LAPORAN PRATIKUM BIOMEDIK 2

Pertemuan ke2 Materi Teknik Pembuatan Media

NAMA: FETI PUSVITA SARI

NIM: 2100029039

GOLONGAN: D1

PROGRAM STUDI KESEHATAN MASYARAKAT

UNIVERSITAS AHMAD DAHLAN

YOGYAKARTA

2022
A.TUJUN

Mahasiswa mampu melakukan teknik pembuatan media padat dan cair dengan benar

dan steril

B. ALAT DAN BAHAN

1. Timbangan

2. Tabung reaksi

3. Tabung durham

4. Labu erlenmeyer

5. Beker glass

6. Pipet ukur

7. Kertas paying

8. Kapas

9. Autoclave

10. Sendok penyu

11. Rak kayu

12. Panci pemanas

13. Aquades steril

14. Media Plate Count Agar (PCA)

15. Media Lactose Broth (LB)

16. Media Brillian Green Bile Lactose Broth atau disingkat BGLB

C. CARA KERJA

1. Pembuatan Media PCA (plate count agar) Padat

a. Bahan ditimbang 2,35 gram dengan pelarut aquadest sebanyak 100 ml.
 b. Masukkan dalam gelas ukur kemudian ditambah aquades sebanyak 100 ml.

c. Aduk serbuk PCA sampai bercampur dengan aquadest.

d. Panaskan larutan media sambil terus diaduk sampai mendidih. Larutan yang

mendidih akan menjadi jernih menandakan media agar sudah siap disterilisasi.

e. Pindahkan media ke dalam labu erlenmeyer secara hati-hati.

f. Tutup rapat labu erlenmeyer dengan kapas dan kertas serta diikat tali. Berikan

label (dengan pensil) bertuliskan nama media dan tanggal pembuatan pada labu

erlenmeyer.

g. Sterilkan ke dalam autoclave suhu 121° selama 15-20 menit

2. Pembuatan Media Lactosa Broth (LB) Single Streng Cair

a. Timbang media lactose broth (LB) 1,3 gram dilarutkan dalam aquades 100 ml

kemudian aduk hingga homogen.

b. Pindahkan larutan media LB Single Streng sebanyak 10 ml menggunakan pipet

ukur ke dalam tabung reaksi – tabung reaksi yang didalamnya terdapat tabung

durham dengan posisi terbalik. Pastikan tabung durham terisi media dengan cara

menutup mulut tabung reaksi dan membalik tabung reaksi sampai tabung durham

terisi media.

c. Tutup semua tabung dengan kapas dan dimasukkan dalam wadah tahan panas dan

tekanan kemudian tutup dengan kertas payung diikat dengan tali.

d. Sterilkan dalam autoclave suhu 121°C selama 15-20 menit.

3. Pembuatan Media Lactosa Broth (LB) Triple Streng Cair

a. Timbang media lactose broth (LB) 3,9 Gram dilarutkan dalam aquades 100 ml

kemudian aduk hingga homogen.

b. Pindahkan larutan media LB Triple Streng sebanyak 5 ml menggunakan pipet

ukur ke dalam tabung reaksi – tabung reaksi yang didalamnya terdapat tabung
 durham dengan posisi terbalik. Pastikan tabung durham terisi media dengan cara

menutup mulut tabung reaksi dan membalik tabung reaksi sampai tabung durham

terisi media.

c. Tutup semua tabung dengan kapas dan dimasukkan dalam wadah tahan panas dan

tekanan kemudian tutup dengan kertas payung diikat dengan tali.

d. Sterilkan dalam autoclave suhu 121°C selama 15-20 menit.

