MAKU N I R E V I E W

Bioteknologi kopi

César De Los Santos-Briones dan S. M. Teresa Hernández-Sotomayor*

Unit Biokimia Tumbuhan dan Biologi Molekuler, Pusat Penelitian Ilmiah Yucatán A.C., Calle 43 No. 130, Chuburna de Hidalgo, ZIP
97200, Mérida, Yucatán, México. *Penulis koresponden: ths@cicy.mx

Dalam tiga dekade terakhir, minat telah berubah menjadiin vitrokultur sel di berbagai bidang penelitian kopi.In vitroteknik
telah diterapkan tidak hanya untuk perbaikan kopi melalui transformasi genetik tetapi juga untuk mempelajari berbagai aspek
dalam sel kopi seperti kimia (sintesis kafein dan produksi aroma kopi), fisiologis dan baru-baru ini, aspek biokimia. Uang
muka yang paling penting diperoleh sampai saat iniin vitroteknik kopi di bidang-bidang seperti biokimia, fisiologi, sistem
regenerasi dan rekayasa genetika, disajikan dan didiskusikan.
Kata kunci:Kopi, kopi, transformasi genetik,in vitrokultur jaringan, regenerasi, embriogenesis somatik.

Bioteknologi kopi:Selama tiga dekade terakhir, perhatian telah diberikan pada kultur sel.in vitrodi berbagai bidang penelitian
kopi. Teknik iin vitrotelah diterapkan tidak hanya untuk perbaikan kopi, melalui transformasi genetik, tetapi juga untuk
mempelajari berbagai aspek, seperti kimia (sintesis kafein dan produksi aroma), fisiologis dan, baru-baru ini, biokimia.
Kemajuan terpenting diperoleh dalam teknik budidayain vitrokopi di berbagai bidang seperti biokimia, fisiologi, sistem
regenerasi dan rekayasa genetika akan disajikan dan didiskusikan.
Kata kunci:Kopi, kopi, budidayain vitro, embriogenesis somatik, regenerasi, transformasi genetik.
teknik pemuliaan tanaman tradisional
tidak berhasil sejakC. arabikaadalah tetraploid sedangkan
spesies lainnya diploid. Di samping itu,C.canephoradan
PERKENALAN spesies non-arabika lainnya tidak cocok dengan diri sendiri.
Kopi, salah satu komoditas yang paling banyak Akibatnya, transfer sifat-sifat genetik dari spesies liar dari
diperdagangkan di pasar internasional, merupakan tanaman genus ke yang dibudidayakanC. arabikabudidaya cukup
pertanian yang memiliki kepentingan ekonomi yang sulit. Komplikasi lebih lanjut adalahKopiperiode panjang
signifikan. Kopi ditanam di 80 negara di seluruh dunia untuk perkembangan buah dan waktu generasi
dengan 70% diproduksi oleh petani kecil. Selain menjadi kacang-ke-kacang. Siklus perkembangbiakan tanaman kopi
sumber pendapatan bagi jutaan orang, itu merupakan membutuhkan waktu empat tahun, i. e., biji menjadi
generasi mata uang asing. tumbuhan berbunga dan kembali menjadi biji. Seleksi untuk
Dari lebih dari 100 spesies kopi, hanya dua yang merupakan hasil biasanya dilakukan dari tanaman kopi berumur 6-8
spesies komersial:Kopi arabikaL. (kopi jenis arabika) tahun.
danCanephora kopiP. mantan Fr. (kopi jenis canephora atau Diperlukan beberapa siklus persilangan dan seleksi hingga
robusta). Kopi jenis arabika khas daerah tumbuh dataran ditemukan genotipe unggul. Untuk memastikan kesetiaan
tinggi dan bertanggung jawab atas hampir 75% produksi melalui perbanyakan benih, diperlukan enam siklus selfing.
dunia sedangkan 25% sisanya ditempati oleh kopi jenis Mempertimbangkan satu siklus untuk hibridisasi dan seleksi
Robusta yang ditanam di daerah dataran rendah. dan enam siklus untuk homozigositas benih, program
Di antara kedua spesies tersebut, kopi arabika merupakan pemuliaan kopi yang normal memerlukan waktu 28 tahun.
minuman yang unggul namun cukup sensitif terhadap Semua ketidaknyamanan ini membuat pendekatan
berbagai hama (jamur, nematoda, dan serangga), sedangkan tradisional seperti itu mahal dan memakan waktu. Kemajuan
kopi robusta menghasilkan kopi dengan kualitas lebih rendah dalam teknik kultur sel tanaman memberikan peluang untuk
namun lebih tahan terhadap hama. Meskipun diinginkan mempersingkat waktu yang dibutuhkan untuk perbaikan
untuk menggabungkan sifat-sifat genetik ini, sebagian besar kopi.

Braz. J. Tumbuhan Physiol., 18(1):217-227, 2006

C. DE LOS SANTOS-BRIONES dan S. M. T. HERNÁNDEZ-SOTOMAYOR
218

Untungnya, dekade terakhir telah menjadi saksi mata
perkembangan alat teknologi baru yang memperkenalkan
potensi besar dalam peningkatan pertumbuhan tanaman.
Selain perbaikan pertumbuhan secara konvensional, teknik
tersebut dapat mempercepat pelepasan varietas dengan sifat
baru. Bioteknologi tumbuhan menawarkan beberapa
kemungkinan untuk meningkatkan produktivitas,
diversifikasi dan produksi. Teknologi ini mencakup teknik
kultur jaringan tanaman, penggunaan teknik biologi
molekuler canggih untuk transformasi tanaman, analisis
genom ditambah dengan pemuliaan dan diagnosis penyakit
tanaman. Kelompok teknik baru ini telah ditambahkan ke
kotak alat untuk memperkuat program guna mendapatkan
hasil panen yang lebih baik. Tujuannya masih sama dengan
yang tradisional: untuk meningkatkan sifat sedemikian rupa
sehingga tanaman yang dihasilkan mencapai sifat agronomi
yang unggul tetapi dengan cara yang lebih cepat dan efisien.
Di antara faktor-faktor yang membatasi produksi kopi
adalah kerentanan yang berbeda terhadap beberapa penyakit,
efisiensi fotosintesis, pemanfaatan air dan toleransi terhadap
keasaman tanah dan aluminium.
Kultur jaringan tanaman telah memungkinkan produksi
massal tanaman, meningkatkan kapasitas perbanyakan
tanaman dengan sifat agronomi tertentu. Ini juga telah
menjadi alat utama untuk penyelidikan dasar dan praktis di
bidang pertanian. Perkembangan baru ini meliputi
perbanyakan klon, kultur suspensi sel, kultur anter/polen,
kultur embrio, isolasi dan regenerasi protoplas, dan
pengembangan plantlet interspesifik baru.in vitro.
Selanjutnya, iniin vitroteknik telah memungkinkan studi
pada tingkat seluler dan molekuler menjadikan tanaman kopi
sebagai “model” di antara spesies berkayu. "Pabrik model"
ini memiliki banyak potensi dalam penelitian biologi
molekuler, biokimia dan bioteknologi.
In vitrometode kultur jaringan pada kopi
Regenerasi tanaman melalui kultur jaringan harus sangat
efektif untuk perbanyakan dan perbaikan tanaman kopi.
Meskipun tujuan utama dari studi awal adalah untuk
menetapkan protokol untuk meregenerasi spesies kopi,
pengembangan protokol ini dan kemajuan terbaru
memungkinkan untuk menerapkan teknik ini untuk
mempelajari berbagai aspek lainnya.
Persyaratan pertama untuk meregenerasi tanaman dalam
jumlah besar adalah memperoleh populasi sel yang besar. Ini
disertai dengan membuang sebagian kecil tanaman (eksplan)
dan menempatkannya di media cair atau padat. Media ini
harus mengandung berbagai nutrisi dan hormon yang cukup
bagi sel untuk membelah dan bereproduksi dan akhirnya
membentuk kumpulan sel yang besar (suspensi jika cair).
Braz. J. Tumbuhan Physiol., 18(1):217-227, 2006
media, kalus jika media padat). Setelah waktu yang tepat,
bila biakan primer ini cukup besar, dapat dibagi lagi dan/atau
dipindahkan ke media lain tergantung pada jenis regenerasi
yang diperlukan.
