Nama asisten : Dinda Lupitasari

Tanggal Praktikum : 24 Mei 2023

Tanggal Pengumpulan : 9 Juni 2023

ANALISIS KAFEIN DENGAN HIGH PERFOMANCE LIQUID

CHROMATOGRAPHY (HPLC)
FAKULTAS TEKNOLOGI INDUSTRI PERTANIAN
UNIVERSITAS PADJADJARAN

Aurelia Benedikta Demira Tobing (240210210032)

Departemen Teknologi Industri Pangan Universitas Padjadjaran, Jatinangor

Jalan Raya Bandung-Sumedang Km. 21, Jatinangor, Sumedang 40600 Telp. (022)
7798844, 779570 Fax. (022) 7795780 Email: aurelia21003@mail.unpad.ac.id

ABSTRAK
Kafein merupakan zat psikoaktif yang memiliki efek stimulan dan paling banyak
digunakan. Pengaruh oleh gaya hidup membuat konsumsi produk berkafein seperti kopi
dan minuman energi menjadi meningkat. Kafein dalam dosis rendah mampu memberikan
efek positif. Dalam studi, dikatakan bahwa 12,5-100 mg kafein dapat memberikan efek
positif dan jarang menimbulkan efek samping. Namun tidak semua produk mencantumkan
kadar kafein didalamnya sehingga perlu diwaspadai resiko efek samping yang dapat terjadi.
High Perfomance Liquid Chromatography (HPLC) merupakan kromatografi yang fase
geraknya dialirkan dengan cepat menggunakan bantuan tekanan dan hasilnya akan
dideteksi oleh instrumen. Tujuan utama dalam penggunaan kromatografi cair dalam
prosedur analisis yaitu memisahkan suatu campuran dalam sampel menjadi komponen-
komponennya. Praktikum kali ini bertujuan untuk menentukan kadar kafein dalam sampel
minuman berenergi (A), kopi hitam kaleng (B), dan kopi hitam bubuk (C). Didapat rata-
rata kandungan kafein pada sampel minuman berenergi (A) yaitu 276,63 mg; kopi hitam
kaleng (B) sebesar 282,22 mg; dan kopi hitam bubuk (C) sebesar 1010,08 mg. Disimpulkan
sampel A dan B memenuhi standar SNI 01-7152-2006 dan sampel C tidak disebabkan
karena persiapan sampel yang kurang baik atau gangguan dari senyawa pada sampel itu
sendiri.
Keywords: HPLC, kafein, kopi, minuman berenergi

PENDAHULUAN energi menjadi meningkat. Kafein dalam

Orang-orang banyak yang
menyukai kopi karena efeknya yang
mampu membuat orang segar kembali.
Hal ini disebabkan oleh kandungan kopi
berupa alkaloid xantin, yaitu kafein
(1,3,7-trimetilxantin). Kafein dikenal
sebagai jenis alkaloid yang terkandung
banyak pada biji kopi, daun teh, dan biji
cokelat. Alkaloid umumnya termasuk
kedalam golongan senyawa yang
mengandung atom nitrogen pada
strukturnya dan sering ditemui pada
tanaman. Penelitian membuktikan bahwa
kafein berefek stimulasi (Sunaryo, 1995).
Kafein merupakan zat psikoaktif yang
memiliki efek stimulan dan paling
banyak digunakan. Pengaruh oleh gaya
hidup membuat konsumsi produk
berkafein seperti kopi dan minuman
dosis rendah mampu memberikan efek
positif. Dalam studi, dikatakan bahwa
12,5-100 mg kafein dapat memberikan
efek positif dan jarang menimbulkan efek
samping (Ingrouille, 2013). Namun tidak
semua produk mencantumkan kadar
kafein didalamnya sehingga perlu
diwaspadai resiko efek samping yang
dapat terjadi. Kadar kafein di dalam kopi
diketahui bervariasi tergantung jenisnya.
Pada kopi instan terkandung 66-100 mg
kafein per sajiannya (Bawazeer, 2013).
Kadar kafein pada minuman energi
cukup tinggi yaitu sekitar 80-141 mg per
sajian (Kucer, 2010).
Kafein yang berkerja pada tubuh
bisa memberikan efek positif ataupun
efek samping. Menurut studi yang
dilakukan Bawazeer dan Alsobahi

