KELOMPOK 6 :

1. A Erza Giantori 190101001

2. Fredi priadi (190101071)
3. Lia safitri (200101202)
4. Nabila Julyantika (200101208)

Ekstraksi pelarut eutektik dalam dengan bantuan

ultrasound dari echinacoside dan oleuropein dari Syringa
pubescens Turcz.
ABSTRAK
Dalam karya ini, pelarut eutektik dalam (DES) disintesis menggunakan metode pemanasan
dengan bantuan ultrasound dan pengadukan. DES dikombinasikan dengan ekstraksi berbantuan
ultrasonik (UEA) diusulkan untuk ekstraksi glikosida yang efisien dari Syringa pubescens Turcz.
Serangkaian sistem DES digunakan untuk mengevaluasi efisiensi ekstraksi glikosida di S.
pubescens. DES terdiri dari kolin klorida/gliserol yang diekstraksi lebih tinggi daripada pelarut
konvensional dan DES lainnya. Prosedur ekstraksi DES-UAE dioptimalkan menggunakan
metodologi permukaan respons. Pelarut ekstraksi adalah kolin klorida-gliserol membentuk DES
dengan perbandingan mol 1:2 dengan kadar air 20%. Kondisi optimum untuk echinacoside (ECH)
dan oleuropein (OLE) adalah daya ultrasonik 200 W, suhu ekstraksi 68 °C, rasio pelarut terhadap
padat 20:1 mL/g dan waktu ekstraksi 45 menit. Selanjutnya, DES dengan kadar air 30% dapat
digunakan sebagai pelarut pengenceran sebelum analisis HPLC terhadap ekstrak DES. Selain itu,
pengayaan ECH dan OLE dari ekstrak DES dicapai dengan menggunakan resin makropori HPD-
450, dengan pemulihan masing-masing 80,04 % dan 86,21 %.

1. Pendahuluan
Syringa pubescens Turcz., yang termasuk dalam keluarga Oleaceae, merupakan tanaman
semak gugur yang tersebar luas di pegunungan Cina utara (Deng et al., 2010). Bunga
tanaman ini sering digunakan sebagai obat rakyat Cina untuk pengobatan hepatitis dan
sirosis (Wu et al., 2003). Investigasi fitokimia menunjukkan bahwa glikosida sebagian
besar merupakan konstituen aktif dari S. pubescens Turcz. Juga dilaporkan bahwa
echinacoside (ECH) dan oleuropein (OLE) adalah glikosida utama (Gbr. 1) (Deng et al.,
2010; Liu et al., 2011). Banyak penyelidikan in vitro dan in vivo telah menunjukkan ECH
dan OLE memiliki sifat pelindung saraf (Geng et al., 2007; Pourkhodadad et al., 2016),
kapasitas antioksidan (Jemai et al., 2009; Wei et al., 2019), aktivitas anti-inflamasi dan
anti-kanker (Li et al., 2014; Sherif dan AlGayyar, 2018), sifat kardioaktif (He et al., 2009)
dan efek antivirus (Ma et al., 2001).
Ekstraksi ECH dan OLE telah dilakukan dengan menggunakan pelarut organik atau
campuran air/pelarut organik (Pei et al., 2019). Meskipun pelarut organik atau pelarut
organik campuran air populer dan sesuai untuk pembubaran dan ekstraksi ECH dan OLE,
mereka menunjukkan kerugian intrinsik termasuk akumulasi di atmosfer karena titik
didih rendah, mudah terbakar tinggi, merusak lingkungan, nonbiodegradasi, dan biaya.
Selanjutnya, pelarut ini bisa tidak memenuhi kebutuhan kimia hijau ketika dampak
lingkungan diperhitungkan. Oleh karena itu, pelarut baru dan ramah lingkungan harus
dikembangkan dan diselidiki untuk mengekstraksi ECH dan OLE dari S. pubescens Turcz.
 Pelarut eutektik dalam (DES) adalah alternatif yang hijau dan berkelanjutan dari
pelarut organik konvensional dan telah menarik banyak perhatian di berbagai bidang
karena sifatnya seperti persiapan yang mudah, kelembaman kimiawi dengan air, biaya
rendah, dapat terurai secara hayati, dan tidak beracun (Mansur et al., 2019). DES dapat
dengan mudah diperoleh dengan mencampurkan akseptor ikatan hidrogen (HBA) dan
satu atau dua donor ikatan hidrogen (HBD). Kolin klorida, yang merupakan garam
amonium kuaterner, adalah yang paling umum digunakan sebagai HBA, yang dapat
membentuk DES dalam campuran dengan HBD lain termasuk urea, etilen glikol, dan
gliserol, alkohol, asam amino, asam karboksilat, dan gula ( Duan et al., 2016; Pal dan
Jadeja, 2019). Untuk semua sifat luar biasa ini, DES diterapkan untuk ekstraksi senyawa
bioaktif dari bahan tanaman seperti flavonoid(Qi et al., 2015; Wang dan Wang, 2019),
asam fenolik (Peng et al., 2016), polifenol ( Saha et al., 2019), antrakuinon (Deng et al.,
2017) dan saponin Di antara analit ini, senyawa fenolik dapat dengan mudah diekstraksi
karena interaksi antarmolekul yang kuat terjadi antara senyawa fenolik dan DES. beranda
jurnal: www.elsevier.com/locate/indcrop Untuk meningkatkan efisiensi dan hasil
ekstraksi, ekstraksi baru

