Revisi Laporan Tugas Akhir

LAPORAN TUGAS AKHIR
PENINGKATAN PRODUKSI BIOETANOL DARI TANDAN

KOSONG KELAPA SAWIT (TKKS) HASIL DELIGNIFIKASI DAN
PENAMBAHAN NUTRISI
Disusun Oleh:
Gupron 171010900028
Muhammad Aziz Fikri Ariandy 2016090007
Syarif Hidayatullah 2016090008
PROGRAM STUDI TEKNIK KIMIA

FAKULTAS TEKNIK
UNIVERSITAS PAMULANG
TANGERANG SELATAN
2023
PENINGKATAN PRODUKSI BIOETANOL DARI TANDAN
KOSONG KELAPA SAWIT (TKKS) HASIL DELIGNIFIKASI DAN
PENAMBAHAN NUTRISI
Merupakan syarat untuk

Memenuhi gelar Sarjana Teknik
Disusun Oleh:
Gupron 171010900028
Muhammad Aziz Fikri Ariandy 2016090007
Syarif Hidayatullah 2016090008
PROGRAM STUDI TEKNIK KIMIA

FAKULTAS TEKNIK
UNIVERSITAS PAMULANG
TANGERANG SELATAN
2023
KATA PENGANAR
Puji syukur kehadirat Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat dan karunia-
Nya sehingga kami dapat menyelesaikan laporanpen pengembangan pelitian ini.
Adapun tujuan dari laporan pengembangan penelitian ini adalah untuk melengkapi
persyaratan yang harus dipenuhi untuk memenuhi kurikulum Sarjana Strata-1 (S1) pada
program studi teknik kimia Universitas Pamulang.
Pada kesempatan kali ini penul isingin mengucapkan terima kasih kepada:
1. Yth. Bapak Untung Nugroho Harwanto, S.T., M.Sc., selaku Ketua Program
Studi Teknik Kimia Fakultas Teknik Universitas Pamulang
2. Yth. Bapak Dr. Eng. Joni Prasetyo, M.T. selaku koordinator penelitian serta
pembimbing akademik penelitian Program Studi Teknik Kimia Fakultas Teknik
Universitas Pamulang
3. Seluruh dosen teknik kimia beserta jajaran staf tata usaha Universitas Pamulang
4. Kedua orang tua penulis yang selalu memberikan dukungan baik moril maupun
materi
5. Seluruh teman, sahabat dan seluruh pihak yang telah membantu penulis dalam
menyelesaikan laporan ini.
Penulis menyadari bahwa pada laporan pengembangan penelitian ini masih
banyak kekurangan, oleh karena itu kritik dan saran sangat dibutuhkan untuk
penyempurnaan di masa yang akan datang dan pada akhirnya laporan ini dapat
memberikan manfaat untuk semua pihak.
Tangerang Selatan, Januari 2023

Hormat kami,
Penulis
ABSTRAK
Indonesia sebagai negara dengan keanekaragaman hayati terbesar di dunia,

memiliki potensi biomassa yang sangat melimpah. Sumber biomassa tersebar di
seluruh wilayah Indonesia, dan potensi terbesar terdapat di Pulau Kalimantan,
Sumatra, Papua, dan Sulawesi. Diantaranya hasil samping industri kelapa sawit
yaitu tandan kosong kelapa sawit (TKKS) mempunyai kandungan selulosa yang
cukup tinggi. Selulosa dalam TKKS dapat dimanfaatkan untuk membuat etanol
dengan menggunakan enzim selulase dan ragi Saccharomyces cescereviseae
melalui proses sakarifikasi dan fermentasi secara serentak (SSF). Proses SSF
dilakukan pada temperature 37ºC, dan putaran 120 Rpm. Variasi proses yang
dilakukan adalah konsentrasi enzim 60 FPU, 90 FPU, 120 FPU dan 150 FPU.
Sebelum proses SSF dilakukan perlakuan awal pada substrat TKKS yaitu dengan
delignifikasi untuk menyisihkan kandungan lignin agar menghasilkan konsentrasi
gula pereduksi yang tinggi. Dalam penelitian ini konsentrasi etanol yang tertinggi
yaitu 1,34 % dari % (b/v) substrat TKKS diperoleh dari konsentrasi enzim 90 FPU
serta penambahan nutrisi yeast extract 0,5 g dan peptone 1 g. Sedangkan
konsentrasi enzim dan penambahan nutrisi berpengaruh dalam kenaikan kadar
etanol seperti yang terdapat pada konsentrasi enzim 150 FPU serta penambahan
nutrisi yeast extract 0,5 g dan peptone 1 g yaitu 1,74%.
Katakunci: Bioetanol, Selulosa, Saccharomyces cereviseae, SSF, Fermentasi,

Tandan kosong kelapa sawit (TKKS)
i
DAFTAR ISI
LAPORAN PENGEMBANGAN PENELITIAN .................................................... i
LEMBAR PENGESAHAN ..................................................................................... i
KATA PENGANAR ................................................................................................ i
ABSTRAK ............................................................................................................... i
BAB I PENDAHULUAN ........................................................................................1
1.1 Latar Belakang ......................................................................................1
1.2 Rumusan Masalah .................................................................................2
1.3 Batasan Penelitian .................................................................................2
1.4 Tujuan Penelitian...................................................................................3
1.5 Manfaat Penelitian.................................................................................3
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ..............................................................................4
2.1 Tandan Kosong Kelapa Sawit (TKKS) ..................................................4
2.1.1 Selulosa ........................................................................................5
2.1.2 Hemiselulosa ................................................................................6
2.1.3 Lignin ...........................................................................................7
2.2 Etanol dan Bioetanol ..............................................................................8
2.2.1 Etanol ...........................................................................................8
2.2.2 Bioetanol ......................................................................................9
2.3 Gambaran Produksi Bioetanol Di Dunia ..............................................13
2.4 Bioetanol Sebagai Bahan Bakar Di Indonesia .....................................14
2.5 Analisa Komponen Kimia ....................................................................15
2.5.1. Delignifikasi / Perlakuan Awal .................................................16
2.5.2 Rotating Microwave / Gelombang Micro ..................................17
ii Universitas Pamulang
2.6 Teknologi Hidrolisis .............................................................................17
2.6.1 Hidrolisis Kimia .........................................................................18
2.6.2 Hidrolisis Secara Enzimatis .......................................................19
2.6.2.2 Enzim Hemiselulase .......................................................................21
2.7 Metode Fermentasi ...............................................................................22
2.8 Perbandingan Antara Metode SHF dan SSF ........................................22
2.8.1 Hidrolisis Dan Fermentasi Terpisah (Separate Hydrolysis And

Fermentation, SHF) ...................................................................22
2.8.2 Sakarifikasi Dan Fermentasi Serentak (Simultaneous

Saccharification And Fermentation/SSF) ..................................23
2.9 Penelitian Terdahulu (State of the art) .................................................24
BAB 3 METODE PENELITIAN ..........................................................................27
3.1 Waktu Dan Tempat Penelitian .............................................................27
3.2 Variabel Penelitian ...............................................................................27
3.2.1 Variabel Bebas ...........................................................................27
3.2.2 Variabel Terikat..........................................................................27
3.3 Alat dan Bahan .....................................................................................27
3.4 Tahap Penelitian ...................................................................................28
3.5 Proses Kerja..........................................................................................29
3.5.1 Persiapan Bahan Baku ................................................................29
3.5.2 Analisa Kadar Air.......................................................................29
3.5.3 Delignifikasi TKKS Menggunakan Microwave ........................29
3.5.4 Analisa TS (Total Solid) ............................................................30
3.5.5 Analisa Suhu dan ORP Meter ....................................................31
3.5.6 Analisa Kadar Gula Reduksi dalam Lignin................................31
3.5.7 Pembuatan Starter ......................................................................31
3.5.8 Pembuatan Larutan Nutrisi.........................................................31
iii Universitas Pamulang

3.5.9 SSF (Simultaneous Saccharification And Fermentation)...........32
3.5.10 Analisa Kadar Etanol ...............................................................32
3.6 Flowchart Penelitian .............................................................................33
3.6.1 Flowchart Pratreatment Bahan Baku (TKKS) ...........................33
3.6.2 Flowchart Proses Pembuatan Bioetanol .....................................33
3.7 Pengukuran Aktifitas Enzim ...............................................................34
BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................................35
4.1 Hasil dan Pembahasan .........................................................................35
4.2. Pretreatment Terhadap Tandan Kosong Kelapa Sawit .......................36
4.2.1 Total Disolve Solid (TDS) .........................................................37
4.2.2 Analisa Kadar Holocelulosa dan Lignin ....................................37
4.3.Produksi Bioetanol dari TKKS dengan Proses Simultaneous

Sacharification and Fermentation (SSF) ...................................................38
4.4. TKKS Delignifikasi Dengan Penambahan Nutrisi Dan Tanpa

Penambanhan Nutrisi Terhadap Produk Bioetanol ....................................38
4.4.1 Pengaruh Delignifikasi Terhadap Perolehan Bioetanol .............40
4.4.2 Pengaruh penambahan Nutrisi Terhadap Perolehan Bioetanol ..40
4.5. Konsentrasi Enzim Selulase Pada Produk Bioetanol ..........................41
4.5.1 Pengaruh Waktu Dan Konsentrasi Enzim Sellulase Terhadap

Perolehan Etanol ........................................................................42
BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN .................................................................43
5.1 Kesimpulan..........................................................................................43
5.2 Saran.................................................................................................... 43
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................44
iv Universitas Pamulang
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Tandan Kosong Kelapa Sawit (Gayang, 2013)...................................4

Gambar 2.2 Struktur Selulosa .................................................................................6
Gambar 2.3 Struktur Hemiselulosa.........................................................................6
Gambar 2.4 Struktur Molekul Lignin .....................................................................8
Gambar 2.5 Struktur Bioetanol .............................................................................10
Gambar 3.6.1 Flowchart Proses Pretreatment Bahan Baku (TKKS) ....................33

Gambar 3.6.2 Flowchart Proses Pembuatan Bioetanol ........................................33
Gambar 4.2.1 Perubahan Struktur dan Warna (TKKS) (a) Sebelum dan (b)
Sesudah Delignifikasi...................................................................36
Gambar 4.2.2 Pengaruh Delignifikasi ..................................................................36
Gambar 4.2.3 Hasil Analisa Kadar Holocelulosa dan Lignin ..............................37
Gambar 4.4 1 Peningkatan Produksi Etanol Dengan Penambahan Nutrisi ..........39

Gambar 4.4.2 Kadar Bioetanol Berdasarkan Konsentrasi Enzim Tanpa
Penambahan Nutrisi .....................................................................40
v Universitas Pamulang
DAFTAR TABEL
Tabel 2.1 Komposisi Tandan Kosong Kelapa Sawit (wt%) ....................................5

Tabel 2.2 Sifat Fisik Etanol ...................................................................................10
Tabel 2.2.1 Perbandingan Sifat Etanol Dan BBM .................................................11

Tabel 2.2.2 Perbandingan Sifat Etanol, BBM, dan E10 ........................................13
Tabel 2.2.3 Metode Analisa Kimia Pada Tahapan Proses Bioetanol Generasi Dua
..........................................................................................................16
Tabel 2.6.1 Kelebihan dan kekurangan pada Hidrolisis Asam Pekat dan Asam
Encer .................................................................................................19
Tabel 4.1 Nilai Normalisasi dan Data Hasil Pengukuran Kandungan TKKS .......35
vi Universitas Pamulang
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1 Foto-Foto Kegiatan Penelitian ..........................................................47

Lampiran 2 Alat-Alat Penunjang Penelitian .........................................................50
Lampiran 3 Tabel Data Pengamatan ....................................................................51
Lampiran 4 Grafik Hasil Pengamatan ..................................................................52
vii Universitas Pamulang

BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Indonesia sebagai penghasil kelapa sawit terbesar di dunia dengan luas

perkebunan kelapa sawit sebesar 14.456.611 ha dan produksi kelapa sawit
sebesar 47.120.247 ton pada tahun 2019 (Ditjenbun, 2020), tentunya limbah
sawit yang dihasilkan juga sangat besar. Pada proses pengolahan tandan
buah segar dihasilkan tandan kosong kelapa sawit (TKKS) sebanyak 23-
30% (Gendish, et al., 2016).
Cangkang buah sudah dimanfaatkan sebagai bahan bakar boiler di
pabrik pengolahan kelapa sawit, sedangkan TKKS masih belum optimal
pemanfaatannya. Selama ini TKKS hanya dimanfaatkan sebagai penimbun
tanah atau terkadang dijadikan pupuk kompos dan sisa TKKS dibiarkan
menumpuk. Apabila penumpukan dibiarkan maka TKKS dapat
menimbulkan permasalahan sampah (Muhammad, et al., 2022).
Biofuel merupakan salah satu energi baru terbarukan (EBT) yang
berasal dari pengolahan bimassa. Biofuel yang umum digunakan saat ini
adalah bioetanol. Sebagai alternatif pengganti bahan bakar fosil, bioetanol
telah diproduksi dalam jumlah cukup besar oleh berbagai negara yang
berkomitmen mengurangi ketergantungan terhadap bahan bakar fosil,
misalnya Amerika Serikat, Brasil, Kanada, China, dan beberapa negara Uni
Eropa. (LIPI, 2019). Selain digunakan sebagai pemenuhan kebutuhan
energi, bioetanol juga dapat dimanfaatkan sebagai bahan baku dalam
industri farmasi, kosmetika, dan berbagai turunan alkohol.
Di Indonesia, bioetanol umumnya menggunakan bahan baku pati,
singkong, atau bahan yang mengandung gula yang disebut bioetanol
generasi satu (G1). Sejak 2010, produksi bioetanol tidak lagi sesuai harapan.
Hal ini karena faktor bahan baku yang berkompetisi dengan bahan pangan
dan karena faktor harga yang kurang menarik. Sementara itu, biomassa
lignoselulosa tersedia cukup melimpah, dan biasanya berasal dari limbah
pertanian, perkebunan dan kehutanan, atau limbah industri. Komponen
1
2
utama dalam bahan berlignoselulosa terdiri atas selulosa,

hemiselulosa, dan lignin yang jumlahnya bervariasi tergantung sumber
bahannya. Baik selulosa maupun hemiselulosa dapat dikonversi menjadi
etanol, atau biasa disebut bioetanol generasi dua (G2) (LIPI, 2019).
Salah satu upaya untuk memproduksi bioethanol dengan waktu lebih
cepat, efisien dan peralatan murah adalah menggunakan teknologi proses
sakarifikasi fermentasi simultan (SFS). Teknologi ini melangsungkan proses
hidrolisis dan fermentasi secara serempak pada satu wadah (Bambang, et al.,
2014). Pada penelitian ini akan digunakan Saccharomyces cereviseae karena
memiliki daya konversi gula menjadi etanol dengan konsentrasi tinggi,
dapat hidup dalam keadaan aerobik maupun anaerobik, dan tumbuh dengan
baik pada suhu 30ºC, pH 4-5 (Bekti, et al., 2022).
Tujuan dari penelitian ini adalah melihat pengaruh volume enzim pada
proses hidrolisa enzimatik terhadap kadar etanol yang dihasilkan dan
pengaruh waktu fermentasi terhadap kadar etanol. Pemakaian bahan-bahan
lokal seperti TKKS, Saccharomyces cerevisiae, dan enzim selulosa yang
mudah didapatkan diharapkan mampu menekan biaya produksi etanol dalam
skala besar.
1.2 Rumusan Masalah
1. Delignifikasi dengan proses yang ramah lingkungan meminimalkan

bahan kimia dan suhu dan tekanan yang rendah.
2. Sakarifikasi pada selulosa dan hemisellulose setelah pretreatment dengan
NaOH lebih efektif dibandingkan tanpa NaOH.
3. Efesiensi waktu fermentasi lebih singkat sehingga mempercepat proses
produksi.
1.3 Batasan Penelitian
1. Bahan kimia yang murah NaOH teknis dan kosentrasi rendah.

