Machine Translated by Google

Ilmu Reproduksi Hewan 231 (2021) 106796

Daftar konten tersedia di ScienceDirect

Ilmu Reproduksi Hewan

beranda jurnal: www.elsevier.com/locate/anireprosci

Kurangnya efek melatonin pada fungsi ovarium dan respons

terhadap sinkronisasi estrus dan AI waktu tetap selama musim
nonkawin pada kerbau perah laktasi (Bubalus bubalis)
Nelcio Antonio Tonizza de Carvalho , *, Júlia Gleyci Soares de Carvalho b,

Diego Cavalcante de Souza c , Ed Hoffman Madureira d,

e
Manoel Francisco de S´ a Filho , Jos'e Nelio de Sousa Salesf,g ,
H
Sarvpreet Singh Ghuman , Michael John D'Occhio
Saya

, Pietro Sampaio Baruselli j

A
Unit Penelitian dan Pengembangan Registro/ Pusat Penelitian Diversifikasi Peternakan/ Institut Peternakan, Registro, Sao ˜ Paulo, SP, Brasil
B
Bagian Reproduksi Manusia, Divisi Urologi, Departemen Bedah, Sao ˜ Paulo, SP, Brazil˜ Universitas Federal Paulo, Sao
C
CDRS - Kantor Pembangunan Pedesaan Registro, SP, Brazil
D
Departemen Reproduksi Hewan, FMVZ-USP, Pirassununga, SP, Brazil
e
Alta Genetika Brasil, Uberaba, Minas Gerais, MG, Brasil
F
Departemen Ilmu Peternakan, UFLA, Lavras, MG, Brazil g
Departemen Kedokteran Hewan, Universitas Federal Juiz de Fora, Juiz de Fora, MG, Brasil
H
Departemen Pengajaran Kompleks Klinik Hewan, Sekolah Tinggi Ilmu Kedokteran Hewan, Universitas Guru Angad Dev Kedokteran Hewan dan Ilmu Hewan,
Ludhiana, Punjab, India
Saya

Sekolah Ilmu Kehidupan dan Lingkungan, Fakultas Sains, Universitas Sydney, New South Wales, Australia
J
Departemen Reproduksi Hewan, FMVZ-USP, Sao ˜ Paulo, SP, Brasil

INFORMASI ARTIKEL ABSTRAK

Kata kunci: Penelitian ini dilakukan untuk menguji apakah pretreatment dengan melatonin akan meningkatkan
Kerbau fungsi folikel ovarium dan meningkatkan respon terhadap sinkronisasi estrus dan fixed time AI (TAI)
Musim tidak kawin selama musim nonbreeding pada kerbau perah laktasi. Dalam Eksperimen 1, sapi kerbau tanpa corpus
Melatonin
luteum (CL) yang dapat dideteksi ditempatkan pada Hari ke-20 (H-20) menjadi tiga kelompok: kontrol
Progesteron
AI waktu tetap
(n = 12); melatonin (n = 13); progesteron (P4) (n = 15). Sapi dalam kelompok melatonin ditanamkan
melatonin pada D-20. Dari D0 hingga D9, terjadi pemaksaan rejimen pengobatan sinkronisasi estrus
Kehamilan
menggunakan protokol Ovsynch standar (kontrol, melatonin) atau rejimen pengobatan Ovsynch
berbasis P4 (P4). Tidak ada perbedaan (P > 0,05) di antara kelompok untuk adanya CL pada D0,
ukuran folikel terbesar pada D0, ovulasi terhadap injeksi GnRH pada D0 dan D9, atau waktu ovulasi
setelah injeksi GnRH pada D9. Dalam Eksperimen 2, ada penerapan rejimen pengobatan yang sama
seperti pada Eksperimen 1, dengan memasukkan TAI. Wanita dari kelompok P4 memiliki persentase
kehamilan/AI yang lebih besar (P = 0,001) (60 %) dibandingkan kelompok kontrol (17 %) dan melatonin
(23 %). Betina dari kelompok P4 juga memiliki CL lebih besar (P = 0,005) pada D20 dibandingkan
dengan kelompok kontrol dan melatonin. Temuan menunjukkan pengobatan dengan melatonin selama
20 hari tidak mempengaruhi fungsi ovarium atau respon terhadap rejimen pengobatan sinkronisasi
estrus dan TAI selama musim nonkawin pada kerbau perah menyusui.

* Penulis yang sesuai.

Alamat email: natcarvalho@sp.gov.br (NAT de Carvalho).

https://doi.org/10.1016/j.anireprosci.2021.106796
Diterima 18 Maret 2021; Diterima dalam bentuk revisi 14 Juni 2021; Diterima 15 Juni 2021
Tersedia online 17 Juni 2021 0378-4320/© 2021 Elsevier BV Semua hak dilindungi undang-
undang.
Machine Translated by Google

NAT de Carvalho dkk. Ilmu Reproduksi Hewan 231 (2021) 106796

1. Perkenalan

Kerbau sungai (Bubalus bubalis) jarang memiliki potensi produksi susu seumur hidup karena pola reproduksi musiman hewan ini. Kerbau
adalah peternak musiman (Zicarelli, 1997; D'Occhio et al., 2020). Fungsi reproduksi dirangsang dengan berkurangnya panjang hari atau hari
“pendek” dan ditekan dengan bertambahnya panjang hari atau hari “panjang”. Ini berarti bahwa kerbau perah melahirkan dan memulai laktasi
selama periode ketika panjang hari bertambah atau ketika ada hari yang panjang yang mengakibatkan periode anestrus post partum
diperpanjang (Zicarelli, 1997). Lama masa kehamilan pada kerbau perah umumnya berkisar antara 305 sampai 320 hari. Ketika
mempertimbangkan periode kehamilan ini dikombinasikan dengan pola musiman untuk reproduksi, seringkali ada periode panjang antara
kehamilan, melahirkan, dan produksi susu yang mengakibatkan periode panjang ketika kerbau tidak menghasilkan susu. Teknologi pembibitan
berbantuan sering digunakan untuk produksi kerbau perah untuk menginduksi kehamilan selama musim nonkawin. Ini melibatkan stimulasi
fungsi ovarium, sinkronisasi waktu estrus di antara betina, dan inseminasi buatan waktu tetap (Carvalho et al., 2013, 2014; Carvalho et al.,
2016, 2017; Baruselli et al., 2018; Monteiro et al., 2018; Carvalho et al., 2020). Bahkan dengan pembibitan berbantuan, kerbau perah yang
dikawinkan selama musim nonkawin cenderung memiliki insiden kematian embrio yang relatif besar, meskipun hal ini bervariasi menurut garis
lintang (Campanile dan Neglia, 2007; Campanile et al., 2013, 2016). Oleh karena itu, fungsi reproduksi pada kerbau perah selama musim
nonkawin ditandai dengan kurangnya fungsi ovarium dan kematian embrio yang relatif lebih tinggi. Baik siklisitas estrus maupun kematian
embrio perlu diperhatikan saat menerapkan teknologi reproduksi berbantuan selama musim nonkawin pada kerbau.

