Subscribe to DeepL Pro to translate larger documents.

Visit www.DeepL.com/pro for more information.

Jurnal Internasional Farmasi: X2(2

020
)10
004
0

Daftar isi tersedia di ScienceDirect

Jurnal Internasional Farmasi: X

beranda jurnal: www.journals.elsevier.com/international-journal-of-pharmaceutics-x

Liposom yang meniru polimerom; Sebuah studi komparatif t e n t a n g manfaat polimerom

dalam hal formulasi dan stabilitas
Noorjahan Aibani, Talat N. Khan, Bridgeen Callan⁎
Institut Penelitian Ilmu Biomedis, Universitas Ulster, Cromore Road, Coleraine BT521SA, Inggris

A R T I K L EI N F A B S T R A C T
O
Beberapa dekade terakhir telah terjadi peningkatan yang signifikan dalam penelitian sistem penghantaran
Kata kunci: Polimer obat uni- lamelar berukuran nano berbasis polimer alternatif, yang disebut dengan polimerom. Manfaat yang
Liposom Liposom dilaporkan dari polimersom dibandingkan dengan liposom yang lebih tradisional termasuk peningkatan
Polimer amfifilik
stabilitas, khasiat enkapsulasi yang lebih tinggi, kemampuan beradaptasi yang lebih baik, dan berkurangnya
Studi perbandingan
perembesan air karena peningkatan ketebalan bilayer. Bersama-sama, keunggulan ini membuatnya cocok
Investigasi in-vitro
untuk sejumlah besar terapi. Karya yang disajikan dalam naskah ini menciptakan dan membandingkan empat
sistem penghantaran obat tersebut, dua berdasarkan liposom tradisional dan dua dibuat dari polimer amfifilik.
Dari sana kami menilai sistem-sistem ini dalam hal ukuran, stabilitas, efisiensi enkapsulasi, pelepasan obat,
toksisitas seluler, dan penyerapan seluler. Kami dapat mengonfirmasi dari investigasi komprehensif ini bahwa
poli-mersom sintetis multi-fungsional tidak diragukan lagi merupakan pesaing masa depan dalam bidang
nanomedisin yang berkembang ini. Kemampuan mereka untuk mengkapsulasi campuran senyawa yang
berbeda, stabilitas tinggi serta kemudahan beradaptasi akan memastikan bahwa mereka tampil menonjol di
masa depan sistem pengiriman obat canggih.

1. Pendahuluan laju pelepasan obat, kesulitan dalam mengesampingkan penghalang

Sejak pengembangan liposom pada tahun 1960-an, liposom telah
dipertimbangkan untuk berbagai aplikasi mulai dari bioimaging hingga
pengiriman gen dan vaksin, pengobatan infeksi dan peradangan,
penyakit paru-paru, dan terapi antikanker (Allen dan Cullis, 2013; Qu
dkk., 2014; Xu dkk., 2019). Liposom telah terbukti bermanfaat dalam
mengurangi efek samping obat yang dienkapsulasi dan terakumulasi
secara pasif di area pembuluh darah tinggi ketika ukuran partikel di
bawah 200 nm. Selain itu, penggabungan PEG memastikan bahwa ada
waktu peredaran darah yang lebih lama karena liposom tidak dikenali
oleh RES. Sejak liposom pertama yang tersedia secara komersial yang
mengandung doksorubisin (Doxil) lebih dari dua dekade yang lalu, ada
tujuh terapi liposom berbasis kanker tambahan yang menerima
persetujuan FDA, termasuk yang terbaru disetujui Vyxoes® untuk
leukemia mieloid akut, pada tahun 2017. Jumlah terapi berbasis
liposomal yang serupa tersedia secara komersial untuk perawatan
berbasis non-kanker (Bulbake et al., 2017). Selain terapi nano yang
telah mendapat persetujuan FDA, masih banyak lagi yang sedang
dalam berbagai tahap uji klinis.
Peningkatan yang terukur dalam formulasi liposom yang tersedia
secara komersial ini mungkin disebabkan oleh beberapa keterbatasan
yang dilaporkan; seperti ketidakstabilan fisik dan kimiawi karena sifat
biologis dan kebocoran obat dari waktu ke waktu (He et al., 2019; Qin
et al., 2011), kurangnya kontrol atas
seperti sawar darah otak, dan pemuatan obat yang tidak mencukupi
(Barenholz, 2001). Keterbatasan ini telah mendorong eksplorasi untuk
memperluas jangkauan nanoterapi kanker yang tersedia yang memiliki
sifat yang sama dalam merakit NPs monolayer atau bilayer dan dapat
mengatasi beberapa masalah yang terkait dengan liposom.
Saat ini terdapat berbagai macam sistem penghantaran obat
berukuran nano (DDS) untuk terapi kanker yang menggunakan bahan
yang dapat terurai secara hayati dan tidak dapat terurai secara hayati.
Ini termasuk tetapi tidak terbatas pada; misel (Torchilin, 2007), tabung
nano (Manzur et al., 2017), nanokapsul (Musyanovych dan Landfester,
2014), niosom (Kazi et al., 2018), dan polimer (Aibani et al., 2018;
Levine et al., 2008).
Dari semua variasi perakitan sendiri, biasanya molekul amfifilik,
polimersom paling mirip dengan struktur liposom (Rideau et al.,
2018). Discher et al. menunjukkan pada akhir 1990-an, kemampuan
kopolimer diblok untuk berkumpul menjadi vesikel bilayer yang
disebut polimersom (Discher et al., 1999; Discher dan Eisenberg,
2000). Polimer memiliki struktur vesikular yang mirip dengan liposom
dengan inti hidrofilik dan bilayer hidrofobik yang memungkinkan
enkapsulasi obat hidrofilik dan hidrofobik dengan korona hidrofilik.
Polimerom sebagai sistem penghantaran obat nanopartikulat telah
mendapatkan banyak perhatian akhir-akhir ini karena memiliki
beberapa keunggulan dibandingkan liposom seperti stabilitas yang
lebih tinggi, kontrol yang lebih baik terhadap sifat membran dan

⁎ Penulis korespondensi.
 Alamat email: b.callan@ulster.ac.uk (B. Callan).

https://doi.org/10.1016/j.ijpx.2019.100040
Diterima 8 Juli 2019; Diterima dalam bentuk revisi 23 Desember 2019; Diterima 29 Desember 2019
T e r
sed i
asecara online pada tanggal 31 Desember 2019
25
901
-5
67©
/ 2
019
D e
t
ib
r
o
k
t
ian
l
ehEl
sevi
erB.V.Artikel ini merupakan artikel yang dapat diakses
secara terbuka di bawah lisensiCCBY-NC-ND
(http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).
N. Aibani, et al.
kemampuan untuk merangkum berbagai macam obat (Lee dan Feijen,
2012). Mereka juga telah terbukti 'meletup' ketika dibuat dari polimer
yang sesuai yang memungkinkan peningkatan tekanan osmotik,
sesuatu yang tidak dapat dilakukan oleh lapisan liposom yang lebih
permeabel (Peyret et al., 2017).
Polimer terdiri dari polimer blok amfifilik yang mampu menyusun
diri menjadi vesikel skala nano, dengan PEG yang biasa digunakan sebagai
blok hidrofilik (Bleul et al., 2015). Polimer dengan berat molekul
tinggi ini memiliki sifat amfifilik yang mirip dengan lipid tetapi terdiri
dari rantai polimer yang terhubung secara kovalen sebagai rangkaian
dua atau lebih blok yang menawarkan membran yang lebih kompak
sehingga memberikan kekakuan dan stabilitas yang lebih baik pada
vesikula ini (Discher dan Ahmed, 2006). Selain itu, struktur modular
polimer dan kemudahan sintesis memungkinkan NP ini serbaguna dan
mudah beradaptasi dengan berbagai monomer dan rantai samping.
Penelitian yang disajikan di sini membandingkan secara langsung
dua struktur nanopartikel berlapis dua yang berbeda dengan membuat
kedua DDS dengan komposisi yang sama. Liposom dibuat dari fosfati-
dilkolin yang diekstrak dari telur atau kedelai karena merupakan
komponen utama membran sel (Raicu dan Popescu, 2008), kolesterol
yang membantu mencapai kekakuan membran bilayer dan lapisan luar
PEG yang memberikan sifat siluman pada liposom. Polimer
diformulasikan menggunakan polimer yang mengandung kolesteril dan
PEG. Lipid yang digunakan dalam liposom diganti dengan rantai alkil
heksadekanoat dan oleat, untuk mencerminkan komposisi lipid. Itu
Gbr. 1. Ilustrasi liposom dan polimerom dengan komponen yang sesuai. Hijau menggambarkan komponen PEG, biru muda rantai oleat, biru tua asetil kolin
bermuatan, abu-abu muda rantai heksadekanoat, dan abu-abu tua kolesteril. (Untuk interpretasi referensi warna pada legenda gambar ini, pembaca dapat merujuk
ke versi web artikel ini).
2
Jurnal Internasional Farmasi: X2(2
020
)
10
004
0
Formulasi selanjutnya ke dalam liposom dan polimerom menghasilkan
dua DDS dengan komposisi yang sama, satu-satunya variasi adalah
lipid dalam liposom diganti dengan polimer yang secara konstitusional
serupa, G b r . 1. Kami kemudian membandingkan kedua NP dalam
hal ra- dius hidrodinamik, PDI, stabilitas, enkapsulasi senyawa
hidrofobik dan hidrofilik, serta pelepasan obat dan muatan permukaan.
Hasilnya dilaporkan di bawah ini.
2. Bahan dan metode
2.1. Bahan
Kolesteril Kloroformat, Etilen diamina, 1-Oktadekanol, asam oleat,
(N, N′-Dikloheksilkarbodiimida) DCC, 4-(Dimetilaminopiridin) DMAP,
PEG-metakrilat (Mn 500), PEG-metilmetakrilat (Mn 2000), Asam
metakrilat, metoksi PEG (550 & 2000) 2000), 1 1′-azobis (sikloheks-
anekarbonitril) (AICN), L-α-Fosfatidilkolin dari kuning telur, FITC-CM-
Dekstran (FCD) 4 kDa, FITC-DEAE-Dekstran (FDD), FITC-Dextran (F-
D), antrasena, membran dialisis (MWCO 14.000), tablet PBS, pelat KLT
berlabel fluoresensi dengan alas aluminium yang dibeli dari bahan kimia
Sigma. Asam oleat, CDCl3 dibeli dari TCI, Jepang. DMEM, RPMI 1640,
Hams F12, Trypsin-EDTA, PenStrep dan Foetal bovine serum diperoleh dari
Thermofisher Scientific, Inggris. Semua sintesis dilakukan dalam kondisi
lembam di bawah gas nitrogen kecuali dinyatakan lain.
N. Aibani, et al. Jurnal Internasional Farmasi: X2(2
020
)
10
004
0

