2004 NATA VALIDASI METODE - En.id

Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.
com
Pedoman Akreditasi Umum —
Validasi dan verifikasi metode uji kuantitatif

dan kualitatif
Januari 2018
© Hak Cipta Asosiasi Otoritas Pengujian Nasional, Australia 2004
Publikasi ini dilindungi oleh hak cipta di bawah Commonwealth of Australia Copyright Act
1968.
Fasilitas atau fasilitas terakreditasi NATA yang mencari akreditasi dapat menggunakan atau menyalin
publikasi ini atau mencetak atau mengirim email publikasi ini secara internal untuk tujuan akreditasi.
Individu dapat menyimpan salinan publikasi ini untuk penggunaan pribadi non-komersial atau menyalin
bagian yang wajar dari publikasi ini sesuai dengan ketentuan kesepakatan yang adil di Bagian III Divisi 3
Undang-Undang Hak Cipta 1968.
Anda harus menyertakan pemberitahuan hak cipta ini dalam bentuk lengkapnya jika Anda membuat salinan dari
publikasi ini.
Terlepas dari penggunaan yang diizinkan ini, Anda tidak boleh memodifikasi, menyalin, mereproduksi, menerbitkan ulang, membingkai,
mengunggah ke pihak ketiga, menyimpan dalam sistem pengambilan, memposting, mengirimkan, atau mendistribusikan konten ini
dengan cara atau bentuk apa pun atau dengan cara apa pun tanpa mengungkapkan otoritas tertulis dari NATA.
Pedoman Akreditasi Umum - Validasi dan verifikasi metode uji kuantitatif dan kualitatif

dan kualitatif
Daftar Isi
1. Perkenalan ............................................... ................................................................... ................................................. 4

2. Verifikasi metode yang telah divalidasi sebelumnya .................................................. ................................................... 4
3. Validasi metode dan parameter validasi ......................................... ........................................................ 5
3.1 Rentang di mana persamaan kalibrasi berlaku (linearitas kalibrasi) ........................................ .8
3.1.1 Interval pengukuran .................................................. ................................................................... ........................ 9
3.1.2 Efek matriks............................................................ ................................................................... ................................... 9
3.2 Selektivitas................................................................ ................................................................... ................................... 10
3.3 Sensitivitas................................................................ ................................................................... ................................... 11
3.4 Akurasi ................................................................. ................................................................... .................................... 13
3.4.1 Presisi ................................................................... ................................................................... .................................. 14
3.4.1.1 Pengulangan ............................................................ ................................................................... .................... 14
3.4.1.2 Reproduksibilitas .................................................. ................................................................... ................. 15
3.4.2 Kebenaran ................................................................... ................................................................... .................................. 15
3.5 Batas deteksi dan batas kuantitasi ........................................ ........................................ 17
3.5.1 Batas deteksi (LOD)........................................ ................................................................... ............... 17
3.5.1.1 LOD berdasarkan evaluasi visual ........................................ ................................................... 17
3.5.1.2 LOD berdasarkan standar deviasi blanko........................................ ......................... 18
3.5.1.3 LOD berdasarkan kisaran di mana persamaan kalibrasi berlaku......................................... .. 18
3.5.1.4 LOD berdasarkan signal-to-noise......................................... ................................................................... ...... 18
3.5.2 Batas kuantisasi (LOQ)........................................ ................................................................... ........... 18
3.5.2.1 Batas pelaporan (LOR)........................................ ................................................................... ......... 18
3.6 Kekasaran................................................. ................................................................... .................................. 18
3.7 Ketidakpastian Pengukuran................................................................ ................................................................... .......... 19
3.8 Ringkasan................................................. ................................................................... ................................... 20
4. Validasi metode non-rutin ................................................. ................................................................... ............ 21
5. Validasi dan verifikasi metode subjektif ................................................. ................................................... 21
Parameter Validasi ................................................... ................................................................... ............................ 22
5.1 Pengulangan/reproduktifitas (yaitu keandalan) .......................................... ................................................... 22
5.2 Probabilitas deteksi dan/atau potensi tingkat kesalahan........................................ ................................... 22
Tindakan Pengendalian ................................................... ................................................................... ................................... 23
5.3 Analisis kritis (atau risiko) .................................................. ................................................................... .................. 23
5.4 Latihan kolaboratif................................................................... ................................................................... ............... 23
5.5 Kontrol kualitas ................................................................... ................................................................... .................................. 23
5.6 Kompetensi staf .................................................. ................................................................... ........................ 23
5.7 Tingkat penerimaan metode pengujian .................................................. ........................................................ 23
6. Daftar istilah ............................................................ ................................................................... ................................... 24
7. Referensi............................................................ ................................................................... .................................................. 28
8. Bacaan tambahan ............................................................ ................................................................... .................................. 29
Lampiran 1. Validasi metode dan verifikasi pohon keputusan ........................................ ................................... 30
Amandemen ................................................. ................................................................... ................................................... 31
Januari 2018 Halaman 3 dari 31


dan kualitatif
1. Perkenalan
Suatu metode harus terbukti sesuai dengan tujuan sehingga pelanggan fasilitas dapat memiliki keyakinan pada hasil yang
dihasilkan oleh penerapannya. Validasi dan verifikasi metode memberikan bukti objektif bahwa suatu metode sesuai
dengan tujuan, yang berarti bahwa persyaratan tertentu untuk tujuan penggunaan tertentu terpenuhi. Catatan: istilah
'metode' mencakup kit, reagen individual, instrumen, platform, dan perangkat lunak.
Untuk alasan ini, validasi dan verifikasi metode merupakan persyaratan penting untuk akreditasi ISO/IEC 17025 dan ISO 15189.
Oleh karena itu, fasilitas yang terakreditasi untuk Standar ini harus menunjukkan validitas semua metode yang digunakan
dengan memvalidasi semua metode standar internal dan modifikasi serta standar verifikasi. metode. Validasi selalu
merupakan keseimbangan antara biaya, risiko, dan kemungkinan teknis. Tingkat validasi yang diperlukan akan tergantung
pada status metode yang dipertimbangkan dan kebutuhan yang berkaitan dengan aplikasi yang dimaksudkan.
Jika fasilitas ingin menerapkan metode standar yang telah divalidasi secara ekstensif melalui studi kolaboratif,
misalnya metode standar ASTM dan (Emas) (seperti metode Standar Australia dan metode Standar ISO)
pertimbangan harus diberikan sejauh verifikasi metode yang diperlukan . Studi verifikasi metode biasanya kurang
ekstensif daripada yang diperlukan untuk validasi metode. Namun demikian fasilitas diharapkan untuk
menunjukkan kemampuan untuk mencapai karakteristik kinerja yang dipublikasikan dari metode standar di
bawah kondisi pengujian mereka sendiri.
Catatan Teknis ini menjelaskan aspek-aspek metode yang harus dipertimbangkan ketika melakukan validasi metode atau
verifikasi metode, dan memberikan panduan tentang bagaimana metode tersebut dapat diselidiki dan dievaluasi. Hal ini
dimaksudkan untuk dapat diterapkan pada sebagian besar jenis aktivitas pengujian. Pedoman ini tidak mencakup pengambilan
sampel sehubungan dengan kinerja suatu metode. Untuk beberapa fasilitas pengujian, tidak semua pendekatan validasi dan
verifikasi yang dijelaskan dalam dokumen ini relevan. Khususnya untuk fasilitas yang terlibat dalam pengujian subjektif
(misalnya fasilitas pengujian forensik, non-destruktif, dan pengujian mekanis), bagian yang lebih dapat diterapkan dalam
dokumen ini adalah Bagian 5.
Laporan Teknis IUPAC (Thompson et al., 2002), dan publikasi lainnya oleh Komite Tetap ENFSI (QCC-VAL-001, 2006),
Laboratory of the Government Chemist, UK, (LGC, 2003) dan B. Hibbert ( Hibbert, 2004) diakui sebagai sumber utama
untuk informasi dan panduan yang diberikan dalam Catatan Teknis ini. Pengguna Catatan Teknis ini harus
memperhatikan bahwa meskipun ada banyak publikasi dan metode untuk memvalidasi dan memverifikasi metode yang
berbeda, tidak ada satu metode pun yang disetujui secara universal dan pendekatan selain yang ditetapkan dalam
pedoman ini dapat diterapkan dan dapat diterima. Pedoman tersebut tidak dapat dianggap sebagai prosedur untuk
validasi atau verifikasi metode sehubungan dengan kepatuhan fasilitas terhadap persyaratan ISO/IEC 17025 dan ISO
15189. Merupakan tanggung jawab fasilitas untuk memilih prosedur dan protokol validasi atau verifikasi yang paling
sesuai untuk hasil yang diinginkan. Namun, penting untuk diingat bahwa tujuan utama validasi atau verifikasi dari
setiap metode pengujian adalah untuk menunjukkan bahwa metode tersebut sesuai untuk tujuan yang dimaksudkan.
Referensi dan bahan bacaan tambahan yang tercantum di akhir dokumen ini dapat memberikan panduan yang
berguna dan lebih lanjut tentang verifikasi dan validasi metode.
Sejumlah contoh dari berbagai jenis aktivitas pengujian telah disediakan di seluruh dokumen ini dan
dimaksudkan untuk tujuan panduan saja. Mereka tidak berarti lengkap dan pendekatan lain mungkin lebih
tepat berdasarkan keadaan individu.
Untuk pengujian di mana hasil kualitatif dilaporkan berdasarkan nilai numerik diharapkan validasi atau
verifikasi metode sesuai dengan prosedur kuantitatif.
2. Verifikasi metode yang telah divalidasi sebelumnya

Metode yang diterbitkan oleh organisasi seperti Standards Australia, ASTM, USEPA, ISO dan IP telah divalidasi oleh
studi kolaboratif dan terbukti sesuai untuk tujuan sebagaimana didefinisikan dalam ruang lingkup metode. Oleh
karena itu, ketelitian pengujian yang diperlukan untuk memperkenalkan metode semacam itu ke dalam fasilitas
kurang dari yang diperlukan untuk memvalidasi metode in-house. Hal yang sama berlaku untuk metode yang diterima
rekan yang diterbitkan dalam literatur ilmiah bersama dengan data kinerja. Jika fasilitas menggunakan kit uji komersial
di mana metodologi dan reagen tidak berubah dari instruksi pabrik, kit tidak perlu divalidasi ulang secara independen
di fasilitas pengujian. Pada dasarnya fasilitas hanya perlu memverifikasi bahwa

operator yang menggunakan peralatan mereka di lingkungan laboratorium mereka dapat menerapkan metode yang memperoleh
hasil yang sama seperti yang didefinisikan dalam data validasi yang disediakan dalam metode standar. Verifikasi metode oleh fasilitas
harus mencakup korelasi statistik dengan metode tervalidasi yang ada sebelum digunakan.
Namun harus dicatat, bahwa dokumentasi untuk metode analisis standar yang diterbitkan oleh badan
standardisasi dan organisasi teknis yang diakui (misalnya AOAC), dll. bervariasi. Dalam beberapa kasus tidak ada
laporan validasi sebagai dasar metode analisis, atau karakteristik kinerja tidak – atau hanya sebagian – divalidasi.
Jika hal ini terjadi, verifikasi kemampuan fasilitas untuk menggunakan metode analisis tidak dapat dilakukan
secara langsung dan validasi diperlukan.
Verifikasi dalam kondisi penggunaan ditunjukkan dengan memenuhi spesifikasi kesesuaian sistem yang
ditetapkan untuk metode tersebut, serta demonstrasi akurasi dan presisi atau parameter metode lain untuk
jenis metode tersebut. Kinerja metode dapat ditunjukkan dengan:
• blanko, atau media yang tidak diinokulasi (misalnya dalam mikrobiologi), untuk menilai kontaminasi;
• sampel kontrol laboratorium (misalnya sampel berduri untuk kimia atau kontrol kultur positif untuk
mikrobiologi) untuk menilai akurasi;
• duplikat untuk menilai presisi;
• standar pemeriksaan kalibrasi yang dianalisis secara berkala dalam kelompok analitik untuk analisis kuantitatif;
• memantau sampel kendali mutu, biasanya melalui penggunaan bagan kendali; dan
• partisipasi dalam program pengujian kinerja asalkan bahan yang diuji mewakili metode dalam hal
matriks, parameter analitik, tingkat konsentrasi, dll.
Modifikasi kecil pada metode internal yang telah divalidasi sebelumnya (misalnya menggunakan jenis kolom kromatografi
yang sama dari pabrikan yang berbeda, penggunaan media pertumbuhan non-selektif yang berbeda, perbedaan rincian
pengenceran sampel sebagai konsekuensi dari penghitungan yang diharapkan atau sedikit perubahan dalam suhu inkubasi
non-kritis) juga harus diverifikasi untuk menunjukkan bahwa tidak ada perubahan pada hasil yang diharapkan.
Parameter kunci untuk dipertimbangkan dalam proses verifikasi akan tergantung pada sifat metode dan kisaran jenis
sampel yang mungkin ditemui. Jumlah sampel yang signifikan secara statistik harus digunakan dalam proses evaluasi
dan ini harus mencakup berbagai hasil untuk tujuan penggunaan. Pengukuran bias dan pengukuran presisi adalah
persyaratan minimum untuk metode yang menghasilkan hasil kuantitatif. Untuk analisis jejak, fasilitas juga harus
memastikan bahwa batas deteksi yang dapat dicapai (LOD) dan batas kuantitasi (LOQ) sesuai dengan tujuan. Untuk
metode kualitatif, diperlukan studi korelasi dengan metode tervalidasi yang ada atau perbandingan dengan hasil yang
diketahui. Untuk metode diagnostik, sensitivitas dan selektivitas klinis (spesifisitas) juga harus dievaluasi pada populasi
pasien lokal yang spesifik (mis rumah sakit, pasien komunitas) sedapat mungkin. Idealnya fasilitas akan dapat
menunjukkan kinerja sesuai dengan spesifikasi metode. Jika tidak, penilaian harus dilakukan untuk menentukan apakah
metode tersebut dapat diterapkan untuk menghasilkan hasil tes yang benar-benar sesuai dengan tujuan.
Validasi penuh diperlukan jika fasilitas memiliki alasan untuk memodifikasi metode standar secara signifikan. Tidak
mungkin untuk menentukan apa yang merupakan modifikasi besar, selain mengatakan salah satu yang akan
mempengaruhi hasil tes. Beberapa contoh mungkin: penggunaan pelarut ekstraksi yang berbeda; penggunaan HPLC
sebagai pengganti GLC; perbedaan formulasi media selektif/diferensial (misalnya penambahan antibiotik alternatif);
konsentrasi antibiotik yang berbeda dengan media dasar yang ditentukan; perubahan suhu atau waktu inkubasi kritis
(misalnya inkubasi 3 hari, bukan 5 hari); atau prosedur konfirmasi yang berbeda (misalnya penggunaan rangkaian tes
biokimia alternatif selain yang ditentukan).
Validasi tambahan juga harus dipertimbangkan jika pelanggan memerlukan spesifikasi yang lebih
ketat daripada yang metode standarnya telah divalidasi.
Pohon keputusan yang diilustrasikan dalam Lampiran 1 dimaksudkan untuk memberikan klarifikasi lebih lanjut tentang kapan harus
melakukan validasi atau verifikasi metode.
3. Validasi metode dan parameter validasi

Metode yang tidak standar dan dikembangkan sendiri memerlukan validasi metode. Untuk fasilitas yang terlibat dalam
pengujian medis, elemen metode yang didukung 'hanya untuk penelitian' atau 'tidak untuk penggunaan diagnostik' juga harus
divalidasi oleh fasilitas sebelum digunakan untuk tujuan diagnostik sebagaimana diuraikan dalam publikasi NPAACPersyaratan
untuk Validasi In-House In-Vitro Diagnostic Devices (IVDs).Fasilitas yang telah memodifikasi komponen kit atau prosedur
pabrikan harus menunjukkan kesetaraan atau keunggulan prosedur yang dimodifikasi dengan menerapkan proses ke dalam
penggunaan rutin. Prosedur harus diperlakukan sebagai pengujian internal untuk tujuan validasi sebagai:

per publikasi NPAACStandar Akreditasi Laboratorium dan Pedoman Deteksi dan Analisis Asam Nukleat
danPersyaratan untuk Validasi In-House In-Vitro Diagnostic Devices (IVDs).
Karakteristik kinerja metode didasarkan pada tujuan penggunaan metode tersebut. Misalnya, jika metode
akan digunakan untuk analisis kualitatif, tidak perlu menguji dan memvalidasi linearitas metode pada
rentang dinamis penuh peralatan.
Ruang lingkup metode dan kriteria validasinya harus ditetapkan dan didokumentasikan di awal proses. Ini termasuk
tetapi tidak terbatas pada pertanyaan-pertanyaan berikut:
sebuah) Tujuan pengukuran (apa yang akan diidentifikasi dan mengapa)?