1

(2013), menunjukkan bahwa 34,4%
peminum minuman energi yang
mengandung kafein mengaku mengalami
efek samping diantaranya palpitasi,
insomnia, nyeri kepala, tremor, gelisah,
serta mual dan muntah. Selain itu,
konsumsi kafein secara reguler dapat
menimbulkan efek ketergantungan.
Kromatografi cair telah
dikembangkan sejak tahun 1960 hingga
1970. Pada tahun 1967, Csaba Horvath
berhasil menyusun sebuah sistem
kromatografi cair modern dalam pertama
kalinya. Kromatografi cair modern ini
digunakan untuk melakukan analisa
terhadap senyawa nukleotida. Saat itu
pula, berhasil dikembangkan kolom
ukuran partikel mikro. Dari kedua hasil
penggabungan tersebut akhirnya
dikembangkan sebuah sistem
kromatografi cair kinerja tinggi yang
berkecepatan tinggi dan kemudian
dikenal sebagai Kromatografi Cair
Kinerja Tinggi (KCKT) atau High
Perfomance Liquid Chromatography
(HPLC).
Prosedur kromatografi
merupakan suatu metode pemisahan
(Roth & Blaschke, 1981). Pemisahan
dengan teknik kromatografi dilakukan
dengan mengadakan manipulasi atas
dasar perbedaan sifat-sifat fisik dari zat-
zat yang menyusun suatu campuran
(Adnan, 1997). High Perfomance Liquid
Chromatography (HPLC) merupakan
kromatografi yang fase geraknya
dialirkan dengan cepat menggunakan
bantuan tekanan dan hasilnya akan
dideteksi oleh instrumen (Gritter et al.,
1985). Tujuan utama dalam penggunaan
kromatografi cair dalam prosedur analisis
yaitu memisahkan suatu campuran dalam
sampel menjadi komponen-
komponennya. Keberhasilan dalam
penggunaan sistem kromatografi cair
memerlukan kombinasi kondisi operasi
yang tepat seperti jenis packing kolom
dan fase gerak, panjang dan diameter
kolom, kecepatan alir fase gerak,
temperatur pemisahan, dan besar sampel
(Noegrahati, 1994).
Nama asisten : Dinda Lupitasari
Tanggal Praktikum : 24 Mei 2023
Tanggal Pengumpulan : 9 Juni 2023
Praktikum kali ini bertujuan
untuk menentukan kadar kafein dalam
sampel minuman berenergi (A), kopi
hitam kaleng (B), dan kopi hitam bubuk
(C).
METODOLOGI
Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam
praktikum analisis kafein dengan High
Perfomance Liquid Chromatography
(HPLC) adalah HPLC, software
empower 2 waters, labu ukur 25 ml,
volume pipet, siringe, pompa vakum, alat
degasser.
Bahan yang digunakan dalam
praktikum kali ini adalah metanol HPLC
grade, akuabides, acetonitrile HPLC
grade, sampel minuman berenergi (A),
kopi hitam kaleng (B), dan kopi hitam
bubuk (C).
Prosedur Pembuatan Deret Larutan
Standar Kafein
Pertama, ditimbang terlebih
dahulu padatan standar kafein sebanyak
10 mg dan dimasukkan ke dalam labu
ukur 50 ml. standar kafein dilarutkan
dengan aquabidest, ditandabataskan, dan
dihomogenkan. Dipipet standar kafein
200 ppm 0 ml; 2,5 ml; 5 ml; 7,5 ml; 10
ml; 12,5 ml ke dalam labu ukur 25 ml.
kemudian ditanda bataskan dengan
aquabidest, dan dihomogenkan.
Prosedur Persiapan Sampel
Untuk minuman energi (A),
dipipet sebanyak 5 ml dan dimasukkan ke
dalam labu ukur 25 ml. Kemudian,
ditambahkan aquabidest hingga tanda
batas, dihomogenkan. Untuk kopi kaleng
(B), dipipet sebanyak 2,5 ml dan
dimasukkan ke dalam labu ukur 25 ml.
Kemudian, ditambahkan aquabidest
hingga tanda batas, dihomogenkan.
Untuk kopi bubuk (C), kopi ditimbang
sebanyak 50 gram dan dilarutkan dengan
200 ml aquabidest panas. Kemudian
larutannya disaring hingga mendapat
filtrast. Filtrat dipipet sebanyak 1 ml dan
dimasukkan ke dalam labu ukur 50 ml.
2

