigen multivalen pada permukaan pemicu sel mast pelepasan banyak mediator kimia seperti
histamin, leukotrien dan prostaglandin dari sel-sel ini (Metcalfe et al., 1997). Mediator kimia
ini menyebabkan gejala alergi tipe I (Metcalfe et al., 1997; Hata et al., 1998; Vosseller et al.,
1997). Antibodi IgE berperan penting dalam reaksi alergi tipe I. antibodi IgE disekresikan
dari sel plasma penghasil IgE, yaitu dibedakan dari sel B (Takhar et al., 2005). Proliferasi dan
diferensiasi sel B menjadi sel plasma mensekresi IgE terutama diatur oleh sel T helper CD4
+. Sel T CD4 + bisa diklasifikasikan menjadi dua subtipe, sel T helper 1 (Th1) dan tipe 2
helper T cells (Th2) (Romagnani, 1994; Powrie dan Coffman, 1993; Murphy dan Reiner,
2002). Sel-sel Th1 dominan mengeluarkan interferon (IFN) -γ, yang mengaktifkan makrofag,
sel NK dan limfosit T sitotoksik, dan menghambat produksi IgE. IL-12 disekresikan oleh
makrofag diaktifkan dan sel dendritik mempromosikan perkembangan sel Th1 (Macatonia et
al., 1993; Hsieh et al., 1993). Di sisi lain, sel Th2 dominan mengeluarkan interleukin (IL) - 4,
yang mempromosikan proliferasi sel B, IgE beralih kelas dan kemudian menambah sekresi
IgE (Rousset et al., 1991; Vercelli, 1995; Yanagihara et al., 1995). Produksi IgE yang
diinduksi oleh IL-4 sangat terhalang oleh IFN-γ (Pène et al., 1988a, b; Del Prete et al., 1988;
Rousset et al., 1991). Ini menunjukkan bahwa IFN-γ bertindak sebagai antagonis IL-4. Oleh
karena itu, pengaturan keseimbangan antara Th1 dan Th2 penting untuk mengendalikan
produksi IgE. Beberapa LAB secara langsung menjadikan dominasi Th1 dan menghambat
produksi IgE (Yasui et al., 1999; Shida et al., 1998; Fujiwara et al., 2004; Ishida et al., 2003;
Murosaki et al., 1998).

Pemberian oral Lactobacillus brevis (L. brevis) subsp. koagulan dilaporkan

meningkatkan produksi interferon-α pada manusia (Kishi et al., 1996). Namun, sedikit yang
diketahui tentang properti anti alergi dari L. brevis, yang ditandai dengan supresi produksi
IgE. Pertama, dari 59 strain yang terbunuh karena panas L. brevis, yang telah kami isolasi
dan simpan selama bertahun-tahun, penelitian, kami memilih strain L. brevis yang diharapkan
memiliki anti alergi properti dengan mengukur sitokin tipe Th1 (IL-12, IFN- γ) produksi dari
sel Peyer's patch (PP). Sel PP, merupakan jaringan limfoid terorganisir dalam lamina propria
usus kecil, memainkan peran penting dalam respon imun untuk dicerna mikroorganisme dan
makanan antigen (Perdigón et al., 1999, 2002). Kedua, kami memilih strain yang
menunjukkan kemampuan untuk meningkatkan keseimbangan Th1 / Th2 dan menghambat
produksi IgE dari ovalbumin (OVA) –immunized spenocyte tikus. Melalui skrining in vitro
ini dari strain L. brevis, kami akhirnya memilih SBC8803 karena strain ini memiliki
kemampuan yang kuat untuk meningkatkan keseimbangan Th1 / Th2, yaitu didefinisikan
sebagai proporsi produksi IFN- γ terhadap produksi IL-4, dan menghambat produksi IgE.
Kami juga memeriksa efek oral

administrasi SBC8803 yang terbunuh dengan panas pada peningkatan keseimbangan Th1
/Th2, produksi IgE, dan pelepasan histamin ke dalam serum dari tikus yang peka terhadap
OVA yang disebabkan oleh tantangan antigen

