TERJEMAHAN JURNAL

Eucalyptus globulus milik keluarga Myrtaceae yang merupakan penduduk asli Australia. Ini
diperkenalkan ke Aljazair pada tahun 1854 oleh Ramel (Boulekbache-Makhlouf et al., 2010), di mana
sekarang didistribusikan secara luas. Minyak atsiri dari E. globulus mengandung lebih dari 20 senyawa
dengan prevalensi 1,8-Cineole (Batish et al., 2008; Boukhatem et al., 2014; Goldbeck et al., 2014; Maciel
et al., 2010). Keterbatasan penggunaan antioksidan sintetik dan meningkatnya minat terhadap
antioksidan alami non-toksik telah melahirkan banyak penelitian tentang potensi antioksidan dari minyak
atsiri. Minyak atsiri tanaman adalah campuran berbagai komponen seperti monoterpen, sesqui-terpene,
alkohol, ester, aldehida dan keton, yang terlibat dalam pertahanan tanaman terhadap hama, herbivora,
jamur, dan bakteri (Batish et al., 2008). Selain itu, minyak atsiri dan tanaman aromatik dikenal karena
banyak digunakan dalam rasa dan aroma, sebagai pengawet, dan sebagai antimikroba (Bakkali et al.,
2008). Karena efek toksikologis dari produk sintetis, upaya baru diberikan sehubungan dengan
penggunaan minyak esensial sebagai antioksidan dan pengawet alami dalam pengolahan makanan,
produksi suplemen makanan dan industri farmasi (Wei dan Shibamoto, 2007).

Minyak esensial dari spesies Eucalyptus banyak digunakan di dunia, Otoritas Makanan dan Obat
Amerika Serikat menganggapnya aman dan tidak beracun, bahkan Dewan Eropa telah menyetujui
penggunaan minyak kayu putih sebagai bahan penyedap dalam makanan (Batish et al. ., 2008). Akibatnya,
minat yang meningkat telah diberikan untuk penggunaannya dalam bidang penelitian ilmiah dan industri
sebagai bahan tambahan makanan alami, obat-obatan dan kosmetik. (Goldbeck et al., 2014; Ishnava et
al., 2013). Beberapa penelitian menyelidiki potensi antioksidan dari minyak atsiri dari berbagai spesies
Eucalyptus seperti E. polyanthemos, E. perriniana, dan E. camaldulensis (Barra et al., 2010; Lee dan
Shibamoto, 2001; Singh et al., 2012). Singh et al. (2012) telah melaporkan aktivitas antioksidan yang kuat
dari pembusukan dan daun segar E. tereticornis terhadap radikal DPPH, OH • dan O2. Namun, Barraet al.
(2010) telah melaporkan aktivitas pembersihan DPPH moderat untuk minyak yang diekstraksi dari bagian
udara E. camaldulensis dan E. radiate. Daun kayu putih kaya akan sumber minyak atsiri, flavonoid atau
tanin, yang bertanggung jawab atas antibakteri, larvisidal, fumigan, aktivitas antioksidan dan sifat
antelmintik. Senyawa utama dari minyak esensial E. globulus adalah 1,8-cineole (eucalyptol),
aromadendrene, globulol, D-limonene dan pinene, kandungannya tergantung pada lingkungan, faktor
agronomi, bagian tanaman dan usia (Topiar et al., 2015 ; Armando et al., 1997).

Penyakit infeksi mulut utama (karies gigi dan penyakit periodontal) disebabkan oleh bakteri yang
menjajah permukaan mulut. Meskipun ada kemajuan mengenai pencegahan dan pengendaliannya, karies
gigi, yang merupakan hasil degradasi enamel oleh asam yang diproduksi oleh bakteri, masih dianggap
sebagai masalah kesehatan masyarakat di seluruh dunia yang mempengaruhi sebagian besar populasi
muda (Ishnava et al. , 2013). Bakteri penyebab utama karies gigi adalah streptokokus kelompok mutans,
seperti Streptococcus mutans dan Streptococcus sobrinus (Berezow dan Darveau, 2011; Selwitz et al.,
2007). Penyakit periodontal adalah gangguan peradangan yang menyebabkan kehilangan gigi. Mereka
disebabkan oleh bakteri anaerob Gram-negatif (Porphyromonas gingivalis, Fusobacterium nucleatum, dan
Aggregatibacter actinomycetemcomitans) yang menghancurkan jaringan periodontal dengan berinteraksi
dengan sel-sel imun mukosa (Allakerand Douglas, 2009; Madianos et al., 2005). Produk alami baru-baru
ini diselidiki sebagai agen yang menjanjikan untuk pencegahan penyakit mulut, dan produk herbal
semakin banyak digunakan sebagai alternatif dari obat-obatan kimia tradisional (Harzallah et al., 2011).