Kultur Kalus:Pembentukan kalus dari eksplan
kadang-kadang terjadi secara spontan, tetapi umumnya
membutuhkan auksin dalam medium, seringkali dalam
kombinasi dengan sitokinin. Laporan perintis tentang kultur
jaringan kopi dilakukan oleh Staritsky (1970) yang
menggunakan ruas-ruas pucuk ortotrofik muda sebagai
eksplan. Dia memperoleh kalus yang tumbuh cepat
menggunakan media Linsmaier dan Skoog yang
dimodifikasi (1965) yang dilengkapi dengan sukrosa (30
g.L-1), tiamin HCl (1 mg.L-1), L-sistein HCl (10
mg.L-1),myo-inositol (100 mg.L-1), kinetin (0,1 mg.L-1),
asam 2,4-diklorofenoksiasetat (2,4-D, 0,1 mg.L-1) atau
naphthalene acetic acid (NAA, 1 mg.L-1).
Belakangan, Sharp et al. (1973) membentuk kalus dari biji,
pucuk, daun dan kepala sariKopi arabikadan menggunakan
media garam yang sama tetapi meningkatkan beberapa
komponen organik untuk membuat biakan ini. Mereka
menemukan kondisi (kurangnya pencahayaan dan suhu
28°C) di mana sel kalus berkembang biak lebih efisien.
Monako dkk.(1974) memperoleh proliferasi sel yang cepat
pada permukaan eksplan dari buah yang sedang berkembang
dengan biji yang belum matangKopi arabikaDanstenophylla
kopiyang ditanam dalam gelap pada suhu 25-28°C dan
dalam medium yang digunakan oleh Staritsky (1970) tetapi
tanpa 2,4-D.
Mereka mengamati perbedaan dalam tingkat proliferasi sel
dan tekstur jaringan perisperma yang dikultur yang
bervariasi dari kalus putih yang rapuh hingga kalus padat
berwarna krem. Studi awal yang disebutkan di atas adalah
dasar untuk pekerjaan selanjutnya dan membuka
kemungkinan penerapan teknik semacam ini dalam
formulasi, pengembangan dan perbaikan prosedur untuk
menginduksi potensi morfogenetik pada spesies kopi
lainnya. Selanjutnya, Herman dan Haas (1975) memperoleh
perbanyakan klonalC. arabikadari kultur kalus melalui
pembentukan organoid; dan Söndahl dan Sharp (1977; 1979)
menetapkan kondisi untuk pembentukan embrio somatik dari
kalus daun yang diinduksi auksinC. arabikamenggunakan
media dengan kombinasi auksin dan sitokinin yang berbeda.
Suspensi sel dan Kultur Protoplas:Pembentukan kultur
suspensi sel telah digunakan dalam kopi untuk berbagai
tujuan, seperti interfase untuk mendapatkan embrio somatik,
isolasi protoplas, regenerasi tanaman, dll. Meskipun Keller
et al. (1972) melaporkan produksi dan pelepasan kafein dari
kultur kalus primer yang berasal
 BIOTEKNOLOGI KOPI
219
plasmolisis, keadaan fisiologis sel atau suhu) yang
mempengaruhi pelepasan protoplas sel kopi. Sejumlah
dari endosperm dan perikarp dariC. arabika, kultur suspensi protoplas yang hidup mulai dari 3,5 x 106 menjadi 4,6 X 106
kopi pertama dibuat dengan tujuan mempelajari produksi
protoplas per gram berat segar diperoleh sesuai dengan
senyawa aromatik dari sel (Townsley, 1974). Kultur dimulai
peningkatan 10 hingga 15 kali lipat dari hasil protoplas yang
dari kalus rapuh yang berasal dari pucuk ortotropikC.
diperoleh oleh Acuña dan de Peña (1991). Tahara dkk.
arabika. Kemudian, kultur suspensi yang sama ini digunakan
(1994) melaporkan metode yang disederhanakan untuk
untuk menganalisis kandungan kafein dan asam klorogenat
menyiapkan dan mengkulturkan protoplas dari kalus
(Buckland dan Townsley, 1975) dan untuk membandingkan
embriogenik yang diinduksi dari daun muda tanaman
lipid yang tidak dapat disapifikasi dalam kacang hijau
dewasa.C. arabikapohon, dan selanjutnya pembentukan
dengan suspensi sel (Van der Voort dan Townsley, 1975).
embrio somatik dari protoplas ini dengan sitokinin sebagai
Studi tambahan tentang sintesis kafein dan biodegradasi
satu-satunya pengatur tumbuh tanaman.
alkaloid purin dalam kultur suspensi kopi dilakukan oleh
Di antara beberapa prosedur yang dilaporkan untuk
Frischknecht dan Baumann (1980), dan Baumann et al.
regenerasi protoplas kopi, terdapat perbedaan yang besar,
(1983).
terutama yang berkaitan dengan zat pengatur tumbuh dan
Sejumlah makalah telah dipublikasikan tentang berbagai
media biakan yang digunakan. Fleksibilitas terhadap zat
aspek isolasi dan kultur protoplas kopi. Söndahl et al.
pengatur tumbuh dapat dilihat pada kultur protoplas yang
(1980), Orozco dan Schieder (1984), dan Acuña dan de Peña
menghasilkan regenerasi planlet. Jaringan embriogenik yang
(1987) masing-masing mengisolasi protoplas dari kalus
digunakan untuk isolasi protoplas dapat diinduksi baik
daun, daun, dan suspensi sel. Dalam semua kasus,
dengan campuran auksin/sitokinin (Schöpke et al. 1987;
pembentukan dinding sel, pembelahan sel, dan pembentukan
Schöpke, 1989; Spiral dan Pétiard, 1991) atau hanya dengan
kalus diamati tetapi tidak terjadi regenerasi tanaman, yang
sitokinin saja (Yasuda et al., 1986; Acuña dan de Peña, 1991;
mempersulit produksi dan kultur protoplas dari sel kopi.
Tahara et al., 1994). Sejalan dengan itu, media yang
Schöpke et al. (1987) melaporkan embriogenesis somatik
digunakan untuk kultur protoplas mengandung campuran
dan regenerasi plantlet dalam protoplas yang diisolasi dari
auksin/sitokinin atau sitokinin, kecuali media yang
embrio somatik turunan suspensi sel dariC.canephora.
digunakan oleh Acuña dan de Peña (1991) yang
Hanya beberapa embrio yang dapat diregenerasi menjadi
menginduksi jaringan embriogenik dengan 6-benzylamino
planlet ketika embrio globular disubkultur pada media tanpa
purine (BAP) saja, dan kemudian kultur protoplas diisolasi.
zat pengatur tumbuh.
dari jaringan ini dalam media yang mengandung campuran
Dalam penelitian lain, Schöpke et al. (1988) dan Schöpke
2,4-D, NAA, dan kinetin.
(1989) mengisolasi protoplas dari suspensi selC.
arabika,C.canephora,C.salvatrix, DanC. racemosa.Dalam
Embriogenesis somatik:Embriogenesis somatik adalah alat
kasus ini, protoplas meregenerasi dinding sel dan terjadi
yang berharga untuk perbanyakan klonKopispesies dan
beberapa pembelahan, tetapi sel tidak bertahan lebih dari 10
untuk pemuliaan untuk resistensi penyakit, toleransi stres,
hari dalam kultur. Setelah keberhasilan awal ini, regenerasi
kandungan kafein yang rendah, dll Studi awal telah
dari protoplasC. arabikadicapai oleh pekerja lain. Acuña dan
menunjukkan bahwa kehadiran auksin sangat penting untuk
de Peña (1991) juga melaporkan regenerasi tanaman dari
inisiasi embrio dan penurunan konsentrasi auksin atau
protoplas suspensi sel embriogenik dariC. arabikaCaturra.
ketiadaan lengkap mempromosikan pematangan. Dengan
Dalam laporan ini, dari total 65 embrio somatik, 35
demikian, secara umum, protokol dasar yang ditetapkan
dipindahkan langsung ke tanah nonsteril di rumah kaca.
melibatkan kultur dalam media primer dengan sumber
Mereka juga menemukan bahwa total proses regenerasi
auksin dan subkultur dalam media sekunder tanpa zat
tumbuhan dari protoplas memakan waktu rata-rata 9 sampai
pengatur tumbuh, keduanya mengandung pasokan nitrogen
10 bulan.
tereduksi yang substansial (Ammirato, 1983).
Spiral dan Pétiard (1991) meregenerasi tumbuhan dari
Dalam kopi, ada sejumlah laporan tentangin vitroregenerasi
protoplasC. arabika, C. canephoradan dari Arabusta hibrida
tanaman melalui embriogenesis somatik dari batang,
interspesifik. Grezes et al. (1994) kondisi optimal untuk
jaringan daun dan jaringan perisperma (Staritsky, 1970;
isolasi protoplas dari non
Söndahl dan Sharp, 1977; Dublin, 1981; Yasuda et al., 1985;
suspensi sel embriogenik dariC. arabika. Mereka de García dan Menéndez, 1987; Raghuramulu et al., 1987;
menggambarkan eksperimen untuk meningkatkan hasil Neuenschwander dan Baumann, 1992; Söndahl dan Lauritis,
protoplas yang layak, dengan 1992; Sreenath et al., 1995). Mayoritas budaya
menganalisis parameter yang berbeda (perlakuan enzimatik,

C. DE LOS SANTOS-BRIONES dan S. M. T. HERNÁNDEZ-SOTOMAYOR
220
media yang digunakan untuk induksi embriogenesis somatik
pada kopi mengandung campuran auksin dan sitokinin.
