JUMLAH BAKTERI ASAM LAKTAT DAN HISTOMORFOMETRI

JEJENUM MENCIT (Mus Musculus) YANG DIBERI

PROBIOTIK DAN DITANTANG Salmonella sp.
Hasna Izzatushsholihah Habiebillah1*, Sruti Listra Adrenalin 2, Indah Amalia Amri3
1,2,3
Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Brawijaya
Puncak Dieng Eksklusif, Kalisongo, Kec. Dau, Kab. Malang 65151
Phone: +62341- 5029152, Fax. +62341- 5029152
Corresponding email: hasna@student.ub.ac.id

ABSTRAK
Salmonellosis merupakan penyakit yang disebabkan oleh Salmonella sp. Salmonella sp.
merupakan bakteri patogen yang menyebabkan berbagai penyakit pada saluran pencernaan. Salah
satu cara untuk menghambat perkembangan dari Salmonella sp. adalah pemberian probiotik.
Probiotik merupakan mikroorganisme hidup yang bermanfaat bagi inang karena dapat
menghambat pertumbuhan bakteri patogen dan mengurangi kerusakan usus dari bakteri patogen
pada saluran pencernaan. Secara umum probiotik berasal dari golongan bakteri asam laktat (BAL)
yang memiliki mekanisme melakukan perlekatan pada mukosa usus kemudian mengeluarkan
antimikroba serta mempertahankan sitokin pro-inflamasi IFN-γ dan TNF-α. Sehingga pemberian
probiotik yang ditantang oleh Salmonella sp. diharapkan mampu dalam mengurangi kerusakan
usus akibat dari Salmonella sp. dan berperan dalam memperbaiki struktur usus karena
kemampuannya dalam menjaga respon imun terhadap bakteri patogen. Tujuan penelitian ini untuk
mengetahui pengaruh pemberian probiotik yang ditantang oleh Salmonella sp. terhadap jumlah
bakteri asam laktat dan gambaran histomorfometri jejenum mencit. Penelitian ini adalah penelitian
experimental laboratoris dengan menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) menggunakan 20
ekor mencit jantan berumur 4-6 minggu dengan berat 18-30 gram yang dilakukan perlakuan
selama 7 hari. Kelompok perlakuan terdiri dari P1 (probiotik dan Salmonella), P2 (probiotik), P3
(Salmonella), dan K- (kontrol negatif). Variabel yang diamati adalah jumlah BAL dengan
melakukan perhitungan metode Total Plate Count (TPC) dan gambaran histomorfometri jejenum
mencit menggunakan image J. Data yang diperoleh dianalisis secara kuantitatif menggunakan
analisis uji One Way Anova dan dilanjutkan uji Duncan. Hasil penelitian menunjukkan kelompok
P1 (probiotik dan Salmonella) mampu meningkatkan jumlah bakteri asam laktat jejenum tetapi
tidak secara signifikan (p>0,05). Pada gambaran histomorfometri jejenum kelompok P1 (probiotik
dan Salmonella) meningkatkan lebar vili secara signifikan (p<0,05), akan tetapi tidak
meningkatkan panjang vili dan menurunkan jarak antar vili secara signifikan (p>0,05) bila
dibandingkan kelompok P4 (kontrol).

Kata Kunci : Salmonella sp, probiotik, bakteri asam laktat, total plate count (TPC),
histomorfometri.
 ABSTRACT

Salmonellosis is a disease that caused by Salmonella sp. Salmonella sp is a pathogenic

bacteria that causes various digestive tract diseases. One of another way to inhibit the development
of Salmonella sp. is probiotics treatment. Probiotics are living microorganisms which are
beneficial for host due to activity of inhibiting the growth pathogenic bacteria in gastrointestinal
tract and has the ability to repair the structure of the intestine villi because of pathogenic bacteria.
Probiotics are commonly produced by Lactic Acid Bacteria (LAB) which has mechanism of
attachment into intestinal mucosa to secretes antimicrobial and maintains pro-inflammatory
cytokines IFN-γ and TNF-α. Probiotics treatment which challenged by Salmonella sp. expected to
decreased intestinal damage from Salmonella sp. and improving intestinal structure because
probiotics can maintain an immune response to pathogenic bacteria. The objective of this study
was to reveal the effect of probiotic treatment which defied by Salmonella sp. According to the
amount of Lactic Acid Bacteria and jejunum histomorphometry of mice after being treated. This
study was experimental laboratory design based on Completely Randomized Design (CRD) using
20 male mice aged 4-6 weeks with 18-30 gram weight and treated for 7 days. The treated group
consist of P1 (probiotic and Salmonella sp), P2 (probiotic), P3 (Salmonella sp), and K- (negative
control). The observed variables were the number of LAB by calculating the Total Plate Count
(TPC) and the jejunum histomorphometric calculation is using image-J. The data obtained were
analyzed quantitatively using One-Way ANOVA test and continued by the Duncan test. The
results showed P1 group (probiotic and Salmonella sp) was able to increase the number of jejunal
lactic acid bacteria but not significantly (p>0.05). The result of histomorphometry of the jejunal
showed P1 (probiotic and Salmonella sp) that were significantly increase the width of villi
(p<0.05), but not increased the length of villi and descreased the distance between villi
significantly (p>0.05) than P4 (control) group.

Keywords: Salmonella sp, probiotic, lactic acid bacteria, total plate count (TPC),
histomorphometric.

1. PENDAHULUAN toksin sehingga dapat menimbulkan berbagai

penyakit saluran pencernaan (Ersawati, dkk.,
Sistem pencernaan merupakan saluran
2018). Menurut Joni dan Abrar (2018),
yang berperan dalam proses digesti makanan,
bakteri yang berperan dalam merusak
absorbsi nutrisi, dan eliminasi sisa makanan.
mukosa usus antara lain Salmonella sp.,
Kesehatan saluran pencernaan perlu untuk
Escherichia coli, Staphylococcus aureus,
diperhatikan, karena saluran pencernaan
Shigella sp., Vibrio cholerae dan Vibrio
terutama organ usus berperan penting
parahaemolyticus.
terhadap adanya keberadaan bakteri patogen.
Salmonella sp. merupakan salah satu
Bakteri patogen dalam usus bersifat toksik
mikroba patogen dalam usus inang. Infeksi
karena mampu menyebabkan kerusakan pada
yang disebabkan oleh bakteri ini biasa
mukosa usus dengan cara adhesi, invasi,
disebut dengan salmonellosis. Salmonella sp.
multiplikasi dan kemudian mengeluarkan
pada usus mampu melakukan penempelan
(adhesi), menginvasi ke dalam mukosa dan
selanjutnya replikasi dengan membentuk
koloni pada sel epitel usus. Hal ini
dipengaruhi oleh faktor virulensi dari
Salmonella sp. yaitu berhubungan dengan
kemampuan nya dalam adhesi atau
perlekatan pada mukosa usus (Wresdiyati,
dkk., 2013). Menurut Santoso (2002),
terdapat dua cara Salmonella sp. dalam
melakukan adhesi yaitu menggunakan
fimbrae dan afimbrial adhesin atau
permukaan protein (outer membran protein).
