Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Naskah yang Diterima

Produksi bioplastik (poli-3-hidroksibutirat) menggunakan kertas bekas sebagai bahan baku:

Optimalisasi hidrolisis enzimatik dan penggunaan fermentasiBurkholderia saccharia

Huda Al-Battashi, Neelamegam Annamalai, Shatha Al-Kindi, Anu Sadasivan Nair, Saif
Al-Bahry, Jay Prakash Verma, Nallusamy Sivakumar

PII: S0959-6526(18)33961-1

DOI: https://doi.org/10.1016/j.jclepro.2018.12.239

Referensi: JCLP 15297

Untuk tampil di: Jurnal Produksi Bersih

Tanggal Diterima: 7 Juli 2018

Tanggal Revisi: 5 November 2018

Tanggal Diterima: 23 Desember 2018

Silakan mengutip artikel ini sebagai: Al-Battashi H, Annamalai N, Al-Kindi S, Nair AS, Al-Bahry S, Verma
JP, Sivakumar N, Produksi bioplastik (poli-3-hidroksibutirat) menggunakan kertas bekas sebagai bahan
baku: Optimalisasi hidrolisis enzimatik dan fermentasi menggunakanBurkholderia saccharia,Jurnal
Produksi Bersih(2019), doi:https://doi.org/10.1016/j.jclepro.2018.12.239.

Ini adalah file PDF dari manuskrip yang belum diedit yang telah diterima untuk diterbitkan. Sebagai layanan
kepada pelanggan kami, kami menyediakan versi awal naskah ini. Naskah akan menjalani copyediting, typesetting,
dan review dari bukti yang dihasilkan sebelum diterbitkan dalam bentuk akhirnya. Harap dicatat bahwa selama
proses produksi dapat ditemukan kesalahan yang dapat mempengaruhi konten, dan semua penolakan hukum
yang berlaku untuk jurnal terkait.
 MANUSkrip YANG DITERIMA

abstrak grafis

A
R IM
TE
DI
NG
YA
ip
kr
US
AN
M
 MANUSkrip YANG DITERIMA
Jumlah kata: 8180

Produksi bioplastik (poli-3-hidroksibutirat) menggunakan kertas bekas sebagai bahan baku:

Optimalisasi hidrolisis enzimatik dan fermentasi menggunakanBurkholderia

sacchar

Huda Al-Battashsebuahsaya, Neelamegam Annamasebuahl,aiShatha Al-Kindsebuahsaya, Anu Sadasivan Nasebuahsaya, r Saif

A
IM
Al-Bahrisebuah, Jay Prakash Verm b, aNallusamy Sivakuma
r
sebuah*

R
sebuahDepartemen Biologi, Sekolah Tinggi Sains, SultanabQ Universitas oos, PO Box 36, PC 123,
Oman

TE
bInstitut Lingkungan Hawkesbury, Syydn . Barat Universitas, Kampus Hawkesbury,
Penrith, Sydney, New South Wales, Australia
DI
NG
YA
ip
kr
US
AN
M

*
Penulis yang sesuai:
Nallusamy Sivakumar
Departemen Biologi
Universitas Sultan Qaboos, Oman
Telp.: +968 24146891.
Alamat email: apnsiva@squ.edu.om (N. Sivakumar)

1
 MANUSkrip YANG DITERIMA

Abstrak

Permintaan global untuk bioplastik khususnya phoylydroxyalkanoate (PHA) telah

telah meningkat dalam beberapa dekade terakhir sebagai plastik berbasis petrokimia suutebstoitf.

Pemanfaatan kertas bekas, penyusun utama sampah kota (MSW), sebagai

sumber karbon untuk produk polihidroksibutirat (PHB) bukan hanya alternatif,

A
rute pengelolaan sampah yang ramah lingkungantablsuo membantu meningkatkan nilai sampah. Di

IM
penelitian ini, pengolahan limbah hidrogen peroksida rpsaapcecharification telah dioptimalkan

R
menggunakan central composite design (CCD). Maksimumdrolisis (88,18%) terjadi di kertas

TE
memuat 5.0 g/L, agitasi 242 rpm, volume kerja 20e%, selulase 49,82 U/gβ,-glukosidase

20,9 U/g dan hemiselulase 29,5 U/g. Sintetis PHB akumulasi biomassa asnida oleh xylose-
DI
memanfaatkanBurkholderia sacchariamenggunakan limbah kertas hidrolisat dipelajari usifnfe gredni t
NG
sumber nitrogen dan karbon menjadi nitrogen (C/N) sra. tM iomaximum PHB dan berat sel kering

(DCW) terjadi dengan amonium sulfat dan C/Noraotfi 20. Biomassa tertinggi (3,63
YA

g/L), akumulasi PHB maksimum (44,2%) dan m pemanfaatan gula pereduksi maksimum

(92,1%) diamati setelah 48 jam budidaya hidrolisat encer. Itu

ip

sifat fisikokimia PHB yang diekstraksi atau sesuai dengan standar PHB.
kr

Oleh karena itu, kertas bekas dapat dimanfaatkan sebagai bahan baku mentah untuk keberlanjutan
US

produksi PHB.
AN
M

Kata kunci:Kertas bekas, Pretreatment hidrogen peroksida, Oizpatitm ion, sakarifikasi,

Burkholderia saccha,riPoli-3-hidroksibutirat

2
 MANUSkrip YANG DITERIMA

1. Perkenalan

Konsumsi ekstensif apnldastics polimer sintetik yang berasal dari

bahan petrokimia dalam beberapa dekade terakhir untuk meningkatkan beberapa lingkungan

masalah pembuangan limbah besar-besaran karena sptenrscie dan akumulasi di kedua perairan

dan lingkungan terestrial (Cesário et al., 20C1ie 4 detik; ielski dkk., 2015; Amulya dkk., 2016;

A
Pradhan dkk., 2017; Kavitha dkk., 2018). Ab1o8u7t juta ton polimer petrokimia

IM
dihasilkan setiap tahun, dan sejumlah besar polimer dibuang ke

ekosistem (Ray et al., 2016). Oleh karena itu, menggunakan ebgio polimer dan plastik raddable memiliki

R
TE
menjadi kebutuhan penting saat ini. Polihidroksinaola ka
tes (PHA) dianggap sebagai

calon pengganti petrokimia-deriveadstpicl s karena mereka sepenuhnya terdegradasi,

DI
biokompatibel dan dapat diterapkan untuk berbagai industri mulai dari pengemasan hingga bidang medis
NG
(Amulya et al., 2016; Annamalai dan Sivakumar, 2;0Is1o6la et al., 2017; Sabarinathan et al.,

2018). PHA adalah poliester mikroba intraseluler erhsich disintesis dan diakumulasikan sebagai
YA

butiran penyimpanan karbon dan energi dalam keadaan yang tidak biasa dalam kasus:

o, spat, e.tcin adanya surplus

kekurangan nutrisi seperti nitrogen, oksigen, hn
ip

sumber karbon (Yu dan Stahl, 2008; Annamalai e, t 2a0l1 . 8; Arias et al., 201.8) Poli-3-
kr

hidroksibutirat (PHB) adalah setudda . yang paling luas saya menemukan anggota yang berkarakter baik dari
US

keluarga PHA dan terakumulasi menjadi sekitar 80% dari berat tihoembass (Anjum et al., 2016).
AN

Tingginya biaya produksi hammertin bioplastik HG

minat dalam penelitian bioplastik

(Van-Thuoc et al., 2008) karena sumber karbon mulia digunakan untuk produksi, yaitu murni
M

gula, minyak mulia, atau asam lemak. Biaya stuhbestrate menyumbang sekitar 50% dari total

biaya produksi (Ciesielski et al., 2015; Kollerael.t, 2017) dan mencapai sekitar 30% ketika

pabrik tebu digunakan (Nonato et al., 2001 sama,

o)n.sC ada permintaan mendesak untuk

mencari sumber-sumber baru, murah, tersedia secara lokal, memperbaharui, berkelanjutan untuk

industrialisasi dan komersialisasi biopilcas.t Oleh karena itu, pemanfaatan karbon murah

3
 MANUSkrip YANG DITERIMA
bahan baku seperti residu limbah pertanian, ewgalysct erol, whey keju, molase, organik

limbah dan limbah efluen fermentatif sebagai sumber karbon terbaik untuk menghasilkan PHB telah

telah dilaporkan (Silva et al., 2014; Saratale dan 2O 01h5, ). Limbah lignoselulosa merupakan salah satu

bahan baku yang paling melimpah dan terbarukan di bumi, ini merupakan sumber yang ideal untuk didegradasi

menjadi gula terlarut untuk produksi PHB (Annameatlaail., 2014, 2018). Diantaranya, sampah

kertas dianggap sebagai konstituen utama dari limbah padat industri dan perkotaan

A
(MSW) di mana melebihi 35% dari biomassa lignoukloeslik yang dibuang di MSW (Dubey dkk.,

IM
2012; Yuan dkk., 2012). Hanya 50–65% sampah yang ditembus setiap tahun (>400 juta

R
ton) didaur ulang sebagai akibat dari beberapa keterbatasan proses daur ulang kertas sebagai kertas

TE
serat kehilangan kekuatannya dan berubah menjadi aper qituyapl rendah setelah sejumlah daur ulang

DI
(Liu et al., 2010; Wang et al., 2012). Konsekuensinya, itu bisa dianggap sebagai potensi
NG
bahan baku untuk produksi PHB karena ketersediaannya dengan biaya rendah ($52/ton) dan kekayaan dalam

selulosa (Dubey et al., 2012; Annamalai et al.1,82)0.

YA

Bahan baku kertas bekas membutuhkan hidrolisis dari mcaoinstituents (selulosa dan

hemiselulosa) menjadi gula sederhana terutama melalui hidrolisis ziemnatik menggunakan campuran
ip

enzim selulase. Hidrolisis enzimatis dipengaruhi oleh beberapa faktor seperti enzim,
kr

dosis, pemuatan substrat, dll. (Liu et al., 20w1h0e) kembali interaksi faktor-faktor ini bisa
US

dievaluasi secara individual dan interaktif (Wantgale., 2005). Metode permukaan respons
AN

(RSM) adalah alat statistik yang digunakan untuk merancang bangunan, membangun model, menilai

hasil dari beberapa faktor, dan mencari pe

kondisi timoum yang diinginkan
M

tanggapan. Ini adalah metode penghematan waktu dan tenaga dengan mengurangi jumlah percobaan

(Wang et al., 2005; Liu et al., 2010). RSM juga reqd untuk meminimalkan jumlah input

faktor dan rentang yang diuji khususnya, dalam tshtudy, dosisnya mahal

enzim. Oleh karena itu, lebih baik menjalankan proctoesm saximize gula yang dilepaskan per unit

jumlah enzim yang digunakan. Hydrolysiscepsrsso enzimatik kertas daur ulang oleh RSM

4
 MANUSkrip YANG DITERIMA
teknik telah dioptimalkan termasuk tiga suhu fasctonramely, enzim

konsentrasi, dan laju pengadukan (Liu et al., 20.1H 0o

) namun, ini membutuhkan pengoptimalan lebih lanjut

untuk tujuan peningkatan skala. Selain pruesvio faktor, beberapa faktor dapat berperan

dalam produktivitas proses hidrolisis, mendukung pemuatan dan kerja substrat

volume, dll. Dengan demikian, desain melalui RSM yang dapat memprediksi tingkat hidrolisis akan menjadi

sangat bermanfaat.