Namun, Dublin (1981) menunjukkan bahwa adalah mungkin
untuk menginduksi embriogenesis pada eksplan daun hanya
dengan sitokinin (BAP). Pengamatan ini dikonfirmasi oleh
Yasuda et al. (1985) dan Hatanaka et al. (1991), yang
melaporkan bahwa sitokinin sangat penting dan auksin
memiliki efek penghambatan terhadapKopiembriogenesis
somatik.
Yasuda dkk. (1995) mendirikan embriogenesis somatik diC.
arabikaDanC.canephoradari eksplan daun pohon dewasa
menggunakan sitokinin sebagai satu-satunya hormon
tanaman. Kedua spesies bereaksi dengan cara yang berbeda.
Di dalamC.canephora, embrio somatik terbentuk dari
potongan tepi eksplan daun muda yang dikultur dalam
kontak dengan sitokinin media. Penambahan auksin dengan
sitokinin menghambat pembentukan embrio. Embrio
somatik ditumbuhkan menjadi tanaman muda pada media
sitokinin. Di dalamArabika, kalus embriogenik diinduksi
setelah kultur berkepanjangan dengan sitokinin dan
kemudian embrio somatik terbentuk pada kalus embriogenik.
Potongan daunarabistapohon kopi dapat diinduksi untuk
membentuk embrio secara langsung ketika ditanam pada
media MS basal tanpa auksin dan mengandung sitokinin
tingkat tinggi. Dengan cara ini, embriogenesis somatik kopi
diperoleh dalam satu langkah (Dublin, 1981; Yasuda et al.,
1985; Hatanaka et al., 1991; Yasuda et al., 1995) dan dua
kali lipat
prosedur langkah (Söndahl dan Sharp, 1977; Dublin, 1984;
Zamarripa et al., 1991; Neuenschwander dan Baumann,
1992). Prosedur satu langkah memiliki keunggulan
pembentukan embrio yang cepat dan tingkat perkecambahan
embrio yang tinggi. Prosedur langkah ganda menghasilkan
embriogenesis somatik frekuensi tinggi (HFSE) yang
memiliki implikasi yang jelas berkaitan dengan produksi
embrio somatik skala besar. Selain itu, untuk beberapa
genotipe, proses HFSE mungkin merupakan satu-satunya
prosedur untuk mendapatkan embriogenesis somatik.
Embriogenesis somatik frekuensi tinggi (HFSE) dari
eksplan daun kopi pertama kali dilaporkan oleh Söndahl dan
Sharp (1977) diC. arabikaCV. Minuman Alkohol Bourbon.
HFSE ditandai dengan banyaknya kalus yang rapuh dan
sangat embriogenik. Prosedur eksperimental
menggambarkan dua media berturut-turut yang diperlukan:
"media pengkondisian" dan "media induksi". Keberhasilan
induksi kalus embriogenik frekuensi tinggi ditemukan
bergantung pada konsentrasi 2,4-D dan kinetin pada media
pertama (media pengkondisian).
Braz. J. Tumbuhan Physiol., 18(1):217-227, 2006
Sifat spesifik kalus HFSE memungkinkan penggunaannya
dalam sistem kultur cair. Neuenschwander dan Baumann
(1992) menjelaskan protokol untuk embriogenesis somatik
dalam kultur cair. Mereka mengusulkan istilah
embriogenesis somatik yang dikendalikan sendiri (SCSE)
karena embrio somatik baru berkecambah dengan kecepatan
94,5% tanpa memerlukan langkah pematangan. Hasil dan
tingkat perkecambahan HFSE jauh lebih rendah
dibandingkan dengan SCSE. Produksi embrio somatik dalam
media cair telah diterapkan sebagai pendekatan perbanyakan
massal cepat tanaman kopi (Zamarripa et al., 1991; Ducos et
al., 1993; Noriega dan Söndahl, 1993; van Boxtel dan
Berthouly, 1996) .
Zamarripa dkk. (1991) melaporkan bahwa produksi embrio
somatik sangat tergantung pada kepadatan inokulum,
produksi dan perkembangan embrio terhambat ketika
kepadatan inokulum tinggi. Penghambatan ini sebagian
ditekan ketika media diperbarui secara berkala. Pada
kerapatan inokulum rendah 1 g FW.L-1, 460.000 embrio
diproduksi dalam 7 minggu dalam labu Erlenmeyer; dalam
bioreaktor, produksinya sekitar 4.000 embrio per liter per
hari. Duco dkk. (1993) mencapai 600.000 embrio somatik
kopi per liter menggunakan bioreaktor berpengaduk, dan
Zamarripa (1993) menggambarkan kelayakan peningkatan
embriogenesis somatik diC.canephoradan hasil pelaporan
Arabusta 400-500 x 103 embrio setelah 7 minggu. Kapasitas
regenerasi plantlet diukur. Dimulai dengan 1 g kalus per liter
media, 56.000 planlet dapat diregenerasi (Ducos et al.,
1999).
Berthouly et al. (1995) dan Etienne dkk. (1997) telah
mengembangkan sistem produksi massal embrio somatik
menggunakan bioreaktor perendaman sementara. Sistem ini
mencakup penggunaan teknik pencelupan dengan bejana
kultur yang diadaptasi secara khusus (RITAR) yang
memungkinkan regenerasi langsung, dalam wadah yang
sama dan tanpa subkultur, plantlet dari suspensi sel. Mereka
memperoleh jaringan embriogenik frekuensi tinggi, suspensi
sel dan regenerasi tanaman. Menggunakan embrio somatik
berkecambah dariKopi arabika, penaburan langsung
menghasilkan konversi embrio menjadi tanaman yang sangat
berhasil. Kepadatan kultur di atas 1600 embrio per liter
dalam bioreaktor secara positif memengaruhi morfologi
embrio dengan menyebabkan pemanjangan sumbu
embrionik yang lebih tinggi (Barry-Etienne et al., 1999).
Embrio tersebut menunjukkan tingkat konversi tanaman
yang lebih baik setelah disemai langsung di persemaian.
Namun demikian, selama bulan-bulan pertama pembibitan,
planlet yang berasal dari embrio yang dihasilkan dengan
perendaman sementara menunjukkan pertumbuhan yang
rendah dan lambat jika dibandingkan dengan bibit
 (Barry-Etienne et al.,2002). Baru-baru ini, regenerasi bioreaktor perendaman sementara ditingkatkan dengan
massalC. arabikaEmbrio L. somatik menggunakan mengoptimalkan siklus perendaman. Itu terbukti meningkat
Braz. J. Tumbuhan Physiol., 18(1):217-227, 2006
BIOTEKNOLOGI KOPI
221
frekuensi perendaman pendek (1 menit perendaman setiap
24, 12 dan 4 jam) merangsang produksi embrio
(masing-masing 480, 2092 dan 3081 embrio per liter
bioreaktor) dan peningkatan kualitas (masing-masing 60, 79
dan 85% embrio berbentuk torpedo ) (Albarrán et al., 2005).
Embriogenesis langsung dapat diinduksi pada eksplan
tertentu. Embriogenesis somatik langsung adalah
pembentukan embrio somatik dari eksplan tanpa
pembentukan fase kalus perantara (Raghavan dan Sharma,
1995). Pada sebagian besar tanaman, embriogenesis somatik
langsung sulit diperoleh. Loyola-Vargas dkk. (1999) telah
melaporkan embriogenesis somatik langsung dari eksplan
daunKopi arabikadan itu didukung oleh bukti histologis.
Mereka memodifikasi protokol yang dijelaskan oleh Yasuda
et al. (1985). Pencoklatan pada jaringan yang disebabkan
oleh akumulasi senyawa fenolik yang berlebihan diperlukan
untuk proses embriogenesis somatik pada kopi
(Quiroz-Figueroa et al., 2002). Pengamatan serupa telah
dilaporkan oleh penulis lain (de García dan Menéndez, 1987;
Neuenschwander dan Baumann, 1992; van Boxtel dan
Berthouly, 1996; Menéndez-Yuffá dan de García, 1997).