Sehingga apabila Salmonella sp. telah
melakukan perlekatan, Salmonella sp. akan
menghasilkan toksin cytolethal distending
toxins (CDT) yang kemudian mempengaruhi
sekresi air, elektrolit dan reaksi inflamasi.
Reaksi inflamasi yang terjadi apabila
berkelanjutan akan menyebabkan
peradangan pada usus (enteritis), ulkus, abses
dan terjadinya nekrosis atau kematian sel
pada jaringan usus. Sehingga sangat
membahayakan bagi sel inang yang terinfeksi
oleh bakteri ini (Darmawan, 2017).
Pemberian probiotik pada beberapa
penilitian telah dibuktikan mampu dalam
meningkatan jumlah bakteri asam laktat
(BAL) dan menurunkan jumlah bakteri
patogen dalam usus. Bakteri asam laktat
(BAL) dalam perannya dalam mukosa usus
mampu untuk mengurangi kerusakan pada
vili yang diakibatkan oleh bakteri patogen
seperti Salmonella sp. Hal ini dikarenakan
bakteri asam laktat dapat menghambat
Salmonella sp. dengan cara menempel
(adhesi) pada epitel usus dan membentuk
koloni. Kemudian menghasilkan senyawa
antimikroba yang memiliki interaksi dengan
membran sel Salmonella sp. dengan cara
mendenaturasi protein membran, disfungsi
permeabilitas membran sel dan mengubah
sifat membran sel dari Salmonella sp.
Sehingga Salmonella sp. akan dihambat
dalam bereplikasi (Gupta, et al., 2018).
Selain itu, bakteri asam laktat dalam menjaga
mekanisme perlindungan terhadap
Salmonella sp. akan mempengaruhi imunitas
yaitu dengan meningkatkan fagositosis dan
memodifikasi produksi sitokin pro-inflamasi
IFN-γ dan TNF-α. Sehingga dapat
mengurangi keparahan dari infeksi
Salmonella sp. (Castillo, et al., 2011).
Berdasarkan dari latar belakang di atas maka
penelitian ini bertujuan untuk mengetahui
jumlah bakteri asam laktat (BAL) jejenum
mencit dan gambaran histomorfometri
jejenum mencit yang dilakukan pemberian
probiotik dan ditantang dengan Salmonella
sp.
2. MATERI DAN METODE
Alat dan Bahan
Alat untuk pemeliharaan mencit
terdiri atas kandang dengan ukuran 40x30 cm
untuk 4 kelompok perlakuan, tutup kandang
terdiri dari anyaman kawat, tempat pakan dan
minum dengan bahan plastik dan sekam. Alat
pemberian perlakuan pada mencit terdiri atas
tabung reaksi, sonde lambung, spuit 1 ml,
timbangan digital, object glass, mikroskop,
ose, masker, glove. Alat untuk nekropsi
mencit terdiri atas scalpel, blade, gunting,
pinset, pot organ, masker, glove dan papan
nekropsi. Alat untuk inokulasi Bakteri Asam
Laktat terdiri atas tabung reaksi, rak tabung,
cawan petri, bunsen, yellow tip, mikropipet,
vortex, inkubator. Alat untuk pembuatan
histopatologi terdiri atas pot organ, kaset,
pisau mikrotom, pinset, inkubator,
waterbath, object glass, cover glass. Alat
untuk pembacaan dan pengarsipan preparat
histopatologi terdiri atas sampel
histopatologi, mikroskop, optik lab, dan
computer.
Bahan penelitian ini untuk perlakuan
mencit terdiri atas Mencit jantan (Mus
Musculus) umur 4-6 minggu dengan berat
badan 18-30 gram, biakan bakteri Salmonella
sp, probiotik EM4™, Nutrient Broth, dan
PBS steril. Bahan yang digunakan untuk
nekropsi mencit terdiri atas formalin dan
alkohol. Bahan untuk inokulasi bakteri asam
laktat terdiri atas media MRS Broth, media
MRSA, PBS steril, CaCO3. Bahan untuk
pembuatan histopatologi terdiri atas Etanol
bertingkat 70%, 80%, 85%, 90%, 95%,
100%, Xylol absolut I, Xylol absolut II, Xylol
absolut III, Parafin I, Parafin II, Parafin III,
hematoxylin, alkohol asam, aquades, eosin,
entellan.
Hewan Coba
Hewan coba pada penelitian ini
adalah mencit (Mus Musculus) jantan dengan
umur 4-6 minggu dan berat badan 18-30
gram. Mencit diperoleh dari Fakultas
Kedokteran Universitas Muhammadiyah
Malang. 20 ekor mencit dibagi dalam 4
perlakuan. Mencit diadaptasikan selama tujuh
hari sebelum dilakukan perlakuan. Pemberian
pakan sebanyak 10% dari berat badan perhari,
sehingga pemberian untuk satu ekor mencit per
hari yaitu 3-5 gram (Nugroho, 2018).
Sedangkan untuk konsumsi minum mencit
diberikan secara ad libitum. Kemudian mencit
dibagi 4 kelompok secara acak dengan setiap
perlakuan terdiri dari 5 ekor mencit. Mencit
ditempatkan dalam kandang plastik berukuran
30x40 cm beralaskan sekam kayu dan ditutup
menggunakan kawat.
Pembuatan Suspensi Probiotik
Probiotik yang digunakan dalam
penelitian ini yaitu probiotik EM4™.
Probiotik EM4™ mengandung bakteri
Lactobacillus casei dan Rhodopseudomonas
palustris serta ragi Saccharomyces
cerevisiae. Pembuatan suspensi larutan
probiotik EM4™ dilakukan dengan
mencampurkan EM4™ dan aquades
menggunakan perbandingan 1 : 1000.
Pemberian probiotik dilakukan setelah masa
aklitimasi mencit selama 7 hari (Wiryawan
dan Sriasih, 2012).
Pembuatan Suspensi Salmonella
Nutrient Broth 3 ml dan
diinkubasikan dengan suhu 37°C selama 24
jam. Selanjutnya dilakukan pewarnaan Gram
untuk mengamati Gram Salmonella sp.
Apabila didapati Gram dan morfologi
merupakan karakteristik dari Salmonella sp.
dapat dilanjutkan pembuatan suspensi
Salmonella sp. Suspensi diencerkan dengan
aquades steril dan dihomogenkan hingga
kekeruhan nya sama dengan standart
kekeruhan McFarland 0,5 (1,5 x 108 CFU/ml)
(Aristyawan, dkk., 2018).