2. Menggunakan microware untuk menghilangkan efektivitas deligfikasi.
3. Bahan limbah biomasa tanda kosong kelapa sawit yang sudah diproses
secara mekanik dengan ukuran mesh 40-50.
2
3
1.4 Tujuan Penelitian
Tujuan dilaksanakannya penelitian, yaitu:

1. Pengaruh delignifikasi TKKS terhadap perolehan kadar bioetanol.
2. Pengaruh kpnsentrasi enzim selulase terhadap perolehan kadar bioetanol.
3. Pengaruh waktu fermentasi terhadap perolehan kadar bioetanol.
1.5 Manfaat Penelitian
Adapun manfaat dilaksanakannya kegiatan penelitian ini:

1. Memudahkan pemanfaatan celulosa dan hemicelulosa sebagai bahan
baku untuk membuat produk yang mempunyai nilai ekonomi.
2. Bisa untuk mengembangkan bahan baku sumber energi alternatif ramah
lingkungan berbasis selulosa menjadi bioetanol.
3. Memiliki kesempatan memperdalam ilmu tentang pemanfaatan tandan
kosong kelapa sawit.
4. Dapat memberikan informasi tentang pemanfaatan tandan kosong kelapa
sawit menjadi bioetanol sebagai sumber energi terbarukan pengganti
bahan bakar konvensional.
BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Tandan Kosong Kelapa Sawit (TKKS)
Kelapa sawit (Elaeis) adalah tumbuhan industri penting penghasil

minyak masak, minyak industri, maupun bahan bakar (biodiesel).
Perkebunannya menghasilkan keuntungan besar sehingga banyak hutan dan
perkebunan lama dikonversi menjadi perkebunan kelapa sawit. Tandan
kosong kelapa sawit adalah salah satu produk sampingan berupa padatan dari
industri pengolahan kelapa sawit. Ketersediaan tandan kosong kelapa sawit
cukup signifikan bila ditinjau berdasarkan rata-rata jumlah produksi tandan
kosong kelapa sawit terhadap total jumlah tandan buah segar yang diproses.
Kelapa sawit sudah terbesar di 22 propinsi di Indonesia, pada tahun 2010
luas kebun sawit sekitar 8,4 juta ha dan meningkat hingga 9,5 juta ha pada
tahun 2012. Indonesia juga merupakan penghasilan kelapa sawit terbesar di
dunia dengan produksi minyak sawit sebesar 27,7 juta ton pada tahun 2013
Untuk periode 2010-2020 diperkirakan pertumbuhan pruduksinya minyak
sawit berkisar 2-4%. Peningkatan area perkebunan kelapa sawit dan tingginya
produksinya minyak sawit di Indonesia ini menyebabkan produksi limbah
kelapa sawit pun akan turut meningkat. Pada awal tahun kelapa sawit akan
menghasilkan sekitar 20-22 tandan buah pertahun dan semakin tua
produktivitasnya akan menurun menjadi 12-14 tandan pertahun. Tandan buah
segar mengadung 25-34% tandan kosong kelapa sawit memiliki tiga
komponen utama yaitu selulosa, Hemiselulosa dan lignin (Gayang, 2013).
Gambar 2.1 Tandan Kosong Kelapa Sawit (Gayang, 2013)
4
5
Menurut Abdullah, 2011 komposisi tandan kosong kelapa sawit dapat

dilihat dari tabel 2.1 berikut:
Tabel 2.1 Komposisi Tandan Kosong Kelapa Sawit (wt%)
Komponen Persentase
Selulosa 59,7
Hemiselulosa 22,1
Lignin 18,1
Karbon 48,9
Hidrogen 6,3
Nitrogen 0,7
Sulfur 0,2
Oksigen 36,7
K 2,24
K2O 3,08-3,65
Tandan kosong kelapa sawit merupakan limbah utama dari

pengolahan kelapa sawit yang belum termanfaatkan secara optimal dan
banyak mengadung selulosa sehingga tandan kosong kelapa sawit sangat
berpotensi untuk digunakan sebagai bahan baku perbuatan biotanol.
2.1.1 Selulosa
Selulosa adalah polimer tak bercabang dari glukosa yang

dihubungkan melalui ikatan beta 1,4 atau 1,4 beta glukosadase. Molekul
lurus dengan unit glukosa rata- rata sebanyak 5000 ini beragregasi
membnbentuk fibril yang terikat melalui ikatan hidrogen di antara
gugus. Hindroksi pada rantai di sebelahya. Serat selulosa yang
mempunyai kekuatan fisik yang tinggi terbentuk dari febril-febril ini,
tergulung seperti spiral dengan arah-arah yang berlawan menurut satu
sumbu. Seluloosa merupakan jenis polissakarida yang paling melimpah
pada hampir setiap struktur tanaman. Kandungan selulosa kayu berkisar
48-50%, Pada bagas berkisar antara 50-55% dan pada tanda kosong
kelapa sawit sekitar 45%. Selulosa dapat dihidrolisis dengan asam kuat
6
maupun dengan enzim selulosa. Selulosa adalah salah satu komponen

utama dari ligniselulosa yang terdiri dari unit monomer D-glukosa yang
terikat pada ikatan 1,4-glukosa. Selulosa cenderung membentuk
mikrofibril melelui ikatan inter dan antara molekul sehingga memberi
struktur yang unit. Mikrofilbil selulosa terdiri dari 2 tipe, yaitu kristalin
dan amorf.
Adapun struktur selulosa dapat dilihat dibawah ini:
Gambar 2.2 Struktur Selulosa
2.1.2 Hemiselulosa
Hemisolulosa merupakan polisakarida dengan bobot melekul lebih

kecil dibandingkan selulosa. Molekul hemiselulosa lebeh mudah
menyerap air, bersifat plastis, dan mempunyai permukaan kontak antara
molekul lebeih luas dibandingkan dengan. Ikatan didalam rantai
himiselulosa bantak bercabang karena gugus β- glukosida didalam
melokul yang satu berkaitan dengan gugus hindrolis C2 C3 dan C4 dari
molekul yang lain. Hemiselulosa berbentuk amorf, mempunyai derajat
polimerisasi lebih rendah dan muda larut didalam alkali tetapi struktur
larut dalam asam, sedangkan selulosa sebaliknya. Struktur hemiselulosa
dapat dilihat pada gambar dibawah ini:
Gambar 2.3 Struktur Hemiselulosa
7
2.1.3 Lignin
Lignin adalah polimer aromatik kompleks yang terbentuk melalui

polimerisasi tiga dimensi dari sinamil alkohol dengan bobot melekul
11.000. Lignin terbentuk dari fenil propana, unit- unit fenil propanan
terikat satu dengan lainya dengan ikatan ester (C-0-C) maupun ikatan
karbon -karbon. Lignin dapat membentuk ikatan kovalen dengan
beberapa komponen hemisolulosa. Oleh karena itu lignin sangat
keberadaana memberikan bentuk lignoselulosa yang kompleks dan
menghambat degradasi selulosa oleh mikroba ataupun bahan kimia
lainya. Proses dan proses delignifikasi terdiri dari mekanis, semia kimia
(alkali, sulfat, kraft, sulfit) dan proses konvesional yang lebih
berwawasan ligkungan pada kenyataanya, proses delignifikasi secara
konvensional tersebut memiliki beberapa kelemahan, yaitu biaya
produksi tinggi, laju delignifikasi rendah dan pencemaran lingkungan
karena adanya limbah larutan pemasak. Lignin umumnya tidak larut
dalam pelarut sederhana, namun lignin larut dalam alkali encer, larutan
garam dan lignin buffer. Lignin larut dalam pelarut organik didasarkan
pada perbedaan kelarutan komponen kimia pada perbedaan kelarutan
komponen kimia bahan baku, dimana lignin dan ekstrakti larut dalam
organik, karbohidrat dengan bobot melekul rendah dapat larut dalam air
sedangkan selulosa tidak larut dalam kedua larutan tesebut. Cairan ionik
adalah garam yang berwujud cair pada suhu kamar atau bawah kamar,
terdiri dari kation organik dan anion arganik atau organik. Delignifikasi
menggunakan cairan ionik choline choride (CHCl) disebabkan oleh
interaksi pengikatan grup hindosil pada lignin, sehingga ikatan lignin
terputus dan menyebabkan kadar selulosa meningkat. Lignin bersifat
hidrofobik dan melindungi selulosa sehingga strukturnya bersifat kaku
(rigrid). Lignin dapat dioksidasi oleh larutan alkali dan oksidator lain,
pada suhu tinggi lignin dapat mengalami perubahan menjadi asam
formt, metanol, asam, aseton dan vanillin.
Rumus struktur molekul lignin dapat dilihat di bawah ini:
8
Gambar 2.4 Struktur Molekul Lignin
2.2 Etanol dan Bioetanol
2.2.1 Etanol
Etanol merupakan senyawa kimia yang banyak fungsinya dalam

kehidupan sehari-hari, misalnya dipakai sebagai pelarut dalam industri
farmasi, makanan, dan minuman. Etanol dapat dihasilkan melalui
proses kimiawi atau biologi. Etanol yang dibuat melalui proses
fermentasi disebut bioetanol. Sampai saat ini, bioetanol banyak
diproduksi dari bahan baku tanaman yang mengandung pati atau yang
mengandung gula, tetapi penggunaan bahan baku ini menimbulkan
persaingan antara pemanfaatan komoditas ini untuk pangan dan untuk
sumber energi. Jika sebagai sumber energi, komoditas tersebut harus
melalui proses konversi (secara fisika, kimia, atau biologi) menjadi
etanol, yang selanjutnya digunakan sebagai substitusi bahan bakar
bensin. Biomassa lignoselulosa yang berasal dari tanaman
ketersediaannya cukup melimpah, terutama sebagai limbah pertanian,
perkebunan dan kehutanan sehingga dapat dikonversi menjadi sumber
energi melalui proses konversi.
Namun, konversi biomassa lignoselulosa menjadi bioetanol ini
harus berhadapan dengan kendala teknis dan ekonomi. Oleh karena itu,
perlu dilakukan banyak riset dan pengembangan agar dapat
menghasilkan teknologi konversi biomassa yang efisien dan ekonomis.
Pada dekade terakhir ini, pendekatan yang banyak digunakan adalah
pengembangan industri bioetanol sistem terpadu. Selain menghasilkan
bioetanol, sistem ini juga mempertimbangkan pemanfaatan potensi
9
limbah proses (limbah pengolahan awal dan limbah fermentasi),

menjadi produk turunan (co-product), misalnya bahan kimia adi, lignin,
protein sel tunggal, pangan, pakan, dan pupuk organik. Sistem terpadu
ini perlu mendapat perhatian karena limbah yang dihasilkan jumlahnya
besar dan akan mencemari lingkungan jika dibiarkan saja. Pemanfaatan
limbah (sisa proses) membuat kegiatan industri secara keseluruhan
menjadi lebih menguntungkan dari sisi lingkungan dan sisi ekonomi
karena mengurangi potensi pencemaran dan memperbesar nilai tambah
(added value) produk yang dihasilkan.
2.2.2 Bioetanol
Bioetanol telah digunakan manusia sejak zaman prasejarah sebagai