Embriogenesis somatik pada kopi telah menjadi subyek
beberapa penelitian histologis (Söndahl et al., 1979a,b;
Nassuth et al., 1980; Michaux-Ferrière et al., 1987, 1989;
Nakamura et al., 1992; Tahara et al. .., 1995;
Menéndez-Yuffá dan de García, 1997; Quiroz-Figueroa et
al., 2002). Histogenesis embriogenesis somatik tidak
langsung dariC. arabikatelah dijelaskan oleh Söndahl et al
(1979a); mereka menunjukkan bahwa proliferasi kalus, di
mana beberapa sel berdiferensiasi dan berkembang menjadi
embrio, berasal dari sel mesofil spons. Nassuth et al.(1980)
mengamati bahwa semua jaringan parenkim antara
epidermis dan kambium vaskular mampu diubah menjadi
jaringan kalus, korteks menjadi lapisan yang paling aktif
dalam hal ini. Setelah 14 hari kultur, proembrio diamati pada
zona pembentukan kalus. Pengamatan mikroskop elektron
pemindaian (Söndahl et al., 1979b; Nakamura et al., 1992)
mengungkapkan embrio yang sangat muda dengan campuran
sel eksplan yang bulat, memanjang atau melengkung.
Sementara studi ini telah memberikan informasi yang
berharga, mereka tidak secara jelas menunjukkan
perkembangan embrio dari satu sel ke tahap akhir. Michaux
Ferrière dkk. (1989), dan Menéndez-Yuffá dan de García
(1997) memberikan bukti untuk hipotesis bahwa embrio
somatik padaKopi
memiliki asal uniseluler. Dalam kedua laporan tersebut,
tahapan utama ontogenesis tidak diamati. Quiroz-Figueroa
dkk. (2002) menunjukkan bahwa peristiwa berurutan dalam
embrio
perkembangan muncul melalui jalur uniseluler simetris.
Mereka menyimpulkan, berdasarkan pengamatan histologis
mereka, bahwa embrio somatik kopi langsung dan tidak
langsung yang terbentuk pada segmen daun yang
dieksplanasi dan kalus, masing-masing, memiliki asal
uniseluler.
Kemajuan fisiologis dan biokimia
Kopi, sebagai salah satu tanaman ekonomi utama terpenting
di dunia, telah menjadi subjek penelitian ekstensif terkait
dengan perbaikan genetik yang bertujuan untuk
meningkatkan hasil. Di sisi lain, pengetahuan tentang proses
fisiologis dan biokimia yang terlibat masih langka. Beberapa
studi yang dilakukan di bidang ini dapat dilanjutkan dalam
tiga topik: jalur biosintetik teobromin dan kafein, perubahan
selama embriogenesis somatik, dan toksisitas aluminium
padain vitrobudaya kopi. Oleh karena itu, untuk
memperbesar persepsi kita tentang pengetahuan ilmiah dasar
dan untuk memahami mekanisme yang berbeda pada tingkat
seluler dan molekuler, bidang penelitian baru harus dibuka
pada subjek ini.
Studi awal terkait produksi dan metabolisme alkaloid purin
(PA) padain vitrobudaya dariKopispp., termasukC. arabika,
telah dilaporkan (Baumann dan Frischknecht, 1988). Kultur
sel kopi diperoleh yang mempertahankan kemampuan untuk
menghasilkan kafein dan teobromin dan melepaskan alkaloid
purin ini ke dalam media (Keller et al., 1972; Waller et al.,
1983). Selain PA, sterol, asam lemak, asam klorogenat, dan
aromatik kopi juga diproduksi (Townsley, 1974; Van de
Voort dan Townsley, 1975; Buckland dan Townsley, 1975).
Furuya dkk. (1990) telah menunjukkan bahwa kubus busa
poliuretan pada akhirnya mampu melumpuhkan lebih dari 10
g (berat segar) sel kopi dalam kultur jangka panjang. Sel
kopi dalam kultur suspensi mampu melakukan
biotransformasi theobromine menjadi kafein (Furuya et al.,
1991).
Berdasarkan pengetahuan enzimologi dan biologi molekuler
baru-baru ini, diusulkan bahwa kafein disintesis melalui
metilasi ganda dari turunan xanthine (Ashihara dan Crozier,
2001). Aktivitas enzimatik N-methyltransferase untuk
biosintesis kafein pada tanaman kopi telah terdeteksi pada
ekstrak bebas sel yang dibuat dari sel kultur (Baumann et al.,
1983). Protein N-methyltransferase juga telah dimurnikan
(Mazzafera et al., 1994; Mösli Waldhauser et al., 1997;
Moisyadi et al., 1998). Selanjutnya, cDNA untuk
 7-methylxanthine methyltransferase (MXMT atau (Ogawa et al., 2001; Mizuno et al., 2003).
theobromine synthase) berhasil dikloning dari tanaman kopi
C. DE LOS SANTOS-BRIONES dan S. M. T. HERNÁNDEZ-SOTOMAYOR
222
Beberapa penelitian telah dilaporkan mengenai modifikasi
respon embriogenik padaKopispp. Embriogenesis somatik
dariC. arabikadiinduksi oleh sumber nitrogen. Konsentrasi
nitrogen optimum antara 3,75 dan 15 mmol.L-1 nitrogen
dengan rasio molar nitrat/amonium 2:1 atau 1:2
(Fuentes-Cerda et al., 2001). Juga, penggunaan asam salisilat
memiliki efek positif pada pertumbuhan sel dan
embriogenesis somatik, menyebabkan dua
peningkatan lipat di kedua proses (Quiroz-Figueroa et al.,
2001). Pola elektroforesis protein selama embriogenesis diC.
arabikaditentukan dan mengungkapkan perbedaan kualitatif
dan kuantitatif dalam ukuran dan muatan (Menéndez-Yuffá
et al., 1994). Analisis dua dimensi kalus embriogenik
mengungkapkan tujuh polipeptida karakteristik dengan berat
molekul 23 hingga 35 kDa dalam pI luas dari asam hingga
basa. Lima di antaranya ditemukan pada pI netral hingga
asam. Dalam kalus nonembryogenic, tujuh polipeptida khas
yang hadir dalam kisaran 15 sampai 70 kDa. Empat dari
polipeptida bersifat asam, tiga dari 70 kDa dan satu dari 15
kDa. Namun, identifikasi dan sifat protein ini masih harus
ditentukan untuk memahami perannya dalam embriogenesis
somatik.
Di beberapa tanah tropis, keracunan logam berat
menyebabkan berkurangnya pertumbuhan dan kehilangan
hasil. Perkebunan kopi terutama terbatas pada tanah masam,
di mana terdapat beberapa bentuk aluminium (Al) yang
beracun. Menggunakan sebagai model suspensiC. arabikasel
(Martínez-Estévez et al., 2001a), dan mengingat saran bahwa
Al mengganggu metabolisme fosfolipid membran, efek
AlCl3 pada komponen yang berbeda dari jalur ini telah
dipelajari. Ketika sel suspensi diinkubasi dengan
peningkatan konsentrasi AlCl3 (200-1000Mmol.L-1), pola
fosforilasi protein berubah. Protein terfosforilasi dengan
massa molekul 18, 31 dan 53 kDa meningkat secara dramatis
setelahnyahidupperawatan sel dengan AlCl3. Ketika AlCl3
ditambahkan ke sebuahin vitroreaksi fosforilasi, tidak ada
perbedaan dalam fosforilasi yang diamati (Martínez-Estévez
et al., 2001b). Hasil ini menunjukkan
bahwahiduppengobatanKopisel dengan AlCl3 mempengaruhi
aktivitas beberapa protein kinase. Efek Al pada fosfolipase C
(PLC) spesifik fosfoinositida dan aktivitas lipid kinase juga
diperiksa (Martínez-Estévez et al., 2003). Dua efek utama
terlihat ketika sel diperlakukan dengan AlCl3. Dalam periode
sesingkat 1 menit, sel yang terpapar Al meningkatkan
aktivitas PLC mereka. Selama periode yang lebih lama,
aktivitas PLC terhambat lebih dari 50%. Aktivitas
phosphatidylinositol 4-kinase, phosphatidylinositol
phosphate 5-kinase dan diacylglycerol kinase meningkat
ketika sel diinkubasi di hadapan
Braz. J. Tumbuhan Physiol., 18(1):217-227, 2006
konsentrasi AlCl yang berbeda3. Laporan ini sangat
mendukung hipotesis bahwa Al mengganggu metabolisme
fosfolipid membran yang tidak hanya mengatur PLC tetapi
juga enzim lain yang memiliki peran kunci dalam jalur
transduksi sinyal. Terlepas dari penelitian yang dilakukan di
bidang ini, kita masih perlu memahami dasar biokimia dan
molekuler dari toksisitas Al dalam kopi. Hal ini menjadi
sangat penting bagi beberapa negara seperti Brasil di mana
tanah masam merupakan masalah utama bagi produktivitas
kopi.
