Judul SYNTHESIS OF A NOVEL CHALCONE DERIVATIVE FROM

MYRISTICIN FOR SKIN CANCER PREVENTIVE ACTIVITY

Jurnal Rasayan J. Chem
Volume & Volume 14(3): 1493-1498
Halaman
Tahun 2021
Penulis H. M. Ansory, I. N. Fitriani, S. Handayani, & N. Aznam

Reviewer Margaretha Rukmana

Tanggal 18 Maret 2023

Abstrak Jurnal yang berjudul “SINTESIS DERIVATIF KALKON

NOVEL DARI MIRISTIKIN UNTUK AKTIVITAS
PENCEGAHAN KANKER KULIT” ini langsung menuju ke topik
bahasan yang akan dibahas oleh penulis, sehingga pembaca semakin
mudah untuk memahami jurnal ini.
Abstrak dari jurnal ini berisi tentang turunan chalcone dari
myristicin diprediksi sebagai senyawa ampuh melawan target protein
molekuler kanker kulit dengan studi molekuler docking,
menggunakan metode skrining target molekuler kanker kulit dari
turunan myristicin adalah Heat Shock Protein 90 (HSP90A),
Prostaglandin Synthase 2 (PTGS2), dan Dihydroorotate
Dehydrogenase (DHODH). Hasil penelitiannya yaitu menunjukkan
bahwa HSP90A, PTGS2, dan DHODH diprediksi sebagai target
makromolekul potensial dengan interaksi yang baik dengan turunan
myristicin untuk terapi kanker kulit
Pengantar Pengantar pada jurnal ini menjelaskan tentang latar belakang
Myristicin (6-allyl-4-methoxybenzo-1,3]dioxole) adalah molekul
utama dalam minyak atsiri pala. Myristicin memiliki gugus alil yang
dapat diubah menjadi gugus aldehida menjadi turunan benzaldehida.
Turunan benzaldehida dari miristisin ini kemudian dapat direaksikan
dengan metil fenil keton untuk menghasilkan turunan kalkon baru.
Chalcones memiliki beragam aktivitas biologis, seperti antikanker,
antioksidan, antimalaria, dan aktivitas anti-alergi.

Kemudian menjelaskan latar belakang kanker kulit merupakan

masalah kesehatan masyarakat yang muncul dengan 40% pasien
kanker saat ini. Kanker kulit mengandung karsinoma sel skuamosa
(SCC), karsinoma sel basal (BCC), dan melanoma ganas. SCC dan
BCC adalah dua kanker kulit non-melanoma yang timbul dari
keratinosit epidermal yang berkorelasi dengan paparan cahaya yang
berkepanjangan, sedangkan melanoma kulit memengaruhi melanosit
dengan paparan sinar matahari yang terputus-putus.Insiden kanker
kulit meningkat di seluruh dunia, sbagian besar kanker kulit yang
disebabkan oleh penetrasi radiasi ultraviolet.
 Serta latar belakang metode yang akan digunakan yaitu molecular
docking adalah metode yang menggabungkan molekul kecil dengan
struktur makromolekul dan ligan dari protein target yang
diidentifikasi dan dicocokkan, membentuk pose pengikatan, dan
memiliki afinitas. Pendekatan ini telah umum digunakan untuk
meneliti obat-obatan dan mengintegrasikan docking molekuler
dengan studi in vitro yang memiliki arti penting untuk menemukan
obat baru. Dalam laporan ini, kami melihat penggunaan docking
molekul dan pengujian inhibitor molekul kecil.

