Autophagy dan Fibrosis Ginjal

Abstrak:
Fibrosis ginjal adalah proses umum dari hampir semua penyakit ginjal kronis yang
berkembang
menjadi penyakit ginjal stadium akhir. Sebagai jalur degradasi protein lisosom yang sangat
terkonservasi, autophagy bertanggung jawab untuk mendegradasi agregat protein, organel
yang rusak, atau patogen yang menyerang untuk mempertahankan homeostasis intraseluler.
Bukti yang berkembang mengungkapkan bahwa autophagy terlibat dalam perkembangan
fibrosis ginjal, baik di kompartemen tubulointerstitial dan di glomeruli. Namun demikian,
peran spesifik autophagy pada fibrosis ginjal masih belum sepenuhnya dipahami. Oleh karena
itu, dalam ulasan ini kami akan menjelaskan karakteristik autophagy dan merangkum
kemajuan terbaru dalam memahami fungsi autophagy pada fibrosis ginjal. Selain itu, masalah
yang ada di bidang ini dan kemungkinan autophagy sebagai target terapi potensial untuk
fibrosis ginjal juga telah dibahas.
Kata kunci: autophagy, fibrosis ginjal, penyakit ginjal kronis, penuaan seluler, fenotipe
sekretori terkait penuaan

1. Pendahuluan
Fibrosis ginjal adalah proses umum dari chronic kidney disease (CKD)
berkembang menjadi end-stage renal disease (ESRD) dan manifestasi histopatologis dari
CKD. Kejadian CKD secara global sekitar 10% [1], dan kejadian CKD meningkat dari tahun
ke tahun, menjadi salah satu penyakit utama yang membahayakan kesehatan masyarakat.
Pusat Pengendalian dan Pencegahan Penyakit AS memperkirakan bahwa 7% orang lanjut
usia pada akhirnya akan berkembang menjadi ESRD, membutuhkan dialisis atau
transplantasi ginjal untuk bertahan hidup [2]. Autophagy adalah jalur degradasi protein
lisosom yang sangat terkonservasi yang melakukan degradasi komponen sitoplasma termasuk
agregat protein, organel yang rusak, dan bahkan patogen yang menyerang [3]. Di hampir
semua sel eukariotik, terdapat autophagy tingkat basal, yang bertanggung jawab untuk
mempertahankan homeostasis seluler dengan mendegradasi protein berumur panjang dan
organel yang rusak [4, 5]. Selain itu, autophagy juga dapat diinduksi oleh isyarat stres
metabolik, genotoksik, atau hipoksia dan berfungsi sebagai mekanisme adaptif, yang penting
untuk kelangsungan hidup sel [4, 5]. Kedua jenis autophagy terlibat dalam banyak penyakit
manusia, termasuk penyakit neurodegeneratif, kanker, penyakit inflamasi dan autoimun, dan
fibrosis ginjal [5-12].
 Aktivasi autophagy memainkan efek perlindungan pada sel-sel ginjal di
bawah kondisi stres [13, 14], dan kekurangan autophagy akan meningkatkan sensitivitas
ginjal terhadap kerusakan, menyebabkan gangguan fungsi ginjal, akumulasi mitokondria
yang rusak, prematur ginjal dan fibrosis ginjal yang lebih parah [15-18]. Namun, penelitian
lain telah menemukan bahwa aktivasi autophagy yang terus menerus berbahaya bagi ginjal
setelah cedera parah, menyebabkan penuaan sel ginjal dan mempromosikan fibrosis ginjal
melalui sekresi sitokin profibrotik [19, 20]. Oleh karena itu, peran spesifik autophagy dalam
fibrosis ginjal masih belum diketahui. Dengan penggunaan gen terkait autophagy bersyarat
(ATG), seperti Atg5 atau Atg7, tikus knockout, disertai dengan pembangunan model penyakit
hewan dan peningkatan metode untuk memantau autophagy, penelitian yang akan datang
tentang autophagy pada fibrosis ginjal akan dijelaskan lebih lanjut. Di sini, kita akan
membahas yang terbaru kemajuan jalur autophagy dan menyoroti perannya dalam fibrosis
ginjal. Selain itu, kami juga akan membahas masalah yang ada di bidang ini dan
kemungkinan autophagy sebagai target terapi yang menjanjikan untuk fibrosis ginjal.

2. Jalur autophagy
Autophagy adalah proses dimana sel eukariotik mendegradasi protein
sitoplasma mereka sendiri dan merusak organel atau menyerang patogen melalui lisosom di
bawah regulasi ATG, sehingga mempertahankan homeostasis sel dan integritas sel [21, 22].
2.1 Klasifikasi autophagy
Menurut fungsi dan cara pengiriman ke lisosom, autophagy dapat dibagi
menjadi tiga jenis: macroautophagy, microautophagy dan chaperone-autophagy
dimediasi (Gambar 1). Makroautofagi mengacu pada fagositosis bahan sitoplasma
besar oleh autofagosom, dan kemudian fusi dengan lisosom untuk mendegradasi
substrat. Microautophagy mengacu pada lisosom itu sendiri menelan komponen kecil
dari sitoplasma dengan menginvaginasi membran lisosom [23]. Dalam autophagy
yang dimediasi pendamping, protein pendamping heat shock cognate 70 (Hsc70) dan
protein pendamping aksesori secara khusus mengenali protein sitoplasma yang
mengandung pentapeptida mirip KFERQ, dan kemudian berinteraksi dengan
lysosomal-associated membrane glycoprotein 2A (LAMP2A), dimana dibuka protein
akhirnya diangkut ke dalam rongga lisosom melalui kompleks translokasi multimerik
[22] (Gambar 1). Dibandingkan dengan autophagy microautophagy dan
chaperonemediated, macroautophagy adalah autophagy yang paling banyak dipelajari,
oleh karena itu macroautophagy disebut hanya sebagai autophagy selanjutnya [23].
Gambar 1. Klasifikasi autophagy. Autophagy dapat dibagi menjadi tiga jenis:
macroautophagy, microautophagy dan autophagy yang dimediasi pendamping.
Makroautofagi mengacu pada fagositosis bahan sitoplasma besar oleh autofagosom,
dan kemudian fusi dengan lisosom untuk mendegradasi substrat. Microautophagy
mengacu pada lisosom itu sendiri yang menelan komponen kecil sitoplasma dengan
menyerang membran lisosom. Dan autophagy yang dimediasi pendamping, protein
pendamping Hsc70 (heat shock serumpun 70) dan protein pendamping aksesori secara
khusus mengenali protein sitoplasma yang mengandung pentapeptida mirip KFERQ,
dan kemudian melewati interaksi glikoprotein 2A (LAMP2A) membran terkait
lisosom, protein yang tidak dilipat diangkut ke dalam rongga lisosom melalui
kompleks translokasi
multimerik.
Autophagy juga dapat dibagi menjadi autophagy basal dalam kondisi
fisiologis dan autophagy yang diinduksi dalam kondisi stres. Autophagy basal penting
untuk mempertahankan homeostasis seluler normal dengan menghilangkan organel
yang berpotensi disfungsional dan protein umur panjang. Sedangkan autophagy yang
diinduksi stres lingkungan dan intraseluler adalah respons adaptif untuk memastikan
sel kelangsungan hidup dan memainkan peran penting dalam penuaan, kanker,
penyakit neurodegeneratif, dan infeksi [5-7, 24].
 Selain itu, autophagy juga dapat dibagi menjadi autophagy nonselektif
(autophagy massal) dan autophagy selektif sesuai dengan apakah substratnya selektif
[25]. Autophagy non-selektif mendegradasi bahan sitoplasma secara non-selektif
dalam menanggapi kekurangan nutrisi, sedangkan autophagy selektif secara selektif
menurunkan muatan tertentu, seperti organel yang rusak, agregat protein, atau
patogen yang menyerang [26-28]. Baik autophagy non-selektif dan autophagy selektif
atau autophagy basal dan auotphagy yang diinduksi harus diatur dengan ketat karena
disregulasi proses ini melibatkan banyak penyakit manusia termasuk fibrosis ginjal.
