Jurnal Penelitian

UJI EFEKTIFITAS EKSTRAK DAUN BINAHONG (Anredera cordifolia (Ten.)

Steenis) SEBAGAI ANTIMIKROBA TERHADAP BAKTERI Klebsiella
pneumoniae SECARA IN VITRO

Noorhamdani As.*, R. Setyohadi **, Akmal Fawzi Y.U.***

*Laboratorium Mikrobiologi FKUB, **Laboratorium Biokimia FKUB,

***Mahasiswa Program Studi Pendidikan Dokter FKUB

ABSTRAK

Penyakit yang disebabkan oleh bakteri jenis enterobacteriacea terutama jenis

Klebsiella pneumoniae yang dapat menyebabkan pneumonia sering dijumpai dan
dapat berakibat fatal. Bakteri ini sangat mudah menular melalui udara dan apalagi
pada tempat-tempat padat. Hal ini lah yang memudahkan adanya infeksi nosokomial
pada rumah sakit. Untuk mengatasi masalah infeksi bakteri sering digunakan
antimikroba. Tapi banyak obat yang dianggap tidak efektif dan di anggap bakteri
telah resisten terhadap obat tersebut. Oleh karena itu diperlukan obat alternatif.
Salah satunya daun binahong yang memiliki kandungan flavonoid, saponin, dan
tannin. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui ekstrak daun binahong sebagai
antimikroba terhadap Klebsiella pneumoniae secara in vitro. Metode yang digunakan
adalah dilusi tabung yang terdiri dari tahap penentuan Kadar Hambat Minimum
(KHM) dan Kadar Bunuh Minimum (KBM). Ekstrak daun binahong dibuat dengan
ekstraksi Maserasi menggunakan metanol 96%. Konsentrasi ekstrak yang dipakai
yaitu 11,5%, 12%, 12,5%, 13%, 13,5% dan 14% v/v, sedang konsentrasi Klebsiella
pneumoniae adalah 106 CFU/ml. Hasil statistik one way ANOVA menunjukkan
terdapat perbedaan yang signifikan pada perubahan konsentrasi ekstrak metanol
96% daun binahong terhadap jumlah koloni Klebsiella pneumoniae (p<0,05). Uji
korelasi menunjukkan adanya hubungan antara konsentrasi ekstrak dengan jumlah
koloni (Korelasi, R = -0,919: p<0,05). Berdasarkan hasil penelitian, dapat
disimpulkan bahwa ekstrak methanol daun binahong mempunyai efek antimikroba
terhadap Klebsiella pneumoniae secara in vitro dengan Kadar Hambat Minimum
(KHM) yang tidak diketahui karena tingkat kekeruhan yang relatif sama dan Kadar
Bunuh Minimum (KBM) adalah 14% v/v.

Kata kunci: antimikroba, Klebsiella pneumoniae, daun binahong

ABSTRACT

Diseases caused by bacteria types enterobacteriacea especially of Klebsiella

pneumoniae, which can cause pneumonia are common and can be very dangerous.
These bacteria are easily spread by air and especially in crowded places. This is
what allows the existence of nosocomial infections in hospitals. To solve the problem
of bacterial infection commonly used antimicrobial. But many drugs are considered
ineffective and is considered the bacteria were resistant to the drug. Therefore we
need an alternative medicine. One of them is binahong leaves which contains
flavonoids, saponins, and tannins. This study aims to determine binahong leaves
extract as an antimicrobial against Klebsiella pneumoniae in vitro. The method used
is the dilution tube consisting of phase determination Minimum Inhibitory
Concentration (MIC) and Minimum Kill Concentration (MBC). Binahong leaf extract is
made by Maceration extraction using methanol 96%. The concentration used were

1
Jurnal Penelitian

11.5%, 12%, 12.5%, 13%, 13.5% and 14% v / v, while concentrations of Klebsiella
pneumoniae is 106 CFU / ml. By one-way ANOVA shows significant differences in
concentrations changes of methanol 96% extract of binahong leaves to the number
of Klebsiella pneumoniae colonies (p <0.05). Correlation test shows the relationship
between the concentration of the extract with the number of colonies (Correlation, R
= -0.919: p <0.05). Based on the result, it can be concluded that the methanol extract
of binahong leaves has an antimicrobial effect against Klebsiella pneumoniae in vitro
with the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) which is unknown because of the
relatively similar levels of turbidity and Minimum Kill Concentration (MBC) is 14% v /
v.