Isolat Salmonella sp. dilakukan
pewarnaan Gram untuk mengetahui Gram
dari Salmonella sp. Pewarnaan Gram
dilakukan dengan mengambil satu koloni
bakteri pada media Bismuth Sulfite Agar
(BSA) menggunakan ose pada gelas objek.
Kemudian dilakukan fiksasi menggunakan
bunsen. Setelah difiksasi, preparat kemudian
diwarnai dengan urutan pewarnaan kristal
violet selama 2 menit, penetesan lugol selama
1 menit, penetesan alkohol 95% selama 1
menit dan pewarnaan safranin selama 2
menit, dimana masing masing urutan
pewarnaan dibilas dengan aquades. Apabila
preparat telah kering, dapat diamati
menggunakan mikroskop dengan perbesaran
1000x dengan bantuan minyak emersi (Dewi,
2013). Pada pewarnaan Gram Salmonella sp.
akan didapatkan bakteri berwarna merah dan
berbentuk basil. Salmonella sp. terwarnai
merah dikarenakan Salmonella sp. tergolong
ke dalam bakteri Gram negatif sehingga saat
pewarnaan Gram, lipid pada dinding sel akan
luruh apabila diteteskan alkohol dan akan
melepaskan warna kristal violet sehingga
bakteri hanya terwarnai oleh warna safranin
(Murti, 2017).
Perlakuan
Perlakuan pemberian probiotik dan
Salmonella sp. dilakukan pada kelompok 1.
Probiotik dan Salmonella sp. diberikan
melalui sonde atau oral gavage yaitu jarum
dengan ujung tumpul yang digunakan untuk
menginduksi bakteri langsung ke dalam
lambung. Pemberian probiotik dilakukan
setelah aklimatisasi, selama 7 hari pada hari
ke-8 sampai hari ke-14 sebanyak 0,5 ml/hari.
Kemudian diberikan Salmonella sp. pada hari
ke-15 sampai hari ke-21 selama 7 hari dengan
dosis 1,5 x 108 CFU/ml menggunakan
standard McFarland 0,5 sebanyak 0,5
ml/hari. Mencit kemudian dinekropsi pada
hari ke-25 (Mulaw, et al., 2020).
Perlakuan pemberian probiotik
dilakukan pada kelompok 2. Cara pemberian
Probiotik EM4™ melalui peroral
menggunakan sonde lambung. Probiotik
diberikan setelah masa aklitimasi selama 7
hari penuh pada hari ke-8 sampai hari ke-14.
Volume untuk pemberian probiotik EM4™
pada mencit yakni 0,5 ml/ekor/ hari diberikan
sebelum makan. Kemudian mencit
dinekropsi pada hari ke-18 (Kusuma, dkk.,
2012). Perlakuan pemberian Salmonella sp.
dilakukan pada kelompok 3. Salmonella sp.
diberikan melalui sonde lambung setelah
masa aklitimasi selama 7 hari penuh pada
hari ke-8 sampai hari ke-14. Salmonella sp.
diberikan dengan dosis 1,5 x 108 CFU/ml
(standard McFarland 0,5) sebanyak 0,5
ml/hari. Kemudian mencit dinekropsi pada
hari ke-18 (Mulaw, et al., 2020).
Perhitungan Jumlah Bakteri Asam Laktat
Isolasi bakteri asam laktat dilakukan
dengan teknik pengenceran bertingkat.
Sampel jejenum sebanyak 1 gram yang telah
ditimbang kemudian dilarutkan ke dalam
MRS broth. Volume MRS broth sesuai
dengan banyaknya volume MRS broth yang
dibutuhkan, pada penelitian ini menggunakan
MRS broth 3-4 ml. Kemudian media MRS
broth yang telah dimasukkan sampel jejenum
di homogenkan (Pundir, 2013). Setelah
sampel telah homogen, dapat dilakukan
pengenceran bertingkat. Teknik pengenceran
yang digunakan untuk bakteri asam laktat
yaitu pengenceran bertingkat 101 -108 dengan
sampel pengenceran yang diambil yaitu 105,
106, 107, 108. Pengenceran dilakukan dengan
menggunakan mikropipet diambil sebanyak 1
ml sampel dalam MRS broth secara aseptis
dimasukkan ke dalam 9 ml PBS steril (0,1%)
dan dihomogenkan. Selanjutnya diambil 1 ml
dari keempat seri pengenceran terakhir dan
dikulturkan pada MRS-Agar tersuplementasi
CaCO3 1% dengan metode spread plate.
Kemudian media diinkubasikan pada suhu
37°C selama 48 jam menggunakan anaerobic
jar. Setelah didapati adanya pertumbuhan
koloni, kemudian dihitung jumlah koloninya
menggunakan metode Total Plate Count
(TPC) (Amaliah, dkk., 2018).
Identifikasi Gram dan pengamatan
morfologi secara mikroskopik bakteri asam
laktat (BAL) dilakukan dengan pewarnaan
Gram. Perhitungan jumlah bakteri asam
laktat dilakukan menggunakan metode Total
Plate Count (TPC).
Pembuatan Preparat Histopatologi
Sampel yang telah disimpan dalam
pot organ berisi formalin 10% diambil untuk
diperkecil dengan dipotong kurang lebih
setebal kaset jaringan yaitu 0,5 cm dan
dimasukkan ke dalam kaset jaringan. Kaset
jaringan yang telah berisi sampel organ
kemudian dilakukan tahapan pembuatan
preparat histopatologi. Tahapan pertama
yaitu dehidrasi yang bertujuan untuk
mengeluarkan air dari jaringan dilakukan
dengan memasukkan kaset jaringan ke dalam
alkohol bertingkat 70%, 80%, 85%, 90%,
95%, 100% masing masing selama 1 jam.
tahapan kedua yaitu clearing yang bertujuan
untuk menggantikan air dalam jaringan
sehingga nantinya dapat diinfiltrasi oleh
parafin, clearing dilakukan dengan
memasukkan kaset jaringan ke dalam xylol
absolut I,II,III masing masing selama kurang
lebih 5-20 menit. Tahapan ketiga yitu
parafinisasi dan blocking yang bertujuan
untuk mengisi jaringan dengan parafin
sehingga mudah untuk dilakukan
pemotongan, parafinisasi dilakukan dengan
memasukkan kaset jaringan ke dalam parafin
suhu 58-60°C sebanyak tiga kali masing-
masing selama 1 jam. Kemudian sampel
organ ditanam dalam block dan disimpan
dalam lemari pendingin. Tahapan keempat
yaitu sectioning dilakukan dengan
pemotongan menggunakan alat microtome
kurang lebih ketebalan 3-5 mikron dan
diletakkan pada gelas objek (Fitriani, dkk.,
2018).
