2.

CELL CULTURE BASICS VIRTUAL LAB (I &II)

A.TUJUAN:

-Mahasiswa mampu mengetahui definisi teknik kultur sel

-Mahasiswa mampu mengenal teknik-teknik dalam kultur sel
B. PROSEDUR
a) Cara kerja:
i. Bukalah website berikut:
https://www.thermofisher.com/id/en/home/global/forms/cell- culture-basics/cell-
culture-basics-virtual-lab.html

ii. Buatlah prosedur kerja dengan bagan alir pada kolom di bawah ini!
iii. Jawab dan catat pertanyaan yang ada! Selanjutnya pertanyaan dan jawaban
tersebut didiskusikan saat diskusi.
 Jas lab diambil dan dipakai untuk melindungi diri lalu glove box diambil juga untuk
dipakai agar tangan kita steril

Kulkas dibuka, kemudian DMEM dan serum diambil lalu di masukkan ke dalam water
bath

Setelah itu,waterbath dibuka lalu DMEM dan serum tadi di bawa ke hand cart

Setelah beberapa saat di waterbath, medium DMEM dan serum tadi diambil kemudian
di bawa ke hand cart

Etanol 70% diberikan ke medium dan serum sebelum di letakkan di hood.Setelah di beri
etanol 70% medium dan serum tadi di letakkan di hood. Semprot juga culture flask di
hand cart dengan etanol 70% kemudian culture flask juga di letakkan di hood

Pipette controller dan serological pipette diambil, lalu gunakan serological pipette yang
sudah di pasang controller untuk mengambil 50 ml medium. Setelah itu serological
pipette yang sudah di gunakan dibuang ke tempat sampah

Dengan memakai serological pipette yang baru , Serum diambil dan di masukkan ke
media culture(DMEM). Setelah dimasukkan, buang serological pipette tadi ke tempat
sampah

Serological pipette baru di ambil lagi, lalu complete medium(DMEM dan serum yang
tercampur) di masukkan ke culture flask. Setelah di masukkan, buang serological pipette
tadi ke tempat sampah dan pipette controller dikembalikan ke tempatnya lagi

Cryovial yang mengandung fibroblasts disemprot dengan ethanol 70% di hand cart
supaya steril. Setelah itu cryovial di letakkan di hood.

Kemudian pipette dan tip diambil dan digunakan untuk mengambil fibroblasts,lalu
dimasukkan ke culture flask. Buang tip yang sudah dipakai ke tempat sampah dan
pipette diletakkan lagi ke tempatnya

Flask yang mengandung complete medium dan fibroblasts dibawa ke incubator lalu
dimasukkan dengan suhu 37 derajat Celsius dan dengan kadar CO2 5%

Setelah beberapa saat flask diambil dari incubator lalu diletakkan di Evos Floid Cell
Imaging Station untuk mengetahui gambar fibroblasts
 Flask tadi di beri etanol 70% lagi lalu diletakkan di hood. Kemudian pipette controller
serta serological pipette yang baru disiapkan , lalu zat yang ada didalam flask diambil
hingga habis lalu dibuang ke tempat sampah Bersama dengan serological pipette

Serological pipette baru diambil lalu gunakan untuk menambahkan PBS ke flask yang
sudah bersih/ kosong dari sel. Kemudian serological pipette yang sudah dipakai dibuang
i. Jawab dan catat ke pertanyaan yang ada! Selanjutnya
tempat sampah
pertanyaan dan jawaban tersebut didiskusikan saat diskusi.
ii.
Serological pipette baru diambil dan ambil seluruh zat yang ada di flask lalu serological
pipette dibuang ke tempat sampah

Serological pipette baru diambil dan tambahkan trypsin di tube ke flask untuk
melepaskan sel. Lalu serological pipette dibuang lagi ke tempat sampah

Serological pipette baru diambil lagi lalu complete medium diambil menggunakan
pipette controller, kemudian diisikan ke dalam flask untuk menghambat trypsin.
Serological pipette yang sudah dipakai dibuang ke tempat sampah