2.2 Proses autophagy
Autophagy adalah proses yang diatur secara ketat dan rumit yang melibatkan
inisiasi, nukleasi, ekspansi, fusi, dan degradasi. Beberapa kompleks berbeda yang
disusun oleh protein ATG berfungsi dalam koordinasi dengan komponen transpor
membran dalam berbagai langkah biogenesis autofagosom. Beberapa protein ATG
mengontrol pembentukan autofagosom. Sejauh ini, lebih dari 40 protein ATG telah
diidentifikasi dalam ragi, di antaranya Atg1-10, 12-14, 16, 18 adalah "protein ATG
inti" [29]. Beberapa protein Atg terakumulasi membentuk struktur khusus yang
disebut struktur pre-autophagosome (PAS). Atg1, Atg2, Atg5, Atg8 dan Atg16
diperkirakan hadir di PAS dan terlibat langsung dalam pembentukan autofagosom
[30]. Di bawah stimulasi kelaparan, PAS akan berkumpul untuk membentuk membran
berbentuk cangkir, membran isolasi, yang akan memanjang dan akhirnya matang
menjadi autofagosom tertutup [31].
2.3 Induksi autophagy dan sinyal autophagy
 Protein ATG dapat membentuk enam gugus fungsi, yaitu kompleks protein
kinase Atg1, kompleks fosfatidilinositol 3-kinase (PI3K) kelas III, kompleks Atg9,
kompleks Atg18-Atg2 dan dua sistem pengikatan mirip ubiquitin (sistem pengikatan
Atg12 dan sistem lipidasi Atg8) [30, 32]. Kompleks yang disusun oleh serin/treonin
protein kinase ULK1, ULK2 dan protein lainnya adalah kompleks utama untuk
memulai autophagy, sedangkan kompleks PI3K mengatur nukleasi vesikel dan
pembentukan vesikel fagositik [33, 34]. Vesikel Atg9, yang berasal dari aparatus
Golgi, dapat merekrut kompleks ULK/Atg1, memulai autophagy dan berfungsi
sebagai sumber membran autophagosome [35-37]. Kompleks WIPI-Atg2
mentransmisikan sinyal yang diterima ke protein ATG hilir dengan mengikat PI3P
[37, 38]. Akhirnya, dua sistem pengikatan seperti ubiquitin, sistem ATG12-ATG5-
ATG16L dan sistem rantai ringan protein 1 terkait mikrotubulus 3 (MAP1LC3; juga
dikenal sebagai LC3) mengatur ekspansi dan penyelesaian autofagosom [39] (Gambar
2).
 Gambat 2. Pembentukan autophagy. Autophagy adalah proses multi-langkah yang
melibatkan inisiasi, nukleasi, ekspansi, fusi, dan degradasi. Ketika kelaparan atau
pengobatan dengan rapamycin, ATG13 mendefosforilasi dan mengikat ATG17
dengan cara yang bergantung pada protein mTOR dan mengaktifkan ATG1 untuk
menginduksi autophagy. Kemudian ATG1 dan ATG13 berinteraksi dengan kompleks
ATG17, ATG29, dan ATG31 untuk membentuk kompleks scaffold PAS, yang
merupakan langkah prasyarat untuk perakitan protein ATG hilir PAS. Kompleks
ULK/ATG1 direkrut ke dalam struktur membran secara independen dari PI3P dan
protein ATG hilirnya, dan kemudian distabilkan dalam struktur membran oleh PI3P.
Vesikel ATG9, yang berasal dari aparatus Golgi, dapat menyediakan lipid yang
diperlukan untuk perakitan protein hilir PAS, merekrut kompleks ULK/ATG1,
memulai autophagy dan berfungsi sebagai sumber membran autophagosome. Kelas
III PI3K kompleks I (PI3KC3-C1) diperlukan untuk nukleasi autofagosom dan terdiri
dari Vps34/VPS34, Vps15/p150, Vps30/BECN1 dan Atg14/ATG14L. Selama induksi
autophagy, PI3KC3-C1, yang menghasilkan PI3P pada PAS, direkrut ke dalam PAS.
PI3P mentransmisikan sinyal yang diterima ke protein ATG hilir melalui protein
ATG18/WIPI. Dua sistem pengikatan seperti di mana-mana, sistem Atg8/LC3 dan
sistem ATG12-ATG5-ATG16L mengatur perluasan dan penyelesaian autofagosom.
ketika kelaparan, protein mTOR tidak aktif dan memulai transkripsi LC3II. LC3
diubah menjadi LC3I di bawah pemrosesan ATG4, dan kemudian mengikat PE di
bawah katalisis enzim seperti E1 ATG7 dan enzim seperti E2 ATG3 (diaktifkan oleh
ATG12-ATG5-ATG16L) dan berpartisipasi dalam perluasan dan penyelesaian
autophagosome. Setelah vesikel fagosit diperluas dan diperluas untuk membentuk
autofagosom, hanya setelah membran luar autofagosom menyatu dengan lisosom dan
menyelesaikan degradasi isinya oleh hidrolase lisosom. Substrat yang terdegradasi
akhirnya dilepaskan ke dalam sitoplasma untuk digunakan kembali. E1, enzim
pengaktif ubiquitin; E2, enzim konjugasi ubiquitin; E3, ligase di mana-mana; RE,
retikulum endoplasma; PE, fosfatidiletanolamin.
2.4 Regulasi autophagy
 Autophagy umumnya diinduksi oleh stres seluler, seperti hipoksia, reactive
oxygen species (ROS), stres retikulum endoplasma (ER), kerusakan DNA,
kekurangan nutrisi atau faktor pertumbuhan, agregat protein, organel yang rusak, atau
patogen yang menyerang dan pensinyalan kekebalan [40] . Selain itu, autophagy
terutama diatur oleh tiga jalur penginderaan nutrisi utama, the mammalian target of
rapamycin complex 1 (mTORC1) [41, 42], jalur adenosine monophosphate-activated
protein kinase (AMPK) [43, 44], dan teroksidasi nicotinamide adenine dinucleotide-
dependent histone deacetylase sirtuin 1 (SIRT1) [45] (Gambar 3).
The mammalian target of rapamycin complex (mTOR) adalah protein kinase
serin/treonin yang aktivitasnya terkait dengan status redoks dan tingkat nutrisi [46].
mTORC1 dianggap sebagai kompleks pengatur nutrisi dan insulin, yang terdiri dari
mTOR, raptor (protein scaffold yang digunakan untuk merekrut substrat mTOR) [47]
dan GβL (G-protein-subunit-like protein; pengatur mTOR kinase aktivitas) [48].
mTORC2 terlibat dalam regulasi sitoskeleton [49] dan fosforilasi Akt, dan dibentuk
oleh kombinasi mTOR, rictor dan GβL [50]. Di bawah kondisi yang kaya nutrisi, GβL
secara konstitutif berinteraksi dengan domain mTOR kinase secara independen dari
raptor, dan mengaktifkan mTOR kinase [48]. Selain itu, mTORC1 dapat berinteraksi
dengan kompleks ULK1-Atg13-FIP200 dan menghambat induksi autophagy melalui
fosforilasi ULK1 dan ATG13 [41, 51] (Gambar 3).
Dalam keadaan energi rendah, autophagy seluler diaktifkan terutama oleh
jalur pensinyalan AMPK dan jalur pensinyalan Sirtuin 1. AMPK adalah kompleks
heterotrimerik yang tersusun oleh subunit , dan . Kinase hulu LKB1 dan CaMKK
dapat mengaktifkan AMPK dengan memfosforilasi residu 172-treoninnya. Selain itu,
aktivasi AMPK oleh LKB1 dan CaMKK tergantung pada rasio AMP/ATP dan
konsentrasi ion kalsium intraseluler [52, 53]. Selain itu, AMPK juga dapat diaktifkan
oleh TAK1, terlepas dari LKB1 dan CaMKK [54]. Saat kelaparan, kadar adenosin
monofosfat dalam sel meningkat, disertai dengan peningkatan rasio AMP/ATP [55],
menyebabkan aktivasi AMPK, yang dapat mengaktifkan autophagy melalui aktivasi
langsung ULK1 melalui fosforilasi Ser 317 dan Ser 777 [42] (Gambar. 3).
