Kimia Pangan 200 (2016) 159–166

Daftar isi tersedia di ScienceDirect

Kimia Pangan

homepage jurnal: www.elsevier .com / cari / foodchem

Metode analitis

Ekstraksi hijau fenolat kulit anggur dengan menggunakan pelarut eutektik dalam

Karin
MarinaKovačević
Cvjetko Bubalo,
Ganić, Natka Ivana Radojčić Redovniković ⇑ Ćurko, Marina Tomašević,

Fakultas Teknologi Pangan dan Bioteknologi, Universitas Zagreb, Pierottijeva 6, 10000 Zagreb, Kroasia

articleinfo abstrak

Sejarah artikel: Teknik ekstraksi konvensional untuk fenolik tanaman biasanya dikaitkan dengan konsumsi pelarut organik yang
Diterima 16 Juni 2015 tinggi dan waktu ekstraksi yang lama. Untuk menetapkan metode ekstraksi ramah lingkungan untuk fenolat kulit
Diterima dalam bentuk revisi 28 September
anggur, pelarut eutektik dalam (DES) sebagai alternatif hijau untuk pelarut konvensional ditambah dengan metode
2015
ekstraksi dengan bantuan gelombang mikro dan ultrasound yang sangat efisien (masing-masing MAE dan UEA)
Diterima 10 Januari 2016
telah dipertimbangkan . Awalnya, penyaringan lima DES yang berbeda untuk ekstraksi yang diusulkan dilakukan dan
Tersedia online 11 Januari 2016
DES berbasis kolin klorida yang mengandung asam oksalat sebagai donor ikatan hidrogen dengan 25% air dipilih
sebagai yang paling menjanjikan, menghasilkan ekstraksi senyawa fenolik kulit anggur yang lebih efektif
Kata kunci:
dibandingkan. ke pelarut konvensional. Selain itu, dalam penelitian kami, UEA terbukti menjadi metode ekstraksi
Antosianin
Pelarut eutektik dalam terbaik dengan efisiensi ekstraksi yang lebih unggul dari metode ekstraksi MAE dan konvensional. Pengetahuan
Kulit anggur yang diperoleh dalam penelitian ini akan berkontribusi pada implementasi DES lebih lanjut dalam ekstraksi senyawa
Ekstraksi hijau aktif biologis dari berbagai sumber tanaman.
Microwave 2016 Elsevier Ltd. Semua hak dilindungi undang-undang.
Fenolat
USG

1. Perkenalan
Fenolat tanaman, yang berasal dari berbagai macam metabolit sekunder
tanaman, telah menarik perhatian karena sifat antioksidannya dan efeknya yang
nyata dalam pencegahan berbagai penyakit terkait stres oksidatif seperti kanker ( Dai
& Mumper, 2010 ). Oleh karena itu, dalam beberapa tahun terakhir, ekstraksi dan
identifikasi senyawa fenolik dari berbagai tanaman telah menjadi bidang utama
penelitian kesehatan dan medis. Karena strukturnya yang kompleks, tidak ada
metode ekstraksi universal yang cocok untuk ekstraksi semua fenolik tanaman di
mana teknik ekstraksi konvensional biasanya dikaitkan dengan konsumsi pelarut
organik yang tinggi dan waktu ekstraksi yang lama ( Ignat, Volf, & Popa, 2011 ).
Selain itu, tumbuhnya kesadaran akan dampak manusia terhadap lingkungan
telah mendorong 'ekstraksi hijau' menjadi sorotan komunitas ilmiah dan industri.
Secara umum, ekstraksi hijau didasarkan pada penemuan dan desain proses
ekstraksi yang akan mengurangi konsumsi energi, memungkinkan penggunaan
pelarut alternatif dan produk alami terbarukan, dan memastikan ekstrak / produk
yang aman dan berkualitas tinggi ( Chemat, Maryline Abert Vian, & Cravotto, 2012 ).
Sejak Directive 2010/75 / EU tentang emisi industri mengharuskan pabrik untuk
membatasi emisi senyawa organik volatil tertentu, area penelitian yang
berkembang dalam pengembangan
teknologi hijau termasuk ekstraksi dikhususkan untuk merancang pelarut baru
yang lebih ramah lingkungan ( Cvjetko Bubalo, Vidović, Radojčić Redovniković, &
Jokić, 2015 ).
Selama beberapa tahun terakhir, di antara pelarut neoterik (neoterik = baru,
terkini, modern) pelarut eutektik dalam (DES) telah berkembang secara dramatis
dalam popularitas sebagai alternatif yang menjanjikan untuk pelarut organik
tradisional ( Cvjetko Bubalo dkk., 2015 ). DES menghadirkan generasi baru cairan
dan umumnya didasarkan pada campuran komponen yang murah dan tersedia:
garam amonium kuaterner tidak beracun (misalnya, kolinium klorida) dan donor
ikatan hidrogen yang tidak bermuatan alami (misalnya vitamin, amina, gula,
alkohol) dan asam karboksilat). DES memiliki sifat fisikokimia yang unik dan berkat
kemungkinan mendesain propertinya untuk tujuan tertentu, jejak ekologisnya
yang rendah dan harga yang menarik, telah menjadi minat yang berkembang baik
untuk penelitian maupun industri ( Paiva dkk., 2014 ). Sejak kemunculannya,
pelarut ini telah menarik perhatian sebagai pelarut dalam sintesis organik dan
(bio) katalisis, produksi polimer, elektrokimia, bahan nano, proses pemisahan,
analisis), aplikasi biomedis dan ekstraksi senyawa aktif biologis dari bahan
tanaman ( Cvjetko Bubalo dkk., 2015; Paiva dkk., 2014 ). Karena DES terdiri dari
senyawa sederhana, murah, dan terbentuk secara alami dengan profil keamanan
yang tinggi, mereka dapat digunakan untuk ekstraksi produk alami dari
tumbuhan yang sangat efisien, baik polar maupun non-polar, seperti obat-obatan,
rasa, pewarna alami, dll. ( Young dkk., 2011 ). Beberapa penulis telah mempelajari
DES

⇑ Penulis yang sesuai.