Keywords: antimicrobial, Klebsiella pneumoniae, binahong leaves.

PENDAHULUAN berada di rumah sakit atau tempat

pelayanan kesehatan.1
Pada saat ini banyak bakteri Untuk mengatasi masalah
yang dapat menyebabkan penyakit. infeksi bakteri sering digunakan
Bakteri ini mudah sekali menular antimikroba. Tapi seiring dengan
terutama pada tempat-tempat perkembangan zaman, bakteri juga
pelayanan kesehatan seperti rumah dapat berkembang untuk melawan
sakit dan puskesmas. Penyakit yang obat antimikroba sehingga bakteri
disebabkan oleh bakteri jenis tetap dapat bertahan hidup dalam
enterobacteriacea terutama jenis tubuh manusia. Sudah banyak obat
Klebsiella pneumoniae yang dapat yang dianggap tidak efektif dan di
menyebabkan pneumonia, sering anggap bakteri telah resisten terhadap
dijumpai di berbagai negara di dunia obat tersebut. Akhir-akhir ini, banyak
dan dapat berkaibat fatal pada penelitian untuk menemukan obat
penderita yang memiliki sistem imun baru yang efektif terhadap bakteri.
yang masih rendah apalagi jika tidak Kebanyakan penelitian mengambil
ditangani dengan baik dan benar. bahan dari bahan alami karena aman
Menurut data dari WHO setiap dan efektif. Selain itu, masyarakat juga
tahunnya, 1,8 juta anak kecil dibawah telah banyak menggunakan
5 tahun mengalami pneumonia dan pengobatan alternatif yang
20% diantaranya meninggal dunia 8. menggunakan bahan-bahan alami.
Bakteri Klebsiella sendiri Pada saat ini banyak sekali
adalah bakteri fakultatif anaerob. pengobatan alami yang belum terbukti
Biasanya banyak ditemukan dikulit, secara ilmiah contohnya adalah
mulut, dan saluran pencernaan tapi tumbuhan binahong. Menurut
habitat aslinya adalah di tanah. Bakteri masyarakat tanaman binahong dapat
ini sangat mudah menular melalui di gunakan untuk menyembuhkan
udara dan apalagi pada tempat-tempat diabetes, pembengkakan liver, radang
padat. Hal ini lah yang memudahkan usus. reumatik, dan penyembuhan
adanya infeksi nosokomial pada luka. Pada penelitian yang dilakukan
rumah sakit. Pneumonia yang Wongso yang meneliti tentang
disebabkan oleh Klebsiella pneumonia kandungan daun-daun tanaman
dapat berupa pneumonia komunitas menjelaskan bahwa dalam daun
atau community accuired pneumonia. binahong terdapat aktivitas
Pneumonia komunitas atau community antioksidan, asam askorbat dan total
accuired pneumonia adalah fenol yang cukup tinggi. Daun
pneumonia yang didapat dari binahong diketahui mempunyai
masyarakat. Strain baru dari Klebsiella kandungan saponin triterpnoid,
ini dapat menyebabkan penyakit flavanoid dan minyak atsiri. Pada
tersebut yang berarti didapat saat penelitian yang dilakukan Yin
menemukan kandungan antibakterial

