Food Chemistry 192 (2016) 306-312

daftar isi yang tersedia di ScienceDirect

food Chemistry

jurnal homepage: www.elsevier. com / cari / foodchem

Metode analitis

isolasi Bioassay-dipandu dari proanthocyanidins dengan aktivitas antioksidan dari kacang tanah ( Arachis
hypogaea) kulit dengan kombinasi teknik kromatografi

Tatiane LC Oldoni Sebuah . . Priscilla S. Melo b . Adna P. Massarioli b . Ivani AM Moreno b .

Rosangela MN Bezerra c . Pedro L. Rosalen d . Gil VJ da Silva e . Andra M. Nascimento f .
Severino M. Alencar b
Sebuah Departemen Kimia, federal Technological University of Paran (UTFPR), 85.501-970 Pato Branco, PR, Brasil
b Departemen Agri-Food Industry, Pangan dan Gizi, '' Luiz de Queiroz '' Fakultas Pertanian, Universitas Sao Paulo (USP), 13.418-900 Piracicaba, SP, Brazil
c Fakultas Ilmu Terapan, Piracicaba Sekolah Gigi, Universitas Campinas (UNICAMP), 13.484-350 Piracicaba, SP, Brazil
d Departemen Ilmu Fisiologis, University of Campinas (UNICAMP), 13.414-903 Piracicaba, SP, Brazil
e Departemen Kimia, FFCLRP, University of So Paulo (USP), 14.040-901 RibeiroPreto, SP, Brazil
f Institut Biologi dan Ilmu Exact, Universitas Federal Ouro Preto (UFOP), 35.400-000 OuroPreto, MG, Brasil

articleinfo abstrak

Pasal sejarah: Pemurnian dan bioassay-dipandu fraksinasi dipekerjakan untuk mengisolasi proanthocyanidins dengan aktivitas antioksidan dari kulit kacang
Menerima Juni 2014 24 tanah ( Arachis hypogaea Runner 886). Ekstrak kasar disiapkan dengan aseton (60% v / v) dan dimurnikan menggunakan metode kromatografi,
Diterima dalam bentuk direvisi 10 Mei 2015 Diterima 4
termasuk teknik HPLC semipreparative. Akibatnya, dua proanthocyanidins diisolasi dan diidentifikasi menggunakan NMR, epicatechin- (2
Juli 2015 Tersedia online 6 Juli 2015

b? HAI? 7, 4 b? 8) -catechin (proantosianidin A1) dan epicatechin- ( b? 2 O? 7, 4 b? 8) -epicatechin (proantosianidin A2). Meskipun kesamaan
struktural, perbedaan yang diamati dalam aktivitas antioksidan mereka. Proantosianidin A1 terbukti lebih aktif, dengan EC 50 nilai untuk DPPH
senyawa kimia dipelajari dalam artikel ini:
scavenging radikal 18.25 l g / mL dan pengurangan Fe 3+ kompleks -TPTZ dari 7,59 mmol / g, lebih tinggi dari sintetis BHT antioksidan. Senyawa
(+) - katekin (pubchem CID: 9064)
ini dievaluasi oleh ABTS + adalah mirip dengan quercetin alami. Oleh karena itu, kulit kacang merupakan sumber penting dari senyawa bioaktif
p- asam coumaric (pubchem CID: 637.542) ( ) -Epicatechin
(pubchem CID: 72.276) epigallocatechin (pubchem CID:
yang dapat digunakan sebagai antioksidan ringan untuk pengawetan makanan.
72.277) ferulic acid (pubchem CID: 445.858) asam Galia
(pubchem CID: 370) Quercetin (pubchem CID: 5.280.343)
proantosianidin A1 (pubchem CID: 2015 Elsevier Ltd All rights reserved.

9872976)
Proantosianidin A2 (pubchem CID:
124.025)

Kata kunci:
Puri fi kasi
By-produk
Senyawa fenolik Aktivitas
antioksidan kromatografi

1. Perkenalan Kelompok (dihydroxylated B-ring) yang mampu mudah menyumbangkan hidrogen (elektron) untuk
menstabilkan spesies radikal ( Williams, Spencer, & Rice-Evans, 2004 ). Selanjutnya, karena berbagai
Proanthocyanidins memiliki minat gizi dan biologi karena mereka dianggap antioksidan ( Manach, kelompok o-dihidroksi hadir dalam struktur dengan berat molekul tinggi, procyanidins memiliki
Mazur, & Scalbert 2005 ) Karena kehadiran katekol B-ring kemampuan tinggi untuk ion logam kompleks, seperti Fe (III), Cu (II) dan Al (III), serta protein.