Beberapa penelitian telah melaporkan aktivitas antioksidan minyak atsiri dari daun E. globulus
(Mishra et al., 2010; Noumi et al., 2011) dan hanya satu pekerjaan yang telah dilakukan pada aktivitasnya
melawan S. mutans (Goldbeck et al., 2014). Untuk berkontribusi dalam evaluasi kegiatan biologis tanaman
E. globulus, penting untuk menguji antioksidan dan kapasitas antibakteri daunnya, dengan pandangan
aplikasi farmasi dan industri mereka. Makalah ini merupakan bagian dari studi tentang evaluasi komponen
volatil dari E. globulus yang dibudidayakan di Aljazair, sehingga komposisi dan penentuan dua aktivitas
biologis (antioksidan dan antibakteri) dari minyak atsiri daunnya adalah pokok bahasan ini. melaporkan.
Oleh karena itu, dalam pekerjaan ini metode GC / MS dikembangkan untuk mengkarakterisasi senyawa
yang mudah menguap dari ekstrak E. globulus daun terhidrodistilasi. Efek antioksidan mereka diuji dengan
mengurangi kapasitas, penghambatan peroksidasi lipid dan efek pemulungan pada DPPH • radikal bebas.
Mengenai aktivitas antibakteri mereka, itu ditentukan terhadap periodontopatogenik Gram-negatif dan
spesies bakteri kariogenik Gram positif.

Bahan tanaman dan bahan kimia

Sampel tanaman dikumpulkan dari arboretum Derguinah (36◦31 13,56 N, 5◦17 18,43 E), Bejaia, di
timur laut Aljazair, pada Februari 2013. Semua pelarut dan reagen memiliki tingkat analitik . Sampel
dibersihkan dan dikeringkan dalam oven pengeringan pada suhu 30 ◦C. Sampel 150 g daun yang
dihancurkan secara kasar menjadi sasaran ekstraksi dengan hidrodistilasi selama 3 jam / 500 mL air suling
menggunakan alat tipe Clevenger. Minyak yang diperoleh dipulihkan dan disimpan pada suhu 4 ◦C. Hasil
minyak dihitung sebagai rasio berat minyak terhadap berat daun.

Penentuan indeks bias

Indeks bias digunakan untuk mengkonfirmasi kemurnian minyak atsiri. Itu ditentukan seperti yang
dijelaskan sebelumnya oleh Boukhatem et al. (2014) dan dihitung menggunakan

Persamaan. (1) n = Kecepatan cahaya dalam ruang hampa Kecepatan cahaya dalam medium (1)

2.3. Penentuan gravitasi spesifik

Gravitasi spesifik minyak E. globulus ditentukan seperti yang dijelaskan sebelumnya dalam metode
standar AOAC (2000). Secara singkat, botol gravitasi ditimbang (W0), kemudian diisi dengan air dan
sumbat dimasukkan. Air botol itu dihapus dan ditimbang lagi (W1).

Proses yang sama diulangi dengan menggunakan sampel oli dan reweighted (W2). Berat jenis minyak
dihitung menggunakan Persamaan.

