Edisi Kedokteran

ANALISIS KANDUNGAN PARASETAMOL PADA JAMU PEGAL LINU

DI PONTIANAK DENGAN MENGGUNAKAN METODE KROMATOGRAFI
LAPIS TIPIS (KLT) DAN SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS

AN ANALYSIS ON PARACETAMOL CONTAIN IN TRADITIONAL MEDICINE

IN PONTIANAK BY USING THIN-LAYER CHROMATOGRAPHY AND
UV-VIS SPECTROPHOTOMETRIC METHOD

Bambang Wijianto, Yumanda

Program Studi Farmasi, Fakultas Kedokteran, Universitas Tanjungpura

ABSTRAK
Penelitian ini merupakan penelitian yang bersifat analitik. Objek dari penelitian
ini adalah jamu pegal linu yang beredar di kota Pontianak. Jamu pegal linu
diperoleh dari toko obat yang terdapat di kota Pontianak. Teknik sampling yang
digunakan adalah non probabilitas yaitu purposive sampling. Sampel yang
didapat sebanyak 14 sampel jamu pegal linu untuk diidentifikasi kandungan
parasetamol pada jamu tersebut. Metode yang digunakan adalah metode
Spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang 249nm yang sebelumnya
dilakukan pemisahan menggunakan Kromatografi Lapis Tipis(KLT) dengan fase
diam Silika Gel GF254 dengan perbandingan fase gerak kloroform : methanol
adalah masing-masing 90:10. Dari seluruh sampel yang diidentifikasi didapat
hasil 3 jamu yang positif mengandung parasetamol yaitu sampel C, E, dan G,
dengan kadar masing-masing berturut-turut 45,4mg, 70,385mg, dan 150,15mg.
Berdasarkan Badan POM RI No.KH.00.01.43.2773/2008 tentang obat
tradisional yang mengandung bahan kimia obat, parasetamol tidak
diperbolehkan ada pada jamu tradisional.
Kata kunci: Parasetamol, jamu, Kromatografi Lapis Tipis(KLT),
Spektrofotometri UV-Vis.

ABSTRACT
This research is an analytic research. The object of this research are traditional
medicine which had been sell in Pontianak. Those samples are from some
medicine stores in Pontianak. Sampling technique used was non-probability
purposive sampling type. There were 14 sample of traditional medicine which
had been used to be identified the paracatamol contain on. This research was
conducted by using Uv-Vis Spectrophotometric method at a wavelength of
249nm that were previously carried out the separation by thin-layer
chromatography with silica gal GF254 as stationary phase and kloroform :
methanol (90:10) as eluens. The writer found 3 of 14 sample of traditional
medicines which contained paracetamol. The positive traditional medicine
sample are sample C, E, and G with each level 45,5mg, 70,385mg, and
150,15mg per 1 dosage of traditional medicine. Based on Badan POM RI

