Nama Asisten : Jedi Riazi

Tanggal Praktikum : 15 Mei 2023

Tanggal Pengumpulan : 2 Juni 2023

PENGUJIAN BAKTERI SALMONELLA-SHIGELLA

FAKULTAS TEKNOLOGI INDUSTRI PERTANIAN
UNIVERSITAS PADJADJARAN

Aurelia Benedikta Demira Tobing (240210210032)

Departemen Teknologi Industri Pangan Universitas Padjadjaran, Jatinangor

Jalan Raya Bandung-Sumedang Km. 21, Jatinangor, Sumedang 40600 Telp. (022)
7798844, 779570 Fax. (022) 7795780 Email: aurelia21003@mail.unpad.ac.id

ABSTRAK
Pada industri makanan, selain faktor kuantitas yang perlu dipenuhi tetapi
ada faktor kualitas yang tidak kalah penting dan harus dipenuhi untuk mencukupi
kebutuhan konsumen. Produk yang dihasilkan perlu dipastikan bahwa terbebas dari
kontaminasi agar tidak terjadi keracunan hingga penyakit. Salmonella dan Shigella
merupakan bakteri patogen yang dapat menyebabkan penyakit pada manusia.
Praktikum kali ini bertujuan untuk mengetahui kontaminasi bakteri Salmonella dan
Shigella pada sampel limbah rumah makan (1), limbah cuci sayur (2), limbah lab
(3), limbah kaki lima (4), limbah tahu (5), limbah cuci daging (6), limbah tekstil
(7), limbah ikan (8), limbah selokan (9), dan limbah sungai (10). Hasil yang didapat
bahwa kelompok 1,2,3,4,5,7,8,9, dan 10 terdeteksi adanya koloni berwarna hitam
yang berarti Salmonella dan koloni berwarna merah muda yang berarti Shigella,
sedangkan kelompok 6 hanya terdeteksi adanya Shigella.
Kata kunci: Air limbah, salmonella, shigella.

PENDAHULUAN digunakan untuk mengetahui

Di dalam industri makanan, higienitas dan tingkat sanitasi suatu

selain faktor kuantitas yang perlu produk. Pada metode ini bakteri yang

dipenuhi tetapi ada faktor kualitas paling umum untuk dijadikan sebagai

yang tidak kalah penting dan harus indikator tercemar dan tidaknya

dipenuhi untuk mencukupi kebutuhan makanan ialah kelompok Cloriform.

konsumen (Rahmawati et al., 2018). Selain itu, bakteri patogen Salmonella

Produk yang dihasilkan perlu yang dapat menyebabkan penyakit

dipastikan bahwa terbebas dari bawaan dari makanan yang

kontaminasi agar tidak terjadi menyebabkan gangguan pencernaan.

keracunan hingga penyakit. Metode Salmonella sp. Merupakan

analisis mikrobiologis dapat bakteri yang masuk ke dalam tiga
 Nama Asisten : Jedi Riazi
Tanggal Praktikum : 15 Mei 2023
Tanggal Pengumpulan : 2 Juni 2023

besar bakteri yang dapat METODOLOGI

menyebabkan keracunan akibat Alat dan Bahan
makanan (Miskimin et al., 1976).
Alat yang digunakan dalam
Bakteri Salmonella termasuk kedalam
praktikum pengujian bakteri
golongan Enterobactericeae.
Salmonella-Shigella adalah pipet dan
Salmonella dan Shigella umumnya
tabung reaksi.
bersifat patogen dan sumber penyakit
Bahan yang digunakan dalam
bagi mahkluk hidup. Bakteri
praktikum ini adalah medium
Salmonella yang ditemukan di
perbanyakan (Selenite F/Selenite
perairan dapat berasal dari limbah
Crystine/Tetrathionate Broth),
domestik dan industri yang bersifat
medium selektif (Salmonella-Shigella
organik (Kunarso, 1987).
Agar), medium identifikasi (agar
Shigella merupakan agen
miring TSI, agar tegak LIM, dan agar
disentri bacillus. Terdapat empat
SIM).
species Shigella yang bersifat
Prosedur
patogen, yakni Shigella flexneri,
Suspensi cair sebanyak 1 mL
Shigella dysentriae, Shigella boydii,
dimasukkan ke dalam 9 mL medium
dan Shigella sonnei. Penularan
perbanyakan TTB sehingga diperoleh
Shigella, selain melalui kontak
pengenceran 1:10. Tabung reaksi lalu
terhadap orang yang terkontaminasi,
dibungkus dengan aluminium foil.
tetapi bisa juga melalui makanan atau
Kultur diinkubasi pada suhu 37oC
air. Sebagai contoh, telah diketahui
selama 16-18 jam. Satu ujung jarum
bahwa penggunaan air tanah
ose dicelupkan ke dalam medium
mempunyai andil terhadap shigellosis
perbanyakan dan digoreskan pada
yang terjadi di Florida, yang telah
medium selektif SSA secara kuadran.
menginfeksi sekitar 1200 orang.
Selanjutnya, diinkubasi pada suhu
Tujuan dari praktikum kali ini
37oC selama 1 jam.
ialah untuk mengetahui kontaminasi
Koloni spesifik Salmonella
bakteri Salmomnella-Shigella pada
dan Shigella diisolasi di medium
sampel air sungai, air limbah industri,
SSA miring. Isolat diinokulasikan
air selokan, air limbah rumah tangga.
 Nama Asisten : Jedi Riazi
Tanggal Praktikum : 15 Mei 2023
Tanggal Pengumpulan : 2 Juni 2023