Alamat email: irredovnikovic@pbf.hr (I. Radojčić Redovniković).

http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2016.01.040
0308-8146 / 2016 Elsevier Ltd. Semua hak dilindungi undang-undang.
160 M. Cvjetko Bubalo dkk. / Food Chemistry 200 (2016) 159–166

Tabel 1 dipisahkan dari ampasnya, dikeringkan-bekukan (Alpha 1-2 LD plus Christ, Jerman)
Daftar DES yang digunakan dalam penelitian ini.
selama tiga hari di 40 C dan disimpan di 20 C sampai
Kombinasi Singkatan Rasio molar analisis.

Kolin klorida: gliserol ChGyl 1: 2

Kolin klorida: asam oksalat ChOa
Kolin klorida: asam malat ChMa
Kolin klorida: sorbosa ChSor
Kolin klorida: prolin: asam malat ChProMa
ekstraksi bantuan senyawa fenolik menunjukkan bahwa banyak senyawa terlarut
lebih baik daripada di air atau lipid. Yaitu, DES memiliki kemampuan
mendonasikan dan menerima proton dan elektron, yang memberikan mereka
kemampuan untuk membentuk ikatan hidrogen, sehingga meningkatkan
kemampuan disolusi ( Bi, Tian, & Row, 2013; Dai, van Spronsen, Witkamp,
Verpoorte, & Choi, 2013; Dai, Witkamp, Verpoorte, & Choi, 2013; Woo Nam, Zhao,
Sang Lee, Hoon Jeong, & Lee, 2015 ). Selain itu, stabilitas yang sangat baik dari
senyawa fenolik dalam DES berbasis gula terlihat menunjukkan kemungkinan
aplikasi baru pelarut ini dalam industri makanan dan farmasi ( Dai, Verpoorte, &
Choi, 2014 ).
1: 1
1.5: 1
2.2. Persiapan DES
1: 1
1: 1: 1
Semua bahan kimia untuk persiapan dikeringkan dalam konsentrator vakum
(Savant SPD131DDA SpeedVac Concentrator) pada suhu 60 C selama 24 jam
sebelum digunakan. DES disintesis pada rasio ChCl tertentu terhadap donor
hidrogen (glukosa, sorbosa, gliserol, prolin, asam malat dan asam oksalat) untuk
mendapatkan cairan pada suhu kamar, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 2. Tabel
1 . Campuran donor ChCl dan hidrogen diaduk dalam 80 ask pada suhu 80 C
selama 2-6 jam sampai terbentuk cairan tidak berwarna transparan yang
homogen. Sampel DES dikeringkan secara vakum sebelum digunakan lebih lanjut.
Selain itu, larutan DES yang berbeda dalam air disiapkan dengan pengenceran
volume tertentu DES dalam air deionisasi (larutan air DES yang mengandung 10%,
25% dan 50% air (b / b) disiapkan).

Berdasarkan hal tersebut di atas, maka tujuan dari penelitian ini adalah untuk
menetapkan metode ekstraksi senyawa fenolik kulit anggur yang ramah
lingkungan dengan menggunakan DES. Kami memilih kulit anggur merah sebagai
bahan tanaman karena kandungan flavonoidnya yang tinggi. Yakni, flavonoid
anggur (antosianin, flavan-3-ols, dan flavonol) yang terdapat di kulit diekstraksi
selama proses maserasi menjadi anggur merah dan karenanya merupakan
kontributor penting bagi kualitas anggur. Awalnya, penyaringan lima DES yang
berbeda sebagai pelarut ekstraksi potensial dilakukan. Untuk mengoptimalkan
metode ekstraksi, setelah pemilihan DES yang optimal, metode alternatif seperti
ekstraksi dengan bantuan ultrasound atau gelombang mikro (UEA dan MAE,
masing-masing) diterapkan.
2. Bahan-bahan dan metode-metode
2.3. Persiapan ekstrak
Perbandingan padat-cair 0,1 g kulit anggur Plavac mali beku kering dan tanah
per mililiter dari masing-masing pelarut (DES atau pelarut konvensional)
diekstraksi menggunakan tiga teknik ekstraksi yang berbeda (shaker, MAE dan
UAE). Kemudian, ekstrak disentrifugasi selama 15 menit pada 5000 rpm dan
supernatan didekantasi dan disesuaikan dengan volume akhir 5 mL (0,04 mg mL 1).
Pemilihan DES yang optimal dilakukan dalam shaker selama 12 jam pada suhu
kamar (ekstraksi konvensional, CE). Untuk membandingkan efisiensi ekstraksi
dengan ekstraksi yang dilakukan dengan pelarut konvensional, ekstraksi
menggunakan air, metanol berair (MEOH; 70:30, v / v) dan larutan metanol asam
(AcMeOH; metanol / air / 12 M HCl, 70:29 : 1, v / v / v; dengan pH = 1,25) dilakukan
di bawah kondisi yang sama seperti yang dijelaskan di atas.