Melatonin (N-acetyl-5-methoxytryptomine), diproduksi oleh kelenjar pineal, adalah faktor endokrin utama yang memodulasi permulaan pola
pemuliaan musiman. Melatonin terlibat dalam memodulasi ritme endogen yang diatur oleh pensinyalan fotoperiodik melalui interaksi dengan
jam biologis sirkadian endogen (zeitgeber) yang mengatur fungsi neuroendokrin reproduksi di otak (Reiter, 1993; P'evet et al., 2006; Reiter et
al. , 2009). Peternak hari pendek, seperti kerbau, memiliki durasi sekresi melatonin yang lebih lama ketika ada periode gelap yang diperpanjang
(hari pendek) yang menyebabkan peningkatan sekresi GnRH dan stimulasi sumbu endokrin reproduksi (D'Occhio et al., 2020 ) . Selain aksi
hormonalnya di otak, melatonin adalah antioksidan kuat dan tampaknya memiliki efek menguntungkan pada reproduksi melalui aksi antioksidan
pada jaringan reproduksi dan darah (Reiter et al., 2010; D'Occhio et al., 2020). Oleh karena itu, melatonin memiliki efek sentral dan sistemik
pada reproduksi (D'Occhio et al., 2020).
Sapi kerbau Murrah (Bubalus bubalis) anestrus musim panas yang menyusui yang diberi perlakuan awal dengan melatonin selama 45 hari
sebelum dimulainya rejimen pengobatan sinkronisasi estrus berbasis progesteron (P4) memiliki tingkat konsepsi yang lebih besar daripada
sapi yang tidak diobati dengan mela tonin (Ramadan et al., 2016). Pretreatment dengan melatonin juga meningkatkan tingkat konsepsi “di luar
musim” pada sapi dara setelah menerapkan rejimen pengobatan sinkronisasi estrus berbasis P4 (Ramadan et al., 2014; Kavita et al., 2018).
Selain itu, pengobatan dengan melatonin saja menginduksi fungsi ovarium pada sapi kerbau murrah postpartum anestrus musiman (Kumar et
al., 2016) dan kerbau dara (Ghuman et al., 2010; Pandey et al., 2019). Baik pada kerbau dara (Kavita et al., 2018) dan sapi (Ramadan et al.,
2016), pengobatan dengan melatonin dikaitkan dengan korpus luteum (CL) yang lebih besar dan konsentrasi P4 sirkulasi yang lebih besar.
Diusulkan bahwa konsentrasi P4 yang lebih besar , setidaknya sebagian berkontribusi pada peningkatan tingkat pembuahan pada kerbau.
Melatonin juga telah digunakan dalam kombinasi dengan P4 untuk sinkronisasi estrus pada kerbau (Ramadan, 2017), domba (deNicolo et al.,
2008) dan kambing (El-Mokadem et al., 2017). Selama periode anestrus musim panas pada sapi kerbau yang diberi melatonin, terdapat
aktivitas antioksidan superoksida dismutase yang lebih besar dalam darah (Kumar et al., 2015; Ramadan et al., 2016; Singh dan Balhara,
2016). Berdasarkan temuan sebelumnya dalam berbagai penelitian, penelitian ini dilakukan untuk menguji hipotesis bahwa pengobatan sapi
kerbau Murrah laktasi selama musim nonkawin dengan melatonin sebelum dan selama periode ketika rejimen pengobatan sinkronisasi estrus
diberlakukan akan menyebabkan peningkatan ovarium. pertumbuhan folikel dan tingkat konsepsi yang lebih besar sebagai hasil dari inseminasi buatan (AI
Pengobatan dengan P4 selama periode ketika rejimen pengobatan sinkronisasi estrus dikenakan tanpa dimasukkannya pengobatan melatonin
(De Rensis et al., 2005; Ghuman et al., 2014), dimasukkan dalam penelitian ini untuk perbandingan ketika melatonin digunakan. dimasukkan
sebagai bagian dari rejimen pengobatan.

2. Bahan-bahan dan metode-metode

2.1. Eksperimen 1. Karakteristik ovarium pada kerbau yang diberi melatonin atau P4

2.1.1. Hewan dan manajemen

Eksperimen 1 dilakukan di Unit Penelitian dan Pengembangan Registro, Pusat Penelitian Diversifikasi Ilmu Ternak, Institut Ilmu Ternak
(Registro (lintang 24,5 ÿS), S˜ ao Paulo, Brazil). Penelitian dilakukan selama musim nonkawin, oleh karena itu, selama periode hari yang
panjang dalam setahun (Desember-Januari; Gambar 1). Kondisi lingkungan selama penelitian termasuk indeks suhu-kelembaban (THI)
digambarkan pada Gambar 1. Sapi laktasi Murrah (Bubalus bubalis) yang digunakan (n = 40) digunakan (umur 8,4 ± 0,8 tahun, berat badan
564 ± 12 kg ( BB), 3,9 ± 0,6 laktasi sebelumnya, 101 ± 13 hari pada susu (DIM), 5,8 ± 0,3 kg susu/hari). Skor kondisi tubuh (BCS) adalah 3,7
± 0,1 (Skala 1–5; 1 = sangat kurus dan 5 = sangat gemuk). Sapi diperah sekali sehari dan kontak dengan anaknya hanya selama periode sapi
diperah. Sapi menggembalakan rerumputan tropis dengan akses gratis ke air dan dilengkapi dengan rerumputan tropis segar dan campuran
biji-bijian yang mengandung jagung giling, bungkil kedelai, ampas jeruk, biji kapas utuh, mineral dan vitamin.

2
Machine Translated by Google

NAT de Carvalho dkk. Ilmu Reproduksi Hewan 231 (2021) 106796

Gambar 1. Parameter lingkungan selama Eksperimen 1 (panel atas) dan Eksperimen 2 (panel bawah). Eksperimen 1 dilakukan selama musim
panas dan penyinaran panjang yang tetap relatif konstan. Eksperimen 2 dilakukan selama periode transisi musim panas-musim gugur ketika
penyinaran menurun. THI, indeks kelembaban suhu.

2.1.2. Desain eksperimental

Hanya sapi tanpa CL yang terdeteksi, berdasarkan evaluasi ultrasonik ovarium yang dimasukkan ke dalam kelompok dalam Eksperimen
1. Sementara sapi-sapi ini diasumsikan berada dalam anestrus, ada kemungkinan bahwa ultrasonografi bertepatan dengan transisi dari satu
siklus estrus ke siklus berikutnya. Untuk tujuan desain percobaan, sapi berada pada status ovarium yang sebanding pada awal percobaan.
Pada H-20 (20 hari sebelum dimulainya rejimen pengobatan sinkronisasi estrus Ovsynch), sapi ditugaskan ke salah satu dari tiga

Gambar 2. Diagram skematik desain eksperimen untuk Eksperimen 1 dan 2. ME, melatonin; AS, ultrasonografi ovarium; TAI, inseminasi buatan
berjangka waktu; Banteng, kawin alami.

3
Machine Translated by Google

NAT de Carvalho dkk. Ilmu Reproduksi Hewan 231 (2021) 106796

kelompok perlakuan berdasarkan umur, laktasi, produksi ASI, DIM, BB, BCS dan diameter folikel terbesar. Sapi dalam kelompok kontrol (n = 12) dan
kelompok perlakuan P4 (n = 15) tidak diberikan pengobatan apa pun sampai dimulainya rejimen pengobatan Ovsynch (D0). Sapi dalam kelompok
perlakuan melatonin (n = 13) diberikan sc implan melatonin (implan 12 × 18 mg, total 216 mg) pada D-20 (Regulin®, Ceva Animal Health, UK) yang
tetap di tempatnya selama durasi percobaan (Gbr. 2). Jenis dan jumlah implan melatonin ini melepaskan jumlah melatonin yang terdeteksi setidaknya
selama 60 hari pada kerbau (Ramadan et al., 2014). Pada D0, semua sapi menjadi sasaran rejimen pengobatan sinkronisasi estrus Ovsynch [D0,
injeksi GnRH (10 ÿg im; buserelin asetat; Prorelinn®, Innovare Biotecnologia e Saúde Animal, Brazil); D7, injeksi PGF2ÿ (150 ÿg im; D-cloprostenol;
Croniben®, Bio genesis-Bago); D9, injeksi GnRH (10 ÿg im; Prorelinn®)]. Hewan dalam kelompok perlakuan P4 juga dirawat dari D0 hingga D7 dengan
´
perangkat P4 intravaginal (P4 1,0 g; Cronipres®, Biogenesis-Bago Animal Health, Brazil).
´

2.1.3. USG ovarium

Ovarium dievaluasi menggunakan ultrasonografi menggunakan transduser transrektal linear-array 7,5 MHz (Mindray DP-2200Vet; Shenzhen,
Guangdong, China). Ultrasonografi dilakukan pada: H-20, untuk menentukan diameter folikel terbesar (LF) dan untuk menentukan apakah sapi
memiliki CL yang terdeteksi; D0, untuk mengukur diameter LF dan menilai keberadaan CL; D1 sampai D7 (setiap 24 jam), untuk memverifikasi ovulasi
diinduksi sebagai hasil dari injeksi GnRH pertama dan untuk memantau pola pertumbuhan folikel; D9 dan D10 ke D12 (setiap 12 jam selama 60 jam),
untuk mengukur diameter LF dan untuk menentukan apakah terjadi ovulasi, dan jika demikian, waktu ovulasi setelah injeksi GnRH kedua (Gbr. 2 ) .
Waktu ovulasi didefinisikan sebagai waktu hilangnya LF yang diidentifikasi sebelumnya dari waktu satu pemeriksaan ultrasonik hingga waktu
pemeriksaan berikutnya.