juga pada agar miring TSI dengan empedu yang dapat menghambat
digoreskan pada permukaan agarnya pertumbuhan bakteri dengan gram
dan ditusukkan di bagian bawah agar. positif (Putri et al., 2021). Hal ini
Isolat juga diinokulasikan pada agar berarti Salmonella dan Shigella, yang
tegak LIM atau SIM menggunakan merupakan bakteri gram negatif,
jarum ose lurus. Isolat yang telah dapat tumbuh dengan baik. Medium
diinokulasikan diinkubasi pada suhu TTB harus dipanaskan terlebih
35oC selama 18-24 jam. Hasil dahulu agar tidak menjendal, tetapi
inkubasi diamati. Pada agar TSI dapat media tidak boleh terlalu panas
diketahui terjadinya fermentasi sehingga botol medium dialirkan
glukosa, laktosa, atau sukrosa dahulu dengan air mengalir. Pada
produksi hidrogen sulfida. Pada medium selenit cystine, apabila
medium LIM dan SIM dapat inkubasi terlalu lama maka
diketahui produksi lisin pertumbuhan koliform akan menjadi
dekarbosilase, H2S, indol, dan dominan. Selain itu, pertumbuhan
motilitas bakteri. Reaksi spesifik koliform yang lebih dominan
dicocokan dengan tabel ciri spesifik dibandingkan dengan Salmonella
Salmonella-Shigella pada medium dapat menyebabkan sulitnya isolasi
TSI, LIM, atau SIMa. berikutnya.
Prosedur pertama yang
HASIL DAN PEMBAHASAN dilakukan dalam pengujian bakteri
Pada praktikum kali ini Salmonella-Shigella, yaitu dipipet
meidum yang digunakan ialah suspensi cair sebanyak 1 ml ke dalam
medium TTB atau Tetrathionate 9 ml medium perbanyakan TTB
Broth. Menurut Moriñigo et al. sehingga diperoleh pengenceran 1:10.
(1993), medium TTB dapat Tabung reaksi dibungkus
digunakan untuk pertumbuhan dari menggunakan alumunium foil.
Salmonella typhi yang biasanya Pembungkusan dilakukan karena
hanya tumbuh pada media yang medium TTB mengandung KI
mengandung selenite. TTB terdapat sehingga sensitif terhadap cahaya.
kandungan senyawa selektif garam Kemudian kultur diinkubasi pada
 Nama Asisten : Jedi Riazi
Tanggal Praktikum : 15 Mei 2023
Tanggal Pengumpulan : 2 Juni 2023