2.2. Sintesis monomer dan polimer

2.2.6. Karakterisasi senyawa
Berat molekul ditentukan dengan spektroskopi massa (1 mg/ml
2.2.1. Sintesis monomer kolesteril (1)
dalam metanol) menggunakan Thermo Finnigan LCQ Classic Ion Trap
Mengikuti prosedur yang telah dipublikasikan sebelumnya (Martin
LC-MS dalam mode elektron positif. Spektrum dianalisis menggunakan
et al., 2016),
Versi Tuneplus
1,044 ml (15,61 mol) Etilen Diamina dilarutkan dalam 5 ml DCM
1.0 SR1. 1Spektroskopi1 H NMR dilakukan dengan menggunakan
kering dan didinginkan di atas penangas es. 0,5007 g (1,11 mmol)
spektroskopi NMR Varian (500 MHz) dalam kloroform terdeuterasi dan
Kolesteril Kloroformat yang dilarutkan dalam 5 ml DCM kering
dianalisis dengan VNMRj
ditambahkan secara perlahan ke dalam larutan di atas dan diaduk
2.2 dan perangkat lunak Topspin 3.5 pl6. Ketebalan lapisan air tetap
semalaman. Produk dicuci 3 kali dengan air dan air garam dan
adalah
dikeringkan untuk menyisakan senyawa antara, kolesteril etilen amina
karbamat. 0,9889 g (2,09 mmol) zat antara dilarutkan dalam 20 ml
DCM kering dengan 0,1811 g (2,09 mmol) asam miristat dan 0,0522 g
(0,20 mmol) DMAP dan disimpan dalam penangas es. 0,5175 g (2,09
mmol) DCC yang dilarutkan dalam 20 ml DCM ditambahkan tetes
demi tetes dan diaduk selama 24 jam. Produk disaring dan filtrat
dikumpulkan dan dimurnikan menggunakan kolom silika gel dengan
Kloroform: 1Metanol 18:2 sebagai fase gerak dan dikarakterisasi
menggunakan13 C NMR dan spektroskopi massa.

2.2.2. Sintesis monomer oktadekil (2)

1-Oktadekanol (2,7 g, 9,98 mmol) dilarutkan dalam 30 ml DCM
kering dengan 0,244 g (0,002 mmol) DMAP dan 0,86 g (0,01 mmol)
asam metakrilat. Larutan DCC sebanyak 2,06 g (0,01 mmol) dibuat
dalam 20 ml DCM kering dan ditambahkan setetes demi setetes ke
dalam larutan ini dan dipertahankan semalaman di bawah gas nitrogen
yang konstan. Produk yang dihasilkan disaring dan dimurnikan
menggunakan silika gel dengan Kloroform: Metanol 18:2 sebagai fase
gerak dan selanjutnya dicuci 3 kali menggunakan asam klorida 0,1 M
menggunakan corong pisah dan dikeringkan untuk mendapatkan
monomer 2.

2.2.3. Sintesis monomer oleat (3)

Etilen diamin (3,088 ml, 48,0 mol) dilarutkan dalam 10 ml DCM.
Larutan berikut, 2,208 g (7,81 mmol) Asam Oleat dilarutkan dalam 5
ml DCM dengan 1,609 g (7,81 mmol) DCC dan 0,095 g (0,78 mmol)
DMAP, ditambahkan secara perlahan dan diaduk selama 48 jam pada
suhu 40 ° C. Produk yang dihasilkan dicuci 3 kali dengan air garam
dan dikeringkan untuk mendapatkan senyawa perantara, oleat
karbamat-etilen amina. 2,532 g (7,81 mmol) senyawa perantara
dilarutkan dalam 20 ml DCM dengan 0,6729 g (7,81 mmol) asam
metakrilat dan 0,09550 g (0,78 mmol) DMAP dalam penangas es.
1,612 g (7,81 mmol) DCC dilarutkan dalam
Larutan DCM 20 ml ditambahkan setetes demi setetes dan diaduk
selama 24 jam. Monomer 3 dimurnikan seperti yang disebutkan dalam
prosedur di atas.

2.2.4. Persiapan polimer (5a/b)

Monomer 1, 2, 3 dan polietilen glikol metakrilat 4a (Mn 500) atau
polietilen glikol metil eter metakrilat (Mn 2000) 4b diambil dalam
bejana reaksi dengan rasio (1:1:1:1 M) untuk P500 dan (1:1:1:0.25)
untuk P2000 dalam 20 ml Tetrahidrofuran anhidrat dengan 5 mg 1 1′-
azobis (sikloheksanekarbonitril), dibekukan-cairkan tiga kali di bawah
vakum dan disimpan pada suhu 80 ° C selama 72 jam. Polimer
diendapkan dan dicuci dengan heksana dengan sentrifugasi pada 6000
rpm selama 5 menit sebanyak tiga kali. Polimer akhir diperoleh
sebagai cairan kental berwarna kuning kental (5a) atau bubuk putih
(5b).

2.2.5. Sintesis kolesteril mPEG karbonat (6a/b)

2 g metoksi PEG Mn2000 (0,001 mol) atau 0,55 g metoksi PEG
Mn550 (0,001 mol) dan 0,449 g (0,001 mol) kolesteril kloroformat
dilarutkan dalam THF dalam penangas es dengan pemasukan nitrogen
yang konstan. Larutan diaduk pada suhu 45-50°C selama 48 jam,
dikeringkan dan dicuci dengan heksana untuk mendapatkan produk
akhir, kolesteril PEG (500) karbonat (6a) atau kolesteril PEG (2000)
karbonat (6b).
3
N. Aibani, et al. Studi pelepasan in-vitro dari polimerom
Jurnal dan liposom
Internasional Farmasi: X2dilakukan
(2020)
ditentukan dengan menggunakan 2 mg ml−1 liposom dan polimerom 10 004
0/ polimerom dalam tabung dialisis yang
dengan menempatkan liposom
yang dimuat dengan 20 μg ml−1 Rhodamin 6G dan disiapkan dengan
diikat di kedua ujungnya dan menempatkannya dalam PBS yang
metode eva- porasi fase terbalik seperti yang dijelaskan pada bagian
dipertahankan pada suhu 37 ° C dan diaduk menggunakan pengaduk
2.3.1. Ketebalan lapisan berair tetap (FALT) dihitung dengan zeta
magnetik. Alikuot diambil secara berkala dari
potensial (L) liposom dan polimerom yang diukur dalam berbagai
konsentrasi NaCl (0 mM, 10 mM, 50 mM, 100 mM), Log L diplot
terhadap k, di mana k = √C/
0,3 untuk garam univalen dan C adalah molalitas NaCl, memberikan
kemiringan yang merupakan ketebalan lapisan berair tetap dalam nm
(Shimada et al., 1995).

2.3. Formulasi liposom dan polimerom

2.3.1. Metode penguapan fase terbalik (RVE)

Alikuot 1 ml fosfatidilkolin telur dan 6a/b (500/2000) (2 mg ml−1
dalam rasio 9:1 M) atau 0,5 ml polimer 5a/b (500/2000) (2 mg ml−1 )
dalam kloroform diuapkan dalam labu bundar untuk membentuk
lapisan tipis. Senyawa yang dienkapsulasi (FCD, FDD atau F-D (100
μl 2 mg ml−1 dalam PBS)) ditambahkan, jika diperlukan, dan
diuapkan hingga kering.
0,5 ml kloroform ditambahkan dan larutan disonikasi selama 15
menit. Jika diperlukan NP yang mengandung antrasena, antrasena (66
μl dari 1 mg ml−1 dalam etanol) ditambahkan pada tahap ini (sebelum
sonikasi). 1 ml PBS ditambahkan ke larutan kloroform untuk liposom
atau 0,5 ml (2 mg ml−1 ) polimer 5a/b dalam PBS dengan 0,5 ml PBS
biasa ditambahkan untuk polimer dan disonikasi selama 30 menit
setelah itu kloroform diuapkan untuk membentuk 1 ml liposom /
polimer. Partikel nano yang dihasilkan disonikasi dalam sonikator
mandi selama 10 menit setelah pembentukan partikel.

