PENGEMBANGAN METODE ANALISIS

DEXTROMETHORPHAN HBr dan DIPHENHYDRAMINE HCl

DALAM SEDIAAN OBAT BATUK CAIR SECARA ULTRA
PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (UPLC)

SKRIPSI

Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat guna mencapai gelar sarjana sains

Disusun Oleh :

Muhamad Faisal Fuad

062108031

PROGRAM STUDI KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS PAKUAN
BOGOR
2012
 LEMBAR PENGESAHAN

Judul : Pengembangan Metode Analisis Dextromethorphan HBr dan

Diphenhydramine HCl dalam Sediaan Obat Batuk Cair Secara
Ultra Performance Liquid Chromatography (UPLC)

Nama : Muhamad Faisal Fuad

NPM : 062108031

Skripsi ini telah diperiksa dan disetujui

Bogor, Maret 2013

Menyetujui,

Pembimbing I Pembimbing II

(Dra. Eka Herlina, M.Pd) (Drs. Agus Taufiq, M.Si)

Mengetahui,

Program Studi Kimia Fakultas Matematika dan

Ketua Ilmu Pengetahuan Alam

Dekan

( Drs. Husain Nashrianto, M.Si ) ( Dr. Prasetyorini, M.Si )

 KATA PENGANTAR

Alhamdulillah segala rasa syukur penulis ke hadirat Allah SWT, berkat

Rahmat dan Inayah-Nya yang dilimpahkan penulis memperoleh kekuatan dan
kekuatan tenaga dan fikiran, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini
dengan segala kenikmatan-Nya. Shalawat dan salam penulis haturkan pada Nabi
akhir zaman, Nabi Muhammad SAW yang senantiasa menuntun seluruh umat
manusia ke jalan Allah SWT.

Skripsi ini, dibuat untuk memenuhi persyaratan mendapatkan gelar

Sarjana Sains, Jurusan Kimia Fakultas MIPA Universitas Pakuan Bogor.

Penulis mengucapkan terima kasih sebesar-besar nya kepada :

1. Ibu Dr. Prasetyorini, M.Si selaku Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam.
2. Bapak Drs. Husain Nashrianto, M.Si selaku Ketua Jurusan Program Studi
Kimia, FMIPA Universitas Pakuan Bogor.
3. Dra. Eka Herlina, M.Pd dan Drs. Agus Taufiq, M.Si. selaku pembimbing
yang telah memberikan arahan, saran dan bimbingan selama penulisan skripsi
ini.
4. Orang tua tercinta, yang selalu menjadi penyemangat dan memberi doa yang
tulus.

Penulis memohon saran yang bersifat membangun bagi para pembaca.

Terima kasih.

Penulis

iii
MUHAMAD FAISAL FUAD. 062108031. 2012. : “Development of Analytical
Methode Dextromethorphan HBr and Diphenhydramine HCl in Liquid
Cough Preparation Using Ultra High Performance Liquid Chromatography
(UPLC)”, supervised by Dra. Eka Herlina, M.Pd. and Drs. Agus Taufiq, M.Si.

SUMMARY
Analytical methode development performed over demand of faster
analysis, especially on industry demanding faster analysis with minimum cost.
The author tries to develop analytical methode Dextromethophan Hbr and
Diphenhydramine HCl in liquid cough preparations of using High Performance
Liquid Chromatography (HPLC) become Ultra Performance Liquid
Chromatography (UPLC). In previous studies for determination of vitamin B1,
B2, and B6 in a multivitamin supplement beverages using HPLC at pressures <
4000 Psi takes 15 minutes with a gradient mobile phase method, and only takes 3
minutes using UPLC at pressure 4000 Psi - 15000 Psi. It is expected that the
development of these methods to UPLC will make the run time (injection time)
faster. This study aims to find a method that is faster and more efficient methods
of analysis Dextromethorphan HBr and Diphenhydramine HCl with UPLC
utilization.
Methodology of the research consisted of searching an optimum flow rate,
verification, and data processing. Searching an optimum flow rate by comparing
the suitability parameters system including resolution (separation of power),
relative standard deviation (RSD), and tailing factor at flow rate of 0.20, 0.30, and
0.40 mL / min. The verification that is perform including precision, accuracy, and
selectivity.
Based on system suitability test results, the optimal flow rate is on 0.30
mL/min. After verification, the results that is obtained meet requirements of the
verification tests with the resolution on 2.247, relative standard deviation (RSD)
on 0.50% for Dextromethorphan HBr, 0.55% for Diphenhydramine HCl, and
recovery for Dextromethorphan HBr on 99.97%, and Diphenhydramine HCl on
100.50%.

Keywords: Methode development, UPLC, HPLC, Liquid cough medicine.

iv
MUHAMAD FAISAL FUAD. 062108031. 2012. : “Pengembangan Metode
Analisis Dextromethorphan HBr dan Diphenhydramine HCl dalam Sediaan
Obat Batuk Cair Secara Ultra High Performance Liquid Chromatography
(UPLC)”, Dibimbing oleh Dra. Eka Herlina, M.Pd. dan Drs. Agus Taufiq,
M.Si.

RINGKASAN
Pengembangan metode analisis dilakukan seiring tuntutan waktu analisis
yang semakin cepat, terutama pada industri yang menutut kecepatan dengan biaya
seminimal mungkin. Penulis mengembangkan metode analisis Dextromethophan
Hbr dan Diphenhydramine HCl dalam sediaan obat batuk cair secara High
Performance Liquid Chromatography (HPLC) menjadi menggunakan Ultra
Performance Liquid Chromatography (UPLC). Pada penelitian sebelumnya untuk
penetapan vitamin B1, B2, dan B6 pada suatu minuman suplemen multivitamin
menggunakan HPLC pada tekanan < 4000 psi membutuhkan waktu 15 menit
dengan metode fase gerak gradien, sedangkan membutuhkan waktu 3 menit jika
menggunakan UPLC pada tekanan 4000 Psi – 15000 Psi. Diharapkan dengan
pengembangan metode ini ke UPLC akan didapatkan run time (waktu injeksi)
yang jauh lebih singkat. Penelitian ini bertujuan mendapatkan metode yang lebih
cepat dan lebih efisien untuk metode analisis Dextromethorphan HBr dan
Diphenhydramine HCl dengan pemanfaatan UPLC.
Metode penelitian yang dilakukan terdiri dari penelitian laju alir yang
optimum, verifikasi, dan pengolahan data. Penelitian laju alir yang optimum
dilakukan dengan membandingkan parameter kesesuaian sistemnya yang meliputi
resolusi (daya pisah), simpangan baku relatif (RSD), dan tailing factor (faktor
pengekoran) pada laju alir 0.20, 0.30, dan 0.40 mL/menit. Verifikasi yang
dilakukan meliputi presisi, akurasi, dan selektivitas.
Berdasarkan hasil uji kesesuaian sistem, laju alir yang optimal adalah pada
kecepatan 0.30 mL/menit. Setelah diverifikasi, hasil yang didapatkan memenuhi
persyaratan uji verifikasi yaitu dengan resolusi 2.247, simpangan baku relatif
(RSD) 0.50% untuk Dextromethorphan HBr, 0.55% untuk Diphenhydramine HCl,
dan recovery 99.97% untuk Dextromethorphan HBr, 100.50% untuk
Diphenhydramine HCl.

Kata Kunci : Pengembangan metode, UPLC, HPLC, Obat batuk cair.

v
 DAFTAR ISI

LEMBAR PENGESAHAN.........................................................................ii

KATA PENGANTAR................................................................................iii

RINGKASAN.............................................................................................iv

SUMMARY.................................................................................................v

DAFTAR ISI...............................................................................................vi

DAFTAR GAMBAR................................................................................viii

DAFTAR TABEL.......................................................................................ix

DAFTAR LAMPIRAN................................................................................x

BAB I PENDAHULUAN............................................................................1

1.1 Latar Belakang Masalah....................................................................1

1.2 Perumusan Masalah...........................................................................2

1.3 Tujuan Penelitian...............................................................................2

1.4 Hipotesis............................................................................................3

1.5 Manfaat Penelitian.............................................................................3

BAB II TINJAUAN PUSTAKA..................................................................4

2.1 Kromatografi.....................................................................................4

2.1.1 Skema Pembagian Kromatografi....................................................4

2.2 HPLC.................................................................................................7

2.3 UPLC...............................................................................................12

2.4 Uji Kesesuaian Sistem.....................................................................14

2.5 Verifikasi.........................................................................................18

2.6 Batuk................................................................................................19

2.7 Obat Batuk.......................................................................................20

BAB III METODOLOGI PENELITIAN..................................................25

vi
 3.1 Waktu dan Tempat..........................................................................25

3.2 Alat dan Bahan................................................................................25

3.3 Metode Penelitian............................................................................25

BAB IV HASIL PENELITIAN.................................................................28

4.1 Uji kesesuaian sistem Dextromethorphan HBr dan

Diphenhydramine HCl menggunakan HPLC........................................28

4.2 Uji kesesuaian sistem Dextromethorphan HBr dan

Diphenhydramine HCl menggunakan UPLC dengan 3 laju alir...........30

4.4 Verifikasi metoda pemeriksaan Dextromethorphan HBr dan

Diphenhydramine HCl menggunakan UPLC........................................33

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN.....................................................38

5.1 Kesimpulan......................................................................................38

5.2 Saran................................................................................................38

DAFTAR PUSTAKA................................................................................39

Lampiran....................................................................................................41

vii
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Skema Pembagian Kromatografi..........................................................5

Gambar 2. Skema alat HPLC................................................................................10

Gambar 3. Contoh kromatogram KCKT...............................................................14

Gambar 4. Contoh perhitungan faktor asimetri....................................................15

Gambar 5. Cara mengukur tR; Wh/2; Wb; dan σ suatu puncak kromatogram....17

Gambar 6. Struktur Dextromethorphan HBr........................................................22

Gambar 7. Struktur Diphenhydramine HCl..........................................................23