2.1. Bahan kimia dan bahan

Metanol, asam klorida dan asam asetat diperoleh dari Merck (Darmstadt,
Jerman). Kolin klorida (ChCl), glukosa, sorbosa, gliserol, asam malat, asam oksalat
dibeli dari Sigma (St. Louis, MO, USA). Standar analitik quercetin-3glucoside ( P. 98%)
dan (+) - catechin ( P. 99%) dibeli dari Sigma (St. Louis, MO, USA), sedangkan standar
analitik delphinidin-3- HAI- monoglucoside ( P. 97%), sianidin-3- HAI- monogluc oside ( P.menit). Pengukuran suhu dilakukan di dinding reaktor dengan sensor IR dan
97%), petunidin-3- HAI- monoglucoside ( P. 97%), peonidin-3-
HAI- monoglucoside ( P. 97%), dan malvidin-3- HAI- monoglucoside ( P. 97%), dibeli
dari Polifenol AS (Sandnes, Norwegia).
Anggur dari kultivar anggur merah asli Kroasia, Vitis vinifera CV.
Plavac mali yang berasal dari Dalmatia (wilayah penanaman vinegrowing Kroasia)
dipanen dalam kematangan teknologinya pada bulan Oktober 2012. Anggur yang
dipilih secara acak berjumlah 2 kg digunakan dalam penelitian ini, dimana kulitnya
langsung dilakukan secara manual.
Untuk mengoptimalkan metode ekstraksi setelah pemilihan DES yang optimal,
MAE dan UEA diterapkan. Peralatan ekstraksi gelombang mikro (platform Micro
SYNTH, Milestone, Italia) digunakan untuk MAE. Peralatan tersebut dilengkapi
dengan sistem kontrol digital untuk suhu, waktu dan daya. Parameter yang
diamati selama MAE adalah suhu ekstraksi (50–90 C) dan waktu ekstraksi (15–90
sistem otomatis penuh melakukan kontrol suhu dengan penyesuaian terus
menerus dari keluaran daya gelombang mikro (daya maksimal ditetapkan pada
100W). Untuk UEA, rendaman ultrasonik dengan pengaturan suhu (Sonorex
DL102H, Bandelin, Jerman) digunakan. Parameter yang diamati selama EAU
adalah suhu ekstraksi (30–90 C) dan waktu ekstraksi (15–90 menit), sedangkan
radiasi berada pada frekuensi tetap 35 kHz. Semua prosedur ekstraksi
menggunakan DES atau pelarut organik konvensional dilakukan dalam rangkap
tiga.

Meja 2
Parameter regresi linier, LOD, LOD dan RSD (%) untuk senyawa fenolik dengan analisis HPLC.

Senyawa k ( nm) Rentang konsentrasi (mg L 1) Persamaan regresi R2 LOD (mg L 1) LOQ (mg L 1) RSD (%)

(+) - Catechin 280 1,25–200 81.853 x + 72.301 0,9997 0.37 1.24 0.40
Delphinidin-3- HAI- glukosida 520 1–100 163.873 x 59.780 0,9998 0.18 0.60 0.96
Cyanidin-3- HAI- glukosida 520 1–100 172.127 x 10.533 0,9999 0.21 0.71 0,57
Petunidin-3- HAI- glukosida 520 1–100 191.604 x 6863 0,9999 0.24 0.80 0.83
Peonidin-3- HAI- glukosida 520 1–150 160.710 x + 5131 0,9999 0.19 0.65 0.71
Malvidin-3- HAI- glukosida 520 1–500 123.595 x + 101.097 0,9998 0.30 0,90 0.30
Quercetin-3- HAI- glukosida 360 0,5–50 111.572 x 70.855 0,9997 0,05 0.46 0.77

LOD: batas deteksi; LOQ: batas kuanti fi kasi; RSD: deviasi standar relatif (%).
 M. Cvjetko Bubalo dkk. / Food Chemistry 200 (2016) 159–166 161

Gambar 1. Kandungan antosianin pada kulit anggur diekstraksi dengan DES yang berbeda, air (H 2 O), metanol berair (MeOH) dan larutan asam metanol (AcMeOH). Angka-angka pada grafik (0–50)
menunjukkan kadar air di DES (%).

2.4. Analisis HPLC menggunakan air / asam format (95: 5, v / v) (pelarut A) dan asetonitril / asam
format (95: 5, v / v) (pelarut B), seperti yang dilaporkan sebelumnya oleh
Sampel disaring melalui 0,45 l m filter selulosa asetat (Macherey – Nagel GmbH Lorrain, Chira, dan Teissedre (2011) . Kondisi gradien adalah sebagai berikut:
& Co., Düren, Jerman) sebelum injeksi. Analisis kromatografi dilakukan pada 10–35% B linier 0–25 menit, 35–100% B linier 25–26 menit, 100% B isokratis 26–28
sistem HPLC Seri Agilent 1100 (Agilent, San Jose, CA, USA) yang dilengkapi dengan menit, 100–10% B linier dari 28 hingga 29 menit dengan re - ekuilibrasi kolom
selama 5 menit dalam kondisi gradien awal; dan laju aliran 1 mL min 1. Spektrum
detektor larik dioda. Flavan-3-ol monomer (+) - catechin, fl avonol quercetin-3- HAI- glukosida
dan antosianin dipisahkan pada kolom Phenomenex Gemini C18 (250 mm 4,6 mm, UV-Vis diukur dalam rentang panjang gelombang 200-600 nm. Deteksi dan
5 l m) identifikasi senyawa fenolik dilakukan sebagai berikut
162 M. Cvjetko Bubalo dkk. / Food Chemistry 200 (2016) 159–166

Gambar 2. (+) - Catechin dan quercetin-3- HAI- kandungan glukosida pada kulit anggur yang diekstraksi dengan DES yang berbeda, air (H 2 O), metanol berair (MeOH) dan larutan asam metanol (AcMeOH).
Angka-angka pada grafik (0–50) menunjukkan kadar air di DES (%).

