Laporan Praktikum ke 4 Hari/tanggal : Kamis, 2 Oktober 2014

Biokimia Umum Waktu: 08.00-11.00 WIB

PJP : Inda Setyawati S TP M, Si
Asisten : 1. Ukdiah Tiara A
2. Abdul Qodir
3 . Siti Nuraeni
4. Gia Permasku

KARBOHIDRAT

Kelompok 9

Irvandi Ardiansyah C14130012

Saeroh C14130029
Nina Suryani C14130056
M. RizkyOktavian C14130087

DEPARTEMEN BIOKIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2014
 I. PENDAHULUAN

I.1 Latar Belakang

Karbohidrat adalah sumber energi bagi makluk hidup khususnya manusia,

oleh karena itu kita harus tahu tentang kandungan apa sajakah yang ada di dalam
karbohidrat.
Karbohidrat adalah polihidroksil-aldehida atau polihidroksil-keton,
Karbohidrat mengandung gugus fungsi karbonil (sebagai aldehida atau keton) dan
banyak gugus hidroksil. Pada awalnya, istilah karbohidrat digunakan untuk golongan
senyawa yang mempunyai rumus (CH2O)n, yaitu senyawa-senyawa yang n atom
karbonnya tampak terhidrasi oleh n molekul air. Namun demikian, terdapat pula
karbohidrat yang tidak memiliki rumus demikian dan ada pula yang mengandung
nitrogen, fosforus, atau sulfur.
Dalam praktikum kali ini ada 8 uji karbohidrat yaitu, uji molisch, uji benedict,
uji barfoed, uji fermentasi, uji selliwanoff, uji osazon, uji tauber, dan uji Iod. Dan
larutan yang amati adalah glukosa, fruktosa, laktosa, galaktosa, sukrosa,maltose.
I.2 Tujuan

Praktikum kali ini bertujuan untuk menunjukkan sifat dan struktur karbohidrat
melalui uji kualitatif. Selain itu bertujuan untuk mengamati struktur berapa
karbohidrat melalui sifat reaksinya dengan beberapa reagen uji serta mengidentifikasi
karbohidrat dengan berbagai uji.
 II. METODE PRAKTIKUM
II.1 Waktu dan tempat
Paraktikum Biofisik ini dilakukan pada hari Kamis, 25 September 2014
bertempat di laboraturium departemen Biokimia Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor.
II.2 Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam praktikum kali ini yaitu, rak tabung reaksi, tabung
reaksi, label, pipet volumetrik, bulp, batang penjepit, mikroskop, lemari asam, pipet
tetes, dan mortar. Sedangkan bahan yang digunakan adalah pereaksi Molisch,
pereaksi Benedict, pereaksi Barfoed, pereaksi Selliwanoff, larutan glukosa 1 %,
larutan fruktosa 1%, larutan sukrosa 1%, larutan maltose 1%, larutan pati 1%, NaOH,
tepung pati, tepung glikogen, tepung gum arab, fosfomolibdat
II.3 Prosedur Percobaan
Ada 8 uji karbohidrat yang akan dilakukan, yaitu sebagai berikut :
II.3.1 Uji Molisch
Alat dan bahan dipersiapkan terlebih dahulu, larutan glukosa, fruktosa,
sukrosa, laktosa, maltose, dan pati dimasukkan kedalam tabung reaksi masing masing
5 ml, setelah itu tambahkan 2 tetes pereaksi Molish, campur hingga rata. Lalu,
dimasukkan perlahan lahan kedinding tabung asam sulfat pekat (perhatian. Lakukan
di lemari asam). Warna yang terlihat diperhatikan.
II.3.2 Uji Benedict
Pereaksi benedict dimasukkan ke masing masing tabung reaksi yang berisi
larutan yang akan di coba sebanyak 5ml, lalu campur hingga homogeny, setelah itu
dididihkan selama 5 menit, setelah itu angkat dan dinginkan. Endapan dan warna
yang terjadi diperhatikan.
II.3.3 Uji Barfoed
Larutan yang akan di uji dan larutan pereaksi barfoed dimasukkan masing masing 1
ml kedalam tabung reaksi. Lalu larutan tersebut di didihkan selama 3 menit. Angkat
dan dinginkan, setelah itu tambahkan larutan fosfomolibdat sebanyak 1 ml. dikocok
dan diamati perubahan dan warna yang terjadi.
 II.3.4 Uji Fermentasi
20 ml larutan dan 2 gram ragi roti di gerus dalam mortar hingga terbentuk
suspensi yang homogen. Kemudian isi suspensi tersebut kedalam tabung fermentasi,
lalu diperam pada suhu 360C dan diperiksa selang 1 jam sebanyak 3 kali pengamatan.
Panjang atau isi gas diukur jika terdapat ruangan gas pada kaki tabung. NaOH 10 %
ditambah kedalam tabung melalui kaki yang terbuka kemudian mulut tabung ditutup
dengan ibu jari sambil tabung dibolak-balik, isapan pada ibu jari membuktikan bahwa
yang terbentuk CO2.
II.3.5 Uji Selliwanoff
Lima (5 ml) pereaksi Selliwanoff dan bahan percobaan di campur dalam
tabung reaksi, kemudian campuran tersebut didihkan selama 30 detik.
II.3.6 Uji Iod
Tepung bahan percobaan dimasukkan dan dicampur kedalam papan uji
kemudian ditambah iod encer. Hal di lakukan juga untuk tepung glikogen, tepung
pati, tepung gum arab, tepung agar-agar dan tepung insulin.
 III HASIL DAN PEMBAHASAN
3.1 Hasil
Tabel 1 adalah uji Molisch
Larutan Uji Hasil Warna Gambar
Glukosa + Hijau
Fruktosa + Merah
Sukrosa - Ungu
Laktosa + Ungu
Maltose + Ungu
Pati + Ungu bening