Jurnal Penelitian Universitas Tanjungpura Volume XXVI Oktober 2012 1

Edisi Kedokteran
No.KH.00.01.43.2773/2008 about traditional medicine which contain chemical,
paracetamol may not exist in traditional herbal medicine.
Keyword: Paracetamol, Traditional Medicine, Thin-Layer Chromatography, Uv-
Vis Spectrophotometric.
PENDAHULUAN
Bangsa Indonesia telah lama
mengenal dan menggunakan
tanaman berkhasiat obat sebagai
salah satu upaya dalam
menanggulangi masalah kesehatan.
Pengetahuan tentang tanaman
berkhasiat obat berdasar pada
pengalaman dan ketrampilan yang
secara turun temurun telah diwariskan
dari satu generasi ke generasi
berikutnya. Penggunaan bahan alam
sebagai obat tradisional di Indonesia
telah dilakukan oleh nenek moyang
kita sejak berabad-abad yang lalu
terbukti dari adanya naskah lama
pada daun lontar Husodo (Jawa),
Usada (Bali), Lontarak pabbura
(Sulawesi Selatan), dokumen Serat
Primbon Jampi, Serat Racikan Boreh
Wulang nDalem dan relief candi
Borobudur yang menggambarkan
orang sedang meracik obat (jamu)
dengan tumbuhan sebagai bahan
bakunya.
Sejalan dengan
perkembangan obat tradisional pada
saat ini, dengan adanya pemicu
persaingan yang semakin ketat pada
industri-industri jamu, terdapat industri
yang menggunakan cara apapun
untuk dapat bersaing dengan industri
lainnya, dengan cara mencampur
bahan kimia yang berbahaya dengan
tujuan agar jamu tersebut dapat
berkhasiat secara instan, sehingga
akan mendapatkan kepercayaan dari
konsumen untuk menggunakan jamu
2 Jurnal Penelitian Universitas Tanjungpura Volume XXVI Oktober 2012
tersebut secara terus menerus untuk
kesembuhan penyakit dari konsumen.
Menurut sujono(2010), bahwa jamu
atau obat tradisional digunakan untuk
pengobatan penyakit
degeneratife(menahun), yaitu
digunakan untuk pemeliharaan agar
penyakit tersebut tidak bertambah
parah. Oleh sebab itu dikhawatirkan
pada pasien yang sudah
menggunakan jamu yang telah
mengandung bahan kimia obat yang
berbahaya akan menimbulkan efek
samping bagi pengguna bahkan
dapat mengakibatkan toksik pada
penggunaan jamu tersebut dalam
jangka panjang.
Jamu pegal linu merupakan
salah satu produk obat tradisional
yang banyak diminati oleh
masyarakat. Jamu pegal linu ini
diyakini dapat menghilangkan pegal
linu, capek-capek, nyeri otot dan
tulang, memperlancar peredaran
darah, memperkuat daya tahan tubuh
dan menghilangkan sakit seluruh
badan. Banyak industri obat
tradisional maupun industri kecil obat
tradisional yang mengembangkan
jamu ini dengan ramuan-ramuan
tertentu. Namun pada faktanya dari
surat edaran yang dikeluarkan oleh
BPOM, kebanyakan kasus jamu pegal
linu yang sudah terdeteksi
mengandung bahan kimia obat
seperti parasetamol.
Berdasarkan PERMENKES
RI Nomor: 246/Menkes/Per/V/1990
 Edisi Kedokteran

tentang ”IZIN USAHA INDUSTRI

OBAT TRADISIONAL DAN BAHAN DAN METODE
PENDAFTARAN OBAT BAHAN
TRADISIONAL MENTERI Bahan yang digunakan dalam
KESEHATAN REPUBLIK penelitian ini adalah baku
INDONESIA” pada bab VIII pasal 39 pembanding parasetamol, methanol,
ayat 1 tentang larangan menyatakan kloroform, NaHCO3 8%, eter, etanol,
bahwa Industri Obat Tradisional atau H2SO4 3N, aquabidest dan sampel
lndustri Kecil Obat Tradisional jamu pegal linu.
dilarang memproduksi segala jenis ALAT
obat tradisional yang mengandung Alat yang digunakan dalam penelitian
bahan kimia hasil isolasi atau sintetik ini adalah Spektrofotometer UV-Vis
yang berkhasiat sebagai obat. Shimadzu UV 2450, kertas pH
Parasetamol merupakan obat universal, neraca analitik, lempeng
yang memilki aktivitas analgesik dan silika gel GF 254 ukuran 20 x 20 cm,
antipiretik, serta memiliki sedikit efek cahaya ultraviolet 254nm, dan kuvet.
sebagai antiinflamasi. Penggunaan METODE
parasetamol secara rutin dalam Pengambilan Sampel
jangka panjang memungkinkan dapat Teknik sampling yang
meningkatkan warfarin. Keberadaan digunakan adalah teknik
parasetamol didalam tubuh juga nonprobability sample, karena dengan
dapat berinteraksi dengan penyakit mempertimbangkan peneliti tidak
tertentu. Penggunaan parasetamol mengetahui secara pasti jumlah
juga dapat mengakibatkan gangguan populasi sampel yang beredar di kota
ginjal berat, penyakit hati atau Pontianak dan tidak melibatkan unsur
hepatitis sehingga dapat menurunkan peluang, sehingga tidak diketahui
fungsi hati dan ginjal. Parasetamol besarnya peluang sesuatu unit
juga dapat mengakibatkan sampling terpilih ke dalam sampel.
ketergantungan pada alkohol. Teknik nonprobability sample
Berdasarkan hal tersebut, menggunakan tipe Purposive
maka peneliti ingin mengetahui Sampling karena sampling dipilih
apakah parasetamol masih juga berdasarkan pertimbangan tertentu
digunakan sebagai bahan tambahan dengan tujuan untuk memperoleh
pada jamu tradisional khususnya satuan sampling yang memiliki
jamu pegal linu yang beredar di kota karakteristik yang dikehendaki.
Pontianak. Maka dengan adanya Sampel jamu diambil dari 6
penelitian ini diharapkan dapat kecamatan yang berada dikota
memberikan manfaat dalam Pontianak. Pengambilan sampel juga
pemberian informasi kepada memperhitungkan jarak antar toko
masyarakat agar lebih berhati-hati jamu. Pada toko jamu yang
dalam mengkonsumsi jamu berdekatan maka sampel diambil dari
tradisional yang dipasarkan dan satu toko jamu saja. Proses
menjanjikan hasil yang memuaskan. pengambilan sampel juga