bahan minuman beralkohol. Dalam perkembangannya, campuran
bioetanol yang mendekati kemurnian ditemukan oleh kimiawan muslim
yang mengembangkan proses distilasi pada masa Kalifah Abbasid,
dengan peneliti terkenal Jabir Ibnu Hayyan (Geber), Al- Kindi
(Alkindus), dan al-Razi (Rhazes) ("Science in Islam," 2002). Etanol
sebagai bahan bakar diketahui melalui catatan Jabir Ibnu Hayyan (721–
815 M) yang menyebutkan bahwa uap wine yang mendidih itu mudah
terbakar. Sementara itu, Al-Kindi (801–873 M) menjelaskan proses
distilasi wine (Forbes, 1971). Bioetanol absolut baru didapatkan pada
1796 oleh Johann Tobias Lowitz yang menggunakan distilasi saringan
arang (Gupta, 2010). Bioetanol pertama kali dibuat secara sintetis pada
1829 di Inggris oleh Henry Hennel dan S.G. Serullas di Prancis
(Demirbas, 2009). Pada 1828, Michael Faraday membuat etanol dengan
hidrasi etilen menggunakan katalis asam. Proses inilah yang kemudian
digunakan dalam produksi etanol sintetis hingga saat ini (Gupta, 2010).
Antoine Lavoisier menggambarkan etanol sebagai senyawa yang
terbentuk dari karbon, hidrogen, dan oksigen. Pada 1808, Nicolas-
Théodore de Saussure menentukan rumus kimia etanol, yakni
C2H5OH. Lima puluh tahun kemudian atau pada 1858, Archibald Scott
Couper menerbitkan rumus bangun etanol (Lewis, 2002) seperti pada
Gambar 2.5. Etanol sering disingkat menjadi EtOH. “Et” adalah
singkatan dari gugus etil (C2H5) dan hidroksil (-OH). Rumus molekul
10
etanol adalah C2 H5 OH, rumus empirisnya C2 H6O, dan rumus

bangunnya CH3-CH2-OH. Etanol tidak berwarna dan tidak beracun,
tetapi memiliki bau yang khas. Dalam sejarahnya, etanol telah lama
digunakan sebagai bahan bakar motor. Berikut ini merupakan Struktur
Bioetanol dan tabel sifat fisik dari etanol berdasarkan SNI 06-3565-
1994:
Gambar 2.5 Struktur Bioetanol
Tabel 2.2 Sifat Fisik Etanol
Parameter Etanol
Rumus kimia C2H5OH
Berat molekul 46
Densitas (g/mL) 0,7851
Titik didih (0C) 78,4
Titik nyala (0C) 13
Titik beku (0C) -112,4
Indeks bias 1,3633
Panas evaporasi (cal/g) 204
Viskositas pada (200C) poise 0,0122
Sumber: Badan Standarisasi Nasional
Tabel 2.1 merupakan tabel parameter kualitas bioetanol berdasarkan
Standar Nasional Indonesia (SNI)
Penggunaan bioetanol sebagai bahan bakar kendaraan bermotor

telah lama dikenal. Pada 1880-an Henry Ford membuat mobil
Quadricycle dan sejak 1908 mobil Ford model T telah dapat meng-
gunakan bioetanol dari jagung sebagai bahan bakarnya (Ethanol history
from alcohol to car fuel, t.t.). Namun, pada 1920-an, bahan bakar dari
petroleum yang harganya lebih murah menjadi lebih populer dan
11
banyak digunakan sehingga etanol kurang mendapatkan perhatian.

Sejak timbul kesadaran bahwa pasokan bahan bakar minyak semakin
menyusut, penggunaan bioetanol sebagai bahan bakar kembali menjadi
perhatian berbagai negara. Hal ini karena bahan baku bioetanol dalam
berbagai bentuk memang telah tersedia di negara-negara tersebut.
Upaya pemanfaatan bahan bakar terbarukan, termasuk bioetanol,
berkembang pesat setelah krisis minyak dunia pada awal 1970-an
(Bringezu dkk., 2009). Etanol sebagai bahan bakar alternatif pengganti
bahan bakar minyak (BBM) menarik perhatian masyarakat dunia karena
kadar emisi timbal, sulfur, karbon monoksida (CO) yang rendah pada
etanol tidak berkontribusi pada akumulasi karbondioksida di atmosfer
dan bersifat terbarukan (Costello & Chum, 1998). Liska dkk. (2008)
menyatakan bahwa pemanfaatan bioetanol generasi satu dapat
mengurangi 30–70% emisi CO2, sedangkan penggunaan bioetanol
generasi kedua dapat mengurangi 90% emisi CO2 dibandingkan dengan
BBM setara oktan 90. Namun, etanol sebagai bahan bakar pengganti
BBM memiliki kelemahan, yakni nilai kalor bakar etanol (21,1 MJ/L)
lebih rendah daripada BBM setara oktan 90 (30–33 MJ/L) (Sementa,
Vaglieco, & Catapano, 2012). Selain itu, etanol absolut bersifat
higroskopis sehingga bila digunakan dalam jumlah banyak sebagai
campuran BBM dapat mendorong terjadinya korosi dalam mesin.
Tabel 2.2.1 Perbandingan Sifat Etanol Dan BBM
No Sifat Etanol Gasolin (*)

1 Berat molekul 46,07 100–105
2 C, Karbon (% berat) 52,2 85–88
3 H, Hidrogen(% berat) 13,1 12–15
4 O, Oksigen(% berat) 34,7 2,7
o
5 Densitas (15 C), (kg/L) 0,79 0,72–0,77
o
6 Titik didih ( C) 78 27–225 (**)
7 Tekanan uap (38oC), kPa 15,9 48–103
8 Viskositas (20oC), (mPa s) 1,19 0,37–0,44
o
9 Auto ignition temperatur ( C) 423 257
10 Angka oktan 112,5–114 85–94(***)
Keteranga:
(*) : setara Pertamina (Oktan 90)
(**) : karena multi komponen, tergantung komponen
(***) : tergantung jenis BBM
Sumber : Sementa dkk. (2012) dan Szulczyk (2010)
12
Etanol sebagai campuran BBM di berbagai negara kisarannya

bervariasi, dari di bawah 5 sampai 85% etanol (Bailey, 2012). Pen-
campuran bioetanol absolut sebanyak 10% dengan bensin (90%) disebut
E10 yang juga dikenal sebagai octane enhancer (aditif) yang ramah
lingkungan (Bajpai, 2013). Penggunaan E10 di negara- negara maju
bahkan telah menggeser penggunaan Tetra Ethyl Lead (TEL) maupun
Methyl Tertiary Buthyl Ether (MTBE) (Bustaman, 2008). Pada
umumnya, penggunaan bioetanol sebagai campuran BBM di berbagai
negara tergantung pada kemampuan negara tersebut menghasilkan etanol
dan infrastruktur yang tersedia.
Sampai 2016, pengujian bioetanol masih menjadi perhatian para
peneliti. Fokus perhatian mereka pada pengujian sifat bakar bioetanol
dan dampaknya pada mesin, terutama bila bioetanol dicampur dengan
BBM berbagai kualitas. Dari pengujian ini, diketahui bahwa
pencampuran bioetanol dengan BBM sampai pada komposisi 15%
etanol (E15) tidak memerlukan perubahan pada mesin meskipun energi
yang dihasilkan sedikit berbeda. Sementara itu, campuran dengan
komposisi bioetanol di atas 15% memerlukan perubahan mesin atau
menggunakan mesin tertentu (Balki, Sayin, & Canakci, 2014; Catapano,
Sementa, & Vaglieco, 2013; Sementa dkk., 2012; Turner, Xu,
Cracknell, Natarajan, & Chen, 2011). Hingga 2015, banyak pabrik
mobil mengembangkan mobil yang dapat beroperasi dengan campuran
BBM kadar etanol yang tinggi, yakni BBM 15% dan etanol 85% atau
disebut E85. Mobil yang dapat berjalan dengan bahan bakar E85 dan
menggunakan mesin yang dapat memakai berbagai grade bahan bakar
yang disebut flexible fuel vehicles (FFV). Selain Ford yang menjadi
perintis penggunaan bioetanol sebagai bahan bakar kendaraan, terdapat
lebih dari 20 produsen kendaraan dari berbagai negara yang telah
menyetujui penggunaan campuran E15, baik hanya untuk jenis tertentu
maupun semua jenis kendaraan yang diproduksinya. Tabel 2.2
memperlihatkan produsen yang telah mengizinkan dan belum
menggunakan E15 (RFA, 2016).
13
Tabel 2.2.2 Perbandingan Sifat Etanol, BBM, dan E10
Sifat Etanol BBM E10

Berat Jenis (kg/m3) pada 20oC 789 790 790
Research Octane Number (RON) 108 95,2 98,9
Panas pembakaran (MJ/kg) 27 44 41,8
C (% berat) 52,20 86,60 83,16
H (% berat) 13,10 13,30 13,28
O (% berat) 34,70 0,03 3,50
Sumber: Pikunas, Pulkaskas, dan Grabys (2003)
Meskipun sudah banyak industri mobil yang siap menggunakan
E15, sampai saat ini E10 merupakan campuran yang paling banyak
dipakai di berbagai negara. Hal ini karena campuran E10 tidak
memerlukan perubahan mesin kendaraan bermotor yang ada saat ini.
Selain itu, campuran E10 memiliki angka oktan 95 yang lebih baik
daripada BBM dan tidak bertimbal. Sifat-Sifat pembakaran E10, yang
merupakan campuran 10% etanol dengan BBM berangka oktan tinggi
(Tabel 2.3) memperlihatkan bahwa penggunaan E10 meningkatkan
tenaga mesin dan mengurangi gas buang CO2 secara signifikan
(Pikunas dkk., 2003).
2.3 Gambaran Produksi Bioetanol Di Dunia
Seiring dengan meningkatnya kebutuhan, produksi bioetanol sebagai

bahan bakar pada 2012–2017 berkembang signifikan. Amerika Serikat (AS),
Brasil, dan China merupakan tiga negara produsen sekaligus pengguna utama
bioetanol dunia (Tabel 2.4). Bahan baku bioetanol di negara-negara tersebut
masih bergantung pada dua bahan pangan penting, yaitu jagung (di AS dan
China, dan tebu (di Brasil). Pada periode 2012–2016, produksi bioetanol dunia
meningkat 4,6% per tahun. AS dan Brasil menjadi produsen utama yang
masing-masing menghasilkan sekitar 57,5% dan 27,5% produksi bioetanol
dunia pada 2015. Artinya, kedua negara tersebut menghasilkan 85% dari total
produksi bioetanol dunia. Pada 2015, produksi bioetanol dunia sebesar 25,68
miliar galon (atau 98,6 juta kiloliter) meningkat dari produksi tahun 2014
sebesar 4,52%.
14
2.4 Bioetanol Sebagai Bahan Bakar Di Indonesia
Di Indonesia, program pemanfaatan bioetanol sebagai bahan bakar

kendaraan bermotor dilakukan untuk mendorong substitusi BBM,
mengurangi impor BBM, dan mengurangi polusi udara sebenarnya telah
dikaji sejak 1980. Namun, rendahnya harga BBM dan meningkatnya
harga bahan baku etanol generasi satu saat itu menyebabkan program
pemanfaatan campuran etanol untuk bahan bakar kendaraan bermotor di
Indonesia mengalami banyak hambatan. Dalam perkembangannya, kondisi
tersebut berubah seiring dengan diha- pusnya subsidi BBM secara bertahap
dan meningkatnya kesadaran akan terbatasnya cadangan minyak
Indonesia. Selain itu, komitmen dunia akan bahaya pemanasan global pun
semakin meningkat. Bioetanol diyakini berpotensi besar untuk menjadi
bahan bakar pengganti BBM. Rencana jangka panjang pemanfaatan
bioetanol sebagai bahan bakar di Indonesia tertuang dalam Rencana
Bauran Energi 2025 dan Instruksi Presiden untuk Pemanfaatan Bahan
Bakar Nabati (BBN) (PerPres No. 5/2006). Berdasarkan agenda riset
nasional, target penelitian dan pengembangan bioetanol tahun 2025 adalah
dikuasainya teknologi proses, engineering design (de-sain teknik) dan
pembangunan pabrik high/superior-performance bioethanol (bioetanol
dengan konsentrasi tinggi), produksi bahan bakar bioetanol dengan bahan
baku lignoselulosa dari hasil samping tanaman, dan produksi bahan bakar
etanol secara tepat guna pada skala kecil dan menengah.
Pada 2006–2009, pengujian bioetanol untuk bahan bakar kendaraan

bermotor pernah dilakukan. Campuran yang digunakan sebagai bahan
bakar dalam pengujian tersebut adalah campuran 95% BBM dengan 5%
etanol atau disebut E5 (PT Pertamina, 2011). Namun karena tidak
cukupnya suplai etanol anhydrous, Pertamina tidak dapat melakukan
pendistribusian biopremium ini. Dalam perkembangannya, pencampuran
bioetanol dengan BBM yang menggunakan komposisi E5 bahkan terhenti
sejak 2010.
Pada periode 2010–2017, penggunaan bioetanol di dalam negeri

sangat kecil, dan produk bioetanol dari Indonesia lebih banyak untuk
kebutuhan ekspor. Hal ini juga karena harga bioetanol di negara tujuan
ekspor jauh lebih tinggi daripada di dalam negeri (Ulum, 2014). Pada
15
2017, pemerintah berencana menggunakan kembali bioetanol sebagai

campuran BBM mulai Januari 2018 (Purwanto, 2017).
Mengingat dorongan dan tantangan tersebut, sudah selayaknya

penelitian pengembangan sumber energi alternatif bioetanol untuk sektor
transportasi di Indonesia dikembangkan lagi. Namun, pengembangan ini
juga harus memperhitungkan kekurangan dan keberhasilan penelitian
terdahulu.
2.5 Analisa Komponen Kimia
Analisis kimia dari biomassa lignoselulosa dapat dilakukan dengan

beberapa metode seperti pada Tabel 2.2.3. Analisis ini dapat dilakukan pada
setiap tahapan proses bioetanol generasi dua. Dengan adanya analisis ini,
komposisi penyusun biomassa lignoselulosa yang akan dijadikan bahan baku
bioetanol generasi dua dan kualitas bioetanol yang dihasilkan dapat diketahui.
Pada biomassa lignoselulosa, pengukuran kadar selulosa, hemiselulosa,
dan lignin dapat dilakukan, baik dengan metode SNI maupun metode NREL.
Pengukuran kadar lignin dan selulosa, baik dengan metode SNI maupun
metode NREL, menghasilkan nilai yang relatif sama. Namun, nilai
hemiselulosa akan menjadi lebih akurat jika menggunakan metode NREL
(Styarini, Risanto, Aristiawan, & Sudiyani, 2012).
Analisis kimia yang perlu dilakukan dalam proses produksi bioetanol,
yaitu analisis gula hasil sakarifikasi dan analisis etanol hasil fermentasi,
distilasi, dan dehidrasi. Penentuan kadar gula pereduksi dapat dilakukan
dengan Metode Nelson-Somogyi (Somogyi, 1951), Metode DNS (asam
dinitro salisilat/3,5-dinitro- salicylic acid) (Miller, 1959), dan metode NREL.
Metode Nelson Somogyi dan Metode DNS hanya dapat mengukur gula
pereduksi saja. Namun, metode ini masih banyak digunakan karena tidak
memerlukan instrumen yang cukup rumit. Metode NREL dapat mengukur
kandungan gula monomer (seperti glukosa dan silosa) karena menggunakan
instrumen high-performance liquid chroma- tography (HPLC).
16
Tabel 2.2.3 Metode Analisa Kimia Pada Tahapan Proses Bioetanol Generasi Dua
No. Proses Analisis Metode Referensi