panjang gelombang: 280 nm (katekin), 360 nm (quercetin-3-glukosida) dan 520 nm
(antosianin). Identifikasi dan penetapan puncak senyawa ini didasarkan pada
perbandingan waktu retensi dan data spektral dengan standar otentik.
Kuantifikasi dilakukan dengan metode standar eksternal pada panjang gelombang
absorbansi maksimum untuk setiap senyawa seperti yang tercantum di bawah ini.
Metode HPLC divalidasi dalam hal linearitas grafik kalibrasi, batas deteksi (LOD),
batas kuanti fi kasi (LOQ) dan presisi, seperti yang ditunjukkan Meja 2 . Linearitas
dievaluasi berdasarkan kurva kalibrasi delapan titik untuk setiap standar. Analisis
regresi linear kuadrat terkecil digunakan untuk menghitung
koefisien kemiringan, intersep dan korelasi dari kurva kalibrasi. Koefisien korelasi
kurva kalibrasi untuk semua standar lebih tinggi dari 0,9997, menunjukkan
linieritas yang sangat baik. Batas deteksi ditentukan dari jumlah standar yang
dibutuhkan untuk memberikan rasio sinyal-ke-derau 3, dan batas kuanti fi kasi
ditentukan sebagai konsentrasi terendah yang memberikan rasio sinyal-ke-derau
dari
10. Ketepatan metode ditentukan dalam hal pengulangan intraday area puncak
untuk semua standar, dengan deviasi standar relatif (RSD%) lebih rendah dari
0,96% dan menunjukkan tingkat presisi yang memadai. Analisis HPLC senyawa
fenolik kulit dilakukan dalam rangkap tiga.

