A.

Pelarut Eutektik
Pelarut eutektik (Deep Eutectic Solvent, DES) serta cairan ionik (Ionic Liquids,
ILs) adalah dua kandidat green solvent yang banyak diteliti di samping cairan superkritis
(Supercritical Fluids, SCF). Namun, ILs menghadapi beberapa tantangan untuk aplikasi
dalam skala besar seperti berbiaya produksi tinggi, masalah toksisitas, stabilitas jangka
panjang yang belum sepenuhnya diketahui, dan viskositas ILs yang relatif tinggi.
Cairan superkritis (Supercritical Fluids, SFS), yang sebagian besar menggunakan
karbon dioksida (CO2), cairan ionik (Ionic Liquids, ILs), dan pelarut eutektik (Deep
Eutectic Solvent, DES) adalah kandidat green solvent. Pelarut ini telah diberi label
sebagai "green" karena tekanan uapnya diabaikan dan tidak mudah terbakar dibandingkan
penggunaan solvent dari golongan volatile organic compounds (VOCs) (Deetlefs dan
Seddon, 2010; Domnguez de Mara dan Maugeri, 2011; Gorke et al., 2010; Wood dan
Stephens 2010). Green solvent memiliki efek minimal terhadap kesehatan manusia, aman
dan ramah lingkungan dalam hal pemanfaatan, dan pembuangan (Deetlefs dan Seddon,
2010).
Cairan ionik dan DES adalah campuran dari garam yang berbentuk cair pada suhu
kamar dan memiliki sifat fisik-kimia yang dapat disesuaikan dengan selektivitas yang
diharapkan hanya dengan menggabungkan jenis kation dan anion yang berbeda. Cairan
ionik terdiri dari kation sintetis khas seperti dialkylimidazolium dan derivatif
alkylpyridium, dan anion seperti chloroaluminate dan logam halida lainnya (Domnguez
de Mara dan Maugeri, 2011). Bila perlu, jenis anion yang reaktif terhadap adanya uap air
tsb dapat diganti dengan halida atau anion (BF 4 atau PF4) yang lebih stabil terhadap
kehadiran air dan udara (Gorke et al., 2010). Namun, ILs masih menghadapi tantangan
untuk aplikasi skala besar karena mahal dan toksik (Thuy Pham etal., 2010). Cairan ionik
(ILs) diproduksi secara sintetis dari komponen yang sangat murni tetapi umumnya masih
memerlukan proses pemurnian lebih lanjut karena kehadiran sedikit pengotor dapat
mengubah sifat ILs secara signifikan.
B. Pengertian Natural Deep Eutectic Solvents (NADES)
Natural Deep Eutectic Solvents (NADES) merupakan bagian dari DES yang
ramah lingkungan dan dibuat dari senyawa-senyawa metabolit primer yang alami dan
aman seperti asam-asam amino, monosakarida, disakarida, polisakarida, asam asetat,
asam laktat, kolin klorida dll dengan perbandingan mol ratio tertentu.
Penggunaan senyawa-senyawa organik sebagai zat pelarut dalam proses ekstraksi
membahayakan keamanan dan kesehatan lingkungan. Oleh sebab itu, perlu dilakukan
upaya-upaya untuk meminimalkan, mengganti atau bahkan menghilangkan penggunaan
pelarut organik yang mudah menguap (Volatile Organic Carbon, VOC) tsb. Natural
Deep Eutectic Solvent (NADES) sebagai salah satu kandidat green solvent dipilih sebagai
pelarut alternatif dalam ekstraksi senyawa-senyawa bioaktif. NADES terdiri dari
campuran senyawa-senyawa metabolit primer seperti gula, gula alkohol, poli-alkohol,