2
Jurnal Penelitian

dan sitotoksik pada daun binahong Sampel Penelitian

yang diinvestigasi dengan metode Sampel yang digunakan dalam
agar dilusi 9. penelitian ini adalah ekstrak daun
Berdasarkan beberapa- binahong dan menggunakan bakteri uji
beberapa informasi tersebut diatas, Klebsiella pneumoniae yang dimiliki
maka sangat menarik dilakukan oleh Laboratorium Mikrobiologi
penelitian lanjutan dan terfokus untuk Fakultas Kedokteran Universitas
mengetahui apakah ekstrak daun Brawijaya Malang.
binahong yang tumbuh di Indonesia Isolat bakteri Klebsiella
memiliki efek antimikroba terhadap Pneumoniae yang digunakan adalah
Klebsiella pneumoniae sehingga, bateri dari Laboratorium Mikrobiologi
dapat digunakan sebagai alternatif Fakultas Kedokteran Universitas
pengobatan penyakit yang ditimbulkan Brawijaya yang berasal dari darah
oleh Klebsiella pneumoniae. penderita pneumoni di Rumah Sakit
Tumbuhan Binahong ini sangat mudah Saiful Anwar (RSSA) Malang. Daun
ditanam dan dibudidayakan diseluruh binahong yang digunakan adalah daun
Indonesia. binahong yang dibeli dari Pak Yono
selaku pemilik kios bunga
METODE PENELITIAN “ALAMANDA” di jl Bukit Berbunga di
kota Batu.
Desain Penelitian
Desain penelitian yang Variabel penelitian
digunakan adalah penelitian 1. Variabel bebas
eksperimental laboratorik. Uji Variabel bebas pada penelitian
antimikroba secara in vitro dengan ini adalah ekstrak daun binahong yang
menggunakan tube dilution test untuk dibuat dengan konsentrasi kadar
mengetahui aktivitas ekstrak daun ekstrak antara lain : 14% , 13,5% ,
binahong (Anredera cordifolia (Ten.) 13%, 12,5%, 12%, 11,5%, 0%
Steenis) sebagai antimikroba terhadap berdasarkan eksplorasi awal atau
Klebsiella pneumoniae. Proses penelitian pendahuluan.
pengekstrakan daun binahong 2. Variabel tergantung
menggunakan metode maserasi Variabel tergantung pada
dengan pelarut metanol. Sedangkan penelitian ini adalah jumlah koloni
pengujian ekstrak daun binahong bakteri Klebsiella Pneumoniae yang
sebagai antimikroba menggunakan tumbuh pada medium NAP.
metode dilusi tabung. Tube dilution
test meliputi dua tahap, yaitu tahap Definisi Operasional
pengujian bahan pada media broth  Kadar Hambat Minimum (KHM)
dan tahap penanaman pada medium adalah konsentrasi minimal
NAP (Nutrient Agar Plate) dengan larutan ekstrak daun binahong
metode streaking (penggoresan) yang yang mampu menghambat
bertujuan untuk menentukan KHM pertumbuhan bakteri Klebsiella
(Kadar Hambat Minimal) dan KBM Pneumoniea. Hal ini ditandai
(Kadar Bunuh Minimal).Besarnya dengan tidak adanya
konsentrasi yang digunakan, kekeruhan pada larutan yang
ditetapkan melalui eksperimen berisi ekstrak daun binahong
pendahuluan. dan suspensi bakteri tersebut
dalam tabung setelah
Tempat dan Waktu Penelitian diinkubasikan 18-24 jam.
Penelitian ini dilakukan di Definisi ini tidak berlaku jika
Laboratorium Mikrobiologi Fakultas ada reaksi antara bahan aktif
Kedokteran Universitas Brawijaya ekstrak dengan media Nutrient
pada bulan Agustus 2010 sampai Broth yang menyebabkan
bulan Oktober 2010. kekeruhan pada seluruh
tabung.