Gambar 3. Pengaruh suhu (a dan b) dan waktu ekstraksi (c dan d) selama MAE terhadap hasil ekstraksi jumlah antosianin-3- HAI- monoglucosides (AMon), jumlah antosianin-3-asetilmonoglukosida (AAc),
jumlah antosianin-3- (6- Op- coumaroyl) monoglucosides (ACm), (+) - catechin (C) dan quercetin-3- HAI- glukosida (Q). Nilai rata-rata ( n = 3) ± SD.
 M. Cvjetko Bubalo dkk. / Food Chemistry 200 (2016) 159–166
Gambar 4. Pengaruh suhu (a dan b) dan waktu ekstraksi (c dan d) selama EAU terhadap hasil ekstraksi jumlah antosianin-3- HAI- monoglucosides (AMon), jumlah antosianin-3-asetilmonoglukosida (AAc),
jumlah antosianin-3- (6- Op- coumaroyl) monoglucosides (ACm), (+) - catechin (C) dan quercetin-3- HAI- glukosida (Q). Nilai rata-rata ( n = 3) ± SD.
2.5. Analisis data
Semua hasil eksperimen dianalisis secara statistik menggunakan perangkat
lunak Statistica 9.1. Data dalam teks dan tabel dinyatakan sebagai mean ± standar
deviasi (± SD), dan bilah kesalahan pada gambar menunjukkan deviasi standar.
Perbedaan antara cara dulu
Gambar 5. Perbandingan antara metode ekstraksi konvensional (CE), MAE dan hasil ekstraksi UEA
untuk total antosianin bebas (TA), (+) - katekin (C) dan quercetin-3- HAI-
glukosida (Q). Nilai rata-rata ( n = 3) ± SD diperoleh pada kondisi optimal untuk setiap metode
ekstraksi. Huruf yang berbeda di atas kolom menunjukkan perbedaan antara metode ekstraksi
yang berbeda untuk respon yang sama yang diukur dengan uji HSD Tukey ( P < 0,05).
163
dianalisis dengan uji ANOVA, dilanjutkan dengan uji post hoc Tukey. Perbedaan
yang signifikan dipertimbangkan pada tingkat P < 0,05.
3. Hasil dan Pembahasan
3.1. Seleksi DES untuk ekstraksi senyawa fenolik kulit anggur
Struktur DES menentukan sifat fisikokimianya dan akibatnya sangat
mempengaruhi efisiensi ekstraksi senyawa aktif biologis. Jadi, kami memilih lima
DES berbasis ChCl berbeda yang mengandung gliserol (ChGyl), asam oksalat
(ChOa), sorbosa (ChSor), asam malat (ChMa), dan asam prolin dan malat
(ChProMa) sebagai donor ikatan hidrogen (HBD) untuk menguji efisiensi ekstraksi
mereka untuk flavonoid kulit anggur utama (delphinidin-3- HAI-
monoglucoside, cyanidin-3- HAI- monoglucoside, petunidin-3- HAI- mo noglucoside,
peonidin-3- HAI- monoglucoside, malvidin-3- HAI- mono glukosida,
malvidin-3-O-asetilmonoglukosida, peonidin-3- (6- Op coumaroyl) monoglucosides,
dan malvidin-3- (6- Op- coumaroyl) monoglucosides sebagai antosianin, (+) - katekin
sebagai perwakilan flavan-3-ol dan quercetin-3- HAI- glukosida sebagai perwakilan
flavonol) ( Tabel 1 ). Ekstraksi senyawa fenolik dilakukan dengan DES yang
mengandung kandungan air yang berbeda untuk mengurangi viskositas, yang
merupakan salah satu masalah utama saat menggunakan DES sebagai pelarut
ekstraksi ( Dai, van Spronsen, dkk., 2013 ). Misalnya, berbeda dengan ekstraksi
ChGyl dan ChCa dengan ChSor murni, ChMa dan ChMaPro tidak dapat dilakukan.
Semua DES diencerkan hingga 50% air dalam DES. Pengenceran lebih lanjut dari
DES tidak dimasukkan karena kelebihan air yang besar dalam DES dapat merusak
halida-HBD
164 M. Cvjetko Bubalo dkk. / Food Chemistry 200 (2016) 159–166
kompleks supramolekul dan larutan air sederhana dari masing-masing komponen
dapat diperoleh ( Gutierrez, Ferrer, Mateo, & del Monte, 2009 ). Juga, untuk
membandingkan efisiensi ekstraksi dengan pelarut konvensional, ekstraksi
dilakukan dengan menggunakan air, metanol encer dan larutan metanol berair
yang diasamkan.
Secara umum, kapasitas DES untuk mengekstrak senyawa fenolik sangat
bervariasi sesuai dengan senyawa fenolik target dan DES itu sendiri ( Gambar. 1
dan 2 ). Secara umum, ditemukan bahwa efisiensi ekstraksi sangat bergantung
pada kadar air. Dalam kasus antosianin total (jumlah dari semua antosianin yang
dihitung), efisiensi ekstraksi terbaik diperoleh dengan ChOa, diikuti oleh ChMa>
ChMaPro> ChGyl> ChSor. Antosianin adalah molekul polar dan perbedaan efisiensi
ekstraksi di antara berbagai DES dapat dijelaskan dengan perbedaan dalam
polaritasnya. Misalnya, DES yang diterapkan, yang berbasis asam organik paling
polar, sehingga mungkin menunjukkan kinerja terbaik, sedangkan DES berbasis
gula dan polialkohol paling tidak polar dan menunjukkan hasil paling buruk ( Dai,
Witkamp, dkk., 2013 ). Fitur impor lain untuk ekstraksi antosianin yang sukses
adalah keasaman pelarut ekstraksi karena antosianin dapat ditemukan dalam
bentuk kimia yang berbeda tergantung pada pH larutan. Yakni, pada pH 1 mereka
sebagian besar hadir dalam bentuk kation flilium merah, dan pada pH antara 2
dan 4 sebagai spesies quinoidal biru. Pada pH antara 5 dan 6, karbinol
pseudobase dan kalkon tak berwarna diamati, sedangkan pada nilai pH lebih
tinggi dari 7 antosianin terdegradasi ( Castañeda-Ovando, PachecoHernández,
Páez-Hernández, Rodríguez, & Galán-Vidal, 2009 ). Mengingat bahwa pH sangat
penting dalam bentuk dan stabilitas kesetimbangan antosianin, tidak
mengherankan bahwa di antara DES yang diuji, ChOa dan ChMa yang asam
memungkinkan konsentrasi tertinggi dari total antosianin bebas. Sebaliknya,
efisiensi ekstraksi menurun dengan penurunan keasaman ( Dai dkk., 2014 ).
Selanjutnya komposisi antosianin diperoleh pada DES ( Gambar 1 ) sesuai
dengan penelitian sebelumnya yang dilakukan pada kulit anggur, yang terdiri dari
lima antosianin-3. HAI- monog lucosides dan tiga turunan asilasi utamanya
(acetylmonoglucosides dan coumaroylmonoglucosides), yang berbeda
polaritasnya ( Lorrain dkk., 2011 ). Polaritas antosianin adalah fungsi dari jumlah