2.3.2. Metode penguapan emulsi (EM-EV)

Alikuot 1 ml fosfatidilkolin telur dan 6a/b (550/2000) (2 mg ml−1
dalam rasio 9:1 M) atau 0,5 ml polimer 5a/b (2 mg ml−1 ) dalam
kloroform dicampur dengan 1 ml PBS untuk liposom dan 0,5 ml (2
mg ml−1 ) polimer dalam PBS dengan 0,5 ml PBS untuk polimerom.
Antrasena (66 μl dari 1 mg ml−1 dalam etanol) ditambahkan dalam
kloroform. Pewarna hidrofilik (100 μl dari 2 mg ml−1 ) ditambahkan
dalam PBS. Campuran kloroform-PBS yang dihasilkan disonikasi
selama 30-40 menit untuk membentuk emulsi. Lapisan kloroform
diuapkan untuk membentuk nanopartikel secara instan dan disonikasi
selama 10 menit untuk membentuk partikel unilamelar.

2.4. Karakterisasi nanopartikel

Efisiensi enkapsulasi polimer dan liposom yang dimuat dengan

pewarna hidrofilik diukur dengan penyaringan sentrifugal,
menggunakan metode yang dikembangkan sendiri. Polimer / liposom
ditempatkan dalam tabung dialisis (MWCO 14.000 Da) yang diikat di
kedua ujungnya dan ditempatkan di dalam tabung sentrifugasi.
Tabung-tabung ini kemudian disentrifugasi pada 3000rcf pada suhu 4
° C selama 2 jam. Filtrat yang dihasilkan dikumpulkan dan dianalisis
untuk obat yang tidak dienkapsulasi menggunakan spektrofotometer
Varian Cary Eclipse Fluorescence pada Ex 490 / Em 517 untuk FCD
(y = 32,318x, R2 = 0,9982), FDD (y = 18,063x, R2 = 0,9997) dan
F-D (y = 33,788x, R2 = 0,999).
Untuk efisiensi enkapsulasi antrasena, 100 μl suspensi nanopartikel
yang mengandung antrasena diencerkan hingga 2 ml dengan etanol
dan diukur konsentrasi antrasena pada Ex 355 / Em 400 (y =
221,14x, R2 = 0,9987). Ukuran partikel diukur dengan menambahkan
100 μl partikel nano dalam 1 ml PBS dievaluasi untuk ukuran dan
PDI menggunakan Malvern Nano-ZS Zetasizer, versi lebih lembut
7.03. Dalam setiap kasus, puncak yang paling melimpah dikutip
dengan n = ≥ 3. Potensial zeta diamati menggunakan elektroda sel
Universal Dip. Morfologi partikel diamati menggunakan scanning
electron microscopy (SEM), suspensi nanopartikel dikeringkan
semalaman di atas rintisan aluminium dan dilapisi dengan lapisan
Emas/Paladium ultra-tipis pada 18 mA selama 3 menit menggunakan
Polaron Equipment Ltd. E5100 Sputter coater dan diamati di bawah
FEI Quanta 200 ESEM dalam mode vakum tinggi.
4
N. Aibani, et al. Jurnal Internasional Farmasi: X2(2
020
)
10
004
0
sebelum diberi perlakuan dengan polimersom dan liposom kosong
dengan konsentrasi 250 dan 500 μg/ml dan diinkubasi semalam. Jumlah
sel hidup setelah perawatan ditentukan dengan menggunakan uji MTT
yang diukur pada 570 nm untuk intensitas warna relatif terhadap
konsentrasi sel hidup.

Gbr. 2. Monomer 1-4 digunakan dalam reaksi polimerisasi dan senyawa 6,

disiapkan untuk penggabungan di dalam liposom.

waktu dan dianalisis dengan metode analitik yang relevan. Jumlah

sampel yang dibuang diganti dengan PBS baru untuk mempertahankan
kondisi bak cuci.

2.5. Studi kultur sel

Semua sel diperoleh dari repositori lini sel internal. Sel HeLa
dikultur dalam media DMEM dengan 10% FBS dan 1% Penstrep dan
1% NEAA (asam amino non-esensial). Sel BxPC-3 dikultur dalam
media RPMI 1650 dengan 10% FBS dan 1% Penstrep sedangkan sel
CHO ditumbuhkan dalam media Hams F12 dengan 10% FBS dan 1%
Penstrep, 1% Glutamin dan 1% NMEAA. Sel ditumbuhkan dalam inkubator
HeraCell pada suhu 37°C dengan pemasukan konstan 5% CO2 . Semua
sel dihitung menggunakan penghitung sel otomatis Invitrogen
Countess Automated.

2.5.1. Studi serapan seluler

1 × 105 sel ml−1 (100 μl) Sel HeLa dimasukkan ke dalam 96
sumuran dan diinkubasi semalam setelah itu FCD (250 μg ml−1 )
atau an- trasena (50 μg ml−1 ) liposom/ polimerom, disaring secara
steril dengan menggunakan
Filter Millex MCE 0,45 μm, ditambahkan pada volume 100 μl dalam
PBS dan diinkubasi selama 4 jam pada suhu 37°C. Setelah inkubasi, sel
dicuci dua kali dengan PBS dan diukur menggunakan pembaca
lempeng mikro Fluostar Omega pada Ex 480 nm / Em 520 nm untuk
FCD dan Ex 355 nm / Em 460 nm untuk antrena. Setelah pengukuran
fluoresensi, estimasi protein sel dilakukan dengan cara melisiskan sel
dan menambahkan 25 μl 0,1% Triton-X100 ke dalam setiap sumuran
dengan inkubasi selama 15 menit pada suhu 37°C. Estimasi protein
dilakukan dengan menggunakan kit BCA Protein assay setelah
diinkubasi pada suhu 37°C selama 30 menit dan mengukur absorbansi
pada 562 nm. Hasil serapan seluler dilaporkan sebagai fluoresensi per
mg protein.

2.5.2. Mekanisme penyerapan sel dengan penghambatan endositosis

Sel HeLa diinkubasi dengan 100 μl 30 μM Chlorpromazine
Hydrochloride dalam media selama 30 menit. Setelah itu media
supernatan dibuang dan sel diinkubasi dengan polimersom/liposom
yang mengandung FCD selama 4 jam seperti yang dijelaskan di atas.
Sel kemudian dicuci dua kali dengan PBS dan dianalisis untuk fluoresensi
FCD seperti yang disebutkan sebelumnya.

2.5.3. Studi toksisitas seluler

Toksisitas sel dari PS2000 dan LS2000 kosong diamati pada 3
garis sel yaitu sel HeLa, sel BxPC-3 dan sel CHO. 100 μl 5 × 104
sel/ml dimasukkan ke dalam 96 sumuran dan diinkubasi semalam
5
N. Aibani, et al. menggunakan media berair.
Jurnal Internasional Farmasi: X2(2
020
)
2.6. Studi stabilitas 1
000
40

Suspensi nanopartikel menjalani studi stabilitas pada suhu 5°C

(disimpan di lemari es) dan 25°C (inkubator) selama 8 minggu.
Sampel diambil secara berkala dan dianalisis untuk mengetahui
efisiensi dan ukuran enkapsulasi.

2.7. Analisis statistik

Semua data dilaporkan dengan SEM dan n = 3 kecuali dinyatakan

lain. Signifikansi statistik kelompok ditentukan dengan menggunakan
uji-t Student's t tidak berpasangan dua sisi di Graphpad Prism Versi
5.01.