suhu 37oC selama 16-18 jam. Waktu SSA juga terkandung pepton yang
optimum inkubasi dapat dilihat ketika berperan untuk pemberi nutrisi untuk
senyawa antimikroba bakteriosin pertumbuhan bakteri (Splittsoesser &
diproduksi optimal yang ditandai Vanderzant, 1992).
dengan besarnya zona bening. Apabila sampel menunjukkan
Berdasarkan hasil penelitian yang positif Salmonella, maka akan
dilakukan oleh Khoiriyah dan memiliki ciri-ciri adanya koloni
Ardiningsih (2014), waktu optimal berwarna hitam. Ciri-ciri sampel
untuk inkubasi Salmonella dilakukan positif mengandung Shigella ditandai
selama 16-18 jam dengan alasan dengan adanya koloni berwarna
karena waktu inkubasi optimum bagi merah muda. Bakteri Salmonella akan
Salmonella adalah ketika 16 jam. menghasilkan enzim tiosulfat
Dilanjutkan dengan reduktase yang akan bereaksi dengan
dicelupkan satu ujung jarum ose ke kandungan sodium tiosulfat yang ada
dalam medium perbanyakan dan pada media SSA sehingga muncul
digoreskan pada medium selektif endapan atau bintik hitam yang
SSA secara kuadran. Selanjutnya, merupakan gas H2 S. berbeda dengan
diinkubasi pada suhu 37oC selama 1 bakteri Shigella, bakteri ini tidak
jam. Streak pada SSA dilakukan agar menghasilkan enzim tiosulfat
koloni dapat tumbuh secara terpisah. reduktase sehingga koloni yang
Medium Salmonella-Shigella Agar terbentuk tidak berwarna dan tidak
(SSA) digunakan karena media SSA berbintik hitam (Aini, 2018).
merupakan media selektif yang dapat Berdasarkan hasil pengujian
mendeteksi keberadaan bakteri bakteri Salmonella-Shigella pada
Salmonella dan Shigella yang tumbuh tabel 1, didapatkan pada kelompok 1,
pada sampel. Pada SSA terkandung 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, dan 10 terdeteksi
garam empedu, brillian green, dan adanya Salmonella dan Shigella yang
tiosulfat yang memiliki fungsi ditandai dengan adanya koloni
sebagai penghambat bakteri gram berwarna hitam yang berarti
positif dan bakteri koliform lainnya Salmonella dan merah muda yang
(Febriyanti, 2020). Pada medium berarti Shigella. Akan tetapi, pada
 Nama Asisten : Jedi Riazi
Tanggal Praktikum : 15 Mei 2023
Tanggal Pengumpulan : 2 Juni 2023

sampel kelompok 6 hanya ditemukan munculnya warna kehitaman. Pada

Shigella karena tidak adanya koloni limbah ikan, pada LBSS 0,1 ml
berwarna hitam. terdapat sedikit E.coli, Salmonella,

Dari hasil pengamatan uji dan Shigella. Pada LBSS 1 ml dan

penguat, pada sampel limbah rumah LBDS 10 ml, ditemukan medium

makan ditemukan bahwa adanya banyak ditumbuhi oleh Salmonella

sedikit koliform E.coli pada LBDS. dan Shigella yang ditandai dengan

Salmonella dan Shigella tumbuh warna kehitaman dan adanya E.coli

menyebar pada ketiga cawan petri. yang ditandai dengan adanya koloni

Pada sampel limbah cuci sayur, tidak bakteri berwarna hijau mengkilap.

adanya E.coli, tetapi tumbuh koliform Pad alimbah selokan, ketiganya

lain yaitu Salmonella yang tumbuh positif terdapat E.coli yang ditandai

cukup banyak dan sedikit Shigella. dengan adanya koloni bakteri

Pada limbah lab, terdapat Salmonella berwarna hijau mengkilap pada

dan Shigella yang tumbuh menyebar permukaan agar dan pada LBDS

dibagian tengah dan tidak ditemukan bakteri E.coli tumbuh lebih banyak.

adanya E.coli. Pada limbah kaki lima, Pada limbah sungai, pada LBSS 0,1

Pertumbuhan didominasi oleh ml terdapat banyak E.coli dan adanya

Salmonella, pertumbuhan Shigella pertumbuhan Salmonella dan

hanya sedikit, dan tidak adanya Shigella. Akan tetapi, pada LBSS 1

E.coli. Pada limbah tahu, ketiganya ml dan LBDS 10 ml medium banyak

tidak menunjukkan adanya ditumbuhi Salmonella dan Shigella

pertumbuhan mikroorganisme. Pada lalu pada bagian ujungnya terdapat

limbah cuci daging ketiga medium sedikit E.coli.

memberikn hasil positif terhadap

Salmonella, E.coli, dan Shigella. KESIMPULAN
Bakteri yang mendominasi
Sampel limbah rumah makan,
pertumbuhannya adalah Salmonella.
limbah cuci sayur, limbah lab, limbah
Pada limbah tekstil, ketiganya
kaki lima, limbah tahu, limbah tekstil,
mengandung banyak Salmonella dan
limbah ikan, limbah selokan, dan
Shigella yang ditandai dengan
 Nama Asisten : Jedi Riazi
Tanggal Praktikum : 15 Mei 2023
Tanggal Pengumpulan : 2 Juni 2023

limbah sungai terdeteksi adanya Potentially Hazardous Foods.