Jurnal Penelitian Universitas Tanjungpura Volume XXVI Oktober 2012 3

Edisi Kedokteran
memperhitungkan jenis produk. Pada
satu produk jamu yang telah diambil
di satu tempat, maka tidak akan
diambil kembali di tempat yang lain
sehingga produk jamu yang dijadikan
sampel tidak ada yang sama dan
dapat mewakili dari produk jamu
pegal linu yang tersebar di kota
Pontianak.
Pembuatan Larutan Baku
Pembanding Parasetamol pada
KLT
Sebanyak 2,5 g baku
parasetamol BPFI dilarutkan kedalam
25ml etanol lalu dihomogenkan.
Pembuatan Larutan Sampel pada
KLT
Diambil satu dosis cuplikan
sampel jamu yang diduga
mengandung parasetamol
dimasukkan kedalam Erlenmeyer 125
ml lalu ditambahkan 50 ml air dan
beberapa tetes larutan NaHCO3 8%
hingga pH 7. Sampel dikocok selama
30menit lalu disaring. Volume filtrate
dimasukkan kedalam corong pisah
lalu asamkan filtrate dengan H2SO4
3N hingga pH 1. Ekstraksi larutan
dengan 20ml eter sebannyak 4 kali
lalu uapkan kumpulan ekstrak eter
ditangas air hingga kering kemudian
dilarut dengan 5 ml etanol.
Pengerjaan Sampel pada KLT
Lempengan KLT(silika gel)
disiapkan dengan fase gerak
kloroform : methanol ( 90 : 10 ). Lalu
larutan A dan B masing-masing
ditotolkan secara terpisah pada plat
silika gel. Larutan dielusikan sampai
jarak rambat 15 cm, lalu lempengan
diangkat dan biarkan fase geraknya
menguap. Lalu amati bercak dibawah
sinar Ultraviolet pada panjang
4 Jurnal Penelitian Universitas Tanjungpura Volume XXVI Oktober 2012
gelombang 254nm Bandingkan nilai
Rf dengan baku standar.
Pengerjaan Sampel pada Uv-Vis
Pada prosedur KLT diambil
hasil kerokan bercak baku dan bercak
senyawa sampel yang mempunyai
harga Rf yang sama dan dikocok
secara terpisah dengan 5 ml etanol
lalu disaring. Ukur serapan pada
panjang gelombang maksimum
dengan etanol sebagai blanko.
Validasi Linearitas
Larutan baku pembanding
yang telah dibuat, digunakan sebagai
seri larutan standar dengan rentang
konsentrasi 3-7 ppm. Pembuatan
larutan standar tersebut dilakukan
dengan cara memipet larutan baku
pembanding 10 ppm sebanyak
volume yang diperlukan sesuai
dengan konsetrasi larutan standar
yang ingin dibuat ke dalam labu ukur
10 ml kemudian ditambahkan etanol
dan dicukupkan volume sampai garis
tanda, dikocok homogen dan difiltrasi.
Diukur serapan pada panjang
gelombang maksimum. Setelah itu
dapat diperoleh hubungan linearitas
yang terbentuk antara konsentrasi
dalam mg/L (x) dan area Parasetamol
(y) dalam pelarut pada berbagai
perbedaan tingkat konsentrasi dan
persamaan regresi linearnya
menggunakan model y = bx + a
dengan b sebagai slope dan a
sebagai intersep.
Validasi Akurasi
Persen perolehan kembali
dapat ditentukan dengan cara
menambahkan sejumlah 10mg baku
Parasetamol ke dalam salah satu
sampel jamu. Campuran tersebut
kemudian dikocok sampai homogen
 Edisi Kedokteran