b) Apa matriks sampel yang mungkin?
c) Apakah ada gangguan yang diharapkan, dan, jika demikian, haruskah ditentukan?
d) Apa ruang lingkupnya (berapa tingkat atau rentang konsentrasi yang diharapkan)?
e) Apakah ada persyaratan legislatif atau peraturan khusus?
f) Apakah ada akomodasi peralatan khusus dan kondisi lingkungan yang perlu
dipertimbangkan?
g) Apa jenis peralatan yang akan digunakan? Apakah metode untuk satu instrumen tertentu, atau haruskah digunakan
oleh semua instrumen dengan jenis yang sama?
h) Metode yang digunakan untuk persiapan, sub-sampling, prosedur dan termasuk peralatan yang akan digunakan?
Alat-alat berikut dapat digunakan untuk menunjukkan kemampuan untuk memenuhi spesifikasi metode kinerja:
1. Kosong:Penggunaan berbagai jenis blanko memungkinkan penilaian seberapa banyak sinyal analitik
disebabkan oleh analit dan seberapa banyak disebabkan oleh penyebab lain, misalnya gangguan. Blanko
juga dapat digunakan dalam pengukuran Limit of Detection.
2. Bahan referensi dan bahan referensi bersertifikat:Penggunaan bahan dengan sifat atau nilai kuantitas yang
diketahui dapat digunakan untuk menilai keakuratan metode, serta memperoleh informasi tentang
interferensi. Ketika digunakan sebagai bagian dari prosedur pengukuran, mereka dikenal sebagai standar
pengukuran. Ketika ditempatkan secara berkala dalam batch analitik, pemeriksaan dapat dilakukan bahwa
respons proses analitik terhadap analit stabil.Catatan: standar pengukuran yang sama tidak dapat digunakan
baik untuk kalibrasi maupun pengukuran bias.
3. Bahan dan solusi yang diperkaya (berduri):Pemulihan dapat dihitung dari hasil analisis sampel yang
diperkaya dengan bahan referensi.
4. Bahan yang dikeluarkan:Ini adalah bahan di mana analit yang diinginkan mungkin pada dasarnya asing, tetapi telah
dimasukkan ke dalam jumlah besar di beberapa titik sebelum bahan diambil sampelnya. Bahan yang timbul dapat
digunakan sebagai pengganti bahan yang difortifikasi.
5. Replikasi:Analisis berulang memungkinkan penilaian ketepatan pengukuran.
6. Analisis data statistik:Teknik statistik digunakan untuk mengevaluasi akurasi, presisi, jangkauan
linier, batas deteksi dan kuantifikasi, dan ketidakpastian pengukuran.
Studi validasi dapat dibagi menjadi validasi komparatif dan primer.
Validasi komparatif
Validasi komparatif (yaitu korelasi atau silang) biasanya diterapkan pada metode bioanalitik dan bertujuan untuk
menunjukkan kinerja yang setara antara dua (atau lebih) metode yang digunakan untuk menghasilkan data dalam
penelitian yang sama atau lintas penelitian yang berbeda dengan membandingkan parameter validasi. Contoh validasi
komparatif adalah situasi di mana metode bioanalisis asli yang divalidasi berfungsi sebagai referensi dan metode
bioanalitik yang direvisi adalah pembanding.
Tidak ada tes tunggal untuk menetapkan kesetaraan metode atau kriteria penerimaan numerik untuk itu.
Umumnya, metode dengan sensitivitas terbesar atau pemulihan tertinggi untuk analit target adalah yang
terbaik. Untuk menentukan apakah mean metode alternatif tidak berbeda secara statistik dari mean metode
referensi, dilakukan analisis varians satu arah atau uji-t berpasangan menurut jenis sampel dan konsentrasi
analit. Studi validasi komparatif metode kualitatif melibatkan identifikasi karakteristik operasi metode (misalnya
sensitivitas, selektivitas, dugaan positif palsu dan dugaan negatif palsu).
Studi validasi dapat didukung oleh studi teknis tambahan yang bersumber dari luar fasilitas. Penggunaan data uji
profisiensi yang dapat diverifikasi dapat dipertimbangkan.
Ketika analisis sampel dalam satu studi dilakukan di lebih dari satu lokasi atau lebih dari satu fasilitas,
validasi silang dengan standar matriks berduri dan sampel subjek harus dilakukan di setiap lokasi atau
fasilitas untuk membangun keandalan antar laboratorium. Validasi komparatif juga harus

dipertimbangkan ketika data yang dihasilkan menggunakan teknik analisis yang berbeda (misalnya LC-MS-MS vs.
ELISA) dalam studi yang berbeda disertakan.
AS/NZS 4659Panduan Penetapan Kesetaraan Metode Uji Mikrobiologi Panganadalah contoh protokol yang
dapat digunakan untuk validasi komparatif. Standar ini memberikan panduan tentang validasi uji kualitatif,
kuantitatif, konfirmasi dan antibiotik.
Validasi utama
Untuk situasi di mana validasi komparatif tidak dapat diterapkan (misalnya metode yang dikembangkan sendiri,
metode standar yang telah dimodifikasi sedemikian rupa sehingga hasil akhir dapat dipengaruhi, metode standar
yang digunakan di luar cakupan yang dimaksudkan, penggunaan isolasi atau deteksi alternatif prinsip, serta metode
cepat), validasi primer harus dilakukan sebelum memperkenalkan metode. Dalam kasus seperti itu, validasi menjadi
proses eksplorasi dengan tujuan menetapkan batasan operasional dan karakteristik kinerja dari metode alternatif,
baru atau metode yang tidak dicirikan secara memadai. Ini harus menghasilkan spesifikasi numerik dan / atau
deskriptif untuk kinerja metode.
Langkah pertama dalam validasi metode adalah menentukan apa yang ingin Anda identifikasi atau ukur; baik secara kualitatif
menggambarkan entitas yang akan diukur dan kuantitas (jika berlaku). Sebuah metode kemudian divalidasi terhadap
spesifikasi ini dan persyaratan pelanggan.
Langkah kedua dalam validasi adalah menentukan parameter kinerja tertentu yang dipilih. Ini dijelaskan di bawah ini.Catatan:
parameter untuk validasi metode telah ditetapkan dalam kelompok kerja yang berbeda dari komite nasional dan internasional.
Sayangnya, beberapa definisi bervariasi antara organisasi yang berbeda. Dokumen ini menggunakan definisi berdasarkan
Kosakata Internasional Metrologi (VIM) (JCGM200, 2008) dalam banyak kasus karena ini sekarang menggantikan semua yang
lain. Namun, beberapa interpretasi mungkin diperlukan di berbagai jenis aktivitas, misalnya untuk pengujian veteriner, mungkin
lebih berlaku untuk merujuk ke Manual Terestrial OIE (2009) untuk sebagian besar terminologi yang relevan yang digunakan di
sini.
Ukuran sampel untuk menentukan parameter kinerja dapat bervariasi di berbagai jenis aktivitas pengujian namun
harus sedemikian rupa sehingga cukup besar untuk menghasilkan hasil yang valid secara statistik dengan metode
seperti uji-t Student untuk menilai akurasi. Minimal 7 analisis ulangan dilakukan pada setiap konsentrasi untuk setiap
penentuan dan setiap jenis matriks direkomendasikan. Pada kenyataannya angka ini sering dilampaui. Secara umum,
semakin banyak sampel yang diuji, semakin besar jumlah derajat kebebasannya, semakin baik dasar statistik untuk
hasil pengukuran yang bersangkutan.
Variasi matriks adalah, di banyak sektor, salah satu sumber kesalahan yang paling penting tetapi paling tidak diakui
dalam pengukuran analitis (IUPAC, 2002). Oleh karena itu, mungkin penting untuk mempertimbangkan variabilitas
matriks karena sifat fisiologis sampel. Dalam kasus prosedur tertentu, misalnya prosedur berbasis LC-MS-MS, langkah-
langkah yang tepat harus diambil untuk memastikan kurangnya efek matriks di seluruh penerapan metode, terutama
jika sifat matriks berubah dari matriks yang digunakan selama metode validasi (FDA, 2001).
Setiap langkah dalam metode harus diselidiki untuk menentukan sejauh mana variabel lingkungan, matriks, material,
atau prosedural dapat mempengaruhi estimasi analit dalam matriks dari waktu pengumpulan material hingga dan
termasuk waktu analisis. Selain parameter kinerja yang tercantum di bawah ini, mungkin juga perlu untuk menilai
stabilitas analit saat melakukan studi validasi. Misalnya, banyak zat terlarut yang mudah terurai sebelum pemeriksaan
kromatografi (misalnya selama persiapan larutan sampel, ekstraksi, pembersihan, transfer fase atau penyimpanan vial
yang disiapkan dalam lemari es atau dalam pengambil sampel otomatis). Hal-hal yang mungkin perlu dipertimbangkan
termasuk stabilitas analit selama pengumpulan dan penanganan sampel, setelah penyimpanan jangka panjang dan
jangka pendek, dan setelah melalui siklus pembekuan dan pencairan dan proses analitis. Kondisi yang digunakan dalam
eksperimen stabilitas perlu mencerminkan situasi yang mungkin dihadapi selama penanganan dan analisis sampel yang
sebenarnya. Prosedur juga harus mencakup evaluasi stabilitas analit dalam larutan stok.
Contoh uji stabilitas yang dilakukan sebagai bagian dari rencana validasi metode untuk timah (Sn) dalam buah kalengan
diberikan di bawah ini:
Contoh:
Analit (Sn) dalam larutan standar:
Standar kerja yang baru disiapkan dibandingkan dengan standar kerja yang telah dibuat dan disimpan. Pengukuran dilakukan
pada interval selama periode waktu tertentu untuk menentukan stabilitas Sn dalam larutan.
Analit (Sn) dalam matriks:

Sampel buah kalengan dijalankan pada interval waktu tertentu selama sampel biasanya disimpan untuk melihat apakah kadar Sn
terdegradasi atau terkonsentrasi. Standar yang digunakan untuk kurva kalibrasi ICP-OES dipantau untuk memastikan bahwa
standar tersebut tidak terdegradasi atau kedaluwarsa.
Analit (Sn) dalam intisari sampel:

Sampel buah kalengan dengan konsentrasi timah yang diketahui dicerna dan diukur setiap hari selama seminggu.
Parameter Kinerja:
3.1 Rentang di mana persamaan kalibrasi berlaku (linier kalibrasi)

Linieritas kalibrasi prosedur analitis adalah kemampuannya untuk menginduksi sinyal (respons) yang
berbanding lurus dengan konsentrasi parameter analitis yang diberikan.
Penentuan linearitas diterapkan pada persamaan kalibrasi dan dengan demikian hanya mencakup
pengukuran instrumental. Linearitas juga dapat diselidiki untuk metode secara keseluruhan dan dengan
demikian menjadi penyelidikan kebenaran sebagai fungsi dari konsentrasi analit.
Untuk analisis instrumental, protokol berikut (Thompson et al., 2002; LGC, 2003) direkomendasikan untuk
menetapkan validitas model kalibrasi sebagai bagian dari validasi metode:
- harus ada enam atau lebih standar kalibrasi (termasuk blanko atau standar kalibrasi dengan
konsentrasi mendekati nol);
- standar kalibrasi harus ditempatkan secara merata pada rentang konsentrasi yang diinginkan. Idealnya,
konsentrasi yang berbeda harus disiapkan secara independen, dan bukan dari alikuot larutan induk yang
sama;
- kisarannya harus mencakup 0–150% atau 50–150% dari konsentrasi yang mungkin ditemui,
tergantung mana yang lebih cocok; dan
- standar kalibrasi harus dijalankan setidaknya dalam rangkap dua, dan sebaiknya rangkap tiga atau lebih, dalam
urutan acak.
Plot data yang sederhana akan memberikan indikasi cepat tentang sifat hubungan antara respons dan
konsentrasi. Regresi kuadrat terkecil klasik, biasanya diimplementasikan dalam program spreadsheet, digunakan
untuk menetapkan persamaan hubungan antara respons instrumental (kamu) dan konsentrasi (x) yang untuk
model linier adalahkamu=sebuah+bx,di manasebuah=y-intercept of line fit terbaik, danb=kemiringan garis fit
terbaik. Kesalahan standar regresi (sy/x) adalah ukuran kebaikan kecocokan. Penggunaan koefisien korelasi yang
berasal dari analisis regresi sebagai uji linieritas mungkin menyesatkan (Mulholland dan Hibbert, 1997), dan telah
menjadi bahan perdebatan (Hibbert, 2005; Huber, 2004; Ellison, 2006; Van Loco et al, 2002). Residu juga harus
diperiksa untuk bukti perilaku non-linear (Miller dan Miller, 2000). Grafik data yang dipasang dan residu harus
selalu diplot dan diperiksa untuk memastikan linearitas dan memeriksa outlier.Catatan: jika varians ulangan
sebanding dengan konsentrasi, perhitungan regresi berbobot harus digunakan daripada regresi 'klasik' (yaitu
tidak berbobot).
Statistik juga terkenal untuk metode, di mana kalibrasi dapat memberikan kecocokan melengkung (misalnya kecocokan
kuadrat untuk analisis ICP-AES dan ICP-MS). Contoh diberikan dalam Hibbert (2006) tentang bagaimana parameter dan
ketidakpastian pengukuran persamaan yang linier dalam parameter, seperti kalibrasi kuadrat, dapat diturunkan.
Jika hubungan tidak mengikuti model linier yang diharapkan selama rentang penyelidikan, perlu untuk menghilangkan
penyebab non-linier, atau membatasi rentang konsentrasi yang dicakup oleh metode untuk memastikan linearitas. Dalam
beberapa kasus mungkin tepat untuk menggunakan fungsi non-linier, tetapi perawatan harus dilakukan untuk memvalidasi
model yang dipilih dengan benar. Secara umum kisaran kalibrasi harus mencakup hanya kisaran konsentrasi yang diharapkan
dari sampel uji. Tidak ada manfaat dari kalibrasi pada rentang konsentrasi yang lebih luas dari yang diperlukan, karena
ketidakpastian pengukuran dari kalibrasi meningkat seiring dengan rentang tersebut.
Data kalibrasi dapat digunakan untuk menilai presisi (memangy/xdapat digunakan sebagai pengulangan darikamu,
atau sy/x/b untuk itux). Untuk menghitung presisi kurva harus disiapkan setidaknya tiga kali.Catatan: dari data ini
batas kuantisasi dapat dihitung.

Untuk analisis non-instrumental, linearitas dapat ditentukan dengan memilih konsentrasi standar yang berbeda (tingkat
rendah, sedang dan tinggi). Level terendah harus jatuh pada kira-kira batas deteksi, level menengah dan tinggi masing-
masing satu dan dua level lebih tinggi (level menengah tambahan dapat ditambahkan untuk meningkatkan presisi).
Hasilnya kemudian dapat diplot dalam bentuk 'kurva respons'. Sebuah contoh disediakan di bawah ini. Untuk analisis
mikrobiologi, hasil dari penghitungan yang diperoleh harus dikonversi ke nilai log dan diplot.
Contoh:
Rentang nilai yang merupakan rentang operasi linier dari uji diagnostik dapat ditentukan oleh seri pengenceran di mana serum
positif tinggi diencerkan secara berurutan dalam serum negatif. Setiap pengenceran kemudian dijalankan pada pengenceran
kerja optimal dalam buffer dan hasilnya diplot. Standar serum dan reagen lainnya dapat digunakan untuk menyelaraskan
pengujian dengan hasil yang diharapkan diperoleh dari reagen referensi aktivitas yang diketahui. Kontrol serum internal
(digunakan untuk normalisasi data) dan standar serum sekunder tambahan, seperti serum positif rendah, positif tinggi, dan
negatif (digunakan untuk perkiraan pengulangan dalam pengujian rutin berikutnya), dapat dipasang ke kurva respons untuk
mencapai nilai yang diharapkan untuk serum tersebut.
3.1.1 Interval pengukuran

Interval pengukuran biasanya diturunkan dari studi linearitas. Interval pengukuran suatu metode didefinisikan
sebagai interval antara konsentrasi atas dan bawah (jumlah) analit dalam sampel yang telah ditunjukkan bahwa
metode tersebut memiliki tingkat presisi, akurasi, dan linieritas yang sesuai (yaitu hasil akan memiliki tingkat
ketidakpastian). Dalam praktiknya, ketidakpastian yang dapat diterima dapat dicapai pada konsentrasi yang lebih
besar dari batas atas (di luar batas rentang linier yang ditentukan). Namun, lebih bijaksana untuk
mempertimbangkan kisaran yang divalidasi, yaitu kisaran antara LOQ dan konsentrasi tertinggi yang dipelajari
selama validasi.Catatan: dalam beberapa jenis aktivitas, istilah interval pengukuran juga disebut sebagai “interval
kerja”, “rentang kerja”, “rentang pengukuran”, atau “rentang pengukuran”.
3.1.2 Efek matriks