Serological pipette yang baru diambil lagi, lalu digunakan untuk memanen selnya lalu
dimasukkan ke dalam tube 15 ml yang kosong dan serological pipette yang sudah dipakai
dibuang ke tempat sampah dan pipette controller dikembalikan ke tempatnya

Kemudian disiapkan microcentrifuge, lalu trypan blue diambil menggunakan pipette dan
tipnya lalu dimasukkan ke microcentrifuge,tip dibuang lalu diambil juga detached grown
cells menggunakan tip yang baru lalu dimasukkan ke microcentrifuge

Cairan di microcentrifuge(Final cell mix) diambil dan diletakkan di cell counter slide
.Buang tip yang sudah dipakai dan piipette diletakkan kembali ke tempatnya

Cell counter slide diletakkan di Automated Cell Counter. Tombol start ditekan untuk
melihat sel yang layak

Setelah sudah dideteksi, pipette controller disiapkan ,kemudian complete medium diambil
menggunakan serological pipette, lalu complete medium diisikan ke tabung reaksi 15 ml.
Serological pipette yang sudah dipakai dibuang ke tempat sampah lalu pipet controller
diletakkan ke tempatnya

DSMO diambil menggunakan pipette dan tip, ke dalam tabung reaksi 15 ml yang
mengandung complete medium ini ditambahkan DSMO. Pipette tip dibuang dan pipette
diletakkan Kembali ke tempatnya.

Pipette controller disiapkan dengan serological pipette yang baru lalu freezing
medium(Complete Medium dan DSMO) diambil, kemudian suspensi ulang sel dengan
menambah freezing medium ke tabung reaksi yang mengandung centrifuged cells.
serological pipette dibuang dan controller di letakkan ke tempat semula.
Resuspended cell diambil menggunakan pipette dan tipnya. Tambahkan sel ke cryovial
untuk persiapan didinginkan. Tip dibuang dan pipette diletakkan ke tempat semula

Pengerjaan kultur sel selesai.

1.Jika kamu bekerja dengan bahan kimia yang bersifat korosif apa yang kamu butuhkan?
 Memakai jas lab dan sarung tangan.

2.Poster yang terletak ditengah dinding lab adalah?

 Tabel periodic.

3.Apa itu kultur sel?

 Kultur sel adalah proses dimana sel-sel tumbuh dalam kondisi yang terkendali,
umumnya di luar lingkungan alaminya.

4.Mengapa penting untuk mengkultur sel?

 Penggunaan kultur sel memberikan cara yang mudah dan lebih hemat untuk penelitian
di berbagai bidang,penemuan obat baru untuk peyembuhan kanker kulit.

5.Jenis sel apa yang bisa kita kultur?

 Ada 2 tipe sel yang bisa kita kultur berdasarkan asal sel,Sel yang dikultur tepat setelah
pengumpulannya dari organisme hidup disebut kultur utama. Sementara kita
menyebut sub-kultur berikutnya yang bersal dari kultur utama ini kultur sekunder atau
garis sel. Dengan demikian, semua garis sel berasal dari kultur utama.Selain itu kita
juga dapat menemukan mana sel yang patuh atau tidak.Tergantung kebutuhan sel
untuk bertahan,tumbuh, dan membelah.

6.Apa salah satu keuntungan dari kultur sel sebagai alat penelltian?
 Kutur sel ini merupakan alat yang mudah dan hemat biaya untuk mempelajari ilmu
kehidupan.

7.Mengapa kultur sel disebut sebagai in vitro ?

 Karena in vitro merupakan proses yang dilakukan di luar dari organisme.In vitro untuk
mempelajari sel atau biomolekul di luar konteks biologi normal.

8.Untuk sel yang melekat,apa yang adesi sediakan?