2.2. Eksperimen 2. Karakteristik ovarium dan kebuntingan hingga TAI dan perkawinan alami

2.2.1. Hewan dan manajemen

Eksperimen 2 dilakukan di empat peternakan komersial (Pertanian A, n = 20; Peternakan B, n = 78; Peternakan C, n = 77 dan Peternakan D, n =
50) yang terletak di Lembah Ribeira (lintang 24.6 ÿS), Negara
musim Bagian dari Sao
gugur ketika ˜ Paulo,
panjang hariBrasil.
mulai Eksperimen dilakukan selama
berkurang (Januari-Maret; transisi
Gambar 1). musim
Kondisipanas ke
lingkungan
selama penelitian termasuk THI digambarkan pada Gambar 1. THI (THI = (0,8 x T + (H/100) x (T-14,4) + 46,4; T = suhu; H = kelembaban) dihitung
berdasarkan pada laporan sebelumnya (Grassman et al., 2020). Sapi kerbau Murrah persilangan (n = 225) digunakan (BCS 3.9 ± 0.0; 122 ± 8 DIM).
Di semua peternakan, kerbau dipelihara di padang rumput Brachiaria spp dengan bebas akses ke air dan garam mineral Sapi diperah sekali sehari
dan kontak dengan anak sapi mereka hanya selama pemerahan Perlakuan didistribusikan secara merata di antara peternakan.

2.2.2. Desain eksperimental

Sapi kerbau ditugaskan ke salah satu dari tiga perlakuan menggunakan kriteria yang sama seperti yang digunakan dalam Eksperimen 1: kelompok
kontrol (n = 65); kelompok P4 (n =83); kelompok melatonin (n = 77). Jadwal pengobatan dan rejimen pengobatan sinkronisasi estrus juga identik
dengan yang dikenakan dalam Eksperimen 1 (Gbr. 2). Selain itu, ada waktu AI (TAI) untuk semua sapi 16 jam setelah injeksi GnRH kedua (D10).
Teknisi yang sama, yang tidak memiliki pengetahuan tentang kelompok perlakuan, melakukan TAI. Semen beku yang dicairkan dari lima ekor kerbau
yang ditempatkan di empat peternakan dengan fertilitas yang terbukti sebelumnya diverifikasi secara acak ditugaskan untuk digunakan untuk TAI pada
sapi dari tiga kelompok perlakuan. Pada D20, seekor sapi jantan subur ditempatkan dengan sapi di setiap peternakan.

2.2.3. Ultrasonografi
Ovarium diamati menggunakan prosedur ultrasonik (Mindray DP-2200Vet) pada D-20, untuk tujuan yang sama seperti yang dijelaskan sebelumnya
dalam manuskrip ini untuk Eksperimen 1; D9, untuk menentukan diameter LF; D15 dan D20, untuk mengukur diameter dan laju pertumbuhan CL; D40
(30 hari setelah TAI) untuk penentuan kebuntingan akibat TAI dan D70 (50 hari dengan pejantan), untuk menentukan status kebuntingan sebagai hasil
perkawinan alami dan untuk memastikan keguguran dari D40 ke D70 pada sapi yang sebelumnya terdeteksi hingga hamil akibat TAI. Kebuntingan per
TAI (P/AI) dihitung berdasarkan jumlah sapi bunting dibagi dengan jumlah sapi yang terdapat TAI. Deteksi vesikel embrionik dengan embrio yang
hidup (kehadiran detak jantung) digunakan sebagai indikator kehamilan. Tahap kehamilan ditentukan oleh penilaian ultrasonografi ukuran vesikel
ketuban menggunakan prosedur yang diterbitkan sebelumnya (Youngquist dan Threlfall, 2007).

2.3. Analisis statistik

Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan Sistem Analisis Statistik untuk Windows-SAS. Dalam Eksperimen 1, variabel kontinyu adalah
diameter LF pada D0, D7 dan D9, dan diameter folikel tempat terjadinya ovulasi dan waktu ovulasi setelah injeksi GnRH kedua. Variabel binomial
adalah adanya CL pada D0, dan tingkat ovulasi setelah injeksi GnRH pertama dan kedua. Data kontinyu diuji normalitas residunya, dianalisis
menggunakan prosedur UNIVARIAT (terbentuk trans bila perlu) dan dikenai uji Bartlett untuk menilai homogenitas varians. Prosedur GLIMMIX dengan
penyesuaian Tukey digunakan dan dianggap ada perbedaan rata-rata di antara kelompok jika ada P ÿ 0,05. Semua nilai dinyatakan sebagai rata-rata
± SEM. Variabel binomial dianalisis menggunakan PROC GLIMMIX dari SAS dan dinyatakan sebagai persentase (%).

Dalam Eksperimen 2, variabel kontinyu (diameter LF pada D9, diameter CL pada D15 dan D20, dan laju pertumbuhan CL dari D15 ke D20)
dievaluasi menggunakan prosedur yang sama seperti yang dijelaskan pada Eksperimen 1. Untuk data binomial, efek pengobatan, BCS, CL pada D0,
peternakan, DIM, dan pejantan pada persentase P/AI dan keguguran awalnya dimasukkan dalam model. Model kedua termasuk efek pengobatan,
BCS, CL di D0, farm, dan DIM pada kebuntingan sebagai hasil perkawinan alami dan kebuntingan kumulatif (P/AI +

4
Machine Translated by Google

NAT de Carvalho dkk. Ilmu Reproduksi Hewan 231 (2021) 106796

kehamilan hingga perkawinan alami). Untuk data binomial, efek perlakuan, BCS, CL pada D0, peternakan, DIM, dan pejantan pada
persentase P/AI dan keguguran awalnya dimasukkan dalam model. Data dianalisis menggunakan prosedur regresi logistik multivariat
dengan menggunakan prosedur LOGISTIK SAS. Variabel dihilangkan dengan eliminasi mundur berdasarkan kriteria statistik Wald
ketika P > 0,20 untuk membangun model akhir. Variabel yang dimasukkan dalam model akhir untuk analisis semua data binomial
adalah perlakuan (kontrol, melatonin, P4), peternakan dan interaksi. Rasio odds yang disesuaikan (AOR) dan interval kepercayaan
(CI) 95% dihasilkan saat melakukan prosedur regresi logistik. Hasil disajikan sebagai proporsi dan AOR. Data binomial dianalisis
menggunakan prosedur GLIMMIX dari SAS. Waktu kehamilan dievaluasi menggunakan prosedur LIFETEST. Sapi dianggap sebagai
unit percobaan. Plot bertahan hidup dihasilkan menggunakan MedCalc versi 9.2 (Perangkat Lunak MedCalc, Mariakerke, Belgia).
Ada dianggap perbedaan rata-rata ketika ada P ÿ 0,05.

3. Hasil

3.1. Eksperimen 1

THI untuk sapi kerbau dalam Eksperimen 1 berkisar antara 78 hingga 82 (Gbr. 1). Nilai untuk sapi pada kelompok kontrol,
melatonin dan P4 tidak berbeda (P > 0,05) untuk variabel berikut: adanya CL dan diameter folikel pada D0; ovulasi sebagai akibat
dari injeksi GnRH pertama; ovulasi akibat injeksi GnRH kedua; dan rata-rata waktu ovulasi setelah injeksi GnRH kedua (Tabel 1).
Waktu rata-rata untuk ovulasi tidak berbeda (P = 0,65) antara sapi dalam tiga kelompok perlakuan. Sapi dari kelompok P4 memiliki
lebih sedikit (P = 0,05) variasi waktu untuk ovulasi setelah injeksi GnRH kedua dibandingkan dengan kelompok kontrol dan melatonin
(Gbr. 3).