teknik seperti ekstraksi dengan bantuan ultrasound (UAE) telah banyak digunakan dalam banyak
penelitian (Esclapez et al., 2011; Sharma et al., 2020 Kombinasi DES dan UEA (DES-UAE) sangat
menjanjikan karena efisiensi ekstraksi yang tinggi dan kimia hijau. Selain itu, banyak penelitian
tentang penerapan DES-UAE untuk mengekstraksi senyawa bioaktif dari bahan tanaman (Ali et al.,
2019; Zhang dan Wang, 2017). DES-UAE sebagai teknik yang menjanjikan akan diterapkan dalam
industri makanan, farmasi dan kosmetik di masa depan.

Sepengetahuan kami, sejauh ini tidak ada investigasi khusus pada ECH dan OLE
menggunakan DES sebagai pengganti pelarut organik tradisional. Dalam karya ini, serangkaian DES
berbasis kolin klorida disiapkan untuk mengevaluasi efisiensi ekstraksi. DES-UAE pertama kali
diterapkan untuk mengekstraksi ECH dan OLE secara bersamaan dari S. pubescens Turcz. Metodologi
permukaan respon (RSM) digunakan untuk mengoptimalkan parameter proses UEA. RSM dapat
diterapkan dengan baik ketika satu atau lebih respons minat dipengaruhi oleh faktor yang berbeda
(Bezerra et al., 2008). Selain itu, pemulihan ECH dan OLE dari ekstrak DES diselidiki menggunakan
resin makropori. Sampel tumbuhan yang digunakan dalam penelitian diperoleh dari Gunung Funiu di
Provinsi Henan, China. Daerah ini merupakan zona transisi geografis antara zona subtropis sedang
dan utara dan merupakan wilayah yang cocok untuk tanaman obat karena topografi yang kompleks
dan beragam, kondisi iklim sedang dan lembab. Jadi, S. pubescens Turcz adalah sumber herbal medis
yang sangat baik.