Setelah rentang di mana persamaan kalibrasi berlaku telah ditentukan, efek matriks pada pemulihan analit
harus ditentukan. Sebagai aturan, sampel mengandung tidak hanya zat yang akan dianalisis (analit), tetapi
juga konstituen lebih lanjut (zat asing, zat yang menyertainya). Konstituen matriks mungkin memiliki
potensi untuk mengubah hasil atau menciptakan peningkatan atau penekanan respon dari detektor
instrumen.
Efek matriks sangat bervariasi dalam kejadian dan intensitas tetapi beberapa teknik sangat rentan terhadapnya
(gangguan mereka dapat, dalam keadaan tertentu, menjadi begitu besar sehingga pemulihan analit menyimpang dari
100% ke tingkat yang signifikan). Misalnya, dalam peningkatan matriks pengujian kimia adalah fenomena sesekali yang
diakui dengan baik dalam analisis residu pestisida menggunakan kromatografi gas-cair. Dalam kasus sampel dengan
matriks yang kompleks dan/atau diketahui secara tidak tepat - misalnya, makanan - sangat sulit untuk memperkirakan
pengaruh potensial zat asing pada analisis (efek matriks). Untuk patologi, pertimbangan perlu diberikan pada sampel
yang mengalami hemolisis, lipemik, dan ikterik.
Jika tidak ada efek matriks yang terlihat, lebih baik menyiapkan standar kalibrasi sebagai larutan analit yang
sederhana. Jika efek matriks dicurigai, mereka dapat diselidiki dengan membuat penambahan standar analit ke
larutan ekstrak sampel yang khas. Jumlah penentuan yang disarankan untuk efek matriks setidaknya sekali atau dalam
rangkap dua pada masing-masing dari 3 konsentrasi di setiap jenis matriks sampel.
Untuk menentukan efek matriks pada respon instrumen, kisaran konsentrasi dengan penambahan standar
harus sama dengan kalibrasi bebas matriks sehingga kemiringan kedua plot kalibrasi dapat dibandingkan untuk
perbedaan yang signifikan. Jika kemiringan tidak berbeda secara signifikan (<10%), tidak perlu mengkompensasi
efek matriks. Namun, harus dicatat bahwa penambahan standar tidak mengkompensasi efek matriks aditif.
Untuk metode non-instrumental tes pemulihan yang dijelaskan dalam Bagian 3.4.2 dari dokumen ini dapat dilakukan
untuk menentukan apakah ada efek matriks.
Jika hasil yang diperoleh untuk standar yang diperkaya matriks lebih rendah (atau lebih tinggi) daripada hasil yang diperoleh
untuk standar murni yang diambil melalui analisis lengkap, hasilnya mungkin karena perolehan analit yang rendah dari bahan
matriks (atau adanya gangguan ketika perolehan tinggi diperoleh) atau mungkin karena penekanan matriks atau efek
peningkatan yang mengubah respons detektor. Untuk memeriksa kemungkinan ini, fasilitas dapat membandingkan hasil yang
diperoleh dari standar murni, standar murni yang diambil melalui analisis lengkap, standar yang dibubuhkan ke dalam ekstrak
matriks kosong dan standar yang ditambahkan ke matriks sebelum ekstraksi. Selanjutnya, penentuan berikut dapat dibuat:

- Standar murni versus standar yang diambil melalui analisis menunjukkan adanya kehilangan analit yang
terkait dengan metode ini, sedangkan hasil yang ditingkatkan dapat menunjukkan kontaminasi reagen.
- Standar murni yang diambil melalui analisis dibandingkan dengan standar murni yang ditambahkan ke ekstrak
yang diekstraksi atau dicerna memberikan indikasi peningkatan matriks atau efek penekanan pada sistem
deteksi.
- Standar murni yang ditambahkan ke matriks kosong setelah ekstraksi atau destruksi, dibandingkan dengan standar
murni yang diperkaya dalam matriks sebelum ekstraksi atau destruksi, memberikan indikasi hilangnya analit selama
pemrosesan (workshop AOAC).
3.2 Selektivitas
Penting untuk menetapkan selama validasi metode bahwa metode pengujian hanya mengukur apa yang
dimaksudkan untuk diukur. Dengan kata lain, metode harus bebas dari gangguan yang dapat
menyebabkan hasil yang salah. Selektivitas suatu metode adalah keakuratan pengukurannya dengan
adanya gangguan seperti mikroorganisme non-target yang bersaing, pengotor, degradasi, dan komponen
matriks. Istilah selektivitas dan spesifisitas sering digunakan secara bergantian. Istilah 'spesifik' umumnya
mengacu pada metode yang menghasilkan respons untuk analit tunggal saja, sedangkan istilah 'selektif'
mengacu pada metode yang memberikan respons untuk sejumlah entitas yang mungkin atau mungkin
tidak dibedakan satu sama lain. Jika respon dibedakan dari semua respon lainnya, metode dikatakan
selektif.
Metode yang menggunakan prosedur determinatif yang sangat spesifik, seperti kromatografi/spektrometri massa,
memiliki kemampuan untuk sangat selektif. Namun, metode berdasarkan pengukuran kolorimetri dapat dipengaruhi
oleh adanya sampel berwarna atau senyawa dengan sifat kimia yang mirip dengan analit. Meskipun tidak praktis untuk
mempertimbangkan setiap potensi gangguan, analis harus menggunakan pengetahuan dan pengalaman mereka
untuk mempertimbangkan skenario yang paling relevan.
Jika diperlukan, efek dari pengganggu potensial dapat diperiksa dengan menganalisis sampel yang konsentrasinya
diketahui dari pengganggu yang dicurigai telah ditambahkan (satu dari masing-masing dianalisis sekali sudah cukup).
Ini harus dilakukan pada sampel yang mengandung analit di atas rentang konsentrasi yang diharapkan dalam praktik
(pengujian titik tunggal dapat diterima tetapi berbagai titik dengan jumlah inhibitor yang bervariasi akan menambah
lebih banyak data tentang interferensi dari jumlah zat yang berbeda). Jika metode ini dimaksudkan untuk mengukur
lebih dari satu analit, setiap analit harus diuji untuk memastikan bahwa tidak ada interferensi. Pemeriksaan efek
interferensi perlu dilakukan – apakah keberadaan interferensi meningkatkan atau menghambat deteksi kuantifikasi
besaran ukur? Pada prinsipnya, metode harus dikembangkan untuk memberikan tingkat selektivitas tanpa gangguan
yang signifikan. Jika deteksi atau kuantifikasi secara signifikan dihambat oleh gangguan, pengembangan metode lebih
lanjut akan diperlukan, tetapi efek kecil dapat ditoleransi dan dimasukkan dalam estimasi bias.
Untuk metode yang memerlukan langkah konfirmasi, misalnya untuk sampel dengan konsentrasi senyawa organik
rendah (termasuk residu pestisida dan kontaminan organik lainnya dalam sampel makanan dan lingkungan, serta
obat-obatan dan metabolitnya dalam jaringan dan cairan tubuh), identifikasi positif dari jumlah jejak organik senyawa
diperlukan. 'Konfirmasi' berlaku untuk identitas dan konsentrasi residu. Konfirmasi identitas analit dan konsentrasi
untuk sampel positif dapat dicapai dengan menggunakan sistem deteksi yang berbeda atau kolom atau menggunakan
sistem deteksi khusus seperti spektrometri massa atau menggunakan teknik analisis alternatif (misalnya sekuensing
DNA; elektroforesis gel). Dalam kasus seperti itu, validasi teknik konfirmasi juga harus dilakukan.
Beberapa contoh untuk menentukan selektivitas suatu metode dan beberapa faktor yang perlu dipertimbangkan
diberikan di bawah ini. Beberapa contoh tambahan untuk menentukan selektivitas dan sensitivitas muncul di
bagian 3.3.
Contoh:
Selektivitas analitik dari suatu uji diagnostik (yang didefinisikan sebagai proporsi sampel dari spesimen referensi yang
diketahui tidak terinfeksi yang diuji negatif dalam suatu pengujian) dapat dinilai dengan menggunakan panel sampel
yang berasal dari spesimen yang telah terpapar organisme terkait secara genetik yang mungkin merangsang antibodi
reaktif silang, atau serum dari spesimen dengan presentasi klinis serupa. 'Analisis tetangga dekat' ini berguna dalam
menentukan kemungkinan reaksi positif palsu dalam pengujian. Juga tepat untuk mendokumentasikan kriteria
spesifisitas kelompok yang mencakup deteksi analit yang diinginkan dalam serum dari subjek yang telah mengalami
infeksi/pajanan ke seluruh kelompok atau serotipe organisme

minat. Penting juga untuk mengevaluasi selektivitas analitik dari pengujian menggunakan sampel dari hewan atau
manusia (mana yang berlaku) yang telah divaksinasi. Mungkin diperlukan suatu uji untuk membedakan antara virus
hidup, galur yang divaksinasi, dan fragmen virus tergantung pada tujuan penggunaan uji tersebut. Jika pengujian
menargetkan antibodi yang ditimbulkan oleh virus, vaksinasi terhadap virus tersebut dapat menghasilkan antibodi yang
mengganggu kesimpulan pengujian tentang infeksi. Juga, jika antigen virus yang digunakan dalam pengujian berasal
dari persiapan kultur virus seluruh sel, yang mengandung reagen antigenik (protein pembawa, dll.) selain virus, hewan
atau manusia yang divaksinasi dapat melakukan tes positif palsu karena deteksi antibodi non-virus.
Contoh:
Untuk analisis mikrobiologi, selektivitas adalah fraksi dari jumlah total kultur atau koloni negatif yang
ditetapkan dengan benar dalam pemeriksaan dugaan (ISO 13843:2000). Ini adalah probabilitas bahwa hasil
tes akan diklasifikasikan sebagai negatif dengan metode pengujian mengingat sampel negatif untuk
organisme tertentu (SANAS TG28-02, 2008). Untuk metode mikrobiologi kualitatif alternatif, perhatian
tentang kemampuannya untuk mendeteksi berbagai mikroorganisme yang mungkin ada dalam artikel uji
cukup ditangani dengan promosi pertumbuhan di media untuk metode kualitatif yang mengandalkan
pertumbuhan untuk menunjukkan ada atau tidak adanya mikroorganisme. Namun, untuk metode yang
tidak memerlukan pertumbuhan sebagai indikator keberadaan mikroba,
Untuk metode mikrobiologi yang melibatkan langkah konfirmasi, hasil positif dugaan diambil melalui prosedur kultur
dan dikonfirmasi positif atau ditentukan negatif. Dengan kata lain, langkah konfirmasi memungkinkan sampel untuk
diklasifikasi ulang sebagai positif yang diketahui atau negatif yang diketahui. Dengan demikian, tingkat selektivitas hasil
setelah konfirmasi selalu 100%.
3.3 Sensitivitas
Sensitivitas (atau inklusivitas) suatu metode adalah laju perubahan respons terukur dengan perubahan konsentrasi (atau
jumlah) analit (atau mikroorganisme). Sensitivitas yang lebih besar biasanya berarti rentang dinamis yang lebih rendah tetapi
juga ketidakpastian pengukuran yang lebih rendah. Untuk sistem instrumental, sensitivitas diwakili oleh kemiringan (b) dari
kurva kalibrasi (kamu=sebuah +bx)dan dapat ditentukan dengan prosedur kuadrat terkecil klasik (untuk kecocokan linier), atau
secara eksperimental, menggunakan sampel yang mengandung berbagai konsentrasi analit. Sensitivitas dapat ditentukan
dengan analisis sampel atau standar yang dibubuhi atau terkontaminasi artifisial yang disiapkan dalam larutan ekstrak sampel
(pemeriksaan awal sudah cukup). Kemiringan rata-rata dengan nilai linier positif yang tinggi (misalnya >1) atau negatif yang
rendah (misalnya <-1) menunjukkan bahwa rata-rata metode tersebut sangat sensitif. Semakin besar sensitivitas (kemiringan/
gradien grafik kalibrasi), semakin baik suatu metode mampu membedakan perubahan kecil dalam konsentrasi analit (atau
mikroorganisme). Namun, sensitivitas tinggi biasanya berarti rentang dinamis yang kecil. Jika sensitivitas berubah dengan
kondisi operasi sehari-hari, pertimbangan sensitivitas selama validasi metode dapat dibatasi untuk memastikan respons linier
yang memuaskan secara teratur dapat dicapai dalam rentang konsentrasi yang diperlukan. Sensitivitas harus diperiksa sebagai
bagian dari prosedur jaminan kualitas dan kontrol kualitas fasilitas yang berkelanjutan.
Beberapa contoh untuk menentukan sensitivitas suatu metode telah diberikan di bawah ini. Contoh
mikrobiologi yang diberikan juga mencakup contoh untuk menentukan selektivitas.
Contoh:
Sensitivitas analitik dari suatu uji diagnostik dapat dinilai dengan menghitung jumlah paling sedikit analit yang dapat dideteksi
dalam sampel pada koefisien variasi yang dapat diterima. Hal ini dapat dilakukan dengan membatasi pengenceran standar
konsentrasi analit yang diketahui. Namun, ukuran absolut objektif seperti itu seringkali tidak mungkin dicapai karena
kurangnya sampel atau standar konsentrasi atau aktivitas yang diketahui. Pendekatan lain adalah dengan menggunakan
analisis pengenceran titik akhir sampel dari spesimen positif yang diketahui, untuk menentukan pengenceran sampel kedua
dari belakang di mana analit tidak lagi terdeteksi, atau setidaknya, tidak dapat dibedakan dari aktivitas serum negatif. Ketika
hasil untuk pengujian yang sedang dikembangkan dibandingkan dengan pengujian lain yang dijalankan pada sampel yang
sama, ukuran relatif dari sensitivitas analitis dapat diperkirakan.
Contoh:
Dalam istilah mikrobiologi, sensitivitas adalah probabilitas bahwa metode tertentu akan memperoleh hasil positif yang
dikonfirmasi mengingat sampel uji diketahui positif. Positif yang diketahui mengacu pada konfirmasi analit yang
diinokulasi. Untuk menunjukkan selektivitas dan sensitivitas, sampel uji harus diinokulasi dengan strain mikroorganisme
spesifik yang diuji serta strain yang dianggap berpotensi bersaing. Evaluasi selektivitas dan sensitivitas tidak berlaku
untuk penghitungan total viabel, jumlah ragi dan kapang atau metode penghitungan total serupa yang tidak ditujukan
pada mikroorganisme tertentu. Direkomendasikan selektivitas dan sensitivitas ditetapkan dengan analisis setidaknya 30
galur murni dari mikroorganisme spesifik yang sedang dipelajari dan setidaknya 20 galur murni dari galur yang
berpotensi kompetitif [AOAC OMA Program Manual, 2002). Jumlah ini mungkin perlu ditingkatkan (misalnya untuk
Salmonellametode, jumlah strain analit target ini adalah

ditingkatkan menjadi setidaknya 100 galur yang dipilih untuk mewakili sebagian besar serovar yang diketahui
Salmonella).
Untuk tes klasifikasi biner, sensitivitas didefinisikan sebagai kemampuan tes untuk mengidentifikasi dengan benar tingkat positif yang
sebenarnya, sedangkan spesifisitas tes didefinisikan sebagai kemampuan tes untuk mengidentifikasi dengan benar tingkat negatif
yang sebenarnya. Misalnya, ketika diterapkan pada tes klasifikasi biner diagnostik medis, jika 100 pasien yang diketahui memiliki
penyakit diuji, dan 46 tes positif, maka tes tersebut memiliki sensitivitas 46%. Jika 100 pasien tanpa penyakit diuji dan 94 kembali
hasilnya negatif, maka tes tersebut memiliki spesifisitas 94%.
Selain sensitivitas dan spesifisitas, kinerja tes klasifikasi biner dapat diukur dengan nilai prediksi positif
(PPV) dan nilai prediksi negatif (NPV). Nilai prediksi positif menjawab pertanyaan "Jika hasil tes positif,
seberapa baik hal itu memprediksi keberadaan aktual, misalnya, suatu penyakit?". Ini dihitung sebagai
(positif benar) / (positif benar + positif palsu); yaitu, proporsi positif sejati dari semua hasil positif. (Nilai
prediksi negatif sama, tetapi untuk negatif.)
Penting untuk dicatat satu perbedaan penting antara kedua konsep tersebut. Artinya, sensitivitas dan
spesifisitas tidak tergantung pada populasi dalam arti bahwa mereka tidak berubah tergantung pada
proporsi positif dan negatif yang diuji. Memang, Anda dapat menentukan sensitivitas tes dengan menguji
hanya kasus positif. Namun, nilai prediksi tergantung pada populasi.
Kondisi
Positif Negatif
Positif Benar Positif Positif Palsu → Nilai prediksi positif
Uji
hasil
Negatif Negatif Palsu Benar Negatif → Nilai prediksi negatif
↓ ↓
Kepekaan Kekhususan
Contoh yang berhasil untuk menentukan spesifisitas dan sensitivitas tes klasifikasi biner veteriner (tes layar faecal
occult blood (FOB) yang digunakan pada 206 anjing untuk mencari kanker usus) diberikan di bawah ini:
Contoh:
Anjing dengankanker usus

Positif Negatif
→ Nilai prediksi positif =
TP / (TP + FP)
Positif TP = 4 FP = 18 = 4 / (4 + 18)
= 4 / 22
FOB = 18%
hasil → Nilai prediksi negatif =
TN / (FN + TN)
Negatif FN = 2 TN = 182 = 182 / (2 + 182) =
182 / 184
98,9%
↓ ↓
Kepekaan Kekhususan
= TP / (TP + FN) = TN / (FP +
= 4 / (4 + 2) TN)
=4/6 = 182 / (18 +
66,67% 182)
= 182 / 200
= 91%
Calculations:
Tingkat positif palsu (%) = FP / (FP + TN) = 18 / (18 + 182) = 9% = 1 spesifisitas
Tingkat negatif palsu (%) = FN / (TP + FN) = 2 / (4 + 2 ) = 33% = 1 sensitivitas Daya =
sensitivitas = 1 tingkat negatif palsu

