Nama : Nisa Alifia Zahra

NPM : 1910631210048

1. Tugas 1
 Latar Belakang

Paroxetine adalah obat antidepresan, dan kisaran konsentrasi tipe zat ini
dalam serum adalah 10-50 ng/ml. Struktur dari paroxetine diilustrasikan di bawah
ini:

Paroxetine adalah zat dasar dengan kelarutan air yang rendah. Nilai pKa
adalah 9,8, dan nilai log P adalah 3,15. Dalam prosedur yang disajikan di sini,
PPT dilakukan dalam plasma sampel dari pasien yang diobati dengan paroxetine,
dan pengukuran analitis akhir (tidak dibahas di sini) adalah dengan LCMS.

 Prosedur

Pertama, 250 l plasma dipipet ke dalam centrifuge kecil tabung.

Kemudian, 25 Liter larutan standar internal ditambahkan ke plasma. Standar
internal adalah paroxetine-d6, dan konsentrasi akhir dalam sampel plasma dari
 internal standar adalah 100 ng/ml. Kemudian ditambahkan 500 l asetonitril, dan
campuran divortex dan kemudian disentrifugasi pada 10.000 g selama 11 menit.
Supernatannya kemudian dipindahkan ke botol kaca kecil untuk analisis LC-MS

 Diskusi Pertanyaan

1. Penambahan standar internal dilakukan untuk meningkatkan presisi dan

keakuratan metode. Jadi, untuk pengukuran kuantitatif, paroxetine diukur
relatif terhadap standar internal deuterated. Hal ini telah dibahas dalam Bab 5.

2. Volume sampel plasma adalah 250 l, dan 500 l asetonitril digunakan sebagai
pencetus. Dengan 2,0 volume pengendap ditambahkan per volume plasma,
efisiensi penyisihan protein diharapkan menjadi 99,7% menurut Tabel 6.1.

3. Vortexing (pengocokan kuat) dilakukan untuk memastikan bahwa asetonitril

dan plasma dicampur secara efisien, untuk memberikan curah hujan seefisien
mungkin.

4. Sentrifugasi yang kuat dilakukan untuk memberikan supernatan yang jernih

tanpa bekas protein dan partikel yang diendapkan.

5. Supernatan mengandung asetonitril dan air dengan perbandingan 2:1, dan ini
adalah langsung disuntikkan ke LC-MS. Volume supernatan sekitar 600 l.
Karena volume plasma asli adalah 250 l, prosedur PPT menghasilkan
pengenceran dari sampel.
2. Tugas 2
 Latar Belakang
Citalopram adalah obat antidepresan, dan kisaran konsentrasi khas zat ini
dalam serum adalah 10-200 ng/ml. Struktur citalopram diilustrasikan di sini:

Citalopram adalah zat dasar dengan kelarutan air yang rendah. Nilai pKa
adalah 9,8, dan nilai log P adalah 3,76. Dalam prosedur yang disajikan dalam
kotak ini, LLE dilakukan dari sampel serum dari pasien yang diobati dengan
citalopram, dan analisis akhir pengukuran (tidak dibahas di sini) adalah dengan
LC-MS.

 Prosedur
Pipet 100 l serum ke dalam tabung sentrifus. Pipet 50 l standar internal, 75
l buffer borat jenuh (pH 10,5), dan 1,2 ml etil asetat/n-heptana (80:20, v/v) ke
dalam tabung sentrifus. Campur isinya pada vortexer selama 30 detik. Kocok
tabung sentrifus selama 10 menit secara mekanis. Sentrifuge selama 10 menit
pada 4500 rpm. Kumpulkan 750 l fasa organik, dan evaporasi hingga kering pada
suhu 40 C. Menyusun Kembali dalam 900 l asetonitril/5mM buffer amonium
asetat pH 5,0 (25:75, v/v), dan menyuntikkan ke dalam LC/MS/MS.
 Pertanyaan Mendasar untuk Prosedur—Langkah demi Langkah
1. Mengapa volume sampel 100 l?
2. Mengapa buffer borat dipipet ke dalam sampel?
3. Mengapa volume pelarut 1,2 ml?
4. Mengapa etil asetat dan n-heptana dicampur?
5. Mengapa tabung centrifuge dikocok selama 10 menit?
6. Mengapa ekstrak dilarutkan dalam buffer asetonitril/amonium asetat?