Metode Penelitian Metode yang digunakan dalam penelitian ini yaitu Metode
Docking Molekuler Struktur kimia 4 ligan, dibuat dari database
ChemDraw secara manual. Struktur tiga dimensi (3D) adalah HSP90
(PDB ID: resolusi 2VCJ: 2,50 A), DHODH (PDB ID: resolusi 5IKQ:
2,41 A), dan PTGS2 (PDB ID: 2BXV dengan resolusi 2,15 A).
Makromolekul dikumpulkan dari Protein Data Bank (PDB).
Makromolekul disiapkan menggunakan perangkat lunak UCSF
Chimera. Investigasi docking dilakukan menggunakan AutoDock
Tools 1.5.6. Selanjutnya dilakukan binding site study oleh Discovery
Studio
Hasil Penelitian Hasil penelitian dari jurnal ini menyatakan bahwa HSP90
adalah pendamping yang memainkan peran penting dalam
pematangan konformasi dan aktivitas protein di dalam membran
substrat. Interaksi ATP dengan HSP90 berkontribusi pada beberapa
residu tirosin autofosforilasi. Hit yang disaring sebelumnya
menunjukkan efek penghambatan HSP90.23 Tumorigenesis yang
diinduksi UV-B terkait dengan perubahan metabolisme, dan bahwa
DHODH memicu respirasi mitokondria untuk perbaikan DNA dan
koordinasi sintesis ATP.24HSP90 sangat penting dalam mengatur
beberapa protein sel. Itu adalah tujuan yang baik untuk banyak
penyakit seperti tumor dan kelainan lipatan protein.25 Tiga senyawa
merapat ke situs pengikatan target protein. Ligan berlabuh terbaik di
Hsp90A adalah3. Skor energi ikat adalah -7,5 kkal/mmol. Skor
pengikatan terbaik pada senyawa DHODH adalah -10,3 kkal/mol
tanpa interaksi ikatan hidrogen. Hasil docking antara protein PTGS2
dengan ligan turunan miristin menunjukkan bahwa semua ligan
dapat berinteraksi dengan PTGS2. ΔGbind terendah adalah3,yang
memiliki skor energi ikat -8,6 kkal/mol. Senyawa ini menempati
situs pengikatan yang sama dengan ligan asli. Tidak ada ikatan
hidrogen dengan amino residu asam di tempat pengikatan. Residu
Tyr385 dan Ser530 hanya memiliki interaksi Van der Walls untuk
aktivitas penghambatan PGTS2.

Kesimpulan Kesimpulan dari penelitian ini adalah hasil docking antara protein
PTGS2 dan DHODH dengan ligan dari senyawa turunan myristicin
menunjukkan bahwa hampir semua ligan dapat berinteraksi dengan
kedua target tersebut. Ligan memiliki nilai ΔGbind terendah dan
memiliki interaksi terbaik -10,3 kkal/mol dan -8,6 kkal/mol pada
 DHODH dan PTGS2. Turunan myristicin chalcone diprediksi
sebagai senyawa ampuh melawan target protein molekuler kanker
kulit dengan studi molekuler docking. Turunan chalcone baru dari
myristicin disintesis melalui tiga langkah sintesis1, 2,ditandai dengan
GC-Ms, IR, dan1 H NMR. Menggabungkan3di HSP90A memiliki
ΔGbind -7,5 kcal/mol.
Kekuatan 1. Abstrak yang ditulis cukup menyeluruh dan mudah dipahami
oleh pembaca.
2. Penulisan pendahuluan sudah sesuai dengan judul yang di bahas
3. Tujuan penelitian sudah berkaitan dengan judul yang diteliti
Kelemahan 1. Dalam jurnal masih kurang menjelaskan secara mendetail dari
hasil serta metode yang digunakan.
2. Kesimpulan yang ditulis oleh penulis masih kurang lengkap untuk
menyimpulkan terhadap keseluruhan isi dari jurnal ini.
3. Dalam jurnal tidak dicantumkan pendapat dari para ahli yang
berkaitan dengan penelitian
4. Penggunaan bahasa dan analisis yang dilakukan tidak mudah
dipahami untuk pembaca
 DAFTAR PUSTAKA

Muchtaridi, A. Subarnas, A. Apriyantono and R. Mustarichie, International Journal of Molecular

Sciences, 11(11), 4771(2010).

J. Y. Lee and Park, Molecules, 16(8), 7132(2011).

H. M. Ansory, B. Purwono and H. S. Sastrohamidjojo, Jurnal Farmasi Indonesia, 12(2), 127(2015).

H. M. Ansory, E. N. Sari, A. Nilawati, S. Handayani, and N. Aznam, In Proceedings of The

Proceedings of the 2nd Bakti Tunas Husada-Health Science International Conference (BTH-
HSIC
2019), Indonesia, pp.138–142 (2020).