3. Hasil

3.1. Sintesis monomer dan polimer

Polimer disiapkan untuk meniru komposisi yang biasa ditemukan

dalam liposom dengan konformasi masing-masing NP yang
ditampilkan pada Gambar 1. Monomer yang disiapkan untuk
polimerisasi meliputi; kolesteril, PEG, oleat dan oktadekil dengan
modifikasi (jika perlu) untuk memastikan bahwa monomer-monomer
tersebut mengandung gugus olefin yang penting untuk adisi Michael
dalam reaksi polimerisasi. Monomer yang digunakan dalam sintesis
polimer 5 ditampilkan pada Gambar 2 (senyawa 1-4), dengan
senyawa 6 adalah komponen kolesteril-PEG yang digunakan dalam
pembentukan liposom. Polimer 5a dibuat dengan menggunakan 4a,
dengan PEG 500, dan polimer 5b dibuat dengan menggunakan PEG
2000 dengan berat molekul yang lebih tinggi (4b).
Semua monomer dikarakterisasi dengan MS dan1 H NMR (lihat
informasi pendukung S1-S4) dan dikonfirmasi. Polimerisasi terjadi
melalui inisiasi radikal bebas menggunakan AICN, dengan produksi
ko-polimer acak. Konten dikontrol secara ketat menggunakan rasio
molar, dengan ilustrasi produk potensial yang ditunjukkan pada Gbr.
1. NMR digunakan untuk mengkonfirmasi bahwa adisi Michael telah
terjadi dengan hilangnya proton olefinik (S5).
Fraksi blok hidrofilik, nilai f, adalah ukuran yang berguna untuk
volume hidrofilik sehubungan dengan keseluruhan polimer, terutama
pada polimer berbasis PEG. Ini dihitung dengan rumus f = Hp / Hp +
Hn di mana Hp adalah volume PEG dan Hn adalah volume
keseluruhan fraksi polimer. Nilai f harus 25% <f <40% untuk
mendapatkan vesikula uni-lamelar berbentuk bola (Christian et al.,
2009; Guan et al., 2015; Letchford dan Burt, 2007). Nilai f dari 5a
ditentukan sebesar 25% (rasio 1: 4 M) dan 5b sebesar 30% (rasio 1:
3,25 M) yang menunjukkan bahwa kedua polimer tersebut mampu
membentuk polimer bola dua lapis. Mengingat bahwa gugus PEG
adalah satu-satunya entitas hidrofilik dalam polimersom, jumlah yang
ada sangat penting untuk perakitan sendiri. Ini tidak terjadi pada
liposom karena gugus kepala fosforilkolin polar pada lipid, sehingga
nilai yang lebih rendah dari 10% dipilih karena sebelumnya telah
terbukti memiliki waktu sirkulasi yang meningkat (Doi et al., 2019;
Ren et al., 2019), sementara pada saat yang sama memungkinkan
penggabungan cho-lesteryl 10%.

3.2. Persiapan dan karakterisasi liposom dan polimerom

Empat NP dibuat dengan menggunakan dua metode literatur yang

berbeda. Mereka termasuk liposom dan polimer yang mengandung
PEG pendek (Mn500) dan disebut sebagai LS500 (liposom) dan
PS500 (polimer). Selain itu, dua NP yang mengandung Mn PEG yang
lebih besar (2000) disebut sebagai LS2000 (liposom) dan PS2000
(polimer). Ada sejumlah metode berbeda yang tersedia dalam literatur
yang membahas tentang pembuatan NP (Joshi et al., 2016; Sadzuka et
al., 2002). Dua metode yang paling umum digunakan untuk
pembuatan liposom (tanpa bantuan perangkat mikrofluida) adalah
metode eva- porasi fase terbalik (RPE), kadang-kadang disebut
sebagai hidrasi film tipis (TFH) dan metode penguapan emulsi (EM-
EV). Metode RPE melibatkan hidrasi film polimer/lipid tipis yang
terbentuk setelah penguapan vakum dalam labu bundar dengan 6
N. Aibani, et al. Jurnal Internasional Farmasi: X2(2
020
)
10
004
0

Tabel 1
Diameter hidrodinamik, PDI dan Zeta potensial liposom (LS500 dan LS2000) dan polimer (PS500 dan PS2000) yang merangkum senyawa hidrofobik dan
hidrofilik.

FCD LS500 PS500 LS2000 PS2000

Ukuran (nm) EMEV 305.9 ± 14.6 174.2 ± 45.4 318.5 ± 84.6 223.4 ± 50.3
RPE 266.1 ± 31.2 163.4 ± 66.8 239.2 ± 55.4 162.9 ± 20.1
PDI EMEV 0.5 ± 0.1 0.8 ± 0.1 0.4 ± 0.07 0.4 ± 0.1
RPE 0.5 ± 0.09 0.7 ± 0.2 0.4 ± 0.1 0.3 ± 0.05
Zeta (mV) EMEV -10.2 ± 4.09 1.8 ± 1.2 -10.05 ± 1.8 2.2 ± 1.6
RPE -8.1 ± 2.1 1.6 ± 1.7 -10.8 ± 1.8 0.9 ± 1.5

Antrasena LS500 PS500 LS2000 PS2000

Ukuran (nm) EMEV 174.6 ± 5.6 316.2 ± 76.0 442.9 ± 48.1 419.4 ± 69.7
RPE 348.2 ± 18.5 184.8 ± 23.5 300.2 ± 71.0 261.9 ± 82.6
PDI EMEV 0.3 ± 0.09 1± 0 0.4 ± 0.03 0.4 ± 0.03
RPE 0.4 ± 0.05 0.9 ± 0.1 0.4 ± 0.09 0.5 ± 0.1
Zeta (mV) EMEV -11.9 ± 0.7 3.5 ± 1.0 -2.6 ± 1.3 4.8 ± 0.1
RPE -9.8 ± 1.8 3.1 ± 0.3 -3.6 ± 0.7 4.5 ± 0.2

Gbr. 3. (a) Grafik distribusi ukuran representatif dari polimer yang menunjukkan pembentukan polimer bilayer dengan ukuran sekitar 150 nm dan sejumlah kecil misel
yang terbentuk dalam proses tersebut. (b) Gambar SEM dari polimersom PS2000, dengan diameter yang disorot, dari atas ke bawah, dari 412, 359, 298, 356 dan 606 nm.

polimersom, namun
seperti PBS (Cortesi dkk., 1999; Pattni dkk., 2015). EM-EV adalah
metode yang disederhanakan di mana NPs dibentuk dengan penguapan
fase organik dari emulsi di bawah tekanan rendah dalam satu langkah
(Elorza dkk., 1993; Patil dan Jadhav, 2014).

3.2.1. Pengaruh senyawa yang dienkapsulasi dan metode formulasi terhadap

diameter hidrodinamik, PDI, potensial zeta dan efisiensi enkapsulasi
Tabel 1 menampilkan diameter hidrodinamik, PDI dan zeta
potensial yang dicapai dari keempat formulasi dengan menggunakan
dua metode preparasi yang berbeda. Selain itu, dua senyawa dengan
nilai logP yang sangat berbeda dienkapsulasi, senyawa hidrofilik dan
bermuatan negatif, fitc-cm-dextran (FCD), dan senyawa hidrofobik
antrasena. Seperti yang dapat dilihat dari hasil yang ada, ada beberapa
variasi, tidak hanya metode yang digunakan untuk menyiapkan NP,
tetapi juga efek dari senyawa yang dienkapsulasi. Secara umum,
ukuran partikel terkecil dicatat untuk metode penguapan fase terbalik
yang membutuhkan hidrasi film selama periode waktu tertentu dengan
langkah tambahan sonikasi probe yang mengubah partikel
multilamelar menjadi unilamelar dan dengan demikian membantu
mengurangi ukuran. Ukuran rata-rata liposom ditemukan lebih tinggi
daripada ukuran polimersom yang sesuai. Dengan demikian
menunjukkan bahwa muatan pada gugus kepala lipid bertanggung
jawab atas radius hidrodinamik yang lebih besar ini. Peningkatan
ukuran dicatat untuk liposom enkapsulasi antrasena, kemungkinan
besar karena peningkatan lapisan hidrofobik dalam kasus ini, karena
liposom diketahui memiliki lapisan yang lebih tipis daripada
7
N. Aibani, et al. Jurnal Internasional Farmasi: X2(2
020
)
Peningkatan juga diamati untuk polimerom. Hal ini mungkin 10
004
0
disebabkan oleh kesamaan dalam gugus fungsi PEG.
LS500, LS2000 dan PS2000 semuanya memiliki PDI yang sesuai
berkisar antara 0,3-0,5 dengan PS500 memiliki PDI yang lebih tinggi
sekitar 0,7-1,0. Kurangnya monodispersitas pada PS500 kemungkinan
besar disebabkan oleh fraksi blok hidrofilik, nilai f, yang berada di
ujung bawah dari jumlah yang diperlukan untuk menghasilkan sistem
dua lapis. Discher dkk. (2007) melaporkan bahwa kopolimer blok
yang memiliki fraksi hidrofilik (f) 35% ± 10% berat dari total
polimer umumnya cenderung merakit diri menjadi polimersom,
sedangkan polimer dengan f> 45% cenderung membentuk misel dan
yang memiliki f <25% membentuk mikrostruktur terbalik, sehingga
PS500 berada di ujung bawah dari nilai f dapat menunjukkan bahwa
pembentukan NP alternatif hadir di samping polimerom. Evaluasi
potensial zeta menunjukkan bahwa semua sistem yang dimuat
polimersom hampir netral, memiliki muatan positif hingga 5 mV,
sedangkan liposom memiliki muatan negatif bersih hingga 12 mV.
LS2000 dan PS2000 sedikit lebih bermuatan positif daripada LS500
dan PS500 masing-masing karena kepadatan molekul PEG yang
lebih tinggi. Secara umum, liposom dan polimerom yang dimuat
antrasena sedikit lebih positif daripada sistem yang dimuat FCD.
Metode preparasi tidak berpengaruh pada potensi zeta dari kedua
jenis NP.
Kurva distribusi ukuran representatif dari PS2000 ditampilkan
dalam
Gbr. 3a. Pemindaian gambar mikroskopis elektron (Gbr. 3b) dari PS2000
mengkonfirmasi bentuk partikel yang bulat, dengan ukuran yang
seragam. Juga disarankan dari hasil DLS yang ditunjukkan pada Gbr. 3a
adalah pembentukan