 Diskusi Pertanyaan
1. Karena sensitivitas tinggi instrumen LC-MS modern, hanya sampel kecil
volume yang diperlukan untuk mengukur zat obat. Untuk alasan keamanan
dan praktis, volume kecil merupakan keuntungan, tetapi volume di bawah 50–
100 l bisa sulit untuk pipet dengan akurasi tinggi.

2. Buffer borat ditambahkan ke sampel untuk mengatur pH menjadi sekitar 10,5.

Dibawah kondisi basa, analit target hanya sebagian kecil terionisasi, dan
ekstraksi ke dalam pelarut organik lebih disukai.

3. Volume pelarut besar (1,2ml) untuk memaksimalkan pemulihan ekstraksi.

4. Pelarut ekstraksi yang sempurna untuk citalopram harus memiliki signifikan

sifat donor ikatan hidrogen. Sayangnya, sebagian besar pelarut dengan ini
properti memiliki beberapa kelarutan dalam air, atau mereka tidak cocok
untuk LLE untuk lainnya alasan. Dalam contoh ini, etil asetat dan heptana
dipilih karena volatilitas, dan volume pelarut ditingkatkan menjadi 1,2ml
untuk memaksimalkan ekstraksi pemulihan. Volatilitas tinggi merupakan
keuntungan karena penguapan setelah LLE mengambil hanya waktu yang
singkat.
 5. Tabung centrifuge dikocok selama 10 menit untuk memastikan bahwa pada
dasarnya semua analitmolekul dipindahkan ke pelarut organik.
6. Campuran etil asetat dan n-heptana tidak dapat diinjeksikan ke dalam LC-MS.
Karena itu,ekstrak harus diuapkan dan dilarutkan kembali (dilarutkan) dalam
asetonitril/amonium asetat, yang dapat disuntikkan ke LC-MS.

3. Tugas 3
 Latar Belakang
Trimipramine adalah obat antidepresan.Trimipramine adalah zat dasar (pKa =
9,42) dengan log P-value 4,76. Itu struktur trimipramine diilustrasikan di sini:

 Prosedur
Kartrid C18 500 mg dikondisikan dengan 2 × 1 ml metanol dan 2 × 1 ml air. Muat
1 ml serum sampel, dan cuci dengan 2 × 1 ml air. Elusi dengan 0,5 ml asam asetat
10 mM dalam metanol, dan kumpulkan eluat untuk LC-MS

 Pertanyaan Mendasar untuk Prosedur—Langkah demi Langkah

1. Mengapa kartrid C18 digunakan?
2. Mengapa kartrid dikondisikan dengan 2 × 1 ml metanol?
3. Mengapa kartrid dikondisikan dengan 2 × 1 ml air?
4. Mengapa kartrid dicuci dengan 2 × 1 ml air?
5. Mengapa kartrid dielusi dengan 0,5 ml 10 mM asam asetat dalam metanol?
  Diskusi Pertanyaan
1. Kolom C18 lebih unggul untuk isolasi analit dengan gugus hidrofobik dari
sampel air.
2. Pengkondisian dengan metanol diperlukan untuk solvasi kolom SPE.
3. Pengkondisian dengan air diperlukan untuk menghilangkan kelebihan metanol
dari tempat tidur volume.
4. Kartrid dicuci dengan air untuk menghilangkan komponen matriks yang larut
dalam air dari kolom—ini memberikan pembersihan.
5. Analit dapat dipertahankan juga oleh interaksi sekunder antara silanol dan
gugus amino tersier dalam analit, dan elusi dengan metanol murni tidak efisien.
Dengan asam asetat dalam eluen, interaksi sekunder ditekan secara efektif
karena asam asetat menekan ionisasi gugus silanol