 basa organik, asam organik, dan asam amino dalam kombinasi molar ratio tertentu yang
diyakini aman bagi manusia dan lingkungan. Mengingat senyawa-senyawa metabolit
primer merupakan senyawa alami yang ditemukan di semua tanaman, misalnya asam
amino, karbohidrat, lipid, lemak, protein, asam nukleat, asam organik dan basa, tersedia
dalam skala besar dan berbiaya rendah. Sehingga NADES biodegradable, biokompatibel,
lebih mudah dan murah dalam hal pembuangan limbah proses yang dihasilkan.
C. Keunggulan Natural Deep Eutectic Solvents (NADES)
Natural Deep Eutectic Solvents (NADES) akan digunakan sebagai pelarut pengganti
pelarut-pelarut organik yang selama ini digunakan dalam penelitian ini mengingat
keunggulannya yang terbuat dari bahan-bahan alam yang ramah lingkungan. Selain itu
Dai et al. (2013) menunjukkan kesesuaian NADES seperti proline-malic acid (PMA),
sucrose-choline chloride (SCC), glucose-choline chloride (GCC), sorbitol-choline
chloride (SoCC), 1,2-propanediol-choline chloride (PCC), fructose-glucose-sucrose
(FGS), dan lactic acid-glucose (LAG) untuk ekstraksi senyawa-senyawa fenolat seperti
cartormin dan carthamin dari safflower (Flos Carthami) dan corolla dari Carthamus
tinctorius L. Hasil ekstraksi menunjukkan kelarutan cartormin dan carthamin yang tinggi
di dalam NADES: Sucrose-choline chloride (SCC), PMA, dan LAG. Kelarutan senyawa
fenolat yang tinggi di dalam NADES juga diikuti oleh senyawa-senyawa lain: rutin,
quercetin, asam sinamat, carthamin, taxol, dan ginkgolide B dalam NADES (Dai et al,
2013). Bervariasinya senyawa-senyawa bioaktif yang dapat larut dalam NADES, baik
makromolekul maupun mikromolekul, menunjukkan besarnya potensi yang dimiliki
NADES sebagai pelarut-multi komponen baik senyawa-senyawa nonpolar hingga polar.
Namun, masih diperlukan penelitian lebih lanjut mengenai aplikasi dari NADES sebagai
pelarut ekstraksi yang ramah lingkungan terhadap senyawa-senyawa bioaktif yang
lainnya.
D. Tipe-tipe NADES
Campuran metabolit primer seperti gula, gula alkohol, poli-alkohol, basa organik,
asam organik, dan asam amino dapat membentuk DES dan disebut sebagai Natural Deep
Eutectic Solvent (NADES) (Choi et al., 2011). Berdasarkan penelitian yang telah
dilakukan sebelumnya, NADES dibagi dalam tipe-tipe sebagai berikut (Dai et al., 2013):
(1) cairan ionik, terdiri dari asam-asam organik (asam sitrat, asam maleat, asam laktat)
dan senyawa-senyawa basa (choline chloride, dan betaine); (2) NADES netral, tidak ada
konstituen ionik, seperti campuran polyalcohols (gliserol, glisin, 1-2-propandiol); (3)
NADES yang bersifat asam, terdiri dari senyawa-senyawa netral (glukosa, fruktosa,
sukrosa, maltosa, trehalose) dan senyawa-senyawa asam; (4) NADES yang bersifat basa,
yang terdiri dari senyawa-senyawa netral dan senyawa-senyawa basa, dan (5) NADES
yang bersifat amfoter, kombinasi dari asam amino (-Proline, -Alanine) dan gula,
polyalcohol, atau senyawa-senyawa asam.