8
N. Aibani, et al.
Tabel 2
Ketebalan lapisan air tetap (nm) dengan panjang rantai PEG yang berbeda.
Formulasi LS500 PS500 LS2000 PS2000
FALT (nm) 0.78 ± 0.12 0.63 ± 0.46 1.40 ± 0.46 1.71 ± 0.20
partikel yang lebih kecil, mungkin misel, ditunjukkan sekitar 10 nm
dalam dia- meter. Hal ini tidak terlalu mengejutkan mengingat
tingginya persentase PEG yang termasuk dalam formulasi, namun,
karena PEG beroperasi sebagai satu-satunya entitas hidrofilik dalam
formulasi Ps, penting bahwa jumlah yang disertakan cukup untuk
menghasilkan keseimbangan antara molekul hidrofobik dan hidrofilik.
Hampir tidak ada variasi dalam efisiensi enkapsulasi liposom dan
polimerom FCD dengan PEG 500 dan 2000 untuk kedua metode
preparasi (S6). Metode penguapan fase terbalik menunjukkan bahwa
efisiensi enkapsulasi FCD baik dalam liposom maupun polimerom
cukup tinggi (mencapai sekitar 75%). Hal ini berkaitan dengan temuan
Sardan dkk. yang telah menunjukkan bahwa efisiensi enkapsulasi
hingga 75% dari obat hidrofilik seperti Dox dalam liposom dapat
dicapai ketika disiapkan dengan metode penguapan fase terbalik
(Sardan dkk., 2013). Dalam kasus lain, telah terjadi enkapsulasi hingga
40% protein yang sangat larut dalam air seperti Drosophilia AChE dan
kalsium kromat hidrofilik dalam liposom yang dibuat dengan metode
hidrasi lapisan tipis (Colletier et al., 2002; Thompson et al., 2009).
Efisiensi enkapsulasi FCD yang sedikit lebih rendah (hingga 60%)
diamati pada liposom LS500 yang memiliki panjang rantai PEG yang
lebih kecil tetapi ada efisiensi enkapsulasi yang baik dalam polimerom
untuk PS500 dan PS2000. Dengan demikian menunjukkan bahwa
kemanjuran enkapsulasi yang tinggi dapat dicapai untuk semua
formulasi terlepas dari ukuran rantai PEG untuk bahan hidrofilik
seperti FCD. Demikian pula, ada enkapsulasi tinggi antrasena
hidrofobik di LS2000 dan PS2000 dan sedikit lebih sedikit di LS500
dan PS500 mengingat sifat PEG 2000 yang lebih padat, masuk akal
jika jebakan molekul yang lebih baik tercapai.
Oleh karena itu, dari pengamatan karakteristik di atas, maka
menyimpulkan bahwa metode RPE menghasilkan NP homogen
berukuran lebih kecil dibandingkan dengan dua metode preparasi
lainnya untuk formasinya yang diperiksa dan digunakan untuk semua
investigasi selanjutnya.
3.2.2. Ketebalan lapisan air tetap (FALT)
Lapisan hidrofilik PEG yang mengelilingi NPs dikaitkan dengan
pencegahan interaksi dengan protein serum. Hal ini disebut sebagai
ketebalan lapisan berair tetap (FALT) dan dapat diukur dengan
mengevaluasi potensi zeta dari NPs dalam konsentrasi NaCl yang
berbeda. FALT liposom dan polimerom dengan PEG 500 (masing-
masing LS500 dan PS500) dan PEG 2000 (masing-masing LS2000
dan PS2000) ditentukan dalam Tabel 2 dan menunjukkan bahwa luas
lapisan PEG di sekitarnya dari kedua polimerom dan liposom
sebanding.
3.2.3. Pengaruh enkapsulasi senyawa bermuatan pada jari-jari
hidrodinamika, PDI, potensial zeta dan efisiensi enkapsulasi
Untuk mengetahui pengaruh muatan pada senyawa yang
dienkapsulasi, LS2000 dan PS2000 yang dienkapsulasi FDD (muatan
positif) F-D (Netral) dan FCD (muatan negatif) dibuat dengan metode
RPE dan dievaluasi karakteristik partikelnya (Tabel 3). Ukurannya
sesuai dengan yang diharapkan dari percobaan kami sebelumnya dan
mengkonfirmasi bahwa dalam
Tabel 3
Karakterisasi LS2000 dan PS2000 yang dimuat dengan senyawa FDD (Positif), F-D (Netral) dan FCD (negatif).
LS2000 PS2000
FDD dimuat
Ukuran (nm) 286 ± 22 154 ± 14
Jurnal Internasional Farmasi: X2(2
020
)
10
004
0
Gbr. 4. Profil pelepasan LS2000 (garis hitam) dan PS2000 (garis abu-abu) yang
mengkapsulasi FD bermuatan netral (lingkaran) FDD bermuatan positif (salib)
dan FCD bermuatan negatif (kotak).
Dalam semua kasus, liposom lebih besar dari polimer yang sesuai.
Ukuran partikel dan PDI LS2000 dan PS2000 tidak dipengaruhi oleh
muatan senyawa enkapsulasi. Mungkin tidak mengherankan,
perbedaan terbesar dicatat dalam potensial zeta dengan muatan pada
senyawa enkapsulasi yang sangat mempengaruhi muatan permukaan
secara keseluruhan. Meskipun semua formulasi memiliki obat yang
tidak dienkapsulasi yang dipindahkan kembali setelah persiapan,
perubahan substansial dalam muatan permukaan ini akan menunjukkan
bahwa interaksi antara permukaan dan senyawa yang tidak
dienkapsulasi adalah daya tarik yang lebih besar daripada gradien
konsentrasi, sehingga beberapa senyawa tetap dekat dengan
permukaan NP dan dengan demikian menetralkan muatan. Efisiensi
enkapsulasi juga serupa yang mengarah pada kesimpulan bahwa
muatan tidak berpengaruh pada enkapsulasi dan ukuran atau PDI
liposom dan polimer, hal ini sekali lagi dapat dikaitkan dengan lapisan
PEG padat yang melapisi permukaan liposom dan polimer.
Dengan adanya kesamaan dalam efisiensi enkapsulasi, profil
pelepasan senyawa yang berbeda dari masing-masing formulasi dibuat
dan ditampilkan pada Gambar 4.
Polimerom telah dilaporkan memiliki pelepasan kargo yang lebih
lambat dibandingkan dengan liposom (Ahmed dan Discher, 2004;
Chiang dkk., 2013) dengan hasil kami untuk senyawa netral (FD) yang
mengkonfirmasi hasil ini, Gbr. 4. Hal ini kemungkinan besar
disebabkan oleh peningkatan ketebalan bilayer hidrofobik di dalam
polimer. Senyawa bermuatan negatif (FCD) memiliki sedikit efek pada
kinetika pelepasan, dengan profil yang hampir sama dengan senyawa
netral. Tidak mengherankan jika senyawa bermuatan positif memiliki
pelepasan paling lambat dari liposom, kemungkinan besar karena
interaksi elektrostatik yang menunda transfer dari NP yang bermuatan
negatif. Perbandingan antara potensial zeta liposom yang mengandung
senyawa netral (-7,1 mV) dengan senyawa positif (-0,9 mV) (Tabel 3)
adalah konfirmasi lebih lanjut dari interaksi ini, dan pada
kenyataannya hal ini menunjukkan bahwa FDD dapat mentransmisikan
liposom seperti biasa, tetapi tetap berada di korona dan menetralkan
muatan permukaan negatif. Profil pelepasan dari polimerom agak lebih
menggugah pikiran. FCD bermuatan negatif memiliki profil pelepasan
yang sama dari polimer seperti dari liposom, tampaknya tidak
terhalang oleh peningkatan
LS2000 PS2000 LS2000 PS2000
F-D dimuat FCD dimuat
242 ± 40 147 ± 46 239 ± 55 163 ± 20
9
N. EE (%) et al.
Aibani, 81 ± 2 87 ± 2 68 ± 2 72 ± 19 Jurnal 75 ±
Inte 7sional Farmasi:76
rna X2±(22020)
PDI 0.4 ± 0.07 0.2 ± 0.01 0.3 ± 0.05 0.3 ± 0.09 10
000 0.4 ± 0.1
4 0.3 ± 0.05
Zeta (mV) -0.9 ± 1.9 4.0 ± 0.8 -7.1 ± 1.1 2.1 ± 1.3 -10.8 ± 1.8 0.9 ± 1.5