Tabel 1
Respon folikel ovarium (rata-rata ± SEM) pada sapi kerbau perah yang dikenai rejimen pengobatan sinkronisasi Ovsynch standar (kelompok Kontrol dan
ME) atau rejimen pengobatan Ovsynch berbasis P4 ( kelompok P4).

Kelompok
Nilai P
Kontrol AKU P4

Jumlah hewan 12 13 15
CL pada D0 (awal sinkronisasi) 8 % (1/12) 38 % (5/13) 20 % (3/15) 0,24
Diameter LF pada D0 (mm) 10,6 ± 0,9 10,9 ± 0,4 11,5 ± 0,5 0,48
Laju ovulasi setelah GnRH pertama 17% (2/12) 46% (6/13) 27% (4/15) 0,29
Diameter LF pada D7 (mm) 14,6 ± 2,8 13,7 ± 1,4 12,0 ± 0,9 0,54
Diameter LF pada D9 (mm) 11,3 ± 1,0 14,3 ± 1,4 12,4 ± 0,4 0,09
Diameter (mm) 13,3 ± 0,9 13,4 ± 0,4 12,2 ± 0,4 0,21
Laju ovulasi setelah GnRH ke-2 50 % (6/12) 69 % (9/13) 80 % (15/12) 0,22
Waktu ovulasi setelah GnRH ke-2 (h) 30,0 ± 4,4 27,6 ± 3,0 29,0 ± 1,0 0,65

CL, korpus luteum; LF, folikel terbesar; OF, folikel ovulasi.

Sapi dalam kelompok ME diberikan implan melatonin 20 hari sebelum dimulainya rejimen pengobatan sinkronisasi estrus. Tidak ada perbedaan antara
kelompok untuk salah satu variabel.

Gambar 3. Distribusi waktu ovulasi setelah injeksi GnRH kedua pada sapi kerbau perah yang menjalani rejimen pengobatan sinkronisasi Ovsynch
standar (kelompok Kontrol dan ME) atau rejimen pengobatan Ovsynch berbasis P4 ( kelompok P4 ). Penghapusan perangkat mengacu pada perangkat
P4 dan angka di atas bilah adalah persentase kerbau.

5
Machine Translated by Google

NAT de Carvalho dkk. Ilmu Reproduksi Hewan 231 (2021) 106796

3.2. Eksperimen 2

THI untuk sapi kerbau dalam Eksperimen 2 berkisar antara 75 hingga 80 (Gbr. 1). Sapi kelompok kontrol, melatonin dan P4 tidak berbeda
dalam rata-rata diameter LF pada D9 (P = 0,89), rata-rata diameter CL pada D15 (P = 0,95), keguguran dari D40 sampai D70 pada sapi yang
sebelumnya terdeteksi hamil akibat TAI (P = 0,93), dan kehamilan sebagai hasil perkawinan alami (P = 0,50). Proporsi sapi dengan CL pada
D15 (P = 0,001) dan D20 (P = 0,003) dan total kebuntingan untuk TAI + perkawinan alami (P = 0,01) lebih besar untuk sapi P4 daripada
kelompok kontrol, sedangkan nilai untuk ini variabel serupa untuk sapi dari kelompok melatonin dengan kontrol dan kelompok P4 . Sapi
kelompok P4 memiliki diameter CL lebih besar pada D20 (P = 0,005), persentase P/AI (P = 0,001) dan jumlah hari tidak bunting (P = 0,001)
lebih sedikit dibandingkan sapi kelompok kontrol dan melatonin, dengan nilai untuk variabel tersebut tidak berbeda untuk kedua kelompok
tersebut (Tabel 2 dan 3). Interval waktu terjadinya kebuntingan lebih pendek (P = 0,001) untuk sapi kelompok P4 (rata-rata 18,5 ± 1,5 hari)
dibandingkan dengan kelompok kontrol (36,1 ± 1,3 hari) dan melatonin (34,2 ± 1,5 hari) ( Gambar 4). Hal ini disebabkan persentase P/AI sapi
pada kelompok P4 lebih besar .
Hasil untuk persentase P/AI pada masing-masing tambak dicantumkan dalam Tabel 4. Tidak ada interaksi untuk variabel mana pun yang
dianalisis. Sapi kontrol dan kelompok ME di Peternakan D memiliki persentase P/AI yang jauh lebih rendah namun ada persentase P/AI 47%
untuk sapi-sapi dari kelompok P4 . Untuk Peternakan C, sapi kontrol dan kelompok ME memiliki persentase P/AI 30%–37% sedangkan
kelompok P4 memiliki nilai 60%. Sapi dari kelompok P4 di Peternakan A memiliki persentase P/AI yang relatif lebih besar yaitu 75%, tetapi
temuan ini menunjukkan perlunya kehati-hatian saat menginterpretasikan data untuk sejumlah kecil hewan.

Tabel 2
Respons ovarium (rata-rata ± SEM) dan angka kebuntingan pada sapi kerbau perah yang dikenai rejimen pengobatan sinkronisasi Ovsynch standar (kelompok Kontrol dan
ME) atau rejimen pengobatan Ovsynch berbasis P4 ( kelompok P4) diikuti dengan AI waktu tetap.

Kelompok
Nilai P
Kontrol AKU P4

Jumlah hewan 65 77 83
Diameter LF pada D9 (mm) 13,0 ± 0,4 13,1 ± 0,4 13,2 ± 0,3 0,89
Kehadiran CL pada D15 54 % (35/65)b 71 % (55/77)ab 85 % (71/83)a 0,001
Diameter CL pada D15 (mm) 17,4 ± 0,6 60 % 17,7 ± 0,7 75 % 17,4 ± 0,3 87 % 0,95
Kehadiran CL pada D20 (39/65)b 17,4 ± (58/77)ab 17,6 ± (72/83)a 19,2 ± 0,003
Diameter CL pada D20 (mm) 0,6b 25,9 ± 2,5a 0,5b 23,7 ± 1,9a 0,3a 14,1 ± 1,1b 0,005
Hari menuju kehamilan 0,001

a,bNilai dalam baris tanpa superskrip umum berbeda (P < 0,05).

CL, korpus luteum; LF, folikel terbesar.
Sapi dari kelompok ME diberikan implan melatonin 20 hari sebelum memulai rejimen pengobatan sinkronisasi estrus.

Tabel 3
Tingkat kebuntingan pada sapi kerbau perah yang menjalani rejimen pengobatan sinkronisasi Ovsynch standar (kelompok Kontrol dan ME) atau rejimen pengobatan
Ovsynch berbasis P4 ( kelompok P4) diikuti dengan IB waktu tetap.
Variabel Kontrol AKU P4 Nilai P

Kehamilan untuk TAI 17 % 23 % 60 % 0,001

(11/65)b (18/77)b (50/83)a
ATAU Disesuaikan (95% CI)* Referensi** 1,42 (0,61– 7,55 (3,39–
3,32) 16,81)

Kehilangan kehamilan 9% 6% 8% 0,93

(01/11) (01/18) (04/50)
ATAU Disesuaikan (95% CI)* Referensi** 0,59 0,87
(0,03–10,48) (0,08–8,63)

Kehamilan untuk kawin alami 33% 44% 33% 0,50

(18/54) (26/59) (33/11)
ATAU Disesuaikan (95% CI)* Referensi** 1.58 0,95
(0,67–3,71) (0,34–2,69)

Kehamilan ke TAI + kawin alami 43% 56% 69% 0,01

(28/65)b (43/77)ab (57/83)a
ATAU Disesuaikan (95% CI)* Referensi** 1,63 (0,79– 3,07 (1,47–
3,35) 6,42)

Sapi dari kelompok ME diberikan implan melatonin 20 hari sebelum memulai rejimen pengobatan sinkronisasi estrus.
* ATAU = rasio peluang; CI = interval kepercayaan.
** Referensi = kelompok referensi untuk rasio risiko yang disesuaikan.

6
Machine Translated by Google

NAT de Carvalho dkk. Ilmu Reproduksi Hewan 231 (2021) 106796

Gambar 4. Kurva kelangsungan hidup untuk proporsi sapi kerbau perah yang tidak bunting yang menjadi sasaran rejimen pengobatan sinkronisasi Ovsynch standar
(kelompok Kontrol dan ME) atau rejimen pengobatan Ovsynch berbasis P4 ( kelompok P4 ) (Hari 0 hingga Hari 9 ) disertai dengan AI waktu tetap pada Hari ke-10, yang
diikuti oleh perkawinan alami sejak Hari ke-20.