Kombinasi Molar Rasio

 Asam sitrat:choline chloride 1:2, 1:3
Asam maleat:choline chloride 1:1, 1:2, 1:3
Asam maleat:choline chloride 1:1, 1:2, 1:3
Aconitic acid:choline chloride 1:1
Glisin:choline chloride:air 1:1:1
Fruktosa:choline chloride:air 1:1:1
Sukrosa:choline chloride: air 1:1:1
Asam sitrat:Proline 1:1, 1:2, 1:3
Asam maleat:Glisin 1:1
Asam maleat:Fruktosa 1:1
Asam maleat:Sukrosa 1:1
Asam sitrat:Glisin 2:1
Asam sitrat:trihalose 2:1
Asam sitrat:Sukrosa 1:1
Asam maleat:Glisin 4:1
Asam maleat:Sukrosa 1:1
Glisine:Fruktosa 1:1
Fruktosa:Sukrosa 1:1
Glisine:Sukrosa 1:1
Sukrosa:Glisin:Fruktosa 1:1:1

E. Sifat-sifat NADES
NADES masih berwujud cair pada suhu kamar dan bahkan pada suhu rendah. Viskositas
akan menurun secara signifikan dengan penambahan sejumlah kecil air. Selain itu,
NADES memiliki cakupan polaritas dalam rentang yang lebar, mulai lebih polar daripada
air hingga polaritas sama dengan metanol. NADES terbukti menjadi pelarut yang sangat
baik untuk berbagai metabolit dengan polaritas rendah sampai menengah yang tidak atau
sukar larut dalam air. Makromolekul seperti DNA, protein dan polisakarida juga larut
dalam NADES. NADES yang tidak beracun dan ramah lingkungan digunakan untuk
berbagai aplikasi pada bidang makanan, kosmetik, agrokimia dan industri farmasi sebagai
media baru Green Technology (Dai et al., 2013).
 Kemudahan pembuatan NADES yang terdiri dari senyawa-senyawa baku berharga
murah, dan ketersediaannya secara alami dan melimpah, sifatnya yang aman; menjadikan
NADES memiliki sejumlah keunggulan dibandingkan green solvent lainnya (Dai et al.,
2013). Walaupun telah dilakukan penelitian pada NADES, masih terdapat kekurangan
informasi tentang isu-isu praktis yang berkaitan dengan aplikasi mereka sebagai pelarut
terutama untuk produk-produk alami senyawa bioaktif berskala komersial.
Sifat-sifat fisika NADES yang dapat terukur yaitu densitas, viskositas, suhu
dekomposisi, suhu glass, pH dan polaritas. Secara umum, semua NADES memiliki
densitas yang lebih besar dibandingkan dengan densitas air (1 g/mL). Terlihat bahwa
semakin besar kandungan air di dalam NADES, maka densitas NADES akan semakin
menurun.
Selain itu, NADES memiliki sifat yang sangat kental (viskositas tinggi), walaupun tetap
berupa liquid pada suhu ruang (30 oC) dan bahkan pada suhu rendah (18 oC). Hal tersebut
menunjukkan bahwa NADES berbentuk liquid kristal dan akan tetap berada pada bentuk
liquid pada rentang suhu yang lebar, hingga -100 oC NADES dilaporkan tetap berbentuk
liquid dan terdekomposisi pada >200 oC (Dai et al., 2013). Viskositas NADES menurun
dengan peningkatan suhu, dan menurun secara signifikan dengan penambahan air.
Sebaliknya, viskositas NADES akan meningkat dengan turunnya suhu penyimpanan.

F. Aplikasi NADES untuk Ekstraksi Metabolit Sekunder

Aplikasi dari NADES untuk ekstraksi metabolit sekunder (Dai et al., 2013; Guo
et al., 2013; Park et al., 2014; Zhang et al., 2014) telah dilaporkan serta penerapannya
dalam pengolahan biodiesel (Huang et al., 2013; Shahbaz et al., 2011; Shahbaz et al.,
2013; Tang et al., 2014). Mikro atau makro-molekul bisa dilarutkan dengan NADES (Dai
et al., 2013). Misalnya, diketahui NADES memberikan kelarutan yang baik dari pada
serangkaian senyawa bioaktif seperti rutin, quercetin, asam sinamat, taxol, carthamin,
ginkgolide B serta beberapa makromolekul seperti gluten, DNA, dan pati di NADES
dilaporkan (Dai et al. 2013). Kelarutan senyawa-senyawa tsb dalam NADES secara
substansial lebih tinggi dibandingkan kelarutan mereka di air.
NADES seperti proline-malic acid-water (PMH), sucrose-choline chloride-water
(SCH), glucose-choline chloride-water (GCH), sorbitol-choline chloride-water (SoCH),
1,2-propanediol-choline chloride-water (PCH), fructose-glucose-sucrose-water (FGSH),
dan lactic acid- glucose-water (LGH) untuk ekstraksi fenolat seperti cartomin dan
carthamin dari safflower (Flos Carthami), corolla dari Carthamus tinctorius L. telah
ditunjukkan oleh (Dai et al., 2013 ). Zat warna alami safflower ini terbukti memiliki
kelarutan tinggi dalam PMH, dan LGH. Namun, berbagai jenis metabolit sekunder,
seperti fenolat lainnya termasuk flavonoid, terpenoid, glikosida, dan alkaloid, memiliki
sifat dan karakteristik kelarutan yang berbeda. Hal ini juga ditunjukkan dalam studi
kelarutan dengan rutin murni, quercetin, asam sinamat, carthamin, taxol, dan ginkgolide
B (Dai et al., 2013).
 Ekstraksi metabolit fenolik dari safflower (Carthamus tinctorius) dengan pelarut
NADES (Dai et al. 2013) termasuk stabilitasnya juga telah dilaporkan. NADES berbasis
gula stabil untuk pigmen fenolik alami ketika terkena cahaya, suhu yang lebih tinggi, dan
waktu penyimpanan yang lama. Oleh karena itu, NADES menawarkan keuntungan jelas
atas DES sintetis terutama untuk bahan makanan, kosmetik, dan aplikasi farmasi. Hasil
ini menunjukkan perlunya penelitian lebih lanjut tentang aplikasi dari NADES sebagai
pelarut ekstraksi ramah lingkungan.