1
0
N. Aibani, et al.
Gbr. 5. Penyerapan seluler di dalam sel Hela dari NP yang merangkum
muatan hidrofobik atau hidrofilik.
ketebalan bilayer hidrofobik, menunjukkan bahwa daya tarik Van der
Waals antara senyawa ini lebih sedikit dibandingkan dengan senyawa
netral dalam bilayer. Selain itu, senyawa bermuatan positif, FDD,
memiliki profil pelepasan yang secara substansial terhambat, mirip
dengan liposom yang tertarik secara elektrostatik dengan FDD. Salah
satu penjelasan yang mungkin untuk hal ini adalah ikatan silang antara
senyawa dan rantai polimer yang berpotensi terhidrolisis, namun,
analisis lebih lanjut akan diperlukan untuk mengonfirmasi.
3.3. Penyerapan seluler dari FCD dan polimersom dan liposom yang
dimuat antrasena
Dalam upaya untuk menentukan penyerapan seluler dari 4 NP,
setiap DDS diisi dengan pewarna hidrofilik (FCD) atau pewarna
hidrofobik (an- trasen) dan keduanya diinkubasi dengan sel HeLa
selama 4 jam pada suhu 37°C dengan konsentrasi 250 μg ml−1 FCD
dan 50 μg ml−1 trasen. Seperti yang terlihat pada Gambar 5, PS500
yang mengandung FCD memiliki penyerapan yang lebih tinggi
(h i n g g a 0,9 ± 0,3 μg / mg protein) jika dibandingkan dengan
konsentrasi senyawa y a n g sama dalam PS2000 (0,6 ± 0,08), LS500
(0,5 ± 0,1) atau LS2000 (0,4 ± 0,09). Ketika mempertimbangkan
jari-jari hidrodinamik dari masing-masing formulasi ini, PS500
menunjukkan ukuran terkecil, sehingga kemungkinan besar ukuran NP
adalah faktor yang paling signifikan dalam kasus ini, terutama ketika
membandingkan PS500 dengan salah satu formula liposom. Oleh
karena itu, hal ini menunjukkan bahwa formulasi PS2000
menghasilkan nilai yang lebih rendah dari yang diharapkan, salah satu
saran yang mungkin adalah bahwa PS500 memiliki rentang partikel
yang lebih luas, mengingat nilai PDI yang lebih tinggi, sebuah
fenomena yang dapat dihilangkan dengan metode ekstrusi. Penyerapan
antrasena dalam polimer PS500 dan PS2000 (masing-masing 1,01 ±
0,2 dan 0,5 ± 0,002) secara signifikan lebih tinggi
1
1
Jurnal Internasional Farmasi: X2(2
020
)
10
004
0
daripada liposom yang sesuai. Karena sifat muatan negatif dari
membran plasma, partikel bermuatan positif dan netral berukuran kecil
lebih baik diserap dan diendositosis daripada partikel bermuatan
negatif terutama melalui endositosis yang dimediasi oleh clathrin
(Hillaireau dan Couvreur, 2009; Sadat dkk., 2016). Karena ukurannya
yang lebih kecil dan muatannya yang netral, polimerom terbukti
menguntungkan untuk penyerapan yang cepat ke dalam sel. Oleh
karena itu dapat disimpulkan bahwa polimersom memiliki penyerapan
yang setidaknya sama baiknya dan dalam banyak kasus lebih unggul
untuk FCD dan antrasena daripada liposom. Kopolimer acak yang
memiliki kolesterol dengan PEG 500 dan rantai samping desil telah
dilaporkan memiliki penyerapan FCD yang tinggi pada sel HeLa
(Martin et al., 2016).
Mekanisme penyerapan seluler dievaluasi dengan penghambatan
endositosis secara kimiawi menggunakan klorpromazin HCl dan NP
yang dikapsulasi dengan FCD. Klorpromazin menghambat
pembentukan lubang yang dilapisi clathrin dengan perpindahan
reversibel clathrin dan protein adaptornya dari membran sel ke
vesikula intraseluler sehingga menghambat endositosis melalui jalur
ini (Swaminathan et al., 2014; Vercauteren et al., 2010).
Penyerapan seluler PS500 dan PS2000 menurun secara signifikan
sebesar
37,6 ± 19,7% dan 46,3 ± 21,0% masing-masing pada penghambatan
endositosis sehingga menunjukkan bahwa penyerapan polimerom
sebagian besar oleh endositosis yang dimediasi oleh clathrin (S7).
Miller dkk. telah menunjukkan bahwa liposom yang distabilkan secara
steril dengan PEG 2000 mengalami endositosis yang jauh lebih sedikit
daripada liposom nonpegilasi konvensional dan ada kemungkinan
bahwa liposom tersebut diambil oleh mekanisme lain (Miller dkk.,
1998).
3.4. Toksisitas sel menggunakan uji MTT
Liposom yang dibuat dengan PEG 2000 telah banyak digunakan
dalam penelitian untuk terapi antikanker karena sifatnya yang
tersembunyi dan memberikan penyamaran yang efektif dari protein
serum (Marqués-Gallego dan Kroon, 2014; Van Den Hoven dkk.,
2013; Zhang dkk., 2016). Oleh karena itu, hanya dua NP yang
menggunakan PEG dengan berat yang lebih tinggi yang dianalisis
lebih lanjut dalam penelitian ini. Studi toksisitas sel dari liposom
kosong dan polimerom pada konsentrasi yang berbeda dalam tiga garis
sel setelah inkubasi semalam diamati menggunakan uji MTT. Gbr. 6a
menyajikan viabilitas sel dari polimersom dan liposom pada 0,25 mg /
ml pada sel HeLa, sel CHO dan sel BxPC-3. Tidak ada perbedaan yang
signifikan secara statistik dalam toksisitas sel dari liposom dan
polimerom kosong pada sel Hela dan BxPC-3 dengan viabilitas 85,5 ±
4 , 6% dan
87,2 ± 9 , 4% untuk liposom dalam sel HeLa dan BxPC-3 dan
73,0 ± 3,9% dan 86,8 ± 6,2% untuk polimerom dalam sel HeLa dan
BxPC-3. Polimerom secara statistik sedikit lebih toksik terhadap sel
CHO pada 0,25 mg / ml yang menunjukkan kelangsungan hidup sel
77,3 ± 2,6% viabilitas dibandingkan dengan liposom yang memiliki
viabilitas 88,0 ± 1,4%.
Jika dibandingkan dengan toksisitas sel pada konsentrasi 0,5 mg/ml
(Gbr. 6b), ditemukan bahwa polimersom secara signifikan lebih toksik
terhadap sel pada konsentrasi yang lebih tinggi. Terdapat 55,4 ± 1,7%
viabilitas sel
N. Aibani, et al. Jurnal Internasional Farmasi: X2(2
020
)
10
004
0

Gbr. 6. (a) Viabilitas sel 0,25 mg/ml NPs yang diinkubasi selama 16 jam dengan berbagai garis sel. (b) Viabilitas sel 0,5 mg/ml NPs yang diinkubasi selama 16 jam
dengan berbagai garis sel.

1
2
N. Aibani, et al. Jurnal Internasional Farmasi: X2(2
020
)
10
004
0

Gbr. 7. Studi jangka panjang tentang retensi dan ukuran obat dengan penyimpanan pada suhu 5 atau 25°C menggunakan PS2000 dan LS2000 yang dimuati
dengan antrasena atau FCD. a. % retensi obat dari waktu ke waktu pada suhu 5°C dan b. 25°C. c. Perubahan diameter hidrodinamik dari waktu ke waktu pada
suhu 5°C dan d. 25°C, kunci diberikan pada pojok kanan atas.

4. Kesimpulan
sel HeLa ketika diobati dengan polimerom dan 71,5 ± 2,5% sel dapat
hidup dalam sel CHO sedangkan 83,6 ± 8,2% sel dapat hidup
Polimer adalah pembawa nanopartikel polimer multiguna yang
dalam garis sel BxPC-3 dibandingkan dengan liposom yang
dapat diadaptasi untuk berbagai aplikasi dalam nanomedisin.
memiliki 81,7 ± 4,4,
91,0 ± 0,8 dan 98,5 ± 5,9% viabilitas pada sel HeLa, CHO dan
BxPC-3.
Peningkatan toksisitas polimerom dibandingkan liposom dapat
menjadi akibat langsung dari peningkatan penyerapan seluler seperti
yang terlihat pada Gambar 5.

3.5. Studi stabilitas fisik

Stabilitas fisik liposom selalu menjadi perhatian terutama untuk

tujuan praktis penyimpanan dan penanganan. Kami membandingkan
studi stabilitas PS2000 dengan LS2000 yang dimuat dengan FCD dan
an- trasena dalam kondisi dingin dan 25 ° C selama 8 minggu dan
mengevaluasinya untuk ukuran dan efisiensi enkapsulasi (untuk
menentukan retensi obat). Seperti yang terlihat pada Gambar 7a,
retensi obat LS2000 dan PS2000 dari FCD dan antrasena tidak
terpengaruh secara signifikan pada kondisi berpendingin, namun
karena jumlah obat yang dipertahankan sedikit menurun pada suhu 25
° C untuk FCD dalam liposom dan polimerom, terjadi penurunan
drastis dalam retensi obat liposom antrasena.
Penurunan retensi obat ini tercermin dalam peningkatan ukuran
liposom setelah 8 minggu (Gbr. 7 kiri bawah, kanan bawah). Retensi
obat antrasena pada PS2000 tidak terpengaruh dibandingkan dengan
LS2000 dan juga ukuran PS2000 lebih stabil setelah 8 minggu pada
suhu 25°C dibandingkan dengan LS2000 baik untuk FCD maupun
antrasena. Ada sedikit peningkatan ukuran polimersom dengan FCD
setelah 8 minggu pada suhu 5 °C. Ukuran liposom antrasena tidak
terpengaruh pada suhu 5 °C. Oleh karena itu, penelitian kami
menyimpulkan bahwa liposom lebih stabil dalam kondisi dingin tetapi
bisa tidak stabil ketika disimpan pada suhu kamar yang sesuai dengan
pengamatan sebelumnya dalam literatur (Muppidi et al., 2012;
Thompson et al., 2009), sedangkan ukuran dan efisiensi enkapsulasi
PS2000 dari FCD dan antrasena stabil pada suhu 25 ° C. Dengan
demikian, dapat disimpulkan bahwa polimersom lebih stabil daripada
liposom sehingga memberikan keunggulan dibandingkan liposom.