Proanthocyanidins yang terkenal karena potensi manfaat untuk kesehatan manusia dan untuk
Sesuai penulis di: CP 591, 85.501-970 Pato Branco, PR, Brasil. menyajikan aktivitas biologis yang berharga,
Alamat email: tatianeoldoni@utfpr.edu.br (TLC Oldoni).

http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2015.07.004
0308-8146 / 2015 Elsevier Ltd All rights reserved.
 TLC Oldoni et al. / Food Chemistry 192 (2016) 306-312
seperti antimikroba, antioksidan, antikanker, antijamur, anti alergi, anti-inflamasi, dan tindakan
vasodilatasi ( Pearson, Schmitz, Lazarus, & Keen, 2001; Pizzolitto et al, 2013.; Zhang, Liu, Han, &
Wei, 2013 ).
Sedangkan kernel kacang tanah adalah komoditas berharga, kulit adalah nilai yang rendah
oleh-produk pengolahan kacang tanah dengan nilai komersial sekitar US $ 12-20 ton per ( Sobolev &
Cole, 2004 ). Kulit telah digunakan untuk pakan ternak atau dibakar untuk energi. Namun, penelitian
terbaru menunjukkan kulit yang memiliki kandungan tinggi senyawa fenolik sebagai avonoids fl, asam
fenolik, procyanidins dimmer dan oligomer ( Ballard & Mallikarjunan, 2009; Ballard, Mallikarjunan,
Zhou, & O'Keefe, 2010; Lou dkk., 2004; Sarnoski, Johnson, Reed, Tanko, & O'Keefe, 2012; Tsujita,
Shintani, & Sato, 2014; Yu, Ahmedna, & Goktepe, 2005; Yu, Ahmedna, Goktepe, & Dai, 2006 ) Yang
membuatnya produk dengan potensi manfaat bagi kesehatan manusia dan aktivitas biologis yang
berharga ( Awad, Chan, Downie, & Fink, 2000; Yu, Ahmedna, & Goktepe 2010 ).
Lou et al. (2004) dan Sarnoski et al. (2012) proanthocyanidins terisolasi dari kulit kacang dan
identifikasi ed mereka. Senyawa-senyawa diuji untuk aktivitas antioksidan. Namun, penulis tidak
menggunakan fraksinasi bioassay-dipandu, dan senyawa diisolasi secara acak. Dengan demikian,
tidak mungkin untuk yakin senyawa bioaktif, pada kenyataannya, terisolasi.
Teknik fraksinasi bioassay-dipandu telah digunakan oleh banyak peneliti untuk mempelajari
produk alami ( Balde et al, 2010.; Bargougui et al, 2014.; Campos, Azevedo, Filho, Perez, & Braga,
2013; Ding, ding, Zhang, & Luo, 2013; Oldoni et al, 2011.; Teke et al., 2011 ). Alasan utama untuk
memilih teknik ini adalah proses rasionalisasi yang digunakan untuk mengisolasi zat aktif biologis dari
ekstrak alami yang kompleks.
Meskipun beberapa studi telah dilakukan dengan kulit kacang, adalah mungkin produk biaya
rendah ini berpotensi kaya akan senyawa dengan aktivitas fungsional dan biologis, seperti senyawa
fenolik. Oleh karena itu, tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengevaluasi aktivitas antioksidan dari
ekstrak kasar dan fraksi kulit kacang dan, kemudian,
mengisolasi proanthocyanidins menggunakan
bioassay-dipandu teknik fraksinasi.
2. Bahan dan metode
2.1. Sampel dan standar
Sampel kacang kulit ( Arachis hypogaea Runner 886), yang disediakan oleh CAP Agroindustrial
(Dumont, SP, Brazil) pada tahun 2010 dan
2011, diperoleh sebagai produk sampingan dari proses blanching kacang. Sampel kulit yang
liofilisasi, ditimbang, dan disimpan pada 18 C sampai analisis.
Silica gel 60 dan 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil hidrat (DPPH) yang dibeli dari Merck (Darmstadt,
Jerman); butylated hydroxytoluene (BHT), dan butylated hydroxyanisole (BHA) standar dari Synth
(Diadema, SP, Brazil); Amberlite resin XAD-2, 2-2 0- azino-di- (3-ethylbenzthiazoline asam sulfonat)
(ABTS),
2,4,6-tri (2-pyridyl) -s-triazina (TPTZ) analitis standar quercetin, (+) - katekin, ( ) -epicatechin, asam
galat, asam ferulic, p- asam coumaric dan epigallocatechin dari (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA);
dan Sephadex LH-20 dari Amersham Pharmacia (Uppsala, Swedia). Semua pelarut yang digunakan
untuk kromatografi adalah kinerja tinggi kromatografi cair (HPLC) grade dan semua bahan kimia
lainnya yang kelas analitis-reagen.
2.2. Ekstraksi dan isolasi bioguided senyawa bioaktif