Gambar 8. Kromatogram pemeriksaan kadar Dextromethorphan HBr dan

Diphenhydramine HCl menggunakan HPLC........................................................28

Gambar 9. Kromatogram pemeriksaan kadar Dextromethorphan HBr dan

Diphenhydramine HCl menggunakan UPLC dengan laju alir 0.2 mL/menit........30

Gambar 10..............Kromatogram pemeriksaan kadar Dextromethorphan HBr dan

Diphenhydramine HCl menggunakan UPLC dengan laju alir 0.3 mL/menit........30

Gambar 11.Kromatogram pemeriksaan kadar Dextromethorphan HBr dan

Diphenhydramine HCl menggunakan UPLC dengan laju alir 0.4 mL/menit........31

viii
 DAFTAR TABEL

YTabel .Syarat kesesuaian sistem PT. Kalbe Farma Tbk......................................18

Tabel 2. Hasil uji kesesuaian sistem Dextromethorpan HBr dan Diphenhydramine

HCl dengan HPLC.................................................................................................29

Tabel 3. Hasil uji kesesuaian sistem Dextromethorpan HBr dan Diphenhydramine

HCl dengan UPLC.................................................................................................31

Tabel 4. Hasil Uji selektifitas pada laju alir 0.3 mL/menit dengan UPLC............33

Tabel 5. Data hasil uji presisi Dextromethorphan HBr.........................................34

Tabel 6. Data hasil uji presisi Diphenhydramine HCl...........................................35

Tabel 7. Data hasil uji akurasi Dextromethorphan HBr........................................36

Tabel 8. Data hasil uji akurasi Diphenhydramine HCl..........................................36

ix
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Diagram alir metodologi penelitian..................................................41

Lampiran 2. Diagram alir preparasi standar dan sampel.......................................42

Lampiran 3. Rumus perhitungan uji kesesuaian system :.....................................43

Lampiran 4. Data hasil uji kesesuaian sistem Dextromethorphan HBr dan

Diphenhydramine HCl menggunakan HPLC........................................................45

Lampiran 5. Data hasil uji kesesuaian sistem Dextromethorphan HBr dan

Diphenhydramine HCl menggunakan UPLC dengan laju alir 0.2 mL/menit........46

Lampiran 6. Data hasil uji kesesuaian sistem Dextromethorphan HBr dan

Diphenhydramine HCl menggunakan UPLC dengan laju alir 0.3 mL/menit........47

x
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang Masalah

Perkembangan zaman telah menuntut untuk semakin cepat dalam hal

kecepatan analisis. Seiring berjalannya waktu setiap orang, perusahaan, atau
badan penelitian selalu mencari metode yang lebih cepat, tepat, dan efisien untuk
suatu pemeriksaan.

Sejalan dengan perkembangan ilmu sains dan teknologi, metode analisis

dari zaman ke zaman juga mengalami perubahan. Perubahan metode tersebut
disesuaikan dengan peruntukannya, karena kondisi yang berubah, ataupun
tuntutan kecepatan analisis.

Kromatografi pada awalnya hanya digunakan untuk pemeriksaan

kualitatif, tetapi saat ini kromatografi telah berkembang menjadi untuk analisis
kuantitatif. Seperti analisis menggunakan Thin Layer Chromatography (TLC)
yang pada awalnya hanya untuk kualitatif, sekarang setelah terdapat alat yang
disebut High Performance Thin Layer Chromatography (HPTLC) yang
menggabungkan TLC dengan densitometri sehingga dapat dilakukan pengujian
kuantitatif menggunakan TLC.

Selain HPTLC, telah dikembangkan beberapa alat instrumentasi

kromatografi untuk keperluan analisis lainnya, meliputi Gas Chromatography
(GC), High Performance Liquid Chomatography (HPLC). Sekarang ini ada alat
yang baru diperkenalkan yaitu Ultra Performance Liquid Chromatography
(UPLC) yang jauh lebih cepat jika di dibandingkan dengan HPLC.

Metode saat ini yang sering digunakan oleh Industri Farmasi, salah
satunya adalah HPLC terutama untuk industri yang menjadikan United State
Pharmacopeae (USP) sebagai standar. Adanya UPLC ke dunia industri maka
banyak dari industri farmasi yang beralih dari HPLC ke UPLC untuk pemeriksaan
kadar zat aktif.

Metode yang dipakai untuk pemeriksaan Dextromethorphan HBr dan

Diphenhydramine HCl di tempat penelitian adalah menggunakan HPLC dengan

1
run time (waktu injeksi) + 7 menit untuk satu injeksi, dan belum ada metode
dengan UPLC. Metode analisis menggunakan HPLC merupakan analisis yang
bisa dikategorikan cepat, tetapi di industri mereka membutuhkan analisis yang
lebih cepat dan efisien dari ini. Hal ini dikarenakan tuntutan kebutuhan produk
dengan waktu yang cepat dengan biaya seminimal mungkin, dan jumlah lot
produk yang banyak.

Prinsip kedua alat ini hampir serupa, yaitu kromatografi cair-cair, hanya
berbeda pada pompa, dan kolom yang digunakan. Kolom yang digunakan
mempunyai ukuran partikel lebih kecil dari HPLC, dan pompa yang digunakan
adalah pompa bertinggi (lebih tinggi dari HPLC, > 4000 Psi) dikarenakan
perbedaan pompa dan kolom yang digunakan, maka metode yang digunakan
harus disesuaikan dan harus diverifikasi kembali.

Pada penelitian sebelumnya untuk penetapan vitamin B1, B2, dan B6 pada
suatu suplemen multivitamin menggunakan HPLC pada tekanan <4000 psi
membutuhkan waktu 15 menit dengan metode fase gerak gradien, dan hanya
membutuhkan waktu 3 menit. Jika menggunakan UPLC pada tekanan
4000 Psi – 15000 Psi. Sehingga diharapkan dengan pengembangan metode ini ke
UPLC akan didapatkan run time yang jauh lebih singkat.

1.2 Perumusan Masalah

Run time yang cukup panjang untuk satu injekan yaitu + 7 menit untuk
analisis Dextromethorphan HBr dan Diphenhydramine HCl dalam sediaan obat
batuk cair menggunakan HPLC, maka dibutuhkan metode yang dapat
menganalisis kadar Dextromethorphan HBr dan Diphenhydramine HCl dalam
sediaan obat batuk cair yang lebih cepat dari metode tersebut.

1.3 Tujuan Penelitian

Mendapatkan metode yang lebih cepat dan lebih efisien untuk penetapan
kadar Dextromethorphan HBr dan Diphenhydramine HCl dengan pemanfaatan
UPLC.

2
1.4 Hipotesis

Metode analisis Dextromethorphan HBr dan Diphenhydramine HCl pada

sediaan obat batuk cair menggunakan UPLC lebih cepat dan efisien bila
dibandingkan dengan HPLC.

1.5 Manfaat Penelitian

Adanya penelitian ini, waktu analisis Dextromethorphan HBr dan

Diphenhyramine HCl pada sediaan obat batuk cair, menjadi lebih cepat dengan
penggunaan UPLC.

3
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Kromatografi

Kromatografi adalah suatu cara pemisahan dimana komponen-komponen

yang akan dipisahkan didistribusikan antara 2 fase, yaitu fasa stasioner (fasa
diam), dan fasa mobil (fasa gerak). Fase gerak dialirkan menembus atau sepanjang
fase stasioner. Fase diam cenderung menahan komponen campuran, sedangkan
fasa gerak cenderung membawanya. Berdasarkan terikatnya suatu komponen pada
fasa diam dan perbedaan kelarutannya dalam fasa gerak, suatu campuran dapat
dipisahkan. Komponen yang kurang larut dalam fasa gerak, yang lebih kuat
terserap atau terabsorpsi pada fasa diam akan tertinggal, sedangkan komponen
yang lebih larut atau kurang terserap akan bergerak lebih cepat.

Penemu kromatografi adalah Tswett yang pada tahun 1903, mencoba

memisahkan pigmen-pigmen dari daun dengan menggunakan suatu kolom yang
berisi kapur (CaSO4). lstilah kromatografi diciptakan oleh Tswett untuk
melukiskan daerah-daerah yang berwarna yang bergerak kebawah kolom. Pada
waktu yang hampir bersamaan, D.T. Day juga menggunakan kromatografi untuk
memisahkan fraksi-fraksi petroleum, namun Tswett lah yang pertama diakui
sebagai penemu dan yang menjelaskan tentang proses kromatografi.

Berdasarkan fase gerak yang digunakan, kromatografi dibedakan menjadi

beberapa golongan besar yaitu kromatografi gas dan kromatografi cair.

2.1.1 Skema Pembagian Kromatografi

Pembagian kromatografi menurut jenis fasa diam dan fasa geraknya dapat
dilihat pada skema dibawah ini :

4
 Kromatografi

Padat Cair Ion Exchange Gel

Fase Diam

Gas Cair Gas Cair Cair Cair

Fase Gerak
Gambar 1. Skema Pembagian Kromatografi
(Sumber: Yazid, 2005 )
Pembagian ini selanjutnya dapat dibagi lagi seperti terlihat pada skema
berikut:

1. Kromatografi Gas :

a. Gas Liquid Chromatography (GLC)

b. Gas Solid Chromatography (GSC)

2. Kromatografi Cair :

a. Liquid Liquid Chromatography (LLC) - Paper Chromatography (PC),

High Performance Liquid Chromatography (HPLC).

LLC adalah pembagian kromatografi dimana partisi terjadi antara fase

gerak dan fase diam yang kedua-duanya zat cair. Dalam hal ini fase diam tidak
boleh larut dalam fase gerak. Umumnya sebagai fase diam digunakan air dan
sebagai fase gerak adalah pelarut organik. Misalnya pada kromatografi kertas,
sebagai fase diam adalah air yang terserap pada serat selulosa dari kertas.