 Selain itu, AMPK yang diaktifkan juga dapat memfosforilasi TSC2 di
kompleks TSC1/TSC2, dan mengganggu interaksi antara TSC1 dan TSC2, sehingga
menghambat mTORC1 dan secara tidak langsung mengaktifkan autophagy [56, 57].
Selain itu, TSC2 memiliki aktivitas GAP yang sangat tinggi dan selektif untuk
menghambat fungsi Rheb, yang dapat memfosforilasi mTOR dan memainkan peran
penting dalam mengatur keadaan S6K dan 4EBP1 dalam menanggapi nutrisi dan
energi seluler [58]. Selain itu, AMPK juga dapat secara langsung memfosforilasi
raptor untuk memediasi pengikatan 14-3-3 (protein jangkar sitosol) untuk
menonaktifkan mTOR[56]. Namun, dalam faktor pertumbuhan mengaktifkan jalur
pensinyalan PI3K/Akt, Akt mengaktifkan mTOR dengan mempromosikan fosforilasi
PRAS40 dan memediasi pengikatannya ke 14-3-3 [59, 60] (Gambar 3.)
Gambar 3. Regulasi autophagy yang bergantung pada nutrisi. Regulasi
autophagy yang bergantung pada nutrisi terutama terkait dengan kompleks the
mammalian target of rapamycin complex 1 (mTORC1), adenosine monophosphate-
activated protein kinase (AMPK), dan nicotinamide adenine dinucleotide-dependent
histone deacetylase (Sirtuin1) teroksidasi. mTOR adalah regulator negatif utama
autophagy. Jalur pensinyalan mTOR diaktifkan dalam kelimpahan nutrisi, sementara
jalur pensinyalan AMPK dan jalur pensinyalan Sirtuin1 diaktifkan pada defisiensi
nutrisi. AMPK difosforilasi dan diaktifkan oleh beberapa kinase hulu, termasuk
LKB1, protein kinase yang bergantung pada kalsium/kalmodulin (CAMKK) dan
protein kinase 7 yang diaktifkan oleh mitogen (TAK1). Setelah diaktifkan, di satu sisi,
AMPK dapat secara langsung memfosforilasi serin/treonin protein kinase ULK1
untuk mempromosikan autophagy dan/atau secara langsung memfosforilasi raptor
(protein perancah yang digunakan untuk merekrut substrat mTOR) untuk memediasi
pengikatan 14-3-3 (a cytosolic protein jangkar) untuk menonaktifkan mTOR,
sehingga secara tidak langsung mengaktifkan autophagy. Di sisi lain, AMPK dapat
memfosforilasi TSC2 di kompleks TSC1/TSC2, mengganggu interaksi antara TSC1
dan TSC2, sehingga menghambat mTORC1 dan secara tidak langsung mengaktifkan
autophagy. Rheb terletak di hilir kompleks TSC1/TSC2 dan di hulu mTOR dan
bertindak sebagai pembangkit mTOR dan dihambat oleh kompleks TSC1/TSC2.
Namun, dalam jalur pensinyalan PI3K/Akt yang diaktifkan oleh faktor pertumbuhan
atau sitokin, Akt bertindak untuk mengaktifkan mTOR dengan menginduksi
fosforilasi PRAS40 dan memediasi pengikatannya ke 14-3-3. Selain itu, Akt juga
dapat menonaktifkan TSC2 atau menghambat FoxO3 (faktor transkripsi yang dapat
mengatur autophagy secara positif) untuk menekan autophagy. Saat kelaparan,
Sirtuin1 dan Sirtuin2 diaktifkan karena peningkatan NAD+. Sirtuin 1 dapat
mendeasetilasi forkhead box protein O1 (FoxO1) untuk mempromosikan fluks
autofagik dan/atau secara langsung mendeasetilasi beberapa protein autofagi esensial
seperti ATG5, ATG7, dan rantai ringan 3 (LC3) terkait mikrotubulus terkait protein 1
untuk menginduksi autofagi. Selain itu, FoxO1 diasetilasi setelah pemisahan dari
Sirtuin2, dan FoxO1 yang diasetilasi mempromosikan autophagy dengan
meningkatkan interaksinya dengan ATG7.
 Sirtuins, sebuah keluarga dari histone NAD+-dependent dan nonhistone
deacetylases, memainkan peran mendasar dalam merasakan dan mengatur respons sel
terhadap tekanan eksternal (seperti ketersediaan nutrisi)[61]. Aktivasi autophagy yang
terkait dengan Sirtuins terutama disebabkan oleh kelaparan. Induksi autophagy oleh
kelaparan (tetapi tidak oleh rapamycin atau stres ER) membutuhkan SIRT1 [62].
Tujuh Sirtuin telah ditemukan pada mamalia. Di antara mereka, SIRT1, SIRT6, dan
SIRT7 semuanya terletak di nukleus; SIRT3, SIRT4, dan SIRT5 adalah sirtuin
mitokondria [63]; SIRT2 adalah sirtuin sitoplasma yang terletak di nukleus selama
fase G2/M [64].
SIRT1 dapat mendeasetilasi protein autophagy, seperti ATG5, ATG7 dan
ATG8, dengan cara yang bergantung pada nikotinamida adenin dinukleotida, yang
penting untuk aktivasi autophagy [45]. Selain itu, SIRT1 juga dapat secara tidak
langsung mengatur autophagy dengan mendeasetilasi faktor transkripsi FoxO
(forkhead box O) [65, 66], yang memainkan peran multifaset dalam regulasi
autophagy [67-70]. Sebagai fungsi khas dari faktor transkripsi, FoxOs nuklir dapat
menginduksi autophagy dengan mengikat ke daerah promotor dan mempromosikan
ekspresi gen autophagy [70-73]. Selain itu, FoxOs sitosolik dapat mengatur autophagy
dengan berinteraksi langsung dengan protein autophagy, seperti Atg 7, yang tidak
tergantung pada transaktivasi [74-77]. Selain itu, FoxOs juga dapat mengatur
autophagy melalui mekanisme epigenetik, seperti modifikasi histone dan microRNAs
[78-81]. Akhirnya, pergantian protein FoxO dikendalikan secara langsung atau tidak
langsung oleh autophagy [82, 83]. SIRT1 dapat mendeasetilisasi dan mengaktifkan
FoxO3, yang dapat meningkatkan regulasi beberapa gen terkait autophagy, seperti
ULK2, BECN1, ATG4B, LC3, VPS34, ATG12, BCL2/BNIP3, BCL2/ BNIP3L dan
GABARAPL1 [40, 84]. Studi juga menunjukkan bahwa tikus SIRT1(-/-) sebagian
mirip dengan tikus ATG5(-/-), bermanifestasi sebagai penghancuran homeostasis
energi, akumulasi organel yang rusak dan kematian perinatal dini [45]. Selain itu,
penarikan serum dapat menyebabkan disosiasi SIRT2 dan FoxO1, menyebabkan
peningkatan asetilasi FoxO1, yang memfasilitasi interaksinya dengan ATG7 di
sitoplasma dan merangsang autophagy [75]. Oleh karena itu, Sirtuins dapat mengatur
autophagy dengan secara langsung dan tidak langsung bekerja pada komponen terkait
yang mengatur autophagy (Gambar 3).
 Selain itu, stres oksidatif, stres redoks, hipoksia, stres ER, defisiensi faktor
pertumbuhan, paparan virus RNA untai ganda, paparan ultraviolet, defisiensi heme,
sinyal imun, dan kerusakan mitokondria dapat secara efektif menginduksi autophagy
[40, 85]. ER terutama terlibat dalam sintesis dan pematangan protein (termasuk
pelipatan protein yang benar), di antaranya respon protein yang tidak dilipat (UPR)
adalah faktor utama yang mengaktifkan autophagy di bawah tekanan ER [86, 87].
Setelah tekanan ER, protein terkait membran ER, seperti PERK, PKR, ATF6, dan
IRE1, berpartisipasi dalam proses aktivasi autophagy. Diantaranya, PERK
menginduksi aktivasi autophagy melalui regulasi positif ATF4, CHOP, NF-κB, dan
eIF-2κ; PKR menginduksi autophagy dengan regulasi positif JNK1, eIF-2α, dan IK;
IRE1 mengaktifkan autophagy melalui JNK1 dan menghambat autophagy oleh XBP1;
sedangkan, ATF6 bisa langsung mengaktifkan autophagy [40].