4. Pembuatan Media Aquades Pengencer 9 ml Cair

a. Ukur aquades steril 9 ml dengan pipet ukur kemudian masukkan ke dalam tabung

reaksi.

b. Buat beberapa tabung aquadest pengencer sesuai kebutuhan.

c. Tutup dengan kapas dan masukkan ke dalam wadah tahan panas dan tekanan

kemudan tutup dengan kertas payung diikat dengan tali.

d. Sterilkan ke dalam autoclave suhu 121°C selama 15-20 menit

5. Pembuatan Media BGLB Cair sebanyak 100 ml.

a. Timbang Media BGLB sebanyak 4 gram dilarutkan dlam aquades 100 ml aduk

hingga homogen dalam labu erlenmeyer.

b. Pindahkan larutan media BGLB sebanyak 10 ml menggunakan pipet ukur ke

dalam tabung reaksi – tabung reaksi yang didalamnya terdapat tabung durham

dengan posisi terbalik. Pastikan tabung durham terisi media dengan cara menutup

mulut tabung reaksi dan membalik tabung reaksi sampai tabung durham terisi

media.

c. Tutup dengan kapas dan masukkan ke dalam wadah tahan panas dan tekanan

kemudan tutup dengan kertas payung diikat dengan tali.

d. Sterilkan ke dalam autoclave suhu 121°C selama 15-20 menit

 6. Pembuatan NaCl 0.85% steril dalam tabung reaksi dengan volume 9 ml sebagai

pengencer sebanyak 100 ml. NaCl 0,85% 9 ml dalam tabung mempunyai fungsi yang

sama dengan aquadest pengencer 9 ml. NaCl 0.85% steril dapat digunakan pada

pengambilan sampel usap alat makan dan pada sampel angka kuman udara untuk

menangkap bakteri di udara. Berikut cara kerja pembuatan NaCl 0,85% 9 ml.

a. Timbang sebanyak 0,85 gram NaCl kemudian lartukan dalam 100 ml

aquadest.

b. Aduk sampai semua NaCl larut lalu pipet sebanyak 9 ml ke dalam tabung

reaksi sampai larutan NaCl 0,85% habis

c. Tutup dengan kapas dan masukkan ke dalam wadah tahan panas dan tekanan

kemudan tutup dengan kertas payung diikat dengan tali.

d. Sterilkan ke dalam autoclave suhu 121°C selama 15-20 menit

7. Pembuatan aquades steril untuk keperluan pemeriksaan mikrobiologi

a. Isi labu erlenmeyer dengan aquadest sesuai kebutuhan.

b. Tutup erlenmeyer dengan kapas dan kertas kemudian ikat dengan tali.

c. Sterilkan ke dalam autoclave suhu 121°C selama 15-20 menit

D. DASAR TEORI

Lactosa Broth adalah media yang digunakan untuk pemeriksaan Coliform maupun

E.coli. Pada tes pendahuluan Lactosa Broth yang dipakai meliputi Lactosa Broth 0,5% dan

Lactosa Broth 1,5%. Lactosa Broth 0,5% sering disebut dengan Lactosa Broth Single Strength

Broth dipakai sebagai Enrichment media (media pengkaya) karena berfungsi untuk membuat

pertumbuhan optimal kembali pada suatu mikroorganisme yang diambil sebagai sampling.

NaCl steril digunakan untuk mengencerkan sampel, pada pemeriksaan sampel air

sungai, air limbah dan sebagainya. Sedangkan Media Plate Count Agar (PCA) dapat
 digunakan pada pemeriksaan sampel angka kuman, sampel mikroiologi air dan mikrobiologi

makanan.

Dalam pembuatan Lactosa Broth 0,5% dan 1,5% harus diatur panas dan kecepatan

putaran penangas yang ada. Apabila sudah kelihatan tercampur semua media dan aquades

menjadi larutan yang homogen, maka masukkan ke dalam tabung-tabung reaksi yang sudah

diberi tabung durham. Tabung durham dimasukkan terbalik sehingga pada saat terjadi reaksi

pembentukan gas maka gas tersebut akan terlihat.