Di mana W0 = berat botol gravitasi kosong, W1 = berat air + botol gravitasi, W2 = berat minyak + botol
gravitasi.
2.4. Analisis minyak esensial

Analisis minyak esensial dilakukan dengan TRACE Ultra Gas Chromatograph digabungkan dengan ISQ Mass
Spectrometer (ThermoScientific, Austin, Texas, USA), yang terhubung ke komputer yang menjalankan
perangkat lunak Xcalibur 2.0 (ThermoScientific, Austin, Texas, USA). Kolom kapiler DB-5ms (60 mx 0,25
mm i.d., ketebalan film 0,25 m, Agilent J&W, Santa Clara, CA, USA) digunakan. Analisis dilakukan dengan
menggunakan helium (kemurnian> 99,99 vol.%) Sebagai gas pembawa pada 1,2 mL / menit dengan
program suhu berikut: 40 ◦C selama 2 menit, meningkat menjadi 250 ◦C pada 5 ◦C / min dan menjadi 300
◦C pada 30 ◦C / menit dan dipertahankan pada suhu ini selama 10 menit. Satu L sampel disuntikkan pada
suhu konstan 250 ◦C dengan rasio split 1:20 selama 1 menit. Massa dipindai antara 40 dan 650 uma.
Komponen penting diidentifikasi dengan membandingkan spektrum massa mereka dengan yang disimpan
diperpustakaanNIST/EPA/NIH.

2.5. Aktivitas antioksidan

Aktivitas antioksidan dari minyak esensial dari daun E. globulus diperkirakan oleh DPPH, mengurangi daya,
dan menghambat tes peroksidasi lipid. Uji DPPH diperkirakan seperti yang dijelaskan oleh Noumi et al.
(2011) metode. Konsentrasi sampel yang berbeda disiapkan dalam metanol murni, kemudian 1 mL
masing-masing ditambahkan ke 0,25 mL larutan metanol DPPH 0,2 mmol / L (v / v). Solusi yang diperoleh
diguncang dengan kuat dan dibiarkan pada suhu kamar selama 30 menit, dan absorbansi diukur pada 517
nm setelah 30 menit. Aktivitas pemulungan dihitung menggunakan Persamaan. (3) Aktivitas pembersihan
DPHH (%) = [(A0 - At) × 100] A0 (3) Di mana A0 adalah absorbansi kontrol setelah 30 menit, dan At adalah
absorbansi sampel setelah 30 menit. Hasil dinyatakan sebagai IC50 (mg / mL), sesuai dengan dosis yang
diperlukan untuk menyebabkan penghambatan 50%. Nilai IC50 yang lebih rendah sesuai dengan aktivitas
antioksidan yang lebih tinggi.

Pengurangan kapasitas minyak yang diuji dievaluasi dengan prosedur Singh et al. (2012). Satu mL
konsentrasi berbeda (10, 20, 30, 40 dan 50 mg / mL) dicampur dengan 1 mL buffer fosfat (0,2 M 'b / v', pH
6,6) dan 1 mL kalium ferricyanide [K3Fe (CN) 6], 1% 'b / v'. Solusi yang diperoleh diinkubasi pada 50 ◦C
selama 20 menit. Kemudian 1 mL asam Trikloroasetat (TCA) (10% 'berat / berat') ditambahkan ke larutan
yang kemudian disentrifugasi selama 10 menit pada 3000 × g. Supernatan diperoleh kembali dan
dicampur dengan 1,5 mL air suling dan 150 L FeCl3 (0,1% berat / berat). Absorbansi diukur pada 700 nm
dan Butylated hydroxyanisole (BHA) digunakan sebagai standar. Hasilnya dinyatakan sebagai IC50 (mg /
mL). Aktivitas peroksidasi lipid ditentukan dengan metode pemutihan - karoten (Tepe et al., 2006), yang
didasarkan pada penghambatan produk oksidasi asam linoleat (senyawa organik yang mudah menguap
dan konjugasi dienehydroperoxides). Emulsi asam karoten / linoleat dibuat dengan mencampur 25 L asam
linoleat, 200 mg Tween 40, 0,5 mg-karoten dan 1 mL kloroform. Setelah penguapan pelarut, di bawah
tekanan rendah pada 40 ◦C, 100 mL air suling ditambahkan. Ke 2,5 mL larutan yang diperoleh,
ditambahkan 350 L sampel (2 mg / mL), setelah dikocok, campuran diinkubasi selama 48 jam pada suhu
kamar. Dua kontrol disiapkan, satu dengan BHA standar (kontrol positif) dan yang lainnya tanpa BHA atau
ekstrak (kosong). Absorbansi pada 490 nm dari masing-masing sampel segera diukur pada 0 jam, 2 jam, 4
jam, 13 jam, dan 48 jam. Aktivitas antioksidan relatif dihitung menurut Persamaan.
Di mana At adalah absorbansi sampel setelah 48 jam, dan A0 adalah absorbansi minyak atsiri pada awal
inkubasi. Hasil dinyatakan sebagai IC50 (mg / mL).