3
Jurnal Penelitian
 Kadar Bunuh Minimum (KBM)
adalah konsentrasi minimal
ekstrak daun binahong yang
mampu membunuh
pertumbuhan bakteri Klebsiella
Pneumoniae. Hal ini ditandai
dengan tidak adanya
pertumbuhan koloni pada
medium NAP setelah
diinkubasikan selama 18-24
jam yang dibandingkan dengan
control negatif.
 Kontrol positif/kontrol bakteri
adalah konsentrasi 0 % yang
dapat digunakan untuk
mengetahui apakah bakteri
yang digunakan terkontaminasi
dengan bakteri lain. Kontrol
positif berasal dari larutan
bakteri uji yang telah
distandardisasi dengan standar
Mc Farland 0,5 sebanyak 2 ml.
 Kontrol negatif/control bahan
adalah konsentrasi yang
digunakan untuk mengetahui
apakah bahan yang digunakan
steril. kontrol negatif dibuat
dengan cara mencampurkan
antara ekstrak daun binahong
sebanyak 1 ml dengan
aquades sebanyak 1 ml.
 Original inoculum adalah
inokulum bakteri dengan
konsentrasi 106 CFU/ml yang
diinokulasikan pada media
agar padat sebelum diinkubasi,
dan digunakan untuk mencari
kategori KBM.
Analisis Data
Penelitian ini menggunakan
variable numerik dengan satu faktor
yang ingin diketahui yaitu perbedaan
jumlah koloni bakteri Klebsiella
pneumoniae yang dihasilkan pada
media NAP berdasarkan faktor
perlakuan pemberian ekstrak daun
binahong, sehingga uji statistik yang
digunakan adalah One-Way ANOVA
dengan program SPSS 15, dengan
taraf signifikasi 0,05 (5%).
Langkah-langkah dalam One-
Way ANOVA adalah sebagai berikut
(Dahlan, 2008) :
4
 Memeriksa syarat uji ANOVA
untuk > 2 kelompok yaitu
- Sebaran data harus
normal
- Varian data harus sama
 Melakukan analisi One-Way
ANOVA, untuk mengetahui
perbedaan jumlah koloni
bakteri Klebsiella
pneumoniae pada setiap
perlakuan terutama yang
disebabkan oleh pemberian
ekstrak daun binahong.
Kemudian untuk mengetahui
pengaruh peningkatan konsentrasi
ekstrak daun binahong terhadap
pertumbuhan Klebsiella pneumoniae
maka digunakan uji statistik Kolerasi
Pearson-Regresi Linier. Analisis data
dilakukan dengan menggunakan
program SPSS (Statistical Product of
Service Solution) for windows versi
15.0
HASIL PENELITIAN DAN ANALISIS
DATA
Data Hasil Penelitian
1. Hasil Identifikasi bakteri
Escherichia coli
Penelitian ini menggunakan
sampel bakteri dari stock kultur yang
tersimpan di laboratorium Mikrobiologi
FKUB. Sampel bakteri diidentifikasi
kembali untuk membuktikan bahwa
bakteri yang digunakan adalah bakteri
Klebsiella pneumoniae. Beberapa tes
reidentifikasi yang dilakukan adalah
dengan pewarnaan gram dan
menggunakan Microbact 12A. Hasil
identifikasi bakteri adalah pada
pengecatan gram koloninya dilihat
secara mikroskopis yaitu
mengamatinya di bawah mikroskop
dengan pembesaran 1000x maka
didapatkan koloni berbentuk batang
(basil), berukuran kecil (0,5x3,0 µm),
bersifat Gram negatif dan tidak
membentuk spora. Identifikasi
berikutnya adalah menggunakan
Microbact 12A. Setalah dilakukan
serangkaian identifikasi didapatkan
hasil bahwa bakteri yang akan
Jurnal Penelitian

digunakan pada penelitian ini adalah Ekstrak daun Binahong

bakteri Klebsiella pneumoniae.
2. Hasil Pengamatan
Kekeruhan dan Perhitungan
Jumlah Koloni Bakteri
Klebsiella pneumoniae
Penelitian ini dilakukan dengan
menggunakan enam macam
konsentrasi ekstrak daun Binahong
(Anredera cordifolia (Ten.) Steenis),
dengan variasi konsentrasi 11,5%;
24%; 12,5%; 13%; 13,5%; 14%, serta
konsentrasi 0% (bakteri tanpa ekstrak)
dan konsentrasi 100% (bahan ekstrak)
sebagai kontrol positif dan negatif.
bewarna hijau kehitaman. Sebelum
diinkubasikan warnanya sudah terlihat
sangat keruh sehingga penelitian ini
tingkat kekeruhan masing-masing
konsentrasi ekstrak tidak dapat
diamati dan sekaligus tidak dapat di
analisis secara kualitatif. Pada
konsentrasi ekstrak paling rendah pun
terlihat keruh, meskipun apabila
dibandingkan dengan konsentrasi
yang lain mempunyai tingkat
kekeruhan yang berbeda-beda.
Perbandingan tingkat kekeruhan pada
masing-masing konsentrasi dapat
dilihat pada Gambar 1.