A
uaPHB melalui pemanfaatan

IM
Selanjutnya, untuk menghasilkan vb . secara komersial bir putih

limbah kertas, strain mikroba yang efisien sepanjang kondisi fermentasi yang optimal harus

R
dipilih (Saratale dan Oh, 201B5kamu)r.kholderia sacchariapotensi ketegangan industri

TE
yang dapat memanfaatkan gula yang ditemukan di lignocelluiclohsydrolysate terutama glukosa dan xilosa

dan substrat lain seperti bagasvsae tebu e(tSa

DI il l., 2004; Lopes et al., 2011) dan
NG
jerami gandum (Cesário et al., 2014B)..sacchardapat mengakumulasi PHB dalam jumlah yang sangat tinggi

jumlah (Gomez et al., 1996). Oleh karena itu, penelitian ini mengoptimalkan hidrolisis enzimatik
YA

kertas kantor limbah hidrogen peroksida yang diolah sebelumnya P(W ) menggunakan metode RSM dan selanjutnya

pemanfaatan dan optimalisasi produksi hidrolisat foPrHB melalui mikroba

ip

fermentasi menggunakanB. sacchariadan karakterisasi bioma yang disintesispe

lisan.
kr

2. Bahan-bahan dan metode-metode

US

2.1. Mikroorganisme dan bahan kimia

AN

B. sacchariaDSM 17165 diperoleh dari Leibniz-Institut DSM GZe-rman

koleksi mikroorganisme dan kultur sel (Ga en

rm
y) dan dipertahankan dalam ragi
M

daging pepton (YPM) miring yang terkandung dalam (g/L): yeeaxsttract, 10; pepton,10; ekstrak daging, 5;

(NH4)2JADI4, 2; dan agar, 15 (Annamalai et al., 2018). Setelah 4erh2 inkubasi pada 30 °C,

agar miring disimpan pada suhu 4 °C. Untuk setiap eksperimen, piring agar YPM dan kaldu YPM

(tanpa agar) digunakan.

5
 MANUSkrip YANG DITERIMA
Semua bahan kimia yang digunakan dalam penelitian ini adalah procufreodm Sigma-Aldrich (MO, USA) atau

sebagaimana dimaksud. Enzim yang digunakan dalam hidrokliosm enzimatik mengejutkan selulase dari Trichoderma

reeseiATCC 26921 (C2730), hemiselulase (H212), dan -dglucosidase (49291) dari

Aspergillus nigerdiperoleh dari Sigma-Aldrich (MO, USA). Ceallu se

l aktivitas (filter

kertas (FPase) ditentukan oleh Ghose (1987) mewthoedre satu unit didefinisikan sebagai

jumlah enzim yang diperlukan untuk melepaskan 1,0 moluocfogsle per menit dari kertas saring pada suhu 50

A
°C dan pH 4,8. Aktivitas hemiselulase diukur menurut Bailey et al., (1992). Satu

IM
unit aktivitas enzim sama dengan jumlah enzim yang dibutuhkan untuk melepaskan 1,0 mol

R
xilosa ekuivalen per menit pada 50 °C dan p8H. Aktivitas 4-.glucosidase ditentukan oleh

TE
mengukur jumlah p-nitrophenol liberatedmfrp o-nitrofenilβ--D-glukopiranosida

(pNPG) (Parry et al., 2001). Satu unit enzim

DI Itcytis didefinisikan sebagai jumlah enzim

te pada 50 °C dan pH 5.0.

NG
dibutuhkan untuk menghasilkan 1,0 mol p-nitrophenol peinrum

2.2. Persiapan bahan baku

YA

Dalam penelitian ini, bahan baku (WOP) adalah coe lledcftrom Sekolah Tinggi Ilmu Pengetahuan, Sultan
ip

Universitas Qaboos, Oman. WOP diparut menjadi spmieaces (2x5 mm) dengan kertas
kr

penghancur (Atlas, Cina). Bahan abon WOP (5%) direndam dalam destilasi
US

air, diikuti dengan pencampuran basah dan pengeringan salah pada 60 °C. Bahan kering adalah

digiling menjadi bahan yang halus dan digunakan untuk bekerja. Pretreatment WOP (5%) adalah
AN

dilakukan dengan menggunakan 0,5% hidrogen peroksida2OH2) pada 121 °C dan 15 psi selama 30 menit. padat

residu disaring melalui selubung kain dan dicuci secara berurutan di bawah air
M

terus menerus sampai pH netral filtrat tercapai. Residu biomassa yang tersisa

dikeringkan dalam oven panas pada suhu 60 °C selama semalam, lemdilonse lebih menjadi bahan yang mengembang dan

disimpan untuk digunakan untuk hidrolisis enzimatik reim xpeent. Komposisi kimia dari

kertas yang tidak diolah dan yang telah diolah telah dianalisis dan
guStandar Nasional Terbarukan

Metode Laboratorium Energi (NREL). Thermogravimeatrnicalysis (TGA) dari keduanya yang tidak diobati

6
 MANUSkrip YANG DITERIMA
dan kertas bekas yang sudah diolah diimplementasikan menggunakanAg7TtG hermo-analisis (Perkin-Elmer,

KITA). Perbedaan komposisi w eap

sampel staper sebelum dan sesudah

pretreatment dihitung berdasarkan berat % los)sat( kisaran suhu tertentu. The

morfologi permukaan dan komposisi unsur kertas reuantet d dan pretreated adalah

dianalisis dengan pemindaian mikroskop elektron (SEM).

A
2.3. Optimalisasi hidrolisis enzimatik

IM
2.3.1. Metodologi permukaan respons (RSM)

R
Untuk produksi gula pereduksi yang efisien melalui hidrolisis enzimatik dengan

TE
beban enzimatik, kondisi fisik (kertas loa, diangitation, dan volume kerja) dan

DI
pemuatan enzim (Unit/g substrat) (cellulasβe-g, lucosidase, dan hemiselulase)

dioptimalkan oleh RSM. Desain komposit pusat diselesaikan dengan menggunakan perangkat lunak statistik
NG

package Design-Expert (versi 7.0.0) (Stat-Eacs.e, U INSA). Faktor independen dalam

desain dipelajari pada lima tingkat yang berbeda‒lsα,(‒1, 0, +1 dan + ) (Tabel 1).
YA

Nilai optimum dari masing-masing faktor adalah standartzoedmemaksimalkan gula total

ip

produksi dan hidrolisis kertas. Satu set 4p 0eerixments dihasilkan menggunakan3aM2in

kr

menjalankan Res. V desain komposit pusat dengan enam reapte lics di titik tengah. Eksperimen
US

dilakukan dalam labu kocok menggunakan 50 mM citb rautfefer pada 50 °C selama 120 jam dalam putaran

shaker (Ilmu termo MAXQ 420 HP). Actlueavlel dari variabel ditransformasikan
AN

menjadi variabel berkode menggunakan (Persamaan 1).

)
M

- - =( = 1,2, . . . . . . , ………………………………. (Persamaan 1)

∆

di mana--adalah nilai berkode dan-adalah nilai-nilai yang tidak dikodekan (aktual) dari independen

faktorsaya, while adalah nilai-nilai yang tidak dikodekan dari-di titik tengah dan∆d-adalah ukuran langkah untuk

variabel yang diuji (Liu et al., 2010).

7
 MANUSkrip YANG DITERIMA
2.3.2. Validasi model

Eksperimen dilaksanakan dalam rangkap tiga, untuk menghindari model statistik di

nilai optimal dari faktor independen. reim nilai xpeental enzim

hidrolisis dibandingkan dengan model predictaelduevs.

2.4. produksi PHB

A
IM
B. sacchariadikultur dalam kaldu YPM selama 24 jam pada suhu 30 °C

dipanen dengan sentrifugasi pada 40× 00

g selama 15 menit, disuspensikan kembali dalam ewra suling steril (t1

R
OD pada 600 nm) dan digunakan sebagai inokulum untuk pcrtoiodnu PHB. Hidrolisat dikumpulkan

TE
dengan sentrifugasi pada 10.000 ×g selama 10 menit. Pp HRB
media oduksi disiapkan oleh

DI
penambahan (g/L) KH2PO4, 2.4; tidak2HPO4, 2.5; MgSO4, 0,5; (NH4)5[Fe(C6H4HAI7)2], 0,05;
NG
CaCl2, 0,02; dan NH 2JADI4, 1,2 ke hidrolisat dengan rasio C/N 20 anhde tpH adalah

diatur menjadi 7,2 menggunakan 10 M NaOH. Kemudian, media s fwilter disterilkan melalui 0,2 m pra-
YA

filter membran yang disterilkan (Millipore) sebagai gantinya rsilisasi pada 121 °C untuk mencegah degradasi

gula. Media filter yang disterilkan digergaji de

itu
d 1% (v/v) inokulum dan diinkubasi pada
ip

30 °C dan 160 rpm dalam pengocok putar (MAXQ 430 HTP h, ermoscientific). Sampel adalah
kr

ditarik setiap 24 jam sampai 72 jam, dan seleigwht kering (DCW) diperkirakan
US

secara gravimetri dengan sentrifugasi kultur pada 4,000 ×g pada 4 °C selama 10 menit, setelah itu
AN

dicuci menggunakan air suling, dan disimpan hingga kering oivgehrtnat 50HaiC dan dinyatakan dalam g/L.

2.5.Optimalisasi sumber nitrogen dan rasio C/N untukHr B produksi P

M

Berbagai sumber nitrogen diuji pada sel groa wnthd sintesis PHB olehB.

sacchar.sayaMedia disiapkan seperti yang disebutkan di atas wiO thPWhidrolisat dan

ditambah dengan anorganik ((N4)H2JADI4, NH4Cl dan NH4TIDAK3) dan organik (pepton dan

ekstrak ragi) sumber nitrogen dengan C/N . tetap tiora(20). Efek dari berbagai rasio C/N

8
 MANUSkrip YANG DITERIMA
(10, 20, 40, 60, dan 80) nitrogen terbaik seouorcn biomassa sel dan PHB

akumulasi diperiksa menggunakan WOP hydrolysateple su

dicairkan dengan jumlah yang berbeda

sumber nitrogen terbaik. Pada kondisi optimum pertumbuhan mikroba dan sintesis PHB,

percobaan dilakukan dengan andcecn . yang diencerkan hidrolisat WOP yang diberi label sebagai

D-WOPH dan C-WOPH, masing-masing.

A
2.6. metode analitis

IM
2.6.1.Analisis gula

R
Konsentrasi glukosa dan xilosa dalam hidroelissaw dikuantifikasi menggunakan

TE
kromatografi cair kinerja (HPLC) (ShimadLzC u,10AD) ditambah dengan aminex

DI
HPX-87H (300 mm × 7,8 mm; Bio-Rad, USA) mengoperasikan kolom 6a5 °C menggunakan 5 mM

asam sulfat sebagai fase gerak pada laju alir L1/menit menggunakan detektor indeks bias
NG

(RID20A). Standar gula yang baru disiapkan werd e kalibrasi fuosreeksternal.