2. Bahan dan Metode

2.1. Binatang

Tikus BALB / c betina (berusia 6 minggu) dibeli dari SLC Jepang (Hamamatsu,
Jepang) atau Charles River Japan, Inc (Yokohama, Jepang). Hewan-hewan itu ditempatkan di
sebuah ruangan AC dipertahankan pada suhu 24 ± 2 ° C dengan kelembaban relative 55 ±
15%. Mereka diberi perlakuan sesuai standar laboratorium hewan pengerat CRF-1 (Oriental
Yeast, Tokyo, Jepang) dan air ad libitum. Semua prosedur dilakukan sesuai dengan Pedoman
untuk eksperimen Hewan di Shinshu University dan disetujui oleh Komite Etik di Universitas
Shinshu.
2.2. Mikroorganisme

Strain L. brevis yang digunakan dalam penelitian ini dikumpulkan dari Sapporo
Breweries Ltd.. L. brevis ini diinokulasi dalam 10 ml kaldu DeMan – Rogosa – Sharpe
(MRS) (Difo Laboratories, Detroit, MN) dan dibudidayakan selama sehari pada suhu 37 ° C
di bawah kondisi anaerob (N2: CO2: H2 = 90: 5: 5, Tabai Espec, TokySo, Jepang),
dikumpulkan dengan sentrifugasi, dan kemudian dicuci tiga kali dengan phosphate buffer
saline (PBS). Kemudian, mikroorganisme itu dibunuh dengan pemanasan pada 121 ° C
selama 20 menit dan kemudian di lyophilized.

2.3. Produksi IL-12 dan IFN-γ dari sel patch Peyer's Tikus

Kemampuan L. brevis untuk menginduksi produksi IL-12 dan IFN- γ dievaluasi

dengan kultur sel Peyer's patch (PP) yang diperoleh dari tikus BALB / c. Sel-sel PP dibuat
dari PP yang diterapi dengan 2,25 mg / ml dispase (Invitrogen Corp, Carlsbad, CA) di Joklik
modifikasi MEM (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), mereka kemudian dikultur dalam medium
RPMI-1640 (Invitrogen Corp), yang mengandung 10% FBS (Equitech-Bio, Kerrvile, TX),
100 U / ml

penisilin dan 100 μg / ml streptomisin (Invitrogen Corp) 2,5 × 106 sel / ml di atas piring
kultur 96 sumur. Sel-sel PP dikultur dengan atau tanpa 10 μg / ml LAB yang terbunuh
dengan panas pada 37 ° C pada konsentrasi 5% CO 2. Supernatan telah dikumpulkan pada
Hari 3 untuk memastikan produksi sitokin (IL-12, IFN-γ). Konsentrasi IL-12 dan IFN-γ di
supernatan ditentukan oleh ELISA.

2.4. Produksi IgE dan sitokin dari splenocytes tikus yang peka terhadap OVA

Kemampuan L. brevis yang terbunuh dengan panas untuk menekan sekresi Antibodi
IgE dan untuk mengeluarkan sitokin dievaluasi dengan kultur splenocytes, yang berasal dari
tikus yang peka terhadap OVA. Tikus BALB / c secara intraperitoneal dipersiapkan dengan
20 μg OVA (Worthington, Lakewood, NJ) diadsorpsi pada 2mg Alum (Sigma- Aldrich)
dalam 200 μl PBS steril. Setelah 14 hari dari yang pertama imunisasi, tikus-tikus ini secara
intraperitoneal ditingkatkan menjadi 20 μg OVA diserap pada 2 mg Alum dalam 200 μl PBS
steril. Setelah 7 hari dari imunisasi kedua, tikus diterminasi dan splenosit (2,5 × 106 sel / ml)
dikultur dengan 100 μg / ml OVA dengan ada atau tidaknya 1 μg / ml LAB. Supernatan
dikumpulkan pada Hari 3 untuk mengukur produksi sitokin (IL-12, IFN-γ, IL-4), dan pada
Hari 14 untuk mengukur produksi IgE. Untuk mengukur IgE spesifik OVA, splenocytes,
yang

dikultur dengan OVA, dicuci dengan medium RPMI-1640 tiga kali pada Hari 3 untuk
menghapus OVA, dan dikultur tanpa OVA selama 11 hari lebih lanjut. Supernatan
dikumpulkan untuk mengukur IgE spesifik-OVA.