2.6. Aktivitas antibakteri

Aktivitas antibakteri minyak atsiri dari daun E. globulus diuji terhadap 12 strain bakteri. Enam bakteri
periodontopatogen Gram-negatif (F. nucleatum ATCC 25586, A. actinomycetemcomitans ATCC 29522, P.
gingivalis ATCC 33277, ATCC 49417, HW24D1, dan W83) dan enam bakteri kariogenik Gram positif (S.
mutans ATCC 35668, ATCC 33535, ATCC 25175, S. sobrinus ATCC 33478, ATCC 27607, ATCC 27352).
Pertumbuhan bakteri dilakukan dalam kaldu Todd Hewitt (Sistem Mikrobiologi BBL, Cockeysville, MA,
USA) di hadapan 0,001% hemin dan 0,0001% vitamin K (THB-HK). Setelah 24 jam inkubasi pada 37 ◦C
dalam ruang anaerob (N2: H2: CO2; 75: 10: 15), nilai konsentrasi hambat minimum (MIC) ditentukan
dengan menggunakan metode mikrodilusi kaldu dalam 96-well microplate (Azelmat et al ., 2015). Bakteri
kultur 24 jam disiapkan dalam THB-HK segar untuk mendapatkan kepadatan optik 0,2 pada 660 nm.
Kemudian 100 L larutan bakteri dan pengenceran serial dari minyak esensial, dalam media kultur yang
mengandung 0,5% Tween 80, dicampur ke dalam sumur. Dua kontrol disiapkan (tanpa bakteri atau tanpa
minyak esensial), setelah itu lempengan-lempengan mikro diinkubasi dalam kondisi anaerob selama 24
jam pada suhu 37◦C

2.7. Analisis statistik

Semua tes dilakukan dalam rangkap tiga dan hasilnya dinyatakan sebagai rata-rata ± kesalahan standar.
Nilai IC50 dihitung menggunakan persamaan regresi linier yang diperoleh dari kurva, yaitu absorbansi = f
(konsentrasi ekstrak). XLSTAT Release 10 (Addinsoft, Paris, Prancis) digunakan untuk analisis varian
(ANOVA). Untuk membandingkan rata-rata setiap parameter, uji rentang ganda Tukey (HSD) digunakan.
Perbedaan dianggap signifikan pada P <0,05.

HASIL

3.1. Analisis parameter fisik

Dua parameter fisik ditentukan untuk menilai kualitas minyak daun E. globulus (indeks bias dan berat
jenis). Indeks bias adalah 1,4657 ± 0,0070, yang sebanding dengan yang sebelumnya dilaporkan dalam
literatur (1,4602-1,46933) (Boukhatem et al., 2014; Subramanian et al., 2012; Zrira et al., 2004). Padahal,
kerapatan relatif dari minyak atsiri yang diteliti adalah 0,9135 ± 0,0036. Hasil petani lebih dekat dengan
yang dilaporkan dalam karya sebelumnya tentang minyak esensial dari tanaman Aljazair E. globulus
(0,919) (Boukhatem et al., 2014) dan yang dilaporkan untuk spesies Eucalyptus Maroko (0,918-0,919)
(Zrira et al. ., 2004). Selain itu, nilai-nilai dari dua sifat fisik ini sesuai dengan standar AFNOR untuk rempah-
rempah E. globulus (1,4590-1,4670 untuk indeks bias, dan 0,906-0,923 untuk kerapatan relatif) (AFNOR,
2000).