Hipoksia menginduksi autophagy dengan mempromosikan up-regulasi HIF-
α, DJ-1, PDGF/PDGFR, dan PERK[88-91]. Peningkatan kadar ROS dapat memulai
autophagy dengan mengaktifkan PERK, ATG4 protease atau JNK1. Selain itu, ROS
juga dapat mengaktifkan protein p53 dan PARP hilir melalui respon kerusakan DNA-,
sehingga menginduksi autophagy [40].
Sitokin dan faktor pertumbuhan dapat menghambat autophagy secara
independen dari jalur mTOR dengan mengaktifkan jalur PI3K/Akt [92]. Sedangkan,
sebagai efektor hilir sinyal insulin, Akt memainkan peran ganda dalam autophagy, di
satu sisi dapat menghambat autophagy dengan mengaktifkan mTOR; di sisi lain,
dapat menghambat autophagy dengan menghambat FoxO3 [93] (Gambar 4).
 Gambar 4. Regulasi autophagy yang diinduksi stres. Digambarkan adalah
hubungan antara autophagy dan stres ER, hipoksia, dan tingkat ROS.
2.5 Fungsi autophagy
Autophagy, proses katabolik penting yang mendegradasi komponen
sitoplasma oleh lisosom, diperlukan untuk banyak aktivitas biologis mendasar, seperti
kontrol kualitas dan respons stres seluler, terutama pada sel postmitosis [3].
Dengan memfasilitasi pergantian tingkat basal protein berumur panjang dan
organel seperti mitokondria, lisosom, ribosom, ER, dan bahkan nukleus, autophagy
memainkan fungsi kontrol kualitas penting dalam sel eukariotik [94-97]. Fungsi
homeostatis ini terlibat dalam patogenesis berbagai penyakit neurodegeneratif dan
penyakit terkait usia [29, 98-101].
Selain itu, autophagy juga merupakan respons stres seluler penting yang
disebabkan oleh berbagai stres termasuk kekurangan nutrisi, penghentian faktor
pertumbuhan, stres oksidatif, atau infeksi [40]. Menanggapi tekanan ini, autophagy
diaktifkan untuk mempertahankan kapasitas biosintetik seluler dan tingkat ATP
dengan menyediakan asam amino untuk sintesis protein dan substrat untuk siklus
asam trikarboksilat (TCA) [102].
Oleh karena itu, peran utama autophagy adalah berfungsi sebagai sistem
kontrol kualitas dengan membersihkan protein yang salah lipatan dan komponen
seluler lainnya dalam kondisi fisiologis normal, dan untuk menyediakan prekursor
metabolik untuk kelangsungan hidup seluler dalam menanggapi berbagai tekanan.
3. Peran autophagy dalam fibrosis hati dan fibrosis paru-paru
Peran autophagy dalam fibrosis hati adalah kompleks dan tergantung pada
jenis sel di mana ia diaktifkan [103, 104]. Autophagy pada hepatosit, sel endotel dan
makrofag bersifat protektif, yang secara tidak langsung dapat melindungi hati dari fibrosis
[105-107]. Secara khusus, autophagy menghambat fibrosis hati melalui pengurangan
hepatosit cedera, menjaga homeostasis sel endotel, dan menurunkan regulasi ekspresi
sitokin inflamasi oleh makrofag dan sel endotel [103, 104]. Namun, autophagy sel stelata
hati (HSCs) merugikan, yang berkontribusi terhadap fibrosis hati dengan memfasilitasi
tetesan lipid rem-up di HSC diam, oleh karena itu mempromosikan aktivasi HSC [108,
109].
Fibrosis paru idiopatik (IPF) adalah penyakit paru-paru kronis, progresif, dan
fibrotik yang terjadi terutama pada orang dewasa yang lebih tua dan seringkali dengan
penyebab yang tidak diketahui [110-112]. Selama proses IPF, aktivitas autophagy
menurun, bermanifestasi sebagai akumulasi p62 dan protein ubiquitinated secara
bersamaan [113]. Studi in vitro menunjukkan bahwa penghambatan autophagy mampu
mempercepat penuaan sel epitel dan mempromosikan diferensiasi myofibroblast, yang
keduanya berkontribusi pada fibrosis paru [113]. Dibandingkan dengan tikus kontrol,
tikus yang kekurangan Atg4b menunjukkan peningkatan apoptosis sel epitel alveolar dan
bronkiolus dan fibrosis yang lebih parah yang bermanifestasi sebagai peningkatan
akumulasi kolagen dan deregulasi ekspresi gen terkait ECM [114]. Defisiensi autophagy
dalam sel myeloid dengan penghapusan Atg5 atau Atg7 mengakibatkan peradangan paru
yang lebih parah dan fibrosis paru [115]. Hasil ini menunjukkan bahwa autophagy
memainkan peran penting dalam peradangan paru-paru dan fibrosis melalui pengaturan
penuaan seluler, diferensiasi dan apoptosis.

4. Autophagy pada fibrosis ginjal

Fibrosis ginjal adalah proses umum dari hampir semua CKD yang
berkembang menjadi ESRD, terlepas dari etiologi yang mendasarinya [116]. Meskipun
banyak data eksperimental yang menjanjikan, strategi terapi yang tersedia saat ini hanya
mengurangi atau menunda perkembangan CKD tetapi tidak dapat membalikkan fibrosis
ginjal. Selain itu, strategi antifibrotik baru tidak dapat diterjemahkan dari bangku ke
samping tempat tidur karena kompleksitas fibrosis ginjal. Hampir semua sel residen
ginjal, termasuk sel epitel tubulus, podosit, sel endotel dan sel mesangial, terlibat dalam
patogenesis fibrosis ginjal, yang menunjukkan kompleksitas proses ini [117, 118].
 Sebagai sistem responsif stres yang penting, autophagy telah terbukti terlibat
dalam patogenesis berbagai penyakit ginjal, termasuk fibrosis ginjal [84, 119].
Hewan coba Sel ginjal Model penyakit Fungsi Fenotipe ginjal Aktivitas Fibrosis Ref
ginjal ginjal autophagy
Penghapusan RTECs 30 hari setelah Perbaikan Penurunan Menurun Meredakan fibrosis [147]
bersyarat iskemia/reperfusi penuaan tubular interstisial
ATG5 di
segmen S3
tubular
proksimal
Penghapusan RTECs 2 jam setelah - Lebih banyak Menurun - [147]
bersyarat iskemia/reperfusi kematian sel serta
ATG5 di kerusakan tubulus
segmen S3 dan peradangan
tubular
proksimal
Knockout RTECs Obstruksi ureter - Penurunan Menurun Mereda [148]
spesifik unilateral (UUO) proliferasi dan
tubulus aktivasi
proksimal miofibroblas,
ginjal dari penurunan
ATG7 akumulasi
komponen ECM
dan atrofi tubulus,
apoptosis sel,
kehilangan
nefron, infiltrasi
makrofag
interstisial dan
ekspresi faktor
profibrotik FGF2
semuanya
dihambat.