Kemudian ditambahkan aquabidest
hingga tanda batas, dan dihomogenkan.
Prosedur Pembuatan Kurva Standar
dan Penetapan Kadar Kafein Sampel
Pertama, deret larutan standar dan sampel
dimasukkan ke dalam vial berukuran 2
ml menggunakan jarum suntik injeksi
dan mikrofilter berukuran 0, 45 µm.
Diukur menggunakan HPLC pada
panjang gelombang 272 nm. Buat kurva
standar dengan menghubungkan
konsentrasi dengan area puncak yang
diperoleh dari hasil pengukuran,
kemudian kadar kafein dihitung
berdasarkan persamaan regresi yang
diperoleh.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kromatografi merupakan suatu
teknik pemisahan campuran berdasarkan
perbedaan distribusi dari komponen-
komponen dalam fasa gerak (mobile
phase) dan fasa diam (stationary phase).
Fasa gerak dapat berupa gas atau cairan,
sedangkan fasa diam dapat berupa cairan
atau padatan (Susanti dan Dachriyanus,
2002). Persyaratan utama dalam
kromatografi adalah fase diam tidak
boleh beraksi dengan fase gerak,
komponen sampel harus larut dalam fase
gerak dan berinteraksi dengan fase diam,
fase gerak harus bisa mengalir melewati
fase diam, dan fase diam harus terikat
kuat diposisinya (Ardianingsih, 2009).
Berdasarkan sifat-sifat dari kedua fasa,
kromatohrafi dibedakan menjadi 5
sistem, yaitu sistem padat-padat, cair-
padat, cair-cair, gas-padat, dan gas-cair.
Salah satu contoh dari sistem cair-padat
adalah metode kromatografi High
Perfomance Liquid Chromatography
(HPLC).
HPLC merupakan
pengembangan terkini dari kromatografi
cair kolom klasik pada kolom, detektor
Nama asisten : Dinda Lupitasari
Tanggal Praktikum : 24 Mei 2023
Tanggal Pengumpulan : 9 Juni 2023
yang lebih sensitif dan peka akan
kemajuan teknolohi pada pompa
bertekanan tinggi yang menyebabkan
HPLC menjadi metode dengan
pemisahan zat yang cepat dan efisien.
Pada dasarnya HPLC merupakan
perkembangan dari metode kromatografi
kolom. HPLC mengizinkan penggunaan
partikel dengan ukuran yang sangat kecil
dengan luas permukaan yang lebih besar
sehingga interaksi akan semakin besar.
Hal inilah yang membuat sistem
pemisahan akan semakin baik (Clark,
2007). Faktor-faktor yang mempengaruhi
hasil pemisahan antara lain, pengaturan
komposisi fase gerak, laju alir serta ada
tidaknya penambahan asam (Amin et al.,
2016). Prinsip kerja dari HPLC adalah
pemisahan komponen analit berdasarkan
kepolarannya, setiap campuran yang
keluar akan terdeteksi dengan detektor
dan direkam dalam bentuk kromatogram.
Dimana jumlah peak menyatakan jumlah
komponennya, sedangkan luas peak
menyatakan konsentrasi komponen pada
campuran (Hendayana, 2006).
Keuntungan dalam analisis
menggunakan HPLC adalah waktu
analisis yang relatif singkat, volume
sampel yang digunakan sedikit, dapat
menganalisis senyawa organik dan
anorganik, serta kolom yang dapat
digunakan kembali (Ardianingsih, 2009).
Akan tetapi, penggunaan HPLC memiliki
kekurangan yaitu penggunaannya yang
relatif sulit, mahal dan membutuhkan
beberapa jenis pelarut sebagai eluennya,
serta diperlukannya optimasi kondisi
untuk memperoleh hasil yang baik.
Perangkat dasar instrumen
HPLC terdiri dari microprossesor,
pompa yang ebrtekanan tinggi untuk
memompa pelarut, injektor, kolom
analitik, detektor, recorder atau data
prosessor yang masing-masing
mempunyai fungsi berbedai (Murningsih
3