2. Hasil ekstraksi minyak esensial

Minyak atsiri yang diekstrak dari daun E. globulus berwarna pucat, memiliki bau seperti kapur barus dan
bau yang menyenangkan, mirip dengan temuan Boukhatem et al. (2014) dan Iqbal et al. (2003). Hasil
ekstraksi minyak atsiri adalah 2,53 ± 0,1%, nilai ini jauh lebih tinggi daripada yang dilaporkan dalam
penelitian sebelumnya, mulai dari 0,77% hingga 1,29% (da Silva et al., 2006; Joshi, 2012; Selvakumar et
al., 2012 ). Selain itu, itu lebih tinggi daripada yang diperoleh dari spesies lain yang dianggap penting
secara ekonomi untuk produksi minyak atsiri, seperti E. uniflora dengan 0,4-1,1% (Melo et al., 2007),
Psidium guajava dengan 0,13-0,45% (Joseph dan Priya) , 2010; Nisha et al., 2011) dan Melaleuca
alternifolia dengan hasil 1-2% (Carson et al., 2006). Memang, tanaman E. globulus juga menghadirkan
potensi ekonomi, mengingat bahwa tiga hingga lima ribu ton minyak kayu putih diperdagangkan setiap
tahun di pasar internasional (Batish et al., 2008).

3.3. Analisis GC / MS untuk minyak atsiri

26 komponen telah diidentifikasi dalam minyak atsiri dari daun E. globulus, yang mewakili 98,82% dari
total komposisi. Mereka terutama terdiri dari monoterpen (85,09%); komposisi terperinci mereka
disajikan pada Tabel 1. Mereka sebagian besar terdiri dari monoterpen beroksigen dan seskuiterpen
(masing-masing 78,58% dan 13,39%), 1,8-Cineole (55,29%), Spathulenol (7,44%) dan - Terpineol (5,46%)
menjadi komponen utama (Tabel 1); jumlah yang sama dari senyawa dominan (1,8-Cineole) telah
dilaporkan dalam literatur (51,08 dan 53,7%) (Boukhatem et al., 2014; Elaissi et al., 2012). Isi ini pada
dasarnya tergantung pada faktor lingkungan, agronomi, umur dan geoklimatik dan juga pada teknik
ekstraksi yang digunakan dan kondisi ekstraksi eksperimental. Tabel 1 daftar senyawa yang berbeda yang
diidentifikasi dalam minyak esensial daun E. globulus yang diperoleh dengan hidrodistilasi (HD),
dibandingkan dengan yang dari Topiar et al. (2015) diperoleh dengan HD atau ekstraksi fluida superkritis
(SFE). Perbedaan dalam minyak esensial yang diekstraksi oleh HD dan SFE adalah pada konsentrasi
komponennya. Dalam penelitian ini kandungan senyawa utama (1,8-Cineole) lebih tinggi (55,29%)
daripada yang diperoleh oleh Topiar et al. (2015), masing-masing sekitar 36,68% dan 21,01% untuk HD
dan SFE. Oleh karena itu, ekstraksi HD adalah metode terbaik untuk mengekstraksi 1,8-Cineole dari daun
E. globulus. Selain 1,8Cineole, kandungan relatif sesquiterpen (S) dan sesquiterpenes (OS) teroksigenasi
dalam E. globulus meninggalkan minyak atsiri yang diekstraksi dengan teknik HD (penelitian saat ini dan
karya Topiar, 2015) dan SFE adalah 13,93, 8,75% dan 2,77%, masing-masing. Ini menunjukkan bahwa HD
tetap merupakan teknik yang lebih baik untuk memperoleh hasil seskuiterpen yang lebih tinggi dan
seskuiterpen teroksigenasi. Selain itu, HD yang digunakan dalam penelitian ini menghasilkan lebih banyak
senyawa (26 molekul) dibandingkan dengan jumlah senyawa (18 molekul) yang diperoleh oleh HD dan SFE
dari karya Topiar (2015).