Penghapusan RTEC UUO - Deposisi ECM Menurun Fibrosis interstisial [132,
khusus PTEC yang kuat dan yang luar biasa 133,
dari ATG5 peningkatan 150]
jumlah RTEC
yang ditangkap
pada siklus sel
fase G2/M
Penghapusan Podosit Berumur Menolak Akumulasi Menurun Akhirnya [120]
spesifik Atg5 protein di mana- mengakibatkan
mana, stres ER, glomerulosklerosis
kehilangan dan fibrosis ginjal
podosit,
proteinuria masif,
lebih rentan
terhadap penyakit
glomerulus
Secara Podosit Model nefropati Menolak Podocytopathy Menurun Glomerulosklerosis [161]
khusus diabetik (DN) yang diinduksi
penghapusan diabetes yang
Atg5 di dipercepat,
podosit proteinuria masif
Khusus Podosit Diet tinggi lemak Menolak Kehilangan Menurun Glomerulosklerosis [162]
penghapusan (HFD) -diinduksi podosit dan
Atg5 model diabetes apoptosis podosit,
proteinuria masif
Secara Sel endotel Umur 10 minggu Menolak Perubahan ringan Menurun Glomerulosklerosis [161]
khusus glomerulu pada penghalang
penghapusan s (GEC) filtrasi
Atg5 di GEC, glomerulus pada
Atg5fl/fl; awal, sedikit
Cdh5-Cre pelebaran kapiler
glomerulus,
penipisan proses
kaki podosit yang
terpisah dan
hilangnya
fenestrasi endotel
glomerulus
disertai dengan
penebalan
sitoplasma
endotel
Secara Sel endotel Diabetes - Lebih parah pada Menurun Glomerulosklerosis [161]
khusus glomerulu Mellitus (DM) pelebaran kapiler
penghapusan s (GEC) glomerulus, lesi
Atg5 di GEC, endotel,
Atg5fl/fl; penebalan
Cdh5-Cre membran basal
glomerulus
(GBM) dan
pelebaran dan
penipisan
prosesus kaki
podosit
Atg5fl/fl;Tek- GEC - - Lengkungan Menurun Glomerulosklerosis [167]
Cre, kapiler sedikit
khususnya disertai dengan
penghapusan akumulasi ROS
Atg5 empat minggu
setelah lahir, pola
lobular dengan
penebalan loop
kapiler dan
ekspansi matriks
mesangial
delapan minggu
setelah lahir, dan
meninggal pada
usia dua belas
minggu
- Sel TGF-β1 - Penurunan Meningkat Menurun [169]
mesangial apoptosis GMC
glomerulu dan
s (GMC) meningkatkan
kelangsungan
hidupnya
- GMC AGEs - Penuaan GMC Menurun Penuaan [172]
- GMC Ang II - Penuaan GMC Meningkat Penuaan [173]
4.1 Fitur fibrosis ginjal
Sebagai jalur akhir umum dari hampir semua CKD, fibrosis ginjal ditandai
dengan penumpukan jaringan parut di dalam parenkim, menyebabkan ekspansi
interstisial kortikal, yang merupakan manifestasi terbaik dari penurunan fungsi ginjal
pada berbagai penyakit ginjal, seperti CKD, penyakit glomerulus, dan nefropati
diabetik tipe I [122-124]. Pada cedera ringan, akumulasi moderat matriks ekstraseluler
(ECM) pada awalnya dapat berkontribusi pada proses perbaikan jaringan dan
selanjutnya dapat diserap kembali selama proses perbaikan ginjal. Namun, bila cedera
lebih parah atau berulang, akan menyebabkan deposisi ECM yang persisten, yang
pada akhirnya mengganggu arsitektur ginjal, mengurangi suplai darah, dan
mengganggu fungsi ginjal. Fibrosis mengakibatkan penurunan kapasitas perbaikan
jaringan dan akhirnya menyebabkan gagal ginjal.
Gambaran utama fibrosis ginjal meliputi: (1) infiltrasi sel inflamasi, seperti
makrofag dan sel dendritik; (2) aktivasi dan proliferasi myofibroblast yang berasal
dari berbagai sumber; (3) produksi dan akumulasi persisten dari sejumlah besar
komponen ECM, seperti kolagen, fibronektin, laminin, glikoprotein, dan
proteoglikan; (4) dan atrofi tubulus ginjal dan penghalusan mikrovaskular [125, 126].
Proses fibrosis ginjal secara artifisial dapat dibagi menjadi empat tahap sesuai dengan
urutan kejadian destruktif ini: tahap priming, tahap aktivasi, tahap eksekusi, dan tahap
perkembangan [125-127]. Patut dicatat bahwa jenis pembagian fibrosis ginjal ini
cukup sewenang-wenang, karena fakta bahwa proses fibrosis ginjal yang realistis
adalah proses yang sangat dinamis, di mana banyak dari peristiwa ini dapat terjadi
secara bersamaan.
4.2 Autophagy sel epitel tubulus ginjal dan fibrosis ginjal
Sel epitel tubulus ginjal (RTECs) adalah sel ginjal residen utama yang
membentuk ginjal dan paling rentan terhadap berbagai cedera, seperti hipoksia,
proteinuria atau racun [128, 129]. Telah lama diyakini bahwa RTEC adalah korban
fibrosis ginjal. Namun, penelitian terbaru menemukan bahwa RTEC juga memainkan
peran penting dalam proses fibrosis ginjal [128, 130, 131]. Cedera parah
menyebabkan sejumlah besar RTEC mengalami apoptosis, dan beberapa RTEC
bertahan dan mengalami perubahan, berfungsi sebagai sel fibrogenik, mendorong
inflamasi interstisial dan fibrosis melalui sekresi berbagai faktor pertumbuhan
profibrogenik, seperti TGF-β1 dan CTGF [132 , 133].
 Sebagai mekanisme homeostatik seluler yang penting, autophagy memainkan
peran penting dalam pemeliharaan integritas RTEC dalam kondisi fisiologis dan
kondisi patologis, seperti cedera ginjal akut (AKI) yang disebabkan oleh
iskemia/reperfusi (I/R) [15, 134, 135]. Fungsi utama RTECs adalah reabsorpsi
elektrolit, yang merupakan proses yang mengkonsumsi sejumlah besar energi [136].
Untuk memenuhi kebutuhan energi untuk reabsorpsi ini, RTEC mengandung
sejumlah besar mitokondria, ER, ribosom, dan lisosom dalam sitoplasma. Kehadiran
sejumlah organel ini memainkan peran penting dalam reabsorpsi dan degradasi
albumin dan protein plasma lainnya dari filtrat glomerulus [137, 138].
Mempertimbangkan sifat dan fungsi RTEC, autophagy mungkin memainkan peran
penting dalam RTEC dalam kondisi fisiologis normal.
Dengan menganalisis mouse reporter GFP-LC3, Liu et al. telah menemukan
bahwa RTEC memiliki tingkat autophagy yang relatif rendah dalam kondisi fisiologis
normal [15]. Penghapusan spesifik waktu Atg5 di RTEC menghasilkan peningkatan
kadar kreatinin serum dan badan inklusi yang p62 dan ubiquitin positif, dan
perubahan ultrastruktur yang bermanifestasi sebagai deteksi badan membran
konsentris setelah 4 hingga 5 bulan pemberian doksisiklin [15]. Kekurangan
autophagy RTEC juga terakumulasi dengan mitokondria yang cacat dan inklusi
sitoplasma, menyebabkan hipertrofi seluler dan akhirnya degenerasi [134]. Hasil ini
menunjukkan bahwa autophagy tingkat basal yang rendah di RTEC dapat menjaga
homeostasis seluler dengan mengatur pergantian protein dan organel seluler.
 Autophagy diinduksi dan berfungsi sebagai mekanisme pelindung adaptif
dan ginjal untuk kelangsungan hidup sel dalam tekanan sel atau kondisi patologis,
seperti AKI - penyakit ginjal utama yang ditandai dengan hilangnya fungsi ginjal
secara cepat yang disebabkan oleh iskemia ginjal - reperfusi, sepsis, dan nefrotoksin
[15, 134, 135, 139]. Dengan menganalisis tikus reporter GFP-LC3, ditemukan bahwa
cedera I/R menyebabkan peningkatan jumlah titik LC3 yang signifikan setelah cedera
I/R 24 jam, sedangkan titik GFP-LC3 tidak dapat untuk dilihat pada tikus palsu yang
dioperasikan, menunjukkan bahwa autophagy mungkin memainkan peran penting
dalam respon stres RTEC [15, 134]. Memang, defisiensi autophagy RTEC secara
dramatis membuat ginjal peka terhadap cedera iskemik atau AKI yang diinduksi
cisplatin, yang menyebabkan gangguan fungsi ginjal yang bermanifestasi sebagai
peningkatan signifikan kadar nitrogen urea serum dan kreatinin, akumulasi
mitokondria yang rusak, inklusi sitoplasma positif p62 dan ubiquitin, dan peningkatan
apoptosis sel tubulus [15, 134, 135]. Hasil ini menunjukkan bahwa autophagy RTEC
memainkan peran penting dalam menjaga integritas sel tubulus selama kondisi stres
dengan menghilangkan mitokondria yang rusak dan menghindari akumulasi protein
rawan agregat [139].