& Chairul, 2000). Fungsi masing-masing
dari bagian HPLC adalah sebagai berikut
(Willard, 1988):
1. Microprossesor Control
Berfungsi untuk mengontrol atau
membuat program untuk mengatur
kecepatan alirat pelarut (flow rate),
mengatur tekanan (pressure),
mengatur komposisi (perbandingan)
pelarut, mengatur suhu injektor, serta
menentukan jumlah sampel yang
akan diinjeksikan ketika
menggunakan "automatic injection".
Lalu, mengatur suhu oven termasuk
suhu kolom, mengatur panjang
gelombang pada detektor, dan
memprogram waktu analisa yang
diperlukan saat menggunakan sistem
gradien HPLC.
2. Pompa
Berfungsi untuk mengalirkan
pelarut dari reservoar ke kolom
dengan tekanan minimal 100 arm
(1500 psi) dan maksimal 400 arm
(6000 psi), tergantung pada besaran
aliran pelarut yang berkisar antara
0,5 hingga 2 ml/min. Pompa akan
beroperasi secara terus-menerus
untuk memompa pelarut dengan
kecepatan aliran yang konstan.
Selain itu, pompa juga bertugas
membawa sampel dari injektor
melalui kolom analitik hingga
mencapai detektor, dan akhirnya
membuangnya.
3. Injektor
Berfungsi untuk memasukkan
sampel ke dalam kolom, baik secara
otomatis maupun manual.
4. Kolom
Kolom memiliki peran yang
sangat penting dalam HPLC, karena
keberhasilan analisis, baik secara
kualitatif maupun kuantitatif, serta
isolasi bahan kimia alam sangat
tergantung pada penggunaan jenis
kolom yang sesuai. Proses
pemisahan sebenarnya terjadi di
Nama asisten : Dinda Lupitasari
Tanggal Praktikum : 24 Mei 2023
Tanggal Pengumpulan : 9 Juni 2023
dalam kolom. Di dalam kolom,
komponen-komponen dalam sampel
ditahan secara selektif oleh fasa diam
(stationary phase/adsorben), lalu
terlarut oleh pelarut (fasa bergerak)
yang mengalir terus-menerus dan
membawanya melalui kolom menuju
detektor.
5. Recorder dan data processing
Recorder berfungsi untuk
mencatat setiap sinyal yang
dihasilkan oleh detektor dan
mengubahnya menjadi bentuk kurva
yang dikenal sebagai kromatogram.
Recorder juga dapat digabungkan
dengan sistem komputer untuk
analisis data atau pemrosesan data
dalam bentuk yang lebih kompak
yang dikenal sebagai "Data
Processor". Informasi yang disajikan
dari hasil pemrosesan data meliputi
waktu retensi, luas puncak (peak
area), persentase (%), dan jumlah
total dari setiap kurva yang
dihasilkan.
Dalam penggunaan HPLC, sampel yang
digunakan juga memiliki syarat dimana
berupa turunan dari senyawa gula dan
etanol, sampel tidak mengandung asam
anorganik, jika berupa padatan maka
harus larut dalam methanol, dan sampel
tidak mengandung zat warna.
Prosedur pertama yaitu
pembuatan fase gerak. Fase gerak berupa
cairan atau pelarut yang berperan untuk
membawa komponen campuran menuju
detektor (Angraini & Desmaniar, 2020).
Fase gerak berfungsi untuk melarutkan
campuran zat, mengangkat atau
membawa komponen yang aakan
dipisahkan melewati sorben fase diam
sehingga memiliki waktu retensi dalam
rentang yang dipersyaratkan,
memberikan selektifitas yang memadai
untuk campuran senyawa yang akan
dipisahkan (Wulandari, 2011). Pada fase
gerak, cairan yang digunakan ialah
akuabidest dan methanol HPLC grade.
Akuabidest merupakan air yang sudah
didestilasi ganda untuk menghasilkan
4