Rasio kemungkinan positif = sensitivitas / (1 spesifisitas) = 66,67% / (1 91%) = 7,4 Rasio

kemungkinan negatif = (1 sensitivitas) / spesifisitas = (1 66,67%) / 91% = 0,37
Oleh karena itu dengan sejumlah besar positif palsu dan sedikit negatif palsu, tes layar FOB positif itu sendiri buruk dalam
mengkonfirmasi kanker (PPV = 18%) dan penyelidikan lebih lanjut harus dilakukan, bagaimanapun, akan mengambil 66,7% dari
semua kanker ( sensitivitas). Namun sebagai tes skrining, hasil negatif sangat baik untuk meyakinkan bahwa anjing tidak
menderita kanker (NPV=98,9%) dan pada skrining awal ini dengan benar mengidentifikasi 91% dari mereka yang tidak
menderita kanker (spesifisitas).
3.4 Akurasi
Akurasi adalah properti dari hasil pengukuran tunggal dan dipengaruhi oleh kesalahan acak dan sistematis,
oleh karena itu tidak termasuk dalam validasi metode itu sendiri. Keakuratan hasil pengukuran
menggambarkan seberapa dekat hasil dengan nilai sebenarnya dan karena itu mencakup efek presisi dan
kebenaran (dinyatakan dalam bentuk bias).
Presisi berkaitan dengan kondisi pengulangan dan / atau reproduktifitas pengukuran "mendapatkan pengukuran yang
sama setiap kali". Dengan kata lain kedekatan hasil beberapa analisis satu sama lain. Oleh karena itu, presisi adalah
ukuran penyebaran hasil pengukuran berulang dan hanya bergantung pada distribusi kesalahan acak – presisi tidak
memberikan indikasi seberapa dekat hasil tersebut dengan nilai sebenarnya.
Suatu sistem pengukuran dapat akurat tetapi tidak tepat, tepat tetapi tidak akurat, tidak keduanya, atau keduanya.
Misalnya, jika eksperimen mengandung kesalahan sistematis, maka peningkatan ukuran sampel umumnya
meningkatkan presisi tetapi tidak meningkatkan akurasi. Menghilangkan kesalahan sistematis meningkatkan akurasi
tetapi tidak mengubah presisi. Namun, validitas sistem pengukuran tergantung pada 'kecocokan untuk tujuan' dan
karenanya akurasi dan presisi perlu dinilai terhadap kriteria validasi. Tidak ada skala mutlak.
Kita tidak pernah bisa membuat pengukuran yang sempurna. Yang terbaik yang bisa kita lakukan adalah sedekat
mungkin dengan keterbatasan alat ukur.
Ilustrasi di bawah ini digunakan dalam upaya untuk menunjukkan perbedaan antara dua istilah, akurasi
dan presisi.
Misalkan Anda membidik sasaran, mencoba mengenai sasaran (pusat sasaran) dengan anak panah. Berikut beberapa
pola representatif anak panah yang di targetkan:
SEBUAH B C
SEBUAH Akurat dan presisi. Anak panah berkerumun dengan rapat dan posisi rata-ratanya adalah pusat mata
banteng.
B Tepat, tapi tidak akurat. Anak panah dikelompokkan bersama tetapi tidak mengenai sasaran yang diinginkan.
C Akurasi dan presisinya buruk. Anak panah tidak berkumpul bersama dan tidak dekat dengan mata banteng.
Akurasi juga digunakan sebagai ukuran statistik seberapa baik tes klasifikasi biner dengan benar mengidentifikasi
atau mengecualikan suatu kondisi. Artinya, akurasi adalah proporsi hasil yang benar (baik benar positif dan benar
negatif) dalam populasi.
Kondisi
BENAR PALSU
Uji → Positif
Positif Benar-benar positif Positif palsu
hasil nilai prediksi

→ Negatif
Negatif Negatif palsu Benar-benar negatif
nilai prediksi
↓ ↓
Ketepatan
Kepekaan Kekhususan
3.4.1 Presisi
ISO 3534-1 (2006) menjelaskan presisi sebagai ukuran kedekatan (derajat hamburan) antara hasil pengujian independen
yang diperoleh dalam kondisi yang ditentukan (kondisi yang ditentukan dapat berupa, misalnya, pengulangan, presisi
menengah, atau reproduktifitas). Ketepatan yang diperlukan ditentukan oleh peran hasil tes yang akan dimainkan
dalam membuat keputusan.Catatan: “Hasil uji independen” berarti hasil yang diperoleh dengan cara yang tidak
dipengaruhi oleh hasil sebelumnya pada objek uji yang sama atau serupa tetapi juga bahan uji telah disiapkan secara
independen dan dianggap sebagai sampel acak dari populasi yang sedang diukur.
Presisi biasanya dinyatakan secara numerik dengan ukuran ketidaktepatan, seperti standar deviasi (kurang
presisi dicerminkan oleh standar deviasi yang lebih besar) atau standar deviasi relatif (koefisien varians) dari
hasil ulangan. Namun, tindakan lain yang sesuai dapat diterapkan. Agar presisi yang dinyatakan benar-
benar mencerminkan kinerja metode di bawah kondisi operasi normal, itu harus ditentukan dalam kondisi
seperti itu. Bahan uji harus khas dari sampel yang biasanya dianalisis. Persiapan sampel harus konsisten
dengan praktik normal dan variasi dalam reagen, peralatan uji, analis dan instrumentasi harus mewakili
yang biasanya ditemui. Sampel harus homogen, tetapi
Presisi dapat bervariasi dengan konsentrasi analit. Ini harus diselidiki jika konsentrasi analit diharapkan
bervariasi lebih dari 50% dari nilai rata-rata. Untuk beberapa pengujian, mungkin tepat untuk menentukan
presisi hanya pada satu atau dua konsentrasi yang signifikan bagi pengguna data uji, misalnya spesifikasi kendali
mutu produksi (QC) atau batas peraturan.
Untuk validasi laboratorium tunggal, ukuran presisi terbaik diperoleh dengan analisis ulangan dari bagian uji sampel
laboratorium yang disiapkan secara independen, bahan referensi bersertifikat (CRM) atau bahan referensi (RM), dalam kondisi
operasi jangka panjang yang normal. Biasanya ini akan melibatkan penentuan reproduktifitas intra-laboratorium seperti yang
dijelaskan di bawah ini.
Jika data tersedia dari eksperimen presisi yang dilakukan pada sampel yang berbeda, mungkin pada waktu yang berbeda dan
tidak ada perbedaan yang signifikan antara varians dari setiap kumpulan data, data dapat digabungkan untuk menghitung
deviasi standar gabungan.
Untuk presisi uji klasifikasi biner didefinisikan sebagai proporsi positif benar terhadap semua hasil
positif (baik positif benar dan positif palsu). Akurasi 100% berarti bahwa nilai yang diukur persis sama
dengan nilai yang diberikan.
jumlah positif benar

presisi -
jumlah positif-benar-benar positif
Untuk membandingkan presisi dari dua metode, F-test direkomendasikan. Jika statistik uji yang
dihitung (F = var1/var2) melebihi nilai kritis yang diperoleh dari tabel statistik, terdapat perbedaan
yang signifikan antara varians metode dan hipotesis nol ditolak.
Untuk presisi, dua kondisi pengukuran, pengulangan dan reproduktifitas, biasanya dikutip. AS 2850 (1986)
memberikan panduan tentang aspek validasi metode ini. Karena keterulangan dan reproduktifitas biasanya akan
bervariasi dalam rentang pengukuran metode analisis, ini harus ditentukan pada beberapa tingkat konsentrasi,
dengan salah satu tingkat ini mendekati nilai yang lebih rendah dari rentang pengukuran. Dengan variasi dalam
matriks yang bersangkutan, penentuan pada beberapa tingkat akan diperlukan.
3.4.1.1 Pengulangan
Pengulangan adalah perkiraan presisi yang diperoleh ketika hasil pengukuran diproduksi di satu fasilitas dan
pengujian dilakukan pada item uji yang identik selama interval waktu yang singkat oleh satu operator menggunakan
peralatan yang sama dalam kondisi yang sekonstan mungkin (misalnya waktu inkubasi dan suhu) . Hal ini dapat
dinyatakan sebagai standar deviasi (s), varians (s2), fungsi distribusi probabilitas, dll untuk sejumlah pengukuran yang
sesuai yang dibuat dalam kondisi pengulangan. Jika metode analisis melibatkan

teknik instrumental, pengulangan instrumen perlu ditentukan selain pengulangan metode (contoh disediakan
di bawah). Pengulangan memberikan indikasi variasi jangka pendek dalam hasil pengukuran dan biasanya
digunakan untuk memperkirakan kemungkinan perbedaan antara hasil pengukuran ulangan yang diperoleh
dalam satu kumpulan analisis. Namun, ini meremehkan penyebaran hasil yang dapat diharapkan dalam kondisi
operasi normal dalam jangka panjang
Standar deviasi pengulangan, varians, fungsi distribusi probabilitas, dll harus ditentukan dengan setidaknya 6
derajat kebebasan. Hal ini dapat dicapai misalnya dengan menganalisis 7 kali berturut-turut dengan satu item
tes (df=6), 4 kali dalam seri dengan 2 item tes (df=6), 3 kali dalam seri dengan 3 item tes (df=6). =6), dll (Zar,
1974).
Pengulangan instrumental dapat ditentukan dengan injeksi larutan standar yang digunakan untuk menyiapkan kurva
kalibrasi kerja serta sampel yang dikeluarkan atau diperkaya pada masing-masing tingkat lonjakan sebanyak 7 kali.
Suntikan ini harus dilakukan secara acak untuk meminimalkan bias. Hitung rata-rata, simpangan baku dan persen
simpangan baku relatif.
Pengulangan metode dapat ditentukan dengan menyiapkan kumpulan bahan sampel dengan tingkat analit pada atau
mendekati konsentrasi yang digunakan untuk studi pemulihan metode. Hal ini dapat dilakukan dengan menggunakan bahan
yang dikeluarkan atau dengan memperkuat bahan (kosong atau dikeluarkan) dengan jumlah analit yang diperlukan. Ekstrak
duplikat disiapkan dari masing-masing sampel ini dan dianalisis oleh satu analis pada hari yang sama. Hitung rata-rata,
simpangan baku dan persen simpangan baku relatif.
Untuk analisis mikrobiologi, pengulangan juga dapat dinilai dalam kasus di mana sampel dilapisi dalam
rangkap dua.
3.4.1.2 Reproduksibilitas
Reproduksibilitas adalah perkiraan presisi yang diperoleh ketika serangkaian pengukuran dilakukan di bawah
kondisi yang lebih bervariasi, yaitu metode yang sama pada item uji identik yang digunakan oleh operator yang
berbeda dengan peralatan yang berbeda di fasilitas yang berbeda pada waktu yang berbeda. Ini dapat
dinyatakan sebagai standar deviasi (s), varians, faktor distribusi probabilitas, dll. dari jumlah penentuan yang
sesuai pada spesimen identik yang dianalisis selama beberapa hari dengan setidaknya dua standar kalibrasi yang
berbeda. 'Intra-laboratorium reproduktifitas', 'dalam reproduktifitas dalam laboratorium' atau 'presisi menengah'
adalah istilah yang digunakan untuk menggambarkan presisi yang berkaitan dengan kondisi reproduktifitas
terbatas pada fasilitas tunggal. Ini melibatkan membuat pengukuran ulangan pada hari yang berbeda, dalam
kondisi yang mencerminkan, sejauh mungkin,
Standar deviasi reproduktifitas dapat ditentukan oleh beberapa sampel yang dijalankan dalam seri atau
sebagai deviasi standar gabungan dari sejumlah penentuan ganda ganda yang dijalankan pada beberapa
seri. Besarnya derajat kebebasan yang dicapai dengan berbagai kombinasi nomor seri dan jumlah spesimen
pada setiap seri disajikan pada tabel di bawah ini:
Derajat kebebasan Derajat kebebasan untuk

Jumlah sampel
Jumlah seri untuk pengulangan reproduktifitas fasilitas
per seri
simpangan baku simpangan baku
7 1 6 Tidak ditentukan
4 2 6 7
3 3 6 8
2 6 6 11
n m (n-1)*m n*m-1
Jika metode uji akan digunakan untuk analisis berbagai jenis sampel (misalnya konsentrasi analit yang
berbeda atau matriks sampel) maka presisi perlu dievaluasi untuk rentang sampel yang representatif.
Misalnya, presisi suatu metode pengujian biasanya menurun seiring dengan menurunnya konsentrasi
analit.
3.4.2 Kebenaran
Kebenaran pengukuran menggambarkan kedekatan kesepakatan antara rata-rata jumlah tak terbatas dari nilai
kuantitas terukur ulangan dan nilai kuantitas referensi. Kurangnya kebenaran menunjukkan kesalahan sistematis. Bias
adalah ekspresi kuantitatif kebenaran. Kebenaran suatu hasil meningkat ketika bias berkurang.
Bias hasil pengukuran dapat dilihat sebagai kombinasi dari bias metode itu sendiri, bias laboratorium,
dan bias yang disebabkan oleh proses analitik tertentu (pemulihan analitis). GE O'Donnel

dan DB Hibbert (2005) menjelaskan bagaimana bias yang berbeda diacak sebagai tingkat yang lebih tinggi dari percobaan komunal
digunakan untuk memberikan standar deviasi.
Tes pemulihan digunakan untuk menilai bias. Bias diukur dengan mendeteksi sejumlah parameter analitik yang diketahui
ditambahkan ke spesimen dan dimasukkan ke seluruh metode analisis. Setelah dikurangi kandungan yang terdeteksi dari
parameter analitik yang bersangkutan dalam spesimen asli tanpa penambahan, persentase perolehan kembali dapat
dihitung sebagai persentase dari jumlah yang ditambahkan. Penyimpangan substansial dari nilai referensi yang diterima
dimanifestasikan dalam tingkat bias yang tinggi.
Untuk memperhitungkan setiap variasi antara run, bias harus ditentukan selama beberapa hari dan lebih disukai di
seluruh rentang pengukuran dan, jika berlaku, melalui penggunaan kombinasi yang sesuai dari spesimen yang
berbeda. Karena metode analisis tidak dapat diharapkan memiliki bias yang sama di seluruh rentang pengukuran
(misalnya dengan kurva kalibrasi non-linier), beberapa tingkat konsentrasi harus dimasukkan dalam penentuan bias
(setidaknya satu penentuan pada tingkat tinggi dan rendah tingkat). Jika tidak, fasilitas harus dapat membuktikan
bahwa metode analisis yang digunakan memiliki kebenaran yang sama di seluruh rentang pengukuran.
Ketika bahan referensi bersertifikat (CRM) tersedia untuk mencocokkan matriks dan nilai sampel laboratorium,
mereka menyajikan pilihan terbaik untuk memperkirakan bias. Idealnya, beberapa CRM dengan matriks yang sesuai
dan konsentrasi analit harus diukur.
Namun, untuk sebagian besar metode pengujian, CRM yang sesuai tidak tersedia, dan alternatif diperlukan untuk
memperkirakan bias. Jika CRM yang sesuai tidak tersedia, pemulihan dapat diperkirakan dengan menganalisis bahan
referensi (RM) (asalkan matriks tersebut cocok dengan sampel yang akan diuji dan cukup dicirikan sehubungan dengan
analit yang diinginkan). Bahan yang dicirikan oleh pengujian kolaboratif terbatas mungkin cocok untuk tujuan tersebut.
Jika tidak tersedia CRMs atau RMs yang sesuai, bias dapat diselidiki dengan analisis blanko matriks atau sampel yang
tidak difortifikasi dan difortifikasi (yaitu terkontaminasi secara artifisial) dengan analit yang diinginkan pada kisaran
konsentrasi. Dalam hal ini pemulihan (R) dihitung dari selisih antara hasil yang diperoleh sebelum dan sesudah spiking
sebagai pecahan dari jumlah yang ditambahkan.
c1-c2
R-
c3
Di mana:c1= konsentrasi terukur dalam sampel yang diperkaya

c2= konsentrasi terukur dalam sampel yang tidak
difortifikasi c3= konsentrasi benteng
Catatan: Pemulihan dinyatakan sebagai persentase dengan mengalikan hasilnya dengan 100.
Untuk beberapa pengujian, misalnya analisis residu pestisida, fasilitas mungkin dapat menancapkan sampel
yang telah ditentukan tidak mengandung residu analit yang dapat dideteksi. Namun, untuk banyak pengujian,
perlu dilakukan spike sampel yang mengandung konsentrasi analit alami.
Dalam kasus seperti itu, bias diperkirakan dari perbedaan antara hasil yang diperoleh untuk analisis sampel dalam keadaan
berduri dan aslinya. Perhatian disarankan ketika mengevaluasi bias dari analisis sampel berduri karena pemulihan mungkin
lebih baik untuk analit berduri dibandingkan dengan analit 'asli', atau residu/kontaminan yang timbul. Misalnya, sementara
spiking air minum dengan fluoride akan memungkinkan perkiraan pemulihan yang dapat diandalkan, hal yang sama mungkin
tidak berlaku untuk spiking tanah dengan pestisida organoklorin. Hal ini sebagian besar disebabkan oleh efisiensi ekstraksi
yang berbeda untuk analit 'ditambahkan' dan 'asli'. Jika memungkinkan, data pemulihan berduri harus dibuktikan dengan
beberapa cara; misalnya, partisipasi dalam uji profisiensi yang melibatkan sampel alami atau sampel yang mengandung residu/
kontaminasi.
Dalam beberapa kasus, fasilitas harus hanya mengandalkan data pemulihan yang tercemar atau terkontaminasi secara artifisial untuk
memperkirakan bias. Dalam kasus seperti itu, perlu dicatat bahwa sementara pemulihan 100% tidak selalu menunjukkan kebenaran,
pemulihan yang buruk pasti menunjukkan bias, meskipun kemungkinan meremehkan total bias.
Untuk analisis mikrobiologi, organisme yang diinokulasi harus mewakili genus, spesies dan/atau mikroorganisme
penghasil toksin yang berbeda yang dimaksudkan untuk dimasukkan dalam pernyataan penerapan metode. Pilihan
kultur harus cukup luas untuk mewakili variasi yang melekat pada mikroorganisme yang diinginkan.