YA

2.6.2.Kuantifikasi dan ekstraksi PHB

Kandungan PHB ditentukan dengan asam metanolsilsowfoeld dengan kromatografi gas

ip

(GC) digabungkan ke detektor ionisasi nyala (FID) yang dijelaskan sebelumnya (Annamalai dan
kr

Sivakumar, 2016). Secara singkat, metanolisis dilakukan dengan menggunakan jumlah yang diketahui dari bahan kering
US

sel dalam 2 mL kloroform dan 2 mL meta asam ln(2o.8 MH2JADI4) mengandung 1% dari
AN

asam oktanoat sebagai standar internal dalam tabung borosteilicgalass dengan tutup ulir Teflon. Itu

campuran reaksi dipanaskan pada 1Hai0C0 selama 4 jam menggunakan blok panas (DRB 200, HACH). Setelah
M

pendinginan, 1 mL air suling ditambahkan, dan lebah divorteks dengan kuat selama 3 menit.

Setelah beberapa waktu, fase organik di bagian bawah erlamengandung hasil methylated

ester disaring dan dianalisis dengan gas chromatohgyra(G pc) (Teknologi Agilent 5890

seri II) ditambah dengan flame ionization detectoFrID() dilengkapi dengan Agilent J&W HP-5

kolom kapiler (30 × 0,32 mm × 0,25 m). Heliu9 m9.(999%) digunakan sebagai gas pembawa

9
 MANUSkrip YANG DITERIMA
dengan laju alir konstan 2 mL/menit dimana eicntjor dengan rasio split 1:20 diatur pada 250

°C dan detektor pada 270 °C. Temperatur oven diprogram untuk naik dari

suhu awal (100 HaiC) selama 1 menit dengan laju pemanasan 15 °C hingga 250 f°oCr 4 menit. PHB

konten ditentukan menggunakan poly-3-hydroxybutyra (steigma) sebagai standar yang

mengalami proses metanolisis yang sama asam tak ada habisnya. Konten PHB diungkapkan

sebagai persentase berat sel kering (%).

A
IM
2.7. Karakterisasi PHB

2.7.1.Analisis termogravimetri (TGA)

R
TE
Suhu dekomposisiTed)( dari sampel PHB yang diekstraksi dan standar adalah

DI
ditentukan menggunakan penganalisis termo TGA7 (Perkin-E,lmUeSrA) pada rentang suhu

30 hingga 900 °C pada laju pemanasan 20 °C / menit inita atmosfer rogen. Kurva % berat
NG

terhadap suhu diperoleh dengan mengamati ee

wah
t kerugian pada rentang tertentu

suhu.
YA

2.7.2.Fourier transform infrared (FTIR)

ip

Gugus fungsi dari sampel yang diekstraksi dan standPaHrdB dianalisis

kr

menggunakan ATR-FTIR (Perkin-Elmer, USA) pada panjang gelombang dari 4000 dan 400 c1m .
US

2.7.3.Resonansi magnetik nuklir (NMR)

AN

NMR dilakukan untuk mempelajari struktur kimia yang diekstraksi dan standarnya
M

PHB. Keduanya1H NMR dan13Spektrum C NMR direkam pada suhu kamar di

kloroform menggunakan spektrofotometer 500 MHz (Br,uS kewitzerland).

2.7.4.Difraksi sinar-X (XRD)

10
 MANUSkrip YANG DITERIMA
Sifat kristal dari film PHB yang diekstraksi dianalisis dengan difraksi sinar-X

(XRD) spektroskopi (The PANalytical X, Pert Pro)thwC i u-Ka (k= 1,5405 ) dalam kisaran

dari 2θ = 1‒70Hai.

2.7.5.Pemindaian mikroskop elektron (SEM)

Struktur mikro, morfologi permukaan dan elemen eknota posisi yang diekstraksi

A
PHB dipelajari menggunakan SEM ditambah dengan spektroskopi sinar-X Energy-edrisipve (EDS)

IM
(Sistem Oxford) pada instrumen Jeol JSM-7600F suepdpw li engan tegangan 20 kV.

R
2.8. Analisis statistik

TE
Paket perangkat lunak statistik Stat-Ease Design Et x(vpersion 7.0.0) (Stat-Ease Inc.,

DI
USA) digunakan untuk menganalisis hasil hidrolisis enzimatik dan validasi
NG
model dianalisis dengan uji-t (p < 0,01) menggunakan software Excel 2016. Pada PHB

percobaan produksi, semua tes dilakukan riplikat di mana mean dan standar
YA

penyimpangan ditentukan. Data dianalisis dengan cara ANOVA dilanjutkan dengan

Analisis perbandingan berganda HSD Post Hoc Tukey adalah IB paket statistik bM SPSS
ip

(versi 21) untuk menentukan signifikansi (p <50)..0

kr
US

3. Hasil dan Pembahasan

3.1. Analisis komposisi limbah kertas kantor (WO biP

o)m
pantat
AN

Kandungan karbohidrat limbah kertas kantor (W ) bOeP sebelum dan sesudah pretreatment
M

dinyatakan sebagai besaran dalam bentuk glucadn xaynlan (Tabel 2). Komposisi dari

WOP yang tidak diberi perlakuan menunjukkan bahwa selulosa, hemicoeslelu, l lignin, abu, dan kelembaban adalah 52,

9,54, 15,32, 18,52 dan 4,24%, masing-masing berdasarkan hak kepemilikan. Analisis yang didapat

setuju dengan nilai yang dilaporkan dalam makalah workwoanste sebelumnya (Dubey et al., 2012).

Namun demikian, variasi dalam komposisi WOP diamati vehden dibandingkan dengan jenis lain

11
 MANUSkrip YANG DITERIMA
kertas seperti majalah, koran, karton, ehtic.hw mengandung jumlah yang wajar

xylan sebagai sumber kayu dan proses pembuatan pulp (gWeat al., 2012). Persiapan kantor

kertas melewati npgulpwi termal dan kimia di sini sebagian besar hemiselulosa

konten dicairkan dalam proses pembuatan pulp KraftRsod (riguez et al., 2017). Namun, setelah

0,5% H2HAI2pretreatment pada 121 ° C selama 30 menit dalam autoclacveell, kandungan ulosa adalah 40%

lebih tinggi dari kertas yang tidak diberi perlakuan (73,28%). Di ohtahnedr , ada penurunan sekitar 41 dan

A
IM
82,9% dalam kandungan hemiselulosa dan lignin, restip velcy. Kandungan karbohidrat yang tersedia

sebagai sumber untuk sintesis PHB adalah sekitar 7 %8..9Hanya 2,61% lignin yang tersisa di

R
WOP setelah pretreatment menyarankan efisiensiH2oDari2pengobatan delignifikasi

TE
biomassa yang sangat penting untuk meningkatkan enzimatis olisis dan mengurangi inhibitor

DI
formasi yang mempengaruhi fermentasi mikroba dalam produksi PHB. Kandungan abu yang tinggi
NG
di kertas kantor yang tidak dirawat adalah karena pengisi usianpgerp seperti kaolin dan tanah liat dan

aditif lainnya (Wang et al., 2012; Rodriguez .e, t2a0l17). Sebagian besar bahan ini telah
YA

hanyut, dan serat kertas muncul sebelum perlakuan yang berbeda (Gbr. 1). Sebagai tambahan,

TGA dilakukan untuk mengevaluasi efek dari2fOH 2pretreatment pada komposisi

ip

perubahan WOP (Gbr. 2). Setelah whetigloss awal karena kelembaban, WOP yang tidak diobati
kr

menunjukkan penurunan berat badan 50% dari berat pada 3C 59w°hile pada tahap yang sama pretreated
US

WOP kehilangan 55%. Di atas 359 °C, penurunan berat badan dari WOP yang sebelumnya dan yang telah diobati adalah sekitar

37,5% dan 45%, masing-masing. Di akhir hega, ttin dia sisa bahan yang tidak diobati
AN

WOP adalah 12,5% pada 990 °C menunjukkan lignin ecn . yang tinggi otn.t Namun, lengkap
M

dekomposisi WOP yang dirawat terjadi pada 942 sig°C

nifying efek pretreatment dari

limbah kertas menggunakan2H HAI2.Pretreatment alkali sekam padi menggunakan 1 M KOa Hucsed 70% dari

penurunan berat badan pada 370 ° C, tidak seperti yang tidak diobati ri alts yang kehilangan 50% meninggalkan 5% dan 20

%, dari bahan, masing-masing, pada akhir h panggung teater (Heng et al., 2017).

Selanjutnya, permukaan ibu yang dirawat saya

iaclsrea sed dan lebih keropos muncul, dan

12
 MANUSkrip YANG DITERIMA
akibatnya, situs internal lebih tersedia, memungkinkan difusi enzim, penyerapan

dan kemudian konversi kertas menjadi gula pereduksi. ,Ahlsigh jumlah toner yang digunakan dalam

pencetakan juga telah dihapus dan dengan demikian jumlah limbah kertas kantor meningkat

hampir dekat dengan kontrol pa kantor yang belum dicetak (pFeigr. 1D).

3.2. Hidrolisis enzimatik menggunakan RSM

A
Dalam penelitian ini, pengaruh beberapa faktor tersebut oe
n hidrolisis enzimatik limbah

IM
kertas kantor dioptimalkan melalui compeod pusat tanda siet (CCD) dari RSM berdasarkan

model yang diperoleh dan kriteria masukan. Tingkat beban berat menurut RSM dalam penelitian ini adalah

R
TE
ditentukan berdasarkan percobaan pendahuluan. T oh
optimasi enzimatik

hidrolisis dilakukan dengan menggunakan enam faktor pada limasvaenl d interaksi mereka telah didefinisikan

dengan menerapkan 40 eksperimen yang ditentukan oleh eml.oS DI ulangan dix dari titik tengah
NG
40 percobaan digunakan untuk menentukan kesalahan percobaan terjadi pada kisaran

percobaan berjalan (Tabel 3). Analisis varianA ce ( VA) untuk hidrolisis enzimatik adalah
TIDAK
YA

diilustrasikan pada Tabel 4. Data respon (hydrisolly%s) dipasang pada model kuadrat dan

diungkapkan dalam Persamaan. (2). Dimana Y adalah singkatan dari thderohl ysis (%), A adalah pemuatan kertas
ip

(%), B adalah agitasi (rpm), C adalah workinogluvme (%) dan D, E dan F adalah
kr

selulase, -glukosidase dan hemiselulase (U/g) masing-masing e-lyv.alue kurang dari 0,1 menunjukkan
US

bahwa istilah model itu signifikan. Dalam pengalaman ini aku

t, B, C, dan D adalah suku-suku model signifikan
AN

yang mengacu pada agitasi, volume kerja, dan as, masing-masing. Juga, ada

interaksi yang signifikan antara AB, AC, AF, CD, ,DaEnd DF, dan efek kuadrat dari
M

2 2
agitasi (B) dan volume kerja (C) signifikan. "Nilai F Kurangnya Kecocokan" dari 34,4

menyarankan ada kemungkinan 9,61% bahwa "LacktoFf-F vai lue" dapat terjadi karena kebisingan.

nilai-nilai digunakan untuk memverifikasi signifikansi ea ocf hkoefisien yang berguna untuk

memahami interaksi timbal balik antara ritm variabel anpto. Nilai P yang lebih kecil

menunjukkan lebih pentingnya correspogndcin efisien. ANOVA untuk enzimatik

13
 MANUSkrip YANG DITERIMA
hidrolisis menunjukkan bahwa model F-nilai 28.0h2icw h signifikan secara statistik pada Prob >

Nilai-F adalah < 0,0001. Hanya ada 0,91% chathnactea ''Model F-value'' yang bisa terjadi

karena kebisingan. "Adeq Precision" mengukur signifikansi rasio kebisingan, dan itu adalah

lebih suka lebih tinggi dari empat. Rasio 196,3 mengacu pada sinyal yang memadai dalam

situasi hidrolisis enzimatik. Modelnya sangat signifikan dan cukup untuk

estimasi variabilitas hoyldyrsis enzimatik dalam kisaran eksperimental

A
si koefisien determinasi

IM
variabel di mana itu bisa menjelaskan 98% dari hasil

(R2) hampir mendekati 1.02(=R0.9844) (Chanasit et al., 2016).