2.5. Percobaan in vivo

Tikus BALB / c betina berusia delapan minggu disuntikkan secara intraperitoneal

pada Hari 7 dan 21 dengan 20 μg OVA dan 2 mg Alum pada volume total 200 μl. Dalam
percobaan pemberian intraperitoneal, tikus (n = 5 per kelompok) secara intraperitoneal
disuntik dengan 0 μg, 20 μg atau 200 μg L. brevis yang mati dengan panas yang
ditangguhkan dalam PBS pada volume total 200 μl tiga kali seminggu sejak Hari 0 hingga 28
(Gbr. 1a). Dalam percobaan pada pemberian oral, tikus (n = 7 per kelompok) diberi makan
diet (MF; Oriental Yeast) yang mengandung 0%, 0,5% atau 0,05% L. brevis dari Hari 0
hingga 28 (Gbr. 1b) . Serum dikumpulkan dari tikus pada Hari 28, dan konsentrasi IgE total
dan IgE spesifik OVA ditentukan oleh ELISA. Splenosit (2,5 × 106 sel / ml) dikultur dengan
100 μg / ml OVA. Supernatan dikumpulkan pada Hari 3 untuk mengukur produksi sitokin
(IL-2, IL 4, IL-5, IL-6, IL-12 dan IFN-γ). Tikus yang peka terhadap OVA dengan metode
yang disebutkan di atas ditantang secara intraperitoneal dengan 2 mg OVA dilarutkan dalam
200 μl PBS 1 minggu setelah imunisasi kedua untuk menginduksi pelepasan histamin ke
dalam serum. Delapan menit setelah tantangan antigen, tikus-tikus itu dibunuh dan darah
dikumpulkan untuk mengukur konsentrasi histamin dalam serum. Konsentrasi histamin
dalam serum ditentukan dengan menggunakan kit EIA histamin (Spi-bio, Montigny-le-
Bretonneux, Prancis). 

Gambar. 1. Jadwal untuk imunisasi dengan OVA dan administrasi L. brevis SBC 8803 yang terbunuh dengan
panas. Tikus BALB / c betina berumur delapan minggu disuntikkan secara intraperitoneal pada Hari 7 dan 21
dengan 20 μg OVA dan 2 mg Alum pada total volume 200 μl. Serum dikumpulkan dari tikus pada Hari 28 untuk
mengukur konsentrasi total IgE dan OVA spesifik IgE. Splenosit dikultur dengan 100 μg / ml OVA untuk
mengukur produksi sitokin. (A) administrasi intraperitoneal dari SBC8803 untuk tikus. 0,2 atau 20 μg L. brevis
yang ditangguhkan dalam 200 μl PBS secara intraperitoneal disuntikkan ke tikus tiga kali seminggu dari Hari 0
hingga 28. (b) Pemberian oral SBC8803 ke tikus. Tikus diberi makan SBC8803 0%, 0,05% atau 0,50% ad ded in
control (MF) diet dari Hari 0 hingga 28. Tikus masing-masing kelompok secara intraperitoneal disuntikkan 2 mg
OVA dilarutkan dalam 200 μl PBS pada Hari 28. Delapan menit setelah tantangan antigen, serum dikumpulkan
dari tikus dan kemudian konsentrasi histamin diukur