Sebuah sampel yang representatif dari kulit kacang tanah (23 g) diekstraksi dengan campuran
aseton: air (60:40), acidi fi kasi ke pH 1,5 dengan
0,1 mol / L HCl, dalam sebuah bak thermostatized pada 70 C selama 30 menit. Itu
307
ekstrak disentrifugasi pada 5000 g selama 15 menit, disaring, dan terkonsentrasi di evaporator rotary
pada 36 C sampai aseton telah menguap sepenuhnya. Sampel diliofilisasi dan padat terkonsentrasi,
yaitu, ekstrak aseton kulit kacang tanah (AEPS) digunakan untuk pemurnian dan analisis selanjutnya.
The AEPS itu lanjut dimurnikan menggunakan Amberlite XAD-2 resin, sehingga fraksi metanol
(Met-fr) dan fraksi air (Aqu-fr).
Aktif Met-fr dipisahkan pada kolom Sephadex LH-20 (5 cm 30 cm), dengan menggunakan teknik
gel filtrasi (hydroxypropylated, cross-linked dekstran), dan dielusi dengan metanol, menghasilkan 123
subfraksi. The subfraksi yang diperoleh dipantau dengan kromatografi lapis tipis (KLT) menggunakan
anisaldehida reagen (4-metoksi-benzaldehida), dan asam asetat sebagai pereaksi berkembang,
diikuti dengan inkubasi pada 100 C selama 5 menit.
zat neon yang dilihat di bawah sinar ultraviolet (UV) cahaya pada 254 nm dan 366 nm ( Alencar et al.,
2007 ). Subfraksi yang mirip dalam warna dan Rf dikelompokkan kembali menjadi 18 subfraksi.
subfraksi ini diuji dan dievaluasi untuk aktivitas antioksidan dan kimia pro fi le dengan menggunakan
HPLC ( Francisco & Resurreccin, 2009a ). Subfraksi 10 menunjukkan aktivitas tertinggi
menggunakan DPPH dan ABTS + Metode pembersih radikal. Oleh karena itu, itu dimurnikan dengan
HPLC semipreparative menggunakan Agilent Prep-ODS (H) kolom (250 mm 20 mm). Fase gerak
yang terdiri dari air (pelarut A) dan asetonitril (pelarut B) pada tingkat fl ow konstan dari 6 mL / menit.
gradien dimulai dengan 20% pelarut B sampai 30% B dalam 30 menit, 55% B di 35 menit, dan 20% B
dalam 40 menit. Kolom dipertahankan pada suhu konstan 30 C. Puncak senyawa dielusi dikumpulkan
dalam kolektor fraksi digabungkan ke sistem kromatografi cair, diuji untuk aktivitas antioksidan
menggunakan DPPH dan ABTS + Metode radikal scavenging dan besi mengurangi kekuatan
antioksidan (FRAP), dan juga dianalisis dengan resonansi magnetik nuklir (NMR) untuk penjelasan
struktur kimianya.
2.3. resonansi magnetik nuklir (NMR)
spektrum NMR, diperoleh di CD 3 OD menggunakan tetrametilsilan (TMS) sebagai standar
internal tercatat dalam 500 spektrometer Bruker DRX, beroperasi pada 500,13 MHz untuk 1 H dan
125,76 MHz untuk 13 C. Data diperoleh oleh 1D dan eksperimen 2D NMR ( 1 H- 1 H NYAMAN, HMQC
dan HMBC). Pergeseran kimia dinyatakan dalam d
(Bagian per juta) dan konstanta kopling ( J) dalam Hz ( Freimund, Sauter, Kappeli, & Dutler 2003 ).
Semua senyawa, sudah dijelaskan dalam literatur, yang diidentifikasi oleh perbandingan data
spektral mereka (resonansi magnetik nuklir - NMR) dengan nilai-nilai yang dilaporkan.
Epicatechin- (2 b? HAI? 7, 4 b? 8) -catechin ( A1): 1 H dan 13 Data C NMR berada dalam perjanjian
dengan nilai literatur dilaporkan ( Lou et al., 2004 ). Epicatechin- ( b? 2 O? 7, 4 b? 8) -epicatechin ( A2): 1 H
dan
13 Data C NMR berada dalam perjanjian dengan nilai literatur dilaporkan ( Lou et al., 2004 ).
2.4. aktivitas antioksidan menggunakan 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil hidrat (DPPH) metode
radikal bebas
Kegiatan radikal bebas DPPH diukur seperti yang dijelaskan oleh Moraes de Souza, Oldoni,
Regitano-d'Arce dan Alencar (2008) . Media reaksi terdiri dari 0,5 mL ekstrak atau puri fi fraksi ed, 3.0
mL etanol, dan 0,3 mL
0,5 mmol / L DPPH solusi dalam etanol. Campuran diinkubasi dengan tidak adanya cahaya pada suhu
kamar selama 45 menit. Selanjutnya, absorbansi diukur menggunakan spektrofotometer (UV
mini-1240, Shimadzu Co, Kyoto, Jepang) di 517 nm. Aktivitas anti-radikal dihitung dengan
menggunakan persamaan berikut:
308 TLC Oldoni et al. / Food Chemistry 192 (2016) 306-312