Tabel 4
Tingkat kebuntingan di masing-masing peternakan pada sapi kerbau perah yang menjalani rejimen pengobatan sinkronisasi Ovsynch standar
(kelompok Kontrol dan ME) atau rejimen pengobatan Ovsynch berbasis P4 ( kelompok P4) diikuti dengan IB waktu tetap.

Tingkat kehamilan
Peternakan

Kontrol AKU P4

A 20 % (1/5) 28 % (2/7) 75 % (6/8)

B 13 % (3/23) 30 18 % (27/5) 37 64 % (18/28) 60
C % (6/20) 6 % % (10/27) 6 % % (18/30) 47 %
D (1/17) (1/16) (8/17)

Kelompok ME menerima implan melatonin 20 hari sebelum memulai rejimen pengobatan sinkronisasi estrus.

4. Diskusi

Hipotesis yang diuji dalam penelitian ini adalah bahwa pengobatan sapi kerbau laktasi dengan melatonin selama musim nonbreeding
akan meningkatkan fungsi folikel ovarium dan meningkatkan respon terhadap sinkronisasi estrus dan meningkatkan persentase P/AI.
Fungsi ovarium tidak lebih besar 20 hari setelah memulai pengobatan dengan melatonin. Respons ovarium akibat pemaksaan rejimen
pengobatan Ovsynch, persentase P/AI, dan persentase kebuntingan akibat perkawinan alami, juga tidak berbeda antara sapi kerbau yang
diberi dan tidak diberi melatonin. Berdasarkan temuan ini, hipotesis bahwa melatonin akan memiliki efek menguntungkan pada fungsi
ovarium dan kebuntingan selama musim nonkawin pada sapi perah laktasi ditolak.
Dalam penelitian sebelumnya yang dilakukan terutama di Asia selatan, respons ovarium terhadap melatonin dilaporkan pada kerbau
dara (Ghuman et al., 2010; Ramadan et al., 2014; Pandey et al., 2019) dan sapi (Kumar et al., 2016 ; Ramadan et al., 2016) ketika betina
ini dipengaruhi oleh tekanan musim panas. Cekaman panas menyebabkan peningkatan produksi radikal bebas pada ruminansia termasuk
kerbau (Megahed et al., 2008; Kumar et al., 2011, 2015; Slimen et al., 2016, 2019; Bouroutzika et al., 2020; Li et al. , 2020). Oleh karena
itu, masuk akal bahwa respon terhadap melatonin pada kerbau yang mengalami stres panas pada penelitian sebelumnya mungkin
disebabkan oleh aksi antioksidan melatonin pada jaringan perifer, daripada mekanisme yang melibatkan modulasi fotoperiodik ritme
fisiologis endogen (Kumar et al . , 2015; Singh dan Balhara, 2016; Hyder et al., 2017). Stres panas pada kerbau dapat dipastikan dengan
menentukan indeks suhu-kelembaban (THI), yang mempertimbangkan suhu dan kelembaban (Kumar dan Kumar, 2013; Dash et al., 2015;
Costa et al., 2020). Pada penelitian yang berbeda dengan kerbau, terdapat penggunaan formula yang berbeda untuk menghitung THI
sehingga sulit untuk membandingkan THI antar penelitian (Behera et al., 2018). Meskipun demikian, THI >75 dilaporkan berhubungan
dengan stress panas pada kerbau (Vale, 2007). THI dalam kisaran 82–85 menyebabkan tekanan panas yang memengaruhi reproduksi
kerbau yang ditempatkan di dalam ruangan di Asia selatan (Kumar et al., 2015, 2016). Pada penelitian ini, terdapat THI pada kisaran 75–
82 untuk sapi kerbau yang ditempatkan di paddock. Agaknya, sapi-sapi ini akan terpengaruh oleh peningkatan tekanan panas yang kecil hingga sedan
Ukuran stres panas lainnya adalah indeks beban panas (HLI) yang menggabungkan pergerakan udara, suhu bola dunia hitam, dan
kelembapan relatif (Gaughan et al., 2008; Sejian et al., 2018). HLI memberikan indeks stres panas hewan yang lebih tepat dan berpotensi
dapat dievaluasi untuk membedakan antara jumlah stres panas yang mempengaruhi kerbau yang dipelihara di paddock dalam penelitian
ini dibandingkan dengan kerbau yang ditempatkan di dalam ruangan di Asia selatan pada penelitian sebelumnya. Efek dari tekanan panas
yang dianggap lebih rendah dari sapi kerbau dalam penelitian ini bisa menjadi penjelasan untuk kurangnya efek melatonin eksogen pada
fungsi ovarium. Dianggap penting bahwa studi masa depan yang memanfaatkan melatonin untuk mengevaluasi efek pada reproduksi
pada hewan pembibitan musiman, seperti kerbau, harus mencakup informasi tentang kondisi lingkungan. Karena melatonin adalah
hormon pleotropik, respons terhadap melatonin eksogen kemungkinan dipengaruhi oleh kondisi homeostatis hewan yang berlaku sebagai
respons terhadap lingkungan.

7
Machine Translated by Google

NAT de Carvalho dkk. Ilmu Reproduksi Hewan 231 (2021) 106796

Melatonin, oleh karena itu, memiliki banyak situs aksi, baik sentral maupun periferal (P´evet, 2002; Simonneaux dan Ribelayga, 2003; Reiter et al., 2009).
Di dalam otak, melatonin memiliki fungsi pada nukleus suprachiasmatic (SCN) untuk mempengaruhi ritme fisiologis endogen termodulasi fotoperiodik (Reiter,
1993; Pandi-Perumal et al., 2006; P´evet, 2003; P´evet et al., 2006) . Melatonin telah diberikan untuk memperpanjang durasi konsentrasi hormon ini yang relatif
lebih besar di SCN (Pevet et al., 2017; Talpur et al., 2018). Pendekatan pengobatan ini menghasilkan melatonin dari sumber eksogen dan endogen yang
berkontribusi pada pemeliharaan konsentrasi melatonin yang relatif lebih lama dan, oleh karena itu, memiliki efek tipe hari yang singkat pada otak. Pada
peternak hari pendek, hal ini merangsang induksi fungsi reproduksi (Nett dan Niswender, 1982; Nowak dan Rodway, 1985; English et al., 1986; Malpaux et al.,
1997; deNicolo et al., 2008; El-Mokadem et al. ., 2017). Pada domba breed yang memiliki pola kawin hari pendek, melatonin eksogen tidak selalu menstimulasi
fungsi ovarium pada domba anestrus musiman (Nowak dan Rodway, 1985; English et al., 1986). Temuan ini mengarah pada saran bahwa domba dapat tahan
terhadap melatonin eksogen tergantung pada kapan pengobatan diterapkan selama siklus tahunan peningkatan dan penurunan panjang hari (English et al.,
1986). Ada kemungkinan bahwa respon kerbau terhadap melatonin eksogen juga tergantung pada kapan pengobatan dimulai pada siklus fotoperiodik tahunan.
Asumsinya adalah, pertama, bahwa SCN adalah tempat utama aksi melatonin eksogen pada kerbau dan, kedua, melatonin eksogen menstimulasi fungsi
neuroendokrin reproduksi pada kerbau. Interpretasi alternatif, seperti yang dijelaskan sebelumnya dalam manuskrip ini, adalah bahwa melatonin eksogen
memiliki efek menguntungkan pada reproduksi kerbau melalui aksi antioksidan pada ovarium, dan berpotensi jaringan perifer lainnya ( Kumar et al., 2015;
Singh dan Balhara, 2016; Hyder et al., 2017). Mungkin ada keuntungan anti oksidan dari perawatan melatonin di lingkungan di mana perubahan musim pada
panjang hari relatif kecil, tetapi seperti yang dijelaskan sebelumnya dalam manuskrip ini, kerbau sering mengalami tekanan panas selama musim panas. Dalam
penelitian ini, variasi musim panjang hari kira-kira 3,5 jam dan mungkin tidak ada efek fotoperiodik pada fungsi ovarium pada sapi kerbau. Temuan dalam
penelitian ini menyoroti pentingnya mengetahui penyebab variasi musiman dalam fungsi ovarium saat pemberian melatonin untuk merangsang fungsi ovarium
pada kerbau. Pertimbangan lebih lanjut adalah apakah kerbau tahan terhadap mela tonin dalam periode selama siklus tahunan panjang hari, seperti yang
terjadi pada domba, dan apakah pemberian melatonin dapat menghasilkan peningkatan fungsi ovarium pada kerbau bila diberikan hanya pada waktu tertentu
dalam setahun.