4. Tugas 4
a) Dialysis
Dalam dialisis, molekul dipisahkan berdasarkan ukuran dan/atau berat
molekul. Dalam sebuah standar percobaan dialisis, dua kompartemen dipisahkan
oleh membran semipermeabel.
Transportasi melintasi membran didasarkan pada ukuran: molekul yang
cukup kecil dapat menembus membran, sedangkan molekul yang lebih besar tidak
bisa.
Prinsip dialysis didasarkan pada filtrasi dan bukan ekstraksi. Molecular
weight cutoff (MWCO) digunakan untuk menggambarkan batas eksklusi, dan
dalam dialisis MWCO biasanya antara 0,1 dan 100 kDa. MWCO ditentukan
sebagai ukuran/berat molekul di mana 90% dari sebuah molekul dengan ukuran
yang sama dengan MWCO dipertahankan.
Dalam bioanalisis, dialisis yang paling umum digunakan dalam analisis
sampel plasma atau serum untuk memisahkan analit (molekul obat kecil) dari
plasma atau protein serum dan makromolekul lainnya (Gambar 6.22).
 Membran dialysis dengan MWCO 15 kDa sering diterapkan sebagai
penyaring protein yang cenderung mengganggu dengan analisis kromatografi
berikutnya akan dipertahankan di atas membran dialisis, sedangkan molekul obat
yang lebih kecil akan melewati membran. Membrane dialysis biasanya terdiri dari
selulosa yang diregenerasi, selulosa asetat, atau polikarbonat, semuanya memiliki
MWCO yang tajam dan kecenderungan pengikatan protein yang relatif rendah.
Dialisis dapat dilakukan dalam mode statis atau dinamis. Dialisis
keseimbangan adalah contoh khas dari dialisis yang dilakukan dalam mode statis,
menjaga kedua sampel dan dialisat stagnan.
Dalam mode dinamis, aliran digunakan untuk meningkatkankecepatan
dialysis. Dialisis dinamis dapat dilakukan dengan memindahkan sampel dan/atau
dialisat. Mode ini umumnya digunakan dalam mikrodialisis. Dialisis dinamis
nyaman dilakukan jika volume sampel besar atau jika dialisis lengkap adalah
tujuannya. Kedua bentuk dialisis yang disebutkan menghasilkan pengenceran
sampel.
Dalam bioanalisis, mikrodialisis digunakan untuk mempelajari mekanisme
kerja obat in vivo dan biokimia perilaku hewan. Prinsipnya, misalnya, diterapkan
pada sampel ekstraseluler cairan (ECF) dari otak atau untuk mengevaluasi
penetrasi zat obat melalui kulit dengan menempatkan probe mikrodialisis di
bawah kulit.
Teknik ini membutuhkan pengenalan dari tabung semipermeabel ultra
tipis (probe) di jaringan. Sebuah presisi pompa terhubung ke probe, memompa
cairan yang kompatibel dengan jaringan melalui probe di laju aliran rendah (1-5
l/menit). Terkadang, cairan ini mengandung kalibrator (untuk menentukan in vivo
pemulihan), atau mungkin mengandung obat yang akan diuji. Molekul kecil di
sekitar ECF probe akan berdifusi secara pasif melintasi membran dan memasuki
probe. Ini termasuk fraksi obat yang tidak terikat protein.
Dialisis keseimbangan adalah pengaturan dialisis khusus yang digunakan
untuk menentukan obat-protein mengikat dalam plasma. Dalam pengaturan ini,
dialisis dilakukan dalam mode statis sampai keseimbangan diperoleh melintasi
membran. Plasma kemudian ditempatkan dalam satu kompartemen, dan sebuah
 plasma peniru buffer, biasanya saline buffer fosfat isotonik (PBS, pH 7,4),
ditempatkan di kompartemen lain. Karena pengikatan obat-protein bergantung
pada suhu, sel dialisis termostat digunakan. Dialisis kemudian dilakukan sampai
kesetimbangan (obat konsentrasi dalam kompartemen buffer = konsentrasi obat
bebas dalam kompartemen sampel).
Akibatnya, pada kesetimbangan konsentrasi obat dalam plasma lebih
rendah (karena obat bebas (tidak terikat) didistribusikan di kedua kompartemen),
dan oleh karena itu, untuk menentukan tingkat pengikatan obat-protein atau fraksi
tidak terikat, konsentrasi obat dalam kompartemen buffer serta konsentrasi obat
total dalam plasma kompartemen harus ditentukan. Fraksi tidak terikat kemudian
dapat dihitung dengan membagi konsentrasi dalam kompartemen buffer dengan
konsentrasi obat total.
Dialisis ekuilibrium tidak mahal dan mudah dilakukan, tetapi relatif lama
waktu keseimbangan diperlukan (4-24 jam). Tekniknya dikenal melelahkan, tapi
Teknik dialysis ini telah ditingkatkan dengan pengenalan pelat multiwell.