Tabel 2 adalah uji Benedict

Larutan Uji Hasil Warna Gambar
Glukosa + Merah
Fruktosa + Hijau kebiruan
Sukrosa + Merah bata
Laktosa + Hijau kebiruan
Maltose + Merah bata
Pati - Biru bening

Tabel 3 adalah Uji Barfoed

Larutan Uji Hasil Warna Gambar
Glukosa + Biru
Fruktosa + Biru pekat
Sukrosa + Biru pekat
Laktosa + Biru pekat
Maltose - Biru bening
Pati - Biru bening
 Tabel 4 Uji Selliwanoff
Larutan Uji Hasil Warna Gambar
Glukosa + Bening
Fruktosa + Merah
+
Sukrosa + Orange

-
Laktosa Bening

Maltose - Bening

Bening
Pati

Tabel 5 Uji osazon

Larutan Uji Hasil Warna Gambar
Fruktosa +

Pati -
 Maltose (-)

Sukrosa(+)

Laktosa(+)

Glukosa(+)

Tabel 6 Uji iod

Larutan Uji Hasil Warna Gambar
Pati + Ungu
Agar-agar - Coklat
Gum Arab - Kuning
Tabel 7 Uji Fermentasi
Larutan Uji Panjang (cm)
0 5 10 15 20
Glukosa 0,1 2,7 5,4 7,8 8,3
Fruktosa BL 1,2 3 4,7 5,9
BL 0,2 0,8 1,3 2,2
Sukrosa