R
Pengaruh interaksi berbagai faktor terhadap hidrolisis enzimatik WOP (sumbu z)

TE
dipertimbangkan dengan merencanakan tiga dimensi (3 ed
sp) kurva permukaan yang buruk terhadap dua

DI
variabel bebas sedangkan faktor lainnya memiliki tingkat t 0. Gambar 3 mengilustrasikan 3D

permukaan respons untuk pemuatan interaksi yang signifikan, agitasi, volume kerja,
NG

selulase, hemiselulase, anβd-glukosidase (AB, AC, AF, CD, DE, dan DF). rinatcetion
YA

agitasi dan pemuatan kertas menunjukkan maximuym drolisis terjadi di dekat yang terendah

kisaran kedua faktor (Gbr. 3A). Untuk meningkatkan pemuatan kertas dalam enzim
ip

hidrolisis, pengurangan volume kerja dilakukan ned seperti yang diamati dari interaksi di
kr

Gambar 3B. Hidrolisis yang lebih tinggi juga diamati pada konsentrasi selulase tertinggi dan
US

volume kerja terendah, hemiselulase, aβn-dglucosidase (Gbr. 3D-F). Meskipun agitasi adalah

dianggap sebagai faktor penting dalam penelitian ini, Leitual. (2010) melaporkan bahwa itu tidak signifikan
AN

faktor sementara selulase adalah faktor yang signifikan w hidrolisis kertas daur ulang dilakukan
M

menggunakan tiga faktor (suhu, agitasi, dan se) di mana dua faktor digunakan dalam

penelitian ini (agitasi dan konsentrasi selulase) e. hidrolisis enzimatik berkisar antara 14,0

menjadi 82,2%, sedangkan kadar gula pereduksi maksimum adalah 23 g/L. Sebagian besar dari

hasil eksperimen mendekati kisaran rendah grafik ef mungkin karena rendah

konsentrasi ketiga enzim (50 U/g) digunakan eksperimennya. Rentang diputuskan

14
 MANUSkrip YANG DITERIMA
berdasarkan hasil awal dan juga berdasarkan tinjauan pustaka pada hal-hal lain

hidrolisis biomassa lignoselulosa yang dapat menghasilkan kurang dari minimum yang digunakan dalam ini

studi (20 U/g) (Wang et al., 2012). Ini bisa disebabkan oleh sifat lembut WOP yang

tidak seperti kebanyakan biomassa lignoselulosa yang memiliki struktur wdper setelah penggilingan menyebabkan lebih sedikit

luas permukaan dan pembebanan padat substrat dapat mencapai 5%.

A
Faktor yang dioptimalkan untuk hidrolisbistain enzimatik WOP dari model adalah sebagai:

IM
berikut: pemuatan kertas 5,0 g/L; agitasi 242 rpw mo; volume rking 20%; selulase 49,82

U/g; -glukosidase 20,9 U/g; hemiselulase 29,5 U/g. T mhoedel divalidasi dengan menjalankan

R
TE
kondisi optimum secara eksperimental, 88,18% o lufcgan dihidrolisis dan dibandingkan

dengan hasil yang disarankan oleh model (87,01 %in)guts-test (p <0,01) yang menunjukkan tidak ada

perbedaan yang signifikan. DI

NG

= +30,43 0,84 4,10 14,53 + 6,31 0,12! + 0.77# + 3.25 −

6,55 + 1,52 1,14 ! 2.55 # 0.85 + 1,15 0,15 ! + 1,87 #
YA

8,89 + 1,59 ! + 0.86 # 3.13 ! 3.81# + 1.73!# + 0.95%+ 3.51%+

5.84%+ 0,41%+ 1,21!%+ 1.85#%…………………………………………. Persamaan. (2)
ip

3.3. Optimalisasi sumber nitrogen dan rasio C/N untukHr B produksi P

kr

Untuk meningkatkan pertumbuhan bakteri dan akumulasi PHB hidrolisat WOP,

US

sumber nitrogen yang berbeda dan rasio C/N t dia efek dari berbagai sumber nitrogen

termasuk anorganik dan organik diuji akumulasi massa boion dan PHB
AN

produksi olehB. saccharia(Gbr. 4A & B). Di antara sumber nitrogen yang diuji esa, maksimum
M

akumulasi biomassa dan PHB terjadi pada cfas(N eHo4)2JADI4, NH4Cl dan ekstrak ragi

diubah minimal media. Tidak ada perbedaan yang signifikan di antara mereka dalam sel kering

berat (DCW) dan kandungan PHB; Namun, ada konten PHB wamsamaksimum di (N4H)2JADI4

media yang diubah. Kehadiran earcact anion sulfat esl pembuatan serapan nitrogen

amonium sulfat sumber nitrogen yang disukai (Cshitaneat al., 2016). Setelah 48 jam

15
 MANUSkrip YANG DITERIMA
fermentasi, biomassa sel yang diperoleh adalah 3,2,94 2a.n9d8 g/L, sedangkan kandungan PHB adalah

34,96, 30,75 dan 29,65% untuk (N 4)H

2JADI4, NH4Cl dan ekstrak ragi, masing-masing (Tabel 5).

Suplementasi media dengan sumber nitrogen lainnya N l H4TIDAK3dan pepton digunakan dalam ini

studi menghasilkan biomassa yang sangat tinggi dengan lPw konten HB. Sintesis PHB terutama adalah

dipengaruhi oleh sumber nitrogen dan kekurangannya incythe media produksi mengarah untuk menghasilkan

asetil-KoA dengan menginduksi siklus TCA (Radhika andurM ugesan, 2012). Annamalai dkk.,

A
(2018) telah menunjukkan pentingnya (4N)2H

IM
JADI4dalam mendukung pertumbuhan yang mengarah pada

akumulasi PHB menggunakan hidrolisat WOP sebagai sumber bneitrogen bC kamuupriavidus

R
nekator. Radhika dan Murugesan (2012) menemukan bahwa gneitnrodefisiensi dalam hidrolisat

TE
media menyebabkan untuk mengurangi pertumbuhan bakteri tidak seperti thn media suplemen glukosa etseytik

yang meningkatkan pertumbuhan mikroba dan PHB acculam

DI olehC. necato.rKarena itu,
tio

optimalisasi rasio C/N merupakan langkah penting untuk mengatasi produksi mikroba PHB. Di
NG

penelitian ini, pengaruh berbagai rasio C/N ,(120, 40, 60, dan 80) terhadap pertumbuhan dan PHB
YA

produksi diselidiki menggunakan (N 4)2HSO4. Hasilnya menunjukkan bahwa pertumbuhanBHai.f

saccharlebih tinggi pada rasio C/N rendah yang mencapai mauxm dengan rasio C/N 20 (4,09
ip

g/L), namun setelah itu, biomassa sel mulai menurun drastis. penyimpanan TphHeB
kr

kemampuan kultur mikroba ditingkatkan setelah kekurangan nitrogen yang lebih tinggi dengan
US

pembatas (NH4)2JADI4ketersediaan, menghasilkan akumulasi polimer yang lebih tinggi secara intraseluler oleh

menekan pertumbuhan mencapai maksimum pada rC o

di/iN dari 80 (65,23%) (Gbr. 4C) di mana
AN

tidak ada perbedaan yang signifikan antara rasio C/N tlharsete. Tidak seperti yang biasa digunakan
M

bakteri yang digunakan untuk produksi PHAB n.,megatriummemiliki perilaku yang berbeda dimana yang tertinggi

Akumulasi PHB terjadi pada rasio C/N yang rendah sekitar 70% dari DCW (Faccin et al.,

2009). Meskipun membatasi nitrogen dalam mediudmesirable untuk sintesis PHB tinggi,

kekurangan ekstrim sumber nitrogen bukanlah praebfeler karena digabungkan dengan polimer

degradasi. Rasio C/N yang tinggi menyebabkan pertumbuhan sel binithioi n dan kemudian curah yang buruk

16
 MANUSkrip YANG DITERIMA
konsentrasi produk (Patnaik, 2006; Yatngal.e, 2010; Lathwal et al., 2015). Ini

hasil penelitian setuju dengan penelitian lain dimana rasio C/N thteimoapl adalah antara 10 dan 20

yang mendukung produksi polimer maksimum n(P aiakt, 2006). Lathwal dkk., (2015)

menunjukkan bahwa rasio C/N 20 mendukung ma produktivitas uxmimPHB jika terjadi

glukosa sintetis diubah media sebagai karbon sa pada

ud
rc(enNH4)2JADI4sebagai sumber nitrogen.

Annamalai dkk. (2018) juga menemukan bahwa C/Nioraotf 20 adalah kondisi optimum dan

A
IM
memberikan produktivitas tertinggi di antara C/Niorssatusing lainnyaC. necato.r

3.4. Produksi PHB menggunakan hidrolisat WOP

R
TE
H2HAI2-hidrolisat kertas kantor yang diolah terlebih dahulu terutama mengandung glukosa dengan

jumlah xilosa yang wajar. Oleh karena itu, etsiasletno mempelajari asimilasi gula

DI
dihasilkan dari kertas bekas menjadi PHB melalui fermentasi ombicarl. Dalam studi kamiB,.
NG
sacchar(DSM 17165) digunakan untuk menyelidiki kemampuan penggunaan gula moixfed dari

Hidrolisat WOP untuk pertumbuhan sel dan syn PHB duduk di bawah kondisi optimal.
YA

Pertumbuhan biomassa, akumulasi PHB, dan kandungan gula om

n ditentukan selama

perjalanan waktu fermentasi (Gbr. 5). C-WOPH owsehd 35,6 % PHB, 4,39 g/L DCW dan
ip

1,56 g/L PHB polimer di mana hampir 50% gula masuk digabungkan ke dalam sel untuk pertumbuhan
kr

tidak

dan akumulasi PHB setelah inkubasi 72 jam. Thehehsigt biomassa (3,63 g/L) dan PHB
US

akumulasi (44,2%) dan pengurangan sugializr maksimum (92,1%) diamati setelah

AN

48 jam budidaya saat menggunakan D-WOPH. Redugcisnugars telah sepenuhnya dikonsumsi dalam

media kultur pada 72 jam dan kemudian menyebabkan degradasi akumulasi PHB menjadi
M

digunakan untuk pertumbuhan sel mencapai 3,95 g/L. Polimer hasil juga mencapai maksimum

saat ini (YPHB/suga= r0,15). Disarankan bahwa WOP hidrolisat fravth oe

kamu biomassa

produksi daripada akumulasi PHB yang dapat digunakan dari biomassa residu yang tinggi

(Xres) mencapai 2,83 dan 2,03 g/L untuk C-WOPH dan D-WOPH, masing-masing di mana residu

17
 MANUSkrip YANG DITERIMA

biomassa diidentifikasi sebagai perbedaan antara w kering kandungan celilght dan PHB (g/L)Xr(es=

DCW−PHB).