Efek menguntungkan dari P4 eksogen dalam penelitian ini pada sinkronisasi ovulasi di antara betina, ukuran CL, dan persentase P/AI, konsisten dengan
hasil yang dilaporkan sebelumnya di mana P4 diberikan pada kerbau (De Rensis et al., 2005; Ghuman et al., 2014; Ramadan et al., 2014, 2016; Ramadan,
2017). Pengobatan dengan P4 menyebabkan perbaikan dalam fungsi folikel dominan dari mana ada ovulasi dan kualitas oosit pada sapi dengan konsentrasi
sirkulasi P4 endogen kurang dari mid-luteal (Bisinotto dan Santos, 2011). Dimasukkannya P4 dalam rejimen pengobatan sinkronisasi estrus juga menyebabkan
terjadinya regresi luteal pra-dewasa yang lebih rendah setelah induksi ovulasi dengan GnRH pada sapi potong dan sapi perah (Rosenberg et al., 1990 dan
Kawate et al., 2004). Persentase P/AI yang relatif lebih besar pada sapi kerbau yang diberi perlakuan dengan P4 dalam penelitian ini mungkin juga disebabkan
oleh tingkat sinkronisasi ovulasi pada 36 jam setelah injeksi GnRH kedua. Ukuran CL yang relatif lebih besar pada kerbau yang diobati dengan P4 diduga
terkait dengan sekresi P4 yang lebih besar yang sebelumnya dilaporkan pada kerbau (Kavita et al., 2018).

Konsentrasi P4 yang relatif lebih besar akan mendukung perkembangan dan implantasi embrio karena P4 diketahui memiliki efek primer pada uterus pada
kerbau (Baba et al., 2019). Respons terhadap P4, terutama untuk sapi kerbau di Peternakan D, merupakan indikasi bahwa kerbau perah yang sedang menyusui
responsif terhadap P4 eksogen selama musim nonkawin.
Proporsi relatif kerbau bunting, akibat perkawinan alami, lebih besar pada perlakuan melatonin dibandingkan dengan sapi pada kontrol dan pada kelompok
perlakuan P4 . Meskipun perbedaannya tidak signifikan, temuan ini dapat ditafsirkan untuk mengindikasikan bahwa respons ovarium mungkin terjadi setelah
pengobatan jangka panjang dengan melatonin. Jika melatonin eksogen memiliki aksi antioksidan pada ovarium kerbau, maka beberapa siklus estrus mungkin
diperlukan agar efek menguntungkan tercermin dengan peningkatan folikulogenesis. Studi lebih lanjut diperlukan untuk menentukan apakah periode pengobatan
melatonin lebih dari 20 hari diperlukan sebelum sinkronisasi estrus-TAI diterapkan selama musim nonkawin pada kerbau perah. Penting juga untuk
mengklarifikasi dinamika folikel ovarium selama periode ketika pengobatan melatonin terjadi karena dalam penelitian dengan jumlah sapi dara anestrus yang
relatif kecil, terdapat diameter folikel dominan yang lebih besar pada hari ke 21 dan 28 tetapi tidak pada hari ke 35. dan 42 setelah memulai pengobatan
melatonin, dibandingkan dengan diameter folikel dominan pada sapi dara anestrus yang tidak diobati (Ramadan et al., 2014). Waktu Eksperimen 2 dilakukan
bertepatan dengan waktu penurunan penyinaran dan ada kemungkinan bahwa aksi melatonin eksogen bersamaan dengan peningkatan produksi melatonin
endogen menyebabkan stimulasi fungsi ovarium. Ini, bagaimanapun, adalah spekulasi dan membutuhkan pengujian lebih lanjut untuk lebih pasti memastikan
fungsi melatonin pada kerbau.

5. Kesimpulan

Singkatnya, melatonin berpotensi memiliki efek di berbagai tempat, pusat dan/atau periferal, untuk mempengaruhi fungsi reproduksi pada kerbau. Efek
melatonin dapat disebabkan oleh efek modulasi fotoperiodik ritme fisiologis endogen yang memengaruhi fungsi neuroendokrin reproduksi, aksi antioksidan
pada ovarium dan jaringan perifer lainnya, atau efek sentral dan periferal. Tindakan melatonin multi-lokasi yang potensial, dan jalur mekanistik yang berbeda,
menyoroti kebutuhan untuk mengetahui penyebab dari fungsi ovarium yang tertekan, dan apakah pengobatan dengan melatonin diharapkan dapat merangsang
fungsi ovarium. Efek positif melatonin pada fungsi ovarium dalam satu studi mungkin tidak direplikasi dalam studi kedua jika penyebab fungsi ovarium yang
ditekan tidak berbasis melatonin, dan/atau tidak responsif terhadap melatonin, pada kedua studi. Sementara kurangnya efek melatonin pada fungsi ovarium
dalam penelitian ini dapat dianggap sebagai hasil negatif, makalah ini telah menyoroti pentingnya memahami mekanisme dan jalur yang menekan fungsi
ovarium ketika memilih strategi untuk meningkatkan fungsi ovarium pada kerbau. Hasil dari penelitian ini juga menyoroti kebutuhan untuk mengetahui kondisi
lingkungan yang berlaku saat memanfaatkan

8
Machine Translated by Google

NAT de Carvalho dkk. Ilmu Reproduksi Hewan 231 (2021) 106796

melatonin.

Deklarasi penulis

Penulis ingin memastikan bahwa tidak ada konflik kepentingan yang diketahui terkait dengan publikasi ini dan tidak ada
dukungan keuangan yang signifikan untuk pekerjaan ini yang dapat mempengaruhi hasilnya.
Para penulis mengkonfirmasi bahwa manuskrip telah dibaca dan disetujui oleh semua penulis yang disebutkan dan bahwa tidak ada orang lain yang memenuhi
kriteria kepenulisan tetapi tidak terdaftar. Kami lebih lanjut mengkonfirmasi bahwa urutan penulis yang tercantum dalam naskah telah disetujui oleh kita semua.

Para penulis menegaskan bahwa kami telah mempertimbangkan perlindungan kekayaan intelektual yang terkait dengan karya ini dan bahwa tidak ada
halangan untuk publikasi, termasuk waktu publikasi, sehubungan dengan kekayaan intelektual. Dengan demikian kami menegaskan bahwa kami telah mengikuti
peraturan lembaga kami mengenai kekayaan intelektual.

Terima kasih

Para penulis berterima kasih kepada Institute of Animal Science (Registro-SP, Brazil) dan produsen kerbau komersial atas penyediaan hewan dan fasilitas
yang murah hati untuk penelitian ini. Penelitian ini didukung oleh CNPq (Proses 2016/05825-6) dan FAPESP (Proses 2017/50.339-5).