dan diukur absorbansi sesuai pada + a. Nilai Sl (kepekaan arah) akan

penetapan kadar Parasetamol dalam sama dengan nilai slope (b) pada
jamu. persamaan garis linear tersebut,
Validasi Presisi sedangkan simpangan baku blanko
Pada percobaan ini, sama dengan simpangan baku
perhitungan keseksamaan yang residual (Sy/x). Nilai absorbansi
dilakukan adalah keseksamaan yang blanko didapat dengan mengukur
dinyatakan sebagai keterulangan. serapan dari blanko yang digunakan
Keterulangan adalah keseksamaan yaitu etanol pada panjang gelombang
metode jika dilakukan berulang kali maksimum analit yaitu pada 249nm.
oleh analis yang sama pada kondisi Simpangan baku respon bangku
sama dalam interval waktu yang pembanding dapat dihitung dengan
pendek. Dilakukan pengukuran rumus berikut:
larutan standar dengan suatu
konsentrasi pada alat
spektrofotometer UV-Vis yang
dilakukan sebanyak 3 kali dalam 1
hari dan 3 kali dalam 3 hari berturut- Keterangan:
Q : LOD (batas deteksi) atau LOQ (batas
turut. Dapat diperoleh nilai presisi kuantitasi)
harian yang dinyatakan dalam bentuk K : 3 untuk batas deteksi atau 10 untuk batas
simpangan baku relatif atau koefisien kuantitasi
variasi (KV) dengan rumus sebagai Sb : simpangan baku respon analitik dari
blanko
berikut : SI : arah garis linear (kepekaan arah) dari kurva
antara respon terhadap konsentrasi = slope (a
pada persamaan garis y = ax + b)

HASIL DAN PEMBAHASAN

Keterangan:
KV : Koefisien Variasi
SD : Standar deviasi
X : Rata-rata konsentrasi
Validasi LOD & LOQ
Batas deteksi dan kuantitasi
dapat dihitung secara statistik melalui
garis linear dari kurva kalibrasi baku
pembanding yang telah dibuat.
Setelah itu dapat diperoleh hubungan
linearitas yang terbentuk antara
konsentrasi (mg/mL) dan area
Parasetamol dalam pelarut fase gerak
pada berbagai perbedaan tingkat
konsentrasi dan persamaan regresi
linearnya menggunakan model y = bx
Penelitian ini bertujuan untuk
mengidentifikasi kandungan obat
parasetamol di dalam jamu pegal linu.
Dalam penelitian ini dilakukan
beberapa tahapan sampai sampel
jamu pegal linu tersebut dapat diukur
dengan menggunakan alat
spektrofotometer. Didapatkan
sebanyak 14 jamu pegal linu yang
beredar di kota Pontianak. Jamu
pegal linu yang digunakan pada
penelitian ini didapat dari toko-toko
obat dan jamu yang berada di kota
Pontianak. Sampel jamu yang didapat
terdapat 2 jamu yang tidak teregistrasi
BPOM dan 12 jamu yang teregistrasi

Jurnal Penelitian Universitas Tanjungpura Volume XXVI Oktober 2012 5

Edisi Kedokteran

BPOM. Jamu yang diambil memiliki pengotor yang tidak terlarut pada air.
bentuk sediaan berupa serbuk dan Hasil filtrat diambil lalu diasamkan
kapsul. Jamu yang telah didapatkan dengan menggunakan H2SO4 3N
akan diproses lebih lanjut agar jamu hingga pH 1. Fungsi dari
dapat diukur khususnya kandungan penambahan asam pada hal ini
zat aktif parasetamol. Tahapan- bertujuan untuk mempercepat proses
tahapan yang dilakukan pada hidrolisis dari parasetamol menjadi p-
penelitian ini adalah preparasi Aminofenol sehingga dapat
sampel, pemisahan sampel dengan terhidrolisis maksimal. Tahap
metode KLT, dan dilanjutkan dengan selanjutnya adalah mengekstrak filtrat
pengukuran pada sampel yang positif air tersebut menggunakan eter. Zat p-
mengandung parasetamol dengan Aminofenol ini lebih larut kedalam eter
menggunakan alat Spektrofotometer. karena tingkat kepolarannya lebih
Preparasi sampel mendekati eter sehingga pada proses
Preparasi sampel ini ektraksi dengan eter maka zat
dilakukan untuk menyiapkan sampel tersebut akan melarut kedalam eter.
agar dapat dilakukan pengukuran Proses ini dilakukan berulang dengan
pada tahap selanjutnya. Preparasi 4 kali ekstraksi dengan 20mL tiap kali
sampel ini juga bertujuan untuk ekstraksi. Hal ini bertujuan agar
memisahkan zat-zat pengotor yang proses ektraksi p-Aminofenol dari
terdapat didalam jamu dari zat filtrat dapat terekstrak secara
parasetamol itu sendiri. Hal yang keseluruhan. Proses ekstraksi dengan
pertama dilakukan adalah melarutkan eter juga untuk memisahkan zat lain
satu dosis jamu tersebut dengan yang tidak ikut larut pada eter.
menggunakan air pada Erlenmeyer Ekstrak eter yang telah didapat
dan ditambahkan zat NaHCO3 8% dikumpulkan lalu di uapkan untuk
hingga pH 7. Hal ini dilakukan untuk menghilangkan pelarut eter tersebut
menstabilkan dan meminimalisir sehingga didapatkan zat p-
reaksi hidrolisis yang terjadi pada Aminofenol dalam bentuk kering yang
parasetamol oleh karena adanya air. selanjutnya dilarutkan pada etanol
Karena pada pH 5-7 merupakan sebanyak 5 ml untuk ditotolkan pada
reaksi hidrolisis minimum. Proses plat KLT di proses selanjutnya.
selanjutnya yang dilakukan adalah Pemisahan dengan menggunakan
pengocokan salama 30 menit. Hal ini metode Kromatografi Lapis Tipis
dilakukan untuk mempercepat (KLT)
melarutnya zat yang larut pada air Pemisahan ini bertujuan
dan untuk mempercepat reaksi untuk memisahkan zat aktif
hidrolisis dari parasetamol sehingga parasetamol dangan zat-zat lain yang
dapat terikat oleh air. Selanjutnya masih terkandung dalam pelarut
yang dilakukan dalam penelitian ini etanol. Pada penelitian ini digunakan
adalah menyaring larutan jamu fase gerak Kloroform : Metanol
dengan kertas saring. Hal ini dengan perbandingan 90:10.
bertujuan untuk memisahkan Sedangkan fase diam yang