gugus hidroksil dan derajat metilasi cincin-B mereka (delphinidin <cyanidin
<petunidin <peonidin <malvidin), bersama dengan pola asilasinya (asetilglukosida
<kumaroil-glukosida)
( Novak, Janeiroa, Seruga,
Oliveira-Brett, 2008 ). Namun, pola yang diamati di antara DES yang berbeda
sangat mirip untuk semua antosianin individu, dengan tren yang jelas untuk
antosianin yang lebih polar diekstraksi lebih baik dengan DES yang mengandung
kadar air lebih tinggi dan dan sebaliknya, yang konsisten dengan data yang
diterbitkan sebelumnya ( Dai, Witkamp, dkk., 2013 ). Misalnya, antosianin-3- HAI- monoglucosides
diekstraksi lebih baik dengan DES yang mengandung 50% air, sedangkan yang
kurang polar seperti malvidin-3- HAI- monoglukosida dan turunan terasilasi
diekstraksi lebih baik dengan DES yang mengandung 25% air.
Selain itu, efisiensi ekstraksi DES menunjukkan hasil yang menjanjikan bila
dibandingkan dengan pelarut konvensional. Hasil ekstraksi yang diperoleh
dengan semua DES dengan kandungan air tertentu lebih tinggi dibandingkan
dengan yang diperoleh dengan air dan metanol 70%. ChOa dengan 25% air
sebagai pelarut ekstraksi terbaik dari semua DES yang diuji menunjukkan hasil
ekstraksi 5- dan 2 kali lipat lebih tinggi untuk air dan metanol berair untuk
kandungan antosianin total. Namun, karena kestabilan kation avilium merah
dalam media yang sangat asam, ekstraksi antosianin biasanya dilakukan dengan
pelarut organik yang diasamkan (berdasarkan penelitian sebelumnya, larutan
metanol yang diasamkan dalam air dipilih sebagai prosedur konvensional). ChOa
dan ChMa dengan 25% air menunjukkan kandungan yang lebih tinggi daripada
larutan metanol yang diasinkan. Dalam kasus ChOa dengan 25% air, konten yang
lebih tinggi dari semua antosianin individu diperhatikan. Juga, pola yang menarik
diperhatikan untuk ChGyl,
dimana selektivitas untuk p- coumaroylmonoglucosides diamati. Yakni, ekstrak
ChGyl mengandung kandungan keduanya yang lebih tinggi p-
coumaroylmonoglucosides daripada larutan metanol berair asam, sedangkan
untuk antosianin-3- HAI- monoglukosida dengan kandungan yang lebih rendah
dicatat. Pengamatan ini menunjukkan bahwa dengan fine tuning struktur DES,
dimungkinkan untuk merancang pelarut yang optimal untuk senyawa yang sangat
mirip secara struktural dalam kelas yang sama.
Selain itu, DES juga menunjukkan efisiensi ekstraksi yang lebih baik untuk (+)
katekin dengan kandungan yang lebih tinggi untuk semua DES yang dipelajari
dengan kandungan air tertentu dibandingkan dengan pelarut konvensional ( Gambar
2 ). Efisiensi ekstraksi terbaik diperoleh dengan ChOa, diikuti oleh ChMa>
ChMaPro> ChGyl> ChSor, yang mirip dengan efisiensi ekstraksi untuk
antosianin-3- HAI- monoglukosida, mungkin karena polaritasnya yang sebanding.
Efisiensi ekstraksi terbaik untuk quercetin-3- HAI- glukosida diperoleh dengan
ChGyl, dimana kandungan yang lebih tinggi diperoleh dibandingkan dengan
pelarut konvensional. Sisa DES mengikuti urutan ChOa> ChMa> ChMaPro> ChSor
dan quercetin-3- HAI- kandungan glukosida mirip dengan ekstrak metanol ( Gambar
2 ). Berdasarkan data yang diperoleh dalam penelitian ini, ChOa dengan 25% air
dipilih sebagai pelarut yang paling menjanjikan untuk ekstraksi senyawa fenolik
kulit anggur dan dapat menjadi pengganti yang menjanjikan untuk pelarut
organik yang mudah menguap.
3.2. Pemilihan metode ekstraksi
Selain penggunaan pelarut hijau, salah satu kriteria ekstraksi hijau adalah
mengurangi konsumsi energi dengan menggunakan teknologi inovatif seperti
UAE dan MAE ( Chemat dkk., 2012 ). Ultrasonografi dan gelombang mikro telah
dikenal sebagai sumber energi yang luar biasa untuk mendorong ekstraksi,
meningkatkan hasil ekstraksi dengan kualitas produk yang tinggi, serta
mengurangi waktu ekstraksi ( Esclapez, García-Pérez, Mulet, & Cárcel, 2011;
Mandal, Mohan, & Hemalatha, 2007 ). Di sini, kedua metode ekstraksi diterapkan.
Pengaruh suhu ekstraksi dan waktu ekstraksi terhadap hasil ekstraksi jumlah
antosianin-3- HAI- monoglucosides (AMon), jumlah
antosianin-3-asetilmonoglukosida (AAc), jumlah antosianin-3- (6- HAI- p-coumaroyl)
monoglucosides
(ACm), (+) -
catechin dan quercetin-3- HAI- glukosida dipelajari.
Penting untuk mengidentifikasi suhu ekstraksi yang optimal, karena ini adalah
salah satu faktor utama yang berkontribusi terhadap efisiensi ekstraksi MAE.
& Secara umum, pada suhu yang lebih tinggi daya pelarut meningkat karena
penurunan viskositas dan difusivitasnya, yang sangat penting untuk pelarut kental
seperti DES. Peningkatan suhu juga menyebabkan penurunan tegangan
permukaan, serta penurunan interaksi antara senyawa target dan matriks sampel,
sehingga meningkatkan desorpsi dan pelarutan komponen target dalam pelarut ( Bi
et al., 2013; Mandal dkk., 2007 ). Di sisi lain, suhu tinggi dapat menyebabkan
degradasi termal senyawa fenolik ( Xiao, Han, & Shi, 2008 ). Oleh karena itu, kami
memutuskan untuk mempelajari kisaran suhu sedang (50-90 C). Selama
percobaan, suhu dikontrol dengan penyesuaian terus menerus dari keluaran daya
gelombang mikro, yang tidak melebihi 100W. Batas atas daya gelombang mikro
yang digunakan ditetapkan untuk menghindari kemungkinan terlalu panasnya
campuran ekstraksi dan akibatnya degradasi fenolik ( Yan dkk., 2010 ). Seperti yang
ditunjukkan di Gambar 3 a, efisiensi ekstraksi antosianin meningkat secara
signifikan ketika suhu dinaikkan dari 50 menjadi 65 C, sedangkan peningkatan