Metode referensi (biasanya metode standar internasional atau nasional yang diakui) dengan bias yang diketahui juga
dapat digunakan untuk menyelidiki bias metode lain. Sampel tipikal yang mencakup kisaran matriks dan konsentrasi
analit yang relevan dengan program pengujian yang diusulkan dianalisis dengan kedua metode. Signifikansi bias
metode pengujian dapat diperkirakan dengan analisis statistik (uji-t) dari hasil yang diperoleh.
3.5 Batas deteksi dan batas kuantitasi

Penentuan batas deteksi (LOD) atau batas kuantitasi (LOQ) biasanya hanya diperlukan untuk metode yang
dimaksudkan untuk mengukur analit pada konsentrasi mendekati nol. Tidak perlu memperkirakan LOD atau LOQ
untuk metode yang akan selalu diterapkan untuk mengukur konsentrasi analit yang jauh lebih besar daripada LOQ.
Namun, perkiraan seringkali sangat penting untuk metode penelusuran dan ultra-jejak di mana konsentrasi
kekhawatiran sering kali mendekati LOD dan LOQ dan hasil yang dilaporkan sebagai 'tidak terdeteksi' mungkin
memiliki dampak signifikan pada penilaian risiko atau keputusan peraturan.
Penentuan batas deteksi dan batas kuantitasi yang terpisah mungkin diperlukan untuk matriks yang berbeda.
3.5.1 Batas deteksi (LOD)

Untuk sebagian besar metode analitik modern, LOD dapat dibagi menjadi dua komponen, metode deteksi
batas (MDL) dan batas deteksi instrumental (IDL)
MDL adalah istilah yang harus diterapkan pada metode ekstraksi dan analisis yang dikembangkan untuk analisis analit
tertentu dalam matriks. MDL dapat didefinisikan sebagai jumlah terkecil atau konsentrasi analit yang dapat dideteksi
atau dibedakan secara andal dari latar belakang untuk matriks tertentu (dengan metode tertentu). Dengan kata lain,
LOD adalah nilai terendah yang diukur dengan metode yang lebih besar dari ketidakpastian yang terkait dengannya
(Taylor, 1989). Semua gangguan matriks harus diperhitungkan saat menentukan MDL. Diterapkan pada tes
mikrobiologi, MDL adalah jumlah mikroorganisme terendah yang dapat dideteksi.
LOD suatu metode tidak boleh disamakan dengan respons instrumental terendah. Penggunaan rasio sinyal
terhadap noise untuk standar analitis yang diperkenalkan pada instrumen merupakan indikator yang berguna
dari kinerja instrumen tetapi cara yang tidak tepat untuk memperkirakan LOD suatu metode. Sebagian besar
analisis hari ini dilakukan pada instrumen analitis. Masing-masing instrumen ini memiliki batasan jumlah analit
yang dapat dideteksi. Batasan ini dapat dinyatakan sebagai batas deteksi instrumen (IDL), yang dapat
didefinisikan sebagai jumlah terkecil analit yang dapat dideteksi atau dibedakan secara andal dari latar belakang
instrumen (yaitu kebisingan instrumental). Saat sensitivitas meningkat, IDL menurun, dan saat noise instrumental
menurun, demikian juga IDL.
Beberapa pendekatan untuk menentukan batas deteksi dimungkinkan. Pendekatan selain yang tercantum di bawah ini
mungkin dapat diterima.
3.5.1.1 LOD berdasarkan evaluasi visual

Evaluasi visual dapat digunakan untuk metode non-instrumental tetapi juga dapat digunakan dengan metode
instrumental. Hal ini juga berguna untuk menetapkan LOD untuk pengukuran kualitatif.
Batas deteksi ditentukan dengan analisis sampel blanko sampel dengan konsentrasi analit yang diketahui
dan dengan menetapkan tingkat minimum di mana analit dapat dideteksi dengan andal.
Kosong sampel dibubuhi dengan analit pada berbagai tingkat konsentrasi. Pada setiap tingkat konsentrasi, perlu
untuk mengukur sekitar 7 ulangan independen (seperti yang disebutkan sebelumnya, dalam kenyataannya
jumlah ini sering terlampaui). Pengukuran ulangan pada berbagai tingkat harus diacak. Kurva respons dari
persentase hasil positif (atau negatif) versus konsentrasi harus dibangun dari data, dari mana dimungkinkan
untuk menentukan, dengan inspeksi, konsentrasi ambang di mana tes menjadi tidak dapat diandalkan.
Batas deteksi yang diterapkan pada uji mikrobiologi, adalah ada atau tidak adanya 1cfu dalam jumlah sampel yang
tetap. Meskipun dapat diselidiki dan dibuktikan secara teori, dalam praktiknya, hal ini sangat sulit dibuktikan karena
adanya mikroorganisme yang bersaing serta efek sampel pada organisme. Oleh karena itu memuaskan untuk
menggunakan sampel uji yang terkontaminasi dengan 5-10 cfu untuk menentukan batas deteksi (SANAS TG 28-02,
2008).
Contoh:
Salah satu metode untuk menunjukkan batas deteksi untuk uji kuantitatif mikrobiologi adalah dengan mengevaluasi dua
metode (alternatif dan kompendial) dengan inokulasi dengan sejumlah kecil mikroorganisme tantangan (tidak

lebih dari 5 cfu per unit) diikuti dengan pengukuran pemulihan. Tingkat inokulasi harus disesuaikan sampai
setidaknya 50% sampel menunjukkan pertumbuhan dalam uji kompendial. Penentuan ini perlu diulang beberapa
kali, karena batas deteksi suatu uji ditentukan dari sejumlah ulangan. Kemampuan kedua metode untuk
mendeteksi keberadaan mikroorganisme dalam jumlah rendah dapat ditunjukkan dengan menggunakan uji Chi
square.
3.5.1.2 LOD berdasarkan standar deviasi blanko

Batas deteksi dapat ditentukan dengan analisis sejumlah besar blanko (disarankan n - 20). Dimana blanko sampel
independen diukur satu kali masing-masing (n - 10 direkomendasikan) dan blanko sampel independen yang diperkaya
pada konsentrasi terendah yang dapat diterima diukur satu kali setiap (n - 10 direkomendasikan). LOD dinyatakan
sebagai nilai rata-rata sampel kosong ditambah tiga standar deviasi (+ 3s).
3.5.1.3 LOD berdasarkan kisaran di mana persamaan kalibrasi berlaku

Jika data sampel di dekat atau di LOD tidak tersedia, parameter persamaan kalibrasi dapat digunakan untuk
memperkirakan LOD instrumental. Menggunakan perkiraan LOD sebagai blangko ditambah tiga simpangan baku
blangko, respons instrumen terhadap blangko diambil sebagai titik potong kalibrasi (sebuah), dan deviasi standar dari
respons instrumen diambil sebagai kesalahan standar kalibrasi (sy/x). Oleh karena itu dari persamaan kalibrasi jikakamu
LOD=sebuah+3sy/x=sebuah+bxLOD, kemudianxLOD= 3sy/x/b. Persamaan ini banyak digunakan dalam kimia analitik. Namun
karena ini adalah ekstrapolasi, hasilnya tidak dapat diandalkan seperti eksperimen yang dilakukan di dekat LOD yang
diharapkan, dan direkomendasikan agar sampel dengan konsentrasi mendekati perkiraan LOD dianalisis untuk
memastikan bahwa sampel tersebut dapat dideteksi dengan probabilitas yang sesuai.
3.5.1.4 LOD berdasarkan signal-to-noise

Dalam kasus prosedur analitis instrumental yang menunjukkan kebisingan latar belakang, pendekatan umum adalah
membandingkan sinyal terukur dari sampel dengan konsentrasi analit rendah yang diketahui dengan sampel kosong
dan menetapkan konsentrasi minimum di mana analit dapat dideteksi dengan andal. Biasanya rasio signal-to-noise
yang dapat diterima adalah 2:1 atau 3:1.
3.5.2 Batas kuantisasi (LOQ)

Batas kuantisasi juga disebut sebagai batas penentuan, namun istilah batas kuantisasi lebih disukai untuk
membedakannya dari LOD. Sama halnya dengan LOD, LOQ dapat dibagi menjadi dua komponen, method
quantitation limit (MQL) dan instrumental quantitation limit (IQL).
MQL dapat didefinisikan sebagai jumlah terkecil analit yang dapat diidentifikasi dan diukur secara andal dengan tingkat
keandalan tertentu dalam matriks tertentu (dengan metode tertentu).
IQL dapat didefinisikan sebagai jumlah terkecil analit yang dapat diidentifikasi dan diukur dengan andal oleh
instrumen.
Batas kuantisasi dinyatakan sebagai konsentrasi analit (misalnya persentase, bagian per miliar) dalam sampel.
Berbagai konvensi telah diterapkan untuk memperkirakan LOQ. Tergantung pada tingkat kepastian yang diperlukan
(misalnya apakah analisis untuk tujuan hukum atau tidak, ketidakpastian pengukuran target dan kriteria penerimaan),
rekomendasi yang paling umum adalah mengutip LOQ sebagai nilai kosong ditambah 10 kali standar deviasi
pengulangan, atau 3 kali LOD (yang sebagian besar memberikan angka yang sama) atau 50% di atas tingkat fortifikasi
terendah yang digunakan untuk memvalidasi metode. Untuk kepastian yang lebih besar, LOQ dapat dikutip sepuluh
kali LOD. Faktor-faktor lain dapat digunakan dalam jenis kegiatan pengujian tertentu dan fasilitas dalam hal ini harus
mengacu pada faktor yang ada dalam jenis kegiatan pengujian yang bersangkutan.
Batas kuantisasi untuk matriks dan metode yang ditentukan dapat bervariasi antara fasilitas atau dalam satu fasilitas
dari waktu ke waktu karena peralatan, teknik, dan reagen yang berbeda.
3.5.2.1 Batas pelaporan (LOR)

LOR adalah batas praktis kuantisasi pada atau di atas LOQ.
3.6 Kekasaran
Kekasaran (ukuran ketahanan) suatu metode adalah sejauh mana hasil tidak terpengaruh oleh perubahan kecil dari
kondisi eksperimental yang dijelaskan dalam metode, misalnya, perubahan kecil pada suhu, pH, konsentrasi reagen, laju
aliran, waktu ekstraksi, komposisi fase gerak. Pengujian ketangguhan memberikan indikasi keandalan metode selama
penggunaan normal. Tujuan pengujian ketangguhan adalah untuk mengidentifikasi dan, jika perlu, kondisi metode
kontrol yang lebih baik yang dapat menyebabkan variasi dalam hasil pengukuran, ketika pengukuran dilakukan pada
waktu yang berbeda atau dalam waktu yang berbeda.

fasilitas. Ini juga dapat digunakan untuk mengidentifikasi faktor-faktor yang perlu ditangani untuk meningkatkan presisi
dan bias. Kekasaran diselidiki dengan mengukur efek perubahan kecil yang direncanakan pada kondisi metode pada
rata-rata hasil. Uji coba perlu dilakukan dengan bantuan spesimen kosong, bahan referensi (bersertifikat), spesimen
dengan komposisi yang diketahui, dll. Untuk mengevaluasi tingkat kekasaran, pengujian signifikansi dapat dilakukan.
Dalam beberapa kasus, informasi mungkin tersedia dari studi yang dilakukan selama pengembangan metode internal.
Investigasi reproduktifitas intra-laboratorium, menurut sifatnya, memperhitungkan beberapa aspek kekasaran metode.
Pengujian ketangguhan dapat dilakukan dengan mempertimbangkan setiap efek secara terpisah, dengan mengulangi
pengukuran setelah memvariasikan parameter tertentu dengan jumlah yang kecil dan mengendalikan kondisi lain secara tepat
(pengujian variabel tunggal). Namun, ini bisa menjadi padat karya karena sejumlah besar efek mungkin perlu
dipertimbangkan. Desain eksperimental tersedia, yang memungkinkan beberapa faktor independen untuk diperiksa secara
bersamaan. Hibbert (2007) menjelaskan desain eksperimental Plackett-Burman yang memberikan pendekatan yang ekonomis
dan efisien dimana (4n-1) variabel dievaluasi dengan melakukan hanya 4nanalisis. Kedua pendekatan mengasumsikan
independensi efek.
Dalam praktiknya, seorang analis yang berpengalaman akan dapat mengidentifikasi parameter metode tersebut dengan potensi untuk
mempengaruhi hasil dan memperkenalkan kontrol, misalnya batas yang ditentukan untuk rentang suhu, waktu atau pH, untuk menjaga dari efek
tersebut.
3.7 Ketidakpastian Pengukuran

Ketidakpastian Pengukuran (MU) adalah properti dari hasil pengukuran, bukan metode. Namun, jika suatu metode
berada di bawah kendali statistik yang memadai, perkiraan indikatif MU dari hasil pengukuran tipikal dapat dikutip.
MU didefinisikan sebagai parameter, yang terkait dengan hasil pengukuran, yang mencirikan dispersi nilai yang
secara wajar dapat dikaitkan dengan besaran ukur (JCGM200, 2008). Pengetahuan tentang UM diperlukan untuk
perbandingan pengukuran yang efektif dan untuk perbandingan pengukuran dengan batas spesifikasi. ISO/IEC
17025 dan ISO 15189 mensyaratkan bahwa fasilitas memperkirakan dan, jika berlaku, melaporkan UM terkait
dengan hasil. Oleh karena itu, estimasi UM dapat dianggap sebagai persyaratan penting validasi metode.
Banyak referensi tersedia yang menyajikan pendekatan yang berbeda untuk estimasi UM, dan karenanya UM tidak
dibahas panjang lebar dalam dokumen ini. ISO telah menerbitkan pedoman estimasi MU (ISO/IEC Guide 98-3, 2008) dan
dokumen interpretatif oleh Eurachem/CITAC menjelaskan bagaimana mereka dapat diterapkan pada pengukuran
analitis (Eurochem/CITAC, 2000). Dokumen-dokumen ini sekarang telah dilengkapi dengan pedoman dan contoh dari
sejumlah sumber lain (UKAS, 2000; ILAC, 2002; APLAC, 2003; Magnusson et al., 2003; ISO/TS, 2004; Nordtest, 2005;
Eurolab, 2007) bertujuan untuk menyediakan fasilitas dengan contoh yang lebih praktis dan pendekatan yang lebih
sederhana yang dapat digunakan untuk menghitung perkiraan UM yang wajar. Contoh yang sangat baik juga tersedia
dari situs web www.measurementuncertainty.org.
Informasi yang diperoleh dari aspek lain dari validasi metode, seperti dijelaskan di atas, dapat memberikan
kontribusi yang besar terhadap anggaran ketidakpastian pengukuran (tetapi komponen lain juga harus
dinilai). Data ini dapat dilengkapi dengan data dari pemeriksaan QC reguler setelah metode tersebut
beroperasi dan data yang dihasilkan dari partisipasi dalam uji coba uji profisiensi yang relevan. Estimasi
juga dapat didasarkan pada, atau sebagian didasarkan pada, data yang dipublikasikan dan penilaian
profesional. Seperti semua aspek validasi metode, perkiraan UM harus sesuai dengan tujuan. Kekakuan
yang diperlukan untuk perkiraan akan bervariasi sesuai dengan alasan pengujian; prinsipnya adalah bahwa
perkiraan harus masuk akal untuk tujuan yang dimaksudkan. Perkiraan MU yang masuk akal dapat
diperoleh dari pertimbangan presisi jangka panjang (reproduksibilitas intra-laboratorium) dan bias.