Journal of Food Science 41
koloni berwarna hitam yang berarti
(5): 1001–6.
Salmonella dan koloni berwarna Moriñigo, M. A., Muñoz, M. A.,
merah muda yang berarti Shigella. Martinez-Manzanares, E.,
Sánchez, J. M., & Borrego, J.
Akan tetapi, pada sampel limbah cuci J. (1993). Laboratory study of
daging hanya terdapat koloni several enrichment broths for
the detection of Salmonella
berwarna putih yang berarti Shigella. spp. particularly in relation to
water samples. Journal of
Applied Bacteriology, 74(3),
DAFTAR PUSTAKA 330–335.
Putri, R. A., Tyasningsih, W., & Fikri,
Aini, F. 2018. Isolasi dan Identifikasi F. (2021). Uji Cemaran
Shigella sp. Penyebab Diare Salmonella sp.pada Susu
pada Balita. Bio-site. 4(1): 1- Segar Kambing Sapera
40. diKecamatan Siliragung
Febriyanti, I. A. (2020). ANALISIS Kabupaten Banyuwangi.
DAN IDENTIFIKASI Prosiding Seminar Nasional
BAKTERI KOLIFORM Pembangunan dan
PADA ES BATU DARI Pendidikan Vokasi Pertanian.
BERBAGAI PENJUAL Rahmawati, S., Farahdiba, A. U.,
MINUMAN DI SEKITAR Alfan, O., & Adhly, R. B.
SEKOLAH DASAR (2018). IDENTIFIKASI
KELURAHAN TOTAL COLIFORM,
WONOKROMO E.COLI DAN
SURABAYA. Skripsi. SALMONELLA SPP.
Khoiriyah, H., & Ardiningsih, P. SEBAGAI INDIKATOR
(2014). Penentuan Waktu SANITASI MAKANAN
Inkubasi Optimum Terhadap KANTIN DI LINGKUNGAN
Aktivitas Bakteriosin KAMPUS TERPADU
Lactobacillus sp. RED. JKK, UNIVERSITAS ISLAM
3(4). INDONESIA. Jurnal Sains
Kunarso, D. H. (1987). Beberapa dan Teknologi Lingkungan,
Catatan Tentang Bakteri 10(2).
Salmonella. Oseana, 12(4). Splittstoesser, D.F., Vanderzant, C.
Miskimin, D. K., Berkowitz, K.A., 1992. Compendium of
Solberg, M., Riha, W.E., method for the
Franke, W.C., Buchanan, microbiological examination
R.L., O’leary, V. (1976). offoods. American Public
Relationships between Health Association,
Indicator Organisms and Washington DC.
Specific Pathogens in
 Nama Asisten : Jedi Riazi
Tanggal Praktikum : 15 Mei 2023
Tanggal Pengumpulan : 2 Juni 2023

LAMPIRAN

Salmonella Shigella
Sampel Foto Ket
(positif/negatif) (positif/negatif)

Limbah terdapat koloni berwarna

Rumah positif positif hitam (Salmonella) dan
Makan merah muda (Shigella)

Terdapat Koloni berwarna

hitam (salmonnela) dan
Limbah
merah muda (shigella).
Cuci positif positif
Pertumbuhan
Sayur
mikroorganisme didominasi
oleh shigella

Terdapat Koloni berwarna

hitam (Salmonella) dan
Limbah merah muda (Shigella).
positif positif
Lab Pertumbuhan
mikroorganisme didominasi
oleh Shigella

Limbah Terdapat sedikit salmonella,

Kaki positif positif pertumbuhan bakteri
Lima didominasi oleh shigella

pertumbuhan koloni dominan

berwarna pink
Limbah
positif positif bening (Shigella) dengan
Tahu
sedikit koloni hitam
(Salmonella)

Limbah
Terdapat koloni berwarna
Cuci negatif positif
putih (Shigella)
Daging
 Nama Asisten : Jedi Riazi
Tanggal Praktikum : 15 Mei 2023
Tanggal Pengumpulan : 2 Juni 2023

pertumbuhan koloni dominan

berwarna
Limbah
positif positif hitam (Salmonella) dan
Tekstil
beberapa bakteri berwarna
pink (Shigella).

Terdapat sedikit koloni

berwarna hitam (Salmonella)
Limbah
positf positif dan pertumbuhan bakteri
Ikan
didominasi oleh koloni
berwarna pink (Shigella)

Terdapat sedikit koloni

berwarna hitam (Salmonella)
Limbah
positf positif dan pertumbuhan bakteri
Selokan
didominasi oleh koloni
berwarna pink (Shigella)

Terdapat banyak koloni

berwarna
Limbah
positif negatif hitam (Salmonella) dan tidak
Sungai
didapati koloni berwarna
pink (Shigella)
Nama Asisten : Jedi Riazi
Tanggal Praktikum : 15 Mei 2023
Tanggal Pengumpulan : 2 Juni 2023