Namun, peran autophagy RTEC dalam fibrosis ginjal tetap kontroversial,
meskipun penelitian ekstensif telah dilakukan. Aktivitas autofagik basal pada RTEC
lebih tinggi pada ginjal tikus tua dibandingkan pada ginjal tikus muda, sedangkan
fluks autofagik RTEC tikus sebagai respons terhadap stres metabolik menurun seiring
dengan penuaan [140]. Defisiensi autofagi RTEC dan tikus tua (24 bulan) tampak
sangat memburuk pada fungsi ginjal dan fibrosis, disertai dengan disfungsi
mitokondria, abnormalitas DNA mitokondria, dan kerusakan DNA inti [140]. Hasil
ini menunjukkan bahwa autophagy basal tinggi yang bergantung pada usia di RTEC
memainkan peran penting dalam menangkal penuaan ginjal dan fibrosis dengan
menjaga homeostasis mitokondria. Selain itu, fluks autophagic tumpul di RTEC
sebagai respons terhadap stres metabolik mungkin melibatkan penyakit ginjal terkait
usia, seperti CKD dan fibrosis ginjal.
 Selama penuaan, struktur ginjal berubah, dimanifestasikan sebagai
glomerulosklerosis, atrofi tubulus dan fibrosis interstisial [141]. Selain itu, sebagai
ciri penuaan, organel yang rusak dan agregat protein juga terakumulasi di dalam sel
[142]. Selain itu, aktivitas autophagy menurun seiring bertambahnya usia [143], yang
dapat menyebabkan kegagalan penghapusan agregat protein dan organel,
menyebabkan perkembangan penyakit terkait usia, seperti CKD dan fibrosis ginjal.
Memang, ginjal mudah terjadi perubahan struktural yang berkaitan dengan penuaan,
seperti glomerulosklerosis dan fibrosis interstisial. Bukti terbaik untuk gagasan ini
adalah peningkatan kerentanan terhadap AKI dan tingginya prevalensi CKD pada
populasi lanjut usia [144]. Bukti menunjukkan bahwa autophagy terkait erat dengan
fibrosis ginjal selama penuaan.
Autophagy dapat mengaktifkan penuaan seluler [145], sedangkan penuaan
seluler RTEC berkontribusi pada penuaan ginjal dan fibrosis [146]. Baisantry dkk.
menyelidiki fungsi autophagy RTEC dalam penuaan RTEC dan fibrosis ginjal.
Mereka menemukan bahwa dibandingkan dengan ginjal dari tikus kontrol, ginjal dari
tikus yang kekurangan autophagy RTEC (penghapusan bersyarat ATG5 di proksimal
segmen S3 tubulus) menunjukkan penurunan penuaan tubulus yang luar biasa,
pengurangan fibrosis interstisial, dan fungsi ginjal superior setelah cedera I/R 30 hari
[147]. Mereka juga menganalisis ginjal tikus 2 jam dan 3 hari setelah reperfusi dan
menemukan bahwa dibandingkan dengan ginjal tikus kontrol, ginjal tikus yang
kekurangan autophagy RTEC menunjukkan lebih banyak kematian sel pada 2 jam
tetapi kerusakan tubular dan peradangan lebih sedikit pada hari ke-3 [147]. Hasil ini
menunjukkan bahwa autophagy mempromosikan RTEC yang rusak parah untuk
bertahan hidup, sedangkan jika RTEC yang rusak parah ini bertahan, yang dapat
menyebabkan perbaikan maladaptif dan perubahan proinflamasi, sehingga mendorong
perkembangan fibrosis ginjal.
 Dalam model tikus fibrosis ginjal, aktivasi autophagy yang persisten di
RTECs ditemukan pada ginjal tikus dengan obstruksi ureter unilateral (UUO) [148].
Selain itu, dibandingkan dengan ginjal tikus kontrol, tingkat fibrosis pada tikus yang
kekurangan autophagy RTEC (ginjal KO spesifik tubulus proksimal ATG7) ginjal
berkurang, dimanifestasikan sebagai penurunan proliferasi dan aktivasi myofibroblast,
penurunan komponen ECM dan atrofi tubular ; moverover, apoptosis sel, kehilangan
nefron, infiltrasi makrofag interstisial dan ekspresi faktor profibrotik FGF2 semuanya
dihambat [148]. Hasil ini menunjukkan bahwa aktivasi autophagy yang persisten di
RTEC memfasilitasi fibrosis ginjal pada model tikus UUO dengan mengatur kematian
sel tubular, peradangan interstisial, dan yang paling penting sekresi faktor profibrotik.
Namun, Li dkk. telah menemukan bahwa dibandingkan dengan tikus tipe
liar, tikus yang kekurangan autophagy RTEC (penghapusan ATG5) khusus PTEC
menunjukkan fibrosis interstisial yang luar biasa dalam model UUO, dimanifestasikan
sebagai deposisi ECM yang kuat dan peningkatan jumlah RTEC yang ditangkap pada
siklus sel G2/M fase [149]. Hasil ini menunjukkan bahwa autophagy RTEC mencegah
fibrosis ginjal mungkin melalui penghambatan penghentian fase G2/M RTEC, karena
fase G2/M menahan sel yang mengalami penuaan dan mensekresi berbagai sitokin
profibrotik dan mempromosikan fibrosis ginjal [132, 133, 150].
Singkatnya, autophagy RTEC memainkan peran protektif dalam
pemeliharaan integritas RTEC dalam kondisi fisiologis, AKI, atau penuaan. Namun
perannya dalam fibrosis ginjal masih kontroversial. Autophagy RTEC mempengaruhi
fibrosis ginjal mungkin melalui efeknya pada penuaan seluler, penghentian proliferasi
yang dipicu oleh tekanan seluler seperti kerusakan DNA, stres oksidatif [145].
Penuaan tidak hanya menghambat proliferasi sel yang rusak, tetapi juga
mempengaruhi lingkungan mikro dengan mengeluarkan sitokin profibrotik (seperti
TGF-β1 dan CTGF), spesialisasi yang disebut sebagai fenotipe sekretori terkait
penuaan (SASP). Autophagy RTEC mempengaruhi fibrosis ginjal mungkin melalui
SASP dari RTECs. Karena autophagy bisa keduanya yaitu mengaktifkan dan
menghambat penuaan seluler [145], yang mungkin menyebabkan hasil yang
berlawanan tentang peran autophagy RTEC dalam fibrosis ginjal pada model tikus
yang berbeda.
4.3 Autophagy podosit dan fibrosis ginjal
 Podosit adalah sel yang berdiferensiasi akhir di glomerulus, yang memainkan
peran penting dalam mempertahankan penghalang filtrasi glomerulus [151]. Sel-sel
epitel postmitosis yang sangat berdiferensiasi ini memiliki tiga bagian yang berbeda:
badan sel, prosesus mayor, dan prosesus kaki [152]. Fenotip postmitosis podosit yang
sangat berdiferensiasi memastikan stabilitas penghalang filtrasi glomerulus, tetapi
juga menyebabkan glomerulus rentan [153]. Karena podosit adalah sel yang
berdiferensiasi akhir dan tidak dapat berproliferasi, oleh karena itu, kerusakan dan
kehilangan podosit merupakan penyebab utama proteinuria masif dan fibrosis ginjal
[154, 155].
Sebagai sistem degradasi intraseluler utama, autophagy mungkin memainkan
peran penting dalam mempertahankan homeostasis podosit. Memang, bukti klinis dan
eksperimental telah menunjukkan bahwa disfungsi jalur autophagy-lisosom
mengakibatkan cedera podosit parah, kehilangan podosit, proteinuria masif dan
fibrosis ginjal [156-158]. Selain itu, tingkat basal autophagy dalam podosit sangat
tinggi dibandingkan dengan sel residen ginjal lainnya [159, 160], menunjukkan bahwa
autophagy memainkan peran penting dalam mempertahankan homeostasis podosit
dan disfungsinya mungkin terlibat dalam proses fibrosis ginjal.