2. Bahan-bahan dan metode-metode

2.1 Bahan dan bahan kimia
S. pubescens Turcz dikumpulkan dari Gunung Funiu di Provinsi Henan, China dan disahkan
oleh Prof. Yanfang Wu dari Universitas Sains dan Teknologi Henan. Dan spesimen voucher
disimpan di Medical College Science, Universitas Sains dan Teknologi (Luoyang, China). S.
pubescens Turcz dikeringkan dalam oven (Yiheng Scientific Instrument Co., Shanghai, China)
pada suhu 50 °C dan digiling dan melewati 60 mesh dan disimpan pada suhu 4 °C sampai
digunakan.
Echinacoside dan oleuropein dibeli dari Shanghai Aladdin Bio-Chem Technology Co.,
(Shanghai, Cina). Asetonitril (HPLC grade) diperoleh dari Sigma-Aldrich (Shanghai, Cina). Kolin
klorida (ÿ98 %), gliserol (ÿ99,5 %), asam laktat (ÿ98 %), urea (ÿ98 %), asam format (ÿ95 %),
asam oksalat (ÿ98 %), 1,2 -propa nediol (ÿ99.5 %) dan glukosa (ÿ99.5 %) dibeli dari Sigma
Aldrich (Shanghai, Cina). Air dimurnikan dengan sistem Milli-Q (Millipore, Bedford, MA, USA).
Semua pelarut yang digunakan dalam penelitian ini adalah kelas analitik.
2.2 Persiapan DES
Dalam penelitian ini, DES disiapkan dengan menggunakan metode yang berbeda menurut
status HBD. Ketika HBD dalam bentuk cair termasuk gliserol, asam laktat, dan asam fromat,
DES disiapkan menggunakan metode persiapan dengan bantuan ultrasound seperti yang
dijelaskan sebelumnya (Hsieh et al., 2020). Secara singkat, kolin klorida dan HBD yang
berbeda dicampur dalam labu kaca tertutup 50 mL dalam ransum molar (Tabel 1). Campuran
ditempatkan dalam penangas ultrasonik (tenaga penangas 250 W, 40 kHz, Scientz, SB-
5200DTD, Ningbo, China). Suhu diatur ke 60 ° C dan dikendalikan oleh sirkulasi air selama
penyelidikan. Dan campuran DES membentuk cairan homogen dan bening setelah
ultrasonikasi selama 60 menit. Ketika HBD dalam bentuk padat, DES disiapkan menggunakan
metode pemanasan pengadukan yang dilaporkan oleh Abbott et al. (2011). Secara singkat,
kedua komponen dicampur dalam labu kaca. Campuran diaduk pada suhu 80 °C dengan
pengaduk magnet sampai terbentuk cairan homogen tak berwarna.
2.3 Prosedur ekstraksi
UEA dilakukan dalam rendaman ultrasonik (Scientz, SB-5200DTD, Ningbo, China) dengan
daya input ultrasonik 250 W dan frekuensi 40 kHz. Sampel sebanyak 0,5 g digabungkan
dengan DES dalam labu Erlenmeyer. Proses ekstraksi dilakukan dengan berbagai parameter.
Setelah proses selesai, larutan disentrifugasi selama 10 menit pada 10.000 rpm untuk
mengumpulkan supernatan. Sampel yang diperoleh disimpan pada suhu 4 °C sampai analisis
lebih lanjut.
2.4 Pengaruh kekuatan ultrasound pada efisiensi ekstraksi
Kekuatan ultrasound adalah parameter penting untuk UEA. Pengaruh rentang daya 100ÿ250
W pada efisiensi ekstraksi senyawa target telah diselidiki sebelumnya. Suhu dan waktu
 trasound ul dijaga konstan masingmasing pada 60 ° C dan 30 menit. Dan DES-1 dengan kadar
air 20% digunakan sebagai pelarut ekstraksi.
2.5 Analisis kuantitatif echinacoside dan oleuropein
Analisis kuantitatif dilakukan pada Waters Alliance 2695 yang dilengkapi dengan detektor
rangkaian fotodioda Waters 2998 (Waters, USA).

Pemisahan dicapai pada kolom SunFire™ C18 (250 mm × 4,6 mm, 5Ÿm, USA) pada suhu 25
°C. Fase gerak terdiri dari elusi gradien Asetonitril (pelarut A) dan 0,5% asam asetat (pelarut
B). Program gradien dikembangkan sebagai berikut: 0ÿ10 mnt Dari 5 % hingga 20 % A, 10ÿ20
mnt 20 %–25 % A, 20ÿ25 mnt 25 %–30 % A, 25ÿ30 mnt 30 %–5 % dari A. Laju aliran dan
injeksi Volume masing-masing adalah 1,0 mL/menit dan 10 ÿL. Panjang gelombang deteksi
Diatur ke 285 nm. Kromatogram yang diperoleh disajikan pada Gambar 2.