kemurnian air yang sangat murni,
sehingga bisa dikatakan lebih steril
dibandingkan dari akuades. Hal ini
dikarenakan pada metode HPLC
memerlukan cairan dengan tingkat
kemurnian yang tinggi.methanol HPLC
merupakan metanol yang sudah diproses
dan dimurnikan dengan tingkat
kemurnian yang tinggi untuk memenuhi
persyaratan khusus yang diperlukan
dalam analisis menggunakan HPLC.
Kualitas pelarut penting untuk
diperhatikan demi menghasilkan hasil
yang akurat, stabil, dan konsisten.
Pertama, akuabidest dan methanol
disaring terlebih dahulu untuk
menghilangkan partikel-partikel kecil.
Selain itu, dilakukan penghilangan gas
pada fasa gerak dikarenakan gas dapat
mengumpul dengan komponen lain
terutama didalam pompa dan detektor
yang nantinya akan mengganggu proses
analisis (Putra, 2004; Suprianto, 2014;
Suprianto et al., 2017). Kertas saring
yang digunakan dalam proses
penyaringan ialah kertas saring dengan
ukuran pori sebesar 0,45 mikrometer agar
menjamin kualitas filtrasi larutan sesuai
dengan range toleransi kualitas dan level
ekstraksinya rendah sehingga tidak akan
terlalu banyak kontaminasi pada filtrat.
Larutan fase gerak berupa metanol :
aquabidest (45:55) difiltrasi
menggunakan vacuum filter ukuran 0,45
mikrometer.
Prosedur selanjutnya yaitu
pembuatan deret larutan standar kafein.
Pertama, ditimbang terlebih dahulu
padatan standar kafein sebanyak 10 mg
dan dimasukkan ke dalam labu ukur 50
ml. standar kafein dilarutkan dengan
aquabidest, ditandabataskan, dan
dihomogenkan. Dipipet standar kafein
200 ppm 0 ml; 2,5 ml; 5 ml; 7,5 ml; 10
ml; 12,5 ml ke dalam labu ukur 25 ml.
kemudian ditanda bataskan dengan
aquabidest, dan dihomogenkan.
Selanjutnya yaitu persiapan sampel,
untuk minuman energi (A), dipipet
sebanyak 5 ml dan dimasukkan ke dalam
labu ukur 25 ml. Kemudian, ditambahkan
aquabidest hingga tanda batas,
Nama asisten : Dinda Lupitasari
Tanggal Praktikum : 24 Mei 2023
Tanggal Pengumpulan : 9 Juni 2023
dihomogenkan. Untuk kopi kaleng (B),
dipipet sebanyak 2,5 ml dan dimasukkan
ke dalam labu ukur 25 ml. Kemudian,
ditambahkan aquabidest hingga tanda
batas, dihomogenkan. Untuk kopi bubuk
(C), kopi ditimbang sebanyak 50 gram
dan dilarutkan dengan 200 ml aquabidest
panas. Kemudian larutannya disaring
hingga mendapat filtrast. Filtrat dipipet
sebanyak 1 ml dan dimasukkan ke dalam
labu ukur 50 ml. Kemudian ditambahkan
aquabidest hingga tanda batas, dan
dihomogenkan.
Analisis senyawa dilakukan
dengan penginjeksian larutan seri pada
panjang gelombang 200-300 nm. Deret
larutan standar dan sampel dimasukkan
ke dalam vial berukuran 2 ml
menggunakan jarum suntik injeksi dan
mikrofilter berukuran 0, 45 µm untuk
menghilangkan pengotor yang mampu
mempengaruhi selama proses.
MIkrofilter 0,45 µm bertujuan agar
ukuran sampel <5 µm sehingga larutan
sampel yang masuk tidak tersumbat di
kolom HPLC dan mempersulit proses
pembersihan kolom. Diukur
menggunakan HPLC pada panjang
gelombang 272 nm karena ini merupakan
panjang gelombang maksimum kafein
untuk terdeteksi dan rentang kafein
memiliki absorbansi tertinggi, dan dalam
laju alir 1 ml/mnt. Penginjeksian
dilakukan dari konsentrasi terendah
hingga tertinggi agar tidak
mempengaruhi hasil kromatogram yang
diperoleh dimana apabila penginjeksian
dilakukan dari konsentrasi tinggi ke
rendah ditakutkan akan tersisa larutan
dengan konsentrasi tinggi pada larutan
dengan konsentrasi rendah sehingga hasil
kromatogramnya menghasilkan puncak
yang tinggi (Day & Underwood, 1980).
Pada HPLC memiliki dua pompa
yang berfungsi untuk mengalirkan
pelarut sebagai fase mobile dengan
mecepatan dan tekanan tetap. Pompa
pertama berisi akuades dan pompa kedua
berisi akuabidest, pada praktikum kali ini
yang digunakan adalah pompa kedua. Di
dalam pompa ini akan terdapat fase gerak
dan fase diam. Dimana fase diam akan
5