Kromatografi kertas termasuk dalam kelompok kromatografi planar,

dimana pemisahannya menggunakan medium pemisah dalam bentuk bidang
(umumnya bidang datar) yaitu betuk kertas. Seluruh bentuk kromatografi
memiliki fase diam (berupa padatan atau cairan yang didukung pada padatan) dan
fase gerak (cairan atau gas). Fase gerak mengalir melalui fase diam dan membawa
komponen-komponen dari campuran bersama-sama. Komponen-komponen yang
berbeda akan bergerak pada laju yang berbeda pula.

5
 Dalam kromatografi kertas, fase diamnya adalah kertas serap yang sangat
seragam dan fase geraknya adalah pelarut atau campuran pelarut yang sesuai.
Berbagai jenis pemisahan yang sederhana dengan kromatografi kertas telah
dilakukan dimana proses dikenal sebagai "analisis kapiler". Metode-metode ini
sangat sesuai dengan kromatografi serapan, dan sekarang kromatografi kertas
dipandang sebagai perkembangan dari sistem partisi.

Salah satu zat padat dapat digunakan untuk menyokong fasa tetap yaitu
bubuk selulosa. Pada kromatografi kertas peralatan yang dipakai tidak perlu alat-
alat yang teliti atau mahal. Hasil-hasil yang baik dapat diperoleh dengan peralatan
dan materi-materi yang sangat sederhana. Senyawa-senyawa yang terpisahkan
dapat dideteksi pada kertas dan dapat segera diidentifikasikan. Bahkan jika
dikehendaki, komponen-komponen yang terpisahkan dapat diambil dari kertas
dengan jalan memotong-motongnya, kemudian dilarutkan secara terpisah.

b. LSC (Liquid Solid Chromatography)-TLC (Thin Layer

Chromatography), dan Kolom

LSC adalah kromatografi penyerapan. Sebagai adsorben digunakan silika

gel, alumina, penyaring molekul atau gelas berpori dipak dalam sebuah kolom
dimana komponen-komponen campuran dipisahkan dengan adanya fase gerak.
Kromatografi kolom dan kromatografi lapis tipis (TLC) merupakan teknik
pemisahan yang masuk golongan ini. 

c. Ion Exchange

Teknik ini menggunakan zeolitas, resin organik atau anorganik sebagai

penukar ion. Senyawaan yang mempunyai ion-ion dengan afinitas yang berbeda
terhadap resin yang digunakan dapat dipisahkan. Analisis asam-asam amino
adalah yang umum dilakukan dengan cara ini. Contoh lain adalah asam-asam
nukleat dan analisis garam-garam anorganik.

d. Ekslusi : - GP (Gel Permeation)- GF (Gel Filtration)

Dalam teknik ini, gel non ionik berpori banyak dengan ukuran yang sama
digunakan untuk memisahkan campuran berdasarkan perbedaan ukuran
molekulnya (BM). Molekul-molekul yang kecil akan memasuki pori-pori dari gel

6
sedangkan molekul besar akan melewati sela-sela gel lebih cepat bila
dibandingkan dengan molekul yang melewati pori-porinya. Jadi urutan elusi
mula-mula adalah molekul yang lebih besar, molekul sedang, dan terakhir
molekul yang paling kecil. Bila sebagai penyaring digunakan sephadex (gel yang
hidrofil) maka teknik ini disebut gel filtration chromatography dan bila digunakan
gel yang hidrofob (polystyrene-divinylbenzene) disebut gel permeation
chromatography.

Teknik kromatografi yang umum digunakan di bidang farmasi yaitu

kromatografi kolom, kromatografi kertas, kromatografi lapis tipis, kromatografi
gas, dan kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT).

2.2 HPLC

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) atau High Pressure Liquid

Chromatography (HPLC) merupakan salah satu metode kimia dan fisikokimia.
KCKT termasuk metode analisis terbaru yaitu suatu teknik kromatografi dengan
fasa gerak cairan dan fasa diam cairan atau padatan.

2.2.1 Sejarah HPLC

Pada awal tahun 60an adalah awal dimulainya sejarah tentang HPLC.
Selanjutnya pada akhir tahun 70an dimulainya peningkatan material material
kolom dan intrumentasi dari HPLC.

Pada awal tahun 80an HPLC mulai terkenal, dan mulai banyak digunakan
di dunia industri. Semenjak 2006 banyak perusahaan yang mengembangkan
instrumen analisis HPLC. Penamaan yang digunakan untuk alat yang merupakan
perkembangan dari HPLC ini berbeda beda setiap perusahaan yang
memproduksinya, dan nama intrumen tersebut antara lain Ultra high Performance
Liquid Chromatography (UPLC), Rapid Resolution Liquid Chromatography
(RRLC), Ultra Fast Liquid Chromatography (UFLC), dan Rapid Separation
Liquid Chromatography (RSLC).

Banyak kelebihan metode HPLC ini jika dibandingkan dengan metode

kromatografi cair klasik. Kelebihan itu antara lain :

 Mampu memisahkan molekul-molekul dari suatu campuran

7
  Mudah melaksanakannya

 Kecepatan analisis dan kepekaan yang tinggi

 Dapat dihindari terjadinya dekomposisi / kerusakan bahan yang

dianalisis

 Resolusi yang baik

 Dapat digunakan bermacam-macam detektor

 Kolom dapat digunakan kembali

 Mudah melakukan “sample recovery” (Johnson, 1991).

HPLC secara mendasar merupakan perkembangan tingkat tinggi dari

kromatografi kolom. Selain dari pelarut yang menetes melalui kolom dibawah
grafitasi, didukung melalui tekanan tinggi sampai dengan 400 atm. Ini membuat
waktu analisis menjadi lebih cepat.

HPLC memperbolehkan penggunaan partikel yang berukuran sangat kecil

untuk material terpadatkan dalam kolom yang mana akan memberi luas
permukaan yang lebih besar berinteraksi antara fase diam dan molekul-molekul
yang melintasinya. Hal ini memungkinkan pemisahan yang lebih baik dari
komponen-komponen dalam campuran.

Perkembangan yang lebih luas melalui kromatografi kolom

mempertimbangkan metode pendeteksian yang dapat digunakan. Metode-metode
ini sangat otomatis dan sangat peka.

2.2.2 Jenis HPLC menurut polaritas fasa gerak dan fasa diam.
Jika dilihat dari sifat polaritas fase gerak dan diamnya maka HPLC dapat
dibagi menjadi 2, yaitu :

1. Fase Normal

Walaupun nama fase ini adalah fase normal, teknik ini merupakan teknik
yang tidak biasa digunakan dalam analisis rutinitas. Pada fase ini kolom yang
digunakan mempunyai polaritas yang lebih tinggi jika di badingkan dengan
eluennya.

8
 Senyawa-senyawa polar dalam campuran melalui kolom akan melekat
lebih lama pada silika yang polar dibanding degan senyawa-senyawa non polar.
Oleh karena itu, senyawa yang non polar kemudian akan lebih cepat melewati
kolom.

2. Fase Terbalik

Pada teknik fase terbalik ini polaritas eluen lebih tinggi jika di bandingkan
dengan kolom yang digunakan. Teknik ini mempunyai kelebihan, yaitu eluen
yang digunakan lebih murah, oleh karena itu teknik ini sering kali digunakan di
industri untuk analisis sehari hari.

Senyawa-senyawa non polar dalam campuran akan cenderung membentuk

atraksi dengan gugus hidrokarbon karena adanya dispersi gaya van der Waals.
Senyawa-senyawa ini juga akan kurang larut dalam pelarut karena membutuhkan
pemutusan ikatan hidrogen sebagaimana halnya senyawa-senyawa tersebut berada
dalam molekul-molekul air atau metanol. Oleh karenanya, senyawa-senyawa ini
akan menghabiskan waktu dalam larutan dan akan bergerak lambat dalam kolom.

2.2.3 Jenis elusi HPLC

Elusi pada kromatografi cair kinerja tinggi dapat dibagi menjadi dua
sistem yaitu:

 Sistem elusi isokratik.

Pada sistem ini, elusi dilakukan dengan satu macam atau lebih fase gerak
dengan perbandingan tetap, atau dapat dikatakan komposisi fase gerak tetap
selama elusi.

 Sistem elusi gradien.

Pada sistem ini, elusi dilakukan dengan campuran fase gerak yang
perbandingannya berubah-ubah dalam waktu tertentu, komposisi fase gerak
berubah-ubah selama elusi.(Azhar,2010)

9
2.2.4 Skema alat HPLC

Eluen Detektor

Pompa Display
Kolom

Injektor Buangan

Gambar 2. Skema alat HPLC

(Sumber: Efendy, 2004)

Gambar diatas memperlihatkan alat atau komponen dasar yang biasa

digunakan pada alat HPLC, yaitu :

1. Eluen, yang berfungsi membawa sampel yang diperiksa ke dalam kolom

pemisah. Di dalam kromatografi cair komposisi dari solven atau fasa gerak
adalah salah satu dari variabel yang mempengaruhi pemisahan. Terdapat
variasi yang sangat luas pada solven yang digunakan untuk KCKT, tetapi
ada beberapa sifat umum yang sangat disukai, yaitu fasa gerak harus :

a. Murni, tidak terdapat kontaminan

b. Tidak bereaksi dengan wadah (packing)

c. Sesuai dengan detektor

d. Melarutkan sampel

e. Memiliki visikositas rendah

f. Bila diperlukan, memudahkan "sample recovery"

g. Diperdagangan dapat diperoleh dengan harga murah (reasonable price)

Umumnya, semua solven yang sudah digunakan langsung dibuang

karena prosedur pemumiannya kembali sangat membosankan dan mahal
biayanya. Dari semua persyaratan di atas, persyaratan a sampai dengan d
merupakan yang sangat penting.

10
2. Pompa, yang berfungsi mendorong eluent dan sampel agar masuk ke dalam
kolom, dan kecepatan alir atau tekanan dapat diatur.