suhu lebih lanjut menyebabkan penurunan kandungan antosianin. Nilai serupa
diperoleh untuk quercetin-3- HAI- glukosida, sedangkan (+) kandungan katekin
meningkat hingga 80 C, menunjukkan stabilitas termal yang lebih baik pada
ekstrak dibandingkan dengan senyawa lain. Namun, 65 C dipilih sebagai suhu
optimal dan pemantauan pengaruh waktu iradiasi pada efisiensi ekstraksi
dilakukan pada suhu ini. Efisiensi ekstraksi dari semua studi
 M. Cvjetko Bubalo dkk. / Food Chemistry 200 (2016) 159–166
komponen ditingkatkan dengan meningkatkan waktu iradiasi hingga 50 menit.
Peningkatan lebih lanjut waktu perawatan menyebabkan penurunan hasil
ekstraksi yang menunjukkan bahwa MAE berkepanjangan menyebabkan
degradasi termal dan oksidasi senyawa target ( Mandal dkk., 2007 ). Ada banyak
laporan literatur tentang keberhasilan penggunaan MAE dalam ekstraksi senyawa
fenolik tanaman pada berbagai kondisi operasi, namun seringkali dengan
kesimpulan yang berlawanan mengenai kondisi optimal ( Jokić dkk., 2012; Mandal
dkk., 2007; Song, Li, Liu, & Zhang, 2011 ). Misalnya, beberapa penelitian
melaporkan bahwa penggunaan daya gelombang mikro yang tinggi untuk waktu
yang singkat menyebabkan efisiensi ekstraksi yang tinggi ( Song dkk., 2011 ),
sedangkan penelitian lain (termasuk penelitian kami, T = 65 C, t = 50 mnt)
mendemonstrasikan kombinasi suhu sedang dan waktu pemaparan yang lebih
lama untuk menghasilkan pendekatan pengoperasian yang optimal ( Jokić dkk.,
2012 ).
Peningkatan ekstraksi dengan bantuan ultrasonik dari hasil ekstraksi terutama
disebabkan oleh gelembung kavitasi dalam pelarut yang dihasilkan oleh lintasan
gelombang ultrasonik yang menyebabkan dampak microjet. Selain itu, kerusakan
dinding sel tanaman yang disebabkan oleh gelombang kejut menyebabkan
pelepasan kandungan sel ke dalam pelarut ( Esclapez dkk., 2011 ). Di sisi lain,
gelombang ultrasonik dapat menyebabkan beberapa perubahan komposisi kimia
sebagai konsekuensi dari degradasi senyawa target dan produksi radikal bebas di
dalam gelembung gas ( Paniwnyk, Beaufoy, Lorimer, & Mason, 2001 ). Selama suhu
ekstraksi UAE (40-90 C) dan waktu ekstraksi (15-90 menit) dipertimbangkan. Gambar
4 a dan b menunjukkan bahwa hasil ekstraksi semua senyawa fenolik studi
meningkat lebih dari 30% dengan kenaikan suhu dari 30 menjadi 60 C.
Peningkatan suhu lebih lanjut dari 65 menjadi 90 C menyebabkan hanya sedikit
peningkatan dalam hasil ekstraksi, oleh karena itu pengaruh Waktu penyinaran
pada hasil ekstraksi dipantau pada suhu 65 ° C. Gambar 4 c dan d menggambarkan
efek yang sama dari waktu ekstraksi seperti untuk MAE. Dapat diamati bahwa
kandungan semua komponen penelitian meningkat secara signifikan dengan
bertambahnya waktu penyinaran hingga 50 menit, sedangkan degradasi jelas
terjadi dengan peningkatan waktu iritasi lebih lanjut, yang sesuai dengan
penelitian sebelumnya ( Carrera, Ruiz-Rodríguez, Palma, & Barroso, 2012; Tao, Wu,
Zhang, & Sun, 2014 ).
Selain itu, perbandingan antara MAE, UAE dan ekstraksi konvensional (CE)
dengan shaker menunjukkan bahwa efisiensi ekstraksi meningkat dalam urutan
berikut CE <MAE <UAE. Ini tidak mengherankan, karena banyak penelitian
menunjukkan MAE dan UEA menjadi teknik pilihan dibandingkan dengan metode
konvensional ( Esclapez dkk., 2011; Mandal dkk., 2007 ). Selain itu, UEA
menunjukkan kinerja yang lebih baik dari MAE. Ada beberapa laporan literatur
yang berhubungan dengan perbandingan antara UAE dan MAE dan ada
kesimpulan yang ambigu tentang efisiensi metode ( Ghassempour dkk., 2008;
Rajaei, Barzegar, Hamidi, & Sahari, 2010 ). Sebagai contoh,
Ghassempour dkk. (2008) membandingkan UEA dan MAE dalam pemulihan
antosianin dari kulit anggur merah dan UEA menunjukkan pemulihan yang sedikit
lebih rendah daripada MAE, sementara Rajaei dkk. (2010) menunjukkan bahwa UAE
adalah metode pilihan untuk ekstraksi senyawa fenolik lambung hijau pistachio.
Metode EAU digunakan dalam ekstraksi senyawa fenolik Carthamus tinctorius L.
dan Chamaecyparis tumpul dengan menggunakan DES yang berbeda dan efisiensi
ekstraksi tidak meningkat dibandingkan dengan metode ekstraksi konvensional
termasuk pemanasan atau pemanasan dan string. Alasan yang mungkin untuk
produktivitas UEA yang rendah dapat disebabkan oleh suhu ekstraksi karena
dalam penelitian sebelumnya UEA dilakukan pada suhu kamar. Dalam penelitian
kami, 65 C dipilih sebagai suhu optimal, yang menunjukkan bahwa suhu adalah
salah satu faktor terpenting dalam ekstraksi senyawa fenolik dengan DES ( Bi et al.,
2013; Dai, Witkamp, dkk., 2013 ). Namun, dalam penelitian kami, UEA terbukti
menjadi metode ekstraksi terbaik dalam kondisi berikut: suhu ekstraksi 65 C dan
waktu ekstraksi 50 menit (lihat Gambar 5 ).
165
4. Kesimpulan
Di antara DES yang diuji, ChOa dengan 25% air terpilih sebagai pelarut paling
menjanjikan dan terbukti efektif dalam ekstraksi senyawa fenolik kulit anggur
dibandingkan dengan pelarut organik konvensional. Selain itu, dalam penelitian
kami, metode ekstraksi terbaik adalah EAU dengan efisiensi ekstraksi lebih baik
daripada MAE dan CE. Penggunaan DES dari sumber alam dalam proses ekstraksi
dapat menghasilkan metode ekstraksi yang sangat efisien dan benar-benar ramah
lingkungan. Namun, studi lebih lanjut seperti aktivitas biologis ekstrak yang
diperoleh dan / atau stabilitas senyawa fenolik di DES harus dilakukan sebelum
benar-benar implementasi DES dalam ekstraksi senyawa fenolik.
Pengakuan
Pekerjaan itu didukung oleh Universitas Zagreb (Grant No. 0582261-7002223).