aktivitas antioksidan % 100 aa Ab ? 100 = Ac mana: Aktivitas antioksidan dinyatakan sebagai mmol trolox setara kapasitas antioksidan (TEAC) / g kacang
kulit. Semua analisis dilakukan dalam rangkap tiga.

Aa = absorbansi dari sampel; Ab = absorbansi kosong (disiapkan dengan mengganti volume

DPPH solusi dengan volume yang sama dari etanol); Ac = absorbansi dari kontrol (disiapkan
2.6. aktivitas antioksidan menggunakan besi mengurangi kekuatan antioksidan metode (FRAP)
dengan mengganti volume ekstrak dengan volume yang sama dari etanol).

Penentuan aktivitas antioksidan menggunakan metode FRAP dilakukan seperti yang dijelaskan
oleh Kukic' et al. (2008) . FRAP reagen disiapkan pada saat analisis dengan mencampur 25 ml 300
Untuk menentukan aktivitas antioksidan dari senyawa terisolasi, analisis aktivitas scavenging
mmol / L buffer asetat (pH 3,6), 2,5 mL dari 10 mmol / L
DPPH dilakukan dalam 96-baik polystyrene lempeng. Aliquots 170 l L dari solusi, 60 l L dari DPPH solusi
radikal dalam etanol, dan 50 l L senyawa terisolasi ditambahkan ke setiap rongga lempeng. Setelah
2,4,6-tri (2-pyridyl) -s-triazina (TPTZ) di 40 mmol / L HCl, dan
inkubasi selama 45 menit pada suhu kamar, absorbansi diukur pada 517 nm dengan
2,5 mL dari 20 mmol / L FeCl 3 dalam larutan air. Sebuah aliquot dari 100 l L masing-masing ekstrak
spektrofotometer. Aktivitas antioksidan ditentukan seperti yang dijelaskan sebelumnya.
ditambahkan ke 3 mL FRAP reagen dan diinkubasi pada 37 C dalam bak mandi air selama 30 menit.
absorbansi diukur, larutan sulfat besi (100-2000 l mol / L) yang digunakan untuk kalibrasi, dan hasilnya
dinyatakan sebagai mmol Fe 2 + / g sampel liofilisasi. Semua analisis dilakukan dalam rangkap tiga.

Konsentrasi sampel (AEPS, fraksi dimurnikan, dan senyawa terisolasi) bertanggung jawab untuk
penurunan 50% dalam DPPH bebas kegiatan awal radikal (EC 50, l g / mL) dihitung dengan regresi
linear dari aktivitas antioksidan, diukur pada berbagai konsentrasi masing-masing sampel. Semua
analisis dilakukan dalam rangkap tiga.
2.7. Analisis statistik

Sebuah desain acak digunakan untuk semua percobaan. Data dianalisis dengan ANOVA
2.5. aktivitas antioksidan menggunakan 2-2 0- azino-di- (3ethylbenzthiazoline
menggunakan Analisis Statistik System (SAS) perangkat lunak. Berarti pemisahan dilakukan dengan
asam sulfonat) metode (ABTS)
menggunakan uji Tukey pada interval kepercayaan diri 95%.

Aktivitas antioksidan dengan metode ABTS dilakukan menurut Re et al. (1999) . The ABTS + radikal
dibentuk oleh reaksi dari 7 mmol / L ABTS dengan 140 mmol / L kalium persulfat, diinkubasi pada 25 C
dalam gelap selama 12-16 jam. Radikal diencerkan dengan etanol untuk mendapatkan nilai
absorbansi
0.700 0.200 di 734 nm. Dalam kondisi gelap, 3.0 mL ABTS + solusi radikal telah ditambahkan ke 30 l L
masing-masing pengenceran AEPS, fraksi dimurnikan, dan senyawa terisolasi dan absorbansi
dibacakan pada 734 nm dalam spektrofotometer setelah 6 menit melawan etanol sebagai kosong.
Trolox digunakan sebagai referensi pada konsentrasi mulai 100 sampai 2000 l mol / L dan hasil
3. Hasil dan Pembahasan
Dalam penelitian ini, kegiatan antioksidan AEPS, puri fraksi fi kasi, dan senyawa terisolasi
diperoleh dari kulit kacang tanah diselidiki. Kegiatan-diarahkan pemurnian ( Gambar. 1 ) Dari ekstrak
kasar dengan menggunakan beberapa pemisahan kromatografi mengakibatkan isolasi dua senyawa
dengan aktivitas antioksidan yang tinggi, 10 mg epicatechin- (2 b? HAI? 7, 4 b? 8) -catechin ( A1) dan 2
mg epicatechin- ( b? HAI? 7, 4 b? 8) -epicatechin ( A2) ( Gambar. 2 ). Itu

kulit diliofilisasi kacang (25 g)

dengan aseton 60%

70 Hai C / 30 menit

Ekstrak aseton kulit kacang tanah (AEPS) (23 g)

Pemurnian di Amberlite
XAD 2 Damar

Fraksi metanol (Met-fr) fraksi air

(1,05 g) (Aqu-fr)

kromatografi kolom
Sephadex LH-20

123 subfraksi - bergabung Subfraksi 10 (160 mg) Ekstraksi

kembali di 18

Rechromatography pada
HPLC semi-preparatif

Proantosianidin A1 (10 mg) Proantosianidin A2 (2 mg)

Gambar. 1. Prosedur isolasi bioassay-dipandu senyawa dari kulit kacang tanah.

 TLC Oldoni et al. / Food Chemistry 192 (2016) 306-312 309

Hasil ini menunjukkan bahwa proses pemurnian menggunakan Amberlite XAD-2 resin adalah yang
SEBUAH
efisien, karena mengakibatkan peningkatan kapasitas antioksidan dari Met-fr dibandingkan dengan
OH
AEPS.
13
OH Hasil yang ditemukan di sini untuk aktivitas antioksidan dari kulit kacang tanah lebih tinggi dari
12
yang dilaporkan oleh Francisco dan Resurreccin (2009b) untuk kulit kacang tanah dari berbagai
14
11 daerah dan diproses di bawah suhu yang berbeda, yang berkisar 0,62-2,56 mmol TEAC / g kacang
HO HAI 15 16 kulit.
2
9
78 34
10 Meskipun Met-fr menimbulkan efek antioksidan yang lebih kuat daripada Aqu-fr, HPLC-DAD pro
HAI
fi les terdaftar untuk pecahan yang sama, dengan variasi dalam intensitas puncak ( Gambar. 3 ).
56
OH
7' Mengingat aktivitas antioksidan yang lebih tinggi, kimia pro fi le dan jumlah bertemu-fr tersedia, ini
6' adalah dimurnikan pada kolom Sephadex LH-20. Elusi Met-fr memungkinkan koleksi 123 subfraksi,
OH 8'
yang dianalisis dengan TLC.
9' 5'