Pewarnaan Hematoksilin-Eosin
merupakan tahap selanjutnya setelah
blocking. Tahap pertama dalam pewarnaan
HE yaitu deparafinisasi untuk
menghilangkan parafin, tahap ini dilakukan
dengan menggunakan xylol sebanyak tiga
kali. Kemudian dilanjutkan dengan rehidrasi
menggunakan alkohol bertingkat 100%,
95%, 90%, 80%, 70% masing masing 5
menit. Selanjutnya pewarnaan jaringan
menggunakan hematoksilin untuk mewarnai
inti sel selama 5 menit, dilanjutkan alkohol
asam 4 detik, dibilas menggunakan air
mengalir, dan pewarnaan menggunakan
eosin untuk mewarnai sitoplasma selama 5
menit. Tahap setelah pewarnaan yaitu
dehidrasi menggunakan alkohol bertingkat,
dilanjutkan clearing menggunakan xylol
dengan tiga kali pengulangan. Tahap terakhir
dari histoteknik diakhiri dengan penutupan
jaringan (mounting) dilakukan dengan
meneteskan entellan pada gelas objek
kemudian ditutup menggunakan cover glass
(Fitriani, dkk., 2018).
Pengukuran Jejunum Mencit
Menggunakan Image J
Pengukuran morfometri usus mencit
secara mikroskopik dilakukan untuk
menentukan panjang vili, lebar vili dan jarak
antar vili. Setelah preparat telah diwarnai
menggunakan pewarnaan Hematoksilin-
Eosin (HE), kemudian dilakukan pengamatan
pada sampel menggunakan mikroskop.
Pengamatan mikroskop untuk preparat
histologi dapat dibantu menggunakan
micrometer eyepiece yang dipasangkan pada
mikroskop cahaya. Perbesaran yang
digunakan untuk pengamatan menggunakan
mikroskop yaitu perbesaran lensa objektif
100 kali. Sampel yang telah diamati dapat
didokumentasikan dengan mikroskop yang
telah terhubung dengan komputer. Penentuan
panjang vili, lebar vili dan jarak antar vili
jejenum menggunakan software
MacBiophotonics Image J dengan diambil 4
lapang pandang jejenum pada sisi yang
berlawanan kemudian di rata-rata sehingga
didapatkan data ukuran pada setiap kelompok
perlakuan (Apriliyani, dkk., 2018).
3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Jumlah Bakteri Asam Laktat Jejunum
Mencit Metode TPC
Perhitungan jumlah bakteri asam
laktat jejenum mencit dilakukan dengan
metode Total Plate Count (TPC)
Gambar 1. Grafik Rata-Rata Jumlah Bakteri Asam Laktat
Berdasarkan dari rata-rata pada setiap
perlakuan didapatkan jumlah bakteri asam
laktat pada pengenceran 105 tertinggi pada
kelompok P1 (Probiotik + Salmonella) dan
terendah pada kelompok P3 (Salmonella).
Hasil pengenceran 106 tertinggi pada
kelompok P1 (Probiotik + Salmonella) dan
terendah pada kelompok P3 (Salmonella).
Hasil pengenceran 107 tertinggi pada
kelompok P1 (Probiotik+Salmonella) dan
terendah pada kelompok P3 (Salmonella).
Hasil pengenceran 108 tertinggi pada
kelompok P1 (Probiotik + Salmonella) dan
terendah pada kelompok P3 (Salmonella).
menggunakan pengenceran bertingkat 101-
108 dengan empat pengenceran terakhir 105-
108 diinokulasikan pada media MRSA.
Perhitungan koloni dilakukan menggunakan
colony counter. Jumlah koloni dari cawan
petri dihitung lalu dikalikan dengan faktor
pengenceran nya. Hasil perhitungan pada
setiap perlakuan kemudian di rata-rata.
Grafik hasil rata-rata jumlah bakteri asam
laktat ditunjukkan Gambar 1.
Hasil perhitungan jumlah bakteri
asam laktat pada setiap pengenceran
dianalisis kuantitatif menggunakan SPSS
25.0 for windows untuk dilakukan uji
normalitas dan homogenitas. Didapatkan
data terdistribusi normal dan homogen
(p>0,05), kemudian dilanjutkan uji analisis
ANOVA. Hasil uji ANOVA menunjukkan
nilai p>0,05 sehingga membuktikan bahwa
tidak terdapat perbedaan yang signifikan
antar perlakuan P1, P2, P3 dan P4 terhadap
jumlah bakteri asam laktat jejenum mencit.
Perbandingan jumlah bakteri asam laktat
pada setiap kelompok perlakuan disajikan
pada Tabel 1.
 Prinsip dilakukannya pengenceran
adalah untuk mengurangi kuantitas dari
bakteri asam laktat, sehingga akan
didapatkan jumlah koloni bakteri asam laktat
5
tertinggi pada pengenceran 10 dan semakin
tinggi pengenceran jumlah koloni akan
semakin berkurang. Berdasarkan dari Tabel
1 didapati pada kelompok P1
6
(probiotik+Salmonella) pengenceran 10
jumlah koloni lebih rendah bila dibandingkan
Tabel 1. Perbandingan Jumlah Bakteri Asam Laktat Jejunum Mencit
Kelompok
105
P1 (Probiotik+Salmonella) 219,5 ± 3,94
P2 (Probiotik) 176,5 ± 3,56
P3 (Salmonella) 171,75 ± 5,23
P4 (Kontrol) 204,75 ± 6,67
Keterangan : cfu/ml = colony forming unit/ ml
Berdasarkan hasil rata-rata jumlah
bakteri asam laktat kelompok P1 pemberian
probiotik ditantang Salmonella menghasilkan
jumlah bakteri asam laktat yang tinggi pada
pengenceran 105-108 dibandingkan
kelompok P4 (Kontrol) dan kelompok P3
hanya diberikan Salmonella. Menurut
penelitian Abdel-daim (2013), pemberian
probiotik yang ditantang dengan Salmonella
lebih dari 24 jam mampu untuk
meningkatkan jumlah bakteri asam laktat
usus dan mengurangi kolonisasi dari
Salmonella dengan mekanisme kompetisi
sehingga menghambat Salmonella invasi
masuk ke dalam mukosa usus serta
memodulasi peningkatan respon imun. Pada
kelompok P1 (Probiotik + Salmonella)
adanya peningkatan bakteri asam laktat
didukung oleh aktivitas probiotik dalam
meningkatkan jumlah bakteri asam laktat
pengenceran 107. Menurut Joni (2018),
adanya pertumbuhan koloni yang tidak sesuai
pada pengenceran dapat diakibatkan
kesalahan saat melakukan proses
pengenceran seperti saat pengambilan
suspensi yang terlalu banyak atau sedikit dari
pengenceran sebelumnya. Bisa juga
diakibatkan dari larutan suspensi yang
kurang homogeny sehingga tidak mewakili
populalsi bakteri yang ada pada pengenceran.