3.2 Pembahasan
Kandungan, struktur dan sifat karbohidrat yang diindentifikasi bisa melalui
berbagai macam uji. Yaitu uhi benedict, molisch, barfoed, selliwanoff, iod,
fermentasi, tauber, dan uji osazon.
Percobaan Uji molisch adalah uji kimia kualitatif untuk mengetahui adanya
karbohidrat. Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat
membentuk cincin furfural yang berwarna ungu. Reaksi positif ditandai dengan
munculnya cincin ungu di permukaan antara lapisan asam dan lapisan sampel.
Percobaan Uji benedict merupakan uji umum untuk karbohidrat (gula)
pereduksi (yang memiliki gugus aldehid atau keton bebas), seperti yang terdapat pada
glukosa dan maltosa. Uji positif ditandai dengan terbentuknya endapan merah bata,
kadang disertai dengan larutan yang berwarna hijau, merah, atau orange.
Ion Cu2+ dari pereaksi Barfoed dalam suasana asam akan direduksi lebih cepat
oleh gula reduksi monosakarida dari pada disakarida dan menghasilkan Cu 2O (kupro
oksida) berwarna merah bata. Hal inilah yang mndasari uji Barfoed.
Dehidrasi fruktosa oleh HCL pekat menghasilkan hidroksimetilfurfural
dengan penambahan resorsinol akan megalami kondensasi membentuk senyawa
kompleks berwarna merah jingga menjadi dasar dari uji Seliwanoff.
Percobaan uji Osazon, yang mendasarinya adalah pemanasan karbohidrat
yang memiliki gugus aldehida atao keton bersama fenilhidrazin berlebihan akan
membentuk hidrazon atao osazon. Osazon yang terbentuk mempunyai bentuk kristal
dan titik lebur yang spesifik.
 Percobaan uji iod , kondensasi iodine dengan karbohidrat, selain
monosakarida dapat menghasilkan warna yang khas. Amilum dengan iodine dapat
membentuk kompleks biru, sedangkan dengan glikogen akan membentuk warna
merah. Oleh karena itu uji iod ini juga dapat membedakan amilum dan glikogen.
Prinsip uji Molisch, karbohidrat akan mengalami hidrolisis menjadi
monosakarida oleh asam sulfat pekat dan selanjutnya mengalami dehidrasi oleh asam
sulfat menjadi furtural atau hidroksi metal furtural yang kemudian dengan alfa naftol
akan berkondensasi membentuk senyawa kompleks yang berwarna ungu berupa
cincin pada batas antara larutan karbohidrat dengan asam sulfat, berfungsi untuk
memeriksa kandungan karbohidrat pada suatu larutan (Bercker 1972).
Reaksi yang terjadi dalam uji molisch adalah sebagai berikut:

+ H2SO4 🡪
Pentosa Furfural α-naftol
Gambar 2 Reaksi pada uji Molisch (pentosa)

Heksosa 5-hidroksimetil furfural α-naftol

Gambar 3 Reaksi pada uji Molisch (Heksosa)
Struktur dari cincin ungu yang terbentuk adalah sebagai berikut:
 Gambar 4 Cincin ungu
Uji benedict merupakan uji yang digunakan untuk mengetahui ada tidaknya
gula pereduksi di dalam suatu larutan. Teori yang mendasarinya adalah gula yang
mengandung gugus aldehida atau keton bebas akan mereduksi ion Cu2+ dalam
suasana alkalis, menjadi Cu+, yang mengendap sebagai Cu2O (kupro oksida)
berwarna merah bata. Pereaksi ini terdiri atas campuran larutan kupri sulfat, natrium
karbonat, dan natrium sitrat. Hasil yang diperoleh menunjukkan glukosa, fruktosa,
maltosa, dan laktosa dapat berekasi dengan perekasi Benedict karena memiliki gugus
aldehida dan keton bebas sedangkan sukrosa dan pati tidak termasuk gula pereduksi
karena kedua karbon dari masing-masing unitnya (Glukosa dan fruktosa) bertautan
dalam ikatan glikosidik sehingga tidak memilki gugus hemiasetal (Hart 2003).
Reaksi yang terjadi pada uji benedict adalah sebagai berikut:

Gula pereduksi endapan merah bata

Gambar 6 Reaksi pada uji Benedict
Uji barfoed menggunakan pereaksi yang terdiri atas larutan kupriasetat dan asam
asetat. Uji ini digunakan untuk membedakan antara monosakarida dengan disakarida.
Prinsip uji ini adalah perbedaan reaktifitas monosakarida dan disakarida dalam
mereduksi kupri asetat. Fungsi pemanasan pada uji ini adalah agar monosakrida dapat
lebih cepat mereduksi kupri asetat membentuk Cu2O daripada disakarida dengan
asumsi bahwa konsentrasi keduanya dalam larutan tidak berbeda banyak.
Reaksi yang terjadi pada uji Barfoed adalah:
 Pentosa Furfural Orsinol (kompleks berwarna biru)
Gambar 8 Reaksi pada uji Barfoed