menahan komponen campuran.
Senyawa-senyawa polar pada campuran
yang melalui kolom akan melekat lebih
lama pada silica (daitome) yang polar
dibanding dengan senyawa-senyawa
non-polar. Maka dari itu, senyawa non-
polar kemudian akan lebih cepat
melewati kolom (Khopar, 2003).
Fase gerak akan melarutkan
komponen campuran. Senyawa-senyawa
yang bersifat non-polar pada campuran
cenderung berinteraksi dengan gugus
hidrokarbon karena gaya dispersi Van
der Waals. Gaya Van Der Waals sendiri
merupakan jenis gaya tarik menarik
diantara molekul dan terjadi pada
molekul non-polar dan polar. Senyawa-
senyawa non-polar juga memiliki
kelarutan yang rendah dalam pelarut
karena mereka memerlukan pemutusan
ikatan hidrogen, seperti yang terjadi pada
senyawa-senyawa yang terlarut dalam air
Tabel 1. Hasil Perhitungan Analisis
Faktor regeresi y = 34087x + 24587
Sampel Konsentrasi (ppm)
A1 256,383372
A2 296,383812
B1 259,232552
B2 305,336932
C1 900,4283158
C2 1121,266172
(Sumber : Dokumentasi Pribadi, 2023)
Didapat rata-rata kandungan kafein pada
sampel minuman berenergi (A) yaitu
276,63 mg; kopi hitam kaleng (B) sebesar
282,22 mg; dan kopi hitam bubuk (C)
sebesar 1010,08 mg.
Menurut SNI 01-7152-2006 Batas
maksimum senyawa kafein dalam
produk pangan minuman yaitu 50
mg/sajian. Dapat disimpulkan bahwa
sampel minuman berenergi (A) dan
sampel minuman kopi hitam kaleng (B)
memenuhi standar mutu SNI, sehingga
Nama asisten : Dinda Lupitasari
Tanggal Praktikum : 24 Mei 2023
Tanggal Pengumpulan : 9 Juni 2023
atau metanol. Oleh karena itu, senyawa-
senyawa ini akan membutuhkan lebih
banyak waktu untuk bergerak dalam
larutan dan akan bergerak dengan
kecepatan yang lebih lambat melalui
kolom. Sebaliknya, molekul-molekul
polar yang akan bergerak lebih cepat
melalui kolom (Clark, 2007).
Selanjutnya, buat kurva standar
dengan menghubungkan konsentrasi
dengan area puncak yang diperoleh dari
hasil pengukuran, kemudian kadar kafein
dihitung berdasarkan persamaan regresi
yang diperoleh. Setelah dianalisis dengan
HPLC dan dihitung didapat hasilnya
sebagai berikut:
Rata – rata Rata-rata
(ppm) (mg)
276,38 27,63
282,28 28,22
1010,84 101,08
aman untuk dikonsumsi. Akan tetapi,
sampel C tidak memenuhi SNI karena
melebihi standar mutu. Ketidak sesuaian
sampel pada standar mutu bisa
disebabkan karena persiapan sampel
yang kurang baik sehingga homogenitas
sampel kurang, adanya pengotor atau
kontaminasi pada sampel, atau
penanganan yang tidak benar. Selain itu,
gangguan bisa juga berasal dari bahan
yang dapat mengganggu hasil analis.
Terkadang pada sampel, terdapat suatu
6
 Nama asisten : Dinda Lupitasari
Tanggal Praktikum : 24 Mei 2023
Tanggal Pengumpulan : 9 Juni 2023