1
3
N. Aibani, et al. Jurnal Internasional Farmasi: X2(2
020
)
Polimer yang dibuat dengan kopolimer acak terbukti lebih 10
004
0
menguntungkan daripada kopolimer blok karena kemudahan
pembuatannya. Dalam penelitian ini kami telah mensintesis
kopolimer acak menggunakan oktadekanol, asam oleat, kolesterol,
dan PEG 500 (PS500) atau PEG2000 (PS2000) untuk mendapatkan
komposisi kimia yang mirip dengan liposom (LS500 dan LS2000).
Polimer ini mampu menyusun sendiri untuk membentuk polimersom
bilayer ketika dibuat dengan metode penguapan fase terbalik dan
dibandingkan dengan liposom. Polimer ini memiliki efisiensi
enkapsulasi yang baik untuk pewarna hidrofilik (FCD) dan hidrofobik
antrasena. Jari-jari hidrodinamik dari polimer lebih kecil daripada
liposom dan memiliki penyerapan seluler yang lebih baik dari FCD
dan an- trasena daripada liposom. Polimer tidak beracun bagi sel pada
konsentrasi 0,25 mg / ml dan memiliki profil pelepasan muatan yang
sebanding dengan liposom untuk senyawa bermuatan, tetapi lebih
lambat untuk senyawa netral. Stabilitas fisik polimer lebih baik
daripada liposom ketika disimpan pada suhu 25 °C selama 8 minggu.
Dengan demikian, kami telah berhasil mensintesis polimersom
biomimetik, serbaguna, biokompatibel, dan stabil yang meniru
liposom yang merangkum berbagai jenis senyawa dan memiliki
serapan seluler yang baik. Penelitian yang disajikan di sini
menegaskan bahwa, dengan komponen yang sebanding, polimer
amfifilik memang merupakan pesaing yang mumpuni untuk liposom.
Potensi penuh dari polimerom muncul seiring dengan meningkatnya
keserbagunaan dan inovasinya, seperti kemungkinan transportasi gas
(Kim et al., 2019) atau pembuatan gelembung (Zhu et al., 2018), akan
sangat menarik untuk melihat penggunaannya berkembang sebagai
sistem terapi multifungsi dan inovatif.

Deklarasi Kepentingan Bersaing

Para penulis menyatakan bahwa mereka tidak memiliki

kepentingan keuangan atau hubungan pribadi yang dapat
mempengaruhi pekerjaan yang dilaporkan dalam makalah ini.