6 Jurnal Penelitian Universitas Tanjungpura Volume XXVI Oktober 2012


digunakan adalah silika gel GF 254.
Silika gel GF 254 ini digunakan
karena bertujuan agar plat dapat
berpendar pada penampakan bercak
di lampu UV 254 untuk melihat
bercak. Hal ini dilakukan karena zat
parasetamol yang ingin diidentifikasi
tidak dapat menimbulkan bercak atau
warna pada plat KLT. Oleh karena itu
pada saat diberikan lampu UV 254
silika gel akan berpendar, sedangkan
pada totolan yang terdapat zat
parasetamol akan menutupi pada
posisi dimana bercak pada
kromatogram berada, meskipun
bercak-bercak itu tidak tampak
berwarna jika dilihat dengan mata. Itu
berarti bahwa jika diberikan sinar UV
pada lempengan, akan timbul
pendaran dari posisi yang berbeda
dengan posisi bercak-bercak. Bercak
tampak sebagai bidang kecil yang
gelap sehingga dapat diidentifikasi
keberadaan bercak dari zat
parasetamol. Jumlah bercak yang
dihasilkan pada sampel terdapat 3
bercak yang tampak dengan
menggunakan lampu UV 254 dengan
nilai Rf yang identik dengan baku
yaitu 0,546; 0,6; dan 0,573
sedangkan nilai dari Rf baku adalah
0,533.
Proses KLT pada penelitian
ini melalui beberapa tahapan.
Tahapan yang pertama yaitu proses
penjenuhan dari chamber yang telah
berisikan fase gerak. Proses ini
dilakukan dengan cara meletakan
kertas saring secara vertikal dari
dasar chamber sampai dengan atas
chamber lalu ditutup dan biarkan
kertas saring menyerap sampai ke
atas. Hal ini dilakukan dengan tujuan
Jurnal Penelitian Universitas Tanjungpura Volume XXVI Oktober 2012
Edisi Kedokteran
untuk meyakinkan bawah kondisi
dalam gelas kimia terjenuhkan oleh
uap dari pelarut. Penjenuhan udara
dalam gelas kimia dengan uap
menghentikan penguapan pelarut
sama halnya dengan pergerakan
pelarut dalam KLT.
Proses selanjutnya yang
dilakukan sebelum proses KLT
dilaksanakan adalah dengan
memberikan batas jarak tempuh pada
plat KLT. Hal ini dilakukan untuk
membatasi jarak rambat dan memberi
tanda pada tempat penotolan. Sampel
yang yang telah siap ditotolkan ke plat
sesuai dengan tanda yang telah
diberikan dan dibiarkan sampai kering
untuk kemudian ditempatkan kedalam
chamber yang telah dijenuhkan dan
kemudian ditutup. Hal yang perlu
diperhatikan adalah batas pelarut
berada di bawah garis dimana posisi
totolan berada. Perlunya hal ini
dilakukan adalah agar sampel yang
telah ditotolkan tidak menyentuh
cairan karena jika menyetuh fase
gerak tersebut maka kemungkinan
ada sampel yang terlarut pada fase
gerak tersebut, sehingga hasilnya
akan tidak maksimal dan tidak sesuai
karena sampel telah ada sebagian
yang hilang. Proses rambatan ini
dihentikan sampai fase gerak telah
merambat sampai batas yang telah
ditentukan. Pada penelitian ini jarak
tempuh yang dilalui pelarut adalah
15cm. Proses selanjutnya yang
dilakukan adalah mengeluarkan plat
KLT dari chamber dan dikeringkan
dengan cara dianginkan. Proses ini
bertujuan untuk mengeringkan atau
menghilangkan fase gerak hingga
kering agar dapat dilihat bercak pada
7
Edisi Kedokteran

