LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI PIPERIN DALAM SIMPLISIA

LADA HITAM

Diajukan sebagai salah satu syarat nilai akhir praktikum fitokimia

Kelompok  2014 // jam 07.00-10.00

: 5C  –  2014
Asisten : Julia Ratnawati, Dra., MS., Apt,
Ketua : Rizqi Irfan Anshory (3311141090)
(3311141090)
Anggota : Lisna Nurhayati
Nurhayat i Kurnia (3311141109)
(3311141109)
Derawati
Derawa ti Gustiani
Gustia ni (3311141112)
(3311141112)
Inggi Novitasari
Novita sari (3311141115)
(3311141115)
Wurityas Armiyanti
Armi yanti (3311141116)
(3311141116)
Rahmi Islamy
Islam y (3311141122)
(3311141122)
Feby Anisa Fitrianti Suwito (3311141
(3311141126)
126)

PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS
AKULTAS FARMASI
ARM ASI
UNIVERSIT
UNIVERSI TAS JENDERAL
J ENDERAL ACHMAD YANI
YANI
CIMAHI
2017
 DAFTAR ISI
DAFTAR
DAFTAR ISI .............................................
..........................................................
............. Error! Bookmark not defined.

BAB I PENDAHULUAN ............................

...................................................
.............................................
....................................
.............. 1

1.1 Latar Belakang .............................

...................................................
............................................
............................................
...................... 1

1.2 Rumusan Masalah ........................

..............................................
............................................
............................................
...................... 2

1.3 Tujuan ............................................................

...................................................................................
..............................................
.........................
.. 2

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

PUSTAKA .................................
.......................................................
............................................
...................... 3

2.1 Tinjauan Botani Tanaman Lada Hitam ...............................................

..........................................................
........... 3

2.2 Senyawa Alkaloid ...........................................

.................................................................
............................................
.........................
... 6

2.3 Senyawa Piperin .............................................

...................................................................
............................................
.........................
... 7

2.4 Proses Isolasi...............................................

Isolasi.....................................................................
............................................
.............................
....... 7

2.5 Identifikasi karakteristik ...................................

.........................................................
..........................................
.................... 10

BAB III ALAT

ALAT DAN BAHAN ............................................
...................................................................
..................................
........... 12

3.1 Alat ............................

...................................................
.............................................
............................................
......................................
................ 12

3.2 Bahan .............................................................

....................................................................................
..............................................
....................... 12

BAB IV METODE PENELITIAN ....................................

..........................................................
..................................
............ 13

BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................

................................................................
.................... 17

5.1 Hasil ........................................................

..............................................................................
.............................................
...............................
........ 17

5.2 Pembahasan ............................................

..................................................................
............................................
...............................
......... 26

BAB VI KESIMPULAN DAN SARAN ..........................................

..............................................................
.................... 34

6.1 Kesimpulan ....................................................

...........................................................................
..............................................
....................... 17

6.2 Saran ............................................

..................................................................
............................................
..........................................
.................... 26

DAFTAR
DAFTAR PUSTAKA
PUSTAKA ...........................................
.................................................................
............................................
...........................
..... 36

LAMPIRAN ..........................................
................................................................
............................................
..........................................
.................... 38
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Lada atau sering disebut merica ( Piper
 Piper nigrum L) secara empiris dikenal
sebagai tanaman yang berkhasiat yang digunakan sebagai bahan obat alternative
seperti analgetik, antipiretik, memperlancar proses pencernaan dan diduga juga
sebagai pencegah kanker karena bersifat antioksidan, tetapi masyarakat sering
 juga menggunakan buah lada hitam sebagai bahan penyedap rasa untuk makanan.
makanan.
Berbagai manfaat lada tersebut sangat berhubungan erat dengan senyawa
metabolit sekunder terutama alkaloida. Peperin merupakan senyawa metabolit
sekunder yang juga merupakan suatu senyawa alkaloid utama yang terkandung
dalam buah lada hitam. Piperin adalah komponen pembentuk oleoresin berupa
campuran antara mintak atsiri dan resin (damar) yang diperoleh dengan isolasi.
Isolasi dalam percobaan ini yaitu mengambil senyawa piperin yang
terdapat dalam lada hitam melalui ekstraksi refluks dengan menggunakan pelarut
organik seperti metanol. Piperin merupakan senyawa polar begitupun dengan
metanol sehingga metanol mampu melarutkan piperin yang terdapat dalam lada
sesuai dengan prinsip like dissolved like. Berdasarkan Literatur bahwa piperin
merupakan senyawa alkaloid yang dapat larut dalam alkohol yaitu metanol,
dimana antara piperin dengan metanol
meta nol mampu untuk membentuk ikatan hydrogen.
Berdasarkan latar belakang di atas, maka dilakukanlah percobaan ini untuk
mengetahui metode isolasi piperin dari lada (Piper ningrum L.).Percobaan yang
dilakukan yaitu
yaitu meliputi meliputi penafisan fitokimia
fitokimia sebagai uji pendahuluan,
kemudian dilakukan proses isolasi dengan memperoleh ekstrak dengan cara
refluks menggunakan metanol, kemudian dilakukan pemantauan KLT terhadap
ekstrak kental yang didapat. Selanjutnya dilakukan proses kristalisasi dan
rekristalisasi untuk memurnikan kristal yang didapat. Setiap kristal yang sudah di
rekristalisasi dilakukan proses KLT hingga hasil menunjukan bahwa kristal
 piperin sudah murni.Kristal yang diperoleh diidentifikasi dengan menggunakan
alat diantaranya Spektrofotometer UV-V
UV-Visible
isible dan Spektrofotometer Inframerah.
Inframerah.