 Sinyal untuk tumbuh dan membelah,sinyal untuk meningkatkan kelangsungan
hidup,sinyal untuk mentransduksi sinyal diferensiasi

9.Apa komponen utama dari media basal?

 Elemen jejak,asam amino,vitamin yang dapat larut dalam air.

10.Mengapa L-Glutamin merupakan asam amino yang penting dalam kultur sel?
 Karena sel mendapat banyak energi dari proses katabolismenya.L-glutamin secara
langsung terlibat dalam siklus krebs,dimana sel menghasilkan sebagian glukosa yang
dibutuhkan untuk tumbuh.
11.Apa fungsi dari fenol merah?
 Menunjukkan pH dan melindungi sel dari cahaya.Sel tumbuh baik pada pH 7.4.Fenol
merah merubah warna medium, ketika berubah kuning pH 6.8 dan berubah menjadi
merah muda ketika pH 8.0

12.Apa kegunaan dari conditioned media?

 Mengatasi periode petumbuhan yang sulit.
13.Bagaimana kondisi yang optimal untuk menyimpan media kultur sel?
 Pada suhu 4 derajat Celsius

14.Apa yang menjadi salah satu komponen utama serum?

 Faktor pertumbuhan

15.Bagaimana kondisi optimal untuk menyimpan serum?

 Dalam aliquots,dibekukan pada suhu 20 derajat Celsius dalam freezer yang tidak
berembun

16.Mengapa kita harus melakukan pemanasan awal untuk semua reagen yang akan dipakai
pada suhu 37 derajat Celsius?
 Untuk menghindari sengatan panas ke sel

17.Bagaimana kondisi di dalam hood?

 Sangat bersih tetapi tidak benar benar steril.

18.Bagaimana selempang sungkup aliran udara harus di siapkan atau digunakan?

 Pada tingkat yang ditunjukkan saat digunakan yaitu pada kondisi steril.

19.Aturan mana yang anda harus ikuti saat bekerja dengan sel hewan di air flow hood?
 Jangan buka bahan bahan yang ada di hood agar tidak terjadi kontaminasi.

20.Apa karakteristik utama dari pembuluh yang dirancang khusus untuk membiakkan
sel,seperti firoblas?
 Permukaannya dilapisi secara khusus

21.Mengapa complete medium disebut lengkap?

 Karena sudah ada nutrisi didalamnya yang dibutuhkan sel untuk tumbuh.

22.Apakah medium lengkap perlu disimpan pada suhu -20 derajat Celsius dalam jangka
panjang?
 Tidak, media lengkap tidak boleh didinginkan.Media lengkap lebih baik disimpan pada
suhu 4 derajat Celsius dan tidak lebih dari 2-4 minggu.

23.Apakah kita bisa menambahkan antibiotic ke media lengkap?

 Bisa,jika diperlukan

24.Bagaimana kita mencairkan sel?

 Dengan cepat,di waterbath pada suhu 37 derajat Celsius.

25.Apa itu garis otentik sel?

 Pembelajaran yang membuktikan garis keturunan dan kurangnya kontaminasi sel kita.

26.Mana dari peryataan berikut yang tidak direkomendasikan untuk menverifikasi garis sel
pada manusia oleh entitas regulasi?
 Pengurutan DNA

27.Apa saja yang termasuk dalam lingkungan kultur sel?

 Komponen media,plastic yang ditempeli gas,komposisi gas
28.Mengapa natrium bikarbonat ditambahkan ke media kultur sel?
 Karena bisa membantu untuk menjaga pH sel selama ada CO2.

29.Mengapa Analisa kurva pertumbuhan penting?

 Karena bisa membangun waktu pengadaan sel,memungkinkan untuk melihat
perubahan sel dari waktu ke waktu,dan memberikan catatan pertumbuhan sel

30.Fase kurva pertumbuhan manakah yang penting untuk dicoba dan dipertahankan selama
kultur sel?
 Fase log.