lampu UV 254. Pada hasil plat KLT di absorbans maksimum dari suatu
wilayah totolan baku parasetamol unsur atau senyawa. Analisis
tidak terdapat noda yang tampak jika Spektroskopi didasarkan pada
dilihat dengan menggunakan interaksi radiasi dengan spesies
penglihatan secara langsung. Maka kimia. Berprinsip pada penggunaan
dari itu digunakan bantuan lampu UV cahaya/tenaga magnet atau listrik
dengan λ 254 agar plat dapat untuk mempengaruhi senyawa kimia
berpendar dan bercak dapat dilihat. sehingga menimbulkan tanggapan.
Setelah kering maka plat dapat dilihat Tanggapan tersebut dapat diukur
penampakan bercak dibawah sinar untuk menetukan jumlah atau jenis
UV. Plat akan berpendar pada sinar senyawa. Cara interaksi dengan
lampu UV 254 sedangkan wilayah suatu sampel dapat dengan absorpsi,
bercak akan menutupi cahaya yang pemendaran (luminenscence) emisi,
dikeluarkan oleh plat sehingga bercak dan penghamburan (scattering)
dapat ditemukan. Pada penelitian ini tergantung pada sifat materi. Pada
digunakan plat KLT yang preparatife penelitian ini zat yang diukur adalah
sehingga bercak yang ditimbulkan zat parasetamol yang sebelumnya
dapat diambil dan diukur pada alat telah melalui proses hidrolisis dengan
spektrofotometer. asam (H2SO4) sehingga berubah
Pada hasil didapatkan 3 menjadi p-Aminofenol. Zat p-
sampel yang menimbulkan bercak Aminofenol dapat dibaca secara
dengan nilai Rf yang indentik dengan langsung pada alat spektrofotometer
nilai Rf baku parasetamol sehingga karena pada p-Aminofenol terdapat
diduga bercak tersebut adalah zat gugus kromofor. Pada pengukuran
yang diduga parasetamol. Bercak digunakan λ maksimal yang bertujuan
yang ditimbulkan tidak menimbulkan untuk menghasilkan hasil dengan
warna atau pun pendaran pada akurasi yang tinggi dengan tingkat
pengamatan dengan menggunakan kesalahan yang kecil pula. λ
lampu UV 254. Bercak dapat dilihat maksimal ini didapatkan dari
dengan adanya pendaran dari silika pengukuran dari baku parasetamol
gel yang tertutupi oleh adanya bercak yang telah dibuat.
atau noda yang dihasilkan, sehingga Dari hasil pengukuran
dapat diketahui letak dari keberadaan didapatkan hasil serapan yang
bercak yang ditimbulkan oleh sampel dihasilkan dari sampel C, E, dan G
dan baku parasetamol. berturut-turut adalah 0,30323;
0,46473; dan 0,98023 dengan
Pengukuran sampel pada alat konsentrasi parasetamol dalam satu
spektrofotometer UV-Vis dosis jamu adalah 45,4 mg; 70,385
Spektroskopi UV-Vis mg; dan 150,15 mg. .
merupakan teknik spektroskopi pada Validasi Metode
daerah ultra violet dan sinar tampak. Sebelum dilakukan
Dari spektrum absorpsi dapat pengukuran dengan menggunakan
diketahui panjang gelombang dengan spektrofotometer, harus dilakukan