PemanfaatanBurkholderiaspesies untuk produksi PHA telah banyak digunakan ed

biomassa lignoselulosa yang berbeda (Tabel 6) yang memiliki kemampuan yang sangat aktif untuk polimer

akumulasi.B. sacchariadi antara spesies lain menunjukkan polimerup tertinggi kehebatan

menggunakan hidrolisat jerami gandum melalui fed-batcm h efenrtasi memberikan 105 g/L PHB (Cesário

A
IM
dkk., 2014). Namun, pemanfaatan bagashsyedrolysate untuk produksi PHB melalui

fermentasi batch hanya mengumpulkan 2,73 g/L ofpth oe

lymer yang setuju dengan hasil

R
penelitian ini (Yu dan Stahl, 2008). Kurang akukulu polimer saya
olehB. sacchariajika dibandingkan

TE
keC. nekatorbisa jadi karena sensitivitasnya terhadap inhibitor foduinn WOP hidrolisat seperti

senyawa fenolik (Annamalai et al., 2018). DI

ole
NG
3.5. Karakterisasi bioypm yang diproduksi secara mikroba

Sifat termal biopolimer murni dariB m. sacchardipelajari melalui

YA

analisis termogravimetri (TGA) untuk mengevaluasi termkekuatan dari PHB yang diekstraksi. Itu

PHB yang sama diproduksi oleh mikroorganisme yang berbeda memiliki sifat termal yang berbeda
ip

(Heng et al., 2017). Gbr. 6A menunjukkan TGA proofiflePHB disintesis bB kamu. sakhari,dan
kr

standar PHB (Sigma). Pada tahap awal eogf rdadation (130‒ 230 °C), sedikit berat
US

kehilangan terjadi oleh dehidrasi adsorbelvdenstos dalam kasus PHB yang diekstraksi.
AN

Awal degradasi polimer adalah karena pemutusan rantai torathnedom dari C=O dan

ikatan C‒O. Tahap kedua penurunan berat badan disebabkan peningkatan dekomposisi
M

suhu hingga ~ 300 °C menghasilkan formatio f asam nkrotonat dan berkontribusi pada massa

degradasi (Hablot et al., 2008; Pradhan et al.1,72 ) . Tidak seperti standar PHB, PHB

berasal dariB. sacchariamenunjukkan stabilitas yang lebih tinggi dengan bobot sisa yang tinggi pada akhir

proses (35‒0600 °C) yang membutuhkan waktu lama untuk mencapai hampir 1%00degradasi, mungkin

karena pengotor. Polimer konvensional m stabilitas termal haosre ditunjukkan oleh5%T

18
 MANUSkrip YANG DITERIMA
dan T10%mencapai 282,6 dan 286,1 °C, masing-masing mencapai 191,9 dan 263,3 °C dalam

kasus PHB yang diekstraksi. Namun demikian, pada adeagtiron yang lebih tinggi, sesuai dengan50T%

suhu, PHB yang diekstraksi menunjukkan kemiripan yang hampir sama dengan PHB/STD (~ 297 °C).

Di sisi lain, termogravir diferensial kurva es(tDTG), yang diturunkan

dari kurva TGA, menunjukkan bahwa suhuecd authe tingkat degradasi maksimum dari

A
matriks polimer biopolimer PHB disintesis b Bkamu. sacchardan standar PHB

IM
(Sigma) (Gbr. 6B). Hasil penelitian menunjukkan bahwa kedua standar PHB dan standar memiliki hubungan yang sangat dekat

suhu yang sesuai dengan degrandartaiote maksimum sekitar ~ 300 °C yang

R
TE
menjelaskan stabilitas termal PHB synthesizbeydB. sacchariaregangan.

Informasi struktural dari PHo . yang diekstraksi

DI
media yang diubah hidrolisat dianalisis1dHbaynd13spektrum C NMR. Itu
BmfrB. sacchariadibudidayakan di WOP

13C menunjukkan
NG

empat atom karbon berbeda yang ada dalam struktur PHB tidak termasuk karbonil (C=O), metana

(CH), metilen (CH 2) dan metil (CH 3) kelompok (Gbr. S1A). Sementara puncak ganda1hin
YA

Spektroskopi NMR dekat 1,3 (1,27 dan 1,28 ppm) w en

diretribusikan ke gugus metil dan
bersama
ip

doublet dari puncak quadruplet (2‒.24.62 ppm) dikaitkan dengan kelompok metilen. Puncak

13C
kr

multipleks (5.2‒45.27) ditetapkan untuk methan - eC H

( ) kelompok (Gbr. S1B). Keduanya
US

dan1Spektrum H jelas terbukti bahwa polymetraecxted dariB. sacchariamelalui

fermentasi glukosa adalah homopolimer PHB dan juga sesuai dengan standar
AN

Spektrum PHB dan spektrum PHB yang dilaporkan (Liul.,e2t 0a16b; Pradhan et al., 2017).
M

Gambar 7 mengilustrasikan spektrum FTIR dari standar ekstraksi PHB yang disintesis

dari limbah kertas kantor hidrolisat (WOP) yang cm Ha

etd erat dengan spektrum NMR. Itu

pita serapan kuat dari kristal karbognryolup (C=O) dari gugus ester yang ditemukan di

struktur polimer PHB muncul di 1720.3kan91.cTm data spektral dari PHB . yang diekstraksi

dikonfirmasi oleh pita ester peregangan CO pada 1055,791cm dan pita amorf di

19
 MANUSkrip YANG DITERIMA
polimer PHA (C Peregangan simetris O‒C) muncul pada 1183,2kan2 1(cBmayarı dan

Severcan, 2005). Band di sekitar 1379,5kan71icsmattributed ke metil (–C3H) kelompok. Itu

vibrasi regangan muncul pada 1277,681ca mnd 2930,54 cm

1mewakili metilen

(‒CH2) dan metana (‒CH) masing-masing. Hasil ini cocok dengan yang dilaporkan secara murni

studi (Bayarı dan Severcan, 2005; Zhou et a1 l.,5;20Azizi dkk., 2017; Pradan dkk.,

2017).

A
IM
Pola difraksi sinar-X (XRD) dari PHB diperoleh dari hidrolisat WOP

dibandingkan dengan standar PHB (Sigma) diilustrasikan pada Gambar 8. Spektrum XRD dari

R
TE
polimer yang diekstraksi dari WOP menunjukkan lima prominepnetak di mana korespondensi 2

berada di (020) pada 13,5°, (110) pada 16,9°, (101) pada 21,4°,1()1a1t 22,5°, dan (121) pada 25,5°. Itu

DI
Pola XRD puncak-puncak PHB yang diekstraksi ternyata mirip dengan PHB standar (Sigma).
NG
Puncak intens maksimum yang sesuai toat2 (020) menunjukkan sifat kristal

PHB. Namun, ada penurunan yang berbeda dan

t puncak fraksi yang diekstraksi
YA

polimer dari hidrolisat WOP dibandingkan dengan stradndPaHB yang menunjukkan penurunan

kristalinitas dan mengacu pada polimer natoufrethe amorf (Saratale dan Oh, 2015;
ip

Salgaonkar dan Bragança, 2017). Pola XRD yang lain erat dengan yang sebelumnya
kr

melaporkan studi tentang PHB yang dihasilkan dari lignocelliuclowsaste seperti ampas tebu
US

(Salgaonkar dan Bragança, 2017), jerami padi (Sle aratnad Oh, 2015). foto-foto SEM dari
AN

polimer yang diekstraksi diambil, dan komposisi unsur detafiltsheo oleh EDS

mikroanalisis menunjukkan bahwa unsur karbon dan oksigen tetap memiliki bobot
M

persentase masing-masing 76,7 dan 21,3% (F)ig 9

3.6.Analisis biaya produksi PHB

Penilaian biaya produksi PHB telah dilakukan berdasarkan hasil ini

belajar. Memiliki target produksi 1 kg PHBBb.kamusaccharmenggunakan kertas bekas sebagai

20
 MANUSkrip YANG DITERIMA
substrat, 31,164 kg kertas bekas diperlukanchww hias diperkirakan 1,60 USD. Untuk

hidrolisis enzimatik, selulase (49,82 U/g), hem lluiclaese (29,5 U/g) dan -glukosidase

(20,9 U/g) digunakan dengan biaya 0,155, 0,367.0a.0 n8d4 USD, masing-masing untuk 31.164 kg

substrat (https://www.alibaba.com). Ammoniumlfaste digunakan sebagai sumber nitrogen

biaya 0,084 USD (https://www.icis.com) di C/Nioraotf 20. Namun, di lokasi produksi

enzim selulase dan substitusi amonium tseulfw aith minuman keras jagung curam atau lainnya

A
sumber nitrogen pada tingkat skala industricig secara signifikan mengurangi biaya produksi (Liu

IM
dkk., 2016a). Selain itu, pengeluaran lainnyacluidning utilitas dan tenaga kerja & pengawasan

R
diperkirakan 2,49 dan 0,31 USD menghormati (ivLelvyett et al., 2016). Jadi, total biaya

TE
produksi PHB dari C-WOPH adalah 5,09 USD/kg, aD n-dWOPH adalah 3,98 USD/Kg

dihasilkan dari akumulasi PHB tertinggi di th-e

DI WD
media OPH. Biaya produksi
NG
PHA adalah 8.6 USD/kg menggunakan glukosa sebagai karbonrcseo, u5.1‒7.9 USD/kg dengan whey, dan

3.7‒11.9 USD/kg ketika sukrosa digunakan sebagai substre avteet(tLet al., 2016). Oleh karena itu,
YA

biaya produksi PHB (3,98 USD/kg) menggunakan wastepepra sebagai substrat bBkamu. saccharadalah

lebih murah daripada menggunakan substrat lain di additiobnetin og cara ideal untuk membuang sampah.
ip

Oleh karena itu, kertas bekas dapat dimanfaatkan sebagai bahan baku untuk produksi PHB.
kr

4. Kesimpulan
US

Studi ini telah menunjukkan potensi tawon ou

- ct proses sintesis PHB
ter-otd
AN

memanfaatkan H2HAI2dirawat WOP. Pretreatment meningkatkan kandungan okselusi WPO dan

menghilangkan lignin dan abu. Hidrolisis enzimatik paeter WOP dioptimalkan

M

melalui CCD termasuk pemuatan kertas, agitasi, volume kwinogr, dan enzim

konsentrasi selulase, hemiselulase, a -ngdlucosidase. Diantaranya, agitasi, kerja

volume, dan selulase adalah faktor yang signifikan se hasil hidrolisat WOP adalah

dimanfaatkan sebagai sumber karbon untuk produksi PHBBb.kamusacchar,sayadan kondisi produksi

(sumber nitrogen, rasio C/N, dan konsentrasi WOP ioenr)e dioptimalkan. Amonium sulfat dan

21
 MANUSkrip YANG DITERIMA
Rasio C/N 20 adalah kondisi terbaik untuk PHBntshyesis, dan akumulasi tertinggi dari

PHB (44,2%) telah tercapai saat D-WOPH uwsaesd. Fisikokimia

sifat-sifat PHB yang diekstraksi sebanding t polimer PHB komersial. Oleh karena itu,

WOP terhidrolisis dapat digunakan secara efisien sebagai alternatif n substrat untuk mengurangi produksi

biaya PHB. Teknologi limbah menjadi kekayaan yang ramah lingkungan dan hemat biaya ini dapat memenuhi

tujuan pembangunan berkelanjutan dari produksi PHB.