b) Ultrafitrasi
Ultrafiltrasi adalah cara lain untuk menghilangkan partikel dari larutan
menggunakan selaput semipermeable. Prosesnya, berbeda dengan dialisis,
didorong oleh tekanan atau sentrifugal yang memaksa.
Mirip dengan dialisis, membran memungkinkan lewatnya molekul lebih
kecil dari batas eksklusi, dan dalam ultrafiltrasi, MWCO biasanya antara 1
dan 1000 kDa.
Ultrafiltrasi dapat dilakukan dengan menggunakan membran datar dan
berongga serat. Ada perangkat unit tunggal yang tersedia (100 l hingga beberapa
mililiter) dan multiwell piring.
Dalam bioanalisis, ultrafiltrasi memiliki kegunaan yang sama dengan
dialisis. Ini digunakan sebagai metode untuk menghilangkan protein atau
makromolekul besar lainnya tanpa pengendapan. Hampir semua protein plasma
dapat dihilangkan, dan sampel (berlawanan dengan PPT) tidak diencerkan selama
pemrosesan sampel.
 Ultrafiltrasi, bersama dengan dialisis ekuilibrium, adalah teknik yang
paling sering digunakan untuk menentukan tingkat pengikatan obat-protein dalam
plasma dalam pengembangan obat awal, seperti ultrafiltrasi juga memungkinkan
untuk mempelajari ikatan protein tanpa mengganggu keseimbangan.
Keuntungan utama dari ultrafiltrasi dibandingkan dengan dialisis
kesetimbangan adalah kecepatan, terutama bila menggunakan membran serat
berlubang. Juga mudah untuk menyesuaikan pH dan suhu untuk kondisi fisiologis
sebelum percobaan dan untuk menjaga pH dan suhu selama pengolahan sampel.
Ultrafiltrasi juga dapat (sebagai dialisis) digunakan sebagai teknik preparasi
sampel dalam pemantauan obat terapeutik.
Kerugian potensial dari ultrafiltrasi adalah pengikatan analit ke membran,
yang menghasilkan konsentrasi analit yang lebih rendah dalam filtrat. Kerugian
lain yang mempengaruhi fluks volume adalah akumulasi lapisan protein pada
permukaan membran (juga) disebut lapisan polarisasi konsentrasi). Pembentukan
lapisan ini bergantung pada tekanan, dan efek pada fluks volume meningkat
dengan meningkatnya tekanan yang diterapkan.