Transformasi kopi
Untuk membangun sistem transformasi genetik diperlukan
eksplan yang kompeten untuk proses transformasi, bersama
dengan anin vitrosistem budidaya yang memungkinkan
frekuensi regenerasi yang tinggi. Selain itu, diperlukan
sistem transfer gen yang sederhana, murah, dan dapat
direproduksi. Pada kopi, terdapat sistem regenerasi yang
efisien melalui embriogenesis somatik dari beberapa
jaringan dan transformasi genetik tanaman kopi telah
berhasil dicapai oleh beberapa kelompok penelitian (Barton
et al., 1991; Spiral et al., 1993; Sugiyama et al., 1995 ; van
Boxtel et al., 1995; Hatanaka et al., 1999; Spiral et al., 1999;
Leroy et al., 2000; Fernández-Da Silva dan Menéndez-Yuffá,
2003; Ogita et al., 2004).
Beberapa penelitian dalam kopi telah menunjukkan bahwa
beberapain vitroKultur jaringan kopi menunjukkan toleransi
terhadap konsentrasi kanamisin yang tinggi (400 mg.L-1)
(Spiral et al., 1993; Giménez et al., 1996). Untuk
mengembangkan sistem pertumbuhan selektif untuk jaringan
kopi yang ditransformasikan secara genetik, van Boxtel et al.
(1997), mempelajari efek agen selektif chlorsulfuron,
glufosinate, glyphosate, hygromycin, dan kanamycin pada
perkembangan kalus dari eksplan daun dan kultur suspensi
embriogenik. Chlorsulfuron dan hygromycin menyebabkan
penghambatan yang kuat dan nekrosis parah, sedangkan
glifosat dan kanamisin menunjukkan penghambatan
variabel. Glufosinate tampaknya secara efisien menghambat
pertumbuhan kalus daun dan suspensi kalus dari semua
genotipe yang diuji tanpa menginduksi nekrosis,
menunjukkan potensi mereka untuk mendeteksi jaringan
kopi yang berubah secara stabil.
Dua jenis teknik transformasi telah diuji: tidak
langsungAgrobacterium-Transformasi yang dimediasi (yang
merupakan teknik yang saat ini digunakan untuk mentransfer
gen pada tanaman kopi) dan transformasi langsung, melalui
pengeboman partikel dan elektroporasi jaringan.
Transfer gen tidak langsung:Ocampo dan Manzanera (1991),
menggunakan tipe liarAgrobacteriumstrain, mengamati
 produksi tumor pada hipokotil yang terinfeksiin vitrokopi berkecambah
Braz. J. Tumbuhan Physiol., 18(1):217-227, 2006
BIOTEKNOLOGI KOPI
223
dengan serangga.
biji. Spiral dan Pétiard (1991) memperoleh hasil awal
menggunakan ko-kultur protoplas dengan
perbedaanAgrobacteriumstrain membawa neomycine
phosphotransferase (NPTII) danBgen penanda
-glucuronidase (GUS) di bawah kendali promotor
CaMV35S. Mereka mengamati ekspresi transien dengan uji
histokimia GUS pada jaringan kalus yang berasal dari
protoplas yang diberi perlakuan.
Planlet yang ditransformasikan dariCanephora
kopidiperoleh dengan regenerasi embrio somatik yang
terinfeksiAgrobacterium rhizogenes. Integrasi gen NPTII
dan GUS ditunjukkan dengan polymerase chain reaction
(PCR) danBuji -glucuronidase (Spiral et al., 1993).
Sugiyama dkk. (1995), setelah transformasiKopi
arabikamenggunakan Ri plasmidAgrobacterium
rhizogenesstrain IFO 14554, menyarankan bahwa
transformasi semacam ini berlaku untuk produksi planlet
dengan fenotipe gen asing.
Produksi tanaman transgenik dengan kokultivasi embrio
somatikC.canephoradenganA. rhizogenes(A4) dan dilucutiA.
tumefaciens(LBA4404) dilaporkan oleh Leroy et al., (1997).
Hatanaka dkk. (1999) melaporkan keberhasilan transformasi
genetikC.canephoramenggunakanA. tumefaciensEHA101
menyimpan pIG121-Hm dari kalus embriogenik. Embrio
somatik berkecambah dan beregenerasi menjadi planlet kecil
yang kemudian dipindahkan ke media yang mengandung
100 mg.L-1 higromisin dan 100 mg.L-1 kanamisin untuk
seleksi akhir tanaman transgenik. Planlet terpilih
menunjukkan aktivitas GUS yang kuat di daun dan akar.
Selanjutnya, gen GUS dan hygromycin phosphotransferase
(HPT) dipastikan terintegrasi secara stabil ke dalam genom
tanaman kopi oleh PCR.
Leroy dkk. (1999; 2000) melaporkan transformasi pertama
tanaman kopi yang mengandung aBacillus thuringiensisgen
yang telah diintegrasikan ke dalam genom kopi. Pengkodean
gen sintetik untuk aB.thuringiensisEndotoksin CryIAc, yang
aktif melawan penambang daun kopiPerileucoptera coffeela,
diperkenalkan ke dalam tiga genotipe dari dua spesies yang
dibudidayakan,C. arabikaDanC.canephora, memberikan
resistensi serangga. Embrio somatik dibudidayakan bersama
dengan galur LBA4404Agrobacterium
tumefaciensberisimenangisgen 1Ac. Lebih dari 100 tanaman
yang ditransformasikan dari peristiwa transformasi
independen diperoleh untuk setiap genotipe kopi. Integrasi
dan ekspresi darimenangisGen 1AC dipelajari dengan
analisis western blotting. Tanaman transgenik menunjukkan
resistensi yang efektif terhadap bioassay penambang daun
Transfer gen langsung:Transformasi genetik sel kopi
pertama yang dilaporkan adalah dengan elektroporasi
protoplas. Barton dkk. (1991) memperoleh plantlet dariKopi
arabikadiubah secara genetik. Mereka membuat kultur
suspensi untuk mendapatkan protoplas yang
ditransformasikan dengan gen resistensi kanamisin melalui
prosedur elektroporasi. Embrio terbentuk dari sel yang
berubah dan diregenerasi menjadi planlet. Embrio yang
diregenerasi mengandung DNA asing yang disisipkan.
Namun, plantlet kopi yang ditransformasi membentuk
sistem akar yang lemah dan oleh karena itu tidak
berkembang menjadi tanaman yang mampu berbunga.
Penerapan sistem biobalistik dengan jaringan kopi
dijelaskan pertama kali oleh van Boxtel et al. (1995).
Eksperimen dilakukan pada jaringan yang berbeda dan
mengungkapkan bahwa kultur suspensi dan embrio somatik
kurang sesuai untuk studi ekspresi transienB-glukoronidase.
Ekspresi sementara paling mudah dideteksi dan paling
sering diamati dengan daun mikro yang dibombardir. Di
antara empat (CaMV-E35S, LTR, UBQ1, dan EFA-A1)
menguji promotor yang mengendalikan ekspresi GUS, hasil
terbaik dengan kopi diperoleh dengan menggunakan
EFA-A1 promotor dariA. thaliana.
Fernández-Da Silva dan Menéndez-Yuffá (2003)
mengembangkan metode transformasi genetik kopi melalui
elektroporasi. Mereka mengevaluasi kondisi elektroporasi
yang berbeda pada jaringan tanaman yang berbeda seperti
kalus embriogenik, bagian daun dariin vitrotanaman, dan
embrio somatik pada tahap globular dan torpedo yang
diperoleh dari suspensi sel. Kondisi optimal untuk
elektroporasi adalah satu jam pretreatment enzimatik dari
embrio berbentuk torpedo, elektroporasi pada 375 V dan
900MF. Embrio somatik sekunder yang diregenerasi dari
embrio somatik berbentuk torpedo elektroporasi positif
untukGusekspresi, dan juga dalam analisis PCR untuk
genGusDanbatang.
Rekayasa genetika:Rekayasa genetika kopi berfokus pada
produksi benih, pematangan, pengendalian serangga, dan
pengurangan kafein. Proses dekafeinasi dilakukan dengan
ekstraksi superkritis yang melibatkan pencucian biji dengan
karbon dioksida cair. Prosedurnya tidak hanya mahal tetapi
juga menghilangkan senyawa lain yang memberi kopi rasa
dan aroma yang kaya. Baru-baru ini, kemajuan dalam
penelitian tanaman kopi transgenik telah dicapai: tanaman
kopi (Kopi arabikaDanCanephora kopi) telah dimodifikasi
secara genetik untuk mengandung lebih sedikit kafein (Ogita
et al., 2003; 2004). Ekspresi gen yang mengkode
 theobromine synthase (CaMXMT1) ditekan oleh interferensi
C. DE LOS SANTOS-BRIONES dan S. M. T. HERNÁNDEZ-SOTOMAYOR
224
besar bagi produsen dan konsumen.