Gambar 1. Uji Dilusi Tabung Perbandingan Tingkat Kekeruhan Tiap

Konsentrasi Ekstrak Setelah Diinkubasi

Dari Gambar 1 dapat dilihat (Nutrient Agar Plate) kemudian di

bahwa dari konsentrasi 11,5%-14%
tidak tampak perbedaan warna yang
signifikan dan cenderung sama. Akibat
kekeruhan tersebut, maka Kadar
Hambat Minimal (KHM) ekstrak daun
Binahong terhadap bakteri Klebsiella
pneumoniae ini tidak dapat ditentukan
secara kualitatif.
Masing-masing konsentrasi
kemudian di streaking pada NAP
inkubasikan pada suhu 37 oC selama
18-24 jam. Setelah dinkubasi, maka
dilakukan pengamatan dan
perhitungan jumlah pertumbuhan
koloni bakteri pada masing-masing
plate. Hasil pengamatan dapat dilihat
pada sampel Gambar 2 berikut.

5
Jurnal Penelitian

11,5% 12%

12,5 13%

13,5% 14%

Gambar 5.2. Pertumbuhan koloni Klebsiella pneumoniae pada Medium

NAP

6
Jurnal Penelitian
Pada tabung dengan
konsentrasi ekstrak 0% (kontrol positif)
dilakukan pengenceran
suspensibakteri dengan larutan NaCl
sebanyak 1000x, Sedangkan pada
konsentrasi 11,5%; 12%; 12,5; 13%;
13,5% dan 14% suspense bakteri di
encerkan sebanyak 100x sebelum
dilakukan streaking pada NAP. Hal
tersebut dilakukan karena apabila
tidak dilakukan pengenceran maka
akan didapatkan pertumbuhan koloni
bakteri yang sangat padat dan tidak
dapat di hitung secara kuantitatif pada
colony counter, oleh sebab itu
pengenceran ini bertujuan untuk
memudahkan dalam perhitungan
jumlah koloni bakteri yang tumbuh
pada NAP dengan konsentrasi ekstrak
sebenarnya. Selanjutnya masing-
masing plate dihitung jumlah koloni
TABEL 1. Hasil Perhitungan Jumlah Koloni Klebsiella pneumoniae pada
Medium NAP
*Keterangan: jumlah koloni dalam satuan CFU/plate
Dari pertumbuhan koloni
bakteri Klebsiella pneumoniae tersebut
dapat ditentukan Kadar Bunuh Minimal
dari ekstrak daun Binahong ini yaitu
pada jumlah koloni <0,1% dari original
inoculum pada pengulangan 1,
pengulangan 2, pengulangan 3, dan
pengulangan 4. Rata-rata original
inoculum bakteri Klebsiella
pneumoniae adalah 648 CFU/plate.
Sehingga KBM nya adalah pada
konsentrasi 14% (0,1% dari jumlah
original inoculums =0,648 CFU/plate).
Berdasarkan hasil pengamatan
terhadap jumlah koloni bakteri
7
bakteri yang tumbuh dengan
menggunakan colony counter. Cara
perhitungan koloni bakteri tersebut
adalah sebagai berikut: pertama
dilakukan pengamatan pertumbuhan
koloni pada plate secara subjektif
apakah koloni sangat banyak atau
tidak. Apabila sangat banyak maka
dipilih sembilan kotak yang mewakili
masing masing plate, jumlah koloni
yang didapatkan adalah hasil kali
jumlah koloni 9 kotak dengan luas
plate dikalikan jumlah pengenceran
yang dilakukan. Apabila dalam satu
plate semua koloni dapat terhitung
semua, maka tidak perlu dikalikan luas
plate. Untuk memperjelas perhitungan
dari masing-masing plate maka
disajikan dalam Tabel 1.
Klebsiella pneumoniae yang dihasilkan
pada media NAP dalam beberapa
konsentrasi ekstrak daun binahong
dan kontrol positif (konsentrasi 0%)
pada Tabel 5.1. menunjukkan hasil