1.2 Rumusan Masalah

Bagaimanakah cara penafisan fitokimia, proses isolasi dan identifikasi senyawa
 piperin yang terkandung pada buah lada hitam?

1.3 Tujuan
Penelitian ini dilakukan, bertujuan untuk mengetahui cara penafisan fitokimia,
 proses isolasi dan identifikasi senyawa piperin yang terkandung pada buah lada
hitam.
 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Tinjauan Botani Tanaman Lada Hitam

2.1.1 Klasifikasi Tanaman
Klasifikasi tanaman lada adalah sebagai berikut :
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Class : Magnoliopsida
Ordo : Piperales
Familia : Piperaceae
Genus : Piper
Species : Piper nigrum L. (3)

2.1.2 Deskripsi Tanaman

Tanaman lada memiliki akar tunggang dengan akar utama dapat
menembus tanah sampai kedalaman 1-2 m. Batang tanaman lada berbuku-buku
dan berbentuk sulur yang dapat dikelompokkan menjadi empat macam sulur, yaitu
sulur gantung, sulur panjat, sulur buah, dan sulur tanah. Daun lada merupakan
daun tunggal dengan duduk daun berseling dan tumbuh pada setiap buku. Warna
daun hijau muda pada waktu muda dan daun tua berwarna hijau mengkilat pada
 permukaan atas. Pertulangan daun melengkung dengan tepi daun bergelombang
atau rata. Bunga-bunga terdapat pada cabang  plagiotrophic (horizontal) yang
tersusun dalam bulir ( spica) atau untai (amentum). Buah lada temasuk buah buni
 berbentuk bulat berwarna hijau dan pada waktu masak berwarna merah. Buah lada
 berwarna putih cokelat dengan permukaan licin. Bila dikeringkan bersama
kulitnya hingga kulit keriput dan berwarna hitam. (4)
 Gambar . Tanaman lada (5)

2.1.3 Karakteristik Sifat

Lada memiliki rasa pedas, berbau khas dan aromatik. Rasa pedas dari buah
lada hitam, 90-95 % disebabkan oleh adanya komponen trans-piperin yang ada
dalam buah lada hitam yang kering kadarnya 2-5 % dan terdiri atas senyawa asam
amida piperin dan asam piperinat. Rasa pedas juga disebabkan oleh adanya
chavicine yang merupaka salah satu isomer dari piperin, selain chavicine terdapat
 juga Isopiperin dan Isochavicine yang merupakan isomer dari piperin.
 O O