3. Injektor, tempat memasukkan sampel dan kemudian sampel didistribusikan

ke dalam kolom.

4. Kolom pemisah, berfungsi memisahkan komponen komponen yang berada

pada sampel. Kolom adalah jantung kromatografi. Berhasil atau gagalnya
suatu analisis tergantung pada pemilihan kolom dan kondisi percobaan yang
sesuai. Kolom dapat dibagi menjadi dua kelompok :

 Kolom analitik : Diameter dalam 2 -6 mm. Panjang kolom tergantung

pada jenis material pengisi kolom. Untuk kemasan pellicular, panjang
yang digunakan adalah 50 -100 cm. Untuk kemasan poros
mikropartikulat, 10 -30 cm. Dewasa ini ada yang 5 cm.
 Kolom preparatif: umumnya memiliki diameter 6 mm atau lebih besar
dan panjang kolom 25 -100 cm.

5. Oven, merupakan alat yang digunakan untuk mengkondisikan suhu kolom

yang digunakan.

6. Detektor, suatu detektor dibutuhkan untuk mendeteksi adanya komponen

sampel di dalam kolom (analisis kualitatif) dan menghitung kadarya
(analisis kuantitatif). Detektor yang baik memiliki sensitifitas yang tinggi,
gangguan (noise) yang rendah, kisar respons linier yang luas, dan memberi
respons untuk semua tipe senyawa. Suatu kepekaan yang rendah terhadap
aliran dan fluktuasi temperatur sangat diinginkan, tetapi tidak selalu dapat
diperoleh.

Sebagian besar detektor yang dipakai pada KCKT tidak merusak sehingga
komponen cuplikan dapat dikumpulkan dengan mudah ketika mereka
melewati detektor. Biasanya pelarut dihilangkan dengan mudah dengan cara
penguapan, kecuali pada pertukaran ion yang memerlukan tatakerja khusus.
(Johnson, 1991)

7. Rekorder data, berfungsi untuk merekam dan mengolah data (weiss. J ,

1995)

11
2.3 UPLC

UPLC merupakan salah satu dari KCKT, dan prinsip dari alat ini sama
persis dengan HPLC. Perbedaannya dengan HPLC adalah tekanan pada sistem
kromatografi. Pompa HPLC mampu menghasilkan tekanan yang tinggi tetapi
tidak setinggi UPLC (HPLC < 4000 Psi, UPLC > 4000 Psi) dapat menghasilkan
tekanan hingga 15000 Psi.

Komponen dari alat ini serupa dengan Instrumen HPLC, alat ini memiliki
pompa untuk mengalirkan eluen, injektor, kolom, oven dan detektor. Tekanan
yang tinggi merupakan hasil gabungan dari pompa dan kolom berbeda yang
digunakan pada HPLC.

Pompa, pompa yang digunakan di UPLC sanggup bekerja hingga tekanan

15000 Psi.

Kolom, kolom yang digunakan mempunyai ukuran partikel yang jauh

lebih kecil jika di bandingkan dengan kolom yang digunakan pada HPLC
(< 3.5µm).

2.3.1 Detektor pada UPLC

Detektor, pada alat UPLC ini alat detektor yang digunakan umumnya
serupa dengan detektor pada alat HPLC, detektor yang sering digunakan adalah :

1. Detektor TUV (Tunable Ultraviolet)

Detektor ini merupakan detektor absorbansi sinar UV dan visible.

Detektor ini memiliki dua pilihan sel, sel analitik volume 500 nanoliter dengan
panjang 10 mm, dan sel sensivitas tinggi volume 2.4 mikroliter dengan panjang 25
mm. Detektor TUV ini dapat beroperasi pada panjang gelombang dari 190 nm
hingga 700 nm.

Detektor ini merupakan detektor yang digunakan pada penelitian ini.

Detektor ini menggunakan prinsip yang sama dengan spektrofotometri, yaitu
menggunakan prinsip hukum lambert beer, yaitu : ”Bila suatu cahaya
monokromatis melalui suatu medium transparan, maka turunnya intensitas
cahaya yang dipancarkan sebanding dengan bertambahnya tebal dan kepekatan
medium” .

12
 Hukum tersebut dapat dituliskan dengan rumus sebagai berikut :

A = a. b. c atau dalam keadaan lain dapat dituliskan:

A = ε. b. c
dimana:
A = absorbansi

a = tetapan absorpsivitas

ε = koefisien ekstingsi molar

b = tebal kuvet yang dilalui sinar (cm)

c = konsentrasi (mg /L) atau (mol /L)

Tebal kuvet yang dilalui sinar (b) dan konsentrasi (c) adalah faktor yang
sangat menentukan bagi harga absorbansi sehingga harus ditunjukkan secara jelas.
Jika konsentrasi dalam prosedur analisis dinyatakan sebagai mol / L (molar) maka
tetapan disebut absorptivitas molar (ε).Akan tetapi bila konsentrasi dinyatakan
sebagai gram/ L maka tetapan disebut absorptivitas (a). (Underwood A L,1990)

2. Detektor PDA (photodiode array)

Detektor ini merupakan detektor absorbansi sinar UV dan visible, dan

dapat beroperasi pada panjang gelombang antara 190 nm hingga 500 nm. Detektor
ini sama seperti detektor TUV memiliki dua pilihan sel, sel analitik volume 500
nanoliter dengan panjang 10 mm, dan sel sensivitas tinggi volume 2.4 mikroliter
dengan panjang 25 mm. Kelebihan detektor ini jika dibandingkan dengan TUV
adalah mendeteksi pada semua panjang gelombang, sehingga data yang
didapatkan berupa 3 dimensi yaitu, Panjang gelombang, absorbansi ,dan
absorbansi.

3. Detektor ELS (evaporative light Scattering)

Detektor ini dilengkapi nebulizer yang telah di desain khusus untuk,

UPLC.

Dengan tekanan yang tinggi, maka komponen yang dipisahkan akan cepat
terpisah, dan lebih cepat terpisah jika dibandingkan dengan HPLC karena
mempunyai tekanan yang lebih besar dari HPLC.

13
2.4 Uji Kesesuaian Sistem

Pengujian kesesuaian sistem dilakukan untuk mengetahui apakah alat,

metode dan sistem kromatografi cair kinerja tinggi yang digunakan dapat
memberikan hasil yang baik dalam proses analisis. Uji kesesuaian sistem
dilakukan dengan perhitungan menggunakan data kromatogram dari hasil lima
kali pengulangan injeksi 20 µL standar dengan konsetrasi yang sama ke dalam
alat KCKT. Berikut merupakan contoh kromatogram KCKT :

Gambar 3. Contoh kromatogram KCKT

Menurut Farmakope Amerika (USP), suatu sistem dikatakan sesuai jika

memenuhi persyaratan salah satu uji seperti resolusi (daya pisah), presisi, faktor
asimetri puncak, efisiensi kolom dan faktor kapasitas.

2.4.1 Resolusi (Daya Pisah)

Dalam kromatografi gas (GC) dan kromatografi cair kinerja tinggi
(KCKT/HPLC), resolusi didefinisikan sebagai perbedaan antara waktu retensi 2
puncak yang saling berdekatan (ΔtR = tR2-tR1) dibagi dengan rata-rata lebar puncak
(W1 + W2)/2

2.4.2 Simpangan Baku Relatif

Uji simpangan baku relatif kesesuaian sistem dilakukan dengan
perhitungan menggunakan data kromatogram dari hasil lima kali pengulangan
injeksi standar dengan konsentrasi yang sama ke dalam alat KCKT. Batas
simpangan baku relatif uji kesesuaian sistem adalah 2.0% (Ditjen POM, 1995)

14
 Rumus untuk perhitungan simpangan baku relatif adalah :

i =n

SB=
√ ∑ ( Xi- X )2
i =1
n−1

SB
SBR= ×100 %
X
Keterangan :
SD = Standar deviasi/ simpangan baku (SB)
Xi – X = Simpangan dan observasi terhadap rata-rata sampel
N = Banyaknya data
%RSD = Relatif standar deviasi/ simpangan baku relatif
X = Rata-rata kadar

2.4.3 Faktor asimetri (tailing factor, TF)

Jika puncak yang akan dikuantifikasi adalah asimetri (tidak setangkup),
maka suatu perhitungan asimetrisitas merupakan cara yang berguna untuk
mengontrol atau mengkarakterisasi sistem kromatografi. Puncak asimetri muncul
karena berbagai faktor. Peningkatan puncak yang asimetri akan menyebabkan
penurunan resolusi, batas deteksi, dan standar deviasi.

Gambar 4. Contoh perhitungan faktor asimetri

( a+b)
Faktor Asimetri (TF)=
2a

Keterangan : a = ½ Puncak awal

b = ½ Puncak ekor

h = Tinggi puncak

15
 Gambar tersebut menunjukkan bagaimana menghitung nilai faktor
asimetri (tailing factor, TF). Kromatogram yang memberikan harga TF =1
menunjukkan bahwa kromatogram tersebut bersifat setangkup atau simetris.
Harga TF > 1 menunjukkan bahwa kromatogram mengalami pengekoran (tailing).
Semakin besar harga TF maka kolom yang dipakai semakin kurang efisien.
Dengan demikian harga TF dapat digunakan untuk melihat efisiensi kolom
kromatografi.

2.4.4 Efisiensi Kolom 

Ukuran efisiensi kolom adalah jumlah lempeng (plate number, N) yang
didasarkan pada konsep lempeng teoritis pada distilasi. Jumlah lempeng (N)
dihitung dengan:

Yang mana:

tR : waktu retensi solut

σt : simpangan baku lebar puncak

Wh/2 : lebar setengah tinggi puncak

Wb : lebar dasar puncak

16
 Gambar dibawah menjelaskan bagaimana cara menghitung tR; Wh/2; Wb;
dan σ suatu puncak kromatogram.

Gambar 5. Cara mengukur tR; Wh/2; Wb; dan σ suatu

puncak kromatogram

2.4.5 Kapasitas kolom

Faktor kapasitas kolom dirumuskan dengan:

Keterangan:

k’ = faktor kapasitas

tR = merupakan waktu retensi solut

tM = waktu retensi fase gerak (waktu retensi solut yang tidak tertahan
sama sekali).