yang cukup bervariasi. Adanya
perbedaan konsentrasi ekstrak daun
binahong pada perlakuan memberikan
pengaruh atau efek yang berbeda
sebagai antimikroba terhadap jumlah
koloni bakteri Klebsiella pneumoniae
yang dihasilkan pada media NAP.
Adanya pengaruh pemberian ekstrak
daun binahong tersebut mulai terlihat
dimana jumlah koloni bakteri Klebsiella
pneumoniae yang dihasilkan pada
Jurnal Penelitian
medium NAP menjadi lebih sedikit
setelah diberikan perlakuan ekstrak
daun binahong mulai pada konsentrasi
11,5% dibandingkan dengan jumlah
koloni bakteri Klebsiella pneumoniae
yang dihasilkan pada media NAP pada
kelompok kontrol positif (konsentrasi
0%). Kemudian jumlah koloni bakteri
Klebsiella pneumoniae yang dihasilkan
pada media NAP cenderung semakin
menurun ketika diberikan konsentrasi
yang lebih tinggi. Bahkan pada
konsentrasi yang lebih tinggi yaitu
14% sampai dengan 100% sudah
tidak didapatkan pertumbuhan bakteri
Klebsiella pneumoniae sama sekali
pada NAP tersebut. Dengan demikian,
berdasarkan penilaian secara
deskriptif menurut rata-rata jumlah
koloni bakteri Klebsiella pneumoniae
yang dihasilkan pada media NAP
tersebut, maka dapat dikatakan bahwa
pemberian perlakuan berupa eksrak
daun binahong menunjukkan
pengaruh sebagai antimikroba apabila
dibandingkan dengan jumlah koloni
kontrol kuman.
PEMBAHASAN
Penelitian eksperimetal ini
bertujuan untuk mengetahui efek
ekstrak daun binahong (Anredera
cordifolia (Ten.) Steenis) sebagai
antimikroba terhadap bakteri Klebsiella
pneumoniae secara in vitro. Metode
yang digunakan adalah metode dilusi
tabung (tube delution test). Dari
metode ini dapat ditentukan Kadar
Bunuh Minimal (KBM) ekstrak daun
binahong yang ditandai dengan
terdapatnya pertumbuhan koloni
bakteri pada NAP <0,1% dari Original
Inoculum. Sedangkan Kadar Hambar
Minumum (KHM) tidak dapat
ditentukan karena berdasarkan
pengamatan, kekeruhannya tidak
mempunyai pola yang teratur. Selain
itu dalam penelitian ini juga bertujuan
untuk mengetahui seberapa besar
pengaruh pemberian ekstrak daun
binahong terhadap pertumbuhan
koloni bakteri Klebsiella pneumoniae.
Penelitian ini menggunakan
sampel bakteri dari stok kultur yang
8
tersimpan di laboratorium Mikrobiologi
FKUB. Sampel bakteri di identifikasi
kembali untuk membuktikan bahwa
bakteri yang digunakan adalah bakteri
Klebsiella pneumoniae. Beberapa tes
identifikasi yang dilakukan adalah
dengan pewarnaan gram dan
identiikasi menggunakan Microbact
12A. Hasil identifikasi bakteri adalah
pada pengecatan gram koloninya
dilihat secara mikroskopis yaitu
mengamatinya di bawah mikroskop
dengan pembesaran 1000x maka
didapatkan koloni berbentuk batang
(basil), berukuran kecil (0,5x3,0 µm),
bersifat Gram negatif dan tidak
membentuk spora.
Ekstrak daun binahong yang
digunakan dalam penelitian ini
didapatkan dengan cara ekstraksi
bahan yaitu daun binahong, yang
diekstrak dengan ekstraksi maserasi
dengan metanol 96%. Metanol 96%
dipilih sebab bahan aktif yang diduga
terdapat pada daun binahong yaitu
golongan fenol, cenderung larut