1 Perlakuan Lignin, Selulosa, Klason lignin SNI 0492:2008
awal Hemiselulosa kadar selulosa SNI 0444:2009
alfa, gama dan SNI 01-
beta kadar 13031989
holoselulosa
NREL Ruiz & Erhman,
1996.
2 Sakarifikasi Gula pereduksi Nelson-Somogyi Somogyi, 1952
DNS Miller 1959
Glukosa, silosa HPLC/NREL Ruiz & Erhman,
1996.
3 Fermentasi Etanol Alkoholmeter
NREL/HPLC Ruiz & Erhman,
1996.
4 Distilasi dan Etanol NREL/HPLC Ruiz & Erhman,
Dehidrasi
1996.
Sumber: SNI 0492:2008; SNI 0444:2009; SNI 01-13031989; SNI 7390:2012; Ruiz dan Erhman (1996); Somogyi
(1952); Miller (1959)
2.5.1. Delignifikasi / Perlakuan Awal
Delignifikasi adalah suatu proses pendahuluan penghilangan lignin

pada mareial berlignoselulosa sehingga hasil dari proses ini sudah
berupa selulosa dengan kemurnian yang cukup besar.
Tujuan dari delignifikasi yaitu untuk menghilangkan lignin, juga
dapat mengurangi kristalinitas selulosa, dan menigkatkan porositas
bahan. Selain lignin terdapat juga zat non selulosa lain seperti zat
ekstraktif, tanin dan resin yang melekat kuat pada selulosa. Lignin
merupakan salah satu bagaian mengayu dari tanaman seperti janggel,
kulit keras, biji, bagian serabut kasar, akar, batang dan daun. Lignin
mengandung substensi yang kompleks dan merupakan suatu gabungan
beberapa senyawa yaitu, hidrogen dan oksigen.
17
2.5.2 Rotating Microwave / Gelombang Micro
Microwave merupakan gelombang elektromagnerik yang memiliki

frekuensi dari 0,3 samapai 300 GHz. Microwave dapat digunakan
dalam sintesis kimia, persiapan sampel untuk analisia kimia dan
pengolahan lainya dalam bidang industri. Sebagai gelombang
elektromagnetik, microwave dapat ditransmisikan tanpa menggunakan
mediu. Dengan demikian, mekanisme microwave berbeda dengan
pemanasan konveksi ataupun konduksi yang memerlukan nediu untuk
transfer panas. Pemanasan microwave tergantung pada sifat dielektik
dan megnetik sebagai medan listrik dan komponen medan magnet
berintraksi dengan bahan selama iradiasi. Pada penelitian ini digunakan
rotating microwave dimana reaktor yang terdapat didalam microwave
berputar yang berfungsi sebagai pengganti pengadukan agar campuran
dalam reaktor dapat tercampur homogeny dan pemanasan merata.
2.6 Teknologi Hidrolisis
Hidrolisis holoselulosa (hemiselulosa dan selulosa) menjadi gula

monomer adalah tahap kedua setelah proses perlakuan awal dalam proses
produksi bioetanol G2. Pada tahap hidrolisis, selulosa dan hemiselulosa
diubah menjadi gula sederhana seperti yang diperlihatkan pada persamaan
reaksi (1) dan (2).
n
C6H10O5   nH2O  nC6H12O6 (1)
Reaksi hidrolisis selulosa pada persamaan reaksi (1) memperlihatkan

bahwa setiap unit glukosa dalam rantai panjang bergabung dengan molekul
air, 162 unit massa selulosa dan 18 unit massa air akan melepaskan 180 unit
glukosa. Dari persamaan ini didapatkan bahwa faktor konversi selulosa
menjadi glukosa adalah 1,111. Oligomer yang terdiri atas beberapa glukosa
juga dapat dihasilkan sebagai produk antara dalam hidrolisis selulosa.
Oligomer yang sering terbentuk adalah selobiosa yang mengandung 2 unit
glukosa (Wyman, Decker, Himmel, Brady, & Skopec, 2005). Hemiselulosa
juga dapat dihidrolisis dengan penambahan air untuk melepaskan gula
monomer. Gula monomer yang terbentuk dari hidrolisis hemiselulosa adalah
silosa (pentosa) atau n-arabinosa. Pada persamaan reaksi (2), diperlihatkan
18
bahwa 132 unit massa hemiselulosa dan 18 unit massa air akan melepaskan
150 unit massa gula pentosa (Wyman dkk., 2005). Faktor konversi
hemiselulosa ke gula pentosa (silosa) adalah 1,136 (Kang, Appels, Tan, &
Dewil, 2014).
n
 C 5H 8O 4  n  nH2O  nC5H10O5 (2)
Proses hidrolisis biomassa lignoselulosa dapat dilakukan menggunakan bahan

kimia atau enzim.
2.6.1 Hidrolisis Kimia
Hidrolisis kimia adalah perlakuan biomassa lignoselulosa dengan

bahan kimia pada waktu dan temperatur tertentu yang memecah
polimer selulosa dan hemiselulosa menjadi monomer gulanya (glukosa
dan xilosa) (Taherzadeh & Karimi, 2008). Bahan kimia yang dominan
digunakan pada proses hidrolisis adalah asam. Beberapa jenis asam
dapat digunakan untuk hidrolisis, seperti asam sulfat, asam klorida,
asam fluorida, asam fosfat, asam nitrat dan asam format (Galbe &
Zacchi, 2002). Kemampuan asam sulfat pekat dalam melarutkan dan
menghidrolisis selulosa pada kapas dan dilanjutkan dengan
pengenceran oleh air telah dilakukan pada awal tahun 1883 (Harris,
1949). Pada umumnya, selulosa berbentuk kristalin dan keras
sehingga pada saat hidrolisis dibutuhkan konsentrasi asam dan
temperatur yang tinggi. Konsentrasi asam yang digunakan untuk proses
hidrolisis adalah antara 10-30%. Penggunaan asam dengan konsentrasi
tinggi pada kondisi proses temperatur rendah dapat menghasilkan
perolehan selulosa yang tinggi (90% perolehan glukosa teoretis)
(Verardi, Bari, Ricca, & Calabrò, 2012). Untuk mendapatkan konversi
selulosa yang tinggi, penggunaan asam dengan konsentrasi rendah
(antara 2–5%), harus dibarengi dengan temperatur yang tinggi (Verardi
dkk., 2012). Pada Tabel 2.6.1 dapat dilihat kelebihan dan kekurangan
metode hidrolisis menggunakan asam pekat (konsentrasi tinggi) dan
asam encer (konsentrasi rendah). Hidrolisis hemiselulosa menggunakan
asam hampir sama dengan selulosa. Asam berfungsi untuk memotong
rantai panjang hemiselulosa menjadi rantai pendek oligomer kemudian
menjadi monomer gula.
19
Hemiselulosa pada umumnya berbentuk amorf sehingga tidak

diperlukan kondisi proses yang tinggi seperti pada hidrolisis selulosa.
Sebagai contoh, perolehan monomer gula sampai dengan 85–90% dapat
dihasilkan dari hemiselulosa pada kondisi proses temperatur sekitar
1600C, waktu reaksi 10 menit dan konsentrasi asam hanya 0,7%
(Wyman dkk., 2005). Pada 1991, BC International dari Amerika Serikat
menggunakan teknologi hidrolisis dua tahap dengan asam encer.
Hidrolisis pertama yang bertujuan untuk memecah hemiselulosa
dilakukan pada kondisi sedang (170–1900C), dilanjutkan hidrolisis
kedua untuk selulosa pada temperatur 200–2300C (Wyman, 1999).
Tabel 2.6.1 Kelebihan dan kekurangan pada Hidrolisis Asam Pekat dan Asam Encer
Hidrolisis Keuntungan Kerugian

Hidrolisis Asam 1. Suhu operasi lebih 1.Konsumsi asam yang
Pekat rendah tinggi
2. Gula yang 2.Korosi pada alat
dihasilkan lebih 3.Konsumsi energi
tinggi yang tinggi untuk
recovery asam
Hidrolisis Asam Konsumsi asam yang 1. Suhu operasi tinggi
Encer rendah tidak memerlukan 2. Gula yang dihasilkan
recover asam lebih rendah
3.Terbentuknya produk
samping yang tidak
diinginkan
Sumber: Taherzadeh dan Karimi (2007); Verardi dkk. (2012)
2.6.2 Hidrolisis Secara Enzimatis
Kata enzim berasal dari bahasa Yunani “enzume” yang berarti di

dalam yeast. Pada awalnya proses fermentasi gula menjadi alkohol
diduga hanya dapat terjadi apabila ada organisme hidup berupa yeast.
Buchner (1897) dan Bachruddin (2014) melakukan eksperimen proses
fermentasi dengan menambahkan ekstrak yeast tanpa melibatkan sel
20
hidup, hasil penelitian tersebut menginspirasi peneliti untuk mengisolasi

dan memurnikan enzim.
Hidrolisis enzimatis menggunakan enzim sebagai katalisator reaksi.

Polisakarida yang berbeda dalam biomassa lignoselulosa membutuhkan
enzim yang berbeda untuk proses hidrolisis. En- zim selulase digunakan
untuk proses hidrolisis selulosa (Duff & Murray, 1996). Hidrolisis
hemiselulosa menggunakan enzim yang menyerang hemiselulosa.
Hidrolisis enzimatis atau sakarifikasi adalah tahapan proses

perombakan senyawa polisakarida di dalam biomassa lignoselulosa
(selulosa dan hemiselulosa) menjadi monomer gula penyusunnya
(glukosa dan silosa) dengan bantuan enzim selulase yang bekerja secara
spesifik. Enzim ini mengatalis perubahan dari selulosa tidak larut
menjadi bentuk-bentuk gula sederhana yang larut dalam air seperti
mono atau disakarida. Faktor-faktor yang memengaruhi proses
hidrolisis enzimatis selulosa sebagia berikut.
1. Suhu : makin tinggi suhu makin cepat reaksi kimia, suhu yang
terlalu tinggi menyebabkan pemecahan selulosa namun
menyebabkan kerusakan enzim.
2. pH : pada umumnya enzim bersifat amfolitik, yang berarti enzim
mempunyai konstanta disosiasi pada gugus asam maupun pada
gugus basa. Enzim menunjukkan aktivitas maksimum pada kisaran
pH 4,5–8,0.
3. Kadar air substrat: kadar air bahan sangat memengaruhi laju reaksi
enzimatis. Pada kadar air yang rendah terjadi rintangan pada
substrat sehingga difusi terhambat.
4. Konsentrasi substrat dan kondisi reaksi substrat: mekanisme kerja
enzim ditentukan oleh jumlah atau konsentrasi substrat yang
tersedia. Jika jumlah substrat sedikit maka kerja enzim rendah.
5. Konsentrasi enzim: konsentrasi enzim yang digunakan sangat
memengaruhi kecepatan reaksi enzim.
6. Waktu hidrolisis: semakin lama waktu hidrolisis, maka kadar
glukosa yang dihasilkan semakin besar.
21
Hidrolisis enzimatik dapat dilakukan secara terpisah dari

fermentasi (SHF) atau secara kombinasi dengan fermentasi (SSF).
Hidrolisis enzimatis memiliki beberapa keuntungan dibandingkan
hidrolisis asam, antara lain dapat menurunkan risiko korosi pada alat
dan mengurangi kehilangan energi pada bahan bakar produksi. Selain
itu, kelebihan dari hidrolisis enzimatis adalah gula yang dihasilkan
seragam dan tidak mengandung produk-produk lain sebagai hasil
degradasi glukosa. Hal tersebut penting apabila glukosa akan di-
manfaatkan lebih lanjut untuk proses fermentasi.
Kekurangan dari hidrolisis enzimatis adalah berkurangnya laju

hidrolisis yang disebabkan oleh inhibisi enzim seiring dengan
meningkatnya konsentrasi glukosa di dalam reaktor (Sun & Cheng,
2002). Waktu proses hidrolisis dapat terjadi selama beberapa hari
dibandingkan asam yang hanya memerlukan waktu beberapa menit.
Selain itu, harga enzim cukup mahal bila dibandingkan asam. Beberapa
enzim penghidrolisis gula yang sangat berperan dalam proses
biokonversi lignoselulosa menjadi bioetanol disajikan dalam
pembahasan berikut.
2.6.2.1 Enzim Selulase
Enzim selulase merupakan enzim yang memegang peranan

penting dalam proses biokonversi limbah-limbah organik
berselulosa menjadi glukosa, protein sel tunggal, makanan
ternak, dan lain-lain (Chalal, 1983). Reaksi yang ditimbulkan
oleh selulase saat mengurai selulosa adalah hidrolisis maka
selulase diklasifikasikan ke dalam jenis enzim hidrolase. Enzim
selulase bukan merupakan enzim tunggal, tetapi terdiri atas tiga
macam enzim, yaitu endo-β-1,4- glukanase (endoglukanase),
exo-β-1,4-glukanase (eksoglukanase) atau selobiohidrolase, dan
β-1,4 glukosidase atau selobiase.
2.6.2.2 Enzim Hemiselulase
Hemiselulase adalah polimer heteropolisakarida yang

merupakan multienzim dengan komponen utama C5 untuk
memecah hemiselulosa. Enzim-enzim yang termasuk komponen
22
hemiselulase adalah silanase, β -mannanase, α-L-arabino-

furanosidase, α-D-glukuronidase, β -silosidase dan
hemisellulolitik esterase (Shoham & Shallom, 2003).
Aspergillus niger, T. reesei, Bacillus dan Humicolainsolens
adalah beberapa sumber penghasil silanase, temperatur
optimumnya antara 40– Sindhu, & Pandey,
2011). Sistem enzim ini terdiri atas enzim hidrolitik yang
bekerja sinergis dan mengubah silan menjadi gula penyusunnya.
2.7 Metode Fermentasi
Proses pembuatan bioetanol dilakukan melalui proses fermentasi.