(RNAi). Laporan-laporan ini memberikan bukti keberhasilan
produksi fenotipe rendah kafein pada spesies kopi 'Arabika'
dan 'Robusta', dengan 100% dekafeinasi pada jaringan
embriogenik dan 70% pada planlet. Wilayah 3'-tidak
diterjemahkan dan wilayah pengkodean cDNA CaMXMT1
dipilih untuk desain konstruksi RNAi beruntai
ganda.Agrobacterium tumefaciensSel EHA101
ditransfusikan dengan konstruksi ini dan kemudian
digunakan untuk mengubah jaringan embriogenikC.
arabikadan embrio somatik dariC. arabikaDanC.canephora.
Setelah 2-4 bulan kultur, sebagian besar jaringan yang
terinfeksi berubah menjadi coklat dan nekrotik, namun
dimungkinkan untuk meregenerasi sel yang resisten terhadap
hygromisin dari jaringan ini. Bibit kemudian dibudidayakan.
Daun muda bibit berumur satu tahun dikumpulkan 2-3
minggu setelah bertunas dan diukur kandungan alkaloid
purinnya. Jenis liar dan garis transgenik yang
mengekspresikan protein fluoresen hijau (GFP) mengandung
teobromin endogen dan kafein dalam jumlah yang sama
(masing-masing sekitar 1 dan 8,4 mg per g jaringan daun
segar). Sebaliknya, daun muda dari galur transgenik yang
mengekspresikan RNAi menunjukkan penurunan kandungan
teobromin sebesar 40-70% dan penurunan kafein sebesar
50-70%. Pada saat jatuh tempo, tanaman transgenik ini
seharusnya menghasilkan biji kopi normal dengan
kandungan kafein rendah. Tanaman kopi tanpa kafein ini,
secara teori, akan mengakhiri dekafeinasi industri yang
mahal yang mengakibatkan hilangnya rasa.
KESIMPULAN
Dalam beberapa tahun terakhir, minat tumbuh pada kopi
sebagai model untuk mempelajari beberapa aspek biologi
modern yang sangat menantang, seperti transformasi dan
regenerasi tanaman. Meskipun kopi adalah komoditas yang
paling banyak diperdagangkan di dunia selain minyak,
penelitian tentang beberapa topik biologi dasar memang
telah diabaikan. Tujuan dari tinjauan ini adalah untuk
menunjukkan pentingnya perkembangan diin vitrokultur sel,
embriogenesis somatik, regenerasi tanaman dan transformasi
dalam kopi, serta menarik perhatian pada beberapa studi
biokimia dan molekuler yang telah dilakukan.
Penelitian tentang pemanenan kopi, pemrosesan,
pengendalian hama dan penyakit, interaksi patogen, dan
cekaman abiotik sangat penting untuk produksi kopi
berkualitas tinggi secara berkelanjutan. Kemajuan dalam
pengetahuan dan pemahaman kita tentang dasar biokimia
dan molekuler dari topik yang disebutkan di atas hanya dapat
diperoleh melalui penelitian lanjutan. Ini adalah kunci sukses
dalam upaya meningkatkan hasil dan kualitas tanaman yang
penting secara ekonomi ini, yang akan membawa manfaat
RNA
Braz. J. Tumbuhan Physiol., 18(1):217-227, 2006
Ucapan terima kasih:Kami ingin berterima kasih kepada
Ligia Brito Argáez dan J. Armando Muñoz-Sánchez atas
kontribusi mereka dalam percobaan untuk Laboratorium
Hernández-Sotomayor yang pekerjaannya didanai oleh hibah
45798-Z dari CONACYT.
REFERENSI
Acuña JR, de Peña M (1987) Isolasi dan kultur protoplas
kopi. Di dalam: Abstr Int. Selamat Kultus Jaringan
Tumbuhan., Spesies Tropis, Bogotá, Kolombia, hal.34-35.
Acuña JR, de Peña M (1991) Regenerasi tanaman dari
protoplasts suspensi sel embriogenik dariKopi
arabikaL.cv caturra. Perwakilan Sel Tumbuhan
10:345-348.
Albarrán J, Bertrand B, Lartaud M, Etienne H (2005)
Karakteristik siklus dalam bioreaktor perendaman
sementara mempengaruhi regenerasi, morfologi, status air
dan mineral dari biaya kopi (Kopi arabika) embrio
somatik. Kultus Organ Jaringan Sel Tumbuhan. 81:27-36.
Ammirato PV (1983) Embriogenesis. Dalam: Evance DA,
Sharp WR, Ammirato PV, Yamada Y (eds), Handbook of
Tissue Culture, Vol. 1, hlm. 82-1 Macmilian, New York.
Ashihara H, Crozier A (2001) Kafein: senyawa yang
terkenal tetapi sedikit disebutkan dalam ilmu tumbuhan.
Tren Tumbuhan Sci. 6(9):407-413.
Barry-Etienne D, Bertrand B, Vasquez N, Etienne H (1999)
Penaburan langsungKopi arabikaembrio somatik
diproduksi secara massal dalam bioreaktor dan regenerasi
tanaman. Rep Sel Tumbuhan 19:111-117.
Barry-Etienne D, Bertrand B, Schlönvoigt A, Etienne H
(2002) Variabilitas morfologi dalam populasi embrio
somatik cof fee yang dihasilkan dalam bioreaktor
mempengaruhi regenerasi dan perkembangan tanaman di
persemaian. Kultus Organ Jaringan Sel Tumbuhan.
68:153-162.
Barton CR, Adams TL, Zarowitz MA (1991) Transformasi
stabil DNA asing menjadiKopi arabikatanaman. Di dalam:
Prok. XIV Colloq. Sains. Int. Kopi. San Francisco,
hal.460-464.
Baumann TW, Koetz R, Morath P (1983) aktivitas
N-methyltransferase dalam kultur suspensiKopi arabikaL.
Rep Sel Tumbuhan 2:33-35.
Baumann TW, Frischknecht PM (1988) Kafein: Produksi
oleh tanaman (Coffea spp) Kultur Sel. Dalam: Bajaj YPS
(ed), Bioteknologi Pertanian dan Kehutanan, hal.264-281.
Springer-Verlag, Berlin.
Berthouly M, Dufour M, Alvard D, Carasco C, Alemanno L,
Teisson C (1995) Mikropropagasi kopi dalam media cair
menggunakan teknik perendaman sementara. Di dalam:
XVI Colloq. Sains. Int. Kopi. Kyoto, hal.514-519.
Buckland E, Townsley PM (1975) Kultur suspensi sel kopi.
Kandungan kafein dan asam klorogenat. Jurnal Institut
Ilmu dan Teknologi Pangan Kanada 8:164-165.
Dublin P (1981) Embriogenesis somatik langsung pada
fragmen daun kopi Arabusta. Kopi Kakao Teh 25:
237-242.
 Dublin P (1984) Teknik reproduksi vegetatif in vitro dan
perbaikan genetik pada tanaman kopi yang
Braz. J. Tumbuhan Physiol., 18(1):217-227, 2006
BIOTEKNOLOGI KOPI
225
Ducos JP, Zamarripa A, Eskes A, Pétiard V (1993) Produksi
embrio somatik kopi dalam bioreaktor. Dalam: XV Kol
loq. Sains. Int. Kopi. Montpellier, hal.89-96.
Ducos JP, Gianforcaro M, Florin B, Pétiard V, Deshayes A
(1999) Cara yang menarik secara teknis dan ekonomis
untuk menyebarkan elitCanephora kopiKlon (Robusta):
embriogenesis somatik in vitro. Dalam: 18 Colloq. Tahu
Int. Kopi. Helsinki, hlm. 295-301.
Etienne H, Bertrand B, Anthony F, Côte F, Berthouly M
(1997) Embriogenesis somatik: alat untuk perbaikan
genetik kopi. Di dalam: Colloq XVII. Sains. Int. Kopi.
Montreux, hal.457-465.
Fernandez-Da Silva R, Menendez-Yuffa A (2003) Ekspresi
ekspresi gen sementara pada embrio somatik sekunder
dari jaringan kopi yang dielektroporasikanGusDanbatang.
Listrik J. Bioteknologi. 6:29-38.
Frischknecht PM, dan Baumann TW (1980) Pola
pembentukan alkaloid purin dalam kultur suspensiKopi
arabika. Tanaman Medis 31:344-350.
Fuentes-Cerda CFJ, Monforte-González M, Méndez-Zeel M,
Rojas-Herrera R, Loyola-Vargas R (2001) Modifikasi
respon embriogenik dariKopi arabikaoleh sumber
nitrogen gen. Bioteknologi. Lett. 23:1341-1343.