8 Jurnal Penelitian Universitas Tanjungpura Volume XXVI Oktober 2012


terlebih dahulu validasi tehadap alat
spektrofotometer itu sendiri. Tujuan
dari validasi itu sendiri adalah untuk
memastikan dan membuktikan bahwa
parameter yang telah ditetapkan telah
memenuhi persyaratan untuk
penggunaannya. Tujuan dari validasi
pada penelitian ini adalah untuk
memastikan operator, instrumen,
peralatan dan laboratorium dapat
digunakan untuk pengukuran pada
metode yang digunakan. Sebagai
salah satu faktor yang berpengaruh
dalam pengambilan keputusan,
instrumen pada dasarnya sangat
berpengaruh dalam hal menentukan
hasil yang didapat dari hasil
pengukuran analit dalam suatu
sampel, jadi proses validasi terhadap
alat spektrofotometer sangat penting
dilakukan untuk mengetahui
kelemahan dan kekuatan suatu
metode terhadap alat tersebut.
Pada proses validasi ini
dilakukan beberapa parameter yaitu
meliputi linieritas, presisi, akurasi dan
LOD(batas deteksi) & LOQ(batas
kuantitasi).
Linieritas
Linieritas dari spetrofotometer
ditentukan dengan cara membuat
kurva hubungan antara absorbansi
pada sumbu y dan konsentrasi
standar pada sumbu x. tujuan dari
Jurnal Penelitian Universitas Tanjungpura Volume XXVI Oktober 2012
Edisi Kedokteran
dilakukannya validasi lineritas adalah
untuk mengetahui adanya hubungan
absorbansi dengan konsentrasi.
Linieritas ini juga dilakukan untuk
mendapatkan kurva baku yang
digunakan untuk menghitung
konsentrasi analit yaitu Parasetamol.
Linieritas ini menggunakan baku
standar yang dibuat dengan
melarutkan sejumlah parasetamol
BPFI ke etanol. Konsentrasi yang
digunakan dalam penentuan linieritas
ini adalah antara 3-7 ppm. Seri
larutan yang digunakan sebanyak 5
seri larutan yaitu 3, 4, 5, 6, 7 ppm.
Linieritas dinyatakan sebagai r.
Berdasarkan hasil pengujian,
diperoleh nilai r adalah 0,99757 dan
persamaan y = 0,1077 x + 0,0099.
Berdasarkan teori nilai ideal untuk
nilai r adalah 1 atau -1 yang hasilnya
tergantung pada arah garis. Dari hasil
yang didapat maka nilai r dari
pengujian dapat digunakan karena
mendekati nilai 1 dan yang berarti
kurva baku dapat digunakan untuk
menghitung kadar zat. Persamaan
yang didapat digunakan untuk
menghitung kadar dari serapan
sampel yang terukur. Kadar sampel
ditentukan dengan menggunakan
kurva baku standar yang telah dibuat
pada validasi Linieritas dengan kurva
sebagai berikut:
9
Edisi Kedokteran
Presisi
Ketelitian atau presisi
dilakukan dengan adanya
keterulangan dan ketertiruan yang
dilakukan oleh operator, instrumen,
peralatan dan laboratorium yang
sama. Keterulangan dan ketertiruan
ini dilakukan untuk mengetahui
adanya galat acak yang berasal dari
penyiapan larutan, seperti
penimbangan, pembuatan larutan,
dan penyaringan. Dari hasil
pengukuran hari pertama sampai hari
ketiga berturut-turut menunjukan hasil
(%)RSD sebesar 1,718%; 0,133%;
0,629%. Nilai RSD yang dihasilkan
dibawah 2% menunjukan bahwa galat
acak yang berasal dari larutan baku
itu sendiri tidak akan mempengaruhi
hasil analisis secara nyata karena
nilainya kecil dan tidak akan
mempengaruhi hasil secara
signifikan. Sedangkan nilai antarhari
yang didapat adalah 6,19%. Hasil ini
juga tidak terlalu mempengaruhi
karena menurut (harmita, 2004) untuk
10 Jurnal Penelitian Universitas Tanjungpura Volume XXVI Oktober 2012
analit dalam konsentrasi PPM nilai
RSD dibawah 16%.
Akurasi
Akurasi suatu metode
ditentukan dengan perolehan kembali
(%Recovery) yang didapat dari hasil
bagi antara konsentrasi sampel yang
terukur dengan konsentrasi sampel
yang ditambahkan. Akurasi ini dapat
menunjukan adanya simpangan
sistematis yang dapat mempengaruhi
hasil analisis. Penentuan akurasi ini
dilakukan dengan cara menambahkan
baku standar dengan konsentrasi
yang telah diketahui pada sampel
yang telah diukur sebelumnya lalu
diukur kembali.
Hasil yang didapatkan dalam
persen perolehan kembali yang
dihasilkan pada penelitian ini adalah
78,91%. Sedangkan menurut
(Harmita, 2004) % perolehan kembali
yang baik adalah 80-120%. Hasil
perolehan kembali yang dihasilkan
tidak termasuk kedalam rentang
tersebut. Hal ini mungkin dikarenakan
 Edisi Kedokteran