HAI 10' OH
16' 2' Di antara subfraksi dievaluasi, subfraksi 10 menunjukkan aktivitas antioksidan tertinggi dan
11' 3' 4'
HPLC-DAD positif pro fi le ( Gambar. 3 ) Untuk isolasi kimia menunjukkan campuran dengan spektrum
UV kompatibel dengan senyawa fenolik. Konstituen utama dikumpulkan menyediakan senyawa
13' 14' 15'
dengan kemurnian tinggi (proanthocyanidins A1 dan A2) ( Gambar. 3 ).
12' OH
HO

OH
3.2. aktivitas antioksidan senyawa terisolasi

OH
Hasil aktivitas antioksidan, dinyatakan sebagai EC 50, menunjukkan bahwa isolasi dan puri
13 prosedur kation fi yang memadai. Penurunan EC 50 nilai diamati selama proses pemurnian ( tabel 2 ).
B OH
12 Kegiatan terbaik diperoleh untuk Met-fr, subfraksi 10, dan proantosianidin A1, dengan EC 50 nilai-nilai
14
16,10, 15,65, dan 18,25 l g / mL, masing-masing. Dibandingkan dengan antioksidan BHA sintetis (EC 50
8 11
HO HAI 15 16 = 25 l g / mL) ( Yuan, Bone, & Carrington 2005 ), Dua senyawa terisolasi dalam penelitian ini dan
2 ekstrak mereka sangat menjanjikan, karena mereka memiliki potensi besar untuk aplikasi di industri
9
67 34 makanan dan farmasi.
10
HAI
OH
5 7'
6'
OH 8'
Untuk yang terbaik dari pengetahuan kita, ini adalah pertama kalinya bahwa proanthocyanidins
9' 5'
bioaktif telah diisolasi dari kulit kacang tanah dengan menggunakan teknik fraksinasi
HAI
10'
OH bioassay-dipandu, dan bahwa aktivitas antioksidan dan struktur dijelaskan.

16' 2'
11' 3' 4' Meskipun Lou et al. (1999) proanthocyanidins terisolasi A1 dan A2 dari fraksi larut air dari kulit
kacang tanah, penulis tidak menentukan aktivitas antioksidan mereka. Meskipun mengisolasi
13' 14' 15' konstituen lainnya dari kulit kacang dan mengevaluasi mereka untuk aktivitas antioksidan mereka
12' OH
menggunakan EC 50 uji, Lou et al. (2004) tidak menggunakan isolasi bioassay-dipandu. Appeldoorn et
HO
al. (2009) juga terisolasi procyanidins tipe A dimer dan tipe B dimer dari kulit kacang dan anggur biji,
masing-masing. Namun, karena penulis tidak mengevaluasi bioaktivitas, mereka tidak bisa
OH
menentukan apakah senyawa ini bertanggung jawab atas aktivitas antioksidan. Teknik fraksinasi

Gambar. 2. Struktur dari senyawa bioaktif yang diisolasi dari kulit kacang: (A) epicatechin- (2 b? HAI? 7, 4 b? 8) bioassay-dipandu memastikan bahwa senyawa yang bertanggung jawab untuk aktivitas biologis yang
-catechin (proanthocyanidin A1), (B) epicatechin- (2 b? HAI? 7, 4 b? 8) -epicatechin (proantosianidin A2). terisolasi.

tes untuk mendeteksi aktivitas antioksidan dipantau sepanjang fraksinasi dan isolasi langkah.
Standar quercetin, catechin, dan epicatechin juga diuji dalam penelitian kami, dan kegiatan
antioksidan mereka (metode ABTS radikal, Gambar. 4 ) Yang dibandingkan dengan AEPS, puri fraksi
Struktur senyawa yang diidentifikasi oleh data spektroskopi mereka ( 1 H NMR, 13 C NMR)
fi kasi dan senyawa terisolasi. Aktivitas tertinggi ditemukan untuk proantosianidin A1 (6,54 mmol
pengukuran dan perbandingan dengan nilai-nilai yang diterbitkan ( Lou et al., 2004 ).
TEAC / g), sangat mirip dengan standar quercetin, catechin, dan epicatechin (7.52, 7.33, dan 7.50
mmol TEAC / g,

3.1. Bioassay-dipandu untuk aktivitas antioksidan masing-masing). Campuran proantosianidin

Langkah pertama dalam proses isolasi senyawa aktif adalah pemurnian dengan Amberlite
XAD-2 Damar. Met-fr dan Aqu-fr dievaluasi untuk aktivitas antioksidan mereka menggunakan DPPH dan
ABTS + metode radikal ( Tabel 1 ) Dan kimia pro fi le dengan HPLC-DAD ( Gambar. 3 ).
Hasil aktivitas antioksidan, dinyatakan sebagai scavenging radikal DPPH dan ABTS +,
Menunjukkan bahwa Met-fr memiliki aktivitas yang lebih tinggi daripada AEPS, sementara Aqu-fr
ditampilkan aktivitas terendah ( Tabel 1 ).
A1 + proantosianidin A2 (1: 1 campuran dalam proporsi yang sama) dan proantosianidin A2 saja
memiliki nilai terendah untuk aktivitas antioksidan.
Senyawa terisolasi proantosianidin A1 dan A2 adalah diastereoisomer dan satu-satunya
perbedaan antara mereka adalah stereokimia dari SEBUAH OH kelompok di 3 0 posisi. Meskipun
kesamaan struktural mereka, senyawa ini dipamerkan berbagai fisik, kimia, dan biologi.
Proantosianidin A1 terbukti lebih bioaktif dari proantosianidin A2, dan
310 TLC Oldoni et al. / Food Chemistry 192 (2016) 306-312