3.4. Aktivitas antioksidan

Gambar. 1 menunjukkan hasil dari efek pemulungan pada radikal DPPH dari minyak esensial dari daun E.
globulus. Seperti yang dapat kita lihat, kapasitas pembersihan DPPH dari minyak yang diuji meningkat
dengan meningkatkan jumlah sampel, persentase penghambatan berkisar dari 11,72% hingga 60,63%
menurut konsentrasi yang diuji. Mishra et al. (2010) telah melaporkan persentase 79,55 ± 0,82 minyak
atsiri daun (konsentrasi 80% / v / v concentration) dari India E. globulus. Aktivitas minyak yang diuji (Tabel
2) lebih rendah (IC50 = 33,33 ± 055 mg / mL) dibandingkan dengan BHA standar (IC50 = 0,033 ± 0,002 mg
/ mL). Hasil ini berbeda dari nilai yang dilaporkan sebelumnya untuk minyak atsiri komersial daun Tunisia
E. globulus dengan IC50 57 g / mL (Noumi et al., 2011), dan dilaporkan untuk minyak atsiri yang dihidrolisa
dari India E. citriodora dengan IC50 425,4 ± 6,79 g / mL (Singh et al., 2012).
Mengenai aktivitas pengurangan daya, hasilnya ditunjukkan pada Gambar. 2, itu meningkat dengan
meningkatnya konsentrasi. Nilai IC50 digambarkan pada Tabel 2, nilai BHA standar (0,048 ± 0,015 mg /
mL) secara signifikan lebih rendah daripada minyak yang diuji (115,39 ± 1,45 mg / mL). Aktivitas ini lemah
dibandingkan dengan yang dilaporkan dalam literatur (48 g / mL) (Noumi et al., 2011), perbedaan ini dapat
dijelaskan oleh fakta bahwa para peneliti ini menggunakan minyak atsiri komersial daripada yang alami.
Di sisi lain, nilai IC50 dari 87,3 ± 9,27 g / mL telah dilaporkan untuk minyak esensial daun E. citriodora
(Singh et al., 2012), nilai ini menjadi kurang penting daripada yang ditemukan dalam penelitian kami.
Penghambatan aktivitas peroksidasi lipid diuji dengan uji pemutihan karoten (Gbr. 3), aktivitas minyak
ditemukan tergantung pada dosis.
Nilai IC50-nya (6,75 ± 0,39 mg / mL) secara signifikan (p <0,05) (Tabel 2) lebih tinggi dari BHA (0,455 ± 0,19
mg / mL). Nilai ini juga lebih tinggi dari minyak esensial komersial dari daun E. globulus (0,048 mg / mL)
(Noumi et al., 2011). Dibandingkan dengan efek pembersihan DPPH dan daya pereduksi, minyak atsiri
daun E. globulus lebih aktif pada penghambatan peroksidasi lipid, mungkin karena spesifisitas uji yang
tinggi untuk senyawa lypophilic. Perbedaan yang ditemukan antara hasil kami dan yang dilaporkan dalam
penelitian lain tentang aktivitas antioksidan minyak atsiri dari tanaman E. globulus, dapat disebabkan oleh
perbedaan mekanisme yang terlibat dalam pengujian yang diterapkan untuk mengevaluasi berbagai tes
dan metode ekstraksi. Rendahnya aktivitas minyak yang diuji juga dapat dijelaskan oleh banyaknya
senyawa yang tidak efektif. Memang, minyak yang diuji kaya akan senyawa monohydroxylated seperti
1,8-Cineole, yang tidak mampu mengkelat ion besi (AidiWannes et al., 2010). AidiWannes et al. (2010)
dan MDzami ˇ et al. (2013) telah melaporkan bahwa minyak atsiri dengan senyawa monoterpenik yang
lebih tinggi tidak efektif. Terpen seperti -pinene, -pinene, limonene, -myrcene, sabinene dan terpinolene
diketahui memiliki sifat antioksidan yang baik, namun, tergantung pada mekanisme yang terlibat dalam
aksi mereka, beberapa dari mereka dapat menunjukkan aktivitas antioksidan yang rendah (Martins et al.
al., 2014). Telah dilaporkan bahwa kemampuan pemutihan karoten dari hidrokarbon monoterpen
mungkin disebabkan oleh adanya gugus metilen dalam strukturnya (AidiWannes et al., 2010). Akibatnya,
hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa kapasitas antioksidan-karoten minyak dapat diturunkan oleh
kekayaannya pada senyawa monoterpene. Di sisi lain, sebuah penelitian baru-baru ini mengkonfirmasi
aktivitas antioksidan 1,8Cineole yang lemah. Rendahnya aktivitas minyak atsiri dari E. globulus juga dapat
dijelaskan oleh degradasi senyawa bioaktif selama ekstraksi mereka dengan hidrodistilasi. Memang,
hidrodistilasi dapat menyebabkan degradasi termal, hidrolisis, dan pelarutan senyawa bioaktif dalam air,
sehingga mengubah kapasitas antioksidannya. Selain itu, air yang digunakan dalam hidrodistilasi
membuat beberapa antioksidan tidak stabil atau menurunkannya dengan aksi enzimatik dalam bahan
tanaman basah. Bahkan, dalam hidrodistilasi, sampel biasanya diekstraksi dalam air mendidih dalam
jangka waktu yang lama, yang dapat menyebabkan dekomposisi termal senyawa target termolabil dari E.
globulus dan dengan demikian menurunkan aktivitas antioksidan dari ekstrak (Bagheri et al., 2014 ).
3.5. Aktivitas antibakteri