Fermentasi berasal dari kata latin ferfere yang artinya mendidihkan. Dahulu,
ketika ilmu pengetahuan masih sangat awal, terbentuknya gas dari suatu
cairan kimia hanya dapat dianalogikan dengan proses air mendidih. Pada
masa itu belum diketahui bahwa kejadian tersebut dapat pula terjadi oleh
terbentuknya gas-gas lain dalam cairan. Salah satunya adalah CO 2 yang
merupakan produk samping dari fermentasi, di mana terjadi perubahan kimia
dari senyawa organik dalam keadaan aerob atau anaerob melalui kerja
enzim yang dihasilkan oleh mikrob menjadi suatu senyawa organik lainnya.
Seiring perkembangan teknologi, definisi fermentasi meluas menjadi

semua proses yang melibatkan mikroorganisme untuk menghasilkan suatu
produk (metabolit primer dan sekunder) dalam suatu lingkungan yang
terkendali. Pada mulanya istilah fermentasi digunakan untuk menunjukan
proses pengubahan glukosa menjadi etanol yang berlangsung secara anaerob.
Kemudian, istilah fermentasi berkembang menjadi seluruh perombakan
senyawa organik yang dilakukan mikroorganisme.
2.8 Perbandingan Antara Metode SHF dan SSF
2.8.1 Hidrolisis Dan Fermentasi Terpisah (Separate Hydrolysis And

Fermentation, SHF)
Proses Separate Hydrolysis and Fermentation (SHF) adalah proses

pembuatan etanol di mana biomassa lignoselulosa yang telah
mengalami perlakuan awal dihidrolisis menjadi glukosa dan di-
23
lanjutkan dengan fermentasi menjadi etanol pada reaktor yang berbeda.

Hal ini memudahkan pengontrolan terhadap tiap tahapan proses agar
tercapai hasil yang diharapkan. Kelebihan metode ini adalah proses
hidrolisis dan fermentasi dapat dilakukan pada kondisi optimum. Pada
proses hidrolisis, selulase dapat bekerja optimum pada temperatur 45–
50oC atau tergantung pada jenis mikroorganisme penghasil glukosa
(Olsson dkk., 2006; Saha, Iten, Cotta, & Wu, 2005). Sementara itu,
mikroorganisme untuk fermentasi bekerja optimum pada temperatur
30–
selobiosa selama proses hidrolisis dapat menghambat kinerja selulase
dan menurunkan effiensi proses (Margeot, Hahn-Hagerdal, Edlund,
Slade, & Monot, 2009). Kelemahan proses tersebut mendorong
pengembangan metode sakarifikasi dan fermentasi serentak (SSF).
2.8.2 Sakarifikasi Dan Fermentasi Serentak (Simultaneous
Saccharification And Fermentation/SSF)
Proses SSF secara umum lebih diminati untuk mengurangi biaya

produksi etanol. SSF pertama kali dikenalkan oleh Takagi, Abe, Suzuki,
Emert, dan Yata (1977), yaitu kombinasi hidrolisis enzimatik dan
fermentasi gula menjadi etanol secara simultan dilakukan dalam satu
reaktor dan waktu yang bersamaan.
Dalam proses SSF polisakarida yang dihidrolisis menjadi

monosakarida langsung difermentasi menjadi etanol. Etanol yang
terakumulasi tidak menghambat enzim selulase sehingga SSF adalah
strategi yang cocok untuk mempercepat laju konversi selulosa menjadi
etanol. Sebagai perbandingan, metode SSF mampu menghasilkan etanol
hingga 40% lebih banyak daripada metode SHF. Proses SSF memiliki
beberapa keunggulan dibandingkan proses hidrolisis dan fermentasi
bertahap sebagai berikut.
1. proses yang dihasilkan ramah lingkungan,

2. dapat meningkatkan rendemen produk,
3. dapat mengurangi kebutuhan kondisi steril karena glukosa langsung
dikonversi menjadi etanol,
4. waktu proses lebih pendek,
24
5. biaya investasi lebih rendah karena menggunakan satu reaktor saja,

dan berkurangnya risiko kontaminasi sebab tingginya temperatur
proses, kehadiran etanol dalam medium reaksi, dan kondisi anaerob
(Lin & Tanaka, 2006).
Di samping kelebihan-kelebihan yang ditawarkan, metode SSF

memiliki beberapa kekurangan, terutama disebabkan berbedanya
temperatur optimal untuk hidrolisis (45–50oC) dan fermentasi (28–
35oC). Selain itu, etanol menghambat kerja mikroorganisme fermentasi
pada konsentrasi tertentu. Secara keseluruhan, beberapa parameter
proses harus dioptimalkan, yaitu konsentrasi substrat, rasio enzim
terhadap substrat, dosis komponen aktif dalam campuran enzim, dan
konsentrasi yeast (Lin & Tanaka, 2006).
Upaya penelitian, pengembangan, dan demonstrasi produksi

bioetanol dari lignoselulosa kebanyakan dilakukan oleh negara maju.
Kemajuan yang paling pesat ditunjukkan oleh Amerika Serikat karena
dukungan yang amat besar dari pemerintahnya. Dibandingkan rute
produksi gula menjadi bioetanol, konversi lignoselulosa menjadi
bioetanol masih memerlukan banyak temuan teknologi penting agar
bisa kompetitif secara ekonomi sehingga bisa layak untuk masuk sektor
komersial (Gnansounou & Dauriat, 2010).
Sumber : Yani Sudiyani, Syahrul Aiman, dan Dieni Mansur (Ed). 2019.
Perkembangan Bioetanol G2: Teknologi dan Prespektif– Jakarta: LIPI Press.
2.9 Penelitian Terdahulu (State of the art)
Penelitian terdahulu merupakan referensi atau acuan bagi penulis dalam

melakukan penelitian. Dari penelitian terdahulu, penulis tidak menemukan
penelitian dengan judul yang sama seperti judul penelitian penulis. Namun
penulis memaparkan beberapa penelitian terdahulu yang memiliki beberapa
keterkaitan dengan penelitian ini. Ditunjukan pada tabel di bawah ini:
25
Bahan Parameter
No. Metode Perolehan Referensi
Baku Proses
1 TKKS Hidrolisis T= Variasi Kadar Yuni,
Asam dan konsentrasi tertinggi dkk.,
Fermentasi H2SO4 2%, 3%, Bioetanol 2012
4%, dan 5%) 9,698 %.
t= Waktu
Fermentasi 5
hari
2 Tongkol Hidrolisis T= Enzim Kadar Abdullah
Jagung Enzimatis Selulase:xilanese tertinggi bin Arif
dan (1:1, dan 2:2) Bioetanol et al.,
Fermentasi t= Waktu 5,038 %. 2016
Fermentasi 5
hari
3 TKKS Hidrolisis T= Konsentrasi Volume Hanifah
Asam dan ragi (5%, 10%, Bioetanol et al.,
Fermentasi 15%, 20%) 14,4 ml, 2021
t= Waktu densitas
Fermentasi 7 0,8757 g/ml,
hari dan kadar
glukosa
tertinggi =
8,48%
4 TKKS Sakarifikasi T= Variasi Peningkatan Radhitya,
dan Pemurnian Kadar dkk.,
Fermentasi Adsorpsi dengan Bioetanol 2020
Serentak Zeolit tertinggi
(SSF), dan adalah
Pemurnian dengan
Adsorpsi Pemurnian
Adsorpsi Z4
yang
menjadikan
26
kadar
Bioetanol
dari 1,32697
g/L Menjadi
1,71227 g/L.
5 Rumput Sakarifikasi t= Waktu Dari variasi Vahemas,
dan
Alang- Fermentasi (3, 5, waktu dan I
Fermentasi
Alang 7, 9 Hari) Sakarifikasi Gusti,
Serentak
(SSF) dan 2020
Fermentasi,
hari ke 7
menghasilkan
kadar
bioetanol
tertinggi yaitu
30% dengan
nilai densitas
sebesar
0,94454 g/ml.
6 TKKS Sakarifikasi T= Konsentrasi Penelitian
dan Enzim Selulase (60, Ini
Fermentasi 90, 120, 150 FPU) -
Serentak t= Waktu
(SSF) Fermentasi (3 Hari)
Tabel 2.9.1 Penelitian Terdahulu (State Of The Art)
BAB 3
METODE PENELITIAN
3.1 Waktu Dan Tempat Penelitian
Penelitian Studi awal yang berjudul “Optimasi Delignifikasi Tandan

Kosong Kelapa Sawit (TKKS) dengan menggunakan microwave pada larutan
Natrium Hidroksida (NaOH)” ini dilakukan di Laboratorium kampus Witana
Harja dan untuk analisa dilakukan di Laboratorium Pusat Riset Kimia
Serpong. Penelitian ini dilaksanakan mulai pada minggu pertama bulan April
hingga minggu pertama bulan Juni 2022.
Penelitian berikutnya yang berjudul “Peningkatan Produksi Bioetanol
Dari Tandan Kosong Kelapa Sawit (TKKS) Hasil Delignifikasi Dan
Penambahan Nutrisi” ini dilakukan di Laboratorium Pusat Riset Kimia
Serpong. Penelitian ini dilaksanakan mulai pada minggu pertama bulan
November hingga akhir bulan Desember 2022.
3.2 Variabel Penelitian
3.2.1 Variabel Bebas
Variabel bebas adalah variabel yang mempengaruhi variabel

terikat, yaitu:
1. Konsentrasi NaOH 0,1 N dan H2O2 50%
2. Konsentrasi enzim 60, 90, 120, 150 FPU/gram TKKS
3. Yeast Extract 0,5 gram
4. Peptone 1 gram
3.2.2 Variabel Terikat
Variabel terikat adalah variabel yang dipengaruhi oleh variabel

bebas, dalam hal ini adalah Total Disolve Solid (TDS), Total Solid
(TS), Suhu dan ORP sebelum dan sesudah microwave, kadar gula
dalam lignin, dan kadar bioethanol setelah fermentasi.
3.3 Alat dan Bahan
Alat dan Bahan yang digunakan untuk kegiatan penelitian ini terdiri dari:
27
28
Alat Bahan
Density meter Tandan kosong kelapa sawit (TKKS)
Syringe filter Natrium Hidroksida (NaOH)
Enological distiller Aquadest
Cawan Porselen Larutan H2O2 (50%)
Shaker Incubator Enzim Selullase
Microwave Fermipan
Vacuum Drying Oven Pepton
Thermometer Saccharomyces Cerevisiae (ragi roti)
Indicator universal / pH meter Yeast Extract
Hotplate stirrer Dextrose Monohydrate
Autoclave Monopotasium Fosfat (KH2PO4)
Breaker glass 250 mL, 500 mL, D-xylose.

dan 1000 mL
Gelas ukur 500 mL, dan 1000

Ml
Neraca Analitis
Erlenmeyer 250 mL, 500 mL,

dan 1000 mL
Laminar Air Flow
3.4 Tahap Penelitian
Bahan baku berupa TKKS yang diperoleh dari pabrik pengolahan kelapa
sawit dipotong-potong sampai ukuran 1 cm dan ditambahkan massanya.
Kemudian analisa kadar air, delignifikasi TKKS menggunakan microwave,
setelah itu analisa Total Solid (TS) dan Total Disolve Solid (TS)
29
Hasil delignifikasi yang telah dikeringkan kemudian dilakukan proses

fermentasi dengan penambahan enzim selullase dan penambahan nutrisi
drngan metode SSF. Hasil fermentasi kemudian di destilasi untuk
memisahkan etanol dengan air dan kemudian dilakukan Analisa kadar
Etanolnya (masing-masing sample).
3.5 Proses Kerja
3.5.1 Persiapan Bahan Baku
Bahan baku berupa TKKS yang diperoleh dari baprik pengolahan

kelapa sawit dipotong-potong sampai ukuran 1 cm dan ditambahkan
massanya.
3.5.2 Analisa Kadar Air
1. Sampel yang sudah ditimbang dengan bobot ±2 gram kemudian

dipanaskan menggunakan oven selama 1 jam dengan suhu 105° C.
2. Setelah satu jam kemudian dimasukkan ke dalam eksikator selama
30 menit.
3. Setelah 30 menit sampel ditimbang menggunakan neraca analitik
untuk mengetahui bobotnya, lalu dimasukkan lagi kedalam oven
selama 1 jam dengan suhu 105° C.
4. Setelah itu dimasukkan lagi ke dalam eksikator selama 30 menit,
lalu di timbang. Langkah-langkah sebelumnya diulang hingga
mendapatkan bobot konstan/tetap.
3.5.3 Delignifikasi TKKS Menggunakan Microwave
1. Sampel TKKS ditimbang sebanyak 10 gram.