senyawa yang memiliki waktu retensi matografi_cair_kinerja_tinggi_h

yang mirip dengan kafein atau senyawa plc/ [Diakses pada tanggal: 8
yang teradsorpsi ke kolom HPLC, Juni 2023].
sehingga terjadi kesalahan dalam Day, R. A. dan A. L. Underwood. 1980.
kuantifikasi kafein. Analisa Kimia Kuantitatif.
Jakarta: Penerbit Erlangga.
KESIMPULAN Gritter, R.J., Bobbit, J.M., dan
Dapat disimpulkan bahwa Schwarting, A.E., 1985,
sampel minuman berenergi (A) dan Introduction to
sampel minuman kopi hitam kaleng (B) Chromatography, diterjemahkan
memenuhi standar mutu SNI, sehingga oleh Kosasih Padmawinata,
aman untuk dikonsumsi. Akan tetapi, Edisi II, 147-186, 200, ITB,
sampel C tidak memenuhi SNI karena Bandung.
melebihi standar mutu. Ketidak sesuaian Hendayana, Sumar. 2006. Kimia
sampel pada standar mutu bisa Pemisahan Metode
disebabkan karena persiapan sampel Kromatografi dan Elektroforesis
yang kurang baik atau gangguan dari Modern. Bandung: Remaja
senyawa pada sampel itu sendiri. Rosdakarya Offset
Hendayana, Sumar.2006.Kimia
DAFTAR PUSTAKA Pemisahan Metode
Adnan, Mochamad, 1997, Teknik Kromatografi dan Elektroforesis
Kromatografi untuk Analisis Modern. Bandung : Remaja
Bahan Makanan, Edisi 1, 1-25, Rosdakarya Offset.
Penerbit ANDI, Yogyakarta. Ingrouille K. Effect of caffeinated
Amin, S., Amir, M., dan Slamet, I. 2016. beverages upon breakfast meal
Kromatografi Cair Kinerja consumption of University of
Tinggi Untuk Analisis Senyawa Wisconsin-Stout undergraduate
Diuretik Yang Disalahgunakan students. 2013.
Sebagai Doping Dalam Urin. Khopkar, S.M. (2003). Konsep Dasar
Jurnal Sains Keolahragaan & Kimia Analitik. UI Press, Jakarta.
Kesehatan. Volume I, No. 2. Kucer N. The relationship between
Ardianingsih, R. 2009. Penggunaan High daily caffeine consumption and
Performance Liquid withdrawal symptoms: a
Chromatographi (HPLC) Dalam questionnaire-based study.
Proses Analisa Deteksi Ion. Turkey Journal of Medical
LAPAN. Berita Dirgantara Science 2010; 40(1):105-8.
volume 10 :101-104. Murningsih, T., & Chairul. (2000).
Bawazeer N A, AlSobahi N Mengenal Hplc: Peranannya
A.Prevalence and side effects Dalam Analisa Dan Proses Isolasi
of energydrink consumption Bahan Kimia Alam. Berita Biologi,
among medical students at 5(2), 261–272.
Umm Al-Qura University, Noegrohati, S., 1994, Aspek
Saudi Arabia. International Fundamental Optimasi dan
Journal of Medical Students Aplikasi Kromatografi Cair
2013; 1(3):104-8. Tekanan Tinggi dalam Prinsip
Clark, Jim. 2007. Kromatografi Cair dan Aplikasi Beberapa Teknik
Kinerja Tinggi (HPLC). Analisis Instrumental, 1-31,
Available online at Laboratorium Analisis Kimia
http://www.chemistry.org/mater dan Fisika Pusat UGM,
i_kimia/ Yogyakarta.
instrumen_analisis/kromatografi Roth, Hermann J., dan Blaschke,
1/kro Gottfried, 1981, Analisis

7
 Nama asisten : Dinda Lupitasari
Tanggal Praktikum : 24 Mei 2023
Tanggal Pengumpulan : 9 Juni 2023

Farmasi,diterjemahkan oleh 10_no1/1/(89-97)V10N1CT.pdf.