Zat antibakteri alami, termasuk minyak atsiri, dapat dimasukkan ke dalam obat kumur untuk
mengendalikan plak gigi. Lebih khusus lagi, ListerineTM yang telah banyak digunakan selama bertahun-
tahun, mengandung timol, eukaliptol, mentol dan metil salisilat (Allaker dan Douglas, 2009). Seperti yang
digambarkan dalam Tabel 3, bakteri Gram-negatif lebih sensitif terhadap minyak esensial E. globulus,
dengan MIC berkisar 0,28 hingga 9,13 mg / mL. P. gingivalis ATCC 33277 adalah yang paling rentan (MIC =
0,28 mg / mL) diikuti oleh F.nucleatum (MIC = 1,14 mg / mL). ; Goldbeck et al. (2014) telah melaporkan
MIC 0,013 mg / mL untuk S. mutans, yang jauh lebih rendah dari yang ditemukan dalam penelitian kami,
yaitu sekitar 11,4 mg / mL untuk semua strain S. mutans yang diuji. Perbedaan hasil kami dan hasil
Goldbeck et al. (2014) dapat dikaitkan dengan perbedaan komposisi minyak atsiri yang diuji. Memang,
dua minyak esensial ini menggambarkan perbedaan yang signifikan dalam konsentrasi 1,8-Cineole dan -
pinene mereka (masing-masing 55,29% vs 71,05% dan 8,30% vs 4,61%). Selain itu, kedua senyawa ini
diketahui oleh aktivitas antibakteri mereka (Chikhoune et al., 2013; Elaissi et al., 2012). Sensitivitas bakteri
P. gingivalis ATCC33277 (MIC = 0,28 mg / mL) terhadap minyak esensial E. globulus, mungkin disebabkan
oleh adanya senyawa monoterpen teroksigenasi (-Terpineol, MIC = 0,4 mg / mL) (Park et al., 2012). Minyak
atsiri sedikit lebih aktif melawan Gram-positif daripada mikroorganisme Gram-negatif, ini dapat dijelaskan
dengan adanya membran luar di sekitar dinding sel mereka, yang dapat membatasi difusi senyawa
hidrofobik melalui penutup lipopolysaccharide-nya. Namun, sensitivitas bakteri Grampositive terhadap
minyak esensial telah dilaporkan (Wilkinson et al., 2003). Minyak atsiri dari Mentha piperita telah
menunjukkan aktivitas yang lebih besar terhadap S. enteritidis daripada terhadap L. monocytogenes,
ketika ditambahkan ke makanan pembuka Yunani. Di sisi lain, tidak ada perbedaan yang terdeteksi antara
sensibilitas Gram positif dan Gram negatif setelah 24 jam. Tetapi, efek penghambatan lebih jelas dengan
Gram-negatif daripada dengan organisme Gram-positif setelah 48 jam (Burt, 2004).