O O
H H

H
H H H
H O
O N
N

 Isochavisin  Isopiperin

O
H

H O

H O O
H

N H
H
N
H
H O

Chavisin  Piperin

2.1.4 Kandungan Kimia dan Kegunaan

1. Kandungan kimia
Menurut Williamson (6), kandungan kimia lada hitam terdiri dari:
Minyak atsiri ( Essential oil )
Lada hitam kering mengandung 1,2  –   2,6% minyak atsiri yang terdiri dari
 sabinine (15-25%), caryophyllene, α- pinene, β - pinene, β -ocimene,δ-guaiene,
 farnesol, δ-cadinol, guaiacol, 1-phellandrene, 1,8 cineole, pcymene, carvone,
citronellol, α- thujene, α-terpinene, bisabolene, dllimonene, dihydrocarveol,
camphene dan piperonal.
 Alkoloids dan amides
 Amides merupakan senyawa yang memberikan aroma tajam terdiri dari
 piperine, piperylin, piperolein A dan B, cumaperine, piperanine, piperamides,
 pipericide, guineensine dan sarmentine.
2.4.6 Kromatografi lapis tipis dua dimensi (KLT-2D)
Kromatografi lapis tipis dua dimensi adalah salah satu metode yang
telah banyak digunakan untuk pemisahan sejumlah besar senyawa yang tidak
dapat dipisahkan dalam dimensi tunggal dan juga bertujuan untuk
meningkatkan resolusi sampel ketika komponen-komponen solute
mempunyai karakteristik kimia yang hampir sama, karenanya nilai Rf
 juga hampir sama sebagaimana dalam asam-asam amino. Selain itu, 2 sistem
fase gerak yang sangat berbeda dapat digunakan secara berurutan sehingga
memungkinkanuntuk melakukan pemisahan analit yang mempunyai tingkat
 polaritas yang berbeda. Prinsip dari KLT dua dimensi adalah adsorpsi dan partisi
dengan menggunakanlempeng GF 254 sebagai fase diam dan
 perbandingan eluen pada profil KLT dimana akan memperpanjang lintasan noda
(Rf) dengan menunjukkan seyawa tunggal yang terdapat pada sampel .

2.5 Identifikasi karakteristik

2.5.1 Spektrofotometri UV-Visible
Spektrofotometri UV-Visible adalah bagian teknik analisa spektroskopi
yang memakai sumber radiasi elektromagnetik ultraviolet dekat (190-380 nm) dan
sinar tampak (380-780 nm) dengan memakai instrument spektrofotometer. (10)
Spektrum UV-Vis mempunyai bentuk yang lebar dan hanya sedikit informasi
tentang struktur yang bisa didapatkan dari spektrum ini. Tetapi spektrum ini
sangat berguna untuk pengukuran secara kuantitatif. Konsentrasi dari analit di
dalam larutan bisa ditentukan dengan mengukur absorban pada panjang
(11)
gelombang tertentu dengan menggunakan hukum Lambert-Beer.
2.5.2 Spektrofotometri inframerah (IR)
Spektrofotometri inframerah (IR) merupakan salah satu alat yang dapat
digunakan untuk menganalisa senyawa kimia. Spektra inframerah suatu senyawa
dapat memberikan gambaran dan struktur molekul senyawa tersebut. Spektra IR
dapat dihasilkan dengan mengukur absorbsi radiasi, refleksi atau emisi di daerah
IR. Daerah inframerah pada spektrum gelombang elektromagnetik mencakup
 bilangan gelombang 14.000 cm-1 hingga 10 cm-1. Daerah inframerah sedang
( 4000-400 cm-1) berkaitan dengan transisi energi vibrasi dari molekul yang
memberikan informasi mengenai gugus-gugus fungsi dalam molekul tersebut.
Daerah inframerah jauh (400-10cm-1) bermanfaat untuk menganalisis molekul
yang mengandung atom-atom berat seperti senyawa anorganik, namun
membutuhkan teknik khusus yang lebih baik. Daerah inframerah dekat (12.500-
4000cm-1) yang peka terhadap vibrasi overtone (18)
 BAB III

ALAT DAN BAHAN

3.1 Alat
Timbangan analitik, satu set alat refluks, erlenmeyer, tabung reaksi,
seperangkat alat kromatografi lapisan tipis, pipet tetes, botol vial, beaker glass,
cawan porselen, rotary evaporator, chamber, cawan penguap, Indicator universal
Lampu uv 254 nm atau 365 nm, Spektrofotometer UV-Visible dan
Spektrofotometer Inframerah, alat titik lebur tester digital WRS-100, pipa kapiler
titik leleh, lemari 40º C.

3.2 Bahan
Simplisia lada hitam, KOH 10% , aethanol 96%, methanol, n-heksan, etil
asetat, kloroform, butanol, aseton, toluen pereaksi dragendorf, plat silika gel 60
GF254.
 - 0,005 terhadap
 jumlah simplsia

Kristal tidak murni + 81,64 mg - 0,064 terhadap

Kristal murni  jumlah Kristal total
- 0,068 terhadap
 jumlah ekstrak
- 0,032 terhadap
 jumlah simplisia

B. Hasil Organoleptik Kristal Murni

Pengujian Hasil Literarur
(wiryowidadgo dan sumaali,2007)