3.8 Ringkasan
Tabel di bawah ini merangkum karakteristik kinerja yang harus dipertimbangkan ketika merencanakan
validasi metode dan investigasi verifikasi metode untuk metode kuantitatif dan kualitatif dan juga
menyertakan catatan singkat tentang bagaimana setiap karakteristik kinerja dapat ditentukan.
Validasi Verifikasi
Karakteristik yang akan dievaluasi Kuantitatif Kualitatif Kuantitatif Kualitatif
metode metode metode metode
Batas deteksi* dan
kuantitasi - - - -
Kepekaan - - - -
Selektivitas - - - -
Rentang di mana persamaan
kalibrasi berlaku (linier - - - -
kalibrasi)
Interval pengukuran
- - - -
Efek matriks - - - -
Kebenaran; bias - - - -
Presisi (pengulangan dan
reproduktifitas) / Akurasi - - - -
Kekasaran - - - -
Ketidakpastian Pengukuran (MU)
- - (1) -
* Diperlukan untuk metode yang dimaksudkan untuk mengukur analit pada konsentrasi mendekati nol
- Menandakan bahwa karakteristik ini biasanya dievaluasi
- Menandakan bahwa karakteristik ini biasanya tidak dievaluasi
(1) Jika metode pengujian yang dikenal baik menentukan batas nilai sumber utama UM dan bentuk
penyajian hasil yang dihitung, fasilitas dianggap telah memenuhi persyaratan ISO/IEC 17025 atau
ISO 15189.
Karakteristik yang akan dievaluasi Prosedur yang dapat diikuti
Batas deteksi dan Analisis ulangan pada beberapa konsentrasi termasuk konsentrasi yang mendekati nol
kuantitasi (metode grafis), atau analisis ulangan pada konsentrasi yang diperkirakan sama dengan
dua kali LOQ (metode statistik). Gunakan blanko dan rentang standar atau sampel yang
mengandung analit dengan konsentrasi rendah (terjadi secara alami atau terkontaminasi
buatan). Penentuan terpisah mungkin diperlukan untuk matriks yang berbeda.
Kepekaan Analisis sampel atau standar yang dibubuhi atau terkontaminasi artifisial yang disiapkan dalam
larutan ekstrak sampel. Pemeriksaan awal untuk gradien yang memuaskan untuk plot respon vs
konsentrasi. (Lebih tepatnya masalah QC setelah pemeriksaan awal).
Selektivitas Analisis blanko reagen dan matriks, standar dan sampel matriks yang dibubuhi
standar (dalam rentang kerja) yang telah ditambahkan konsentrasi zat
pengganggu yang diketahui.
Rentang di mana persamaan Pengukuran duplikat standar ditempatkan secara merata di atas rentang
kalibrasi berlaku (linier konsentrasi sampel yang diharapkan.
kalibrasi)
Interval pengukuran Evaluasi bias dan kemungkinan penentuan LOQ
Efek matriks Analisis blanko matriks atau matriks yang dibubuhi standar (minimal satu kali atau rangkap
dua pada masing-masing 3 konsentrasi pada setiap jenis matriks sampel).
Kebenaran; bias Analisis ulangan. Sampel referensi harus matriks dan konsentrasi yang sesuai
dengan sampel.

Karakteristik yang akan dievaluasi Prosedur yang dapat diikuti
Presisi (pengulangan dan Analisis duplikat untuk setiap jenis matriks sampel (jika mungkin dipilih untuk mengandung analit
reproduktifitas) / Akurasi pada konsentrasi yang paling relevan bagi pengguna hasil pengujian) di bawah kondisi yang
ditetapkan. Untuk membandingkan presisi dari dua metode, F-test direkomendasikan. Untuk
akurasi, bandingkan nilai sebenarnya dari setiap campuran vs. hasil yang diukur.
Kekasaran Perkenalkan batasan yang sesuai untuk parameter metode yang mungkin berdampak pada hasil jika
tidak dikontrol dengan hati-hati. Selidiki jika perlu:
saya) pengujian variabel tunggal (pengujian dan pengujian ulang dengan perubahan kecil pada satu
parameter metode);
ii) tes multi variabel (percobaan yang dirancang Plackett-Burman).
Ketidakpastian Pengukuran (MU) Hitung perkiraan MU yang masuk akal dan sesuai dengan tujuan. Pastikan perkiraan
selaras dengan konsentrasi yang paling relevan bagi pengguna hasil.
Tidak semua parameter perlu dinilai untuk semua metode. Kekakuan validasi harus cukup untuk memastikan bahwa hasil
pengujian yang dihasilkan oleh suatu metode secara teknis baik dan akan memenuhi kebutuhan klien. Studi validasi metode
yang direncanakan dengan baik akan didasarkan pada pemahaman yang jelas tentang persyaratan khusus untuk metode yang
digunakan. Dalam kerangka ini, eksperimen yang dirancang dengan cermat akan memberikan informasi untuk memenuhi lebih
dari satu parameter.
Fasilitas perlu menyimpan catatan validasi metode yang komprehensif, termasuk prosedur yang digunakan
untuk validasi, hasil yang diperoleh dan pernyataan apakah metode tersebut sesuai dengan tujuan.
Fasilitas juga harus terus memeriksa bahwa metode analisis memenuhi nilai karakteristik kinerja yang
didokumentasikan sehubungan dengan validasi. Hal ini dapat dicapai dengan misalnya melacak perilaku sampel
kontrol kualitas internal dari waktu ke waktu. Jika metode tidak lagi menghasilkan hasil yang konsisten dengan data
validasi asli, metode tersebut dapat dianggap tidak sesuai dengan tujuan yang dimaksudkan.
4. Validasi metode non-rutin

Seringkali, metode khusus digunakan hanya untuk beberapa analisis sampel. Pertanyaan harus diajukan apakah
metode ini juga perlu divalidasi dengan menggunakan kriteria yang sama seperti yang direkomendasikan untuk
analisis rutin. Dalam hal ini, validasi mungkin memakan waktu lebih lama daripada analisis sampel dan dapat
dianggap tidak efisien, karena biaya per sampel akan meningkat secara signifikan. Jawabannya cukup sederhana:
Analisis apa pun bermanfaat hanya jika datanya cukup akurat; jika tidak, analisis sampel tidak ada gunanya.
Kesesuaian metode analisis untuk tujuan penggunaannya merupakan prasyarat untuk memperoleh data yang akurat;
oleh karena itu, hanya metode yang divalidasi yang harus digunakan untuk memperoleh data yang bermakna.
Namun, tergantung pada situasinya, upaya validasi dapat dikurangi untuk metode non-rutin. Eurachem/CITAC
Panduan untuk kualitas dalam kimia analitik: Bantuan untuk akreditasi(2002) termasuk bab tentang bagaimana
memperlakukan metode non-rutin. Rekomendasinya adalah untuk mengurangi biaya validasi dengan menggunakan
metode generik, misalnya metode yang dapat diterapkan secara luas. Metode generik dapat, misalnya, didasarkan
pada kromatografi gas kapiler atau pada HPLC gradien fase terbalik. Dengan sedikit atau tanpa modifikasi, metode ini
dapat diterapkan pada sejumlah besar sampel. Parameter kinerja harus divalidasi pada sampel tipikal yang dicirikan
oleh matriks sampel, jenis senyawa dan rentang konsentrasi.
Jika, misalnya, senyawa baru dengan struktur serupa dalam matriks yang sama akan dianalisis, validasi hanya memerlukan
beberapa eksperimen kunci. Dokumentasi metode generik tersebut harus dirancang untuk dengan mudah mengakomodasi
perubahan kecil yang berkaitan dengan langkah-langkah individu, seperti persiapan sampel, analisis sampel atau evaluasi data.
Prosedur operasi metode harus menentukan pemeriksaan yang perlu dilakukan untuk analit baru untuk menetapkan
bahwa analisis tersebut valid. Dokumentasi terperinci dari semua parameter eksperimental penting untuk memastikan
bahwa pekerjaan dapat diulang dengan cara yang persis sama di kemudian hari.
5. Validasi dan verifikasi metode subjektif

Menurut ISO/IEC 17025 semua prosedur teknis yang digunakan oleh fasilitas harus sepenuhnya divalidasi atau diverifikasi
sebelum digunakan. Persyaratan ini tidak hanya berlaku untuk metode analitis tetapi juga untuk metode yang hasilnya
didasarkan pada keputusan interpretatif atau tingkat subjektivitas (misalnya tulisan tangan, senjata api dan analisis audio di
laboratorium forensik, identifikasi mikroskopis, metode pengujian non-destruktif, pengujian mekanis metode, dll). Pedoman ini
dimaksudkan untuk memberikan tingkat konsistensi, keandalan, dan harmonisasi untuk

validasi dan verifikasi tidak hanya metode analitis seperti yang tercakup dalam bagian 2 dan 3 dokumen ini
tetapi juga untuk metode pengujian berdasarkan keputusan interpretatif (yaitu metode pengujian subjektif).
Metode tes subjektif adalah salah satu di mana pengalaman dan keahlian analis atau penguji merupakan
penentu yang signifikan apakah sampel atau item tes dikatakan memenuhi kriteria tertentu atau tidak.
Penilaian didasarkan pada data kualitatif dan keahlian individu dalam menafsirkan informasi tersebut. Validasi
metode tersebut lebih menantang dan kurang proscriptive daripada untuk pengukuran analitik.
Parameter validasi seperti linearitas atau batas deteksi tidak relevan dalam tes subjektif. Presisi dan akurasi
bisa jadi relevan dan mungkin perlu dipertimbangkan.
Parameter yang harus diperhatikan adalah:
- Pengulangan / reproduktifitas; dan

- Probabilitas deteksi dan/atau potensi tingkat kesalahan.*lihat catatan 1 di bawah ini
Tindakan mitigasi atau pengendalian berikut mungkin juga relevan:
- Analisis kritis (atau risiko);

- Latihan kolaboratif seperti pengujian perbandingan antar dan intra-laboratorium;*lihat catatan 2 di bawah ini
- Kontrol kualitas;
- Tingkat kompetensi staf yang terlibat; dan
- Tingkat penerimaan metode pengujian.
Pertanyaan-pertanyaan berikut juga harus dipertimbangkan:
Apakah teknik tersebut telah diuji dalam kondisi jenis aktivitas aktual (dan bukan hanya di fasilitas), jika dapat diterapkan? Dapatkah
probabilitas deteksi dan tingkat kesalahan diestimasi dengan andal?
* Catatan 1: Fasilitas mungkin tidak memiliki saranaandalmemperkirakan kemungkinan deteksi atau potensi tingkat
kesalahan untuk metode interpretatif/komparatif. Hal ini disebabkan pengaruh pemeriksa individu pada parameter
ini.
* Catatan 2: Perbandingan antar-laboratorium dapat menyebabkan meningkatnya ketidakpastian.
Parameter Validasi
5.1 Pengulangan / reproduktifitas (yaitu keandalan)

Metode tes subjektif dapat dikatakan valid jika analis atau pemeriksa berulang kali memperoleh hasil yang benar
untuk tes yang diketahui positif dan negatif. Bukti pengulangan dapat mencakup penyediaan bukti:
- Tingkat kesepakatan antara dua analis atau pemeriksa yang berbeda yang telah menilai bukti kinerja yang sama
untuk metode tertentu (yaitu keandalan antar-analis atau pemeriksa); atau
- Tingkat persetujuan dari analis atau pemeriksa yang sama yang telah menilai bukti kinerja yang sama
tetapi pada waktu yang berbeda (yaitu keandalan intra-analis atau pemeriksa).
Bentuk reliabilitas lain yang harus dipertimbangkan termasuk konsistensi internal suatu tes (yaitu
reliabilitas internal) serta kesetaraan tes penilaian alternatif (yaitu bentuk paralel).
5.2 Probabilitas deteksi dan/atau potensi tingkat kesalahan

Ketika memvalidasi atau memverifikasi metode uji kualitatif subjektif, probabilitas deteksi (POD) dan potensi tingkat
kesalahan perlu dipertimbangkan. Selain POD dan potensi tingkat kesalahan, sensitivitas dan selektivitas juga
diidentifikasi sebagai karakteristik kinerja penting dalam validasi metode identitas kualitatif. POD dan tingkat kesalahan
potensial dinyatakan sebagai persentase. POD adalah kemungkinan bahwa metodologi pengujian akan mengidentifikasi
pengukuran dengan benar. Penentuan empiris POD untuk situasi baru tidak selalu praktis karena kurangnya waktu,
benda uji dan sumber daya terbatas lainnya. Model fisik dapat memberikan alternatif yang berguna untuk penentuan
empiris untuk mengukur POD dalam situasi ketika data terbatas tetapi mungkin tidak memperhitungkan semua faktor
dan sumber variabilitas. Metode statistik dapat digunakan untuk mengukur dan menyesuaikan bias sistematis dan
sumber variabilitas yang tidak diperhitungkan dalam model fisik. Oleh karena itu, menggabungkan model fisik dengan
penyesuaian empiris memiliki potensi untuk memberikan metodologi yang bisa diterapkan.

Tingkat kesalahan potensial, yang sering ditentukan melalui partisipasi dalam studi pengujian kecakapan, juga
dikenal sebagai "tingkat kepercayaan" dari uji hipotesis dan sebagai tingkat signifikansi statistik dari hasil
pengujian. Ini tidak memiliki definisi yang seragam. Ini bisa berarti tingkat positif palsu, yang merupakan
persentase positif palsu dibagi dengan kombinasi negatif benar dan positif palsu; persentase positif palsu, yaitu
persentase positif palsu dibagi dengan kombinasi positif benar dan positif palsu; atau sejumlah kemungkinan
berbeda yang mungkin sangat bervariasi bahkan dalam satu sampel.
Tindakan Kontrol
5.3 Analisis kritis (atau risiko)

Analisis kritis (atau analisis risiko) perlu dilakukan. Ini termasuk identifikasi kemungkinan sumber
kesalahan dan variasi proses. Setelah sumber diidentifikasi, dampaknya terhadap proses perlu dievaluasi.
Probabilitas deteksi (POD), kemungkinan terjadinya masalah (O), dan gravitasi dari konsekuensi yang
dihasilkan (G) dievaluasi. Parameter kritis (C) kemudian dapat dihitung (C=POD*O*G), dan mewakili ukuran
kuantitatif dari kekritisan setiap kemungkinan sumber ketidaksesuaian. Solusi yang tepat dapat diusulkan
untuk setiap sumber yang mungkin diidentifikasi untuk mengurangi kritis (C) ke tingkat yang dapat
diterima, baik dengan meningkatkan deteksi masalah (dan mengurangi faktor POD) dan/atau mengurangi
kemungkinan terjadinya masalah (dan mengurangi faktor HAI).
5.4 Latihan kolaboratif

Partisipasi dalam latihan kolaboratif seperti pengujian perbandingan intra dan antar laboratorium penting untuk
menentukan batasan metode. Ini juga merupakan sumber penting dari penentuan tingkat kesalahan.
5.5 Kontrol kualitas

Setiap tes subjektif harus memiliki prosedur kontrol kualitas yang dibangun. Metode pengujian harus mencakup
prosedur untuk memasukkan kontrol negatif dan positif bila memungkinkan. Misalnya, hasil tes subjektif dapat
diperiksa oleh analis lain yang kompeten jika memungkinkan. Pemeriksaan harus dilakukan tanpa akses ke
pendapat analis pertama. Hasil pemeriksaan tersebut dapat disusun untuk menunjukkan keandalan metode.
Namun demikian, kehati-hatian harus diberikan karena keandalan dapat dipengaruhi oleh keahlian analis.
5.6 Kompetensi staf

Tujuan sebenarnya dari validasi metode subjektif adalah untuk memverifikasi kemungkinan memperoleh hasil yang benar
dengan menggunakan tes yang bersangkutan. Tes subjektif pada dasarnya adalah evaluasi kualitatif. Keahlian analis adalah
komponen penting. Oleh karena itu validasi harus sangat bergantung pada pengujian keahlian pemeriksa. Diperlukan verifikasi
kompetensi yang berkelanjutan.
5.7 Tingkat penerimaan metode pengujian

Metode pengujian yang mapan dan diterima mungkin tidak selalu memerlukan tingkat validasi atau verifikasi metode
yang sama. Pertimbangan yang relevan mungkin termasuk apakah teknik tersebut telah ditinjau oleh rekan sejawat
dan diterbitkan dalam jurnal yang diakui. Ada atau tidaknya standar untuk pengendalian operasi teknik dan apakah
teknik tersebut telah diterima secara umum dalam komunitas ilmiah yang relevan.