A
IM
Ucapan Terima Kasih

Para penulis mengucapkan terima kasih kepada Central lAPenelitian ytnis dan Terapan

R
Unit (CAARU) di Universitas Sultan Qaboos untuk akses ke fasilitas analisis

TE
termasuk GC-FID, XRD, SEM, dan NMR. Penulismengakui akses ke

DI
fasilitas analisis yang disediakan oleh Nano Lab di Cogleleof Engineering untuk TGA dan FTIR

analisis dan Sekolah Tinggi Pertanian dan Kelautan S untuk HPLC.

NG
sekali

Sumber pendanaan
YA

Penelitian ini didukung oleh hibah dari TheeaRrcehs Council (TRC) Oman (Kode:

ORG/EBR/14/003).
ip

Pernyataan minat:
kr

Para penulis menyatakan bahwa mereka tidak memiliki potensi untuk terkena minat.
US

Referensi
AN

Amulya, K., Reddy, MV, Rohit, MV, Mohan, S.V2 . , 016. Air Limbah sebagai terbarukan
bahan baku untuk produksi bioplastik: mengerti peran reaktor
lingkungan mikro dan pH sistem. J. Bersih. Melecut. , 1142618–4627. https://
M

doi.org/10.1016/j.jclepro.2015.08.009
Anjum, A., Zuber, M., Zia, KM, Noreen, A., AnjumM, .N., Tabasum, S., 2016. Mikroba
produksi polihidroksialkanoat (PHA) andciotspolymers: Sebuah tinjauan
kemajuan terbaru. Int. J.Biol. Makromol. 89, 161-174. https://doi.org/10.1016/
j.ijbiomac.2016.04.069
Annamalai, N., Al-Battashi, H., Al-Bahry, S., Sivuamkar, N., 2018. Produksi biorefinery dari
poli-3-hidroksibutirat menggunakan rhoylydsate kertas bekas sebagai bahan
baku untuk fermentasi mikroba.J. Bioteknologi.265, 25–30.
https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.2017.11.002

22
 MANUSkrip YANG DITERIMA
Annamalai, N., Rajeswari, MV, Balasubramanian,,2T0.14. Sakarifikasi enzimatik
jerami padi yang diolah dengan selulase yang dihasilkan dari cilB luas carboniphilus CAS 3
memanfaatkan limbah lignoselulosa melalui statistiklicoaptimization. Biomassa Bioenergi
68, 151–160. https://doi.org/10.1016/j.biombioe.42.016.018
Annamalai, N., Sivakumar, N., 2016. Produksi lyp hidroksibutirat dari dedak gandum
hidrolisat menggunakan Ralstonia eutropha melalui micarlofbermentation. J. Bioteknologi. 237,
13–17. https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.200196.0. 01
Arias, DM, Uggetti, E., García-Galán, MJ, Gar,cí J., 2018. Produksi
polihidroksibutirat dan karbohidrat dalam campuran Kultur bakteri: Pengaruh
pembatasan nutrisi dan fotoperiode. Bioteoclh baru. n 42, 1–11. https://
doi.org/10.1016/j.nbt.2018.01.001

A
Azizi, N., Najafpour, G., Younesi, H., 2017. Perlakuan ulang asam dan enzimatik
sakarifikasi rumput laut coklat untuk produksi polyhydroxtybraute (PHB)

IM
menggunakan Cupriavidus necator. Int. J.Biol. Makromol. 101, 021 9–1040.
https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2017.03.184

R
Bailey, MJ, Biely, P., Poutanen, K., 1992. Pengujian metode inatebrol untuk pengujian
aktivitas xilanase. J. Bioteknologi. 23, 257–270. sh:t/t/pdoi.org/10.1016/0168-

TE
1656(92)90074-J
Bayarı, S., Severcan, F., 2005. Studi FTIR dari biopolimer yang dapat terurai: P(3HB), P(3HB-
co-4HB) dan P(3HB-co-3HV). J. Mol. Struktur. 744–747.529–534. https://doi.org/
10.1016/j.molstruc.2004.12.029
DI
Cesário, MT, Raposo, RS, de Almeida, MCMvDa.,n Keulen, F., Ferreira, BS, da
Fonseca, MMR, 2014. Peningkatan bioproduksi olfy-p 3o - hidroksibutirat dari
NG
hidrolisat lignoselulosa jerami gandum. Bciohtneol baru. 31, 104-113. https://
doi.org/10.1016/j.nbt.2013.10.004
Chanasit, W., Hodgson, B., Sudesh, K., Umsakul, 2K0,16. produksi yang efisien dari
YA

polihidroksialkanoat (PHA) dari Pseudomonas mceina doPSU menggunakan biodiesel

limbah cair (BLW) sebagai satu-satunya sumber karbon. Bi.ioB sciotechnol. Biokimia. 80,
1440–1450. https://doi.org/10.1080/09168451.201568.1 61 28
Ciesielski, S., Mo żejko, J., Pisutpaisal, N., 2015. Minyak tumbuhan sebagai pisroinm g substrat untuk
ip

produksi polihidroksialkanoat. J. Bersih. ProBdri.d, ges untuk masa depan yang lebih berkelanjutan:
Alie University (EMSU) dan
kr

Bergabung dengan Pengelolaan Lingkungan untuk Sunsatb

konferensi Meja Bundar Eropa untuk Produksi Konsumsi Berkelanjutan (ERSCP)
106, 408–421. https://doi.org/10.10.j1 cl6e/pj ro.2014.09.040
US

Dubey, AK, Gupta, PK, Garg, N., Naithani, S0,12. Produksi bioetanol dari limbah
asam kertas hidrolisat pra-perlakukan dengan xylose fenrtm misalnya Pichia stipitis. Karbohidrat.
Polim. 88, 825–829. https://doi.org/10.1016/j.caorlb . 2p012.01.004
AN

Faccin, DJL, Martins, I., Cardozo, NSM, RecRh.,, Ayub, MAZ, Alves, TLM,
Gambetta, R., Resende Secchi, A., 2009. Rasio OptiminzaotifoC:N dan sumber karbon
awal minimal untuk poli(3-hidroksibutirat)od penusukan oleh Bacillus megaterium.
M

J. Kimia. teknologi. Bioteknologi. 84, 1756–1761. h/t/tdposi:.org/10.1002/jctb.2240

Ghose, TK, 1987. Pengukuran selulase acietisv.itPure Appl. Kimia 59, 257–268.
https://doi.org/10.1351/pac198759020257
Gomez, JGC, Rodrigues, MFA, Alli, RCP, rTeosr, BB, Netto, CLB, Oliveira, MS,
Silva, LF da, 1996. Evaluasi bakteri gram negatif tanah yang menghasilkan
asam polihidroksialkanoat dari karbohidrat anodpp asam ionik. aplikasi Mikrobiol.
Bioteknologi. 45, 785-791. https://doi.org/10.1000 72
/s5030050763
Hablot, E., Bordes, P., Pollet, E., Avérous, L.,082.0 Termal dan termo-mekanis
degradasi sistem muhlatispe berbasis poli(3-hidroksibutirat). Polim. Turunkan.
Menusuk. 93, 413–421. https://doi.org/10.1016/j.polyem
grdadstab.2007.11.018

23
 MANUSkrip YANG DITERIMA
Heng, K.-S., Hatti-Kaul, R., Adam, F., Fukui, Tu,dSesh, K., 2017. Konversi sekam padi
menjadi polihidroksialkanoat (PHA) melalui tiga langkah ce psros: alkalin yang dioptimalkan
pretreatment, hidrolisis enzimatik, dan biosyntshebsyi Burkholderia
cepaciaUSM (JCM 15050). J. Kimia. teknologi. Bioteknologi. 92, 1008–. https://
doi.org/10.1002/jctb.4993
Isola, C., Sieverding, HL, Raghunathan, R., SM ib.iP, . , Webster, DC, Sivaguru, J., Batu,
JJ, 2017. Penilaian siklus hidup fotodegra bahan meric edpaoblyl berasal dari
sumber daya hayati terbarukan. J. Bersih. Melecut. 142, 293454–.2 https://
doi.org/10.1016/j.jclepro.2016.10.177
Kavitha, G., Rengasamy, R., Inbakandan, D., 201o8ly.hPydroxybutyrate produksi dari
sumber laut dan penerapannya. Int. J.Biol. cM roamol. 111, 102–108.

A
https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2017.12.155
Koller, M., Maršálek, L., de Sousa Dias, MM, Bnraeugg, G., 2017. Menghasilkan mikroba

IM
polihidroksialkanoat (PHA) biopoliester secara siunsatbale. Biopolim. Uni Eropa
37, 24-38. https://doi.org/10.1016/j.nbt.2.01 56. 001

R
Lathwal, P., Nehra, K., Singh, M., Jamdagni, Pn, aR,aJ.S., 2015. Optimalisasi Budaya
Parameter untuk Produksi Polihidroksibutirat Maksimum dengan Strain Bakteri

TE
Terpilih yang Diisolasi dari Tanah Rizosfer. Pol. Jic.rMobil. 64, 227–239.
Levett, I., Birkett, G., Davies, N., Bell, A., Lafnogrd, A., Laycock, B., Lant, P., Pratt, S.,
2016. Penilaian tekno-ekonomi produksi poly-3-hydruotxyyrabte (PHB) dari metana
DI
—Kasus untuk bioprocegs.sJin termofilik. Mengepung. Kimia Ind. 4, 3724–3733.
https://doi.org/10.1016/j.jece.2016.3037.0
Liu, Q., Cheng, K., Zhang, J., Li, J., Wang, G.1, 02.0Optimasi statistik daur ulang-
NG
hidrolisis enzimatik kertas untuk pengorbanan dan fermentasi simultan melalui
desain komposit pusat. aplikasi Biokimia. Biotek. n 1o
6l0, 604–612.
https://doi.org/10.1007/s12010-008-8446-2
YA

Liu, G., Zhang, J., Bao, J., 2016a. Biaya enzim evaluatifoncellulase untuk skala industri
produksi etanol selulosa berdasarkan pemodelan eAnspPlus yang ketat. Bioproses
Biosis. Ind. 39, 133-140. https://doi.org/10.10 s00 7/449-015-1497-1
Liu, X.-J., Zhang, J., Hong, P.-H., Li, Z.-J., 20b1. 6Produksi dan karakterisasi mikroba
ip

poli-3-hidroksibutirat oleh Neptunomonas antaa rc.ticPeerJ 4, e2291.