G. Pembuatan NADES
Dalam metode pemanasan kombinasi freeze-dry untuk pembuatan NADES.
Komponen-komponen penyusun (misal: fruktosa, glukosa, dan air untuk FG-H 2O)
dicampurkan sesuai dengan mol ratio yang telah ditentukan pada botol tertutup.
Campuran tersebut diaduk pada suhu 70 oC menggunakan magnetic stirrer dalam water
bath hingga diperoleh campuran berbentuk liquida yang bening. Selanjutnya campuran
liquid yang diperoleh dimasukkan ke dalam freeze-dry hingga beratnya konstan (3
hari). Campuran liquida keluar freeze-dry diamati, jika tetap berbentuk cairan liquida
yang bening (tidak mengendap, tidak berubah warna ataupun mengkristal), maka
selanjutnya campuran liquida tersebut disebut sebagai NADES.
Campurkan komponen-komponen penyusun NADES sesuai
mol ratio yang ditentukan :
Komponen-2 Komponen-3

Komponen-1

Set suhu pemanasan hot plate (70 C)

Aduk dengan magnetic stirrer hingga terbentuk

campuran liquid bening

H. Diagram Alir Pembuatan NADES

Mencampurkan komponen-komponen penyusun

NADES (sesuai mol ratio yang telah ditentukan)
 Mengaduk campuran tersebut pada suhu 70 oC
menggunakan magnetic stirrer dalam water bath hingga
diperoleh campuran berbentuk liquida yang bening

Memasukkan ke dalam freeze-dry hingga berat konstan

(3 hari )

Jika campuran liquida tetap bening (tidak mengendap,

mengkristal ataupun berubah warna), maka NADES
telah diperoleh

Perbedaan mol ratio dari komponen-komponen pembentuk NADES, dapat

mempengaruhi stabilitas NADES. Untuk memperoleh kestabilan dari NADES maka
mencoba dilakukan percobaan dengan mengubah rasio molar dari air, peningkatan rasio
molar air dilakukan dengan cara penambahan/pengenceran NADES dan jika ingin
mengurangi rasio molar air dilakukan freeze dry kembali hingga diperoleh NADES yang
stabil. NADES dapat diencerkan (dengan penambahan air dalam molar tertentu) 25%
hingga maksimum 50% tanpa kehilangan sifatnya sebagai NADES. Pengenceran lebih
lanjut (>50%) akan menyebabkan hilangnya sifat NADES, akibat hilangnya ikatan
hidrogen pada larutan (Choi et al., 2011; Dai et al., 2013)
NADES dapat terbentuk karena adanya ikatan hidrogen antar molekul dari
komponen-komponen pembentuknya. Penambahan jumlah air ataupun pengenceran
terhadap NADES akan menimbulkan perubahan drastis dari stuktur NADES,
kemungkinan besar karena putusnya ikatan hidrogen yang terbentuk (Choi et al., 2011;
Dai et al., 2013, Dai et al., 2013a).
NADES adalah suatu liquid kristal yang mana semua molekulnya tersusun
melalui ikatan hidrogen dan gaya antar molekul lainnya (Dai et al., 2013). Sebagaimana
yang ditunjukkan oleh Choi et al. (2011) dalam penelitiannya, adanya struktur yang lebih
besar yang terbentuk pada malic acid-sucrose (MAS-H2O); demikian pada pada NADES:
1,2-propanediol-choline chloride (Dai et al., 2013) dan proline-malic acid (Dai et al.,
2015). Pada 1,2-propanediol-choline chloride, ikatan hidrogen mungkin terbentuk antara
gugus hidroksil dari 1,2-propanediol dengan choline chloride (Dai et al., 2013);
sedangkan ikatan hidrogen terbentuk antara gugus hidroksil malic acid dengan atom
hidrogen pada gugus amina dari proline (Dai et al., 2015).

I. Tabel.Densitas NADES
Densitas

T
Mol Kandungan dekomposisi
Golongan rasio Air (g/m (oC)
Komponen L)
(%-berat)
1,32
FG- H2O 1:1:09 28 23 >122,47
1,34
FG- H2O 1:1:10 30 69 >129,08
Netral
1,38
FS-H2O 2:1:22 32 25 >131,47
1,35
FS-H2O 2:1:32 41 29 >118,58

1,37
MAG-H2O1:1:04 19 57 >222,68
1,35
MAG-H2O1:1:07 28 52 >128,90
1,39
Asam MAS-H2O1:1:08 23 49 >134,16
1,34
MAS-H2O1:1:11 33 24 >127,12
1,42
CAS-H2O1:2:10 19 67 >128,87
1,36
CAS-H2O 1:2:16 26 96 >127,07