Rata-rata (CFU/ml) ± SD
106 107 108
203,5 ± 6,45 208,5 ± 5,82 173 ± 4,77
154,25 ± 7,23 107 ± 6,83 84,25 ± 5,36
139,75 ± 3,78 50,25 ± 1,62 43,75 ± 0,95
198,25 ± 4,13 116,25 ± 5,4 50,25 ± 2,32
untuk melawan patogen Salmonella
(Higgins, et al., 2009). Bakteri asam laktat
memiliki mekanisme dalam melawan
Salmonella dengan menghasilkan asam laktat
dan asam asetat untuk menurunkan pH
sehingga Salmonella terhambat untuk
tumbuh, persaingan situs reseptor, stimulasi
sistem kekebalan dan produksi antimikroba
aktif seperti bakteriosin (Adetoye, et al.,
2018).
Penelitian ini menunjukkan kelompok
P1 (Probiotik + Salmonella) menghasilkan
jumlah bakteri asam laktat pada pengenceran
105-108 yang lebih tinggi bila dibandingkan
kelompok P2 hanya diberikan probiotik. Hal
ini dikarenakan kemungkinan adanya
stimulasi bakteri asam laktat yang lebih
banyak pada pemberian probiotik yang
ditantang Salmonella sebagai bentuk
mekanisme pertahanan dan mekanisme
kompetisi terhadap keberadaan patogen
Salmonella (Higgins, et al., 2009). Kelompok
P3 pemberian hanya Salmonella
menunjukkan adanya penurunan jumlah
bakteri asam laktat pada pengenceran 105-108
bila dibandingkan kelompok P4 (Kontrol)
dan kelompok P2 dengan pemberian
probiotik. Hal ini dikarenakan pertumbuhan
bakteri asam laktat berbanding terbalik
dengan keberadaan bakteri patogen
Salmonella. Terdapat kompetisi antara
bakteri asam laktat (BAL) yang secara
normal berada di usus dengan Salmonella
dalam melakukan perlekatan pada mukosa
usus dan mendapatkan nutrisi. Sehingga
perlakuan dengan Salmonella tanpa probiotik
akan menurunkan jumlah bakteri asam laktat
(BAL) di usus (Salehizadeh, et al., 2020).
Hasil dari penelitian ini, didapati
kelompok P2 (Probiotik) pada pengenceran
105-107 jumlah bakteri asam laktat lebih
rendah dibandingkan kelompok P4 (kontrol)
dan pada pengenceran 108 didapati lebih
tinggi dibandingkan kelompok P4 (kontrol)
akan tetapi tidak mengalami perbedaan yang
jauh secara signifikan. Hasil ini tidak sesuai
dengan penelitian yang telah dilakukan
(Wijayanti dan Ardyati, 2007), yang
menyebutkan pemberian probiotik mampu
dalam meningkatkan jumlah bakteri asam
laktat pada usus mencit. Hal ini dapat
diakibatkan dari kesalahan saat proses
pengenceran yaitu suspensi yang kurang
homogen sehingga tidak mewakili dari
populasi bakteri yang ada. Sehingga
didapatkan hasil pada pengenceran 105-107
kelompok P2 (Probiotik) lebih rendah akan
tetapi pada pengenceran 108 bakteri asam
laktat yang didapatkan jauh meningkat
dibandingkan kelompok P4 (Kontrol).
Pengaruh lainnya yaitu pada pemberian
perlakuan melalui oral yang dapat
meningkatkan stress pada mencit sehingga
mampu menurunkan nafsu makan. Menurut
(Widodo, dkk., 2015), bakteri asam laktat
dalam usus membutuhkan keberadaan nutrisi
untuk tumbuh. Jumlah bakteri asam laktat
akan meningkat apabila dalam usus mencit
mengandung nutrisi dengan jumlah yang
cukup. Bakteri asam laktat membutuhkan
nutrisi berupa karbohidrat yang mudah larut
sebagai sumber energi dan membentuk asam
laktat. Bakteri asam laktat juga memerlukan
protein sebagai sumber nitrogen untuk
membentuk biomassa sel. Sehingga faktor
keberadaan nutrisi yang cukup dalam usus
mampu meningkatkan jumlah koloni bakteri
asam laktat.
Pengaruh Pemberian Probiotik Ditantang
Salmonella sp. Terhadap Histomorfometri
Jejunum Mencit
Histomorfometri jejenum mencit diukur
menggunakan image-J dengan kalibrasi 400×
dan perbesaran mikroskop 400×. Pengukuran
histomorfometri jejenum dilakukan dengan
empat lapang pandang yang berbeda pada
setiap kelompok perlakuan. Parameter yang
diamati meliputi panjang vili, lebar vili dan
jarak antar vili. Menurut Wang and Peng
(2008), panjang vili diukur dari apex vili
hingga ke persimpangan kripta vili (crypt
villus junction). Lebar vili diukur dari tepi
epitel vili hingga ke tepi epitel vili yang
berlawanan melewati titik tengah dari vili dan
diukur pada bagian terlebar dari vili. Jarak
antar vili diukur dengan menghitung jarak
atau celah antar satu vili dengan vili yang lain
(Nawi et al., 2013).
Pengukuran histomorfometri jejenum
mencit pada setiap perlakuan di rata-rata.
Hasil rata-rata histomorfometri jejenum
didapatkan panjang vili tertinggi pada
kelompok P2 (probiotik) dan terendah pada
kelompok P3 (Salmonella). Lebar vili
tertinggi pada kelompok P2 (probiotik) dan
terendah pada kelompok P3 (Salmonella).
Histomorfometri Jejenum Mencit
250 225,53
200 175,44
150
79,81 85,13
100
50 17,25
12,4
0
P1 (Probiotik + P2 (Probiotik)
Salmonella)
Panjang Vili
Gambar 2. Grafik Rata-Rata Histomorfometri Jejenum pada Setiap Kelompok
Perlakuan
Hasil pengukuran histomorfometri
jejenum kemudian dianalisis menggunakan
SPSS 25.0 for windows untuk dilakukan uji
homogenitas dan normalitas (p>0,05) sebagai
salah satu syarat dalam dilakukannya uji
oneway ANOVA. Hasil uji ANOVA
menunjukkan nilai p<0,05 yang
menunjukkan bahwa terdapat perbedaan
yang nyata antara perlakuan (P1,P2,P3,P4)
terhadap histomorfometri jejenum mencit
(Lampiran 5). Sehingga dilanjutkan uji
analisis setelah ANOVA (post hoc) yaitu uji
Duncan untuk mengetahui perbedaan dari
setiap kelompok perlakuan. Hasil pengujian
statistik dapat diamati pada Tabel 2.
Berdasarkan dari pengamatan analisis
histomorfometri pada Tabel 2., dapat diamati
Jarak antar vili tertinggi pada kelompok P3
(Salmonella) dan terendah peda kelompok P2
(probiotik). Hasil grafik rata-rata
histomorfometri ditunjukkan pada Gambar
2.