2. Ditambahkan NaOH dengan variasi konsentrasi 0,1 N sebanyak
200 ml, dan H2O2 50% sebanyak 0,4 ml.
3. Kemudian suhu awal sebelum masuk microwave dicek
menggunakan thermometer.
4. Percobaan dilakukan lagi dengan aturan suhu microwave sebesar
100oC dalam waktu 20 menit.
5. Hasil sampel TKKS kemudian dianalisa. Analisa pertama yaitu
suhu dan ORP.
30
6. Suhu yang diperoleh setelah keluar dari microwave yaitu sekitar

35-75°C, lalu sampel diadu menggunakan stirrer selama 60 menit.
7. Sampel kemudian di saring dan di cuci dengan air (perlakuan
seperti di atas dilakukan 2 kali).
8. Kemudian hasil saring TKKS dikeringkan untuk diuji ke analisa
selanjutnya .
9. Pada varian sampel TKKS yang lain dilakukan perlakuan sama
seperti tahap-tahap diatas.
3.5.4 Analisa TS (Total Solid)
1. Lakukan penyaringan dengan peralatan vakum. Basahi saringan

dengan sedikit air suling.
2. Aduk contoh uji dengan pengaduk magnetik untuk memperoleh
contoh uji yang lebih homogen.
3. Pipet contoh uji dengan volume tertentu, pada waktu contoh diaduk
dengan pengaduk magnetic.
4. Cuci kertas saring atau saringan dengan 3 x 10 mL air suling,
biarkan kering sempurna, dan lanjutkan penyaringan dengan vakum
selama 3 menit agar diperoleh penyaringan sempurna. Contoh uji
dengan padatan terlarut yang tinggi memerlukan pencucian
tambahan.
5. Pindahkan kertas saring secara hati-hati dari peralatan penyaring
dan pindahkan ke wadah timbang aluminium sebagai penyangga.
Jika digunakan cawan gooch pindahkan cawan dari rangkaian
alatnya.
6. Keringkan dalam oven setidaknya selama 1 jam pada suhu 103º C
sampai dengan 105º C, dinginkan dalam desikator untuk
menyeimbangkan suhu dan timbang.
7. Ulangi tahapan pengeringan, pendinginan dalam desikator, dan
lakukan penimbangan sampai diperoleh berat konstan atau sampai
perubahan berat lebih kecil dari 4% terhadap penimbangan
sebelumnya atau lebih kecil dari 0,5 mg. 3.5.5 Analisa TDS (Total
Disolve Solid) Proses analisa TDS dilakukan dengan menggunakan
alat TDS meter.
31
3.5.5 Analisa Suhu dan ORP Meter
Proses analisa suhu dan ORP dilakukan dengan menggunakan alat ORP
meter dan Thermometer.
3.5.6 Analisa Kadar Gula Reduksi dalam Lignin
1. Siapkan tabung reaksi sesuai banyakannya sampel

2. Pipet 4m masing-masing sampel
3. Kemudian tambahkan 1ml aquadest kedalam masing-masing
tabung reaksi sampel
4. Tambahkan 0.5 ml H2SO4 kedalam masing-masing tabung reaksi
sampel
5. Tambahkan 0.5 ml H2SO4 kedalam masing-masing tabung reaksi
sampel
6. Lakukan pengukuran spektrofotometer UV dengan Panjang
gelombang 205 nm
7. Kemudian catat hasil pengukuran tersebut
3.5.7 Pembuatan Starter
1. Siapkan larutan medium 125 mL yang terbuat dari yeast extract,

peptone, KH2PO4, dextrose monohydrate dan d-xylose dalam
erlenmeyer 250 mL.
2. Kemudian larutan medium di sterilisasi menggunakan autoclave
selama 15 menit
3. Pembuatan starter dilakukan di laminar flow dengan
mencampurkan medium starter dan saccaromhyces cerevisae.
4. Larutan starter diinkubasi pada suhu 35°C selama 24 jam
menggunakan orbital shaker dengan kecepatan 100 rpm.
3.5.8 Pembuatan Larutan Nutrisi
1. Larutan nutrisi dibuat dari campuran yeast extract dan peptone

2. Kemudian di sterilisasi menggunakan autoclave selama 15 menit
3. Larutan nutrisi diinkubasi pada suhu 35°C selama 24 jam
menggunakan orbital shaker dengan kecepatan 100 rpm.
32
3.5.9 SSF (Simultaneous Saccharification And Fermentation)
Medium untuk SSF dibuat sebanyak 450 mL terdiri dari sampel

TKKS yang telah di pretreatment (15 gram), larutan nutrisi, enzim
selulase, dan larutan starter. Kultivasi dimasukkan ke dalam
Erlenmeyer 1 L kemudian ditutup rapat, selanjutnya diletakkan pada
orbital shaker pada kecepatan 100 rpm dan suhu 35°C selama 48
jam.
3.5.10 Analisa Kadar Etanol
1. Siapkan TKKS hasil delignifikasi yang sudah dikeringkan dan

timbang sebanyak 15 gram, masukan ke dalam Erlenmeyer 1000
mL. yang sudah disterilisasi (timbang TKKS 15 gram untuk
beberapa macam sample).
2. Siapkan atau campurkan media Fermentasi kemudian masukan ke
dalam autoklaf selama 1 jam, lalu masukan ke orbital shaker-
incubator dengan suhu 37oC dan 120 Rpm.
3. Hari ke 2 Siapkan larutan Enzim Selullase kemudian campurkan
kemasing-masing sampel TKKS hasil delignifikasi. Pencampuran
dilakukan di , laminar air flow.
4. Campurkan media fermentasi pada sample TKKS, pencampuran
dilakukan di , laminar air flow. Kemudian masukan ke orbital
shaker-incubator dengan suhu 37oC dan 120 Rpm.
5. Pada percobaan ke 3 ditambahkan Nutrisi (Yeast Extract) pada
proses Fermentasi.
6. Pada hari ke 3 atau 24 jam setelah proses fermentasi sampel
diambil 50 mL untuk dilakukan destilasi dan kemudian etanol hasil
destilasi di Analisa kadar etanol nya. Lakukan Analisa kadar etanol
jam ke 48 dan jam ke 72.
7. Catat hasil kadar etanol dan bandingkan hasil dari jam ke 24, jam
ke 48, dan jam ke 72.
Analisa Kadar Etanol pada 3 varian sampel TKKS yaitu Row Material
TKKS (bahan baku), TKKS hasil Delignifikasi, dan TKKS dengan
penambahan Nutrisi, masing- masing dilakukan fermentasi dengan
metode SSF.
33
3.6 Flowchart Penelitian
3.6.1 Flowchart Pretreatment Bahan Baku (TKKS)
Bahan Baku
(TKKS)
Timbang TKKS 10 gram (masukan kebreaker glas 500mL)
Tambahkan 200 mL NaOH 0,1 N dan 0,4 mL H2O2 50%
Microwave 20 Menit Pada Suhu 100oC Dan Cek Suhu
Putar Dengan Stirrer Selama 60 Menit
Saring (Ampas Di Pratreatment Ulang)

Microwave 20 menit Pada Suhu 100oC
Setelah 2x Pratreatment Ampas Dikeringkan Pada Vacuum Drying Oven Pada Suhu 70-80oC
TKKS Hasil Delignifikasi Siap Untuk Difermentasikan
Gambar 3.6.1 Flowchart Proses Pretreatment Bahan Baku (TKKS)
3.6.2 Flowchart Proses Pembuatan Bioetanol
Timbang 15g TKKS Hasil Delignifikasi
Fermentasi Dengan Metode SSF
Destilasi Larutan Hasil Fermentasi
Analisa Kadar Etanol
Gambar 3.6.2 Flowchart Proses Pembuatan Bioetanol
34
3.7 Pengukuran Aktifitas Enzim
Berdasarkan International Union of Pure and Applied Chemistry

(IUPAC), satuan konsentrasi enzim untuk selulase dinyatakan dalam Filter
Paper Unit (FPU). Perhitungan aktivitas enzim dengan satuan FPU ini dapat
menggunakan persamaan berikut ini.
𝟎,𝟑𝟕
Filter Paper Activity = [ 𝑬𝒏𝒛𝒚𝒎𝒆]𝒓𝒆𝒍𝒆𝒂𝒔𝒊𝒏𝒈 𝟐.𝟎𝒎𝒈 𝒈𝒍𝒖𝒄𝒐𝒔𝒆 𝒖𝒏𝒊𝒕𝒔/𝒎𝒍
𝐅𝐏𝐔
Konsentrasi enzim = 𝐆𝐫𝐚𝐦 𝐓𝐊𝐊𝐒
Diketahui: 1 Erlenmeyer berisi 15 gram TKKS dalam 150 mL Enzim

1 mL Enzim = 15 FPU
𝐅𝐏𝐔
0,1 gr enzim + 3mL = 15 𝐧𝐋
= 0,5 gr
60
1. 1 Erlenmeyer = 15 3 = 300
300
= 150 = 2 gr
90
2. 1 Erlenmeyer = 15 = 450
3
450
=150 = 3 gr
120
3. 1 Erlenmeyer = 15 = 600
3
600
=150 = 4 gr
150
4. 1 Erlenmeyer = 15 = 750
3
750
=150 = 5 gr
Total konsentrasi enzim / mL = Total Enzim / gr

420 mL= 14 gr
Jadi jumlah Enzim Selulase yang digunakan pada variasi konsentrasi Enzim
(60 FPU, 90 FPU, 120 FPU, dan 150 FPU) yaitu 14 gram.
BAB 4
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil dan Pembahasan
Penelitian ini bertujuan untuk Memanfaatkan tandan kosong kelapa sawit

dengan pengolahan delignifikasi yang ramah lingkungan dan mengetahui
hasil studi awal delignifikasi tandan kosong kelapa sawit mengetahui
kandungan selulosa tertinggi yang terkandung dalam tandan kosong kelapa
sawit dan kondisi NaOH pada proses delignifikasi. TKKS yang sudah
didapatkan selanjutnya dilakukan pengujian kadar bioetanol dengan
sebelumnya dilakukan proses fermentasi dengan metode SSF. Adapun analisa
Kpmponen TKKS sebelum dan sesudah delignifikasi dapat di lihat pada tabel
4.1 berikut ini:
Analisa Sebelum Delignifikasi
Lignin Selulosa Hemiselulosa
23,39% 48,56 28,08%
*Referensi: Radhitya, dkk., 2020
Alkali (NaOH) Analisa Sesudah Delignifikasi

Lignin Selulosa Hemiselulosa
0 M (air) 14,087% 16,303% 5,697%
0,2 M 12,878% 15,919% 10,081%
0,4 M 10,257% 14,769% 13,231%
0,6 M 9,760% 20,906% 17,094%
0,8 M 11,259% 20,714% 11,28,6%
*Penelitian Saat Ini
Tabel 4.1 Data Hasil Pengukuran Komponen TKKS Sebelum dan sesudah Delignifikasi
Menurut (Radhitya, 2020). Hasil pengujian lignoselulosa dengan metode

chesson yang dilakukan menunjukan jika memang benar jumlahselulosa yang
terkandung dalamtandan kosong kelapa sawit lebih besar dibandingkan
denganhemiselulosa dan lignin, hal ini sesuai dengan beberapa hasil dari
penelitian lain. Karena TKKS yang digunakan untuk penelitian mengandung
kadar selulosa yang menjadi komponen terbesa rdalam TKKS yaitu dengan
35
36
presentasi sebesar 48,56% oleh karena itu tandan kosong kelapa sawit ini
sangat berpotensi sebagai bahan baku pembuatan bioetanol generasi dua.
4.2. Pretreatment Terhadap Tandan Kosong Kelapa Sawit
Tujuan dari proses pretreatment adalah untuk memecah struktur lignin,

memecah kristal selulosa, meningkatkan porositas bahan, memecah
hemiselulosa, dan depolimerisasi hemiselulosa. Hal ini dilakukan untuk
mengkondisikan bahan lignoselulosa baik dari segi ukuran maupun struktur
bahan baku, sehingga memudahkan akses enzim untuk mengkonversi
karbohidrat menjadi gula (Nata, et al., 2014). Proses delignifikasi juga
menyebabkan perubahan warna TKKS dapat dilihat pada Gambar 4.2.1.
Gambar 4.2.1 Perubahan Struktur dan Warna (TKKS) (a) Sebelum dan (b) Sesudah
Delignifikasi
Proses delignifikasi TKKS dilakukan menggunakan NaOH 0,1 N 200

mL, H2O2 0,4 mL, dan TKKS 10 g. Hasil penelitian menunjukkan bahwa
TKKS hasil delignifikasi menggunakan metode alkali dan dengan microwave
berpengaruh terhadap lignin dan holoselulosa yang dihasilkan. Berikut adalah
grafik hasil etanol tanpa delignifikasi dan dengan delignifikasi pada TKKS.
30
25
20
Etanol (g/L)
15
10
0
Bahan Baku Delignifikasi
Gambar 4.2.2 Pengaruh Delignifikasi
37
Pada gambar 4.2.2 di atas adalah hasil bahan baku sebelum di

delignifikasi dan sesudah dilakukan delignifikasi.
Pada proses delignifikasi TKKS dengan Microwave ini diharapkan dapat
dihasilkan selulosa dengan kandungan lignin yang rendah. Gambar 4.2.2
menunjukkan bahwa kadar etanol dari TKKS tanpa delignifikasi lebih rendah
jika dibandingkan dengan TKKS yang di delignifikasi terlebih dahulu.
Penurunan kadar lignin disebabkan waktu pemasakan yang cukup lama
memicu terjadinya degradasi gugus basa dari larutan pemasak yang
menyerang alfa dan beta lignin, sehingga hasil degradasi tidak stabil memicu
terjadinya kondensasi. Kondensasi menyebabkan putusnya ikatan lignin dari
hemiselulosa dan selulosa.
4.2.1 Total Disolve Solid (TDS)
Hasil pengamatan TDS tandan kosong kelapa sawit ini menunjukkan

bahwa semakin pekat semakin naik, bukan karena dipengaruhi oleh proses
TKKS tersebut, tetapi dipengaruhi oleh kenaikan konsentrasi pada larutan
NaOH.
4.2.2 Analisa Kadar Holocelulosa dan Lignin
Hasil analisa kadar holocelulosa dan lignin ini adalah data dari
penelitian sebelumnya yaitu data hasil delignifikasi dengan konsentrasi
Naoh 0,2 M, 0,4 M, 0,6 M, dan 0,8 M dan dengan Microwave. Data dapat
dilihat pada grafik di bawah ini:
Gambar 4.2.3 Hasil Analisa Kadar Holocelulosa dan Lignin
Pada gambar 4.2.3 menunjukan hasil analisa kadar holocelulosa dan

lignin dimana didapatkan hasil optimum pada konsentrasi NaOH 0,6 M /
0,6 N dengan kadar holocelulosa sebesar 38% , dan kadar lignin 54 %, dan
sisanya 8% air.
38
4.3.Produksi Bioetanol dari TKKS dengan Proses Simultaneous