c) Ekstraksi Sorben Affinity

Ekstraksi sorben berbasis afinitas adalah ekstraksi berdasarkan interaksi
selektif antara sorben bahan dan analit. Ada berbagai jenis sorben selektif
berdasarkan afinitas prinsip yang tersedia, tiga prinsip yang berbeda akan
dijelaskan: antibodi, polymerly imprinted polymers (MIPs), dan aptamers.
Ketiga prinsip tersebut pada berdasarkan pengenalan molekul, dan
beberapa interaksi yang berbeda penting untuk dicapai ini, seperti interaksi
hidrofilik (ikatan hidrogen dan interaksi dipol), hidrofobik interaksi (gaya van der
Waals), serta interaksi susun.
Prinsip afinitas yang paling luas adalah penggunaan bahan sorben yang
melibatkan interaksi antigen-antibodi. Dengan menggunakan prinsip ini, antibodi
biasanya secara kovalen terikat pada sorben yang sesuai membentuk apa yang
disebut imunosorben. Imunosorben ini kemudian dikemas ke dalam kartrid SPE
atau pra-kolom. Sorben juga dapat digunakan secara langsung dalam larutan jika
itu adalah partikel magnetik yang dilapisi, menggunakan magnet untuk
memisahkan sorben bahan dari larutan.
Antibodi disintesis dengan memulai respon imun pada hewan terhadap
analit (antigen). Selektivitas tergantung pada beberapa parameter di mana tipe
antibody (monoklonal, poliklonal, dan fragmen) yang paling penting. Antibodi
pertama kali dikomersialkan dikembangkan untuk molekul besar. Antibodi
terhadap molekul kecil adalah sesuatu lebih baru, dan untuk memulai respon imun
terhadap molekul dan analit kecil, molekul harus terikat pada molekul pembawa
(biasanya, protein).
Setelah produksi, antibodi dimurnikan dan diimobilisasi ke dukungan
padat (yaitu, silika, agarosa, selulosa, atau polimer sintetik). Antibodi biasanya
kovalen terikat pada gugus epoksida atau aldehida pada penyangga melalui gugus
amino bebas
Setelah imobilisasi, karakterisasi imunosorben dilakukan sehubungan
dengan beberapa parameter, seperti kepadatan ikatan, kapasitas pengikatan,
spesifisitas pengikatan dan reaktivitas silang, volume terobosan, dan pemulihan.
Imunosorben digunakan dengan cara yang sama seperti sorben
konvensional untuk SPE, tetapi penyimpanan dan pengkondisian dilakukan dalam
atau dengan menggunakan PBS. Antibodi sangat selektif dan memiliki afinitas
tinggi terhadap analit yang digunakan untuk memulai respon imun. Karena ini,
imunosorben dapat digunakan untuk mengekstrak dan mengisolasi analit
dari matriks biologis dengan satu langkah, sekaligus menghindari ekstraksi
bersama komponen matriks lainnya.
MIP adalah polimer sintetik dengan rongga khusus untuk analit target.
Mereka kadang-kadang disebut antibodi sintetik, dan keunggulan utamanya
dibandingkan dengan antibodi konvensional antibodi sehubungan dengan
persiapannya, yang mudah, murah, dan cepat.
Selain itu, MIP memberikan stabilitas termal dan kimia yang tinggi.
Beberapa metode persiapan untuk MIP dijelaskan. Metode yang paling banyak
digunakan disebut polimerisasi massaldi mana langkah-langkah umumnya adalah
(i) produksi monolit (dengan
rongga khusus untuk analit; lihat, (ii) penggilingan monolit untuk
menghasilkan partikel, dan (iii) fraksinasi partikel dengan penyaringan untuk
mengisolasi ukuran partikel.
Prosedurnya sederhana, tetapi kerugiannya adalah produksinya
menghasilkan partikel dengan bentuk dan ukuran yang tidak beraturan. Ini
mungkin menyulitkan untuk mengemas kolom SPE secara efisien.
Meskipun prosedurnya sederhana, relatif memakan waktu dan boros
karena hanya 30–40% dari bahan yang diproduksi yang dipulihkan sebagai bahan
yang dapat digunakan.
Selektivitas MIP tertinggi dalam media sintesis, dan ini biasanya aprotik
atau nonpolar pelarut. Ini telah membuat aplikasi ke matriks biologis berair
kurang mudah.
Akhir-akhir ini, fokusnya adalah pada pengembangan sintesis dalam
media berair atau polar, membuat selektivitas lebih baik dalam media sampel
berair. Pendekatan lain untuk meningkatkan selektivitas juga telah diuji. misalnya
kombinasi monomer yang berbeda.
Aptamers adalah oligonukleotida untai tunggal (DNA atau RNA) sintetis
pendek (≤110 bp). Mereka disiapkan dengan menggabungkan kumpulan acak
urutan oligonukleotida dari perpustakaan dengan analit yang bersangkutan, diikuti
dengan pemilihan urutan yang mengikat.
Ini sudah selesai oleh beberapa siklus berulang pemisahan kompleks.
Aptamer menunjukkan pengikatan tertinggi spesifisitas dan afinitas kemudian
diisolasi dan diperkuat oleh rantai polymerase reaksi. Target analit berkisar dari
molekul kecil (100 Da) hingga biomolekul besar (protein), dan aptamer juga dapat
diproduksi ke seluruh sel dan virus.
Keseluruhan proses seleksi dan produksi aptamer disebut SELEX (evolusi
sistematis ligan dengan pengayaan eksponensial). Ini adalah proses yang dapat
diotomatisasi, dan jumlah yang wajar dari aptamers yang sangat spesifik untuk
analit yang diinginkan dapat diproduksi.
d) Mikroekstraksi Fase Padat
Mikroekstraksi fase padat (SPME) diperkenalkan pada awal 1990-an
sebagai teknik mikroekstraksi bebas pelarut berdasarkan partisi dan ekstraksi
analit antara dua fase yang tidak dapat bercampur, fase ekstraksi padat dan sampel
air.