https://doi.org/10.7717/peerj.2291 Lopes,
kr

MSG, Gosset, G., Rocha, RCS, GomG ez.C

, J.,. Ferreira da Silva, L., 2011. PHB
biosintesis pada mutan represi katabolit kB houlderia sacchari. Curr.
US

Mikrobiol. 63, 319–326. https://doi.org/10.1007/2s8 04 0-011-9981-6

Nonato, RV, Mantelatto, PE, Rossell, CE, 2.0I0n1produksi biodegradable terintegrasi
plastik, gula dan etanol. aplikasi Mikrobiol. Biohte ncol. 57, 1-5.
AN

Parry, NJ, Beever, DE, Emyr, O., VandenbergI.h, eV,an Beeumen, J., 2001. Biokimia
karakterisasi dan mekanisme kerja thoesrta mbleβ-glucosidase dimurnikan
dari Thermoascus aurantiacus. Biokimia. J.353.12177.–
M

Patnaik, PR, 2006. Optimalisasi dispersi untuk meningkatkan produksi PHB secara fed-batch
budaya Ralstonia eutropha. Bioresour. Techno9l.7, 1994–2001. https://doi.org/
10.1016/j.biortech.2005.09.027
Pradhan, S., Borah, AJ, Poddar, MK, DikshitK, .,P.Rohidas, L., Moholkar, VS, 2017.
Produksi mikroba, ekstraksi berbantuan ultrasound, dan karakterisasi
biopolimer polihidroksibutirat (PHB) dari terrea sltri(P. hysterophorus) dan
gulma air (E. crassipes) invasif. Sumber daya hayati hn Tol., Edisi Khusus tentang
Konferensi Internasional tentang Tren Terkini dalam Bcihonteology & konferensi pasca
ICCB-2016 tentang Strategi untuk Perlindungan Lingkunganncatind Management (ICSEPM-
2016) 242, 304–310. https://doi.org/10.1016/j.beicohrt.2017.03.117

24
 MANUSkrip YANG DITERIMA
Radhika, D., Murugesan, AG, 2012. Bioproduksi, optimasi atistik dan
karakterisasi plastik mikrobial (poli 3-hiksdirobutirat) menggunakan berbagai
hidrolisat eceng gondok (Eichhornia crasss) sumber karbon tunggal. Bioresour.
teknologi. 121, 83–92. https://doi.org1/1001.6/j.biortech.2012.06.107
Ray, S., Prajapati, V., Patel, K., Trivedi, U., 2 60
. 1Optimasi dan karakterisasi PHA
dari isolat Pannonibacter phragmitetus ERC8 limbah usgilnygcerol. Int. J.Biol.
Makromol. 86, 741–749. https://doi.org/10.1016b/ijo . ijmac.2016.02.002
Rodriguez, C., Alaswad, A., El-Hassan, Z., Olab.iG , SEBUAH
. , 2017. Perlakuan awal mekanis dari
limbah kertas untuk produksi biogas. Pengelolaan Sampah. 6185, 7-164.
https://doi.org/10.1016/j.wasman.2017.06.040
Sabarinathan, D., Chandrika, SP, VenkatramanE,aPs.w , aran, M., Sureka, CS, Preethi, K.,

A
2018. Produksi Polihidroksibutirat (PHB) dari Pmseudomonas plecoglossicida
dan Aplikasinya dalam Deteksi Kanker. Aku

IM
nf.orMed. Tidak terkunci 11, 61–67.
https://doi.org/10.1016/j.imu.2018.04.009
Salgaonkar, BB, Bragança, JM, 2017. Pemanfaatan Ampas tebu oleh

R
Halogeometricum borinquense Strain E3 untuk Biosysnitshe dari Poli(3-hidroksibutirat-
co-3-hidroksivalerat). Bioteknologi 4, 50.

TE
https://doi.org/10.3390/bioengineering4020050
Saratale, GD, Oh, M.-K., 2015. Karakterisasi pooly-3-hydroxybutyrate (PHB)
diproduksi dari Ralstonia eutropha menggunakan alkaelti-rp bahan baku biomassa. Int. J.

Silva, LF, Taciro, MK, Raicher, G., Piccoli, AR.M

DI
Biol. Makromol. 80, 627–635. https://doi.org/10.1 60 /j.1ijbiomac.2015.07.034
. . , Mendona, TT, Lopes, MSG,
Gomez, JGC, 2014. Perspektif pada producotfiopnolyhydroxyalkanoates di
NG
biorefineries terkait dengan produksi asrugand etanol. Int. J.Biol. Macromol.,
Edisi Khusus: Biopolimer yang dapat terbiodegradasi71, 2–7. https://doi.org/
10.1016/j.ijbiomac.2014.06.065
YA

Silva, LF, Taciro, MK, Ramos, MEM, Carter.,MJ., Pradella, JGC, Gomez, JGC,
2004. Bayctberia produksi poli-3-hidroksibutirat (P3HB) dari hidrolisat xilosa,
glukosa dan ampas tebu. J.Ind.Micl.roB bioteknologi. 31, 245–254.
ip

https://doi.org/10.1007/s10295-004-0136-7
Van-Thuoc, D., Quillaguamán, J., Mamo, G., Mattoians,sB., 2008. Pemanfaatan pertanian
residu untuk produksi poli(3-hidroksibutirat) H byalomonas boliviensis LC1. J.
kr

aplikasi Mikrobiol. 104, 420–8. https://doi.org/10.111/j1.1365-2672.2007.03553.x Wang,

G., Mu, Y., Yu, H.-Q., 2005. Response surfancaelysis untuk mengevaluasi pengaruh
US

pH, suhu dan konsentrasi substrat pada aktideogenesis air limbah kaya sukrosa.
Biokimia. Ind. J.23, 175-184. httposi.:o//rdg/10.1016/j.bej.2005.01.002 Wang, L.,
Templer, R., Murphy, RJ, 2012. Hidrolisis enzimatik highi-dssolloading
AN

kertas bekas untuk produksi biofuel. aplikasi Energi 9, 9 23–31. https://

doi.org/10.1016/j.apenergy.2012.03.045
Yang, Y.-H., Brigham, CJ, Budde, CF, BoccazPz.i,, Willis, LB, Hassan, MA, Yusof,
M

ZAM, Rha, C., Sinskey, AJ, 2010. Optimasi komponen media pertumbuhan untuk
produksi polihidroksialkanoat (PHA) dari organacids oleh Ralstonia eutropha.
aplikasi Mikrobiol. Bioteknologi. 87, 2037–2045. http/dso
:/i.org/10.1007/s00253-010-
2699-8
Yu, J., Stahl, H., 2008. Pemanfaatan mikroba anbdiopolyester sintesis ampas tebu
hidrolisat.Bioresour.Technol.99, 8042–8048.
https://doi.org/10.1016/j.biortech.2008.03.071
Yuan, X., Cao, Y., Li, J., Wen, B., Zhu, W., WanXg., Cui, Z., 2012. Pengaruh pretreatment
oleh konsorsium mikroba pada kertas dan karton produksi metana. Bioresour.
teknologi. 118, 281–288. https://doi.o0rg.1/1016/j.biortech.2012.05.058

25
 MANUSkrip YANG DITERIMA
Zhou, Y., Huang, Z., Diao, X., Weng, Y., Wang, Y..,-Z 2015. Karakterisasi efek
REC pada kompatibilitas PHBH dan PLA. PolymT.est. 42, 17–25. https://doi.org/
10.1016/j.polymertesting.2014.124.01

A
R IM
TE
DI
NG
YA
ip
kr
US
AN
M

26
 MANUSkrip YANG DITERIMA

Keterangan gambar

Gambar 1.SEM dan EDX dari WOP sebelum pretreatment (A), setelah perawatan (B) dan setelah

hidrolisis enzimatik (C) limbah kertas kantor (W).OP Kesamaan warna toner

berisi kertas dibandingkan dengan kertas kontrol (tidak ada ert)o(nD)

Gambar 2.Termogram TGA dari kertas kantor yang tidak dirawat (UOPd) kertas kantor parnetreated (TOP)

A
dengan 0,5% H2HAI2. Suhu dinaikkan dari 30 menjadi 990t °aLaju konsumsi 20 °C

IM
/ menit

Gambar 3.Plot permukaan respons menunjukkan efek sitxorfsacon terhadap hidrolisis enzimatik (A)

R
TE
agitasi dan pemuatan kertas; (B) volume kerja pemuatan apnadper; (C) selulase dan

volume kerja; (D) hemiselulase dan volume kerja; m(E) -glukosidase dan selulase;

dan (F) hemiselulase dan selulase DI

NG
Gambar 4.Pengaruh massa sumber nitrogen organik dan anorganik (A), produksi PHB (B),

dan (C/N) rasio (C) menggunakan media hidrolisat WOPBb.kamusacchar.Nilai dengan perbedaan
YA

abjad berbeda nyata (p < 0,05)

Gambar 5.produksi PHB olehB. sacchariamenggunakan WOP pekat (C) dan encer (D)
ip

hidrolisat pada 30 °C dan 160 rpm selama 72 jam. Erraorrsmengikat standar deviasi
kr

Gambar 6.Termogram TGA (A) dan DTG% (B) dari produksi PHBBb. sacchardan standar
US

(Sigma).Suhu dinaikkan dari 30 menjadi 990 °aLaju perubahan 20 °C / menit

AN

Gambar 7.Spektrum FTIR dari standar PHB (Sigma) (A) aH ndBPdiproduksi olehB. sacchariaoleh

fermentasi hidrolisis enzimatik limbah oeffp icaper (WOP) (B)

M

Gambar 8.Difraktogram sinar-X (XRD) dari PHB yang ditentukan dari fermentasi mikroba

limbah kertas kantor (WOP) dan standar PHB (Sigma)

Gambar 9.Pemindaian mikroskop elektron (SEM) (A), EDS etxe mengekstrak PHB dari mikroba

fermentasi limbah kertas kantor (WOP) (B)

27
 MANUSkrip YANG DITERIMA

Tabel 1Variabel dan level pengkodean yang terlibat dalam thetime oipsasi hidrolisis enzimatik
menggunakan desain komposit pusat

Variabel bebas Simbol Level berkode

- -1 0 +1 +

A
Pemuatan kertas (%) SEBUAH 2.5 3 4 5 5.5

IM
Agitasi (rpm) B 122 150 200 250 278
Volume kerja (%) C 11.5 20 35 50 58.5
Selulase (U/g) D 11.5 20 35 50 58.5

R
Beta-glukosidase (U/g) E 11.5 20 35 50 58.5

TE
Hemiselulase (U/g) F 11.5 20 35 50 58.5

DI
NG
YA
ip
kr
US
AN
M

1
 MANUSkrip YANG DITERIMA

Meja 2Analisis komposisi dari yang tidak diobati dan yang sudah diolah kertas reooffice

Komponen WOP yang tidak diobati (%) WOP pra-perawatan (%)

A
b
Selulosa (glukan) 52,16 ± 1,63 73,28 ± 1,24sebuah

IM
Hemiselulosa (Xylan ) 9,54 ± 0,63 sebuah
5,62 ± 0,24b
Karbohidrat total 61,7 ± 2,01 sebuah
78,9 ± 1,63b
Lignin 15,32 ± 1,16 2.61 ± 0.28b

R
sebuah

Abu 18,52 ± 1,32 sebuah

10,56 ± 1,26b

TE
Kelembaban 4.24 ± 1.16b 6,54 ± 1,42sebuah

* Hasil disajikan sebagai mean ± SD, n=3

* Nilai dengan abjad yang berbeda pada conluamre yang sama berbeda nyata (p < 0,05).