pada proses preparasi yang panjang Kedua parameter ini

dapat menyebabkan baku yang mempunyai nilai yang berbeda
ditambahkan tertinggal diwadah pada bergantung pada metode dan
saat pemindahan atau pada saat instrumen yang digunakan. Nilai LOD
pengerjaan sampel yang ditambahkan yang dihasilkan adalah pada
baku kurang teliti dari pengerjaan absorbansi 0.01624. Nilai ini
sehingga baku yang diperoleh menunjukan bahwa instrument tidak
kembali tidak sesuai dengan yang dapat membedakan sinyal absorbansi
ditambahkan. antara blanko dan baku dibawah nilai
LOD(Batas Deteksi) & LOQ(Batas tersebut. Sedangkan nilai absorbansi
Kuantitasi) LOQ yang dihasilkan adalah 0,05413.
LOD dan LOQ dapat Nilai ini menunjukan bahwa
ditentukan dari persamaan regresi absorbansi analit yang terukur
linier kurva standar. Parameter ini dibawah nilai tersebut memberikan
ditentukan untuk mengetahui ketepatan dan ketelitian yang kurang
konsentrasi terendah pada sinyal baik.
antar blanko dan analit dapat Pada hasil metode KLT dan
dibedakan. Nilai LOD dan LOQ ini spektrofotometri UV-Vis dapat
didapat dari pengukuran serapan digunakan untuk mengetahui
blanko. Blanko etanol diukur kandungan parasetamol pada jamu
absorbansinya dengan menggunakan secara kualitatif namun tidak
alat spektrofotometer dengan panjang menghasilkan hasil yang baik jika
gelombang 249nm karena merupakan dilakukan pengukuran secara
panjang gelombang maksimum dari kuantitatif karena akurasi tidak baik
sampel dan didapat nilai absorbansi dengan nilai akurasi 78,91 %,
blanko sebanyak 3 kali pengukuran sedangkan nilai akurasi seharusnya
yaitu 0,002; 0,003; dan 0,003. bernilai antara 80-120%.

Jurnal Penelitian Universitas Tanjungpura Volume XXVI Oktober 2012 11

Edisi Kedokteran

KESIMPULAN DAFTAR PUSTAKA

Terdapat 3 sampel jamu pegal linu
yang beredar di kota Pontianak yang 1. Arikunto. S, 2006, Prosedur
positif mengandung zat aktif Penelitian, Jakarta : Rineka
parasetamol. Berdasarkan hasil Cipta
analisis kandungan parasetamol pada
jamu pegal linu dengan menggunakan 2. BPOM RI. 1993. Identifikasi
metode Kromatografi Lapis Tipis dan Parasetamol Dalam Obat
Spektrofotometri UV-Vis didapatkan Tradisional Sediaan Padat,
hasil 3 sampel yang positif (+) Jakarta : DEPKES RI.
mengandung bahan kimia obat
parasetamol yaitu sampel C, E, dan G 3. BPOM RI. 1997. Identifikasi
dengan konsentrasi masing-masing Parasetamol dan
45,4 mg; 70,385 mg; dan 150,15 mg Fenilbutazon Dalam Obat
per satu dosis jamu. Tradisional Sediaan Padat.
Jakarta : DEPKES RI

12 Jurnal Penelitian Universitas Tanjungpura Volume XXVI Oktober 2012

 Edisi Kedokteran

4. BPOM RI. 2008.

Informatorium Obat Nasional 8. Harmita. 2004. Petunjuk
Indonesia 2008. Jakarta: Pelaksanaan Validasi Metode
Sagunpseto. dan Cara Perhitungannya.
Majalah Ilmu Kefarmasian,
5. Chaerun. W. 2005. Obat – Vol 1, No.3, 117 - 135.
Obat Penting. Yogyakarta: Jakarta: Departemen Farmasi
UGM Press. FMIPA-UI.

6. Depkes RI. 1995. Farmakope 9. Huda. N. 2005. Pemeriksaan

Indonesia. Edisi Keempat. Kinerja Spektrofotometer UV-
Jakarta: Departemen Vis GBC 911A Menggunakan
Kesehatan Republik Pewarna Tartrazine CL
Indonesia. 19140. (Online)

7. Harmanto. N dan Subroto. M. 10. Setiawan. N, 2005, Teknik

2007. Herbal dan Jamu Sampling, Bandung :
(pengaruh dan efek samping). Universitas Padjadjaran
(Online)(http://www.ningharm
anto.combukumadePilih_Jam 11. Rohman. A. 2007. Kimia
u_dan_Herbal_Tanpa_Efek_S Farmasi Analisis. Yogyakarta:
amping.pdf. diakses 16 Pustaka Pelajar.
September 2011).

Jurnal Penelitian Universitas Tanjungpura Volume XXVI Oktober 2012 13