Proses SPME pada dasarnya terdiri dari dua langkah: (i) partisi analit
antara matriks dan fase ekstraksi, tergantung pada rasio partisi analit; dan (ii)
desorpsi analit dari fase ekstraksi dan ke dalam instrumen analitik.

Secara tradisional, SPME sebagian besar telah digunakan dalam

kombinasi dengan GC. Namun, ada tren yang meningkat untuk menggabungkan
SPME dengan kromatografi cair untuk menganalisis volatilitas lemah atau labil
termal senyawa tidak setuju untuk GC. Jika SPME digunakan dalam kombinasi
dengan LC, analit didesorbsi baik dalam antarmuka SPME-LC online atau offline
ke dalam pelarut desorpsi, yang kemudian disuntikkan ke dalam instrumen LC
oleh autosampler.
Perangkat SPME konvensional terdiri dari serat silika leburan yang
dilapisi di bagian luar dengan fase diam yang sesuai, yang disebut serat-SPME.
Perangkat pada dasarnya terdiri dari dudukan rakitan dan rakitan serat yang
melindungi serat ekstraksi internal.Fasa diam dapat berupa cairan (polimer),
padatan (sorben), atau kombinasi dari mereka.
Berlawanan dengan teknik preparasi sampel konvensional seperti LLE dan
SPE, SPME adalah metode persiapan sampel kesetimbangan, di mana hanya
sebagian kecil dari analit dikeluarkan dari sampel dan diekstraksi ke dalam fase
ekstraksi kecil.
Beberapa dari fitur yang menjadi ciri SPME termasuk pembersihan
sampel yang efisien; itu dapat diterapkan pada volume sampel kecil (<100 l);
hampir menghilangkan penggunaan pelarut organik berbahaya; dan
penyederhanaan prosedur preparasi sampel umum dengan meminimalkan jumlah
langkah-langkah yang diperlukan.
SPME dapat dioperasikan dalam mode ekstraksi yang berbeda, tergantung
pada sifat analit dan matriks. Dalam mikroekstraksi fase padat ruang kepala (HS-
SPME), yang merupakan kebanyakan digunakan mode ekstraksi di SPME, serat
diposisikan di ruang kepala di atas matriks. Matriks dapat berupa sampel berair
atau padat.
Analit yang mudah menguap dalam kesetimbangan antara matriks dan
ruang kepala akan diekstraksi oleh fase ekstraksi. Satu Keuntungan menggunakan
HS-SPME adalah matriks dengan berat molekul tinggi yang tidak mudah
menguap interferensi tidak pernah bersentuhan langsung dengan fase ekstraksi,
sehingga meningkatkan selektivitas Bisa didapatkan. Selain itu, kemungkinan
masalah pengotoran dari matriks diminimalkan.
Dalam mode ekstraksi mikro fase padat ekstraksi langsung (DI-SPME),
serat SPME adalah direndam ke dalam sampel berair dan memungkinkan analit
yang menarik untuk dipartisi antara sampel dan fase ekstraksi pada serat. Sebuah