Ucapan Terima Kasih

TNK dan NA mengucapkan terima kasih kepada Universitas Ulster

atas beasiswa penelitian Wakil Rektor mereka

1
4
N. Aibani, et al.
Lampiran A. Data tambahan
Data tambahan untuk artikel ini dapat ditemukan secara online di
https:// doi.org/10.1016/j.ijpx.2019.100040.
Referensi
Ahmed, F., Discher, DE, 2004. Polimerom yang berpori sendiri dari PEG-PLA dan PEG-
PCL: vesikula pelepasan terkontrol yang dipicu oleh hidrolisis. J. Kontrol. Release.
https://doi.org/ 10.1016/j.jconrel.2003.12.021.
Aibani, N., Nesbitt, H., Marino, N., Jurek, J., O'Neill, C., Martin, C., di Bari, I., Sheng, Y.,
Logan, K., Hawthorne, S., McHale, A., Callan, J.F., Callan, B., 2018. Polimer netral
elektron untuk kemoterapi kanker gabungan. Acta Biomater. https://doi.org/
10.1016/j.actbio.2018.09.005.
Allen, TM, Cullis, PR, 2013. Sistem penghantaran obat liposomal: dari konsep hingga
aplikasi klinis . Adv. Drug Deliv. Rev. https://doi.org/10.1016/j.addr.2012.09.037.
Barenholz, Y., 2001. Aplikasi liposom: Masalah dan prospek. Curr. Opin. Colloid
Interface Sci. https://doi.org/10.1016/S1359-0294(00)00090-X.
Bleul, R., Thiermann, R., Maskos, M., 2015. Teknik untuk mengontrol ukuran polimer.
Makromolekul. https://doi.org/10.1021/acs.macromol.5b01500.
Bulbake, U., Doppalapudi, S., Kommineni, N., Khan, W., 2017. Formulasi liposom dalam
penggunaan klinis: tinjauan terbaru. Pharmaceutics. https://doi.org/10.3390/
pharmaceutics9020012.
Chiang, W.H., Huang, W.C., Chang, C.W., Shen, M.Y., Shih, Z.F., Huang, Y.F., Lin, S.C.,
Chiu, H.C., 2013. Polimerom yang difungsikan dengan gel polielektrolit berlapis
untuk pengiriman terapi multimodal dan pencitraan MR yang ditargetkan pada
tumor yang potensial. J. Control. Rilis.
https://doi.org/10.1016/j.jconrel.2013.03.029.
Christian, D.A., Cai, S., Bowen, D.M., Kim, Y., Pajerowski, J.D., Discher, D.E., 2009.
Pembawa polimer: dari perakitan sendiri hingga siRNA dan terapi protein. Eur. J.
Pharm. Biopharm. https://doi.org/10.1016/j.ejpb.2008.09.025.
Colletier, JP, Chaize, B., Winterhalter, M., Fournier, D., 2002. Enkapsulasi protein
dalam liposom: efisiensi tergantung pada interaksi antara protein dan lapisan bi-
fosfolipid. BMC Biotechnol. https://doi.org/10.1186/1472-6750-2-9.
Cortesi, R., Esposito, E., Gambarin, S., Telloli, P., Menegatti, E., Nastruzzi, C., 1999.
Pembuatan liposom dengan penguapan fase terbalik menggunakan pelarut organik
alternatif. J. Microencapsul. https://doi.org/10.1080/026520499289220.
Discher, D.E., Ahmed, F., 2006. Polymersomes. Annu. Rev Biomed. Eng. https://doi.org/
10.1146/annurev.bioeng.8.061505.095838.
Discher, D.E., Eisenberg, A., 2000. Vesikel Polimer. J. Coll, Interface Sci.
Discher, B.M., Won, Y.Y., Ege, D.S., Lee, J.C.M., Bates, F.S., Discher, D.E., Hammer, D.A.,
1999. Polimer: vesikel tangguh yang terbuat dari kopolimer diblok. Science (80-.).
https://doi.org/10.1126/science.284.5417.1143.
Discher, D.E., Ortiz, V., Srinivas, G., Klein, M.L., Kim, Y., Christian, D., Cai, S., Foto, P.,
Ahmed, F., 2007 Agustus 1. Aplikasi yang muncul dari polimer dalam pengiriman:
dari dinamika molekuler hingga penyusutan tumor. Kemajuan dalam Ilmu Polimer 32
(8-9), 838-857.
Doi, Y., Shimizu, T., Ishima, Y., Ishida, T., 2019. Penyimpanan jangka panjang
oksaliplatin lipo-somal ter-PEGilasi dengan peningkatan stabilitas dan waktu
sirkulasi yang lama secara in vivo. Int. J. Pharm.
https://doi.org/10.1016/j.ijpharm.2019.04.042.
Elorza, B., Elorza, MA, Frutos, G., Chantres, JR, 1993. Karakterisasi liposom bermuatan
5 - f l u o r - u s a s i l y a n g dibuat dengan metode penguapan fase terbalik atau
ekstrusi pembekuan-pencairan: studi pelepasan obat. BBA - Biomembr.
https://doi.org/10.1016/ 0005-2736(93)90398-J.
Guan, L., Rizzello, L., Battaglia, G., 2015. Polimer dan aplikasinya dalam penghantaran
dan terapi kanker . Nanomedicine. https://doi.org/10.2217/nnm.15.110.
He, H., Lu, Y., Qi, J., Zhu, Q., Chen, Z., Wu, W., 2019. Mengadaptasi liposom untuk
pengiriman obat oral . Acta Pharm. Sin. B. https://doi.org/10.1016/j.apsb.2018.06.005.
Hillaireau, H., Couvreur, P., 2009. Masuknya nanocarrier ke dalam sel: relevansinya
dengan penghantaran obat . Sel. Mol. Life Sci. https://doi.org/10.1007/s00018-009-
0053-z.
Joshi, S., Hussain, MT, Roces, CB, Anderluzzi, G., Kastner, E., Salmaso, S., Kirby, DJ,
Perrie, Y., 2016. Pembuatan liposom berbasis mikrofluida yang secara simultan
menjebak obat hidrofilik dan lipofilik. Int. J. Pharm. https://doi.org/10.1016/j.
ijpharm.2016.09.027.
Kazi, KM, Mandal, AS, Biswas, N., Guha, A., Chatterjee, S., Behera, M., 2018. Niosom:
masa depan sistem pengiriman obat yang ditargetkan. J. Adv. Pharm. Technol. Res.
doi. https:// doi.org/10.4103/0110-5558.76435.
Kim, J., Jeong, S., Korneev, R., Shin, K., Kim, K.T., 2019. Polimer Taut Silang dengan
Deformabilitas Reversibel dan Kemampuan Transportasi Oksigen.
Biomacromolecules. https://doi.org/10.1021/acs.biomac.9b00485.
Lee, J.S., Feijen, J., 2012. Polimer untuk penghantaran obat: desain, pembentukan dan
karakterisasi. acterization. J. Control. Release.
https://doi.org/10.1016/j.jconrel.2011.10.005.
Letchford, K., Burt, H., 2007. Tinjauan pembentukan dan klasifikasi struktur
nanopartikulat kopolimer blok amfifilik: misel, nanosfer, nanokapsul, dan polimer.
Eur. J. Pharm. Biofarm. https://doi.org/10.1016/j.ejpb.2006.11. 009.
Levine, D.H., Ghoroghchian, P.P., Freudenberg, J., Zhang, G., Therien, M.J., Greene, M.I.,
Hammer, D.A., Murali, R., 2008. Polimer: alat multi-fungsi baru untuk diagnosis
dan terapi kanker. Methods. https://doi.org/10.1016/j.ymeth.2008.05. 006.
Manzur, A., Oluwasanmi, A., Moss, D., Curtis, A., Hoskins, C., 2017. Nanoteknologi
dalam terapi kanker pankreas. Pharmaceutics. https://doi.org/10.3390/
1
5
Jurnal Internasional Farmasi: X2(2
020
)
10
004
0
pharmaceutics9040039.
Marqués-Gallego, P., de Kroon, A.I.P.M., 2014. Strategi ligasi untuk menargetkan
pembawa nano liposomal . Biomed. Res. Int.
doi:https://doi.org/10.1155/2014/129458.
Martin, C., Marino, N., Curran, C., McHale, AP, Callan, JF, Callan, B., 2016. Kolesteril
untuk meningkatkan penyerapan seluler dari polimer dalam sel HeLa. Int. J.
Pharm. https://doi.org/10.1016/j.ijpharm.2016.07.036.
Miller, CR, Bondurant, B., McLean, SD, McGovern, KA, O'Brien, DF, 1998. Interaksi
liposom-sel in vitro: efek muatan permukaan liposom pada pengikatan dan en-
doktosis liposom konvensional dan liposom yang distabilkan secara steril.
Biochemistry. https:// doi.org/10.1021/bi980096y.
Muppidi, K., Pumerantz, A.S., Wang, J., Betageri, G., 2012. Studi pengembangan dan
stabilitas formulasi vankomisin liposomal baru. ISRN Pharm. https://doi.org/
10.5402/2012/636743.
Musyanovych, A., Landfester, K., 2014. Mikro dan nanokapsul polimer sebagai pembawa
biologis dengan sifat multifungsi. Macromol. Biosci. https://doi.org/10.1002/
mabi.201300551.
Patil, Y.P., Jadhav, S., 2014. Metode baru untuk persiapan liposom. Chem. Phys. Lipids.
https://doi.org/10.1016/j.chemphyslip.2013.10.011.
Pattni, B.S., Chupin, V.V., Torchilin, V.P., 2015. Perkembangan baru dalam penghantaran
obat liposomal . Chem. Rev. https://doi.org/10.1021/acs.chemrev.5b00046.
Peyret, A., Ibarboure, E., Tron, A., Beauté, L., Rust, R., Sandre, O., McClenaghan, ND,
Lecommandoux, S., 2017. Polimerisasi meletup oleh kejutan osmotik yang diinduksi
cahaya di bawah kendali temporal, spasial, dan spektral. Angew. Chemie - Int. Ed.
https://doi. org/10.1002/anie.201609231.
Qin, G., Li, Z., Xia, R., Li, F., O'Neill, B.E., Goodwin, J.T., Khant, H.A., Chiu, W., Li,
K.C., 2011. Liposom terpolimerisasi parsial: stabil terhadap kebocoran namun mampu
melepaskan secara instan untuk penghantaran obat yang dikendalikan dari jarak jauh.
Nanotechnology. https:// doi.org/10.1088/0957-4484/22/15/155605.
Qu, MH, Zeng, RF, Fang, S., Dai, QS, Li, HP, Long, JT, 2014. Pengiriman bersama
siRNA dan docetaxel berbasis liposom untuk pengobatan sinergis kanker paru-paru.
Int. J. Pharm. https://doi.org/10.1016/j.ijpharm.2014.08.019.
Raicu, V., Popescu, A., 2008. Komposisi dan arsitektur sel. Dalam: Biofisika Molekuler
dan Seluler Terpadu, https://doi.org/10.1007/978-1-4020-8268-9_2.
Ren, H., He, Y., Liang, J., Cheng, Z., Zhang, M., Zhu, Y., Hong, C., Qin, J., Xu, X., Wang, J.,
2019. Peran ukuran liposom, muatan permukaan dan PEGilasi pada terapi penargetan
rheumatoid arthritis. ACS Appl. Mater. Interfaces. https://doi.org/10.1021/acsami.
8b22693.
Rideau, E., Dimova, R., Schwille, P., Wurm, FR, Landfester, K., 2018. Liposom dan
polimer: tinjauan komparatif terhadap peniruan sel. Chem. Soc. Rev.
https://doi.org/10.1039/c8cs00162f.
Sadat, S.M.A., Jahan, S.T., Haddadi, A., 2016. Pengaruh ukuran dan muatan permukaan
nanopartikel polimer pada aplikasi in vitro dan in vivo. J. Biomater.
Nanobiotechnol. https://doi.org/10.4236/jbnb.2016.72011.
Sadzuka, Y., Nakade, A., Hirama, R., Miyagishima, A., Nozawa, Y., Hirota, S., Sonobe,
T., 2002. Efek modifikasi polietileneglikol campuran pada ketebalan lapisan berair
tetap dan aktivitas antitumor liposom yang mengandung doksorubisin. Int. J. Pharm.
https://doi.org/10.1016/S0378-5173(02)00075-3.
Sardan, M., Kilinc, M., Genc, R., Tekinay, A.B., Guler, M.O., 2013. Sistem liposomal
terintegrasi peptida amfifil yang menembus sel untuk meningkatkan pengiriman obat
antikanker ke sel tumor. Faraday Discuss. https://doi.org/10.1039/c3fd00058c.
Shimada, K., Miyagishima, A., Sadzuka, Y., Nozawa, Y., Mochizuki, Y., Ohshima, H.,
Hirota, S., 1995. Penentuan ketebalan lapisan berair tetap di sekitar liposom yang
dilapisi polietileneglikol. J. Drug Target. https://doi.org/10.3109/
10611869509015957.
Swaminathan, S., Fowley, C., McCaughan, B., Cusido, J., Callan, JF, Raymo, FM, 2014.
Pertukaran tamu intraseluler antara inang supramolekuler yang dinamis. J. Am. Chem.
Soc. https://doi.org/10.1021/ja500285p.
Thompson, A.K., Couchoud, A., Singh, H., 2009. Perbandingan enkapsulasi hidrofobik dan
h i d r o f i l i k menggunakan liposom yang dibuat dari fosfolipid turunan gumpalan
lemak susu dan fosfolipid kedelai. Dairy Sci. Technol. https://doi.org/10.1051/
dst/2008036.
Torchilin, V.P., 2007. Pembawa nano misel: perspektif farmasi. Pharm. Res.
https://doi.org/10.1007/s11095-006-9132-0.
Van Den Hoven, J.M., Nemes, R., Metselaar, J.M., Nuijen, B., Beijnen, J.H., Storm, G.,
Szebeni, J., 2013. Aktivasi komplemen oleh liposom ter-PEGilasi yang
mengandung pra- dnisolon. Eur. J. Pharm. Sci.
https://doi.org/10.1016/j.ejps.2013.03.007.
Vercauteren, D., Vandenbroucke, R.E., Jones, A.T., Rejman, J., Demeester, J., De Smedt,
S.C., Sanders, N.N., Braeckmans, K., 2010. Penggunaan inhibitor untuk
mempelajari jalur endositik pembawa gen: optimasi dan jebakan. Mol. Ther.
doi:https://doi.org/ 10.1038/mt.2009.281.
Xu, H., Ohulchanskyy, TY, Yakovliev, A., Zinyuk, R., Song, J., Liu, L., Qu, J., Yuan, Z.,
2019. Nanoliposom yang merangkum agen kontras pencitraan CT dan foto-sensitizer
untuk terapi fotodinamik yang dipandu pencitraan u n t u k kanker.
Theranostics. h t t p s : / / d o i . o r g / 1 0 . 7 1 5 0 / t h n o . 3 1 0 7 9 .
Zhang, Q., Lu, L., Zhang, L., Shi, K., Cun, X., Yang, Y., Liu, Y., Gao, H., He, Q., 2016.
Sistem penghantaran liposomal berfungsional ganda untuk tumor padat berdasarkan
RGD dan peptida antimikroba yang responsif terhadap pH. Sci. Rep.
https://doi.org/10.1038/srep19800.
Zhu, D., Fan, F., Huang, C., Zhang, Z., Qin, Y., Lu, L., Wang, H., Jin, X., Zhao, H., Yang, H.,
Zhang, C., Yang, J., Liu, Z., Sun, H., Leng, X., Kong, D., Zhang, L., 2018. Polimer
penghasil gelembung yang dimuat dengan indocyanine green dan doksorubisin untuk
kemoterapi yang efektif yang dikombinasikan dengan terapi fototermal. Acta Biomater.
https://doi.org/10.1016/j.actbio.2018.05.033.