Volume retensi yang bersesuaian juga dapat digunakan karena volume

retensi berbanding lurus dengan waktu retensi. Volume retensi kadang-kadang
terpilih dibanding waktu retensi karena tR bervariasi dengan kecepatan alir.
Volume retensi selanjutnya dihitung dengan rumus:

V = (Vr-Vm)/Vm

Keterangan :

Vr = volume retensi solut

Vm = volume retensi fase gerak (waktu retensi solut yang tidak tertahan
sama sekali).

17
 Syarat kesesuaian sistem yang digunakan di internal Quality Control (QC)
PT. Kalbe Farma adalah :

Tabel 1. Syarat kesesuaian sistem PT. Kalbe Farma Tbk

SYARAT

Faktor Asimetri < 2,0

Simpangan Baku Relatif < 2,0 %

Resolusi > 1.5

2.5 Verifikasi

Verifikasi merupakan proses pembuktian bahwa laboratorium uji mampu

mendemonstrasikan bahwa metode analisis yang digunakan memiliki kelayakan
kinerja untuk melakukan sebuah penetapan rutin sesuai dengan karakteristik
kinerja metode. Hal ini mensyaratkan dilakukannya pengujian terhadap parameter
kinerja metode misalnya presisi dan akurasi.

Pengulangan perlu dilakukan jika dalam tahapan analisis terindikasi

perlunya dilakukan modifikasi metode. Verifikasi juga harus dilakukan jika:

 Terjadi pergantian instrumen analisis

 Terjadi pergantian pereaksi yang spesifik
 Terjadi perubahan pada pengaturan laboratorium yang dapat
mempengaruhi hasil analisis
 Metode digunakan pertama kali oleh staf baru
 Metode telah digunakan dalam waktu yang cukup lama (Wood et
al, 2004).

Pada penelitian ini parameter verifikasi yang dilakukan meliputi :

2.5.1 Selektifitas
Selektifitas adalah kemampuan metode analisis untuk membedakan analat
yang akan ditetapkan terhadap senyawaan lain yang terdapat dalam sampel.
Selektifitas atau spesifitas suatu metode menyatakan kemampuan penetapan
secara akurat dan khusus dari komponen lain yang dicurigai dapat mengganggu

18
kondisi pengujian. Pengujian selektifitas pada KCKT mengacu pada nilai resolusi
yang dihasilkan dari kromatogram.

2.5.2 Presisi
Presisi didefinikan sebagai nilai kedekatan dari hasil analisis yang dapat
diterima, dengan tujuan mengetahui kesalahan akibat operator. Presisi diterapkan
pada pengukuran berulang (Repeatability) yang menunjukkan hasil pengukuran
individual didistribusikan di sekitar nilai rata-rata dengan mengabaikan letak nilai
rata-rata terhadap nilai yang sebenarnya.

Pengujian repeatability ini dilakukan pada contoh, analis, peralatan dan

laboratorium yang sama pada waktu yang berdekatan. Penetapan repeatability
dilakukan dengan melakukan pengujian contoh minimal enam kali terhadap
sampel dengan konsentrasi analit 100 % kemudian ditentukan nilai standar deviasi
dan koefisien variasi contoh (BPOM, 2006).

2.5.3 Akurasi
Akurasi menyatakan seberapa dekat nilai hasil pengukuran dengan nilai
sebenarnya (true value) atau nilai yang dianggap benar (accepted value). Nilai
akurasi dapat ditunjukkan oleh nilai keperolehan kembali (% recovery).

Pemeriksaan akurasi pada produk obat pada umumnya dilakukan dengan

cara mengukur matriks sampel telah diketahui konsentrasinya pada konsentrasi
yang berbeda, dibandingkan dengan nilai sebenarnya, dan dihitung nilai
keperolehan kembali (% recovery) dengan rumus :

kadar terukur
% recovery= ×100 %
kadar sebenarnya
2.6 Batuk

2.6.1 Pengertian dan Fisiologi Batuk

Batuk adalah suatu refleks fisiologi pada keadaan sehat maupun sakit dan
dapat ditimbulkan oleh berbagai penyebab. Refleks batuk lazimnya diakibatkan
oleh rangsangan dari selaput lendir saluran pernafasan, yang terletak dibeberapa
bagian dari tenggorokan. Batuk merupakan suatu mekanisme fisiologi yang

19
bermanfaat untuk mengeluarkan dan membersihkan saluran pernafasan dari
dahak, zat-zat perangsang asing, dan unsur infeksi. Dengan demikian, batuk
merupakan suatu mekanisme perlindungan (Halim,1996).

2.6.2 Penyebab Batuk

Refleks batuk dapat timbul akibat radang (infeksi saluran pernafasan),
alergi (asma), sebab-sebab mekanis (asap rokok, debu, tumor paru-paru),
perubahan suhu yang mendadak, dan rangsangan kimiawi (gas, bau). Penyebab
utama batuk adalah infeksi virus misalnya influenza, selesma, dan radang pada
cabang serta hulu tenggorokan. Penyebab lain dari batuk antara lain peradangan
pada paru-paru, tumor dan juga akibat dari suatu efek samping obat (Tan dan
Kirana, 1987).

2.6.3 Jenis-Jenis Batuk

 Batuk produktif

Merupakan suatu mekanisme perlindungan dengan fungsi mengeluarkan

zat-zat asing ( kuman, debu dan sebagainya ) dan dahak dari batang tenggorokan.
Maka, jenis batuk ini tidak boleh ditekan.

 Batuk Non Produktif

Bersifat kering tanpa adanya dahak, misalnya pada batuk rejan atau
memang pengeluarannya memang tidak mungkin. Batuk jenis ini tidak ada
manfaatnya, maka haruslah dihentikan (Tan dan Kirana, 1987).

2.7 Obat Batuk

Obat adalah suatu bahan atau paduan bahan yang dimaksudkan untuk
digunakan untuk menetapkan diagnosis, mencegah, mengurangi, menghilangkan,
menyembuhkan penyakit atau gejala-gejala penyakit, luka-luka, kelainan pada
manusia atau hewan dan untuk memperindah badan atau bagian badan lainnya
(Anief, 1994).

Obat dikelompokkan atau digolongkan berdasarkan :

a. Menurut letak aksi anatomis, contohnya obat-obat yang bekerja

pada susunan syaraf pusat.

20
 b. Menurut penggunaan terapi (berdasarkan khasiat), contohnya obat
hipnotik (menidurkan)

c. Menurut mekanisme aksi farmakologis

d. Menurut sumber asli atau sifat kimia, penggunaan dan sifat

farmakoterapi. Penggolongan obat Menurut Undang-Undang :

e. Obat yang dapat dijual bebas.

f. Obat yang termasuk dalam golongan Obat Bebas Terbatas (dulu

disebut daftar W), yaitu obat keras dengan batasan jumlah dan
kadar isi berkhasiat dan harus ada tanda peringatan (P) boleh dijual
bebas.

g. Obat keras (dulu disebut obat daftar G = gevaaljik = berbahaya)

yaitu obat berkhasiat keras yang untuk memperolehnya harus
dengan resep dokter.

h. Obat narkotik (dulu disebut obat daftar O = opiat) untuk

memperolehnya harus dengan resep dokter dan apotik diwajibkan
melaporkan jumlah dan macamnya. Selain penggolongan obat
menurut undang-undang tersebut diawasi pula penggunaan obat
bahan psikotropik.

Yang disebut obat bebas yaitu obat yang tidak digolongkan sebagai obat
keras, obat psikotoprik, obat narkotik, maupun obat bebas terbatas.(Yahya,1993)

Obat batuk dan pilek digunakan untuk menghilangkan gejala penyakit

sehingga disebut simtomatik. Batuk dan pilek menyerang saluran pernapasan
bagian atas dan seringkali mengganggu aktivitas sehari-hari. Obat batuk dan pilek
dapat digunakan bila dirasakan gejala sudah mengganggu.

Pada umumnya obat batuk akan mengandung satu atau lebih komponen
berikut, yaitu ekspektoran (berkhasiat untuk memudahkan mengeluarkan dahak
melalui refleks batuk) dan antihistamin (zat untuk mencegah atau meredam aksi
alergi). Ada pula pabrik farmasi yang menambah dengan Antitusif (zat peredam
batuk), baik yang berasal dari narkotika, maupun yang bukan narkotik. Akhir-
akhir ini ada pula yang menambahkan bahan Mukolitik (pengencer dahak yang

21
kental), dan Surfaktan (bahan pencegah melekatnya dahak pada dinding saluran
pernapasan dan diharapkan dapat memperlancar pengeluaran dahak melalui
refleks batuk). (Danusantoso, 2001).

2.7.1 Dextromethorphan HBr

Dextromethorphan HBr merupakan derivat fenantren non-narkotik sintesis
berkhasiat menekan rangsangan batuk, yang sama kuatnya dengan kodein tapi
bertahan lebih lama. Tidak berkhasiat analgetis, sedatif, sembelit, atau adiktif,
maka tidak termasuk daftar narkotika. Mekansime kerjanya berdasarkan
peningkatan ambang pusat batuk di otak. Pada penyalahgunaan dengan dosis
tinggi dapat terjadi efek stimulasi SSP dengan menimbulkan semacam euforia,
maka kadang kala digunakan oleh pecandu obat-obatan. Efek sampingnya hanya
ringan dan terbatas pada rasa mengantuk, termangu-mangu, pusing, nyeri kepala
dan gangguan lambung usus. (Tjay, 2010)

Dibawah ini merupakan struktur bangun, dan informasi fisik tentang

Dextromethorphan HBr :

Gambar 6. Struktur Dextromethorphan HBr

(Sumber: Jl Donato et. al, 2012)

Nama Kimia : 3-Metoksi-17-Metil-9α,13α, 14α,-Morfinan hidrobromida

Rumus Empiris : C18H25NO.HBr.H2O

Berat Molekul : 370,33

22
Pemerian : Hablur hampir putih atau serbuk hablur, bau lemah.
Meleleh pada suhu lebih kurang 113°C.

Kelarutan : Agak sukar larut dalam air, mudah larut dalam etanol dan
kloroform, tidak larut dalam eter.