J. Yu, M. Shen, L. Deng, L. Gan and C. Ha, Chemistry of Natural Compounds, 48(4), 541(2012).

B. Srinivasan, T. E. Johnson, R. Lad and C. Xing, Journal of Medicinal Chemistry, 52(22), 7228(2009),
A. Modzelewska, C. Pettit, G. Achanta, N. E. Davidson, P. Huang and S. R. Khan, Bioorganic &
Medicinal Chemistry, 14(10), 3491(2006).

A. N. Kristanti, H. Suwito, N. S. Aminah, K. U. Haq, H. D. Hardiyanti, H. Anggraeni, N. Faiza, R.S.

Anto and S. Muharromah, Rasayan Journal of Chemistry, 13(1), 654(2020).

C.L. Miranda, J.F. Stevens, V. Ivanov, M. McCall, B. Frei, M.L. Deinzer, et al., Journal of Agricultural
and
Food Chemistry, 48(9), 3876(2000).

J. N. Domınguez, J. E. Charris, G. Lobo, G. N. de Domınguez, M. M. Moreno, F. Riggione, et al.,

European
Journal of Medicinal Chemistry, 36(6), 555(2001).

J. R. Dimmock, D.W. Elias, M. A. Beazely and N. M. Kandepu, Current Medicinal Chemistry, 6(12),
1125(1999).

M. Go, X. Wu and X. Liu, Current Medicinal Chemistry, 12(4), 483(2012).

H. Hegde, S. L. Gaonkar, N. P. Badiger and N. S. Shetty, Rasayan Journal of Chemistry, 13(3), 1744
(2020).

D. K. Yadav, S. Kumar, E. Choi, S. Chaudhary and M. Kim, Frontiers in Chemistry, 8, 250(2020).

S. Ziaj, F. Tseliou, D. Datta and R. A. Abbott, British Journal of Dermatology, 184(4), 764(2020).

Y. Li and X. Zhang, Journal of Dermatological Treatment, 31(4), 1(2020).

Nursamsiar1, M. Siregar, A. Awaluddin, N. Nurnahari, S. Nur, E. Febrina and A. Asnawi, Rasayan

Journal of Chemistry, 13(1), 690(2020).

M. Hassam, A. A. Nour, A. M. Satti and K. S. Kirollos, International Journal of Chemical Kinetics, 14(4),
351(2015).

M. Halpern, M. Yonowich-Weiss, Y. Sasson and M. Rabinovitz, Tetrahedron Letter, 22(7), 703(1981).

M. Halpern, Y. Sasson and M. Rabinovitz, The Journal of Organic Chemistry, 48(7), 1022(1983).

V. Vijayakumar, N. Radhakrishnan, and P. Vasantha-Srinivasan., Research Journal of Pharmacy and

Technology, 13(6), 2777 (2020).

Amarnath Singadi and K. Venkateswarlu, International Journal of Advances in Pharmacy and

Biotechnology, 6(1), 4(2020).

M. A. Al-Sha'er, I. Mansi, M. Khanfar and A. Abudayyh, Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal
Chemistry, 31(sup4), 64(2016).

M. Hosseini, L. Dousset, P. Michon et al., Oncogenesis, 8(10), 1(2019).

F. Schopf, M. Biebl and J. Buchner, Nature Reviews Molecular Cell Biology, 18(6), 345(2017).
`Judul Effects of Myristicin in Association with Chemotherapies on the
Reversal of the Multidrug Resistance (MDR) Mechanism in Cancer
Jurnal Pharmaceuticals
Volume & Volume 15: 1-12
Halaman
Tahun 2022
Penulis Elisa Frederico Seneme, Daiane Carla dos Santos, Carolina Afonso
de Lima, Ícaro Augusto Maccari Zelioli, Juliana Mozer Sciani and
Giovanna Barbarini Longato
Reviewer Margaretha Rukmana
Tanggal 22 Maret `2023