6. Daftar istilah
Akurasi, Akurasi Pengukuran, Akurasi Pengukuran-Kedekatan kesesuaian antara nilai besaran yang
diukur dengan nilai besaran yang sebenarnya dari suatu besaran ukur (JCGM200:2008).
analit -Komponen sampel atau benda uji yang mewujudkan suatu kuantitas atau kualitas yang pada akhirnya
ditentukan secara langsung atau tidak langsung. Istilah 'analit' dalam dokumen ini digunakan untuk setiap zat atau
bahan yang akan dianalisis (misalnya komponen darah, unsur kimia, mikroorganisme, dll).
Bias, Bias Pengukuran -Perkiraan kesalahan pengukuran sistematis (JCGM200:2008).
Tes Klasifikasi Biner -Apakah tugas mengklasifikasikan anggota dari sekumpulan objek yang diberikan menjadi dua kelompok
berdasarkan apakah mereka memiliki beberapa properti atau tidak (misalnya diterapkan pada pengujian medis, tes klasifikasi
biner digunakan untuk menentukan apakah pasien memiliki penyakit tertentu atau tidak - properti klasifikasi adalah penyakit).
Dapat juga disebut sebagai tes ada/tidaknya, atau tes positif/negatif.
Kosong-Nilai blanko diperoleh sebagai hasil analisis spesimen yang sejauh mungkin tidak mengandung analit
yang bersangkutan. Penggunaan berbagai jenis blanko (yang tidak ditambahkan analit) memungkinkan
penilaian seberapa banyak respons instrumen yang diukur disebabkan oleh analit dan seberapa banyak
disebabkan oleh penyebab lainnya. Berbagai jenis blanko tersedia untuk pengguna:Reagen kosong: Reagen
yang digunakan selama proses analitis (termasuk pelarut yang digunakan untuk ekstraksi atau pelarutan)
dianalisis secara terpisah untuk melihat apakah mereka berkontribusi pada sinyal pengukuran. Hasil
pengukuran yang timbul dari analit kemudian dapat dikoreksi.Sampel kosong. Ini pada dasarnya adalah matriks
tanpa analit. Mereka mungkin sulit diperoleh tetapi bahan tersebut memberikan perkiraan terbaik dari efek
gangguan yang akan dihadapi dalam analisis sampel uji (Eurachem, 1998).
Kalibrasi-Operasi yang, dalam kondisi tertentu pada langkah pertama, menetapkan hubungan antara nilai
kuantitas dengan ketidakpastian pengukuran yang disediakan oleh standar pengukuran dan indikasi yang sesuai
dengan ketidakpastian pengukuran terkait dan, pada langkah kedua, menggunakan informasi ini untuk
menetapkan hubungan untuk memperoleh pengukuran hasil dari suatu indikasi. Kalibrasi dapat dinyatakan
dengan pernyataan, fungsi kalibrasi, diagram kalibrasi, kurva kalibrasi, atau tabel kalibrasi. Dalam beberapa
kasus, ini mungkin terdiri dari koreksi aditif atau perkalian indikasi dengan ketidakpastian pengukuran terkait.
Kalibrasi tidak boleh disamakan dengan penyesuaian sistem pengukuran, yang sering keliru disebut "kalibrasi
sendiri", atau dengan verifikasi kalibrasi (JCGM200:2008).
Bahan Referensi Bersertifikat-Bahan referensi, disertai dengan dokumentasi yang dikeluarkan oleh badan yang
berwenang dan memberikan satu atau lebih nilai properti tertentu dengan ketidakpastian dan ketertelusuran terkait,
dengan menggunakan prosedur yang valid (JCGM200:2008).
Derajat kebebasan-Jumlah penentuan independen (perkiraan) dari besaran statistik tertentu (misalnya
mean atau standar deviasi) yang dapat dilakukan atas dasar kumpulan data yang diberikan.
Fasilitas -Diakui bahwa tidak semua kegiatan pengujian atau kalibrasi dilakukan di 'laboratorium'. Oleh karena
itu, istilah 'fasilitas' dan 'laboratorium' digunakan secara bergantian di seluruh dokumen ini.
Negatif Palsu -Hasil negatif dari tes klasifikasi biner ketika hasil sebenarnya positif.
Positif Palsu -Hasil positif dari tes klasifikasi biner ketika hasil sebenarnya negatif.
Kebugaran untuk Tujuan-Sejauh mana data yang dihasilkan oleh proses pengukuran memungkinkan pengguna untuk membuat
keputusan yang benar secara teknis dan administratif untuk tujuan yang dinyatakan (IUPAC, 2000).
Sampel yang Diperkuat -Sampel yang terkontaminasi artifisial yang telah ditambahkan konsentrasi analit yang
diketahui (juga dikenal sebagai aberduriSampel). Digunakan untuk menguji akurasi (terutama efisiensipemulihan) dari
metode analitik.
Standar emas -Istilah yang sering digunakan dalam jenis pengujian aktivitas medis dan veteriner. Mengacu pada
metode tes diagnostik atau tolok ukur yang dianggap definitif. (MelihatMetode Standardefinisi).
Batas Deteksi-Nilai kuantitas terukur, diperoleh dengan prosedur pengukuran tertentu, di mana probabilitas
salah mengklaim tidak adanya komponen dalam bahan adalah-, diberi peluang-palsu mengklaim kehadirannya
(JCGM200:2008).Catatan: IUPAC merekomendasikan nilai default untuk - dan - sama dengan 0,05.

Batas Kuantitas, Batas Penentuan-Mengacu pada konsentrasi atau massa analit terkecil, yang dapat
dianalisis secara kuantitatif dengan keandalan yang wajar dengan prosedur tertentu.
Presisi Menengah, Presisi Pengukuran Menengah-Presisi pengukuran di bawah serangkaian kondisi

presisi menengah (JCGM200:2008).
Kondisi Pengukuran Presisi Menengah, Kondisi Presisi Menengah-Kondisi pengukuran, dari serangkaian
kondisi yang mencakup prosedur pengukuran yang sama, lokasi yang sama, dan pengukuran yang berulang
pada objek yang sama atau serupa selama periode waktu yang diperpanjang, tetapi dapat mencakup kondisi lain
yang melibatkan perubahan (JCGM200:2008).
Matriks-Bahan, komponen atau substrat dominan yang mengandung analit yang diinginkan.
Efek Matriks-Perubahan atau interferensi langsung atau tidak langsung sebagai respons karena adanya analit
yang tidak diinginkan (untuk analisis) atau zat pengganggu lainnya dalam sampel.
Verifikasi Matriks-Ketika fasilitas perlu menerapkan metode standar atau metode peer review untuk
matriks yang secara umum berbeda dari cakupan metode yang awalnya dimaksudkan, perlu untuk
memverifikasi metode ini sesuai untuk matriks baru. Pertimbangan harus diberikan pada properti matriks
baru sebelum protokol validasi dilakukan. Misalnya, sifat sifat fisik matriks atau keberadaan agen biostatik,
yang dapat mempengaruhi pemulihan determinan, harus dipertimbangkan dan tindakan yang tepat harus
diambil.
mengukur-kuantitas yang ingin diukur (JCGM200:2008).
Ketidakpastian Pengukuran-Parameter non-negatif yang mencirikan dispersi nilai kuantitas yang dikaitkan
dengan besaran ukur, berdasarkan informasi yang digunakan (JCGM200:2008).
Interval pengukuran, interval kerja-Himpunan nilai kuantitas dari jenis yang sama yang dapat diukur dengan alat
ukur tertentu atau sistem pengukuran dengan ketidakpastian instrumental tertentu, di bawah kondisi yang ditentukan
(JCGM200:2008).Catatan: Batas bawah interval pengukuran tidak boleh disamakan dengan batas deteksi.
Validasi Metode-Proses penetapan karakteristik kinerja dan batasan metode dan identifikasi pengaruh
yang dapat mengubah karakteristik ini dan sejauh mana. Analit mana yang dapat ditentukan di matriks
mana dengan adanya interferensi mana? Dalam kondisi ini tingkat presisi dan akurasi apa yang dapat
dicapai? Proses untuk memverifikasi bahwa suatu metode sesuai dengan tujuan; yaitu untuk penggunaan
pemecahan masalah analitis tertentu (Eurachem, 1998).
Verifikasi Metode-Ketika akreditasi pertama kali dicari untuk metode standar, data verifikasi harus dihasilkan.
(Jika versi baru dari metode standar diperkenalkan, modul pelatihan diperlukan. Lihat Lampiran 1). Verifikasi
adalah proses mendemonstrasikan kriteria kinerja yang termasuk dalam metode yang dapat dipenuhi oleh
fasilitas sebelum memperkenalkannya untuk penggunaan rutin.
Pengujian Mikrobiologi -Istilah 'pengujian mikrobiologis' yang dirujuk dalam isi dokumen ini mencakup
pengujian sampel untuk mikroorganisme dan dapat diterapkan pada berbagai tingkat untuk jenis kegiatan
berikut (misalnya Agribisnis, Kesehatan Hewan, Lingkungan, Makanan dan Minuman, Patologi Manusia dan
Hukum).
Platform -Istilah 'platform' biasanya mengacu pada sistem operasi komputer. Istilah ini sering digunakan ketika mengacu pada
jenis sistem komputer apa yang akan dijalankan oleh program perangkat lunak tertentu.
Nilai Prediktif Positif dan Negatif -Istilah 'nilai prediksi positif dan negatif' sering diterapkan pada tes klasifikasi
biner diagnostik dan mengacu pada tingkat presisi. Misalnya,nilai prediksi positif(rasio positif benar untuk
gabungan positif benar dan palsu) adalah proporsi pasien dengan hasil tes positif yang didiagnosis dengan
benar. Ini adalah ukuran paling penting dari metode diagnostik karena mencerminkan probabilitas bahwa tes
positif mencerminkan kondisi mendasar yang sedang diuji. Itu nilai prediksi negatifadalah proporsi pasien
dengan hasil tes negatif yang didiagnosis dengan benar (rasio negatif sejati dengan gabungan negatif benar dan
negatif palsu).
Presisi, Pengukuran Presisi-Kedekatan kesepakatan antara indikasi atau nilai kuantitas terukur yang
diperoleh dengan pengukuran berulang pada objek yang sama atau serupa dalam kondisi tertentu.

Presisi pengukuran digunakan untuk mendefinisikan keterulangan pengukuran, presisi pengukuran menengah, dan
reproduktifitas pengukuran (JCGM200:2008).
Strain murni-Strain murni mengacu pada keturunan dari isolasi tunggal dalam budaya murni dan biasanya terdiri
dari suksesi budaya yang akhirnya berasal dari satu koloni. SEBUAHbudaya murniadalah kultur sel atau organisme
multiseluler yang tumbuh tanpa adanya spesies atau jenis lain. Kultur murni dapat berasal dari sel tunggal atau
organisme tunggal, dalam hal ini sel-sel tersebut merupakan klon genetik satu sama lain.
Hasil tes kualitatif-Hasil tes yang tidak diturunkan secara numerik (misalnya pemeriksaan visual atautes
klasifikasi binerseperti ketidakhadiran/kehadiran, positif/negatif, reaktif/non-reaktif, dll). Hasil tes kualitatif
berdasarkan hasil numerik, misalnya berdasarkan ambang batas, sering digambarkan sebagai semikuantitatif
atau semi kualitatif dan diharapkan validasi atau verifikasi metode sesuai dengan prosedur kuantitatif.
Hasil tes kuantitatif-Hasil tes yang diturunkan secara numerik.
Pemulihan-Efisiensi ekstraksi dari proses analitis, dilaporkan sebagai (persentase) jumlah analit yang diketahui
yang dibawa melalui ekstraksi sampel dan langkah-langkah pemrosesan dari metode tersebut.
Materi referensi-Bahan, cukup homogen dan stabil dengan mengacu pada sifat-sifat tertentu, yang telah
ditetapkan agar sesuai dengan tujuan penggunaannya dalam pengukuran sifat nominal (JCGM200:2008).
Deviasi Standar Relatif- (RSD atau %RSD) adalah nilai absolut dari koefisien variasi (s/x).Hal ini sering
dinyatakan sebagai persentase. Istilah serupa yang kadang-kadang digunakan adalah varians relatif yang
merupakan kuadrat dari koefisien variasi. Simpangan baku relatif banyak digunakan untuk menyatakan presisi
dan pengulangan.
Pengulangan, Pengulangan Pengukuran-Pengukuran presisi di bawah serangkaian kondisi pengulangan

pengukuran (JCGM200:2008).
Kondisi Pengulangan Pengukuran, Kondisi Pengulangan-Kondisi pengukuran, dari serangkaian kondisi yang
mencakup prosedur pengukuran yang sama, operator yang sama, sistem pengukuran yang sama, kondisi
operasi yang sama, dan lokasi yang sama, dan pengulangan pengukuran pada objek yang sama atau serupa
dalam waktu singkat. Pengukuran presisi di bawah serangkaian kondisi pengulangan pengukuran
(JCGM200:2008).
Reproduksibilitas, Reproduksibilitas Pengukuran-Pengukuran presisi di bawah kondisi reproduktifitas

pengukuran (JCGM200:2008).
Kondisi Reproduksibilitas Pengukuran, Kondisi Reproduktifitas-Kondisi pengukuran, dari serangkaian

kondisi yang mencakup operator yang berbeda, sistem pengukuran, lokasi, dan pengukuran ulangan pada
objek yang sama atau serupa (JCGM200:2008).
Kekasaran/Kekokohan-Tingkat kemandirian metode analisis dari penyimpangan kecil dalam kondisi

eksperimental metode analisis.
Selektivitas, Selektivitas Sistem Pengukuran-Sifat sistem pengukuran, yang digunakan dengan prosedur
pengukuran tertentu, yang memberikan nilai besaran terukur untuk satu atau lebih besaran besaran
sedemikian rupa sehingga nilai setiap besaran besaran tidak bergantung pada besaran lain atau besaran lain
dalam fenomena, benda, atau zat yang diselidiki ( JCGM200:2008).
Sensitivitas, Sensitivitas Sistem Pengukuran-Hasil bagi perubahan indikasi sistem pengukuran dan
perubahan yang sesuai dalam nilai besaran yang diukur (JCGM200:2008).
Stabilitas-Stabilitas (kimia) analit dalam matriks tertentu di bawah kondisi tertentu untuk interval waktu
tertentu.
Standar Deviasi-Sebuah ukuran bagaimana nilai-nilai tersebar tentang rata-rata dalam distribusi nilai.
Simpangan baku - untuk seluruh populasi darinnilai diberikan oleh:

n
-(x -) 2
saya -
- - saya-1
n
Dalam praktiknya, kami biasanya menganalisis sampel statistik dan bukan seluruh populasi. Standar deviasisuntuk sampel yang
dipilih secara acak diberikan oleh:
n
-(x-xsaya
) 2
s- saya-1
n-1
Metode Standar-Menurut British Standards Institution, standar adalah publikasi: "spesifikasi yang
menetapkan bahasa umum, dan berisi spesifikasi teknis atau kriteria tepat lainnya dan dirancang untuk
digunakan secara konsisten, sebagai aturan, pedoman, atau definisi". (MelihatStandar emasdefinisi).
Ketidakpastian Pengukuran Target-Ketidakpastian pengukuran ditetapkan sebagai batas atas dan diputuskan
berdasarkan tujuan penggunaan hasil pengukuran (JCGM200:2008). Merupakan ketidakpastian terbesar yang
diizinkan untuk penggunaan tertentu dari hasil itu.
Metode Tes -Kumpulan prosedur dan teknik untuk melakukan suatu aktivitas. Istilah 'metode pengujian' dan 'prosedur'
digunakan secara bergantian di seluruh dokumen ini dan berlaku untuk semua metode pengujian termasuk prosedur
pemeriksaan, seperti pemeriksaan sidik jari, dan tinjauan.
Modul Pelatihan -Istilah modul pelatihan mengacu pada tindakan yang harus diambil ketika versi baru dari
metode yang fasilitasnya saat ini terakreditasi diperkenalkan. Modul pelatihan mengharuskan staf untuk diberi
tahu tentang perubahan dalam versi baru metode dan untuk ini dicatat dalam catatan pelatihan staf. Modul
pelatihan mempertimbangkan kompetensi staf fasilitas untuk melakukan teknik dan keakraban dengan misalnya
organisme target.
Kebenaran, Kebenaran Pengukuran, Kebenaran Pengukuran-Kedekatan kesepakatan antara rata-rata
jumlah tak terbatas dari nilai kuantitas terukur ulangan dan nilai referensi (JCGM200:2008).
Benar Negatif -Hasil negatif dari tes klasifikasi biner ketika hasil sebenarnya negatif.
Benar Positif -Hasil positif dari tes klasifikasi biner ketika hasil sebenarnya positif.
Validasi-Konfirmasi melalui pemeriksaan dan penyediaan bukti objektif bahwa persyaratan khusus untuk penggunaan
yang dimaksudkan telah dipenuhi (ISO 9000:2005). (MelihatValidasi Metodedefinisi). Validasi komparatifbertujuan
untuk menunjukkan kinerja yang setara antara dua (atau lebih) metode. Tidak ada tes tunggal untuk menetapkan
kesetaraan metode atau kriteria penerimaan numerik untuk itu. Umumnya, metode dengan sensitivitas terbesar atau
pemulihan tertinggi untuk mikroorganisme/analit target adalah yang terbaik. Untuk situasi di mana validasi
komparatif tidak dapat diterapkan (misalnya penggunaan matriks yang secara signifikan berbeda dengan yang
ditentukan dalam ruang lingkup metode atau penggunaan prinsip isolasi atau deteksi alternatif),validasi utamaharus
dilakukan sebelum memperkenalkan metode. Dalam kasus seperti itu, validasi menjadi proses eksplorasi dengan
tujuan menetapkan batasan operasional dan karakteristik kinerja dari metode alternatif, baru atau metode yang tidak
dicirikan secara memadai. Ini harus menghasilkan spesifikasi numerik dan deskriptif untuk kinerja metode.
Verifikasi-Konfirmasi melalui pemeriksaan dan penyediaan bukti objektif bahwa persyaratan tertentu
telah dipenuhi (ISO 9000:2005).