4. Kesimpulan

Penelitian ini melaporkan efek antibakteri dari minyak esensial dari daun E. globulus terhadap spesies
bakteri periodontopatogenik. Minyak atsiri ini ditemukan lebih aktif melawan bakteri Gram-negatif,
dengan aktivitas antioksidan yang lemah. Identifikasi kimiawi dari molekul berbeda yang
mengkarakterisasi minyak esensial E. globulus membuktikan adanya monoterpen beroksigen yang dapat
bertindak sebagai agen antibakteri. Minyak atsiri dari daun E. globulus, yang merupakan senyawa
antibakteri yang signifikan, dengan demikian dapat memiliki aplikasi potensial untuk formulasi farmasi,
seperti pasta gigi dan obat kumur
Eksperimen SFE dilakukan dengan menggunakan 150 mL kolom ekstraksi (I.D. 30 mm) diisi dengan 40 g
bahan tanaman kering, digiling ditempatkan di antara lapisan wol kaca dan manik-manik kaca (I.D. 2 mm),
yang berfungsi sebagai distributor aliran pelarut. Ekstraktor direndam dalam jaket air yang dikontrol suhu.
Kompresor (NovaSwiss 560.0007) dengan unit pengatur tekanan (NovaSwiss 560.0009) digunakan untuk
menekan CO2 dan untuk mengontrol tekanan ekstraksi. Arah aliran pelarut melalui bahan tanaman adalah
dari atas ke bawah dan dipilih untuk mempercepat ekstraksi, karena fakta bahwa pada jumlah Reynolds
yang lebih rendah dan untuk kondisi di dekat titik kritis konveksi alami CO2 adalah dominan [23] . Laju
aliran diukur dengan meter gas laboratorium setelah ekspansi ke tekanan sekitar dalam katup mikrometer
yang dipanaskan dan disesuaikan menjadi 1,8 g / mnt. Ekstrak, dipisahkan dari gas CO2, dikumpulkan
dalam botol kaca yang didinginkan oleh campuran etanol dan es kering (–78 ° C), untuk mengurangi
keluarnya komponen volatil dengan CO2. Air yang terkondensasi dalam botol selama percobaan
dikeluarkan dengan selembar kertas penyaringan atau jarum suntik tergantung pada jumlah totalnya.
Botol dengan ekstrak ditimbang, disegel, dan disimpan dalam freezer sampai analisis GC. Tiga jenis set-up
eksperimental (ekstraksi sederhana, penggunaan pemisah tambahan dan adsorpsi pada silika gel)
digunakan untuk mempengaruhi konsentrasi komponen volatil dalam ekstrak. Ringkasan kondisi ekstraksi
dan pemisahan yang diterapkan tercantum dalam Tabel 1.

Pertama, kondisi ekstraksi, tekanan dan suhu, dioptimalkan dalam percobaan ekstraksi sederhana (1-4),
di mana ekstraktor terhubung langsung ke katup mikrometer. Kedua dalam percobaan 5 dan 6, larutan
yang mengalir keluar dari ekstraktor sebagian ditekan sebelum memasuki pemisah tambahan di mana
fraksi pertama dari ekstrak diendapkan. Ekstrak yang tersisa dengan senyawa yang lebih larut kemudian
benar-benar ditekan dan dikumpulkan dalam pemisah atmosfer kedua seperti yang ditulis di atas.
Akhirnya, dalam percobaan penyerapan, kolom tambahan (10 mm, 19,5 mL) dengan silika gel (6,5 g)
dihubungkan antara extractor dan katup mikrometer. Kondisi dalam ekstraktor dan dalam kolom dengan
silika gel adalah sama, 40 ° C dan 12 MPa. Senyawa yang melewati silika gel dikumpulkan sebagai fraksi
pertama (7/1). Ekstraktor kemudian dilewati dan fraksi kedua (7/2) diperoleh dengan desorpsi senyawa
yang terperangkap dengan CO2 murni pada 30 MPa dan 40 ° C. Akhirnya, untuk elusi senyawa yang
berikatan kuat sebagai fraksi ketiga (7/3), digunakan kondisi 40 ° C, 30 MPa dan CO2 yang dimodifikasi
dengan etanol (15% berat).