SEBUAH

Mau

Menit

proantosianidin A1 B
Mau

proantosianidin A2

Menit

Gambar. 3. RP-HPLC pro fi le terdaftar untuk pecahan kulit kacang dan senyawa terisolasi. (A) metanol dan air pecahan; (B) subfraksi 10 dan koleksi proantosianidin A1 dan A2 proantosianidin menggunakan semipreparative RP-HPLC.

Tabel 1
tabel 2
aktivitas antioksidan dari ekstrak aseton kulit kacang tanah (AEPS) dan metanol nya (Met-fr) dan air (Aqu-fr) fraksi
menggunakan ABTS dan DPPH metode. Sebuah aktivitas antioksidan dari ekstrak aseton kulit kacang tanah (AEPS), yang sebagian kecil metanol (Met-fr), subfraksi 10,
dan senyawa terisolasi (proantosianidin A1 dan A2 proantosianidin) dengan menggunakan metode DPPH, dinyatakan
Mencicipi aktivitas antioksidan ABTS sebagai EC 50.

(mmol TEAC / g) DPPH (%) Mencicipi aktivitas antioksidan - DPPH EC 50 ( l g /

AEPS 4.4 b 0,10 55,9 Sebuah 2,55 mL)

Bertemu-fr 5.5 Sebuah 0,50 60,0 Sebuah 1,44
AEPS 20,62 b 0,05
Aqu-fr 3.2 c 0,15 41,3 b 1.80
Bertemu-fr 16.10 d 0,21
Setiap nilai dinyatakan sebagai mean (rangkap tiga) standar deviasi (SD). Huruf yang sama pada kolom yang tidak subfraksi 10 15,65 e 0,07
secara signifikan berbeda pada tingkat 0,05. Sampel diuji pada konsentrasi 50 l g / mL. proantosianidin A1 18.25 c 0,01
proantosianidin A2 31.10 Sebuah 0,05

Aktivitas antioksidan campuran equimolar dari kedua senyawa itu lebih sedikit, yang mungkin
disebabkan oleh penurunan aktivitas menunjukkan oleh yang terakhir.
Senyawa-senyawa terisolasi juga dievaluasi untuk aktivitas antioksidan mereka dengan metode
FRAP. Kegiatan diperoleh untuk AEPS, Met-fr, subfraksi 10, dan proantosianidin A1 adalah 7,75,
7.33, 7.55, dan 7.59 mmol Fe 2 + / g, masing-masing ( Gambar. 4 ). Nilai ditemukan standar, epicatechin
dan catechin, yang 21,3 dan
20,9 mmol Fe 2 + / g, masing-masing. Membandingkan hasil yang ditemukan dalam penelitian ini
menggunakan metode FRAP dengan BHT standar sintetis, yang menyajikan aktivitas antioksidan dari
1,59 mmol Fe 2 + / g ( Borneo,
Setiap nilai dinyatakan sebagai mean (rangkap tiga) standar deviasi (SD). Huruf yang sama pada kolom yang tidak
secara signifikan berbeda pada tingkat 0,05.
Len, Aguirre, Ribotta, & Cantero 2009 ) Dan dengan antioksidan alami diuji, senyawa terisolasi
menunjukkan potensi besar sebagai antioksidan dalam industri makanan dan farmasi.
Mengingat bahwa studi tentang aktivitas antioksidan menggunakan metode FRAP langka,
diskusi ini berfokus pada senyawa yang diisolasi dari matriks lainnya. Dengan menggunakan metode
FRAP Cerezo, Cuevas, WINTERHALTER, Garcia-Parrilla, dan Troncoso (2010) dievaluasi aktivitas
antioksidan senyawa yang diisolasi dari strawberry dan menemukan nilai-nilai mulai 2,75-7,67 mmol
Fe 2 + / g. terisolasi
 TLC Oldoni et al. / Food Chemistry 192 (2016) 306-312 311

Gambar. 4. aktivitas antioksidan dari ekstrak aseton kulit kacang tanah (AEPS), fraksi metanol-nya (Met-fr), subfraksi 10, senyawa terisolasi dari kulit kacang dan standar alami menggunakan ABTS (A) dan FRAP (B) metode (hasil dinyatakan
sebagai mean nilai standar deviasi, n = 3).

Senyawa yang diidentifikasi sebagai anthocyanin dan yang paling aktif adalah Studi harus dilakukan untuk memverifikasi efektivitas senyawa antioksidan dalam sistem biologi.
pelargonidin-3-glucoside.

Konflik kepentingan
4. Kesimpulan

Para penulis menyatakan tidak ada konflik yang menarik.