Seperti disebutkan di atas, podosit memiliki tingkat autophagy konstitutif
yang sangat tinggi [120]. Dibandingkan dengan tikus tua kontrol, tikus tua yang
kekurangan autofagi podosit (penghapusan spesifik Atg5 dalam podosit)
menunjukkan glomerulopati disertai dengan akumulasi protein di mana-mana, stres
ER, kehilangan podosit, proteinuria masif, dan akhirnya mengakibatkan
glomerulosklerosis dan fibrosis ginjal [120] . Aktivitas autophagy meningkat pesat di
glomeruli dari tikus yang diinduksi oleh proteinuria dan di glomeruli dari pasien
dengan penyakit proteinuric didapat. Selain itu, dibandingkan dengan tikus kontrol,
tikus yang kekurangan autophagy podosit lebih rentan terhadap penyakit glomerulus.
Hasil ini menunjukkan bahwa autophagy podosit (konstitutif dan diinduksi) adalah
mekanisme homeostatik pelindung utama dan memainkan peran penting dalam
menjaga integritas podosit, menghalangi penuaan dan cedera podosit, dan dalam
menghambat fibrosis ginjal.
 Nefropati diabetik (DN) adalah penyebab utama fibrosis ginjal dan ESRD.
Proses khas DN adalah munculnya mikroalbuminuria, progresi menjadi proteinuria
masif, dan akhirnya fibrosis ginjal dan gagal ginjal. Proteinuria masif adalah
penyebab utama fibrosis ginjal dan ESRD. Selain itu, albuminuria juga indikator yang
sangat prediktif dari CKD termasuk DN. Lenoir dkk. menemukan bahwa glukosa
tinggi mendorong fluks autophagy podosit secara in vitro dan pada tikus diabetes
[161]. Dibandingkan dengan tikus kontrol, tikus yang kekurangan autophagy podosit
(khususnya penghapusan Atg5 dalam podosit) menunjukkan podositopati yang
diinduksi diabetes yang dipercepat, dimanifestasikan sebagai proteinuria masif dan
glomerulosklerosis.
Tagawa dkk. juga menemukan bahwa tikus yang kekurangan autofagi
podosit (khususnya penghapusan Atg5 dalam podosit) menunjukkan kehilangan
podosit dan proteinuria masif dalam model diabetes yang diinduksi diet tinggi lemak
(HFD) untuk menginduksi proteinuria minimal [162]. Selain itu, mereka juga
menunjukkan bahwa tingkat autophagy podosit relatif tidak mencukupi pada pasien
dan tikus dengan diabetes dan proteinuria masif dibandingkan dengan mereka yang
tidak memiliki atau minimal proteinuria. Perlu dicatat bahwa massa lisosom yang
rusak muncul di podosit tikus diabetes dengan proteinuria masif dan tikus yang
kekurangan autophagy podosit yang diberi makan HFD. Selanjutnya, podosit yang
dikultur yang diobati dengan serum dari pasien dan tikus dengan diabetes dan
proteinuria masif menyebabkan disfungsi autophagy, menyebabkan disfungsi lisosom
dan apoptosis podosit [162]. Hasil ini menunjukkan bahwa autophagy podosit
memainkan peran penting dalam mempertahankan homeostasis podosit mungkin
dengan mengontrol kualitas lisosom dalam kondisi diabetes, dan bahwa kerusakannya
menyebabkan hilangnya podosit, proteinuria masif, dan fibrosis ginjal.
Singkatnya, aktivitas autophagy podosit sangat tinggi dibandingkan dengan
sel residen ginjal lainnya. Selain itu, autophagy podosit (konstitutif dan induksi)
memainkan peran penting dalam menjaga integritas podosit, menghalangi penuaan
podosit, dan menghambat fibrosis ginjal.
4.4 Autophagy sel endotel glomerulus dan fibrosis ginjal
 Ginjal mengandung beberapa jenis sel endotel (EC), seperti sel endotel
glomerulus (GEC), mikrovaskuler EC dalam kapiler peritubular dan EC dalam
pembuluh darah vena dan arteri yang lebih besar [163]. EC ini terpapar ke lingkungan
ginjal yang berbeda dan memainkan peran transportasi yang berbeda. GEC, yang
sangat berfenestrasi dan dilapisi oleh glikokaliks berfilamen yang cukup tebal,
memainkan peran penting dalam pemeliharaan penghalang filtrasi glomerulus (GFB)
dan struktur podosit [163-166].
Lenoir dkk. pertama kali menyelidiki fungsi autophagy GEC in vivo. Mereka
menemukan bahwa dibandingkan dengan tikus kontrol berusia 10 minggu, tikus yang
kekurangan autophagy GEC berusia sama (khususnya penghapusan Atg5 di GEC,
Atg5fl/fl;Cdh5-Cre) menunjukkan perubahan ringan pada penghalang filtrasi
glomerulus pada awal, bermanifestasi sebagai sedikit pelebaran kapiler glomerulus,
penipisan proses kaki podosit diskrit dan hilangnya fenestrasi endotel glomerulus
disertai dengan penebalan sitoplasma endotel [161]. Selain itu, mereka juga
menganalisis fungsi autophagy GEC pada kondisi diabetes mellitus (DM) dan
menemukan bahwa tikus diabetes yang kekurangan autophagy GEC menunjukkan
pelebaran kapiler glomerulus yang lebih parah, lesi endotel, penebalan membran basal
glomerulus (GBM) dan podosit. pelebaran dan penipisan proses kaki dibandingkan
dengan tikus diabetes kontrol [161]. Hasil ini menunjukkan bahwa autofagi GEC
memainkan peran protektif pada glomeruli baik pada awal maupun pada DM dengan
menjaga integritas endotel dan ultrastruktur podosit untuk mempertahankan
homeostasis GFB.
Matsuda dkk. mengeksplorasi lebih lanjut peran fisiologis autophagy di
GEC, mereka menemukan bahwa GEC mengungkapkan aktivitas autophagic yang
berlimpah, dimanifestasikan sebagai peningkatan yang luar biasa dalam jumlah
autophagosomes atau autolysosomes di GEC setelah penghambatan autophagy oleh
pemberian klorokuin [167]. Selain itu, mereka menetapkan garis tikus kekurangan
autophagy GEC lainnya (Atg5fl / fl; Tek-Cre, khususnya penghapusan Atg5 di GEC
dan dalam sel hematopoietik) dan menemukan bahwa tikus ini menunjukkan loop
kapiler yang sedikit buncit disertai dengan akumulasi ROS empat minggu setelah
lahir, pola lobular dengan penebalan loop kapiler dan ekspansi matriks mesangial
delapan minggu setelah lahir, dan meninggal pada usia dua belas minggu mungkin
karena pansitopenia yang disebabkan oleh pembelotan garis keturunan hematopoietik
mereka [167].
 Selanjutnya, mereka melakukan percobaan transplantasi sumsum tulang,
menundukkan tikus yang kekurangan autophagy GEC berusia empat minggu untuk
iradiasi dan kemudian diikuti oleh transplantasi sumsum tulang dari littermates
kontrol normal [167]. Tikus transplantasi berumur dua belas bulan menunjukkan
mesangiolisis dan glomerulosklerosis disertai dengan penurunan fungsi ginjal yang
luar biasa, yang dimanifestasikan sebagai peningkatan yang signifikan dalam nitrogen
urea plasma (UN) dan albuminuria. Selain itu, pemberian ROS scavenger N-acetyl-L-
cysteine (NAC) ke tikus yang kekurangan autophagy GEC dapat mengurangi lesi
glomerulus [167], menunjukkan bahwa autophagy GEC mempertahankan integritas
kapiler glomerulus dan menghambat fibrosis ginjal mungkin dengan mengurangi stres
oksidatif.
Singkatnya, GEC menunjukkan aktivitas autophagic yang substansial, yang
sangat tinggi dibandingkan dengan sel residen ginjal lainnya. Selain itu, autophagy
GEC memainkan peran penting dalam menjaga integritas GEC, ultrastruktur podosit,
homeostasis GFB, dan integritas kapiler glomerulus. Disfungsi autophagy GEC dapat
menyebabkan fibrosis ginjal mungkin karena kerusakan GFB yang disebabkan oleh
hilangnya GEC dan podosit.