Referensi

Baba, NA, Panigrahi, M., Verma, AD, Sadam, A., Sulabh, S., Chhotaray, S., Parida, S., Krishnaswamy, N., Bhushan, B., 2019. Profil transkrip endometrium dari
gen yang diatur progesteron selama awal kehamilan Kerbau Air (Bubalus bubalis). Reproduksi Rumah. Animasi. 54, 100–107.
Baruselli, PS, Soares, JG, Bayeux, BM, Silva, JC, Mingoti, RD, Carvalho, NAT, 2018. Teknologi reproduksi berbantuan (ART) pada kerbau. Animasi.
Reproduksi 15, 971–983.
Behera, R., Chakravarty, AK, Sahu, A., Kashyap, N., Rai, S., Mandal, A., 2018. Identifikasi model indeks kelembaban suhu terbaik untuk menilai dampak tekanan
panas pada sifat penyusun susu di Murrah kerbau di bawah kondisi iklim subtropis India Utara. India J. Anim. Res. 52 (1), 13–19.
Bisinotto, RS, Santos, JEP, 2011. Penggunaan perlakuan endokrin untuk meningkatkan angka kebuntingan pada sapi. Reproduksi Subur. Dev. 24, 258–266.
Bouroutzika, E., Kouretas, D., Papadopoulos, S., Veskoukis, AS, Theodosiadou, E., Makri, S., Paliouras, C., Michailidis, ML, Caroprese, M., Valasi, I., 2020. Efek dari
pemberian melatonin pada domba bunting dalam kondisi stres panas, dalam status redoks dan hasil reproduksi. Antioksidan 266, 1–18.
Campanile, G., Neglia, G., 2007. Kematian embrio pada sapi kerbau. Italia. J. Anim. Sains. 6, 119–129.
Campanile, G., Vecchio, D., Neglia, G., Bella, A., Prandi, A., Senatore, EM, Gasparrini, B., Presicce, GA, 2013. Pengaruh musim, kematian embrio akhir dan produksi progesteron terhadap angka
kebuntingan pada kerbau pluripara (Bubalus bubalis) setelah inseminasi buatan dengan sexed semen. Teriogenologi 79, 653–659.

Campanile, G., Neglia, G., D'Occhio, MJ, 2016. Kematian embrio dan janin pada kerbau sungai 365 (Bubalus bubalis). Teriogenologi 86, 207–213.
Carvalho, NAT, Soares, JG, Porto Filho, RM, Gimenes, LU, Souza, DC, Nichi, M., Sales, JS, Baruselli, PS, 2013. Equine chorionic gonadotropin meningkatkan
kemanjuran protokol inseminasi buatan berjangka waktu pada kerbau selama musim nonkawin. Teriogenologi 79, 423–428.
´
Carvalho, NAT, Soares, JG, Souza, DC, Vannucci, FS, Amaral, R., Maio, JRG, Sales, JNS, Sa Filho, MF, Baruselli, PS, 2014. Beda beredar
Konsentrasi progesteron selama sinkronisasi protokol ovulasi tidak mempengaruhi folikel ovarium dan respons kebuntingan pada sapi kerbau anestrus musiman. Teriogenologi 81, 490–495.

Carvalho, NAT, Soares, JG, Baruselli, PS, 2016. Strategi mengatasi anestrus musiman pada kerbau. Teriogenologi 86, 200–206.
Carvalho, NAT, Soares, JG, Souza, DC, Maio, JRG, Penjualan, JNS, Martins Junior, B., Macari, RC, D'Occhio, MJ, Baruselli, PS, 2017. Ovulasi
sinkronisasi dengan estradiol benzoat atau GnRH dalam protokol inseminasi buatan berjangka waktu pada sapi kerbau dan sapi dara selama musim nonkawin.
Teriogenologi 87, 333–338.
Carvalho, NAT, Carvalho, JGS, Sales, JNS, Guerreiro, BM, Freitas, BG, D'Occhio, MJ, Baruselli, PS, 2020. Pengobatan dengan estradiol cypionate saat penarikan progesteron mengurangi
penanganan tanpa mengorbankan tingkat kehamilan menjadi AI berjangka waktu kerbau. Teriogenologi 157, 498–502.
Costa, A., De Marchi, M., Battisti, S., Guarducci, M., Amatiste, S., Bitonti, G., Borghese, A., Boselli, C., 2020. Tentang pengaruh suhu- indeks kelembaban pada komposisi susu curah kerbau dan
sifat koagulasi. Depan. Dokter hewan. Sains. 7, 1–8.
D'Occhio, MJ, Ghuman, SS, Neglia, G., Valle, GD, Baruselli, PS, Zicarelli, L., Visintin, JA, Sarkar, M., Campanile, G., 2020. Faktor eksogen dan endogen dalam
musim reproduksi pada kerbau: review. Teriogenologi 150, 186–192.
Dash, S., Chakravarty, AK, Sah, V., Jamuna, V., Behera, R., Kashyap, N., Deshmukh, B., 2015. Pengaruh Suhu dan Kelembaban Terhadap Angka Kehamilan Murrah
kerbau di bawah iklim subtropis. Australia Asia. J. Anim. Sains. 28, 943–950.
De Rensis, F., Ronci, G., Guarneri, P., Nguyen, BX, Presicce, GA, Huszenicza, G., Scaramuzzi, RJ, 2005. Tingkat konsepsi setelah inseminasi waktu tetap mengikuti protokol ovsynch dengan dan
tanpa suplementasi progesteron pada kerbau Italia Mediterania siklik dan non-siklik (Bubalus bubalis). Teriogenologi 63, 1824–1831.

deNicolo, G., Morris, ST, Kenyon, PR, Morel, PCH, Parkinson, TJ, 2008. Performa reproduksi 733 yang ditingkatkan Melatonin pada domba yang dibiakkan di luar musim. Animasi.
Reproduksi Sains. 109, 124–133.
El-Mokadem, MY, Nour El-Din, ANM, Ramadan, TA, Rashad, AMA, Taha, TA, Samak, MA, 2017. Manipulasi reproduksi musiman menggunakan implantasi melatonin di Anglo-Nubian diobati dengan
pelepasan obat internal yang terkontrol dan equine chorionic gonadotropin selama musim nonbreeding. J. Ilmu Susu. 100, 5028–5039.

Inggris, J., Poulton, AL, Arendt, J., Symons, AM, 1986. Perbandingan efisiensi perawatan melatonin dalam memajukan birahi pada domba. J.Reprod. Fertl. 77,
321–327.
Gaughan, JB, Mader, TL, Holt, SM, Lisle, A., 2008. Indeks beban panas baru untuk ternak penggemukan. J. Anim. Sains. 86, 226–234.
Ghuman, SS, Singh, J., Honparkhe, M., Dadarwal, D., Dhaliwal, GS, Jain, AK, 2010. Induksi ovulasi folikel non-ovulasi ukuran ovulasi dan inisiasi
siklus ovarium pada sapi dara kerbau anestrus musim panas (Bubalus bubalis) menggunakan implan melatonin. Reproduksi Rumah. Animasi. 45, 600–607.
Ghuman, S., Honparkhe, M., Singh, J., 2014. Perbandingan protokol berbasis ovsynch dan progesteron untuk induksi sinkronisasi ovulasi dan tingkat konsepsi pada
kerbau subestrous selama musim kawin rendah. Iran. J.Vet. Res. 15 (4), 375–378.
Grassman, C., Eising, R., Neves, LO, Eli, K., Juffo, EEL, 2020. Tersedia indeks suhu dan umidade untuk mengosongkan leiteiras dari raça holandesa di Rio do Sul.
SC. Ditampilkan: <http://eventos.ifc.edu.br/wp-content/uploads/sites/5/2014/09/CAZ-38.pdf>. Akses pada 03 November.
Hyder, I., Sejian, V., Bhatta, R., Gaughan, JB, 2017. Peran biologis melatonin selama musim panas terkait stres panas pada ternak. Biol. Ritme Res. 48 (2),
297–314.
Kavita, Phogat, JB, Pandey, AK, Balhara, AK, Ghuman, SS, Gunwant, P., 2018. Efek suplementasi melatonin sebelum protokol Ovsynch pada ovarium
tingkat aktivitas dan pembuahan pada sapi dara murrah anestrus selama di luar musim kawin. Reproduksi Biol. 18, 161–168.