2.6. ELISA

Tingkat IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL 12 dan IFN-γ dalam supernatan kultur
diukur menggunakan uji sandwich ELISA. Lima puluh μl antibodi pertama yang
dilarutkan dalam 50 mM buffer natrium karbonat ditambahkan ke setiap sumur dari
pelat mikrotiter 96-baik dan diinkubasi semalaman pada suhu 4 ° C. Konsentrasi
antibodi pertama untuk pengukuran IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL 12 dan IFN-were adalah
sebagai berikut, 1 μg / ml antibodi anti-tikus IL-2 murni yang dimurnikan (Biolegend
Inc. , San Diego, CA), 1 μg / ml antibodi monoklonal IL-4 (R&D Systems, Inc.,
Minneapolis, MN), 1 mg / ml antibodi IL-5 anti-tikus murni (Biolegend Inc.), 1 mg /
ml antibodi anti-tikus IL-6 murni (Biolegend Inc.), 1 mg / ml antibodi monoklonal
tikus IL-12 (p40 / p70) yang dimurnikan (BD Pharmingen, San Diego, CA) dan 2
mg / ml IFN kelinci anti-tikus / tikus Bi (Biosource, Camarillo, CA). Setiap sumur
dicuci dengan buffer cuci (PBS mengandung 0,05% Tween 20) tiga kali Seratus ml
1% BSA dalam 50 mM buffer natrium karbonat ditambahkan ke setiap sumur, plat
diinkubasi selama 90 menit pada suhu 37 ° C dan kemudian masing-masing sumur
dicuci dengan buffer cuci lima kali. Lima puluh ml supernatan kultur atau larutan
standar ditambahkan ke masing-masing sumur, pelat diinkubasi selama 90 menit pada
suhu kamar dan kemudian masing-masing sumur dicuci dengan penyangga pencuci
lima kali. Lima puluh ml dari antibodi kedua yang terbiotinilasi dilarutkan dalam
buffer pencuci yang mengandung 1% BSA ditambahkan ke setiap sumur dari pelat
mikrotiter 96-sumur dan diinkubasi selama 90 menit pada suhu kamar. Konsentrasi
antibodi kedua untuk pengukuran IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-12 dan IFN-were adalah
sebagai berikut, 0,5 mg / ml antibodi IL-mouse anti-tikus biotinilasi (Biolegend, Inc.),
0,1 mg / ml antibodi IL-mouse anti-tikus biotinylated (R&D Systems, Inc.), 0,5 mg /
ml antibodi anti-tikus IL 5 biotinylated (Biolegend, Inc.), 0,5 mg / ml antimouse
biotinilasi Antibodi IL 6 (Biolegend, Inc.), 0,5 mg / ml antibodi tikus monotinylated
IL-12 (p40 / p70) antibodi monoklonal (BD Pharmingen) dan 0,1 mg / ml mouse anti-
tikus / mouse IFN-γ biotin konjugat (Biosource). Setiap sumur dicuci seperti
sebelumnya. Lima puluh μl 0,1 μg / ml streptavidin horseradish peroxidase
(Biosource) ditambahkan ke masing-masing sumur, pelat diinkubasi selama 30 menit
pada suhu kamar dalam gelap dan kemudian masing-masing sumur dicuci seperti
sebelumnya. Larutan substrat 3,3 ′, 5 ′, 5 tetramethylbenzidine (TMB, Sigma Aldrich)
ditambahkan ke setiap sumur, pelat dibiarkan berkembang pada suhu kamar. Reaksi
warna dihentikan dengan penambahan 0,5 N H2SO4. Absorbansi pada 450 nm diukur
menggunakan microplate reader (MTP-800 AFC, Hitachi High-Technologies, Tokyo,
Jepang)

Tingkat IgE total dalam supernatan kultur diukur menggunakan kit kuantisasi
IgE ELISA tikus (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX). Tingkat titer IgE spesifik
OVA dalam supernatan kultur ditentukan oleh sandwich ELISA. Biotinylated OVA
digunakan sebagai pengganti antibodi kedua IgE anti-tikus terkonjugasi HRP.
Biotinilasi OVA dilakukan menggunakan kit biotinilasi (Cygnus Technologies,
Southport, NC). Titer IgE spesifik OVA dihitung dari perbandingan dengan serum
tikus hiperimunisasi. Serum hiperimunisasi diperoleh dari tikus yang diimunisasi
secara intraperitoneal dengan OVA yang diadsorpsi ke tawas tiga kali. IgE spesifik-
OVA dari sampel diekspresikan sebagai persentase terhadap kontrol.
 2.7. Analisis Statistik

Semua nilai dinyatakan sebagai mean ± SD. Evaluasi statistik dari hasil
dilakukan dengan analisis varian satu arah (ANOVA) (SPSS 13.0J untuk Windows,
SPSS, Chicago, IL). Nilai probabilitas kurang dari 0,05 dianggap signifikan secara
statistic.