Untuk mengevaluasi ECH dan OLE, kurva kalibrasi digunakan untuk menghitung Isinya.
Hasilnya dinyatakan sebagai nilai rata-rata ± standar deviasi (% berat kering). Setiap ekstraksi
 dilakukan dalam rangkap tiga. Kurva kalibrasi dibangun dengan Memplot luas puncak versus
konsentrasi. Persamaan regresi ECH dan OLE adalah:
y = 3 × 107 x+25266 (R2 = 0,9999) dan y = 1 × 107 x+31054 (R2 = 0,9999)
masing-masing, yang menunjukkan bahwa metode yang dikembangkan adalah suitabel
untuk analisis kimia

2.6. Optimasi desain Box-Behnken

Desain Box-Behnken (BBD) digunakan untuk mengoptimalkan parameter DES- UAE untuk
ekstraksi ECH dan OLE. Faktor dan level dipilih berdasarkan percobaanfaktor tunggal
pendahuluan.
Hasil yang diperoleh dipasang ke model orde kedua. Persamaan dulu:

dimana Y adalah nilai respon yang diprediksi oleh model. ÿ ( ÿ0 , i, ii, ij) masing-masing
adalah konstanta, linier, kuadrat, dan koefisien interaksi. Dan X (Xi, Xj) masing-masing adalah
level dari variabel independen. Analisis varians (ANOVA) digunakan untuk mengevaluasi
signifikansi data yang diperoleh.

2.7. Pengayaan ECH dan OLE dari solusi ekstraksi DES

Pengayaan ECH dan OLE dilakukan dengan menggunakan HPD-450 mac roporous resin. Resin
direndam menggunakan etanol konsentrasi 95% (v/v) selama 12 jam dan dicuci bersih
dengan air deionisasi. Resin yang diperoleh dikeringkan di bawah vakum sebelum digunakan.
Sekitar 10 g resin

3. Hasil dan Pembahasan

3.1. Skrining daya ultrasonik untuk ekstraksi ECH dan OLE

Kekuatan ultrasound adalah variabel penting yang mempengaruhi hasil ekstraksi. Hasil
ekstraksi ECH dan OLE meningkat dengan meningkatnya daya ultrasound dari 100 menjadi
200 W, seperti yang terlihat pada Gambar. S1 (Bahan Pelengkap). Hal ini disebabkan fakta
bahwa peningkatan intensitas daya dan intensitas kavitasi pada daya ultrasound yang lebih
tinggi meningkatkan laju perpindahan massa (Almeida et al., 2017). Dengan demikian, daya
ultrasound 200 W dipilih sebagai parameter optimal dalam percobaan selanjutnya.

3.2. Penapisan sistem DES untuk ekstraksi ECH dan OLE

DES dapat dihasilkan dari jenis HBD dan HBA yang berbeda, yang memiliki sifat berbeda
termasuk tegangan permukaan, polaritas, viskositas, dan kelarutan. Oleh karena itu, DES
yang berbeda dapat mempengaruhi efisiensi ekstraksi bahan kimia target dari matriks
tanaman. Dalam karya ini, tujuh jenis DES digunakan untuk menyaring sistem pelarut yang
cocok untuk mengekstraksi glikosida dari S. pubescens Turcz. Ketujuh jenis DES yang dibuat
bersifat bening dan transparan pada suhu ruang.
Hasilnya menunjukkan bahwa 20-60% kadar air menunjukkan efisiensi ekstraksi yang lebih
tinggi dan hasil ECH dan OLE dibandingkan dengan kadar air lainnya (Gbr. S3). Hal ini
disebabkan penambahan air menurunkan viskositas dan menyesuaikan polaritas sistem DESs
(Peng et al., 2016). Namun, peningkatan kadar air lebih lanjut (> 60%) tidak menguntungkan
karena akan melemahkan interaksi antara DES dan bahan yang diinginkan (Guo et al., 2019).

3.3. Optimasi ekstraksi variabel menggunakan BBD

BBD telah banyak digunakan untuk menentukan parameter ekstraksi optimum dari bahan
tanaman (Chan et al., 2019; Rambo et al.