Abstrak Jurnal yang berjudul “Effects of Myristicin in Association with

Chemotherapies on the Reversal of the Multidrug Resistance (MDR)
Mechanism in Cancer” ini menjelaskan sehingga pembaca semakin
mudah untuk memahami jurnal ini.
Abstrak dari jurnal ini berisi tentang penyelidikan lebih lanjut
tentang myristicin sebagai pembalikan MDR yang potensial. Efek
myristicin dalam kaitannya dengan kemoterapi pada mekanisme
resistensi multidrug (MDR) pada kanker. Myristicin adalah senyawa
yang ditemukan dalam minyak biji pala dan telah ditunjukkan
memiliki potensi anti-kanker. MDR adalah suatu mekanisme di mana
sel-sel kanker menjadi resisten terhadap kemoterapi yang digunakan
untuk mengobati kanker.
Pengantar Pengantar pada jurnal ini menjelaskan tentang kanker
merupakan masalah kesehatan masyarakat utama di dunia.
Pengobatan kanker berupaya untuk menyembuhkan, memperpanjang
dan meningkatkan kualitas hidup pasien. Terapi yang paling sering
digunakan untuk pengobatan kanker adalah kemoterapi. Obat-obatan
yang digunakan langsung di dalam sel, mengganggu proses berbagai
fase siklus sel, oleh karena itu tidak memiliki selektivitas yang
tinggi.
Kemudian menjelaskan latar belakang hambatan utama dalam
pengobatan kemoterapi yang diwakili oleh resistensi multiobat
(MDR). Senyawa yang berasal dari alam telah diteliti tidak hanya
untuk mencari antineoplastik baru tetapi juga untuk menilai aktivitas
modulasi MDR mereka. Myristicin (1-allyl-3,4-methylenedioxy-5-
methoxybenzene) adalah zat alami aktif dari keluarga alkilbenzena,
terutama ditemukan dalam pala (Myristica fragrans).

Metode Penelitian Metode yang digunakan dalam penelitian ini yaitu dengan
Docking Molekuler dimana molekul myristicin dirancang
menggunakan alat OpenBabel, dengan mempertimbangkan parameter
3D dan pH 7. Hasilnya dikonversi ke format mol.2 untuk digunakan
dalam docking. Protein target, P-glikoprotein, dipilih dari RCSB
PDB (Protein Data Bank), kode akses 3G60, rantai A. Terakhir,
protein dan ligan diserahkan ke platform SwissDock, yang mampu
memprediksi energi ikat dan posisi myristicin dalam kaitannya
dengan P-gp. Program UCSF Chimera 1.15 digunakan untuk
pemrosesan data untuk memverifikasi posisi molekul dalam P-gp dan
tumpang tindih dengan ligan. Program ini juga digunakan untuk
menghitung pengikatan asam amino P-gp dan jarak antara ligan
dengan protein. Kultur stok ditanam dalam media lengkap. metode
kolorimetri 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)2,5-diphenyl tetrazolium
bromide (MTT, Sigma-Aldrich, Burlington, MA, USA) digunakan,
 yang secara tidak langsung mengevaluasi viabilitas sel dengan
aktivitas enzimatik mitokondria sel hidup. Kemudian melakukan uji
Asosiasi antara Myristicin dan Agen Kemoterapi (Cisplatin dan
Docetaxel) setelah mendapatkan nilai IC50 myristicin dan agen
kemoterapi docetaxel dan cisplatin, sel-sel menerima perawatan
bersama dengan myristicin-docetaxel dan myristicin-cisplatin,
masing-masing, selama 48 jam inkubasi dan, pada akhir waktu
perawatan ini, sel diwarnai. dengan MTT dan data absorbansi
dianalisis dan disusun menjadi grafik yang menghubungkan
persentase pertumbuhan sel dengan konsentrasi sampel, seperti yang
telah dijelaskan. Parameter farmakokinetik dihitung berdasarkan
struktur molekul myristicin dan dibandingkan dengan kriteria yang
ditetapkan oleh Lipinski. Platform Molinspiration digunakan untuk
merancang molekul dan kemudian memperoleh parameter yang
berkaitan dengan sifat fisikokimia, kelarutan, lipofilisitas.

Hasil Penelitian Hasil penelitian dari jurnal ini menyatakan bahwa myristicin
dapat membalikkan mekanisme MDR pada sel-sel kanker dan
ovarium yang resisten terhadap kemoterapi. Sel-sel kanker yang
diberi perlakuan myristicin menunjukkan sensitivitas yang lebih
besar terhadap kemoterapi dibandingkan dengan kelompok kontrol
yang hanya diberi kemoterapi.
Selain itu, myristicin juga meningkatkan permeabilitas
membran sel dan memfasilitasi masuknya kemoterapi ke dalam sel-
sel kanker. Hal ini menunjukkan bahwa myristicin dapat membantu
meningkatkan efektivitas pengobatan kanker. Analisis western blot
juga menunjukkan bahwa ekspresi protein P-gp, yang merupakan
salah satu faktor penyebab MDR, menurun pada sel-sel kanker yang
diberi perlakuan myristicin. Dengan menurunkan ekspresi protein ini,
myristicin dapat membalikkan mekanisme MDR pada sel-sel kanker.
Temuan ini menunjukkan bahwa myristicin memiliki potensi sebagai
 agen yang dapat membantu mengatasi MDR pada kanker dan
meningkatkan efektivitas pengobatan kanker.