9
Machine Translated by Google

NAT de Carvalho dkk. Ilmu Reproduksi Hewan 231 (2021) 106796

Kawate, N., Itami, T., Choushi, T., Saitoh, T., Wada, T., Matsuoka, K., et al., 2004. Peningkatan konsepsi dalam inseminasi buatan berjangka waktu menggunakan pelepasan progesteron
perangkat intravaginal dan protokol Ovsynch pada sapi potong hitam Jepang pasca melahirkan. Teriogenologi 61, 399–406.
Kumar, V., Kumar, P., 2013. Dampak stres termal terhadap rektal, suhu permukaan kulit, laju respirasi, indeks beban panas dan penyimpanan panas pada kerbau Murrah (Bubalus
Bubalis) laktasi. Banteng Kerbau. 32 (Edisi Khusus 2), 1141–1144.
Kumar, S., Ajeet, K., Meena, K., 2011. Pengaruh cekaman panas pada ternak tropis dan berbagai strategi perbaikannya. J. Stress Physiol. Biokimia. 7 (1), 45–54.
Kumar, A., Mehrotra, S., Singh, G., Narayanan, K., Das, GK, Soni, YK, Singh, M., Mahla, AS, Srivastava, N., Verma, MR, 2015. Pengiriman berkelanjutan melatonin eksogen memengaruhi
biomarker stres oksidatif dan kapasitas antioksidan total pada kerbau air anestrus musim panas (Bubalus bubalis). Teriogenologi 83, 1402–1407.

Kumar, A., Mehrotra, S., Singh, G., Maurya, VP, Narayanan, K., Mahla, AS, Chaudhari, RK, Singh, M., Soni, YK, Kumawat, BL, Dabas, SK, Srivastava , N., 2016.
Suplementasi melatonin pelepasan lambat meningkatkan pemulihan siklisitas ovarium dan konsepsi pada kerbau anestrus musim panas (Bubalus bubalis). Reproduksi
Rumah. Animasi. 51, 10–17.
Li, M., Hassan, F., Guo, Y., Tang, Z., Liang, X., Xie, F., 2020. Dinamika Musiman Respons Fisiologis, Oksidatif, dan Metabolik pada Nili-Ravi Non-laktasi
Kerbau Di Iklim Panas dan Lembab. Depan. Dokter hewan. Sains. 7, 1–11.
Malpaux, B., Viguie, C., Skinner, D., Thiery, JC, Chemineau, P., 1997. Kontrol ritme reproduksi sirkannual oleh melatonin pada domba betina. Otak Res. Banteng. 44,
431–438.
Megahed, GA, Anwar, MM, Wasfy, SI, Hammadeh, ME, 2008. Pengaruh stres panas pada keseimbangan kortisol dan oksidan-antioksidan selama fase estrus pada kerbau-sapi (Bubalus
bubalis): peran termo-protektif dari pengobatan antioksidan. Reproduksi Rumah. Animasi. 43, 672–677.
Monteiro, BM, Souza, DC, Vasconcellos, G., Carvalho, NAT, Baruselli, PS, 2018. Pengaruh musim terhadap penampilan reproduksi kerbau perah saat menggunakan P4/E2/
manajemen inseminasi buatan waktu tetap berbasis eCG. Teriogenologi 119, 275–281.
Nett, TM, Niswender, GD, 1982. Pengaruh melatonin eksogen pada reproduksi musiman pada domba. Teriogenologi 17, 645–651.
Nowak, R., Rodway, RG, 1985. Pengaruh implan melatonin intravaginal pada permulaan aktivitas ovarium pada domba dewasa dan prapubertas. J.Reprod. Fertl. 74,
287–293.
Pandey, AK, Gunwant, P., Soni, N., Kavita, Kumar, S., Kumar, A., Magotra, A., Singh, I., Phogat, JB, Sharma, RK, Bangar, Y., Ghuman , SPS, Sahu, SS, 2019.
Genotipe gen MTNR1A mengatur tingkat konsepsi setelah pengobatan melatonin pada kerbau. Teriogenologi 128, 1–7.
Pandi-Perumal, SR, Srinivasan, V., Maestroni, GJM, Cardinali, DP, Poeggeler, B., Hardeland, R., 2006. Melatonin: Sinyal biologis paling serbaguna dari alam? FEB
J. 273, 2813–2838.
P'evet, P., 2002. Melatonin. Klinik Dialog. Ilmu saraf. 4, 57–72.
P'evet, P., 2003. Melatonin pada model binatang. Klinik Dialog. Ilmu saraf. 5, 343–352.
P'evet, P., Agez, L., Bothorel, B., Saboureau, M., Gauer, F., Laurent, V., Masson-P'evet, M., 2006. Melatonin pada mamalia multi-osilasi dunia sirkadian.
Chronobiol. Int. 23 (1-2), 39–51.
Pevet, P., Klosen, P., Felder-Schmittbuhl, MP, 2017. Hormon melatonin: penelitian pada hewan. Praktik Terbaik. Res. Klinik. Endokrinol. Metab. 31, 547–559.
Ramadan, TA, 2017. Peran melatonin dalam reproduksi musiman pada kerbau. Sains Terbuka Intech. 5, 87–106.
Ramadan, TA, Sharma, RK, Phulia, SK, Balhara, AK, Ghuman, SS, Singh, I., 2014. Efektivitas pengobatan melatonin dan pengendalian pelepasan obat internal terhadap kinerja
reproduksi sapi dara kerbau selama musim kawin dalam kondisi tropis. Teriogenologi 82, 1296–1302.
Ramadan, TA, Sharma, RK, Phulia, SK, Balhara, AK, Ghuman, SS, Singh, I., 2016. Manipulasi performa reproduksi kerbau laktasi menggunakan melatonin dan perawatan alat
pelepas obat internal terkontrol selama musim out-of-breeding dalam kondisi tropis. Teriogenologi 86, 1048–1053.
Reiter, RJ, 1993. Irama melatonin: jam dan kalender. Pengalaman 49, 654–664.
Reiter, RJ, Tan, DX, Manchester, LC, Paredes, SD, Mayo, JC, Sainz, RM, 2009. Melatonin dan reproduksi ditinjau kembali. Biol. Reproduksi 81, 445–456.
Reiter, RJ, Tan, DX, Fuentes-Broto, L., 2010. Melatonin: molekul multitasking. Prog. Otak Res. 181, 127–151.
Rosenberg, M., Kaim, M., Herz, Z., Folman, Y., 1990. Perbandingan metode sinkronisasi siklus estrus pada sapi perah. Efek pada progesteron plasma dan
manifestasi estrus. J. Ilmu Susu. 73, 2807–2816.
Sejian, V., Bhatta, R., Gaughan, JB, Dunshea, FR, Lacetera, N., 2018. Ulasan: adaptasi hewan terhadap tekanan panas. Hewan 12, 431–444.
Simonneaux, V., Ribeleyga, C., 2003. Generasi pesan endokrin melatonin pada mamalia: tinjauan regulasi kompleks sintesis melatonin oleh
norepinefrin, peptida dan pemancar pineal lainnya. Pharmacol. Wahyu 55, 325–395.
Singh, I., Balhara, AK, 2016. Pendekatan baru dalam program inseminasi buatan kerbau dengan referensi khusus ke India. Teriogenologi 86, 194–199.
Slimen, IB, Najar, T., Ghram, A., Abdrrabba, M., 2016. Efek cekaman panas pada ternak: aspek molekuler, seluler dan metabolisme, tinjauan. J. Anim. Fisik. Animasi.
Nutr. 100, 401–412.
Slimen, IB, Chniter, M., Najara, T., Ghram, A., 2019. Meta-analisis beberapa respons fisiologis, metabolik, dan oksidatif domba yang terpapar panas lingkungan
menekankan. Hidup. Sains. 229, 179–187.
Talpur, HS, Chandio, IB, Brohi, RD, Worku, T., Rehman, Z., Bhattarai, D., Ullah, F., JiaJia, L., Yang, L., 2018. Kemajuan penelitian tentang peran melatonin dan nya
reseptor dalam reproduksi hewan: tinjauan komprehensif. Reproduksi Rumah. Animasi. 53, 831–849.
Vale, WG, 2007. Pengaruh lingkungan terhadap reproduksi kerbau. Italia. J. Anim. Sains. 289 (6), 130–142.
Youngquist, RS, Threlfall, WR, 2007. Terapi Terkini dalam Teriogenologi Hewan Besar (Edisi Kedua). Perusahaan WB Saunders, Philadelphia, hlm. 298–299.
Zicarelli, L., 1997. Reproduksi musiman pada kerbau. Dalam: Prosiding Kursus Ketiga tentang Bioteknologi Reproduksi pada Kerbau. Caserta, Italia, hlm. 29–52.

10