Sarjono Kisman dan Slamet
Ibrahim, 411-412,419-424,
Gadjah Mada Universitas Press,
Yogyakarta.
Sunaryo, 1995, Perangsang Susunan
Saraf Pusat dalam Farmakologi
dan Terapi, Edisi 4, Editor
Sulistia G. Ganiswarna, 226,
227, 231-233, Bagian
Farmakologi Fakultas
Kedokteran Universitas
Indonesia, Jakarta.
Suprianto, E. D. L. Putra, and S. M.
Sinaga. (2017). “Optimization of
Volume Void and Wavelengths at
Simultaneous Determination
Method Development of
Sweeteners, Preservatives and
Dyes by UFLC,” International
Journal of ChemTech Research.
https://sphinxsai.com/2017/ch_vol
Suprianto. (2014). “Pengembangan
Metode Penetapan Kadar
Campuran Pemanis, Pengawet dan
Pewarna Secara Simultan Dalam
Sirup Esen Dengan Menggunakan
Kromatografi Cair Kinerja
Tinggi,”.
https://doi.org/10.13140/rg.2.2.157
63.37923.
Susanti, M. Dan Dachriyanusus. 2002.
Kromatografi Cair Kinerja
Tinggi. Padang : LPTIK
Universitas Andalas.
Willard HH, Merritt LL (Jr), Dean JA,
Settle FA (Jr). (1988). Instrumental
Methods of Analysis 7th Ed.
Wadworth. Inc. Bellmont,
California USA, 580-613.
Wulandari, L. 2011. Kromatografi Lapis
Tipis. Jember : Taman Kampus
Presindo.

LAMPIRAN
Tabel 1. Hasil Uji HPLC
Kons
RT Area Sampel RT Area
(ppm)
0 0,000 0 A1 2,386 1772455
20 2,364 783952 A2 2,371 2045154
40 2,307 1319942 B1 2,333 908233
60 2,366 2098046 B2 2,349 1065389
80 2,330 2711787 C1 2,226 638445
100 2,333 3459826 C2 2,263 788999
(Sumber : Dokumentasi Pribadi, 2023)

Tabel 2. Pengenceran Sampel

A 5
B 10
C 50
(Sumber : Dokumentasi Pribadi, 2023)

8
 Nama asisten : Dinda Lupitasari
Tanggal Praktikum : 24 Mei 2023
Tanggal Pengumpulan : 9 Juni 2023

Kurva Standar
4000000
3500000 y = 34087x + 24587
R² = 0,9982
3000000
2500000
Area

2000000
1500000
1000000
500000
0
0 20 40 60 80 100 120
Axis Title

Gambar 1. Kurva Standar Kafein

Perhitungan
Sampel A1
1772455 − 24587
𝐾𝑜𝑛𝑠 (𝑝𝑝𝑚) = ( ) 𝑥 5 = 256,3833
34087
Sampel A2
2045254 − 24587
𝐾𝑜𝑛𝑠 (𝑝𝑝𝑚) = ( ) 𝑥 5 = 296,3838
34087

𝑅𝑎𝑡𝑎 − 𝑟𝑎𝑡𝑎 = 276,383592

Sampel B1
908233 − 24587
𝐾𝑜𝑛𝑠 (𝑝𝑝𝑚) = ( ) 𝑥 10 = 259,2325
34087
Sampel B2
1065389 − 24587
𝐾𝑜𝑛𝑠 (𝑝𝑝𝑚) = ( ) 𝑥 10 = 305,3369
34087

𝑅𝑎𝑡𝑎 − 𝑟𝑎𝑡𝑎 = 282,284742

Sampel C1
638445 − 24587
𝐾𝑜𝑛𝑠 (𝑝𝑝𝑚) = ( ) 𝑥 50 = 900,4283
34087
Sampel C2
788999 − 24587
𝐾𝑜𝑛𝑠 (𝑝𝑝𝑚) = ( ) 𝑥 50 = 1121,2661
34087

𝑅𝑎𝑡𝑎 − 𝑟𝑎𝑡𝑎 = 1010,847244