Bentuk Kristal seperti Kristal seperti jarum

 jarum
warna Kuning Kuning

Bau Tidak berbau Tidak berabau

C. Hasil penapisan fitokimia alkaloida

Golongan Foto Keterangan Hasil
senyawa
alkaloida Pereaski dragendorf 

Endapan + alkaloida
merah bata

1. Pereaski mayer

Keruh + alkaloida
 D. Hasil pengamatan KLT

Pengujian Visual Uv 254 nm Uv 365 nm Spot Nilai Fase gerak

Rf

Ekstrak
metanol Banyak 0,71 n-heksan :
spot etil asetat

Kristal
(rekistralis 3 spot 0,46 n-heksan :
asi KOH etil asetat
10 %)
 Sturttgart.
14. Iskandar et al, 2003. Panduan Praktis Pencegahan dan Pengobatan Stroke.
Jakarta : Bhuana Ilmu Populer
15. Fessenden dan Fessenden. 1997. Dasar-Dasar Kimia Organik. Jakarta :
Binarupa Aksara
16. Soebagio. 2002. Kimia Analitik, Universitas Negeri Makasar Fakultas MIPA,
Makasar.
17. Nasution M.N., 2010. Manajemen Mutu Terpadu (Total Quality Management),
Ghalia Indonesia, Jakarta.
18. Schechter, I barzilai,I.L., anda Bulatov,V.,1997, Online Remote Prediction of
Gasoline Properties by Combined Optical Method, Ana.Chim.
Acta,339,p,193-199
19. Kister, Henry Z. 1992. Distillation Design (1st ed.). McGraw-Hill.
20. Arsyad, M.Natsir,2001, Kamus Kimia Arti dan Penjelasan Istilah, Gramedia,
Jakarta.
21. Williamson.1999. Macroscale and Microscale Organic Experiments.
Houghton Mifflin Company, U
 LAMPIRAN

BAGAN PENELITIAN

- Dilakukan penafisan fitokimia

- Direfluks dengan methanol
- Disaring

 Dipantau dengan KLT

(n-heksan ; etil asetat)
 Dipekatkan dengan
rotary evaporator

 Di Kristalisasi dengan
KOH 10%

 Diuji kemurnian
dengan klt (n-
heksan:etil)

 Direkristalisasi

(aetanol 96%)

Kristal B
 Diuji kemurnian
dengan KLT (n-
heksan:etil asetat)
 Dipantau dengan KLT
dengan berbagai
 pelarut
 Direkristalisasi
n heksan:etil asetat
(7:3)
  Diuji kemurnian dengan KLT (n-heksanettil asetat)
 Dipantau dengan KLTdengan pelarut campuran
 Dilakukan KLT 2 dimensi
 Dilakukan uji pemantauan dengan pembanding
 Diidentifikasi Kristal denganSpektrofotometriUV dan IR

HASIL

PERHITUNGAN
1. Pemantauan KLT ekstrak etanol lada hitam
Jarak spot : 1,5cm (>2spot)

,5
Rf = = 0,33
4,5

2. Pemantauan KLT kristal (kristalisasi KOH 10%) (eluen n-heksan:etil asetat

(7:3))
Jarak spot : 2,1cm (3spot)

2,
Rf = = 0,46
4,5

3. Pemantauan KLT kristal (rekristalisasi Aethanol 96 %) (eluen n-heksan:etil

asetat (7:3))
Jarak spot : 2,1cm (2spot)

2,
Rf = = 0,46
4,5

4. Pemantauan KLT kristal (eluen Etanol)

Jarak spot : 3,3cm (1spot)

3,3
Rf = = 0,73
4,5

5. Pemantauan KLT kristal (eluen Kloroform 100%)

Jarak spot : 3,2cm (2spot)

3,2
Rf = = 0,71
4,5

6. Pemantauan KLT kristal (eluen Etanol)

Jarak spot : 3,3cm (1spot)
 ,3
Rf = = 0,37
3,5

15. Pemantauan KLT kristal : pembanding (1)

Jarak spot : 2,0cm

2,
Rf = = 0,44
4,5

16. Pemantauan KLT kristal : pembanding (2)

Jarak spot : 2,0cm

2,
Rf = = 0,44
4,5

1. Perhitungan Rendemen
 Jumlah sample : 250g
 Jumlah ekstrak : 120g
2
 Rendemen ekstrak =   100% = 48%
25

 Jumlah kristal total : 1,267g

,267
 Rendemen kristal total =   100% = 1,05%
2

 Jumlah kristal belum murni : 14,39mg

4,39mg
 Rendemen kristal belum murni=   100% = 0,0113%
267

 Jumlah kristal murni : 67,25 mg

67,25 mg
 Rendemen kristal murni =   100% = 5,3%
267

 Rendemen kristal murni dan kristal belum murni

67,25+4,39
=   100% = 6,4%
267
H. Sepktrum Spektrofotometer uv-visible
 0.5000

0.4000

      1

0.3000

 .
     s 
      b 
      A

      2
0.2000

      4       3 

0.1000

0.0000
200.00 250.00 300.00 350.00 400.00
nm.

Kristal uji dalam metanol p.a

I. Spektrofotometri FTIR