Sacharification and Fermentation (SSF)
Secara umum sintesis bioetanol yang berasal dari biomassa terdiri dari
dua tahap utama, yaitu hidrolisis dan fermentasi. Proses SSF merupakan
penggabungan antara tahap hidrolisis dan fermentasi yang dilakukan secara
simultan dalam satu waktu, sehingga dapat berlangsung efisien. Proses
hidrolisis (sakarifikasi) dilakukan secara biologis, yaitu dengan menggunakan
enzim.
Enzim merupakan protein yang bersifat katalis, sehingga sering disebut
biokatalis. Enzim mempunyai kemampuan mengaktifkan senyawa lain secara
spesifik dan dapat meningkatkan kecepatan reaksi kimia yang akan
berlangsung lama apabila tidak menggunakan enzim. Proses SSF juga
melibatkan yeast atau mikroba untuk menguraikan glukosa pada proses
fermentasi.
Fermentasi merupakan proses produksi energi dari mikroorganisme
dalam kondisi anaerobik (tanpa udara). Mikroorganisme yang melakukan
fermentasi bioetanol harus dapat memfermentasi semua monosakarida yang
terkandung dalam media. Mikroba saccharomyces cerevisiae digunakan
untuk mengkonversi gula menjadi bioetanol dengan kemampuan konversi
yang baik (Nata, et al., 2014).
4.4. TKKS Delignifikasi Dengan Penambahan Nutrisi Dan Tanpa

Penambanhan Nutrisi Terhadap Produk Bioetanol
Pada proses hidrolisis selulosa menjadi glukosa terhambat akibat

rendahnya laju hidrolisis karena kandungan lignin dalam bahan lignoselulosa.
TKKS yang telah didelignifikasi membantu meningkatkan laju hidrolisis
dikarenakan lignin yang telah berkurang pada proses delignifikasi.
39
150 134
Etanol (g/L)
100
50 27
14
0
Bahan Baku Delignifikasi Nutrisi
Gambar 4.4 1 Peningkatan Produksi Etanol Dengan Penambahan Nutrisi
Sampel yang digunakan pada tahap ini (gambar 4.4.1) menggunakan

konsentrasi enzim 90 FPU dan penambahan nutrisi dengan bobot yeast
extract 0,5 g dan peptone 1 g. Bioetanol yang dihasilkan berdasarkan sebelum
dan sesudah delignifikasi menunjukkan bahwa dengan delignifikasi
didapatkan kadar bioetanol lebih besar dibandingkan tanpa delignifikasi.
Kemudian dengan pemberian nutrisi kadar bioetanol semakin tinggi.
Dapat dilihat bahwa kadar bioetanol terbesar dengan delignifikasi yaitu
27 g/L pada waktu fermentasi 48 jam, sedangkan kadar bioetanol terbesar
tanpa delignifikasi yaitu 14 g/L pada waktu fermentasi 24 jam. Dan
didapatkan kadar bioetanol terbesar dengan pemberian nutrisi yaitu 134 g/liter
pada waktu fermentasi 28 jam. Dari data yang diperoleh proses hidrolisis
akan maksimal pada kondisi TKKS dengan delignifikasi, dimana proses
hidrolisis akan bekerja maksimal pada kondisi tersebut.
Hal ini sejalan dengan proses hidrolisis enzimatik membutuhkan
pretreatment sehingga enzim dapat berkontak langsung dengan selulosa.
Pretreatment dilakukan untuk memecah struktur kristalin selulosa dan
memisahkan lignin sehingga selulosa dapat terpisah (Dayatmo, et al., 2015).
Grafik perolehan bioetanol tanpa penambahan nutrisi dengan variasi NaOH
(60, 90, 120, 150 FPU) dapat dilihat pada gambar 4.4.2.
0,90 0,80
0,80
Kadar Bioetanol (%)
0,68 0,68 0,68

0,70 0,60
0,60 0,54 0,54
0,47
0,50 0,40
0,40 0,27
0,28
0,30 0,20
0,20
0,10
0,00
24 Jam 48 Jam 72 Jam
Waktu Fermentasi
60 FPU 90 FPU 120 FPU 150 FPU
40
Gambar 4.4.2 Kadar Bioetanol Berdasarkan Konsentrasi Enzim Tanpa Penambahan Nutrisi
Bioetanol yang dihasilkan berdasarkan konsentrasi enzim menunjukkan

bahwa semakin besar konsentrasi enzim yang diberikan, maka semakin
banyak kadar bioetanol yang dihasilkan pada kondisi tertentu. Dapat dilihat
pada (gambar 4.4.2) bahwa kadar bioetanol paling besar pada 150 FPU yaitu
0,80% dengan waktu fermentasi 24 jam dan yang terkecil pada 90 FPU
dengan kadar bioetanol 0,20% dengan waktu fermentasi 72 jam.
4.4.1 Pengaruh Delignifikasi Terhadap Perolehan Bioetanol
Pada penelitian ini, pengaruh delignifikasi dengan perlakuan secara

alkali yaitu dengan variasi konsentrasi NaOH, dan pemanasan dengan
Microwave telah menurunkan kadar lignin sebanyak 10-35%.
Pemanasan pada temperatur 100oC selama 20 menit pada microwave
bukan kondisi yang optimal untuk delignifikasi. Beberapa penelitian
menunjukan bahwa kondisi optimal untuk delignifikasi adalah pada
temperatur 160-260oC selama 1 menit atau 190oC selama 10 menit
(Duff, dan Muray, 1996). Dengan demikian, dapat difahami bahwa
pengondisian yang diterpkan pada penelitian ini masih di bawah kondisi
optimum.
Pada penelitian ini, perlakuan delignifikasi tidak hanya terjadi
penurunan kadar lignin namun terjadi penurunan terhadap kadar
hemiselulosa. Hal ini menjadi indikasi bahwa perlakuan delignifikasi
terhadap biomassa TKKS tidak hanya menurunkan kadar lignin, tetapi
dipolimerisasi hemiselulosa juga (Saha et al, 2005). Ini disebabkan
hemiselulosa merupakan senyawa karbohidrat penyusun sel bahan
berlignoselulosa tetapi dengan terjadi polimerisasi yang lebih rendah
dari selulosa. Akibatnya hemiselulosa sangat rentan terhadap suhu
tinggi , asam dan basa dibandingkan selulosa (Prentti, 2006).
4.4.2 Pengaruh penambahan Nutrisi Terhadap Perolehan Bioetanol
Pada penelitian ini untuk menghasilkan kadar etanol yang lebih

tinggi lagi maka ditambahkan perlakuan penambahan nutrisi berupa
Yeast Extract sebanyak 0,5g dan Pepton 1g. Kadar bioetanol pada lama
fermentasi 72 jam menunjukan Saccharomyses Cerevisiae mengalami
pertumbuhan dan perkembangan optimal sehingga dapat memproduksi
bioetanol. Kadar bioetanol yang tinggi dengan penambahan yeast
41
exstract 0,5 g dan pepton 1 g, menunjukan yeast exstract yang

ditambahkan sebagai sumber nitrogen pada konsentrasi tersebut dapat
memaksimalkan proses sintesis sel Saccharomyses Cerevisiae sehingga
kinerjanya lebih optimal dalam memproduksi bioetanol (Laopabion,
dkk, 2009).
4.5. Konsentrasi Enzim Selulase Pada Produk Bioetanol
Salah satu komponen penting dalam proses SSF adalah enzim. Enzim
merupakan biokatalis yang fungsinya mempercepat suatu reaksi kimia. Enzim
yang digunakan dalam proses SSF adalah enzim selulase. Konsentrasi
selulase yang diberikan pada proses SSF mempengaruhi kadar bioetanol yang
dihasilkan (Nata, et al., 2014). Variasi untuk enzim selulase yang diberikan
adalah 60 FPU, 90 FPU, 120 FPU, dan 150 FPU. Berikut adalah Gambar 4.5
hasil bioetanol berdasarkan variasi konsentrasi enzim dan penambahan
nutrisi.
Cellulase (FPU/Gram TKKS)

20,0 17,4 16,6
16,0 60 FPU
13,4 12,6
15,0 12,0 12,0
Etanol (g/Ll)
90 FPU
10,0
4,0 4,0 120 FPU
5,0 2,0
150 FPU
0,0
0 20 40 60 80
Waktu (Jam)
Gambar 4.5 Pengaruh Waktu Fermentasi
Pada gambar 4.5. berdasarkan penambahan nutrisi yeast extract 0,5 g dan
Peptone 1 g pada Konsentrasi Enzim 60 FPU (Sampel 9), 90 FPU (Sampel
39), 120 FPU (Sampel 20), dan 150 FPU (Sampel 3), dengan waktu
fermentasi 24 jam, 48 jam, dan 72 jam bioetanol yang dihasilkan
menunjukkan bahwa kadar bioetanol penambahan nutrisi berpengaruh
terhadap peningkatan kadar bioetanol, sedangkan pengaruh waktu fermentasi
terlihat ada peningkatan pada masing–masing variasi enzim selulase
ditunjukan pada jam ke-48 dan cenderung menurun pada jam ke-72. Pada
gambar 4.5. Dapat dilihat bahwa kadar bioetanol paling besar pada
konsentrasi enzim 150 FPU (sampel 3) yaitu 1,74% dengan waktu fermentasi
48 jam.
42
4.5.1 Pengaruh Waktu Dan Konsentrasi Enzim Sellulase Terhadap

Perolehan Etanol
Pada proses sakarifikasi selulosa menghasilkan glukosa. Dimana

hidrolisis sempurna akan menghasilkan monomer selulosa yaitu
glukosa, sedangkan hidrolisis tidak sempurna akan menghasilkan
disakarida dari selulosa yaitu selobiosa, dan jika dihidrolisis lebih lanjut
akan menjadi glukosa. Rusaknya struktur kristal selulosa akan
mempermudah terurainya selulosa menjadi glukosa. Selain itu,
hemiselulosa turut terurai menjadi senyawa gula sederhana yaitu
glukosa, galaktosa, manosa, heksosa, pentosa, xilosa, dan arabilosa.
Selanjutnya senyawa-senyawa tersebut yang akan difermentasi oleh
mikroorganisme dan menghasilkan etanol. Secara teoritis,hidrolisis
glukosa akan menghasilkan etanol dan karbondioksida. Perbandingan
mol antara glukosa dan etanol dapat dilihat pada reaksi berikut ini:
C6H12O6 2 C2H5OH+CO2
Satu mol glukosa menghasilkan 2 mol etanoldan 2 mol
karbondioksida, atau dengan perbandingan bobot tiap 180 g glukosa
akan menghasilkan 90 g etanol (Abdullah bin Arif, dkk 2016). Hasil
perlakuan variasi enzim selulase (60, 90, 120, dan 150 FPU) untuk
mendapatkan produksi bioetanol tertinggi pada variasi 150 FPU,
dengan demikian maka pada kondisi tertentu semakin banyak
konsentrasi enzim selulase yang ditambahkan maka semakin
meningkatkan kadar bioetanol. Pada penelitian ini konsumsi glukosa
oleh Saccharomyses Cerevisiae akan meningkat hingga 48 jam (2 hari),
namun konsentrasi itu akan menurun setelah melewati 48 jam, kondisi
tersebut mengidentifikasi bahwa Saccharomyses Cerevisiae telah
memasuki fase stasioner, hal ini diduga karena semakin tinggi
konsentrasi enzim maka sisi aktif enzim yang berkontak dengan
substrat (Selulosa dan Xilan) juga semakin banyak, sehingga semakin
banyak juga selulosa yang dihidrolisis menjadi glukosa, akan tetapi
kandungan glukosa yang terlalu banyak menyebabkan inhibisi produk
glukosa karena glukosa tersebut akan menempel pada sisi aktif enzim
sehingga luas permukaan enzim yang kontak dengan substrat menjadi
lebih sedikit (Abdullah bin Arif, dkk 2016).
BAB 5
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Dari hasil penelitian yang telah dilakukan maka didapat beberapa

kesimpulan sebagai berikut :
1. Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan maka dapat disimpulkan
bahwa pretreatment dengan NaOH 0,1 N 200 mL dan H2O2 50% 0,4 mL
pada TKKS 10 g dapat meningkatkan konsentrasi selulosa. Laju hidrolisis
berjalan baik dengan dilakukan delignifikasi terhadap TKKS, hal itu
dibuktikan dengan kadar bioetanol yang lebih tinggi yaitu 1,34%
dibandingkan tanpa delignifikasi yaitu 0,68% pada konsentrasi enzim 90
FPU serta penambahan nutrisi yeast extract 0,5 g dan peptone 1 g.
2. Konsentrasi enzim berpengaruh terhadap kadar bioetanol. Hal itu
dibuktikan dengan kadar bioetanol paling tinggi di dapat pada konsentrasi
150 FPU yaitu 0,80% tanpa penambahan nutrisi. Jika ditambahkan nutrisi
pada mikroba maka kadar bioetanol menjadi semakin tinggi, hal itu
dibuktikan dengan kadar bioetanol paling tinggi di dapat pada konsentrasi
150 FPU dengan penambahan nutrisi yeast extract 0,5 g dan peptone 1 g
yaitu 1,74%. Sedangkan untuk variasi penambahan nutrisi tidak terlalu
berpengaruh terhadap kadar bioetanol.
5.2 Saran
Adapun beberapa saran yang harus diperhatikan saat melakukan

penelitian:
1. Bahwa pengukuran hasil eksperimen dilakukan lebih berhati-hati, dimulai
dengan pengolahan eksperimen. Misalkan Ketika proses pengeringan
sampel dilakukan di oven Bersama dengan peneliti lain, dijaga agar tidak
terjadi kesalahan prosedur dimana peneliti lain mengambil sampel tidak
berhati-hati.
2. Disarankan melakukan penelitian dengan variabel yang berbeda agar lebih
sempurna tentang factor-faktor yang mempengaruhi delignifikasi.
43
DAFTAR PUSTAKA
Gayang, F. (2013). Konversi Lignoselulosa Tandan Kosong Kelapa Sawit