Kesimpulan Kesimpulan dari penelitian ini adalah myristicin sendiri tidak

memiliki efek sitotoksik terhadap garis keturunan tumor ovarium
yang resisten NCI/ADR-RES, tetapi meningkatkan efek sinergis
ketika dikaitkan dengan kemoterapi obat cisplatin dan docetaxel,
mengurangi konsentrasi kemoterapi yang diperlukan untuk
menyebabkan penurunan viabilitas sel sebesar 50%. Mengingat
kendala besar dalam pengobatan kemoterapi kanker yaitu MDR
diperoleh oleh sel tumor, menyelidiki target yang efektif untuk
menghindari resistensi ini tetap menjadi tantangan penting yang perlu
dipecahkan. Oleh karena itu, penelitian ini mendorong
dilanjutkannya penelitian miristisin sebagai senyawa potensial
pembalikan MDR.
Kekuatan 1. Abstrak yang ditulis sangat lengkap dan mudah dipahami oleh
pembaca.
2. Penulisan pendahuluan sudah sesuai dengan judul yang di
bahas
3. Tujuan penelitian sudah berkaitan dengan judul yang diteliti
4. Kesimpulan yang ditulis oleh penulis masih sudah cukup
lengkap untuk menyimpulkan terhadap keseluruhan isi dari
jurnal ini.
5. Dalam jurnal dicantumkan pendapat dari para ahli yang
berkaitan dengan penelitian

Kelemahan 1. Dalam jurnal masih kurang menjelaskan secara mendetail dari

hasil serta metode yang digunakan.
2. Penggunaan bahasa dan analisis yang dilakukan tidak mudah
dipahami untuk pembaca
 DAFTAR PUSTAKA

Sung, H.; Ferlay, J.; Siegel, RL; Laversanne, M.; Soerjomataram, I.; Jemal, A.; Bray, F. Global
Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN Estimasi Insidensi dan Kematian di Seluruh Dunia
untuk 36 Kanker di 185 Negara.CA Cancer J.Clin.2021,71, 209–249. [CrossRef] [PubMed]

Fernandes, IC; Mello, AA Entendendo e combatendo ocAncer.TEMA Rev. Elektron.

Cienc.2008,7, 2–11. 3. Batista, PRB; de Mattos, M.; da Silva, SF Convivendo com
ocAncer: Lakukan diagnosisHaistico ao tratamento.Pendeta Enferm. UFSM2015,5, 499–
510. [CrossRef]

Miller, KD; Nogueira, L.; Mariotto, AB; Rowland, JH; Yabroff, KR; Alfano, CM; Jemal, A.;
Kramer, JL; Siegel, statistik pengobatan dan penyintas kanker RL, 2019.CA Cancer
J.Clin.2019,69, 363–385. [CrossRef]

MolAr, J.; Engi, H.; Hohmann, J.; MolAr, P.; Deli, J.; Wesolowska, O.; Michalak, K.; Wang, Q.
Pembalikan resistensi multidrug oleh zat alami dari tumbuhan.Kur. Atas. Kedokteran
kimia2010,10, 1757–1768.