Furuya T, Koge K, Orihara Y (1990) Kultur jangka panjang
dan produksi kafein dari kopi amobil (Kopi arabika) L.
sel dalam busa poliuretan. Perwakilan Sel Tumbuhan
9:125-128.
Furuya T, Orihara Y, Koge K (1991) Biotransformasi
teobromin menjadi kafein dalam suspensi dan kopi
terimobilisasi busa poliuretan (Kopi arabikaL.) sel.
Perwakilan Sel Tumbuhan 9:659-662.
García E de, Menéndez A (1987) Embriogenesis dari
eksplan daun pohon kopi catimor. Kopi Kakao Thé 31
(1):15-22.
Giménez CA, Menéndez-Yuffá A, de García E (1996) Efek
kanamisin antibiotik pada eksplan berbeda dari hibrida
kopi (Coffea sp) Catimor. Piton 59:39-46.
Grèzes J, Thomas D, Tomasset B (1994) Faktor-faktor yang
mempengaruhi isolasi protoplas dariKopi arabikasel.
Kultus Organ Jaringan Sel Tumbuhan. 36:91-97.
Hatanaka T, Arakawa T, Yasuda T, Uchida N, Yamaguchi T
(1991) Pengaruh zat pengatur tumbuh pada embriogenesis
somatik pada kultur daun tanamanCanephora kopi.
Perwakilan Sel Tumbuhan 10:179-182.
Hatanaka T, Choi YE, Kusano T, Sano H (1999) Tanaman
kopi transgenikCanephora kopidari cal lus embriogenik
melaluiAgrobacterium tumefaciens-transformasi yang
dimediasi. Rep Sel Tumbuhan 19:106-110.
Herman EB, Haas GJ (1975) Perbanyakan KlonalKopi di
abicaL. dari Kultur Kalus. Hortscience 10:588-589. Keller
H, Wanner H, Baumann TW (1972) Kaffeinsynthese in
buah-buahan dan kultur jaringanKopi arabika.
Rencanakan ke 108:339-350.
Leroy T, Royer M, Paillard M, Berthouly M, Spiral J,
Tessereau S, Legavre T, Altosaar I (1997) Pengenalan gen
minat agronomi pada spesiesCoffea canepho raBatu
dibudidayakan. Kopi Kakao Teh 28:231-244.
dengan transformasi denganAgrobacteriumsp. Dalam: 17
Colloq. Tahu Int. Kopi. Nairobi, hlm. 439-446.
Leroy T, Philippe R, Royer M, Frutos R, Duris D, Dufour M,
Jourdan I, Lacombe C, Fenouillet C (1999) Pohon kopi
yang dimodifikasi secara genetik untuk ketahanan
terhadap penambang daun kopi. Analisis ekspresi gen,
ketahanan terhadap serangga dan nilai agronomis. Di
dalam: XVIII Colloq. Sains. Int. Kopi. Helsinki,
hal.332-338.
Leroy T, Henry AM, Royer M, Altosaar I, Frutos R, Duris D,
Philippe R (2000) Tanaman kopi hasil rekayasa genetika
dengan menekanBacillus thuringiensis menangisGen 1Ac
untuk resistensi terhadap penambang daun. Rep Sel
Tumbuhan 19:382-389.
Linsmaier M dan Skoog F (1965) Persyaratan Faktor
Pertumbuhan Organik Kultur Jaringan Tembakau. Fisik.
Tanaman. 18: 100-127.
Loyola-Vargas VM, Fuentes-Cerda CFJ, Monforte-González
M, Méndez-Zeel M, Rojas-Herrera R, Mijangos-Cortés J
(1999) Kultur jaringan kopi sebagai model baru untuk
studi variasi somaklonal. Di dalam: XVIII Colloq.
Sci.Int.Kopi. Helsinki, hal.302-307.
Martínez-Estévez M, Muñoz-Sánchez JA, Loyola-Vargas
VM, Hernández-Sotomayor SMT (2001a) Modifikasi
media kultur untuk menghasilkan toksisitas aluminium
dalam suspensi sel kopi (Kopi arabikaL.). Perwakilan Sel
Tumbuhan 20:469-474.
Martinez-Estevez M, Loyola-Vargas VM, Hernandez
Sotomayor SMT (2001b) Aluminium meningkatkan
fosforilasi protein tertentu dalam kultur suspensi seluler
kopi (2001b).Kopi arabika). J. Tumbuhan Physiol. 158:
1375-1379.
Martínez-Estévez M, Racagni-Di Palma G, Muñoz-Sánchez
JA, Brito-Argáez L, Loyola-Vargas VM, Hernández
Sotomayor SMT (2003) Aluminium secara berbeda
memodifikasi metabolisme lipid dari jalur fosfoinositida
diKopi arabikasel. J. Tumbuhan Physiol. 160:1297-1303.
Mazzafera P, Wingsle G, Olsson O, Sandberg G (1994) S-ad
enosyl-L-methionine: theobromine
1-N-methyltransferase, enzim yang mengkatalisasi
sintesis kafein dalam kopi. Fitokimia 37:1577-1584.
Menéndez-Yuffá A, de García EG, Segura-Nieto M (1994)
Studi perbandingan pola elektroforesis protein selama
embriogenesis padaKopi arabikacv Catimor. Rep Sel
Tumbuhan 13:197-202.
Menéndez-Yuffá A, de García EG (1997) Peristiwa
morfogenik selama embriogenesis somatik tidak langsung
pada kopi “Catimor”. Protoplasma 199:208-214.
Michaux-Ferrière N, Dublin P, Schwendiman J (1987) Studi
histologi embriogenesis somatik dari eksplan daunKopi
arabikaL. Kopi Kakao Teh 31:103-111.
Michaux-Ferrière N, Bieysse D, Alvard D, Dublin P (1989)
Studi histologi embriogenesis somatik diKopi fea arabika,
diinduksi dengan kultur pada media tunggal fragmen daun
dari genotipe yang berbeda. Kopi Kakao Teh 33:207-217.
Mizuno k, Okuda A, Kato M, Yoneyama N, Tanaka H, ​Ashi
hara H, Fujimura T (2003) Isolasi gen sintase al kafein
fungsi ganda baru yang mengkode enzim untuk versi
 konversi 7-metilxantin menjadi kafein dari kopi (Kopi fea
C. DE LOS SANTOS-BRIONES dan S. M. T. HERNÁNDEZ-SOTOMAYOR
226
Moisyadi S, Neupane KR, Stiles JI (1998) Kloning dan
karakterisasi cDNA encoding xanthosine-N7-metil
transferase dari kopi (Kopi arabika). Tindakan
hortikultura. 461: 367-377.
Monaco LC, Medina H, Söndahl MR (1974) Budaya
perisperma kopi. Sains dan Budaya 26:240.
Mösli Waldhauser SS, Gillies FM, Crozier A, Baumann TW
(1997) Pemisahan N-7 methyltransferase, enzim kunci
dalam biosintesis kafein. Fitokimia 45:1407-1414.
Nakamura T, Taniguchi T, Maeda E (1992) Studi tentang
embriogenesis somatik kopi dengan memindai mikroskop
elektron. Jpn. J. Tanaman Sci. 61:476-486.
Nassuth A , Wormer TM , Bouman F , Staritsky G ( 1980 )
Histogenesis kalus padaCanephora kopieksplan batang
dan penemuan inisiasi embrioid awal. Akting Bot. Neerl.
29:49-54.
Neuenschwander B, Baumann TW (1992) Jenis novel
embriogenesis somatik diKopi arabika. Perwakilan Sel
Tumbuhan 10:608-612.
Noriega C, Söndahl M (1993) mikropropagasi kopi Arabika
melalui embriogenesis somatik melalui bioreaktor. Di
dalam: XV Colloq. Sains. Int. Kopi. Montpellier,
hal.73-81.
Ocampo CA, Manzanera LM (1991) Kemajuan dalam
manipulasi genetik tanaman kopi. Dalam: XIV Colloq.
Sains. Int. Kopi. San Francisco, hlm. 378-382.
Ogawa M, Herai Y, Koizumi N, Kusano T, Sano H (2001) 7-
Methylxanthine methyltransferase tanaman kopi. J.Biol.
kimia 276:8213-8218.
Ogita S, Uefuji H, Yamaguchi Y, Koizumi N, Sano H (2003)
Memproduksi tanaman kopi tanpa kafein. Alam 423:823.
Ogita S, Uefuji H, Morimoto M, Sano H (2004) Aplikasi
dari RNAi untuk mengkonfirmasi teobromin sebagai
perantara utama untuk biosintesis kafein pada tanaman
kopi dengan potensi untuk membangun varietas tanpa
kafein. Tanam Mol. Biol. 54:931-941.