146,69 154,99
67,2
58,46
32,59 18,9
P3 (Salmonella) P4 (Kontrol Negatif)
Lebar Vili Jarak antar vili
pada panjang vili terdapat perbedaan yang
signifikan antara kelompok P2 (Probiotik)
dengan kelompok P1
(Probiotik+Salmonella), P3 (Salmonella) dan
P4 (Kontrol). Sedangkan panjang vili tidak
berbeda nyata antara kelompok P1
(Probiotik+Salmonella), P3 (Salmonella) dan
P4 (Kontrol). Menurut penelitian Hussein
(2020), pemberian probiotik secara efektif
mampu dalam meningkatkan panjang vili
usus secara signifikan untuk memperluas
area absorpsi, peningkatan sekresi enzim dan
peningkatan sistem transportasi nutrisi.
Perbedaan yang tidak nyata antara kelompok
P1 (Probiotik+Salmonella), P3 (Salmonella)
dan P4 (Kontrol) dapat dipengaruhi oleh
faktor virulensi dari Salmonella. Hal ini
membuktikan bahwa pemberian Salmonella
tidak berpengaruh secara signifikan terhadap
panjang vili. Hal ini berkaitan dengan faktor
virulensi Salmonella yang berhubungan
dengan kemampuan nya dalam melakukan
replikasi dan melakukan kolonisasi pada
Tabel 2. Hasil perbandingan histomorfometri jejenum mencit pada setiap kelompok perlakuan
Kelompok
Panjang Vili
P1 (Probiotik+Salmonella) 175.44 ± 1.77a
P2 (Probiotik) 225.53 ± 1.83b
P3 (Salmonella) 146.69 ± 1.49a
P4 (Kontrol) 154.99 ± 2.93a
Hasil lebar vili jejenum tidak menunjukkan
perbedaan yang signifikan pada kelompok P1
(Probiotik+Salmonella) dan P2 (Probiotik).
Hal ini menunjukkan pemberian probiotik
berpengaruh nyata terhadap lebar vili.
Sehingga pemberian probiotik yang ditantang
Salmonella mampu meningkatkan lebar vili
secara signifikan. Lebar vili pada kelompok
P3 (Salmonella) menunjukkan hasil yang
tidak signifikan dengan kelompok P4
(Kontrol). Hal ini berhubungan dengan
kemampuan Salmonella dalam adhesi atau
melakukan perlekatan pada mukosa.
Sehingga apabila Salmonella telah
melakukan perlekatan dengan baik,
Salmonella akan menghasilkan cytolethal
distending toxins yang kemudian
mempengaruhi morfologi dari vili usus. Pada
penelitian ini didapati pada penambahan
Salmonella tidak berbeda nyata dengan
kelompok kontrol yang dapat diakibatkan
kurangnya kemampuan Salmonella dalam
melekat di usus sehingga menghasilkan
mukosa usus antara lain fimbrae yaitu protein
polimer yang berfungsi sebagai mediator
Salmonella dalam menempel pada mukosa
usus (Gut, et al., 2018).
Rata-rata (µm) ± SD
Lebar Vili Jarak antar vili
79.81 ± 0.72b 17.25 ± 0.67ab
85.13 ± 0.59b 12.40 ± 0.50a
58.46 ± 0.88a 32.59 ± 1.83c
67.20 ± 1.18a 18.90 ± 0.74b
perbedaan yang tidak signifikan (Wresdiyati,
dkk., 2013).
Hasil jarak antar vili jejenum
menunjukkan tidak adanya perbedaan yang
signifikan antara kelompok P1
(Probiotik+Salmonella) dengan kelompok P2
(Probiotik). Hal ini menunjukkan pemberian
probiotik tanpa Salmonella ataupun dengan
Salmonella tidak menunjukkan perubahan
yang nyata pada jarak antar vili jejenum.
Pada kelompok P1 (Probiotik+Salmonella)
dengan kelompok P4 (Kontrol) tidak
menunjukkan perbedaan yang signifikan. Hal
ini menunjukkan pemberian probiotik dengan
Salmonella tidak menghasilkan perubahan
yang nyata pada jarak antar vili jejenum.
Jarak antar vili pada kelompok P3
(Salmonella) menunjukkan adanya
perbedaan yang signifikan dengan kelompok
P1 (Probiotik+Salmonella), kelompok P2
(Probiotik), dan kelompok P4 (Kontrol). Hal
ini dipengaruhi oleh kemampuan Salmonella
dalam mendenaturasi protein pada membran
sel sehingga mengakibatkan deskuamasi sel
epitel usus dan meningkatkan jarak antar vili jarak antar vili dapat diamati pada Gambar
secara signifikan (Handoko, dkk., 2015). 3.
Hasil pengukuran histomorfometri
jejenum meliputi panjang vili, lebar vili dan

Gambar 3. Pengukuran Panjang, Lebar dan Jarak Antar Vili Jejenum (Perbesaran 400x).
Keterangan: (A) Kelompok P1 (Probiotik + Salmonella), (B) Kelompok P2 (Probiotik), (C)
Kelompok P3 (Salmonella), (D) Kelompok P4 (Kontrol).

Keterangan :
: Panjang vili :Jarak antar vili
: Lebar vili
diberikan Salmonella. Hal ini membuktikan
Kelompok P1 dengan pemberian berkurangnya kerusakan yang diakibatkan
probiotik dan ditantang Salmonella oleh Salmonella. Perlakuan pemberian
menunjukkan histomorfometri lebih baik bila probiotik mampu dalam mengurangi
dibandingkan dengan kelompok P3 hanya kerusakan yang diakibatkan Salmonella
dengan menstimulasi imunitas humoral dan
seluler. Stimulasi imunitas melalui
peningkatkan populasi dan proliferasi
limfosit, mempertahankan sitokin pro-
inflamasi IFN-γ, TNF-α, dan peningkatan IL-
12, IL-10, Imunoglobulin IgA, IgE IgG, IgM.
Bakteri asam laktat yang dihasilkan oleh
probiotik melakukan perlekatan pada epitel
usus untuk menstimulasi aktivitas makrofag,
aktivasi fagositosis, dan kolonisasi dari
Salmonella sp. Sehingga mampu
mempertahankan mekanisme perlindungan
vili terhadap Salmonella sp. dengan menjaga
respon imun (Gupta, et al., 2018; Astawan,
dkk., 2011). Probiotik di usus memiliki
kemampuan dalam mengurangi perkembang-
biakan Salmonella sp. dengan melakukan
adhesi pada sel epitel untuk berkompetisi
dengan Salmonella sp. dan menghasilkan
senyawa antimikroba bakteriosin yang
memiliki interaksi terhadap membran sel
Salmonella sp. sehingga mampu
mendenaturasi protein pada membran sel.
Probiotik menghasilkan produk asam laktat
untuk menurunkan pH sehingga
pertumbuhan Salmonella sp. terganggu
(Castillo, et al., 2011; Adetoye, et al., 2018).