DI
NG
YA
ip
kr
US
AN
M

2
 MANUSkrip YANG DITERIMA

Tabel 3Rancangan percobaan komposit pusat enam valerisabat lima tingkat percobaan
hidrolisis enzimatik
Eksperimental
Hidrolisis%
rancangan

RUNA BCDEF Nilai sebenarnya Nilai yang diprediksi

1 +2 0 0 0 0 0 30.8 31.4
2 + 1 1 -1 -1 -1 -1 46.6 45.1
3 - 1 +1 -1 +1 -1 +1 0 64.9 64.0
4 0 0 0 0 +2 35.2 36.2

A
5 0 0 0 +2 0 0 39.4 41.3

IM
6 -2 0 0 0 0 0 31.6 34.1
7 000000 28.3 30.4
8 - 1 -1 +1 +1 +1 -1 0 39.5 39.4
9 0 0 0 -2 0 32.8

R
33.6
10 + 1 +1 +1 +1 -1 -1 26.6 28.2

TE
11 - 1 -1 -1 -1 +1 -1 45.1 43.6
12 0 +2 0 0 0 0 32.5 32.6
13 +1 +1 -1 +1 +1 +1 14 74.2 73.3
+1 -1 +1 -1 -1 -1 15 -1
+1 +1 -1 -1 -1 16 -1 +1
+1 +1 +1 +1 17 0 0 0 0
22.3
16.8
28.7
DI 23.3
18.1
29.2
NG
00 31.6 30.4
18 0 0 0 0 0 0 32.1 30.4
19 -1 +1 -1 +1 +1 -1 20 56,5 55.3
000000 35.3 30.4
YA

21 +1 -1 -1 +1 +1 -1 22 82.2 80.8
0 0 +2 0 0 0 26,5 22.0
23 - 1 -1 -1 +1 -1 -1 82.0 80.6
24 0 0 0 0 0 0 35.2 30.4
ip

25 +1 -1 -1 -1 +1 +1 26 51.5 50.3
0 0 0 -2 0 0 20.4 21.6
kr

27 -1 -1 -1 -1 -1 +1 28 48.1 46.9
+1 +1 +1 -1 -1 +1 29 +1 18.2 20.2
US

+1 +1 -1 -1 -1 30 0 0 0 0 16.7 14.1
+2 0 30.8 33.2
31 0 0 -2 0 0 0 59.8 67.5
32 -1 -1 +1 +1 -1 +1 33 36.9 37.2
AN

+1 -1 -1 +1 -1 +1 34 0 0 76.9 75.8
0000 31.3 30.4
35 -1 +1 -1 -1 +1 +1 36 45.0 44.0
M

0 0 0 0 0 -2 31.6 33.7
37 0 -2 0 0 0 0 42.4 45.4
38 +1 -1 +1 +1 +1 +1 39 14.0 14.3
-1 -1 +1 -1 +1 +1 40 +1 64.1 64.3
+1 +1 -1 +1 -1 16.0 17.3
A: Pemuatan kertas (%), B: Agitasi (rpm), C: Volume kerja
(%), D: Selulase (U/g), E:Beta-glukosida(U se/g),
F: Hemiselulase (U/g)

3
 MANUSkrip YANG DITERIMA

Tabel 4ANOVA untuk model kuadrat respon

Jumlah dari Berarti F nilai-p
Sumber kotak df Kotak Nilai Prob > F
Model 12865,36 27 476.495 28.02296 < 0,0001 Penting
SEBUAH 13,12661 1 13,12661 0,771984 0,3969
B 313.0294 1 313.0294 18.40945 0,0010
C 3924.565 1

A
3924.565 230.8061 < 0,0001
D 739.8703 1 739.8703 43.51222 < 0,0001

IM
E 0.250403 1 0.250403 0.014726 0,9054
F 11.1283 1 11.1283 0.654462 0,4343
AB 176.8791 1 176,8791 10,40237 0,0073

R
AC 716.4227 1 716.4227 42.13326 < 0,0001

TE
IKLAN 38.65308 1 38.65308 2.273211 0.1575
AE 21.66252 1 21.66252 1.273986 0.2811
AF 108.3376 1
SM
BD
12.16578 1
21.94527 1
108.3376 6.371399
12.16578 0.715477
21.94527 1.290614
DI 0,0267
0,4142
0,2781
NG
MENJADI 0,393495 1 0,393495 0,023142 0,8816
BF 58.17358 1 58.17358 3.421223 0,0891
CD 1322.382 1 1322.382 77.77009 < 0,0001
CE 42.1025 1 42.1025 2.476073 0.1416
YA

CF 12.47774 1 12.47774 0.733823 0,4084

DE 164.1352 1 164.1352 9.65289 0,0091
DF 242.842 1 242.842 14.28168 0,0026
ip

EF 49.94129 1 49.94129 2.937078 0.1123

2
11.94068 1
kr

SEBUAH 11,94068 0,702239 0,4184

2
B 164.0603 1 164.0603 9.648484 0,0091
2
US

C 455.1303 1 455.1303 26.76649 0,0002

2
D 2.283033 1 2.283033 0.134267 0.7204
2
E 19.57132 1 19.57132 1.151001 0,3044
AN

2
F 45.41408 1 45.41408 2.670829 0,1281
Sisa 204.0448 12 17.00374
168.9969 7 24.14242 3.444204 0,0961 Tidak signifikan
M

Kurangnya Kesesuaian

Kesalahan Murni 35.0479 5 7.09579

Jumlah Kor 13069,41 39

4
 MANUSkrip YANG DITERIMA

A
Tabel 5Pengaruh berbagai sumber nitrogen pada produksi PHB biomaansds sel bB kamu. saccharmenggunakan WOP

M
hidrolisat.

RI
Biomassa Produktifitas
Sumber nitrogen PHB (%) PHB (g/L) Hasil (g/g)
(g/L) (g/L/jam)

TE
Anorganik (NH4)2JADI4 2,94 ± 0,23 sebuah
34,96 ± 3,54sebuah
1,03± 0,13sebuah 0,10 ± 0,01sebuah 0,02±0,00sebuah

DI
NH4Cl 3,00±0,04sebuah 30,75 ± 3,25ac 0,92± 0,08sebuah 0,09±0,01sebuah 0,02±0,00sebuah

NH4TIDAK3 1,90 ± 0,11b 7.46 ± 3.20b 0,14± 0,05b 0,01±0,00b 0,00±0,00b

NG
Organik Ekstrak ragi 2.98±0.51sebuah 29,65 ± 2,30ac 0,88±0,31sebuah 0,09±0,03sebuah 0,02±0,01sebuah

Pepton 1,40 ± 0,06b 24,03 ± 1,89c 0,34± 0,02b 0,03±0,00b 0,01±0,00b

YA
* Nilai dengan huruf yang berbeda pada kolom yang sama berbeda nyata (p < 0,05).

ip
kr
US
AN
M

5
 MANUSkrip YANG DITERIMA

Tabel 6Biomassa Sel, hasil dan produktivitas PHBBHai.fsaccharmemanfaatkan berbagai biomassa lignoselulosa.
Produser PHA Lignoselulosa jenis PHA Mode operasi BiomassaPHA PHA Menghasilkan Ref.
biomassa (g/l) (%) (g/l) (P/S)
Burkholderia saccharia ampas tebu PHB Fermentor, Batch 4.4 62.0 2.73 0.39 (Silval.,e2t a
004)
Hidrolisat

A
Burkholderia cepacia PHB Fermentor, Batch 4.4 53.0 2.33 0.29 (Silval.,e2t a
004)

M
ampas tebu
Hidrolisat

RI
Burkholderia saccharia Jerami gandum PHB Fermentor, Fed- 135.8 72 105.00.22 (Cesario et al., 2014)
hidrolisat

TE
kelompok

Burkholderia cepacia Bubuk kopi bekas P(3HB-co-3HV) Labu, batch . 91 4 54,79 2,69 0,23 (Obruca et al., 2014)

DI
Burkholderia cepacia Kayu PHB Fermentor, Fed 16.97 51,4 8,72 0,19 (Pan et al., 2012)
Hidrolisat kelompok

NG
Burkholderia cepacia Kayu (biomassa hutan) P(3HB-co-3HV) Labu, batch .14 39 1.6 na (Keenan dkk., 2006)
Burkholderia saccharia Limbah kertas kantor P3HB Labu, batch 3.63 44.2 1.60.15 Studi ini

YA
ip
kr
US
AN
M

6
 MANUSkrip YANG DITERIMA

A
R IM
TE
DI
NG
YA
ip
kr
US
AN
M

7
 MANUSkrip YANG DITERIMA

A
M
RI
TE
DI
NG
YA
ip
kr
US
AN

Gambar 1
M

1
 MANUSkrip YANG DITERIMA

A
R IM
TE
DI
NG

Gambar 2.
YA
ip
kr
US
AN
M

2
 MANUSkrip YANG DITERIMA

SEBUAH B C Hidrolisis per glukan

82.2042

13.9524

D E F

A
M
RI
TE
DI

Gambar 3

3
 MANUSkrip YANG DITERIMA

A
IM
R
TE
DI
NG
YA
ip
kr
US
AN

Gambar 4
M

4
 MANUSkrip YANG DITERIMA

A
IM
R
TE
DI
NG
YA
ip
kr

Gambar 5
US
AN
M

5
 MANUSkrip YANG DITERIMA

A
IM
R
TE
DI
NG
YA
ip
kr

Gambar 6
US
AN
M

6
 MANUSkrip YANG DITERIMA

A
R IM
TE
DI
NG
YA
ip
kr

Gambar 7
US
AN
M

7
 MANUSkrip YANG DITERIMA

A
RIM
TE
DI
NG
YA
ip
kr

Gambar 8
US
AN
M

8
 MANUSkrip YANG DITERIMA

A
IM
R
TE
DI
NG
YA
ip
kr

Gambar 9
US
AN
M

9
 MANUSkrip YANG DITERIMA

Highlight

• Hidrolisis enzimatik maksimum 88,18% adalah metode permukaan respon acehdiebvy

• PHB yang dihasilkan dari kertas bekas hidrolisat usino gsxeylutilizingB. saccharia
• PHB maksimum dan berat sel kering terjadi dengan (N 4)2HSO4dan rasio C/N 20
• Termostabilitas tinggi PHB dengan degraio maksimum dn
atrate sekitar ~ 300 °C
• Produksi PHB menggunakan kertas bekas merupakan pendekatan ecofriendy cost effecatinvde

A
R IM
TE
DI
NG
YA
ip
kr
US
AN
M