Referensi
Bi, W., Tian, M., & Row, KH (2013). Evaluasi eutektik dalam berbasis alkohol
pelarut dalam ekstraksi dan penentuan flavonoid dengan optimasi metodologi permukaan
respon. Jurnal Kromatografi A, 1285, 22–30 .
Carrera, C., Ruiz-Rodríguez, A., Palma, M., & Barroso, CG (2012). USG
ekstraksi bantuan senyawa fenolik dari buah anggur. Analytica Chimica Acta,
732, 100–104 .
Castañeda-Ovando, A., Pacheco-Hernández, M., Páez-Hernández, ME, Rodríguez, J.
A., & Galán-Vidal, CA (2009). Studi kimia antosianin: Tinjauan. Kimia Pangan, 113, 859–871 .
Chemat, F., Maryline Abert Vian, MA, & Cravotto, G. (2012). Ekstraksi hijau dari
produk alami: Konsep dan prinsip. Jurnal Internasional Ilmu Molekuler, 13, 8615–8627 .
Cvjetko Bubalo, M., Vidović, S., Radojčić Redovniković, I., & Jokić, S. (2015). hijau
pelarut untuk teknologi hijau. Jurnal Teknologi Kimia dan Bioteknologi, 90, 1631–1639 .
Dai, J., & Mumper, RJ (2010). Fenolat tumbuhan: Ekstraksi, analisis dan sifatnya
sifat antioksidan dan antikanker. Molekul, 15, 7313–7352 .
Dai, Y., van Spronsen, J., Witkamp, G.-J., Verpoorte, R., & Choi, YH (2013). Alam
pelarut eutektik dalam sebagai media potensial baru untuk teknologi hijau. Analytica
Chimica Acta, 766, 61–68 .
Dai, Y., Verpoorte, R., & Choi, YH (2014). Penyediaan pelarut eutektik dalam alami
stabilitas yang ditingkatkan dari pewarna alami dari bunga yang aman ( Carthamus
tinctorius). Kimia Pangan, 159, 116–121 .
Dai, Y., Witkamp, GJ, Verpoorte, R., & Choi, YH (2013). Eutektik dalam alami
pelarut sebagai media ekstraksi baru untuk metabolit fenolik dalam Carthamus tinctorius L. Kimia
Analitik, 85, 6272–6278 .
Esclapez, MD, García-Pérez, JV, Mulet, A., & Cárcel, JA (2011). USG-
ekstraksi berbantuan produk alami. Ulasan Rekayasa Makanan, 3, 108–120 .
Ghassempour, A., Heydari, R., Talebpour, Z., Fakhari, AR, Rassouli, A., Davies, N., &
Aboul-Enein, H. (2008). Studi metode ekstraksi baru untuk pemisahan antosianin dari kulit
anggur merah dan analisis dengan HPLC dan LC-MS / MS. Jurnal Kromatografi Cair &
Teknologi Terkait, 31, 2686–2703 .
Gutierrez, MC, Ferrer, ML, Mateo, CR, & del Monte, F. (2009). Pengeringan beku
larutan encer pelarut eutektik dalam: Pendekatan yang sesuai untuk suspensi eutektik dalam
dari struktur rakitan sendiri. Langmuir, 25, 5509–5515 .
Ignat, I., Volf, I., & Popa, VI (2011). Tinjauan kritis metode untuk karakterisasi
senyawa polifenol dalam buah dan sayuran. Kimia Pangan, 126,
1821–1835 .
Jokić, S., Cvjetko, M., Božić, Ð., Fabek, S., Toth, N., Vorkapić-Furač, J., & Radojčić
Redovniković, I. (2012). Optimalisasi ekstraksi senyawa fenolik dengan bantuan gelombang
mikro dari brokoli dan aktivitas antioksidannya. Jurnal Internasional Ilmu dan Teknologi
Pangan, 47, 2613–2619 .
Lorrain, B., Chira, K., & Teissedre, P.-L. (2011). Komposisi fenolik merlot dan
anggur cabernet-sauvignon dari kebun anggur Bordeaux untuk tahun 2009-vintage:
Comparison to 2006, 2007 and 2008 vintages. Kimia Pangan, 126, 1991–1999 .
Mandal, V., Mohan, Y., & Hemalatha, S. (2007). Review artikel: Microwave dibantu
ekstraksi - Alat ekstraksi yang inovatif dan menjanjikan untuk penelitian tanaman obat. Ulasan
Farmakognosi, 1, 7–16 .
Novak, I., Janeiroa, P., Seruga, M., & Oliveira-Brett, AM (2008). USG
flavonoid yang diekstrak dari empat varietas kulit anggur merah Portugis yang ditentukan
dengan kromatografi cair fase-balik dengan deteksi elektrokimia. Analytica Chimica Acta,
630, 107–115 .
Paiva, P., Craveiro, R., Aroso, I., Martins, M., Reis, RL, & Duarte, ARC (2014).
Pelarut eutektik dalam alami-pelarut untuk abad ke-21. Kimia dan Teknik Berkelanjutan ACS,
2, 1063–1071 .
Paniwnyk, L., Beaufoy, E., Lorimer, JP, & Mason, TJ (2001). Ekstraksi rutin
dari kuncup bunga Sophora japonica. Sonokimia Ultrasonik, 8, 299–301 .
166 M. Cvjetko Bubalo dkk. / Food Chemistry 200 (2016) 159–166
Rajaei, A., Barzegar, M., Hamidi, Z., & Sahari, MA (2010). Optimalisasi ekstraksi
kondisi senyawa fenolik dari pistachio ( Pistachia vera) lambung hijau melalui metode
permukaan respons. Jurnal Ilmu dan Teknologi Pertanian,
12, 605–615 .
Song, J., Li, D., Liu, C., & Zhang, Y. (2011). Ekstraksi dengan bantuan gelombang mikro yang dioptimalkan
dari total fenolat (TP) dari Ipomoea batatas daun dan aktivitas antioksidannya.
Ilmu Pangan Inovatif dan Teknologi yang Muncul, 12, 282–287 .
Tao, Y., Wu, D., Zhang, Q.-A., & Sun, D.-W. (2014). Ekstraksi dengan bantuan ultrasound
fenolat dari wine lees: Pemodelan, pengoptimalan, dan stabilitas ekstrak selama
penyimpanan. Sonokimia Ultrasonik, 21, 706–715 .
Woo Nam, M., Zhao, J., Sang Lee, M., Hoon Jeong, J., & Lee, J. (2015). Ditingkatkan
ekstraksi produk alami bioaktif menggunakan eutektik dalam yang dibuat khusus
pelarut: Aplikasi untuk menghindari ekstraksi dari Flos sophorae. Kimia Hijau, 17, 1718–1727 .
Xiao, W., Han, L., & Shi, B. (2008). Ekstraksi flavonoid dengan bantuan microwave dari
Radix astragali. Teknologi Pemisahan dan Pemurnian, 62, 614–618 .
Yan, MM, Liu, W., Fu, YJ, Zu, YG, Chen, CY, & Luo, M. (2010). Optimasi
proses ekstraksi dengan bantuan gelombang mikro untuk empat astragalosida utama Radix
astragali. Kimia Pangan, 119, 1663–1670 .
Muda, HC, van Spronsen, J., Dai, Y., Verberne, M., Hollmann, F., Arends Isabel, WC
E., ... Verpoorte, R. (2011). Apakah pelarut eutektik dalam alami merupakan mata rantai yang
hilang dalam memahami metabolisme dan fisiologi sel? Fisiologi Tumbuhan, 156,
1701–1705 .