Dari penelitian ini, dapat disimpulkan bahwa aktivitas antioksidan yang disajikan oleh AEPS
menunjukkan potensi tinggi. Untuk yang terbaik dari pengetahuan kita, ini adalah laporan pertama Ucapan Terima Kasih
menggambarkan isolasi bioassay-dipandu senyawa aktif dari kulit kacang tanah. Proses mengisolasi
senyawa dengan aktivitas tinggi dari AEPS, membuktikan bahwa proses isolasi dilakukan dengan Para penulis berterima kasih kepada Negara So Paulo Research Foundation (FAPESP - Brazil)
benar. Kegiatan antioksidan proantosianidin A1 dan A2 yang jauh lebih tinggi daripada antioksidan (Proc Nos 200.855.492-7 dan 200.907.944-9..) Untuk dukungan keuangan dan Arah Penelitian dan
sintetis BHA dan BHT, dan kegiatan dekat dengan antioksidan alami yang kuat, seperti quercetin dan Pasca Kelulusan (DIRPPG) dari
epicatechin. The proantosianidin A1 adalah antioksidan kuat tanpa efek sinergis dengan isomer A2 Federal
nya. Technological University of Parana (UTFPR).

Referensi

Secara keseluruhan, itu adalah menarik untuk dicatat bahwa oleh-produk dari kulit kacang Brasil
merupakan sumber yang berharga dari molekul bioaktif alami dan memiliki sifat yang menunjukkan
aplikasi dalam industri makanan dan farmasi. Kami menyarankan bahwa, in vivo
Alencar, SM, Oldoni, TLC, Castro, ML, Cabral, ISR, Costa-Neto, CM, Cury, J.
A., et al. (2007). Komposisi kimia dan aktivitas biologis dari jenis baru propolis Brasil: propolis Merah. Journal of
Ethnopharmacology, 113, 278-283 .
Appeldoorn, MM, Sanders, M., Vincken, J., Cheynier, V., Le Guernev, C., Hollman,
PCH, et al. (2009). Yang efisien isolasi utama procyanidin A-jenis dimer dari
312 TLC Oldoni et al. / Food Chemistry 192 (2016) 306-312
kulit kacang dan tipe B dimer dari biji anggur. Food Chemistry, 117,
713-720 .
Awad, AB, Chan, KC, Downie, AC, & Fink, CS (2000). Kacang tanah sebagai sumber
beta-sitosterol, sterol dengan sifat antikanker. Nutrisi dan Kanker, 36,
238-241 .
Balde, ES, Megalizzi, V., Traore, MS, Cos, P., Maes, L., Decaestecker, C., et al.
(2010). In vitro antiprotozoal, antimikroba dan aktivitas antitumor dari crassipes Pavetta ekstrak daun K. Schum. Journal
of Ethnopharmacology, 130, 529-535 .
Ballard, T., & Mallikarjunan, P. (2009). Mengoptimalkan ekstraksi fenolik
antioksidan dari kulit kacang tanah dengan menggunakan metodologi respon permukaan. Jurnal Pertanian dan
Pangan Kimia, 57, 3064-3072 .
Ballard, TS, Mallikarjunan, P., Zhou, K., & O'Keefe, S. (2010). Mikrowave
ekstraksi senyawa antioksidan fenolik dari kulit kacang tanah. Food Chemistry, 120, 1185-1192 .
Bargougui, A., Champy, P., Triki, S., Bories, C., Le Pape, P., & Loiseau, PM (2014).
Kegiatan antileishmanial dari Opuntia fi fraksi cus-indica. Biomedis & Nutrisi Pencegahan, 4, 101-104 .
Borneo, R., Len, AE, Aguirre, A., Ribotta, P., & Cantero, JJ (2009). antioksidan
Kapasitas tanaman obat dari Provinsi Crdoba (Argentina) dan mereka
in vitro pengujian dalam sistem model makanan. Food Chemistry, 112, 664-670 .
Campos, JJ, Azevedo, ADO, Filho, JDDS, Perez, AC, & Braga, FC (2013).
isolasi Bioguided dari myricetin-3-O- b- galactopyranoside dengan aktivitas antinociceptive dari bagian udara Davilla
elliptica St.-Hil. jurnal
Ethnopharmacology, 150, 270-274 .
Cerezo, AB, Cuevas, E., WINTERHALTER, P., Garcia-Parrilla, MC, & Troncoso, AM
(2010). Isolasi, identifikasi, dan aktivitas antioksidan senyawa antosianin di Camarosa stroberi. Food Chemistry,
123, 574-582 .
Ding, L.-J., ding, W., Zhang, Y.-Q., & Luo, J.-X. (2013). Bioguided fraksinasi dan
isolasi esculentoside P dari Phytolacca americana L .. Tanaman Industri dan Produk, 44, 534-541 .
Francisco, MLLD, & Resurreccin, AVA (2009a). Pengembangan reversed- sebuah
fase kromatografi cair kinerja tinggi (RP-HPLC) prosedur untuk penentuan simultan senyawa fenolik dalam
ekstrak kulit kacang.
Food Chemistry, 117, 356-363 .
Francisco, MLLD, & Resurreccin, AVA (2009b). Total fenolat dan