D.HASIL PENGAMATAN

NO Media Gambar Keterangan

1 PCA Kandungan media :
(media padat) Cosein, Ycost
extrad,Glucose, Agar-
agar
Fungsi media untuk
pemeriksaan :untuk
menghitung jumlah
koloni bakteri
Warna : Kuning
2 LB.Singel Strenght Kandungan media :
(media cair) Pepton, most extract
lostase
Fungsi media untuk
permeriksaan : uji
pendahuluan
pemeriksaan e coli atau
kaliform
Warna : Kuning pucat
3 LB Tripel Strenght Kandungan media :
(media cair) Ppton , Msat, etract
lactose
Fungsi media untuk
pemeriksaan ; uji
pendahukuan
pemeriksaan e-coli atau
koliform
Warna : Kuning pekat

4 NaCl 0,85% Fungsi: Menangkap

Mikroorganisme pada
alat makan
Warna : PUTIH bening
Wujud : Cair

5 Media BGLB Kandungan media

:Encymastic krillianrit
green
Fungsi media untuk
pemeriksaan : Uji
pencegahan pada
media LB jika terdapat
e-coli
Warna :Hijau

E.PEMBAHASAN

Berdasarkan pratikum kali ini membahas tentan teknik pembuatan media dalam teknik pembuatan
media pada pratikum pada oratikum ini ada 5 jenis pembuatan media yaitu;pembutan media PCA(Plate
Count Agar)padat,pembuatan media LB(Lactosa Broth)Singel Strength Cair,pembuatan media (Lactosa
Broth) LB Tripel Strength cair,pembuatan media BGLB,pembuatan media NaCl 0,35%.

Platecaint Agar (PCA) digunakan sebagai media menghitung jumlah total dan jenis bakteri ,media
(PCA) mengandung nutrisi yang di sediakan oleh triptan,vitamin sehingga mendukung pertumbuhan dari
bakteri, mekanisme kerja mikroba pada media PCA adalah kolifram sebagai suatu kelompok dicirikan
sebagai bakteri berbentuk batang.gram negative .tidak membentuk spora , aerobic, dan anaerobic
fakultatif yang memfermentasi laktosa dengan menghasilkan asam dan gas dalam waktu 48 jam pada
suhu 35C

LB single strength adalah media yang di gunakan untuk pembenihan diperkaya sebelum di sbar ke
media padat , tidak cocok untuk isolasi mikroba dan tidak dapat dipakai untuk memepelajari koloni
kuman.LB triple streght adalah MPN(Mast Porblabe Number) yang menggunakan uji yang di gunakan
untuk mendeteksi sifat fermentative coloform dalam samper uji 1,5% atau 5ml.

Media Brilliant Green Lactosa Broth (BGLB) khususnya digunakan untuk pemeriksaan MPN Kalifrom,
yaitu pemeriksaan yang digunakan untuk mengetahui perkiraan jumlah terdekat bakteri, Coli dan
Koliform.Penggunaan media BGLB ini digunakan pada tahap uji penguat. Dalam pembuatan aquadest
media NaCl 0,85% berfungsi untuk menangkap mikroorganisme pada alat makan.

Pada pratikum ini di setiap pembuatan media membutuhkan aquedest sebagai pelarut dan
dibutuhkan autoklav yang di gunakan sebagai starilisasi pada pembuatan media lactose broth (LB) Singel
Strenght pembutan media Lactosa Broth (LB) Tripel Streght ,pembuatan BGLB menggunakan tabung
durham yang berfungsi untuk mengetahui aktifitas bakteri

F.KESIMPULAN

Berdasarkan pratrikum yang telah dilaksanakan mampu memahami dan dapat melakukan teknik
pembuatan media padat dan cair dengan benar dan steril , setiap media memiliki kandungan dan fungsi
yang berbeda, namun secara umum memiliki fungsi yang sama yaitu sebagai tempat keberlangsungan
hidup bakteri

G.DAFTAR PUSTAKA

Mayasan,U M.imbriologi.tahun 2020

Tabel Hasil Pengamatan Media

NO Media Gambar Keterangan

1 PCA
(Media padat)
2 LB Single Strength
(Media cair)
3 LB Triple Strength
(Media cair)
4 Media BGLB
(Media cair)