4.5 Autophagy sel mesangial glomerulus (GMC) dan fibrosis ginjal
Fibrosis ginjal ditandai dengan akumulasi ECM di kompartemen interstisial
dan glomerulus ginjal. Sebagai konstituen seluler utama mesangium glomerulus,
GMC memainkan peran penting dalam perkembangan fibrosis glomerulus dan
fibrosis ginjal [168]. Sebagai salah satu sel penghasil matriks utama, GMC
mensekresi komponen matriks mesangial (seperti kolagen tipe IV dan tipe V dan
fibronektin) yang terkait dengan matriks mesangial untuk membentuk GBM, yang
fungsi utamanya adalah melakukan filtrasi [168]. Namun, GMC dapat diaktifkan oleh
stimulus patologis, menghasilkan proliferasi berlebihan dan akumulasi ECM yang
persisten. Selain itu, GMC yang diaktifkan juga dapat mensekresi berbagai sitokin
profibrotik, seperti TGF-β1 dan CTGF, yang semuanya terlibat dalam perkembangan
fibrosis ginjal.
 Fungsi autophagy GMC pada fibrosis ginjal kurang dipahami dan sebagian
besar studi adalah studi in vitro. Ding dkk. menunjukkan bahwa TGF-β1 dapat
menginduksi autophagy, dan oleh karena itu melindungi GMC dari apoptosis selama
deprivasi serum [169]. Autophagy GMC mungkin berfungsi sebagai mekanisme
adaptif dalam menanggapi cedera glomerulus dengan menghambat apoptosis GMC
dan meningkatkan kelangsungan hidupnya. Kim dkk. telah menemukan bahwa
autophagy GMC terlibat dalam degradasi intraseluler kolagen tipe I [170]. Dengan
mengatur secara negatif dan mencegah akumulasi ECM yang persisten, autophagy
GMC memainkan peran penting dalam menghambat fibrosis ginjal.
Sel ginjal senescent meningkat pada berbagai penyakit ginjal, dan
peningkatan sel senescent mendorong perbaikan maladaptif ginjal, menyebabkan
perkembangan fibrosis ginjal setelah cedera parah [171]. Shi dkk. menemukan bahwa
AGEs menghambat aktivitas autophagy, menyebabkan penuaan GMC mungkin
melalui jalur RAGE/STAT5 [172]. Namun, Yang dkk. menunjukkan bahwa aktivitas
autophagy meningkat pada sel-sel tua yang diobati dengan stimulasi Ang II [173].
Selain itu, penghambatan autophagy oleh 3-methyladenine (3-MA) dapat mengurangi
penuaan GMC yang diinduksi oleh Ang II. Singkatnya, fungsi autophagy GMC pada
fibrosis ginjal masih kurang dipahami, dan beberapa penelitian in vitro bahkan sampai
pada kesimpulan yang berlawanan. Oleh karena itu, sangat perlu untuk penyelidikan
lebih lanjut tentang peran autophagy GMC dalam fibrosis ginjal in vivo dengan
menggunakan tikus yang kekurangan autophagy spesifik.

5. Kesimpulan dan perspektif

Fungsi autophagy pada fibrosis ginjal telah dipelajari secara ekstensif pada
model tikus, tetapi masih belum ada konsensus dan tetap kontroversial mungkin karena
kompleksitas fibrosis ginjal dan keragaman fungsional autophagy. Hampir semua sel
residen ginjal serta sel inflamasi yang terinfiltrasi terlibat dalam proses fibrosis ginjal
[126]. Fungsi autophagy di sebagian besar sel-sel ini dan pengaruhnya terhadap fibrosis
ginjal masih kurang dipahami. Autophagy dalam podosit dan GEC memainkan peran
protektif dalam menjaga integritas sel dan menghambat fibrosis ginjal. Namun, peran
autophagy RTEC dalam fibrosis ginjal tetap kontroversial, beberapa penelitian percaya
bahwa autophagy RTEC dapat menghambat fibrosis ginjal sedangkan yang lain
menunjukkan sebaliknya. Selain studi ini pada tikus knockout, tidak ada bukti kuat yang
menunjukkan bahwa fungsi autophagy pada sel residen ginjal lainnya serta sel infiltrasi
memainkan peran mempromosikan atau menghambat dalam fibrosis ginjal.
 Autophagy sel residen ginjal mempengaruhi fibrosis ginjal mungkin melalui
penuaan seluler, program yang dilestarikan yang ditandai dengan penghentian proliferasi
permanen dan fenotipe sekretori aktif [174]. Sel-sel tua mempromosikan fibrosis ginjal
terutama dengan mensekresi berbagai faktor profibrotik, seperti TGF-β1 dan CTGF [171,
175, 176]. Penuaan seluler adalah salah satu penyebab utama penuaan dan bertanggung
jawab atas banyak penyakit terkait usia. Aktivitas autophagy berkurang dalam proses
penuaan, apalagi autophagy juga berkontribusi pada perpanjangan umur dan rentang
kesehatan mamalia [143]. Dibandingkan dengan tikus kontrol, tikus yang direkayasa
secara genetik dengan peningkatan aktivitas autophagy oleh knock-in
Becn1F121A/F121A atau knockout Rubicon memiliki peningkatan fenotipe terkait usia,
seperti pengurangan fibrosis jantung dan ginjal, pengurangan tumorigenesis spontan, dan
perluasan umur [177, 178]. Sebaliknya, penurunan regulasi aktivitas autofagi dengan
penghapusan LC3B (tikus LC3-/-) atau penghapusan sebagian Beclin (tikus Beclin+/-)
menyebabkan peningkatan deposisi kolagen dan peningkatan kadar faktor profibrotik
matang TGF-β pada ginjal yang terhambat [179 ]. Secara umum, autophagy dapat
menghambat fibrosis ginjal dengan mengurangi penuaan sel atau penuaan.
Hubungan antara penuaan dan autophagy adalah kompleks, dan sebagian
besar bukti disimpulkan dari penelitian pada tikus atau dalam sel yang dikultur. Di satu
sisi, autophagy dapat menghambat penuaan seluler dengan menghilangkan makromolekul
atau organel yang rusak dan mempertahankan homeostasis sel [180-183]. Di sisi lain,
autophagy dapat mempromosikan penuaan seluler dengan pembentukan kompartemen
kopling spasial TOR-autophagy (TASCC), yang menawarkan fluks asam amino daur
ulang dan metabolit lainnya yang tinggi, dan mendukung sintesis besar-besaran faktor
SASP [145, 184 ]. Mengingat fungsi multifaset autophagy dalam penuaan seluler, tidak
sepenuhnya mengejutkan bahwa temuan yang bertentangan telah dilaporkan pada fibrosis
ginjal.
 Terlepas dari dukungan data substansial bahwa autophagy memainkan peran
penting dalam fibrosis ginjal, banyak pertanyaan tetap tidak terjawab. Misalnya, peran
autophagy dalam GMC, sel fibroblas, dan makrofag dalam fibrosis ginjal tetap tidak
diketahui. Mekanisme yang tepat dari autophagy pada berbagai jenis sel ginjal pada
fibrosis ginjal sebagian besar masih belum diketahui. Selain itu, peran microautophagy,
autophagy yang dimediasi pendamping dan autophagy selektif dalam berbagai jenis sel
ginjal pada fibrosis ginjal juga kurang dipahami. Selain itu, sebagian besar bukti saat ini
untuk fungsi autophagy pada fibrosis ginjal berasal dari model tikus dan sel kultur in
vitro, apakah hasil dari sel in vitro dan hewan dapat diterapkan pada manusia masih
belum diketahui. Di masa depan, aktivasi dan penghambatan aktivitas autophagy bisa
menjadi strategi terapi yang menjanjikan untuk fibrosis ginjal, mengingat fungsi
pembuangan limbahnya yang kuat. Ada kebutuhan mendesak untuk menetapkan metode
pemantauan aktivitas autophagy manusia untuk mengevaluasi peran autophagy dalam
fibrosis ginjal manusia dan perkembangan pengobatannya [185].