Berdasarkan dari hasil analisis
histomorfometri jejenum yang ditunjukkan
pada Tabel 2. kelompok P2 pemberian
probiotik menunjukkan hasil yang lebih baik
bila dibandingkan dengan kelompok P4
(kontrol). Panjang vili dan lebar vili
pada kelompok P2 (Probiotik) mengalami
peningkatan. Hal ini dipengaruhi oleh
peningkatan asam lemak rantai pendek.
Bakteri probiotik memiliki kemampuan
dalam menghasilkan asam lemak rantai
pendek dari proses fermentasi. Asam lemak
rantai pendek merupakan komponen
penyusun dari sel epitel usus sehingga
semakin banyak asam lemak rantai pendek
yang dihasilkan akan menstimulasi
perbanyakan sel epitel usus (Izzuddiyn, dkk.,
2018). Adanya peningkatan panjang dan
lebar vili akan memperluas daerah absorbsi
makanan dan nutrisi, sehingga akan
meningkatkan kinerja usus dalam mencerna
makanan (Matur and Eraslan, 2012). Jarak
antar vili pada pemberian probiotik menurun
hal ini dipengaruhi oleh pertambahan jumlah
vili sehingga densitasnya menjadi lebih
padat. Menurut Hartono (2016), probiotik
memiliki kemampuan dalam peningkatan
jumlah vili dengan menstimulasi
perbanyakan epitel usus untuk memperbaiki
performa dalam penyerapan nutrisi.
Kelompok P3 dengan pemberian
hanya Salmonella menunjukkan adanya
penurunan panjang vili dan lebar vili
dibanding kelompok P4 (Kontrol). Menurut
Na Dong (2019), infeksi yang diakibatkan
oleh Salmonella sp. akan mengakibatkan
panjang vili dan lebar vili lebih pendek secara
signifikan dibanding kelompok tanpa infeksi
Salmonella dikarenakan Salmonella akan
memicu terjadinya inflamasi sehingga terjadi
degenerasi epitel dan kerusakan epitel vili
yang mengakibatkan penurunan panjang dan
lebar vili. Penurunan tinggi vili dan lebar vili
akan mempengaruhi kemampuan usus dalam
mencerna dan menyerap makanan.
Peningkatan jarak antar vili pada kelompok
P3 dipengaruhi oleh deskuamasi sel epitel
yang mengakibatkan pelepasan epitel yang
menempel pada membrana basalis sehingga
jarak antar vili terlihat lebar. Gambaran
inflamasi yang diakibatkan oleh Salmonella
akan menunjukkan ruang antar vili dan jarak
antar vili menjadi lebih lebar karena adanya
kerusakan pada lapisan mukosa (Handoko,
dkk., 2015).
Berdasarkan dari pemaparan diatas
dapat disimpulkan, kelompok P2 (Probiotik)
menunjukkan hasil histomorfometri yang
lebih baik yaitu adanya peningkatan panjang
vili, lebar vili dan penurunan jarak antar vili
dibandingkan perlakuan tanpa pemberian
probiotik P4 (Kontrol). Sehingga pemberian
probiotik dinilai efektif dalam meningkatkan
performa penyerapan nutrisi dengan
memperbaiki struktur vili usus. Pada
kelompok P3 (Salmonella) menunjukkan
hasil histomorfometri dengan penurunan
panjang vili, lebar vili dan peningkatan jarak
antar vili. Hal ini menunjukkan adanya
kerusakan dan penurunan kemampuan vili
dalam menyerap nutrisi. Sehingga pada
kelompok P1 (Probiotik + Salmonella) selain
menghasilkan histomorfometri yang jauh
lebih baik dibuktikan mampu dalam
mengurangi kerusakan vili akibat dari
patogen Salmonella.
4. KESIMPULAN
Berdasarkan dari hasil dan analisis
penelitian ini dapat disimpulkan bahwa
pemberian probiotik dan ditantang
Salmonella dapat meningkatkan jumlah
bakteri asam laktat jejenum mencit tetapi
tidak secara signifikan (p>0,05) bila
dibandingkan kelompok kontrol. Kemudian,
pemberian probiotik dan ditantang
Salmonella pada gambaran histomorfometri
mampu meningkatkan lebar vili secara
signifikan (p<0,05). Akan tetapi tidak
meningkatkan panjang vili dan menurunkan
jarak antar vili secara signifikan (p>0,05) bila
dibandingkan kelompok kontrol.
DAFTAR PUSTAKA
Abdel-Daim, A., Hassouna, N., Hafez, M.,
Ashor, M.S.A, and Aboulwafa, M.M.
2013. Antagonistic Activity of
Lactobacillus Isolates against
Salmonella typhi In Vitro.
http://dx.doi.org/10.1155/2013/6806
05. [13 August 2013].
Adetoye, A., E. Pinloche., B. A. Adeniyi, and
F. A. Ayeni. 2018. Characterization
and Anti-Salmonella Activities of
Lactic Acid Bacteria Isolated From
Cattle Faeces.
https://bmcmicrobiol.biomedcentral.c
om/articles/10.1186/s12866-018-
1248-y. [30 August 2018].
Amaliah, Z. Z. N., S. Bahri, dan P. Amelia.
2018. Isolasi dan Karakterisasi
Bakteri Asam Laktat dari Limbah
Cair Rendaman Kacang Kedelai.
Jurnal Fitofarmaka Indonesia, 5 (1) :
253–257.
Apriliyani, N. I., M. A. Djaelani, dan S. Tana.
2018. Profil Histologi Duodenum
Berbagai Itik Lokal di Kabupaten
Semarang. Jurnal Bioma : Berkala
Ilmiah Biologi, 18 (2) : 144-150.
Aristyawan, A. D., N. E. Sugijanto, dan
Suciati, S. 2018. Potensi Antibakteri
dari Ekstrak Etanol Spons Agelas
Cavernosa. Jurnal Farmasi dan Ilmu
Kefarmasian Indonesia, 4 (1) : 39-44.
Astawan, M., T. Wresdiyati., I. I. Arief, dan
D. Febiyanti. 2011. Potensi Bakteri
Asam Laktat Probiotik Indigenus
Sebagai Antidiare dan
Imunomodulator. Jurnal Teknologi
dan Industri Pangan, 22 (1) : 11-16.
 Bacha, W. J. 2012. Color Atlas of
Veterinary Histology. Wiley-
Blackwell. Inggris. 164-167.
Castillo, N.A., G. Perdigón and A. M. de
LeBlanc. 2011. Oral administration
of a probiotic Lactobacillus
modulates cytokine production and
TLR expression improving the
immune response against Salmonella
enterica serovar Typhimurium
infection in mice.
http://www.biomedcentral.com/1471
-2180/11/177. [3 August 2011].
Darmawan, Alfian. 2017. Indentifikasi
Salmonella sp pada Daging Ayam
Broiler di Pasar Tradisional Kota
Makassar [Skripsi]. Fakultas
Kedokteran Hewan. Universitas
Hasanuddin.