31.Apa fungsi protein permukaan sel yang mempromosi kontak dari sel ke sel?
 Berhenti bertumbuh karena penghambatan kontak.

32.Apa itu confluency?

 Rasio area yang ditempati sel dengan total ruang yang tersedia

33.Apakah sel perlu diberi makan lagi jika mereka sudah mencapai confluency?
 Tidak, Anda perlu memberi makan sel sesuai dengan perkembangan atau
pertumbuhan mereka.

34.Jenis morfologi seperti apa yang dimiliki sel kita?

 Seperti firoblast

35.Menurut Anda apakah sel siap untuk di subkultur?

 Iya, karena mereka telah mencapai confluency sekitar 80%.

36.Apa yang bisa kita tambahkan ke kultur untuk menghambat trypsin?

 Media lengkap,protein yang ada dan ion magnesium yang ada pada media lengkap
dapat menghambat trypsin dan menghindari racun ke sel.

37.Apa tujuan dari disassocistion medium?

 Untuk menyebabkan sel yang melekat antara satu dan lainnya lepas dan substrat

38.Sel manakah yang tidak hidup?

 Sel gelap.Trypan blue hanya dapat menembus membran sel yang rusak, sehingga jika
sel tersebut tidak layak maka akan menembus ke dalam sel.Begitulah mengapa
mereka terlihat gelap seperti.

39.Apa yang penting dan perlu diperhatikan saat kita menumbuhkan sel hewan?
 Waspada dalam kita melindungi sel dari kontaminasi

40.Hal mudah apa yang dapat kita lakukan jika menemukan kontaminasi oleh bakteri terhadap
kultur kita?
 Membuang sel dan mencairkan botol sel segar yang beku.

41.Apa itu kontaminasi silang?

 Kontaminasi silang adalah hasil kerja dengan beberapa garis sel pada waktu yang sama
42.Mengapa penting untuk mengkriopreservasi sel hewan?
 Karena stok ini sangat penting untuk menguji reproduktif pengujian
reproducibility,memiliki stok jika kultur Anda terkontaminasi,dan selama sel
bertumbuh mereka dapat berubah seiring dengan waktu.

43.Dalam kondisi apakah yang bagus untuk membekukan sel?

 Cukup makan dan bagian rendah

44.Apa tujuan dari cryoprotective agent?

 Untuk memungkinkan laju pertumbuhan yang lebih lambat

45.Apa yang cara tepat untuk mendinginkan sel?

 Dinginkan mereka sekitar 1 derajat per menit

46.Jenis perlindungan apa saja yang harus kita perlukan untuk menggunakan tangki nitrogen?
 Jas lab dan celemek karet,Sarung tangan dengan insulasi,pelindung wajah penuh

47.Apa keuntungan utama dari pembiakkan sel?

 Sel tersebut dapat mempertahankan fungsinya meskipun tumbuh secara in vitro

48.Apa persyaratan minimum untuk menumbuhkan sel dalam kultur?

 Media kultur lengkap, pH sekitar 7.4 dan atmosfer 5% CO2

49.Apa saja dasar Teknik yang steril bagi peneliti?

 Menjaga lingkungan kultur bersih,menggunakan reagen kondisi steril,menggunakan
pipet serologis hanya sekali pemakaian

50.Apa yang penting saat bekerja di hood?

 Meminimalkan gerak cepat, tidak membuat hal yang menimbulkan kontaminasi
,menyeka tudung dengan etanol 70%

51.Hal apa yang penting saat mencoba untuk mempertahankan pertumbuhan sel?
 Subkultur mereka sebelum sel mencapai confluency

52.Jika kita mencampur tripan biru dengan suspensi sel 1:1 dan menghitung 240 sel yang layak
di ruang Neubauer(4 set 16 kotak), berapa banyak sel yang layak yang kita miliki per ml?
 1,2 x 106 sel/ml

53.Manakah cara terbaik untuk mencairkan/membekukan sel?

 Cepat/Lambat masing-masing