pengaduk magnet sering terletak di sampel untuk meningkatkan konveksi sampel
dan karenanya meningkatkan keseimbangan kecepatan. Namun, kontak langsung
antara sorben dan matriks dapat menyebabkan pengotoran fase ekstraksi dan
karenanya mengurangi sensitivitas, reproduktifitas, akurasi, dan ekstraksi
integritas dari matriks rumit seperti sampel biologis.
Mode ketiga adalah mode SPME yang dilindungi membran. Tujuan utama
ini jarang digunakan mode adalah untuk melindungi serat dari kerusakan saat
serat direndam dalam sampel yang kotor. Ada banyak fase ekstraksi yang tersedia
secara komersial. Mereka saling berbeda karakteristik fisikokimia membantu
meningkatkan jangkauan aplikasi SPME.
Pelapis serat tersedia dalam peningkatan ketebalan dari 7 hingga 150 m,
yang meningkat jumlah analit yang diekstraksi — dan, karenanya, deteksi analit
— tetapi juga meningkat waktu keseimbangan. Pelapis termasuk adsorben fase
tunggal seperti polidimetilsiloksan nonpolar (PDMS), polimer yang lebih polar
 seperti poliakrilat (PA), dan Carbowax (CW) dan sorben fase campuran di mana
polimer nonpolar dan polar dicampur bersama.
Peningkatan ketebalan sorben berarti waktu ekstraksi yang lebih lama. Ini
bisa dikompensasi untuk dengan meningkatkan luas permukaan dengan
menggunakan geometri film tipis. Film tipis seperti itu SPME menyediakan lebih
banyak analit yang diekstraksi tanpa mengorbankan waktu. Namun, ekstraksi
prinsip masih tetap sama seperti yang dibahas untuk serat-SPME. Konfigurasi
film tipis memungkinkan SPME dilakukan dalam format multiwell.
Konfigurasi lain dari SPME adalah SPME dalam tabung, di mana analit
yang diinginkan diadsorpsi ke dinding bagian dalam kapiler tabung. Konfigurasi
ini terutama ditujukan untuk otomatisasi dan throughput tinggi kinerja SPME.
Keuntungan utama SPME adalah kesederhanaannya, eliminasi pelarut,
sensitivitas tinggi, volume sampel kecil, biaya relatif rendah, dan otomatisasi
sederhana.
Analit dalam sampel biologis diekstraksi baik dengan teknik HS-SPME
untuk analit yang mudah menguap atau dengan DI-SPME diikuti oleh derivatisasi
untuk analit yang kurang mudah menguap.
Dalam kedua kasus, ekstraksi sering diikuti dengan analisis pada GC-MS.
Dalam prosedur seperti itu, batas deteksi rendah (LODs) dan kuantisasi yang
sangat baik diperoleh. Namun, untuk obat dan metabolit yang lebih polar dalam
plasma, penerapan SPME mungkin terbatas senyawa dengan konsentrasi
terapeutik yang relatif tinggi karena relatif rendah rasio partisi antara analit polar
dan pelapis SPME dan karenanya relative LOD tinggi.