(Ditjen POM, 1995)

2.7.2 Diphenhydramine HCl

Diphenhydramine HCl berfungsi sebagai penekan batuk dan mempunyai
efek antihistamin (antialergi) dan mempunyai manfaat mengurangi batuk kronik
pada bronkitis. Memiliki efek samping yaitu pengaruh pada kardiovaskular dan
SSP seperti sedasi, sakit kepala, gangguan psikomotor, gangguan darah, gangguan
saluran cerna, reaksi alergi, efek antimuskarinik seperti retensi urin, mulut kering,
pandangan kabur dan gangguan saluran cerna, palpitasi dan aritmia, hipotensi,
reaksi hipersensitivitas, ruam kulit, reaksifotosensitivitas, efek ekstrapiramidal,
bingung, depresi, gangguan tidur, tremor, konvulsi, berkeringat dingin, mialgia,
paraestesia, kelainan darah, disfungsi hepar, dan rambutrontok.
(http://www.diskes.jabarprov.go.id/InformasiObat)

Berikut ini merupakan rumus bangun dan data fisik dari Diphenhydramine
HCl :

Gambar 7. Struktur Diphenhydramine HCl

+
(Sumber: El-Sayed et. al, 2011)

Nama Kimia : 2-(diphenylmethoxy)-N,N-dimethylethylamine hydrochloride

Rumus Empiris : C17H21NO•HCL

23
Berat Molekul : 291.82

Pemerian : Hablur kristal putih atau serbuk kristal putih, dan tidak
berbau.

Kelarutan : Sangat larut dalam air dan Alkohol.

24
 BAB III
METODOLOGI PENELITIAN

3.1 Waktu dan Tempat

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Quality Control

PT. Kalbe Farma TBK dari bulan Maret 2012 hingga Mei 2012.

3.2 Bahan dan Alat

3.2.1 2 Bahan yang digunakan :

Bahan yang digunakan adalah working standar Dextromethorphan HBr
dan Diphenhydramine HCl, asetonitril untuk HPLC , asam trifloroasetat (TFA),
dan aquabidest.

3.2.2 Alat yang digunakan :

Alat yang digunakan adalah HPLC Waters 2487; UPLC Waters; vial
HPLC Waters; vial UPLC Waters; syring 10 mL; penyaring 0.45 nm; penyaring
0.2 nm; labu ukur 50 mL; labu ukur 20 mL; pipet ukur 2.0 mL; pipet serologi 10
mL; ultrasonic; vortex; sentrifuse; botol eluen; dan neraca analitik Metler Toledo.

3.3 Metode Penelitian

3.3.1 Sistem Kromatografi HPLC :

Sistem kromatografi HPLC yang digunakan mempunyai perbandingan

fasa gerak asetonitril dengan trifluoro acetic acid (TFA) 0.1% sebanyak 38:62,
volume injeksi 20 µL, Jenis kolom Waters Atlantis dc 18 4.6 x 150 mm dengan
ukuran partikel 5 µm, detektor UV dengan panjang gelombang 220 nm, laju alir
1.0 mL/menit, dan dengan suhu ruangan (tanpa oven).

3.3.2 Sistem Kromatografi UPLC

Sistem kromatografi UPLC yang digunakan mempunyai perbandingan

fasa gerak asetonitril dengan trifluoro acetic acid (TFA) 0.1% sebanyak 38:62,
volume Injeksi 1.4 µL, Jenis kolom Acquity UPLC HSS T3 2.1 mm x 50 mm
dengan ukuran partikel 1.8 µm, detektor UV dengan panjang gelombang 220 nm,
laju alir 0.20 mL/menit, 0.30 mL/menit, dan 0.4 mL/menit dengan suhu ruangan
(tanpa oven).

25
3.3.3 Preparasi standar

Ditimbang 62.5 mg working standar Diphenhydramine HCl dan 37.5 mg

working standar Dextromethorphan HBr. Dimasukkan kedalam labu ukur 50 mL
dilarutkan, dihimpitkan dengan aquabidest, dan dipipet sebanyak 2.0 mL kedalam
labu ukur 20 mL. Larutan ditambahkan dengan methanol hingga tanda tera
kemudian dihomogenkan (Larutan Standar-> 125 µg/mL Diphenhydramine HCl,
dan 75 µg/mL Dextromethorphan HBr)

3.3.4 Preparasi sampel

Ditentukan berat jenis sampel dengan piknometer, ditimbang sebanyak 2.5

kali berat jenis sampel kedalam labu ukur 50 mL sebanyak 6 kali, ditambahkan
aquabidest sebanyak 10 mL, disonikasi selama 15 menit, ditambahkan metanol pa
hingga tanda batas, divorteks selama 5 menit, disonikasi kembali selama 15 menit,
larutan dihomogenkan, dituangkan ke dalam tabung sentrifuse, dan disertrifuse
selama 15 menit (Filtrat = Larutan Sampel).

Kandungan teoritis Dextromethorphan HBr dan Diphenhydramine HCl

yang tertera pada etiket obat batuk yang diperiksa adalah Dextromethorphan HBr
sebesar 7.5 mg/ 5 mL, dan Diphenhydramine HCl 12.5 mg / 5 mL.

3.3.5 Uji kesesuaian sistem Dextromethorphan HBr dan Diphenhydramine HCl

menggunakan HPLC.

Disaring larutan standar menggunakan filter 0.45 µm. Diinjeksikan larutan

standar dan sampel pada laju alir 1.0 mL/menit. Dihitung nilai parameter
kesesuaian sistennya yang meliputi resolusi (daya pisah), presisi, dan faktor
asimetri puncak.

3.3.6 Pencarian laju alir yang optimal pada UPLC.

Pencarian laju alir yang optimal dilakukan dengan membandingkan tiga

nilai parameter uji kesesuaian sistem yang meliputi resolusi (daya pisah),
simpangan baku relatif dan faktor asimetri pada laju alir 0.20 mL/menit, 0.30
mL/menit, dan 0.40 mL/menit.

Disaring larutan standar menggunakan filter 0.20 µm, diinjeksikan larutan

standar pada laju alir 0.20 mL/menit, 0.30 mL/menit, dan 0.40 mL/menit

26
sebanyak 5 kali. Dibandingkan nilai parameter uji kesesuaian sistemnya pada
masing masing laju alir yang meliputi resolusi , simpangan baku relatif area
puncak , dan faktor asimetri puncak.

Dilakukan verifikasi terhadap laju alir yang memiliki nilai kesesuaian

sistem paling baik.

3.3.7 Verifikasi laju alir baru.

Verifikasi yang dilakukan meliputi parameter resolusi (daya pisah),

presisi, dan akurasi.

3.3.7.1 Resolusi

Larutan standar disaring menggunakan filter 0.20 µm, diinjeksikan ke

dalan sistem UPLC sebanyak 5 kali dengan laju alir yang memiliki nilai parameter
kesesuaian sistem paling baik. Dihitung nilai resolusi dari kromatogram
Dextromethorphan HBr dan Diphenhydramine HCl yang dihasilkan.

3.3.7.2 Presisi

Larutan standar disaring menggunakan filter 0.20 µm, diinjeksikan ke

dalan sistem UPLC sebanyak 10 kali dengan laju alir yang memiliki nilai
parameter kesesuaian sistem paling baik. Dihitung nilai simpangan baku relatif
area dari kromatogram Dextromethorphan HBr dan Diphenhydramine HCl yang
dihasilkan.

3.3.7.3 Akurasi

Dicampurkan sejumlah zat aktif yang telah ditimbang seksama dengan

campuran plasebo sehingga menghasilkan campuran dengan kadar 80%, 100%
dan 120%, masing-masing diuji triplo. Disiapkan masing-masing konsentrasi
sebanyak 3 replikasi (BPOM, 2006). Diinjeksikan masing-masing dari larutan
sampel tersebut dan juga larutan standar ke dalam sistem UPLC. Dihitung kadar,
% recovery, dan simpangan baku relatif dari Dextromethorphan HBr dan
Diphenhydramine HCl.

27
 BAB IV
HASIL PENELITIAN

4.1 Uji kesesuaian sistem Dextromethorphan HBr dan Diphenhydramine HCl

menggunakan HPLC.

Pada Uji kesesuaian sistem Dextromethorphan HBr dan Diphenhydramine

HCl menggunakan HPLC dengan 5 replikasi menghasilkan kromatogram seperti
ditunjukkan gambar 8 berikut :

Gambar 8. Kromatogram pemeriksaan kadar Dextromethorphan HBr dan

Diphenhydramine HCl menggunakan HPLC.

Pada gambar 8 diatas menunjukkan hasil kromatogram Dextromethorphan

HBr dan Diphenhydramine HCl menggunakan HPLC dengan metode yang telah
tervalidasi sebelumnya dan menjadi metode pemeriksaan rutin. Dari data 5 kali
injeksi didapatkan hasil yang ditunjukkan oleh Tabel 2 dibawah ini :

28
Tabel 2. Hasil uji kesesuaian sistem Dextromethorpan HBr dan Diphenhydramine
HCl dengan HPLC

Paramete Persyarata
Zat Aktif Hasil
r n
Waktu
4.439 -
Retensi
Simpanga
0.62
Dextromethoph n Baku < 2.0%
%
an HBr Relatif
Faktor
1.465 < 2.0%
Asimetri
Resolusi - > 1.5
Waktu
5.056 -
Retensi
Simpanga
0.70
Diphenhydrami n Baku < 2.0%
%
ne HCl Relatif
Faktor
1.684 < 2.0%
Asimetri
Resolusi 1.960 > 1.5

Tabel 2 diatas menunjukkan Dextromethorphan HBr mempunyai waktu

retensi 4.439 menit dengan faktor faktor asimetri puncak 1.465, simpangan baku
relatif luas area puncak 0.62% dan resolusi 1.960 Diphenhydramine HCl
mempunyai waktu retensi 5.056 menit, faktor asimetri puncak 1.684, dan
simpangan baku relatif luas area puncak 0.70%., data lebih rinci dapat dilihat pada
lampiran 4.