Data percobaan yang diperoleh dari permukaan respon BBD disajikan pada Tabel 2. Hasil
analisis varians (ANOVA) ditunjukkan pada Tabel 3. Model orde kedua yang dipasang untuk
nilai respon dalam variabel kode adalah sebagai berikut:
 Temperatur yang tinggi dapat menurunkan viskositas DES yang mengakibatkan peningkatan
difusivitas, yang meningkatkan efisiensi ekstraksi (Huang et al., 2017b). Di sisi lain, suhu
tinggi dapat meningkatkan kelarutan dan difusivitas komponen target, sehingga
menyebabkan peningkatan perpindahan massa antara pelarut dan bahan tanaman (Lama-
Munoz et al., 2019). Peningkatan suhu lebih lanjut menunjukkan penurunan hasil ekstraksi.
Ini karena dekomposisi ECH dan OLE pada suhu tinggi. peningkatan waktu suara ultra tidak
dapat meningkatkan efisiensi ekstraksi OLE secara signifikan. Hal ini disebabkan sifat kimiawi
fitokimia sehingga menghasilkan efisiensi ekstraksi yang berbeda (Do et al., 2014).

3.4. Optimalisasi parameter desain dan verifikasi model

Parameter optimal ditentukan menggunakan Design Expert Version 10.0. Oleh karena itu,
variabel ekstraksi optimal untuk hasil maksimal ECH dan OLE diperoleh dengan waktu
ultrasonografi 45 menit, suhu 68 °C dan rasio pelarut-padat 20 mL/g. Hasil eksperimen
mendekati nilai prediksi (Tabel S1), yang menyarankan model RSM yang diperoleh akurat dan
cocok untuk ekstraksi simultan ECH dan OLE dari S. pubescens Turcz.

3.5. Pengaruh pengenceran pelarut terhadap ekstrak DES

. Dalam karya ini, ekstrak DES diencerkan dengan metanol, etanol dan DES. Hasil
menunjukkan bahwa metanol dan DES dengan kadar air 30 % adalah kompatibel untuk
pelarut pengenceran. Dalam pandangan kimia hijau, DES dengan kadar air 30% digunakan
sebagai pelarut pengenceran, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 2.

3.6. Pengayaan ECH dan OLE dari solusi ekstraksi DES

Setelah pengobatan dengan HPD-450, isi ECH dan OLE mencapai 16,89% dan 4,32%, dan
pemulihan masing-masing 80,04% dan 86,21%. Hasilnya menunjukkan bahwa resin berpori
makro HPD-450 dapat secara efektif memperkaya ECH dan OLE dari larutan DES.4

4. Kesimpulan
Variabel yang mempengaruhi proses DES-UAE dievaluasi dan dioptimalkan untuk ekstraksi
ECH dan OLE dari S. pubescens Turcz.
Di antara DES yang diuji, kolin klorida dan gliserol dengan kadar air 20% dipilih sebagai sistem
ekstraksi yang paling menjanjikan, dan dipastikan lebih efisien daripada pelarut organik
konvensional dan DES lainnya. Parameter ekstraksi praktis untuk ECH dan OLE adalah waktu
ekstraksi 45 menit, suhu 68 °C, rasio pelarut terhadap bahan 20 mL/ g, dan daya ultrasound
200 W. Hasil percobaan verifikasi menggunakan kondisi yang dioptimalkan menunjukkan
metode yang ditetapkan dapat diandalkan dan cocok untuk ekstraksi simultan ECH dan OLE
dari S. pubescens Turcz. Selanjutnya, DES-1 dengan kadar air 30% dapat digunakan sebagai
pelarut pengenceran sebelum injeksi HPLC. Larutan DES yang diperoleh dapat diperkaya
secara efektif menggunakan resin makropori HPD-450. DES-UAE sebagai teknik ekstraksi
hijau memiliki potensi untuk diterapkan pada bahan tanaman lainnya. Studi lebih lanjut akan
difokuskan padaaktivitas farmakologi ECH dan OLE di masa depan.