e) Ekstraksi Berbasis Membran

Teknik preparasi sampel lain yang layak disebut adalah berbasis
membrane teknik ekstraksi. Mereka berbagi fitur umum di mana membran tipis
memisahkan dua fase, dan memungkinkan pengangkutan analit yang diinginkan
dari satu fase, melintasi membran, dan lebih jauh ke fase penerima di sisi
berlawanan dari membran.
 Membrane itu dapat diklasifikasikan sebagai berpori atau tidak berpori.
Selektivitas berpori membran terutama didasarkan pada ukuran pori dan
pengecualian ukuran pori, dan memiliki kesamaan dengan ultrafiltrasi .
Membran tidak berpori dapat berupa membran berpori yang diresapi
dengan pelarut organik untuk membuat apa yang disebut membran cair yang
didukung (SLM), atau seluruhnya padat, misalnya karet silikon. Membran padat
tidak sering digunakan dalam preparasi sampel bioanalitik dan tidak akan
disebutkan lagi di bagian ini.
Transpor melintasi membran cair dapat difasilitasi oleh difusi pasif yang
didorong oleh gradien pH, oleh perbedaan potensial listrik melintasi membran,
atau oleh tekanan melintasi membrane.
Metode ekstraksi membran yang paling sering digunakan dalam
bioanalisis didasarkan pada SLM. SLM memiliki keunggulan selektivitas tingkat
tinggi dan efisiensi pembersihan, pengayaan kemampuan, dan meminimalkan
penggunaan pelarut organik.

Prinsip ekstraksi serupa dengan teori tradisional LLE, di mana analit

dipartisi antara larutan berair dan pelarut organik berdasarkan rasio partisi analit .

Di dalam Ekstraksi SLM, pelarut organik dimasukkan ke dalam membran

tipis berpori. Fitur pelarut organik termasuk tidak dapat bercampur dengan air dan
titik didih yang tinggi untuk menghindari penguapan. SLM menciptakan
penghalang fisik antara dua solusi: sebuah larutan sampel dan larutan akseptor.
Jika larutan akseptor adalah pelarut organik, disebut sistem dua fase dan
mengikuti prinsip umum LLE. Jika larutan akseptor berair, sistem tiga fase hadir,
dan prinsipnya mirip dengan LLE dengan ekstraksi balik.

Contoh , pH dalam larutan sampel tinggi, menghasilkan asam bermuatan

(A), tidak bermuatan basa (B), dan netral (N). Hanya senyawa basa dan netral
yang akan diekstraksi menjadi SLM-nya. PH larutan akseptor di sisi berlawanan
dari SLM rendah; oleh karena itu, partisi senyawa dasar dari SLM dan ke dalam
larutan akseptor lebih disukai.
 Karena mekanisme ekstraksi yang dijelaskan di atas, ekstraksi SLM
adalah selektif metode ekstraksi dengan tingkat kemampuan pembersihan sampel
yang tinggi. Ini membuatnya menjadi berharga alat persiapan sampel dalam
bioanalisis, di mana matriks sering rumit dan mengandung banyak komponen
yang dapat mengganggu hasil analisis.
Namun, ekstraksi SLM peralatan belum tersedia secara komersial, dan
metode persiapan sampel ini oleh karena itu masih belum digunakan di
laboratorium rutin klinis.
Ekstraksi SLM dalam bioanalisis terutama dilakukan dalam konfigurasi
serat berlubang (mikroekstraksi fase cair serat berongga, HF-LPME) atau
multiwell berbasis membran datar konfigurasi (ekstraksi membran cair paralel,
PALME).