Menjadi Gula Pereduksi Menggunakan Enzim Xilanase dan Selulase
Komersial, Skripsi. Bogor: Departeman Kimia, Fakultas Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam, IPB.
Anindyawati, T. (2009). Prosepek Enzim dan Limbah Lignoselulosa untuk
Produksi Bioetanol, Berita Selulosa, 44(1): 49-56,
http://dx.doi.org/10.25269/jsel.v44i01.149
Sudiyani, Y., Aiman, S., Mansur, D. 2019. Perkembangan Bioetanol G2:
Teknologi dan Perspektif. LIPI Press. Jakarta.
Praevia, M.F., Widayat (2022). Analisis Pemanfaatan Limbah Tandan
Kosong Kelapa sawit sebagai cofiring Pada PLTU Batubara. Jurnal
Energi Baru dan Terbarukan, 3(1): 28-37,
https://doi.org/10.14710/jebt.2022.13367
UKM, B. (2009). Bahan Bakar Nabati (Bioetanol). Khalifah Niaga
Lantabura. Yogyakarta.
Naibaho, P. (1998). Teknologi Pengolahan Kelapa Sawit. Pusat Penelitian
Kelapa Sawit. Medan.
Aryafatta. (2008). Mengolah Limbah Sawit Menjadi Bioetanol.
http://www.aryafatta.com/2008/06/01/mengolah-limbah-sawit-jadi-
bioetanol/, diakses 10 Januari 2023
Isroi. (2008). Potensi Biomassa Lignoselulosa di Indonesia Sebagai Bahan
Baku Bioetanol: Tandan Kosong Kelapa Sawit.
https://isroi.com/2008/04/29/potensi-biomassa-lignoselulosa-di-
indonesia-sebagai-bahan-baku-bioetanoltandan-kosong-kelapa-sawit/,
diakses 10 Januari 2023
Dayotmo, D., Hartini, H.S. (2015). Pembuatan Bioetanol dari Limbah
Ampas Pati Aren Dengan Metode Hidrolisis Enzimatis Menggunakan
Enzim Ligninolitik dari Jamur Pelapuk Putih. Jurnal Konversi, 4(2),
43-52. https://doi.org/10.24853/konversi.4.2.43-52
Prescott, S.C., Dunn, C.G. (1959). Industrial Microbiology, 3rd ed.
McGraw-Hill Book Company, New York. US
44
Winarno, F.G., S. Fardiaz. (2002). Mikrobiologi Pangan. Gramedia Pustaka
Utama. Jakarta.
Naibaho, P. 1998. Teknik Pengolahan Kelapa Sawit. Pusat Penelitian
Kelapa Sawit. Medan.
Palupi, B., Fachri, B., Rahmawati, I., Rizkiana, M.F., Amini, H.W., Meidi,
N., Rahmawaty, D. (2022) Pengaruh Nutrisi Mikroorganisme Pada
Proses Fermentasi Terhadap Konsentrasi Bioetanol dari Batang
Tembakau.
https://jurnal.unej.ac.id/index.php/prosiding/article/download/32207/1
1497/
Dirjen Perkebunan. 2021. Statistik Perkebunan Indonesia Komoditas
Tembakau 2019-2021. Direktorat Jendral Perkebunan. Jakarta.
Nata, I.F., Prayogo, J.H., Arianto, T. (2014). Produksi Bioetanol dari
Alkali-Pretreatment Jerami Padi Dengan Proses Simultaneous
Sacharification and Fermentation (SSF). Konversi, 3 (1): 10-16,
http://dx.doi.org/10.20527/k.v3i1.132
Harsojuwono, B.A., Arnata, I.W. (2014). Optimasi ph dan Suhu Proses
Sakarifikasi Fermentasi Simultan Dalam Produksi Bioethanol dari Ubi
jalar. Media Ilmiah Teknologi Pangan, 1 (1): 50-57,
https://ojs.unud.ac.id/index.php/pangan/article/view/13069
Abdullah, N, F. Sulaiman, H. Gerhauser. 2011. Characterisation of Oil Palm
Empty Fruit Bunches for Fuel Application. Journal of Physical
Science. Vol. 22(1), 1–24.
Ajani, A O, Agarry S.E, Agbede OO. 2011. A Comparative Kinetic Study of
Acidic Hydrolysis of Wastes Cellulose from Agricultural Derived
Biomass. JASEM. ISSN 1119-8362. Vol 15 (4) 531 – 537.
Budiyati, Eni, dan Umar Bandi. 2015. The Effects of Hydrolysis
Temperature and Catalyst Concentration on Bio-ethanol Production
from Banana Weevil. Proceedings of The 9th Joint Conference on
Chemistry. ISBN 978-602- 285-049-6.
Ceirwyn, S.J. 1995. Analytical Chemistry of Food. Blackie Academic &
Professional: London. Pp. 84-125.
45
Chen, Jyh Cherng dan Jian Shuo Guo. 2013. Improving the conversion
efficiency of waste cotton to bioethanol by microwave hydrolysis
technology. Sustain. Environ. Res., 23(5), 333-339.
Chin, Siew Xian, Chin Hua Chia, Zhan Fang, Sarani Zakaria, Xing Kang Li,
dan Fan Zhang. 2014. A Kinetic Study on Acid Hydrolysis of Oil
Palm Empty Fruit Bunch Fibers Using a Microwave Reactor System.
American Chemical Society. 28: 2589-2597.
Darnoko. (1992). Potensi Pemanfaatan Limbah Lignoselulosa Kelapa Sawit
Melalui Biokonversi. Berita Pen. Perkeb (2): 85-97.
Erliyanti, Nove Kartika dan Elsa Rosyidah. 2017. Pengaruh Daya

Microwave Terhadap Yield Pada Ekstraksi Minyak Atsiri dari Bung
Kamboja (Plumeria Alba) Menggunakan Metode Microwave
Hydrodistillation. Jurnal Rekayasa Mesin. Vol. 8. No. 3: 175-178.
Ethaib, Saleem, R. Omar, S. M. M. Kamal, D. R. A. Biak. 2015. Microwave
Assisted Pretreatment of Lignocellulosic Biomass: A Review. Journal
of Engineering Science and Technology. Special Issue on SOMCHE
2014 & RSCE 2014 Conference: 97 – 109.
Gayang, Faizal. 2013. Konversi Lignoselulosa Tandan Kosong Kelapa Sawit
Menjadi Gula Pereduksi Menggunakan Enzim Xilanase dan Selulase
Komersial. Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Purwito dan Anita, F.E.S. (2005). Pemanfaatan Limbah Sawit dan Asbuton
Untuk Bahan Pencegah Serangan Rayap Tanah. (Kolokium dan Open
House). Pusat Penelitian dan Pengembangan Pemukiman Badan
Penelitian dan Pengembangan Departemen Pekerjaan Umum.
Venny, A.N dan Astuti, L.Y. (2010). Pemanfaatan Tandan Kosong
Kelapa Sawit Sisa Media Jamur Merang (Volvariella volvacea)
sebagai Pupuk Organik dengan Penambahan Aktivator Effective
Microorganism EM-4. http://digilib.its.ac.id.
Silvia, A.P. (2020). Pengaruh Penambahan Yeast Exstract Dan Lama
Fermentasi Terhadap Produksi Bioetanol Dari Limbah Air Kelapa
Yang Ditambah Tetes Tebu Menggunakan Khamir Saccharomyses
Cerevisiae. Malang: Universitas Islam Negri Maulana Malik
Ibrahim.
46
Lampiran 1
Lampiran 1 Foto-Foto Kegiatan Penelitian
I. Delignifikasi TKKS Menggunakan Microwave
II. Analisa Kadar Air
47
III. Analisa Lignin Tidak Terlarut
IV. Analisa Lignin Terlarut
V. Analisa TS (Total Solid)
48
VI. Analisa TDS (Total Disolve Solid)
VII. Analisa Kadar Bioetanol
49
Lampiran 2
Lampiran 2 Alat-Alat Penunjang Penelitian
1. Autoclave 2. Laminar Air Flow
3. Orbital Shaker-Incubator 4. Furnace
50
Lampiran 3
Lampiran 3 Tabel Data Pengamatan
I. Data pengukuran Suhu dan ORP
Alkali Suhu ( C ) ORP (mv)

0 73,9 317
0,2 70,5 -652
0,4 79,1 -745
0,6 69 -679
0,8 71,6 -523
II. Data pengukuran Total Disolve Solid (TDS) dan Total Solid (TS)
TDS (ppm) TS (ppm) TSS (ppm)

0M 374 1593 1219
0,2 M 14600 16714 2114
0,4 M 27200 37702 10502
0,6M 46000 57980 11980
0,8 M 66500 83122 16622
51
Lampiran 4
Lampiran 4 Grafik Hasil Pengamatan
I. Grafik pengukuran Suhu dan ORP
80
0
Suhu ( C ), ORP (mv)
-80 0 0,2 0,4 0,6 0,8

-160
-240
-320
-400 Suhu ( C )
-480 ORP (mv)
-560
-640
-720
-800
Konsentrasi Alkali
II. Grafik pengukuran Total Disolve Solid (TDS)
III. Grafik pengukuran Lignin
52
IV. Grafik pengukuran Rendemen (Yield)
53
LEMBAR PERBAIKAN
54

Revisi Laporan Tugas Akhir

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Revisi Laporan Tugas Akhir

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

LAPORAN TUGAS AKHIR

PENINGKATAN PRODUKSI BIOETANOL DARI TANDAN

Syarif Hidayatullah 2016090008

PROGRAM STUDI TEKNIK KIMIA

Merupakan syarat untuk

Syarif Hidayatullah 2016090008

PROGRAM STUDI TEKNIK KIMIA

Tangerang Selatan, Januari 2023

Indonesia sebagai negara dengan keanekaragaman hayati terbesar di dunia,

Katakunci: Bioetanol, Selulosa, Saccharomyces cereviseae, SSF, Fermentasi,

LAPORAN PENGEMBANGAN PENELITIAN .................................................... i

LEMBAR PENGESAHAN ..................................................................................... i

KATA PENGANAR ................................................................................................ i

BAB I PENDAHULUAN ........................................................................................1

1.1 Latar Belakang ......................................................................................1

1.2 Rumusan Masalah .................................................................................2

1.3 Batasan Penelitian .................................................................................2

1.4 Tujuan Penelitian...................................................................................3

1.5 Manfaat Penelitian.................................................................................3

BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ..............................................................................4

2.1 Tandan Kosong Kelapa Sawit (TKKS) ..................................................4

2.1.1 Selulosa ........................................................................................5

2.1.2 Hemiselulosa ................................................................................6

2.1.3 Lignin ...........................................................................................7

2.2 Etanol dan Bioetanol ..............................................................................8

2.2.1 Etanol ...........................................................................................8

2.2.2 Bioetanol ......................................................................................9

2.3 Gambaran Produksi Bioetanol Di Dunia ..............................................13

2.4 Bioetanol Sebagai Bahan Bakar Di Indonesia .....................................14

2.5 Analisa Komponen Kimia ....................................................................15

2.5.1. Delignifikasi / Perlakuan Awal .................................................16

2.5.2 Rotating Microwave / Gelombang Micro ..................................17

2.6.1 Hidrolisis Kimia .........................................................................18

2.6.2 Hidrolisis Secara Enzimatis .......................................................19

2.6.2.2 Enzim Hemiselulase .......................................................................21

2.7 Metode Fermentasi ...............................................................................22

2.8 Perbandingan Antara Metode SHF dan SSF ........................................22

2.8.1 Hidrolisis Dan Fermentasi Terpisah (Separate Hydrolysis And

2.8.2 Sakarifikasi Dan Fermentasi Serentak (Simultaneous

2.9 Penelitian Terdahulu (State of the art) .................................................24

BAB 3 METODE PENELITIAN ..........................................................................27

3.1 Waktu Dan Tempat Penelitian .............................................................27

3.2 Variabel Penelitian ...............................................................................27

3.2.1 Variabel Bebas ...........................................................................27

3.2.2 Variabel Terikat..........................................................................27

3.3 Alat dan Bahan .....................................................................................27

3.4 Tahap Penelitian ...................................................................................28

3.5 Proses Kerja..........................................................................................29

3.5.1 Persiapan Bahan Baku ................................................................29

3.5.2 Analisa Kadar Air.......................................................................29

3.5.3 Delignifikasi TKKS Menggunakan Microwave ........................29

3.5.4 Analisa TS (Total Solid) ............................................................30

3.5.5 Analisa Suhu dan ORP Meter ....................................................31

3.5.6 Analisa Kadar Gula Reduksi dalam Lignin................................31

3.5.7 Pembuatan Starter ......................................................................31

3.5.8 Pembuatan Larutan Nutrisi.........................................................31

iii Universitas Pamulang

3.5.10 Analisa Kadar Etanol ...............................................................32

3.6 Flowchart Penelitian .............................................................................33

3.6.1 Flowchart Pratreatment Bahan Baku (TKKS) ...........................33

3.6.2 Flowchart Proses Pembuatan Bioetanol .....................................33

3.7 Pengukuran Aktifitas Enzim ...............................................................34

BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................................35