Hasil yang diperoleh dalam percobaan ini adalah hanya fruktosa yang
membentuk endapan merah dan memekatkan warna larutannya menjadi biru tua.
Sukrosa dan maltosa juga memekatkan warna menjadi biru tua namun tidak
membentuk endapan. Pati dan laktosa tidak memekatkan warna larutan. Ini berarti
monosakarida lebih reaktif dalam mereduksi ion daripada sukrosa dan maltosa.
Secara umum, fermentasi adalah respirasi dalam lingkungan anaerobic dengan
tanpa akseptor electron eksternal. Produk fermentasi mengandung energy kimia yang
tidak teroksidasi penuh, tetapi tidak dapat mengalami metabolisme lebih jauh tanpa
oksigen atau akseptor electron lainnya (highly oxidized). Sehingga cenderung
dianggap produk buangan (samping) konsekuensinya adalah bahwa produksi ATP
dari fermentasi menjadi kurang efisisen dibandingkan oksidatif phosphorilation,
dimana piruvat teroksidasi penuh menjadi karbon dioksida (Baum J Stuart 1975).
Persamaan reaksi kimia:
C6H12O6 2C2H5OH + 2CO2 + 2 ATP (Energi yang dilepaskan: 118 kJ per
mol)
Fermentasi menghasilkan gas karbon dioksida yang terakumulasi, gas tersebut
dibuktikan dengan adanya isapan pada jari oleh natrium karbonat sebagai hasil reaksi
setelah ditambahkan sejumlah NaOH. Natrium karbonat yang terbentuk akan
mengurangi volume gas pada kaki tabung, sehimgga sejumlah gas terdorong keluar.
Untuk menyeimbangkan keadaan seperti semula, udara dari luar tabung akan masuk
mengisi tabung fermentasi tersebut. Oleh karena mulut tabung yang terbuka telah
disumbat dengan jari, udara dari luar tidak dapat masuk ke dalam tabung dan akan
menarik jari seperti adanya isapan yang lemah.
Prinsip uji Selliwanoff, peristiwa dehidrasi monosakarida ketosa menjadi
furtural lebih cepat dibandingkan dehidrasi monosakarida aldosa, hal ini dikarenakan
aldosa sebelum mengalami dehidrasi lebih dahulu mengalami transformasi menjadi
ketosa, dengan demikian aldosa akan bereaksi negatif. Reaksi ini berdasarkan
pembentukan 4-hidroksi metil furfural yang membentuk senyawa berwarna dengan
adanya resorsinol atau 1,3 dihidroksi benzena. Reaksi ini spesifik untuk ketosa. Hasil
yang diperoleh menunjukkan fruktosa menghasilkan perubahan warna, sedangkan
yang lain tidak menghasilkan perubahan warna. Perubahan warna yang dihasilkan
fruktosa lebih pekat daripada yang lain. Ini berarti fruktosa memiliki gugus keton
sehingga dapat membntuk 4-hidroksi metil furfural (Slamet S, dkk 2007).
Berikut reaksinya:

Gambar 10 Reaksi pada uji Selliwanof

Uji iod didasari oleh penambahan iod pada suatu polisakarida yang akan
menyebabkan terbentuknya senyawa kompleks absorpsi berwarna spesifik. Pati
dengan iod menghasilkan warna biru tua yang menandakan terdapatnya amilosa di
dalam pati. Agar-agar merupakan polisakarida tak bercabang ,campuran agarosa dan
agaropektin. Tepung agar-agar yang ditetesi dengan iod menghasilkan warna coklat
tua. Warna coklat tua menunjukkan adanya agarosa dalam agar-agar. sedangkan Gum
arab menghasilkan warna orange (Hein 1984).
Semua karbohidrat yang memiliki gugus aldehid dan keton yang bebas akan
membentuk osazon bila dipanaskan dengan fenil hidrazin berlebih. Osazon dapat
membentuk kristal yang spesifik untuk jenis karbohidrat tertentu sehingga selain
dapat digunakan untuk mengidentifikasi karbohidrat juga dapat digunakan untuk
membedakan beberapa monosakarida. Glukosa, fruktosa dan manosa dengan fenil
hidrazin mengahsilkan osazon yang sama dengan struktur kristal yang sama. Ini
karena ketiga monosakarida ini memiliki gugus H dan OH yang posisinya sama pada
atom karbon 3, 4, dan 5.
Berikut adalah reaksinya:

Fermentasi adalah produksi energi di dalam sel berupa respirasi yang terjadi
dalam kondisi anaerob (tanpa melibatkan oksigen). Jika respirasi aerob terjadi pada
sistem metabolisme energi manusia, pada kebanyakan tumbuhan dan hewan, respirasi
yang berlangsung adalah respirasi aerob, namun demikian dapat saja terjadi respirasi
aerob terhambat karena sesuatu hal, maka hewan dan tumbuhan tersebut
melangsungkan proses fermentasi yaitu proses pembebasan energi tanpa adanya
oksigen, yang disebut respirasi anaerob.
Respirasi anaerob merupakan reaksi pemecahan karbohidrat untuk
mendapatkan energi tanpa menggunakan oksigen. Perlu Anda ketahui sel jamur dan
bakteri dapat melakukan respirasi anorganik. Demikian juga apabila kita melakukan
konstraksi otot terlalu kuat misalnya berlari-lari, maka sel-sel jaringan otot kita juga
melakukan respirasi anaerob. Pada keadaan oksigen yang tidak mencukupi untuk
respirasi maka terjadi penimbunan asam laktat di dalam sel dan akan menimbulkan
kelelahan. Proses penguraian pada respirasi anaerob disebut fermentasi
 IV. SIMPULAN DAN SARAN

IV.1 Simpulan

Berdasarkan praktikum kali ini dapat disimpulkan bahwa uji berbagai macam
percobaan uji yang dicoba bertujuan untuk mengetahui struktur karbohidrat. Pada uji
Molisch, dapat terlihat larutan uji yang monosakarida adalah yang paling reaktif. Warna
ungu kemerah-merahan menyatakan reaksi yang positif. Hasil percobaan uji molish pada
larutan glukosa 1%, fruktosa 1%, sukrosa 1%, laktosa 1%, maltosa 1%, dan pati 1%
menghasilkan cincin berwarna ungu. Oleh karena itu, semua larutan yang dicobakan
mengandung karbohidrat. Uji benedict merupakan uji yang digunakan untuk mengetahui
ada tidaknya gula pereduksi di dalam suatu larutan. Hasil yang diperoleh menunjukkan
glukosa, fruktosa, maltosa, dan laktosa dapat berekasi dengan perekasi Benedict karena
memiliki gugus aldehida dan keton bebas sedangkan sukrosa dan pati tidak termasuk gula
pereduksi. Uji Bardfoed digunakan untuk membedakan antara monosakarida dengan
disakarida. Hasil uji menunjukkan bahwa fruktosa lebih reaktif dalam mereduksi ion
daripada bahan yang lain. Ketosa dan aldosa dibedakan melalui uji selliwanorf. Hasil yang
diperoleh menunjukkan fruktosa menghasilkan perubahan warna, sedangkan yang lain tidak
menghasilkan perubahan warna. Semua karbohidrat yang memiliki gugus aldehid dan keton
yang bebas akan membentuk osazon bila dipanaskan dengan fenil hidrazin berlebih.
Percobaan iodium didasari oleh penambahan iodium pada suatu polisakarida yang akan
menyebabkan terbentuknya senyawa kompleks abssorpsi berwarna spesifik. Pati dengan
iodium menghasilkan warna biru pekat yang menandakan terdapatnya amilosa di dalam
pati.
IV.2 Saran
Asprak lebih bisa interaktif dengan para praktikannya agar semua paham
materi yang disampaikan.
 V. DAFTAR PUSTAKA
Baum J Stuart, Scaife Charles.W.J.1975. Chemistry a Life Science Approach.
New York (US) : Macmillan Publishing Co.,Inc.

Becker, Raplh S, Wayne E.Entworth. 1972. General Chemistry. Boston:

Houghton Mifflin Company.

Hart, Harold. 2003. Kimia Organik: Suatu Kuliah Singkat Ed 11. Jakarta(ID) :
Erlangga.

Hein, Morris, Leo R.Best, Scott Pattison. 1984. Coolege Chemistry; An

Introduction to General, Organic, and Biochemistry 3rd edition. Monterey:
Brooks/Cole Publishing Company.

Slamet, S dkk. 2007. Analisa Bahan Makanan Dan Pertanian. Yogyakarta (ID) :
LIBERTY Yogyakarta