HASIL

3.1. Deteksi strain L. brevis yang menginduksi sejumlah besar IL-12 dan IFN-γ dari sel PP

Peyer's patches, yang merupakan jaringan limfoid terorganisir dalam lamina propria
usus kecil, memainkan peran penting dalam respon imun dengan menelan mikroorganisme
dan antigen makanan. Kami menggunakan sel PP untuk mengevaluasi kemampuan L. brevis
yang mati dengan panas untuk meningkatkan keseimbangan Th1 / Th2. Produksi tipe sitokin
Th1 (IL-12 dan IFN-γ) diukur dari sel PP karena sekresi IL-4 dari sel PP tikus normal berada
di bawah batas yang dapat diukur. Seperti ditunjukkan pada Tabel 1, kemampuan L. brevis
yang dipanaskan untuk menginduksi sekresi IL-12 dan IFN- γ from dari sel PP berbeda
tergantung pada jenisnya. Dari 59 galur L. brevis yang diselidiki, kami memilih galur yang
merupakan penginduksi kuat IL-12 dan IFN-γ. Selanjutnya, kami memeriksa kemampuan
mereka untuk meningkatkan keseimbangan Th1 / Th2 dan menekan sekresi IgE dari
splenocytes yang diperoleh dari tikus yang diimunisasi OVA.
Sel-sel PP dibuat dari PP dengan memperlakukan dengan 2,25 mg / ml dispose yang
dilarutkan dalam medium MEM yang dimodifikasi Joklik, kemudian dikultur dalam medium
RPMI-1640, yang mengandung 10% FBS, 100 U / ml penisilin dan 100 μg / ml streptomisin ,
menjadi 2,5 × 106 sel / ml di atas piring kultur 96 sumur. Sel-sel PP dikultur dengan atau
tanpa 10 μg / ml L. brevis yang terbunuh dengan panas pada suhu 37 ° C pada konsentrasi
CO2 5%. Supernatan dikumpulkan pada Hari 3 untuk mengukur produksi sitokin (IL-12,
IFN-γ). Konsentrasi IL-12 dan IFN γ dalam supernatan ditentukan oleh ELISA.

3.2. Pengaruh strain L. brevis yang dipilih pada IgE dan produksi sitokin dari splenosit tikus
peka-OVA (in vitro)

Gambar 2 menunjukkan produksi sitokin dari splenosit tikus sensitized-OVA yang

dikultur dengan L. brevis strain yang mati dengan panas yang dipilih karena kemampuannya
untuk secara kuat menginduksi sitokin Th1 seperti produksi IL-12 dan IFN. Semua strain L.
brevis yang mati dengan panas, menginduksi produksi IL-12 dan IFN-high yang tinggi dan
menghambat produksi IL-4 dari splenosit pada tikus yang peka terhadap OVA. Gambar. 3
menunjukkan produksi total IgE dan OVA-specific IgE produksi dari splenosit tikus peka
OVA dikultur dengan L. brevis yang mati dengan panas. Setiap strain L brevis kecuali
SBC8214 menekan total IgE dan produksi IgE spesifik-OVA dari splenosit dibandingkan
dengan kontrol. Secara khusus, SBC8803 secara nyata meningkatkan keseimbangan Th1 /
Th2 terhadap dominasi Th1 dan menghambat produksi IgE spesifik OVA. Oleh karena itu,
kami memilih SBC8803 sebagai jenis yang paling menjanjikan untuk mengerahkan efek anti
alergi dengan sejumlah kecil pemberian oral. Selanjutnya, kami memeriksa efek pemberian
SBC8803 oral pada peningkatan keseimbangan Th1 / Th2, produksi IgE, dan pelepasan
histamin ke dalam serum yang disebabkan oleh tantangan antigen intraperitoneal
menggunakan tikus yang peka terhadap OVA.

Gambar. 2. Produksi IL-4, IL-12 dan IFN-γ dari splenosit tikus peka-OVA dan keseimbangan
Th1 / Th2. Tikus BALB / c disuntikkan secara intraperitoneal pada Hari 7 dan 21 dengan 20
μg OVA dan 2 mg Alum pada volume total 200 μl. Limpa dikumpulkan pada Hari 28 dan
splenosit (2,5 × 106 sel / ml) dikultur dengan 100 μg / ml OVA dengan ada atau tidaknya 1
μg / ml strain L. brevis yang dipanaskan. Setelah 3 hari, supernatan dikumpulkan dan
konsentrasi IL-4, IL-12 dan IFN-γ ditentukan oleh ELISA. Keseimbangan Th1 / Th2 dihitung
dari proporsi konsentrasi IFN-γ dengan konsentrasi IL-4.
Gambar. 3. Produksi total IgE dan IgE spesifik-OVA dari splenosit tikus peka OVA. Tikus
BALB / c disuntikkan secara intraperitoneal pada Hari 7 dan 21 dengan 20 μg OVA dan 2 mg
Alum pada volume total 200 μl. Limpa dikumpulkan pada Hari 28 dan splenosit (2,5 × 106
sel / ml) dikultur dengan 100 μg / ml OVA di hadapan atau tidak adanya 1 μg / ml strain L.
brevis yang terbunuh dengan panas. Setelah 14 hari, supernatan dikumpulkan dan konsentrasi
IgE total ditentukan oleh ELISA. Untuk mengukur IgE spesifik OVA, splenosit dicuci
dengan media RPMI1640 tiga kali pada Hari 3, dan kemudian dikultur tanpa OVA selama 11
hari lebih lanjut. Supernatan dikumpulkan untuk mengukur IgE spesifik OVA. 3.3. Efek
pemberian L. brevis pada produksi IgE dalam serum dan produksi sitokin dari splenosit tikus
sensitized-OVA (in vivo)