Orozco FJ, Schieder O (1984) Isolasi protoplas mesofil dari
genusKopi. . . . Pariwisata 34:534–536. Quiroz-Figueroa F,
Mendez-Zeel, Larqué-Saavedra A, Loy ola-Vargas VM
(2001) Konsentrasi cylate garam picomolar menginduksi
pertumbuhan sel dan meningkatkan embriogenesis somatik
padaKopi arabikakultur jaringan. Perwakilan Sel Tumbuhan
20:679-684.
Quiroz-Figueroa FR, Fuentes-Cerda CFJ, Rojas-Herrera R,
dan Loyola-Vargas VM (2002) Studi histologis pada
tahap perkembangan dan diferensiasi dua sistem
embriogenesis somatik yang berbeda dariKopi arabika.
Rep Sel Tumbuhan 20:1141-1149.
Raghavan V, Sharma KK (1995) Embriogenesis zigotik pada
gymnospermae dan angiospermae. Dalam: Thorpe TA
(ed), In vit ro embriogenesis pada tumbuhan, hal.73-115.
Pers Akademik Kluwer, Belanda.
Raghuramulu Y, Purushotham K, Sreenivasan MS, Ramaiah
PK (1987).In vitroregenerasi plantlet kopi di In dia. J.
Coffee Res. 17:57-64.
Schöpke C, Müller LE, Kohlenbach HW (1987) Somatic em
briogenesis dan regenerasi planlet dalam kultur protoplas
arabikaL.) Lett FEBS. 534:75-81.
Braz. J. Tumbuhan Physiol., 18(1):217-227, 2006
dari embrio somatik kopi (Canephora kopiP. ex. Fr.).
Kultus Organ Jaringan Sel Tumbuhan. 8:243-248.
Schöpke C, Müller LE, Kohlenbach HW (1988) Protoplas
kopi: isolasi, kultur dan regenerasi plantlet. Di dalam:
Prok. XII Collok. Sains. Int. Kopi. Montreux, hlm.
426-432.
Schöpke C (1989) Kultur in vitro pada kopi: upaya
mengisolasi dan mengolah protoplas dan meregenerasi
tanaman. Maraun Frankfurt, JW Goethe Univ., tesis PhD.
Sharp WR, Caldas LS, Crocomo OJ, Monaco LC, Carvalho
A (1973) ProduksiKopi arabikakalus dari tiga tingkat
ploidi dan morfogenesis berikutnya. Phyton 31:67-74.
Söndhal MR, Sharp WR (1977) Frekuensi tinggi induksi
embrio somatik pada eksplan daun berbudayaKopi ara
bicaL. Z. Tumbuhan Physiol. 81:395-408.
Söndhal MR, Sharp WR (1979) Penelitian diKopispp. dan
aplikasi metode kultur jaringan. Dalam: Sharp WR,
Larsen PO, Paddock EF, Raghavan V (eds), Plant cell and
tissue culture, pp.527-584. Universitas Negeri Ohio.
Tekan, Co
lumbus.
Söndahl MR, Spahlinger DA, Sharp WR (1979 a) Sebuah
studi histologis induksi frekuensi tinggi dan frekuensi
rendah embrio somatik pada eksplan daun berbudayaKopi
di abicaL. Z. Tumbuhan Physiol. 94:101-108.
Söndahl MR, Salisbury JL, Sharp WR (1979b) Karakterisasi
SEM jaringan embriogenik dan embrio globular selama
embriogenesis somatik frekuensi tinggi dalam sel kalus
kopi. Z.Pflanzenphysiol. 94:185-188
Söndhal MR, Chapman M, Sharp WR (1980) Pembebasan
protoplas, rekonstitusi dinding sel, dan proliferasi kalus
padaKopi arabikaL. jaringan kalus. Turrialba 30:161-165.
Söndhal MR, Lauritis JA (1992) Kopi. Dalam: Por FA,
Hammer schlag F, Litz RE (eds), Bioteknologi tanaman
buah abadi, hal.401-420. CAB Internasional, London.
Spiral J, Pétiard V (1991) Kultur dan regenerasi protoplas
diKopijenis. Di dalam: Prok. XIV Colloq. Sains. Int.
Kopi. San Francisco, hal.383-391.
Spiral J, Thierry C, Paillard M, Pétiard V (1993) Regenerasi
planletCanephora kopiPierre (Robusta) trans dibentuk
olehAgrobacterium rhizogenes. C.R. Acad. Tahu t316 Seri
III, hlm.1-6
Spiral J, Leroy T, Paillard M, Pétiard V (1999) Kopi
transgenik (Kopijenis). Dalam: Bajaj YPS (ed),
Bioteknologi bidang pertanian dan kehutanan, Vol. 44,
hlm.55-76. Musim semi er-Verlag, Berlin.
Sreenath HL, Shanta HM, Babu KH, Naidu MM (1995) Jadi
matic embriogenesis dari kultur integumen (perisperm)
kopi. Perwakilan Sel Tumbuhan 14:670-673.
Staritsky G (1970) Pembentukan embrioid pada jaringan
kalus kopi. Akting Bot. Neerl. 19:509-514.
Sugiyama M, Matsuoka C, Takagi T (1995) Transformasi
kopi denganAgrobacterium rhizogenes. Di dalam: XVI
Colloq. Sains. Int. Kopi. Kyoto, hal.853-859.
Tahara M, Yasuda T, Uchida N, Yamaguchi T (1994)
Pembentukan embrio somatik dari protoplaskopi arab
caL. Hortscience 29:172-174.
Tahara M, Nakanishi T, Yasuda T, Yamaguchi T (1995)
Aspek tologis dan biologisnya dalam embriogenesis
 somatikKopi arabika. Di dalam: XVI Colloq. Sains. Int.
Braz. J. Tumbuhan Physiol., 18(1):217-227, 2006
BIOTEKNOLOGI KOPI
227
Townsley PM (1974) Produksi kopi dari kultur suspensi sel
tanaman. Jurnal Institut Ilmu dan Teknologi Pangan
Kanada 7:79-81.
van Boxtel J, Berthouly M, Carasco C, Dufour M, Eskes A
(1995) Ekspresi sementara dariB-glucuronidase mengikuti
pengiriman biolistik DNA asing ke dalam jaringan kopi.
Perwakilan Sel Tumbuhan 14:748-752.
van Boxtel J, Berthouly M (1996) Embriogenesis somatik
frekuensi tinggi dari daun kopi. Jaringan Sel Tumbuhan
Atau Kultus Gan. 44:7-17.
van Boxtel J, Eskes A, Berthouly M (1997) Glufosinate
sebagai penghambat proliferasi kalus yang efisien pada
jaringan kopi. Sel Invitro. Dev. Biol. - Tanam 33:6-12.
Van der Voort F, Townsley PM (1975) Perbandingan lipid
unsaponificable diisolasi dari kultur sel kopi dan dari biji
kopi hijau. Journal de l'Institut Ca nadien des Sciences et
Technologies d'Alimentation 8: 199-201.
Waller GR, CD Macvean, Suzuki T (1983) Produksi tinggi
kafein dan aktivitas enzim terkait dalam kultur kalusKopi
arabikaL. Rep Sel Tumbuhan 2:109-112.
Yasuda T, Fujii Y, Yamaguchi T (1985) Induksi kalus
Kopi. Kyo to, hal.860-867.
embriogenik dariKopi arabikaeksplan daun dengan
benzylad enine. Fisiol Sel Tumbuhan. 26:595-597.
Yasuda T, Tahara M, Uchida N, Yamaguchi T (1986) Somat
ic embriogenesis dari kalus kopi dan protoplas. Di dalam:
Somers DA, Gengenbach BG, Biesboer DD, Hackett WP,
Green CE (eds), Abstr. 6th Int. Cong. Kultur Sel Jaringan
Tumbuhan, Univ. Minnesota, Minneapolis. hal.137.
Yasuda T, Tahara M, Hataka T, Nishibata T, Yamaguchi T
(1995) Perbanyakan klon melalui embriogenesis
somatikKopijenis. Di dalam: XVI Colloq. Sains. Int.
Kopi. Kyoto, hal.392-402.
Zamarripa A, Ducos JP, Tessereau H, Bollon H, Eskes A,
Pétiard V (1991) Pengembangan proses perbanyakan
massal tanaman kopi dengan embriogenesis somatik
dalam media cair. Dalam: XIV Colloq. Sains. Int. Kopi.
San Francisco, hal.392-402.
Zamarripa A (1993) Kajian dan perkembangan
embriogenesis pada media cair pohon kopi (Coffea
canephora P., Coffea arabica L. dan hybrid Arabusta).
Rennes, Prancis, Sekolah Tinggi Agronomi Nasional.
Tesis doktoral.
Braz. J. Tumbuhan Physiol., 18(1):217-227, 2006