7. Referensi
bengkel AOAC,Pedoman untuk validasi laboratorium tunggal (SLV) metode kimia untuk logam dalam makanan,
www.flworkshop.com/metals/AOAC%20SLV%20Metals%20protocol.doc
AOAC Internasional (2002),Pedoman komite metode AOAC Internasional untuk validasi kualitatif
dan metode dan analisis resmi mikrobiologi makanan kuantitatif, Manual Program OMA,
www.aoac.org
AOAC Internasional (2007),Bagaimana memenuhi persyaratan ISO/IEC 17025 untuk verifikasi metode, ALACC
Panduan, www.aoac.org/alacc_guide_2008.pdf.
AS 2850 (1986),Analisis kimia-program uji antar laboratorium untuk menentukan presisi analisis
metode(s)-Panduan untuk perencanaan dan pelaksanaan.
AS/NZS 4659 (Bagian 1-4),Panduan penentuan ekivalensi metode uji mikrobiologi pangan.
Ellison, SLR (2006),Untuk mempertahankan koefisien korelasi. Terakreditasi. Kualitas. Assurance, Edisi No. 11, hal
146 - 152.
Komite Tetap ENFSI untuk Kualitas dan Kompetensi (QC) (2006),Validasi dan Implementasi Metode
(Baru), QCC-VAL-001, Edisi No. 001, www.enfsi.eu
Ethier, J. (2005),Tata cara validasi bahan aktif farmasi (API) biologis
proses manufaktur, Jurnal Resmi ISPE, Vol. 25 No. 2
Eurachem/CITAC (2002),Panduan untuk kualitas dalam kimia analitik: Bantuan untuk akreditasi,
www.eurachem.org/guides/pdf/CITAC%20EURACHEM%20GUIDE.pdf
Panduan Eurachem (1998),Kesesuaian untuk tujuan Metode analitik. Sebuah panduan laboratorium untuk metode
validasi dan topik terkait, Edisi 1.0, http://eurachem.ul.pt/guides/mval.html
Food and Drug Administration (FDA) (2001),Panduan untuk industri – Validasi metode bioanalitik
Hibbert, DB (2005),Komentar lebih lanjut tentang penggunaan (miss-) dari r untuk menguji linearitas kalibrasi,
Akreditasi dan Jaminan Kualitas, Edisi 10, hlm 300-301
Hibbert, DB (2006),Ketidakpastian hasil dari kalibrasi linier, Analis, 131, hal 1273-1278
Hibbert, DB (2004),Validasi metode,dalam Encyclopedia of Analytical Science, Edisi ke-2, Kualitas
Assurance, Elsevier Ltd.
Huber, W. (2004),Tentang penggunaan koefisien korelasi r untuk menguji linearitas fungsi kalibrasi,
Akreditasi dan Jaminan Kualitas, Edisi No 9, hlm 726
ISO 3534-1 (2006),Statistik-kosakata dan simbol, Bagian 1: Istilah statistik umum dan istilah yang digunakan dalam
kemungkinan
ISO 9000 (2005),Sistem manajemen mutu -- Dasar-dasar dan kosakata ISO 13843
(2005),Kualitas air – Pedoman validasi metode mikrobiologi.
Panduan ISO/IEC 98-3 (2008),Ketidakpastian pengukuran – Bagian 3: Panduan untuk ekspresi ketidakpastian dalam
pengukuran (GUM 1995)
IUPAC (2002),Pedoman yang diselaraskan untuk validasi laboratorium tunggal dari metode analisis,Aplikasi Murni
Kimia 74(5), hlm 835-855, http://www.iupac.org/publications/pac/2002/7405/x0835.html
JCGM:200 (2008),Kosakata Internasional Metrologi (VIM) – Konsep dasar dan umum dan
istilah terkait,3rdedisi, BIPM, Sèvres, www.bipm.org/vim2008
Miller, JC dan Miller, JN (2000),Statistik dan kemometrik untuk kimia analitik,Edisi ke-4, Prentice
Hall, ISBN 0-13-022888-5, dan/atau VAMSTAT IIPelatihan Statistik untuk Pengukuran Analitik yang Valid
CD-ROM, www.vam.org.uk
LGC (2003),Validasi metode internal - Panduan untuk laboratorium kimia, Laboratorium Pemerintah
Kimiawan (LGC), Inggris.
Mulholland, MI dan Hibbert, DB (1997),Linearitas dan batasan kalibrasi kuadrat terkecil, Jurnal dari
Kromatografi A, 76273-8
Dewan Penasihat Akreditasi Patologi Nasional (NPAAC) (2006),Standar Akreditasi Laboratorium dan
Pedoman Deteksi dan Analisis Asam Nukleat
Dewan Penasihat Akreditasi Patologi Nasional (NPAAC) (2007),Persyaratan untuk pengembangan dan
penggunaan Perangkat Diagnostik In Vitro (IVD) in-house
Dewan Penasihat Akreditasi Patologi Nasional (NPAAC) (2007),Persyaratan untuk estimasi
ketidakpastian pengukuran
O'Donnell, GE dan Hibbert, DB (2005),Perlakuan bias dalam memperkirakan ketidakpastian pengukuran, The
Analis, Edisi No. 130, hlm 721-729

Manual Terestrial OIE (Mei 2009),Prinsip dan metode validasi tes diagnostik untuk infeksi
penyakit,Bab 1.1.4/5,www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Health_standards/tahm/1.1.04_VALID.pdf”
Dewan Akreditasi SANAS (2008),Pedoman validasi dan penjaminan mutu di bidang mikrobiologi
pengujian, TG28-02.
Taylor, JK (1989),Jaminan kualitas pengukuran kimia, edisi keenam, Penerbit Lewis, ISBN 0-
87371-097-5, halaman 79.
Thompson M., Ellison SLR dan Wood R., UPAC Interdivisional Working Party (2002),Harmonisasi
pedoman untuk validasi metode analisis laboratorium tunggal(Laporan Teknis IUPAC), Aplikasi Murni.
Kimia., 74(5), hlm 835-855
Van Loco, J., Elskens, M., Croux, C., Beernaert, H. (2002),Linearitas kurva kalibrasi: penggunaan dan penyalahgunaan
koefisien korelasi, Terakreditasi. Kualitas. Assur., Edisi No. 7, hlm 281-285.
Youden, WJ dan Steiner, EH (1975),Manual statistik dari Asosiasi Ahli Kimia Analitis Resmi,
AOAC, ISBN 0-935584-15-3
Zar, JH (1996),Analisis biostatistik, edisi ketiga, Prentice-Hall Inc.
8. Bacaan tambahan
APLAC (2003),Interpretasi dan panduan estimasi ketidakpastian pengukuran dalam pengujian,
APLAC TC 005, APLAC, www.aplac.org.
Praktik Terbaik untuk Metodologi Mikrobiologi (BPMM). Laporan Akhir di
http://www.fda.gov/ucm/groups/fdagov-public/@fdagov-foodsgen/documents/
document/ucm088708.pdf dengan suplemen di http://www.fda.gov/Food/
ScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm124900 .htm
Panduan EURACHEM (1996),Kesesuaian untuk tujuan metode analitis.Sebuah panduan laboratorium untuk metode
validasi dan topik terkait, LGC, Teddington. Juga tersedia dari Sekretariat EURACHEM dan situs web.
Eurachem/CITAC (2000),Mengukur ketidakpastian dalam pengukuran analitik,Panduan Eurachem/CITAC CG4,

Edisi ke-2, ISBN 0-948926-15-5, www.eurachem.ul.pt.
Eurachem/CITAC (2003),Ketertelusuran dalam pengukuran kimia,www.eurachem.ul.pt
Eurolab (2007),Ketidakpastian pengukuran ditinjau kembali: Pendekatan alternatif untuk evaluasi ketidakpastian,
Laporan Teknis No 1/2007, www.eurolab.org
Jenis garaktivitas, FM, Klestan, E. dan Hirsch, J. (2000),Prinsip jaminan kualitas untuk analitis
laboratorium, Edisi ke-3, AOAC Internasional, ISBN-0-935584-70-6.
Hibbert, DB (2007),Penjaminan mutu laboratorium kimia analitik,Oxford University Press, Baru
York
ILAC (2002),Memperkenalkan konsep ketidakpastian pengukuran dalam pengujian terkait dengan
penerapan Standar ISO/IEC 17025, ILAC G17, www.ilac.org.
ISO 16140 (2003),Mikrobiologi bahan makanan dan pakan ternak – Protokol untuk validasi alternatif
metode
ISO/TS 21748:2004,Panduan untuk penggunaan pengulangan, reproduktifitas, dan perkiraan kebenaran dalam
estimasi ketidakpastian pengukuran
Magnusson, B., Naykki, T., Hovind, H. dan Krysell, M. (2003),Buku pegangan untuk perhitungan pengukuran
ketidakpastian di laboratorium lingkungan, Laporan NORDTEST TR537
Laporan Konsultasi Ahli Bersama FAO/IAEA (1997),Validasi metode analitik untuk pengendalian makanan,
Kertas Pangan dan Gizi FAO No. 68, FAO
Thompson. M. dan Kayu, R. (1995),Pedoman yang diselaraskan untuk pengendalian kualitas internal dalam kimia analitik
laboratorium,Aplikasi Murni Kimia, 67 (4), hlm 49-56
Thompson, M., Ellison, S., Fajgelj, A., Willetts, P. dan Wood, R. (1999),Pedoman yang diselaraskan untuk penggunaan
informasi pemulihan dalam pengukuran analitis, Aplikasi Murni. Kimia., 71 (2), hlm 337-348
Sekretariat NMKL, Finlandia (1996),Validasi metode analisis kimia,Prosedur NMKL No. 4
Tes Nord (2005),Buku pegangan untuk perhitungan ketidakpastian pengukuran di laboratorium lingkungan, Laporan
TR 537, www.nordtest.org
Sub-komite untuk Standar Kesehatan Hewan dan Laboratorium (SCAHLS), http://www.scahls.org.au
UKAS (2000),Ekspresi ketidakpastian dalam pengujian, UKAS LAB12, Edisi 1, www.ukas.com.

Lampiran 1. Pohon keputusan validasi dan verifikasi metode

Apakah metode kandidat metode
standar atau memilikinya? Ya Ya Apakah Anda memiliki referensi Apakah ini
telah divalidasi oleh validasi Apakah metodenya? pembenaran teknis untuk Ya baru Ya
MULAILAH metode yang diterima diubah? variasi, misalnya jurnal analit*** ke
body (misalnya AOAC) dan publikasi? fasilitas?
apakah data kinerja tersedia?
Tidak
Tidak
Konfirmasi dari Tidak
kinerja yang dipublikasikan Pelatihan

karakteristik Ya modul**
Ya Ya Ya
(verifikasi) tapi penuh Metode diterbitkan di Apakah matriks di dalam Apakah ini baru?
rees
Apakah mereka teman sebaya metode
validasi atau literatur ilmiah dengan ruang lingkup analit*** ke
metode peninjauan? verifikasi
validasi komparatif data kinerja? metode? fasilitas?
mungkin diperlukan jika ada
perubahan yang dibuat atau
matriks berbeda Tidak Tidak
Tidak
Tidak Tidak
Apakah matriks
metode
Validasi penuh Ya secara umum berbeda Pelatihan
verifikasi
. yg dibutuhkan dari ruang lingkup modul**
metode?
Validasi penuh
yg dibutuhkan
Tidak
Tidak Apakah matriks di dalam Ya

Validasi penuh Komparatif
ruang lingkup
yg dibutuhkan validasi
metode?
Verifikasi matriks
* Telah ditemukan dalam beberapa kasus (misalnya pengujian mikrobiologi veteriner) bahwa alat uji tertentu berkinerja berbeda di bawah kondisi lingkungan setempat, dibandingkan dengan kondisi lingkungan asli yang menjadi sasaran selama
validasi primer. Dalam kasus seperti itu, fasilitas harus melakukan validasi untuk membuktikan bahwa kit bekerja dalam kondisi lingkungan setempat.
* * Ini mencakup pengenalan versi baru dari metode standar. Ini mungkin misalnya memiliki perbedaan agar, suhu, reaksi, dll yang perlu dijelaskan.
* * * Dalam beberapa kasus di mana analit bukanlah analit baru untuk fasilitas tetapi teknik yang berbeda digunakan untuk analisis analit, pelaksanaan modul pelatihan mungkin tidak memadai dan verifikasi metode mungkin diperlukan. Misalnya
dalam pengujian biologis, AS5013 memiliki 2 metode (AS5013.3 dan AS5013.4) untuk pencacahan koliform. Pengalaman dalam 1 metode tidak berarti bahwa fasilitas tersebut harus kompeten untuk
melakukan yang lain.
Untuk analisis ad-hoc atau khusus, tingkat validasi akan dibatasi oleh keadaan.
Janua ry 2018 Halaman 30 dari 31

Amandemen
Tabel di bawah ini memberikan ringkasan perubahan yang dibuat pada dokumen dengan masalah ini.
Bagian Amandemen
Seluruh dokumen Dokumen ini menggantikan Catatan Teknis 17 sebelumnya.
Dokumen telah ditinjau dan diperbarui untuk mencerminkan struktur dokumentasi

kriteria akreditasi yang baru dan mengganti bidang dengan jenis kegiatan.

2004 NATA VALIDASI METODE - En.id

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

2004 NATA VALIDASI METODE - En.id

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

Pedoman Akreditasi Umum —

Validasi dan verifikasi metode uji kuantitatif

Validasi dan verifikasi metode uji kuantitatif

1. Perkenalan ............................................... ................................................................... ................................................. 4

Januari 2018 Halaman 3 dari 31

Validasi dan verifikasi metode uji kuantitatif

2. Verifikasi metode yang telah divalidasi sebelumnya

Januari 2018 Halaman 4 dari 31

3. Validasi metode dan parameter validasi

Januari 2018 Halaman 5 dari 31

sebuah) Tujuan pengukuran (apa yang akan diidentifikasi dan mengapa)?

Studi validasi dapat dibagi menjadi validasi komparatif dan primer.

Januari 2018 Halaman 6 dari 31

Analit (Sn) dalam matriks:

Januari 2018 Halaman 7 dari 31

Analit (Sn) dalam intisari sampel:

3.1 Rentang di mana persamaan kalibrasi berlaku (linier kalibrasi)

Januari 2018 Halaman 8 dari 31

3.1.1 Interval pengukuran

3.1.2 Efek matriks

Januari 2018 Halaman 9 dari 31

Januari 2018 Halaman 10 dari 31

Januari 2018 Halaman 11 dari 31

Anjing dengankanker usus

Januari 2018 Halaman 12 dari 31

Rasio kemungkinan positif = sensitivitas / (1 spesifisitas) = 66,67% / (1 91%) = 7,4 Rasio

Januari 2018 Halaman 13 dari 31

jumlah positif benar

Januari 2018 Halaman 14 dari 31

Derajat kebebasan Derajat kebebasan untuk

Januari 2018 Halaman 15 dari 31

Di mana:c1= konsentrasi terukur dalam sampel yang diperkaya

Januari 2018 Halaman 16 dari 31

3.5 Batas deteksi dan batas kuantitasi

3.5.1 Batas deteksi (LOD)

3.5.1.1 LOD berdasarkan evaluasi visual

Januari 2018 Halaman 17 dari 31

3.5.1.2 LOD berdasarkan standar deviasi blanko

3.5.1.3 LOD berdasarkan kisaran di mana persamaan kalibrasi berlaku

3.5.1.4 LOD berdasarkan signal-to-noise

3.5.2 Batas kuantisasi (LOQ)

3.5.2.1 Batas pelaporan (LOR)

Januari 2018 Halaman 18 dari 31

3.7 Ketidakpastian Pengukuran

Januari 2018 Halaman 19 dari 31

Karakteristik yang akan dievaluasi Prosedur yang dapat diikuti

Interval pengukuran Evaluasi bias dan kemungkinan penentuan LOQ

Januari 2018 Halaman 20 dari 31

Karakteristik yang akan dievaluasi Prosedur yang dapat diikuti

4. Validasi metode non-rutin

5. Validasi dan verifikasi metode subjektif

Januari 2018 Halaman 21 dari 31

Parameter yang harus diperhatikan adalah:

- Pengulangan / reproduktifitas; dan

Tindakan mitigasi atau pengendalian berikut mungkin juga relevan:

- Analisis kritis (atau risiko);

Pertanyaan-pertanyaan berikut juga harus dipertimbangkan:

* Catatan 2: Perbandingan antar-laboratorium dapat menyebabkan meningkatnya ketidakpastian.

5.1 Pengulangan / reproduktifitas (yaitu keandalan)

5.2 Probabilitas deteksi dan/atau potensi tingkat kesalahan

Januari 2018 Halaman 22 dari 31

5.3 Analisis kritis (atau risiko)