kapasitas antioksidan dari kulit kacang dipanaskan. Jurnal Komposisi Makanan dan Analisis, 22, 16-24 .
Freimund, S., Sauter, M., Kappeli, O., & Dutler, H. (2003). Sebuah non-merendahkan baru
Proses isolasi untuk 1,3- b- d-glucan kemurnian tinggi dari ragi roti
Saccharomyces cerevisiae. Karbohidrat Polimer, 54, 159-171 .
Kukic', J., Popovic', V., Petrovic', S., Mucaji, P., C'iric', A., Stojkovic', D., et al. (2008).
aktivitas antioksidan dan antimikroba Cynara cardunculus ekstrak. Food Chemistry, 107, 861-868 .
Lou, H., Yamazaki, Y., Sasaki, T., Uchida, M., Tanaka, H., & Oka, S. (1999). Sebuah tipe
proanthocyanidins dari kulit kacang tanah. Fitokimia, 51, 297-308 .
Lou, H., Yuan, H., Ma, B., Ren, D., Ji, M., & Oka, S. (2004). Polifenol dari kacang tanah
kulit dan mereka efek radikal-pemulungan bebas. Fitokimia, 65 ( 16), 2391-2399 .
Manach, C., Mazur, A., & Scalbert, A. (2005). Polifenol dan pencegahan
penyakit kardiovaskular. Opini saat ini di Lipidology, 16, 77-84 .
Moraes de Souza, RA, Oldoni, TLC, Regitano-d'Arce, MAB, & Alencar, SM
(2008). aktivitas antioksidan dan komposisi fenolik dari infus herbal yang dikonsumsi di Brazil. Ciencia Y
Tecnologia Alimentaria, 6, 41-47 .
Oldoni, TLC, Cabral, ISR, Regitano d'Arce, MABR, Rosalen, PL, Ikegaki, M,
Nascimento, AM, & Alencar, SM (2011). Isolasi dan analisis bioaktif avonoids iso fl dan chalcone dari jenis baru
propolis Brasil. Pemisahan dan Puri fi kasi Teknologi, 77, 208-213 .
Pearson, DA, Schmitz, HH, Lazarus, SA, & Keen, CL (2001). Penghambatan in vitro
low-density lipoprotein oksidasi oleh procyanidins oligomer hadir dalam coklat dan cocoas. Metode dalam enzim,
335, 350-360 .
Pizzolitto, RP, Dambolena, JS, Zunino, MP, Larrauri, M., Grosso, NR, Nepote, V.,
et al. (2013). Aktivitas senyawa alami dari kulit kacang di verticillioides Fusarium pertumbuhan dan fumonisin B1
produksi. Tanaman Industri dan Produk,
47, 286-290 .
Re, R., Pellegrini, N., Proteggente, A., Pannala, A., Yang, M., & Rice-Evans, C. (1999).
aktivitas antioksidan menerapkan perbaikan ABTS kation radikal dekolorisasi assay. Radikal Bebas Biologi &
Medicine, 26, 1231-1237 .
Sarnoski, PJ, Johnson, JV, Reed, KA, Tanko, JM, & O'Keefe, SF (2012).
Pemisahan dan karakterisasi proanthocyanidins dalam jenis Virginia kulit kacang dengan LC-MS n. Food
Chemistry, 131, 927-939 .
Sobolev, VS, & Cole, RJ (2004). Catatan atas pemanfaatan testa benih kacang tanah. jurnal
Ilmu Pangan dan Pertanian, 84, 105-111 .
Teke, GN, Kuiate, J.-R., Kuet, V., Teponno, RB, Tapondjou, LA, Tane, P., et al.
(2011). isolasi bio-dipandu agen antimikroba dan antioksidan potensial dari kulit batang Trilepisium
madagascariense. Afrika Journal selatan dari Botany, 77, 319-327 .
Tsujita, T., Shintani, T., & Sato, H. (2014). Pembuatan dan karakterisasi kacang
benih polifenol kulit. Food Chemistry, 151, 15-20 .
Williams, RJ, Spencer, JPE, & Rice-Evans, C. (2004). Serial ulasan: Flavonoid dan
iso avones fl (phytoestrogen): Penyerapan, metabolisme, dan bioaktivitas. Radikal Bebas Biologi & Medicine, 36, 838-849
.
Yu, J., Ahmedna, M., & Goktepe, I. (2005). Pengaruh metode pengolahan dan
pelarut ekstraksi konsentrasi dan aktivitas antioksidan fenolat kulit kacang. Food Chemistry, 90, 199-206 .
Yu, J., Ahmedna, M., & Goktepe, I. (2010). Potensi kacang ekstrak fenolik kulit
sebagai antioksidan dan agen antibakteri di dimasak dan mentah daging sapi.
International Journal of Food Science & Technology, 45, 1337-1344 .
Yu, J., Ahmedna, M., Goktepe, I., & Dai, J. (2006). Kacang procyanidins kulit:
Komposisi dan kegiatan antioksidan yang dipengaruhi oleh pengolahan. Jurnal Komposisi Makanan dan Analisis,
19, 364-371 .
Yuan, YV, Bone, DE, & Carrington, MF (2005). Aktivitas antioksidan dulse
( Palmaria palmata) ekstrak dievaluasi in vitro. Food Chemistry, 91, 485-494 .
Zhang, H., Liu, M., Han, S., & Wei, Y. (2013). Mengoptimalkan ekstraksi catechin
dari kacang kulit merah menggunakan metodologi respon permukaan dan aktivitas antioksidan. Ieri Procedia, 5, 312-320
.