terhadap metanol.
Penulis melakukan penelitian
eksplorasi terlebih dahulu sebelum
mendapatkan konsentrasi perlakuan
tersebut. Penelitian eksplorasi
dilakukan dalam beberapa tahap.
Tahap pertama adalah mencoba
dengan konsentrasi 100%, 50%, 25%,
12,5%, 6,25%, 3,125%, dan 0%. Dari
eksplorasi tahap pertama tidak lagi
didapatkan pertumbuhan bakteri pada
konsentrasi 25% sehingga dilakukan
penelitian eksplorasi tahap kedua.
Tahap kedua adalah mencoba dengan
konsentrasi 12,5%, 15%, 17,5%, 20%,
22.5%, dan 25%. Dari eksplorasi
tahap kedua tidak lagi didapatkan
pertumbuhan bakteri pada konsentrasi
15% sehingga dilakukan penelitian
eksplorasi tahap ketiga. Tahap ketiga
adalah mencoba dengan konsentrasi
12,5%, 13%, 13,5%, 14%, 14,5%, dan
15%. Dari penelitian ekplorasi tahap
ketiga ini tidak didapatkan
pertumbuhan kuman pada konsentrasi
14% sehingga dilakukan eksplorasi
tahap keempat. Tahap keempat
adalah mencoba dengan konsentrasi
11.5%, 12%, 12,5%, 13%, 13,5%, dan
Jurnal Penelitian
14%. Dari hasil eksplorasi tahap
keempat tidak didapatkan
pertumbuhan kuman pada konsentrasi
14%. Dari rentang tersebut, penulis
memilih konsentrasi 11.5% hingga
14% sebagai konsentrasi perlakuan
dengan rentang konsentrasi 0,5%.
Konsentrasi perlakuan yang
digunakan adalah 11.5%, 12%, 12,5%,
13%, 13,5%, dan 14%.
Warna ekstrak daun binahong
adalah Warna ekstrak daun binahong
adalah hijau kehitaman, sehingga
tingkat kekeruhan dari masing-masing
konsentrasi perlakuan tidak dapat
diamati secara kualitatif untuk
menemukan KHM-nya. Bahkan
sebelum diinkubasikan, masing-
masing tabung sudah mengalami
kekeruhan sehingga dalam penelitian
ini nilai KHM tidak dapat ditentukan.
Hasil perhitungan jumlah koloni
bakteri ini kemudian dianalisis dengan
software SPSS 15, menggunakan uji
statistik One-way ANOVA, Uji
korealasi, dan Uji regresi. Dari uji
ANOVA, didapatkan nilai 0,000 (p <
0,05) yang berarti terdapat perbedaan
efek antimikroba pada pemberian
ekstak daun binahong antara setiap
perlakuan terhadap jumlah koloni
bakteri Klebsiella pneumoniae yang
dihasilkan pada medium NAP. Dari Uji
Korelasi didapatkan nilai signifikan
0,000 dan koefisien korelasi -0,919
yang berarti pemberian ekstrak daun
binahong mempunyai hubungan
(korelasi) yang signifikan dengan
jumlah koloni bakteri Klebsiella
pneumoniae dengan arah korelasi
negatif artinya semakin tinggi
konsentrasi ekstrak daun binahong
cenderung akan menurunkan jumlah
bakteri Klebsiella pneumoniae.
Kemudian Uji Regresi dapat diketahui
seberapa besar pengaruh pemberian
ekstrak daun binahong terhadap
jumlah koloni bakteri Klebsiella
pneumoniae. Hasil persamaan regresi
liniernya adalah Y = 1131.079 –
41.479X, dimana Y adalah jumlah
koloni bakteri Klebsiella pneumoniae
yang dihasilkan pada mediun NAP,
sedangkan X adalah perlakuan
pemberian ekstrak daun binahong.
9
Efek antibakteri daun binahong
terhadap bakteri Klebsiella
pneumoniae diperkirakan diperankan
oleh zat-zat aktif yang larut dalam
methanol 96%, sebab metode
ekstraksi pada penelitian ini