Total IgE dan kadar IgE spesifik OVA dalam serum pada tikus yang disensitasi OVA,
yang diberikan secara intraperitoneal, L. brevis SBC8803, ditunjukkan pada Gambar. 4.
SBC8803 menekan total produksi IgE dan OVA spesifik OVA dengan cara yang tergantung.
Pemberian SBC8803 yang terbunuh secara panas dengan dosis 200 μg / tikus secara
signifikan menghambat total produksi IgE dan IgE spesifik OVA dibandingkan dengan tikus
kontrol. Gambar. 5 menunjukkan sitokin tipe Th1 (IL-2, IL-12, IFN-γ) dan sitokin tipe Th2
(IL-4, IL-5, IL-6) dari splenosit tikus SBC8803 yang tersensitasi OVA secara intraperitoneal
(yang diberikan secara yang diberikan secara intraperitoneal. Nilai IFN-γ / IL-4, yang
mewakili keseimbangan Th1 / Th2, dihitung dari konsentrasi IFN-γ dan IL-4. Konsentrasi
IFN-γ yang unitnya ng / ml dibagi dengan konsentrasi IL-4 yang unitnya ng / ml, dan
kemudian unit nilai IFN-γ / IL-4 yang dihitung dinyatakan sebagai rasio. Produksi sitokin tipe

Th2 seperti IL-4, IL-5 dan IL-6 dari splenosit secara signifikan dihambat dalam cara yang
tergantung pada dosis, dan keseimbangan Th1 / Th2 ditingkatkan menuju dominasi Th1 oleh
administrasi intraperitoneal SBC8803

Gambar 4. Pengaruh pemberian intraperitoneal L. brevis SBC8803 yang terbunuh dengan

panas pada total IgE dan IgE spesifik OVA dalam serum tikus peka-OVA. Tikus BALB / c
betina berumur delapan minggu disuntikkan secara intraperitoneal pada Hari 7 dan 21 dengan
20 μg OVA dan 2 mg Alum pada volume total 200 μl. Serum dikumpulkan dari tikus pada
Hari 28 dan konsentrasi total IgE dan IgE spesifik OVA ditentukan oleh ELISA. 0, 20 atau
200 μg SBC8803 yang terbunuh dengan panas yang ditangguhkan dalam 200 μl PBS secara
intraperitoneal disuntikkan ke tikus tiga kali seminggu dari Hari 0 hingga 28. Setiap nilai
mewakili rata-rata ± SD, n = 5. Sangat berbeda dari kelompok kontrol yang sesuai pada
P<0.01
Gambar. 5. Produksi sitokin (IL-4, IL-5, IL-6, IFN-γ, IL-12 dan IL-2) dari splenosit tikus
peka OVA dan peningkatan keseimbangan Th1 / Th2. Tikus BALB / c betina berumur
delapan minggu disuntikkan secara intraperitoneal pada Hari 7 dan 21 dengan 20 μg OVA
dan 2 mg Alum pada volume total 200 μl. Limpa dikumpulkan pada Hari 28 dan splenosit
(2,5 × 106 sel / ml) dikultur dengan 100 μg / ml OVA selama 3 hari. Konsentrasi IL-4, IL-5,
IL-6, IFN-γ, IL-12 dan IL-2 dalam supernatan ditentukan oleh ELISA. Keseimbangan Th1 /
Th2 dihitung dari proporsi konsentrasi IFN-to ke konsentrasi IL-4. 0 μg, 20 μg atau 200 μg L.
brevis SBC8803 yang terbunuh dengan panas yang ditangguhkan dalam 200 μl PBS secara
intraperitoneal diinjeksikan ke tikus tiga kali seminggu dari Hari 0 hingga 28. Setiap nilai
mewakili rata-rata ± SD, n = 5. Secara signifikan berbeda dari kelompok kontrol terkait di
P<0.05 dan P<0.01, masing-masing