Dextromethorphan HBr mempunyai waktu retensi yang lebih cepat

dikarenakan sifatnya yang lebih mudah larut dalam fasa gerak dengan komposisi
asetonitril : TFA 0.1% (dalam air) dengan perbandingan 38 : 62, jika
dibandingkan dengan Diphenhydramine HCl.

4.2 Uji kesesuaian sistem Dextromethorphan HBr dan Diphenhydramine HCl

menggunakan UPLC dengan tiga laju alir.

Pada uji kesesuaian sistem Dextromethorphan HBr dan Diphenhydramine

HCl menggunakan UPLC dengan laju alir 0.2 mL/menit, 0.3 mL/menit, dan 0.4
mL/menit dihasilkan kromatogram sebagai berikut :

29
 Gambar 9. Kromatogram pemeriksaan kadar Dextromethorphan HBr dan
Diphenhydramine HCl menggunakan UPLC dengan laju alir 0.2 mL/menit.

Gambar 10. Kromatogram pemeriksaan kadar Dextromethorphan HBr dan

Diphenhydramine HCl menggunakan UPLC dengan laju alir 0.3 mL/menit.

Gambar 11. Kromatogram pemeriksaan kadar Dextromethorphan HBr dan

Diphenhydramine HCl menggunakan UPLC dengan laju alir 0.4 mL/menit.

Dari ketiga kromatogram diatas didapatkan hasil yang ditampilkan pada

Tabel 3 dibawah ini :

30
Tabel 3. Hasil uji kesesuaian sistem Dextromethorpan HBr dan Diphenhydramine
HCl dengan UPLC

Laju Alir
Zat Aktif Parameter Hasil Syarat
(mL/menit)
0.2 1.523
Waktu Retensi 0.3 1.293 -
0.4 0.985
0.2 0.31
Simpangan Baku
0.3 0.82 < 2.0%
Relatif
Dextromethophan 0.4 1.29
HBr 0.2 0.990
Faktor Asimetri 0.3 0.982 < 2.0
0.4 0.966
0.2 -
Resolusi 0.3 - -
0.4 -
0.2 1.775
Waktu Retensi 0.3 1.505 -
0.4 1.106
0.2 0.33
Simpangan Baku
0.3 0.83 < 2.0%
Relatif
Diphenhydramine 0.4 0.58
HCl 0.2 1.323
Faktor Asimetri 0.3 1.334 < 2.0
0.4 1.374
0.2 2.239
Resolusi 0.3 2.247 > 1.5
0.4 2.109

4.2.1 Uji kesesuaian sistem dengan UPLC pada laju alir 0.2 mL/menit

Pada Tabel 3 diatas menunjukkan hasil 5 kali injeksi pada laju alir 0.2
mL/menit Dextromethorphan HBr mempunyai waktu retensi 1.523 menit, faktor
asimetri puncak 0.990 memenuhi syarat tidak lebih dari 2.000, dan simpangan
baku relatif luas area puncak 0.31% memenuhi syarat tidak lebih dari 2.00%.
Diphenhydramine HCl mempunyai waktu retensi 1.775 menit dengan faktor
asimetri puncak 1.323 memenuhi syarat tidak lebih dari 2.000, simpangan baku
relatif luas area puncak 0.33% memenuhi syarat tidak lebih dari 2.00% dan
mempunyai resolusi 2.239 memenuhi syarat tidak kurang dari 1.500%. Hasil uji

31
kesesuaian metode pada laju alir 0.2 mL/menit secara rinci dapat dilihat pada
lampiran 5.

4.2.2 Uji kesesuaian sistem dengan UPLC pada laju alir 0.3 mL/menit

Pada Tabel 3 diatas menunjukkan hasil 5 kali injeksi pada laju alir 0.3
mL/menit Dextromethorphan HBr mempunyai waktu retensi 1.293 menit dengan
faktor asimetri puncak 0.982 memenuhi syarat tidak lebih dari 2.000, dan
simpangan baku relatif luas area puncak 0.82% memenuhi syarat tidak lebih dari
2.00%. Diphenhydramine HCl mempunyai waktu retensi 1.505 menit dengan
faktor asimetri puncak 1.334 memenuhi syarat tidak lebih dari 2.000, simpangan
baku relatif luas area puncak 0.83% memenuhi syarat tidak lebih dari 2.00% dan
mempunyai resolusi 2.247 memenuhi syarat tidak kurang dari 1.500%. Hasil uji
kesesuaian metode pada laju alir 0.3 mL/menit secara rinci dapat dilihat pada
lampiran 6.

4.2.3 Uji kesesuaian sistem dengan UPLC pada laju alir 0.4 mL/menit

Pada Tabel 3 diatas menunjukkan hasil 5 kali injeksi pada laju alir 0.4
mL/menit Dextromethorphan HBr mempunyai waktu retensi 0.958 menit dengan
faktor asimetri puncak 0.966 memenuhi syarat tidak lebih dari 2.000, dan
simpangan baku relatif luas area puncak 1.29% memenuhi syarat tidak lebih dari
2.00%. Diphenhydramine HCl mempunyai waktu retensi 1.106 menit dengan
faktor asimetri puncak 1.374 memenuhi syarat tidak lebih dari 2.000, simpangan
baku relatif luas area puncak 0.58% memenuhi syarat tidak lebih dari 2.00% dan
mempunyai resolusi 2.109 memenuhi syarat tidak kurang dari 1.500%. Hasil uji
kesesuaian metode pada laju alir 0.4 mL/menit secara rinci dapat dilihat pada
lampiran 7.

4.3 Verifikasi metode pemeriksaan Dextromethorphan HBr dan

Diphenhydramine HCl menggunakan UPLC pada laju alir 0.3 mL/menit.

Verifikasi dilakukan terhadap metode yang memiliki laju alir 0.3

mL/menit dikarenakan pengujian pada laju alir ini memiliki waktu retensi lebih
cepat dari laju alir 0.2 mL/menit dan memiliki nilai resolusi, faktor asimetris, dan
simpangan baku relatif yang masih dapat diterima jika merujuk ke persyaratan
tempat dilakukannya penelitian, yang dapat dilihat pada Tabel 1. Sedangkan untuk

32
hasil uji kesesuaian sistem pada laju alir 0.4 mL/menit walaupun mempunyai
waktu retensi lebih cepat mempunyai simpangan baku relatif yang jauh lebih
besar jika di bandingkan dengan laju alir 0.2 mL/menit dan 0.3 mL/menit.

4.3.1 Resolusi

Hasil yang didapatkan dari uji selektifitas, ditunjukan oleh nilai resolusi
pada Tabel 4 di bawah ini:

Tabel 4. Hasil Uji selektifitas pada laju alir 0.3 mL/menit dengan UPLC

Pengulanga Syarat
Resolusi
n
1 2.259
2 2.244
3 2.252
> 1.5
4 2.253
5 2.228
Rata – rata 2.247

Tabel 4 diatas menunjukkan resolusi yang di hasilkan pada laju alir 0.3
mL/menit mempunyai nilai 2.247 sehingga memenuhi standar persyaratan internal
tempat penelitian yaitu senilai lebih besar atau sama dengan 1.5. Data
selengkapnya dapat dilihat pada lampiran 6.

4.3.2 Presisi

Hasil yang didapatkan dari uji presisi, untuk Dextromethorphan HBr

ditunjukan oleh nilai simpangan baku relatif pada Tabel 5 di bawah ini:

Tabel 5. Data hasil uji presisi Dextromethorphan HBr

Pengulanga
Area
n
1 358678
2 358876
3 357883
4 358031
5 359143
6 360043
7 356687
8 360203
9 355125
10 361345

33
 Rata- rata 358061
Std 1799.29
% RSD 0.50%

Tabel 5 diatas menunjukkan dengan laju alir 0.3 mL/menit, uji presisi
untuk Dextromethorphan HBr menghasilkan nilai simpangan baku relatif sebesar
0.50% sehingga memenuhi persyaratan uji presisi yaitu tidak lebih dari 2.0%.
Data selengkapnya mengenai uji presisi pada laju alir 0.3 mL/menit dapat dilihat
di lampiran 8.

Hasil uji presisi untuk Diphenhydramine HCl ditunjukkan oleh Tabel 6

dibawah ini :

Tabel 6. Data hasil uji presisi Diphenhydramine HCl

Pengulanga
Area
n
1 1111554
2 1116221
3 1125463
4 1120810
5 1132346
6 1120733
7 1113671
8 1124449
9 1115830
10 1121351
Rata- rata 1120243
Std 6214.25
% RSD 0.55%

Tabel 6 diatas menunjukkan dengan laju alir 0.3 mL/menit, uji presisi
untuk Diphenhydramine HCl menghasilkan nilai simpangan baku relatif sebesar
0.55%, sehingga memenuhi persyaratan uji presisi yaitu tidak lebih dari 2.0%.
Data selengkapnya mengenai uji presisi pada laju alir 0.3 mL/menit dapat dilihat
di lampiran 8.