Kumar, A.; Jaitak, V. Produk alami sebagai modulator resistensi multidrug pada kanker.eur.
J.Med. kimia2019,176, 268–291. [ CrossRef]

Seneme, EF; Dos Santos, DC; Silva, ESDM; Franco, YEM; Longato, GB Potensi farmakologis
dan terapeutik myristicin: Tinjauan literatur.Molekul2021,26, 5914. [CrossRef] [PubMed]

Afonso de Lima, C.; de Souza Bueno, IL; Nunes Siqueira Vasconcelos, S.; Sciani, JM; Ruiz,
ALTG; Foglio, MA; Carvalho, JED; Barbarini Longato, G. Pembalikan garis sel kanker
ovarium fenotipe resistensi multiobat oleh asosiasi apiole dengan
kemoterapi.Farmasi2020,13, 327. [CrossRef] [PubMed]

Lipinski, CA; Lombardo, F.; Dominy, BB; Feeney, PJ Pendekatan eksperimental dan komputasi
untuk memperkirakan kelarutan dan permeabilitas dalam pengaturan penemuan dan
pengembangan obat.Lanjut Pengiriman Obat. Putaran.2012,64, 4–17. [CrossRef]
Kim, MK; Choi, HS; Cho, SG; Shin, YC; Ko, ekstrak SG Rubus coreanus Miquel menyebabkan
apoptosis sel kanker ovarium NCI/ADR-RES yang resistan terhadap doxorubicin melalui
fosforilasi JNK.Mol. Kedokteran Reputasi.2016,13, 4065–4072. [CrossRef]

Wang, JJ; Lei, KF; Han, F. Lingkungan mikro tumor: Kemajuan terbaru dalam berbagai
perawatan kanker.eur. Pendeta Med. Pharmacol. Sains.2018 ,22, 3855–3864. [PubMed]

Tchounwou, PB; Dasari, S.; Noubissi, FK; Ray, P.; Kumar, S. Kemajuan dalam pemahaman kita
tentang mekanisme aksi molekuler cisplatin dalam terapi kanker.J.Exp.
Pharmacol.2021,13, 303–328. [CrossRef] [PubMed]

Pienta, KJ Mekanisme praklinis aksi kombinasi docetaxel dan docetaxel pada kanker
prostat.Sem. Oncol.2001,28, 3–7. [CrossRef]

Hamdan, D.; Leboeuf, C.; Le Foll, C.; Buket, G.; Janin, A. Menjelajahi kembali efek samping
docetaxel terkait kekebalan dalam studi observasional: Hipereosinofilia darah.Kedokteran
Kanker.2019,8, 2005–2012. [CrossRef] [PubMed]

Dia, M.; Wu, H.; Jiang, Q.; Liu, Y.; Han, L.; Yan, Y.; Wei, B.; Liu, F.; Deng, X.; Chen, H.; et al.
Faktor-2α yang diinduksi hipoksia secara langsung mempromosikan ekspresi BCRP dan
memediasi resistensi sel induk kanker ovarium terhadap adriamisin.Mol. Oncol.2019,13,
403–421. [ CrossRef]

Bukowski, K.; Kciuk, M.; Kontek, R. Mekanisme resistensi multidrug pada kemoterapi
kanker.Int. J.Mol. Sains.2020,21, 3233. [ CrossRef]

Wu, J. Mekanisme dan Kemajuan Anti Kanker Ovarium dengan Komponen Tumbuhan
Alami.Molekul2021,26, 594

Newman, DJ; Cragg, Produk Alami GM sebagai Sumber Obat Baru selama Hampir Empat
Dekade dari 01/1981 hingga 09/2019.J.Nat. Melecut.2020,83, 770–803. [CrossRef]

Laiolo, J.; Lanza, PA; Parravicini, O.; Barbieri, C.; Insuasty, D.; Cobo, J.; Vera, D.; Enriz, RD;
Carpinella, MC Hubungan aktivitas struktur dan mode pengikatan hibrida quinolinone-
pirimidin sebagai agen pembalikan resistensi multiobat yang dimediasi oleh P-gp.Sains.
 Reputasi.2021,11, 16856. [CrossRef]

Huang, RY; Pei, L.; Liu, Q.; Chen, S.; Dou, H.; Shu, G.; Yuan, ZX; Lin, J.; Peng, G.; Zhang, W.;
et al. Analisis isobologram: Tinjauan komprehensif metodologi dan penelitian saat
ini.Depan. Pharmacol.2019,10, 1222. [CrossRef]

Zhang, H.; Xu, H.; Ashby, CR; Assaraf, YG; Chen, ZS; Liu, HM Kimia pendekatan berbasis
molekul untuk mengatasi resistensi multidrug pada kanker dengan menargetkan P-
glikoprotein (P-gp).Kedokteran Res. Putaran.2021,41, 525–555. [CrossRef] [PubMed]