Dewi, A. K. 2013. Isolasi, Identifikasi dan
Uji Sensitivitas Staphylococcus
Aureus Terhadap Amoxicillin dari
Sampel Susu Kambing Peranakan
Ettawa (Pe) Penderita Mastitis Di
Wilayah Girimulyo, Kulonprogo.
Jurnal Sains Veteriner, 31 (2) : 138-
150.
Ersawati, N., N. N. W. Susari, dan N. L. E.
Setiasih. 2018. Berat Organ Usus
Tikus Putih (Rattus Norvegicus)
Pasca Penambahan Tepung Daun
Kelor (Moringa Oleifera) pada
Pakan. Indonesia Medicus Veterinus,
7 (3) : 278-284.
Ferreira, R. B. R., N. Gill., B. P. Willing., L.
C. M. Antunes., S. L. Russell., M. A.
Croxen, and B. B. Finlay. 2011. The
Intestinal Microbiota Plays A Role In
Salmonella-Induced Colitis
Independent of Pathogen
Colonization. Journal PLOS ONE, 6
(5) : 1-11.
Fitriani, F., H. Husmimi, dan M. Akmal.
2018. Aplikasi Metode Emersi
Fiksatif Berbeda Terhadap Morfologi
Histologi Testis dan Epididimis
Kambing Lokal (Capra Sp.). Jurnal
Agripet, 18 (1) : 24–29.
Gupta, R., K. Jeevaratnam., and A. Fatima.
2018. Lactic Acid Bacteria: Probiotic
Characteristic, Selection Criteria,
And Its Role In Human Health.
Journal of Emerging Tecnologies and
Innovatife Research, 5 (10) : 411-424.
Gut, A. M., T. Vasiljevic., T. Yeager, and O.
N. Donkor. 2018. Salmonella
infection – Prevention And Treatment
by Antibiotics and Probiotic Yeasts:
A Review. Microbiology Society, 164
: 1327–1344.
Handoko, T., Aulanni'am., D. A. Oktavianie.
2015. Pengaruh Terapi Ekstrak
Etanol Akar Seledri (Apium
groveolens) terhadap Aktifitas
Protease dan Gambaran
Histopatologi Jejunum Tikus (Rattus
norvegicus) Model IBD
(Inflammatory Bowel Disease) Hasil
Induksi Indometasin [Tesis]. Fakultas
Peternakan. Universitas Brawijaya.
Hartono, E. F., N. Iriyanti, dan S.
Suhermiyati. 2016. Efek Penggunaan
Sinbiotik Terhadap Kondisi
Miklofora dan Histologi Usus Ayam
Sentul Jantan. Jurnal Agripet, 16 (2) :
97-105.
Higgins, J. P., A. D. Wolfenden., S. N.
Henderson., A. T. Rodriguez., J. L.
Vicente., B. M. Hargis, and G. Tellez.
2010. Effect of Lactic Acid Bacteria
 Probiotic Culture Treatment Timing
on Salmonella Enteritidis in Neonatal
Broilers. Poultry Science Association,
89 : 243–247.
Hussein, E. O. S., S. H. Ahmed., A. M.
Abudabos., M. R. Aljumaah., M. M.
Alkhlulaifi., M. A. Nassan., G. M.
Suliman., M. A. E. Naiel and A. A.
Swelum. 2020. Effect of Antibiotic,
Phytobiotic and Probiotic
Supplementation on Growth, Blood
Indices and Intestine Health in
Broiler Chicks Challenged with
Clostridium perfringens.
doi:10.3390/ani10030507. [18 March
2020].
Joni, L. S., dan M. Abrar. 2018. Sambar
(Cervus Unicolor) di Taman Rusa
Aceh Besar. Jurnal JIMVET, 2 (1) :
77-85.
Kusuma, I. G. E., A. A. G. Arjana, dan I. K.
Berata. 2012. Pemberian Efektif
Microorganism (Em4®) Terhadap
Gambaran Histopatologi Hati Tikus
Putih (Rattus Norvegicus) Betina.
Indonesia Medicus Veterinus, 1 (5) :
582-595.
Matur, E. and E. Eraslan. 2012. The Impact
of Probiotics on the Gastrointestinal
Physiology. doi: 10.5772/34067. [12
April 2012].
Mulaw, G., D. Muleta., A. Tesfaye, and T.
Sisay. 2020. Protective Effect Of
Potential Probiotic Strains From
Fermented Ethiopian Food Against
Salmonella Typhimurium Dt104 In
Micehttps://doi.org/10.1155/2020/75
23629. [14 April 2020].
Murti, N. I. K. 2017. Prevalensi Salmonella
Sp. Pada Cilok Di Sekolah Dasar Di
Denpasar. E-Jurnal Medika, 6 (5) :
36-41.
Nugroho, R. A. 2018. Mengenal Mencit
Sebagai Hewan Laboratorium.
Mulawarman University Press.
Samarinda. 43-47.
Warna Silikon RTV Sebagai Bahan
Protesa Maksilofasial Ekstraoral.
Jurnal Kedokteran Gigi, 4 (2) : 163-
168.
Pundir, R. K. 2013. Probiotic Potential Of
Lactic Acid Bacteria Isolated From
Food Samples: An In Vitro Study.
Journal Of Applied Pharmaceutical
Science, 3 (3) : 85-93.
Salehizadeh, M., M. H. Modarressi., S. N.
Mousavi, and Maryam T. E. 2020.
Evaluation of lactic acid bacteria
isolated from poultry feces as
potential probiotic and its in vitro
competitive activity against
Salmonella typhimurium. Veterinary
Research Forum, 11 (1) 67 – 75.
Widodo, T. S., B. Sulistiyanto, dan C.
S.Utama. 2015. Jumlah Bakteri Asam
Laktat (BAL) dalam Digesta Usus
Halus dan Sekum Ayam Broiler yang
Diberi Pakan Ceceran Pabrik Pakan
yang Difermentasi. Jurnal Agripet, 15
(2) : 98-103.
Wijayanti, E. D. dan T. Ardyati. 2012. Uji
Potensi Perlekatan Bakteri Asam
Laktat Isolat TLA-15 dan TLA-20
pada Sel Epitel Usus Tikus (Rattus
Norvegicus). Jurnal Farmasi dan
Ilmu Kesehatan, 1 (2) : 1-6.
Wiryawan, K. G. dan M. Sriasih. 2012.
Penampilan Ayam Pedaging yang
Diberi Probiotik (Em-4) Sebagai
 Pengganti Antibiotik. Majalah Ilmiah
Peternakan, 8 (2) : 1-10.
Wresdiyati, T., S. R. Laila., Y. Setiorini., I. I.
Arief, dan M. Astawan. 2013.
Probiotik Indigenus Meningkatkan
Profil Kesehatan Usus Halus. Jurnal
MKB, 45 (2) : 78-85.