4.3.3 Akurasi

34
 Hasil yang didapatkan dari uji akurasi, untuk Dextromethorphan HBr
ditunjukan oleh nilai %Recovery (nilai perolehan kembali) pada Tabel 7 di bawah
ini:

Tabel 7. Data hasil uji akurasi Dextromethorphan HBr

Kadar Kadar %
No Terhitun Teoriti Recover
g s y
1 79.85 80 99.81
2 79.88 80 99.85
3 79.86 80 99.82
4 99.92 100 99.92
5 100.22 100 100.22
6 100.30 100 100.30
7 119.92 120 99.94
8 119.95 120 99.96
9 119.93 120 99.94
Rata-rata 99.97

Tabel 7 diatas menunjukkan nilai % Recovery untuk Dextromethorphan

HBr didapatkan sebesar 100.50%, dimana persyaratan untuk nilai % Recovery
hasil uji akurasi adalah 98.00% -102.00%. Untuk data selengkapnya dapat dilihat
di lampiran 9.
Hasil uji akurasi untuk Diphenhydramine HCl ditunjukkan oleh Tabel 8
dibawah ini :
Tabel 8. Data hasil uji akurasi Diphenhydramine HCl
Kadar Kadar %
No Terhitun Teoriti Recover
g s y
1 80.40 80 100.50
2 80.40 80 100.50
3 80.41 80 100.51
4 100.54 100 100.54
5 100.49 100 100.49
6 100.48 100 100.48
7 120.61 120 100.51
8 120.57 120 100.48
9 120.55 120 100.46
Rata-rata 100.50
Tabel 8 diatas menunjukkan nilai % Recovery untuk Diphenhydramine
HCl didapatkan sebesar 99.97%, dimana persyaratan untuk nilai % Recovery hasil

35
uji akurasi adalah 98.00% -102.00%. Untuk data selengkapnya dapat dilihat di
lampiran 9.

36
 BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian pengembangan metode analisis

Dextromethorphan Hbr dan Diphenhydramine HCl dalam sediaan obat batuk cair
menggunakan UPLC, dapat disimpulkan bahwa :

1. Laju alir yang optimal pada metode analisis Dextromethorphan Hbr dan
Diphenhydramine HCl dalam sediaan obat batuk cair menggunakan UPLC
adalah 0.30 ml/menit dengan waktu retensi Dextromethorphan HBr 1.293
menit dan untuk Diphenhydramine HCl 1.505 menit yang sebelumnya pada
HPLC Dextromethorphan HBr 4.439 menit dan Diphenhydramine HCl 5.056
menit.
2. Setelah diverifikasi didapat hasil yang memenuhi persyaratan uji verifikasi
yaitu dengan resolusi 2.247 dengan persyaratan > 1.5, simpangan baku relatif
(RSD) 0.50% untuk Dextromethorphan HBr, 0.55% untuk Diphenhydramine
HCl dengan persyaratan < 2.0%, dan recovery 99.97% untuk
Dextromethorphan HBr, 100.50% untuk Diphenhydramine HCl dengan
persyaratan 98.0% - 102.0%.

5.2 Saran

Metode ini disarankan untuk divalidasi lengkap agar dapat digunakan

sebagai metode untuk pemeriksaan rutin dan dilakukan penelitian lebih lanjut
untuk pemeriksaan Dextromethorphan HBr dan Diphenhydramine HCl dalam
sediaan selain cairan ataupun sediaan cairan dengan plasebo yang berbeda.

37
 DAFTAR PUSTAKA

Ahuja S , and Rasmussen H. 2007. HPLC Method Development for

Pharmaceuticals. 1st ed. USA : Elsevier Academic Press.

Asmoro W. 2008. Ketrampilan Dasar Anastesiologi I Farmakologi Terapan.

Modul 1-E. Solo: Bagian Anastesiologi Dan Reaminasi RSUD
Dr.Moewardi Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret
Surakrta. pp 81-110.

Azhar. 2010. Penerapan Metoda Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Pada

Penetapan Kadar Kloramfenikol dalam Sediaan Kapsul. Medan:
Universitas Sumatera Utara.

Danusantoso,H. 2001. Batuk. Jakarta: Universitas Trisakti.

Ditjen POM. (1995). Farmakope Indonesia Edisi IV. Jakarta: Departemen

Kesehatan Republik Indonesia. Hal. 298.

Douglas Skoog, F. James Holler, Timothy Nieman. 1998. Principles of

Instrumental Analysis, 5th Edition. Philadelphia : Saunders College
Publishing

Effendy. 2004. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi dalam Bidang Farmasi. Medan:
Universitas Sumatra Utara.

El-Sayed et. al. 2011. Potentiometric determination of antihistaminic

diphenhydramine hydrochloride in pharmaceutical preparations and
biological fluids using screen-printed electrode. http://
www.sigmaaldrich.com /catalog/papers/21745764. Diakses tanggal 10
Mei 2012.

Halim, D. (1996). Batuk. Jakarta: Universitas Trisakti. Hal. 10.

Http://www.diskes.jabarprov.go.id/InformasiObat. Diakses tanggal 11 Mei 2012

Jl, Donato et. al. 2012. Simultaneous determination of dextromethorphan,

dextrorphan and doxylamine in human plasma by HPLC coupled to
electrospray ionization tandem mass spectrometry: application to a

38
 pharmacokinetic study. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/
22651995. Diakses tanggal 10 Mei 2012.

Johnson,E.L. 1991. Dasar Kromatografi Cair. Bandung: Institut Teknologi

Bandung.

Swartz, Michael. 2007. HPLC to UPLC Method Migration. Waters

Tan, H. T., dan Kirana, R. (1978). Obat-obat penting. Jakarta: Elex Media
Komputindo Kelompok Gramedia. Hal. 619-623

Tisnadjaja, Djadjat, Dkk. 2005. Pengkajian Kandungan Fitosterol pada Tanaman

Kedawung (Parkia roxburgii G. Don.). Bogor: Lembaga Ilmu
Pengetahuan Indonesia

Tjay,T.H dan Kirana Rahardja . 2010. Obat-Obat Penting Edisi Ketujuh. Cetakan
Pertama. Jakarta: PT. Elex Media Komputindo.

Underwood,A.L. 1990.Analisa Kimia Kuantitatif.Edisi keempat. Jakarta: Erlangga

Wood, R., L. Foster, A. Damant dan P. Key. 2004. Analytical Methods for Food
Additives. Inggris: Woodhead Publishing Ltd.

Yahya,M dan Rizali.H.Nasution. 1993. Pengantar Farmakologi Cetakan Kedua.

Medan: Pustaka Widyasarana.

Yazid,E. 2005. Kimia Fisika Untuk Paramedis. Yogyakarta: ANDI Press.

39
Lampiran
Lampiran 1. Diagram alir metodologi penelitian
Standar dan matriks sampel di preparasi
Larutan standar dan sampel
disaring menggunakan filter
Larutan sampel dan standar
diinjeksikan ke HPLC
menggunakan Laju alir awal
Dihitung Nilai parameter uji
kesesuaian sistem
Diphenhydramine HCl dan
Dextrometorphan HBr dalam
sampel
Larutan standar dan sampel
disaring menggunakan filter
Larutan standar dan sampel
di injeksi ke UPLC sebanyak
5 kali, pada laju alir
0.25mL/menit, 0.3mL/menit,
dan 0.4mL/menit
Dicek dan dibandingkan nilai
kesesuaian sistemnya
Dilakukan verifikasi terhadap
metode yang paling optimal
40
Lampiran 2. Diagram alir preparasi standar dan sampel

Preparasi larutan standar Preparasi larutan matriks sampel

Ditimbang working standar Ditetapkan berat jenis plasebo

62.5 mg Diphenhydramine HCl
dan 37.5 mg Dextrometorphan
HB Ditimbang Plasebo dan Zat aktif untuk sampel 80%, 100%, dan 120%

Labu ukur 50 mL
(dengan pelarut aquabidest)
Ditambahkan 10 mL air

Dipipet 2.0 mL Disonikasi 15 menit

Labu ukur 20 mL Dihimpitkan dengan methanol

Dihimpitkan dengan methanol Divorteks 5 menit

Larutan pembanding Disonikasi 15 menit

Disentrifuse 15 menit

Filtrat = larutan contoh

41
Lampiran 3. Rumus perhitungan uji kesesuaian system :

1) Resolusi (daya pisah)

tr 2−tr 1
Rs= 2 ∆ tr
W 1+ W 2 ¿
W 1+W 2
2

Keterangan :

tr = waktu retensi

W = lebar puncak

2) Simpangan baku relatif puncak

i =n

SB=
√ ∑ ( Xi- X )2
i =1

SB
n−1

SBR= ×100 %
X
Keterangan :
SD = Standar deviasi/ simpangan baku (SB)
Xi – X = Simpangan dan observasi terhadap rata-rata sampel
N = Banyaknya data
%RSD = Relatif standar deviasi/ simpangan baku relatif
X = Rata-rata kadar

3) Faktor asimetri puncak

44
 ( a+b)
Faktor Asimetri (TF)=
2a

Keterangan : a = ½ Puncak awal

b = ½ Puncak ekor

h = Tinggi puncak

45
Lampiran 4. Data hasil uji kesesuaian sistem Diphenhydramine HCl dan
Dextromethorphan HBr menggunakan HPLC.

46
Lampiran 5. Data hasil uji kesesuaian sistem Diphenhydramine HCl dan
Dextromethorphan HBr menggunakan UPLC dengan laju alir 0.2
mL/menit.

47
Lampiran 6. Data hasil uji kesesuaian sistem Diphenhydramine HCl dan
Dextromethorphan HBr menggunakan UPLC dengan laju alir 0.3
mL/menit.

48
Lampiran 7. Data hasil uji kesesuaian sistem Diphenhydramine HCl dan
Dextromethorphan HBr menggunakan UPLC dengan laju alir 0.4
mL/menit.

49
Lampiran 8. Data hasil uji verifikasi presisi pemeriksaan Diphenhydramine HCl
dan Dextromethorphan HBr menggunakan UPLC.

50
Lampiran 9. Data hasil uji verifikasi akurasi pemeriksaan Diphenhydramine HCl
dan Dextromethorphan HBr menggunakan UPLC.

51