menggunakan pelarut methanol 96%.
Diperkirakan zat-zat yang larut dalam
methanol 96% adalah flavonoid,
saponin dan tannin. Aktivitas flavonoid
ini disebabkan oleh kemampuannya
untuk membenuk kompleks dengan
protein ekstraseluler dan terlarut, dan
dengan dinding sel. Flavonoid yang
bersifat lipofollik mungkin juga akan
merusak membrane sel mikroba.
Rusaknya membran dan dinding sel
akan menyebabkan metabolit penting
di dalam sel akan keluar, akibatnya
terjadi kematian sel. Saponin memiliki
efek sebagai antibakteri. Saponin akan
merusak membran sitoplasma yang
kemungkinan mempunyai efek yang
sinergis maupun adiktif dengan tanin
dalam merusak permeabilitas sel
bakteri itu sendiri. Berdasarkan
penelitian oleh Mandal P et.al. (2005)3
dikatakan bahwa saponin yang
diisolasi dari tumbuhan Psidium
Guajava mempunyai aktivitas dalam
menghambat germinasi Proteus
vulgaris pada dosis sekitar 30 mg/ml.
Sedangkan pada penelitian ekstrak
daun binahong yang sekarang
dilakukan didapatkan kadar bunuh
minimal pada dosis kurang lebih 14
mg/ml, hal ini kemungkinan
disebabkan karena kandungan
saponin pada daun binahong lebih
besar daripada yang terdapat pada
Psidium Guajava, atau adanya efek
sinergisme antara tannin dengan
saponin pada ekstrak daun binahong
menyebabkan daya bahan antibakteri
bahan tersebut meningkat 10. Selain
itu, pada penelitian sebelumnya yaitu
tahun 2002 oleh Egwim C et.al 2,
dikemukakan bahwa Cassia
eucalyptus (Ce) yang mempunyai
bahan aktif saponin dan tanin, jauh
lebih efektif sebagai antimikroba,
sebab KBM hanya sekitar 2 mg/ml,
dibandingkan bahan lain yaitu
Euphobia hirta (Eh); Citrus aurantifolia
(Ca), dan Cassia occidentalis (Co)
Jurnal Penelitian
yang hanya mempunyai 1 bahan aktif
yaitu tanin atau saponin saja. Hal ini
semakin menguatkan dugaan adanya
efek sinergisme antara kedua bahan
aktif tanin dan saponin.
Serupa dengan tanin, flavonoid
merupakan senyawa fenol yang
berfungsi sebagai antibakteri dengan
cara membentuk senyawa kompleks
terhadap protein extraseluler yang
mengganggu integritas membran dan
dinding sel. Kedua bahan aktif ini juga
kemungkinan mempunyai efek adiktif
ataupun sinergis. Selain itu, senyawa
flavonoid mempunyai kerja
menghambat enzim topoisomerase II
pada bakteri yang dapat merusak
struktur DNA bakteri dan
menyebabkan kematian. Intinya,
hampir semua zat antimikroba bekerja
dengan mempengaruhi sintesa protein
dan sintesa DNA, serta merusak
integritas membran dan dinding sel
bakteri yang akan mengganggu
permeabilitas sel. Pada 2009, sebuah
penelitian di Bali oleh IM Sukadana6,
menyebutkan bahwa ekstrak metanol
dari daun Avverhoa carmbola Linn.L
diduga mempunyai efek antimikroba
flavonoid yang tinggi. Hal ini dibuktikan
dengan adanya hambatan
pertumbuhan bakteri dengan
menggunakan metode difusi cakram
pada konsentrasi 5 - 10 mg/ml. Bakteri
yang diuji cobakan pada Escherichia
coli dan Staphylococcus aureus. Oleh
karena itu,tidak salah bila diduga
bahwa kandungan flavonoid dari
ekstrak metanol daun binahong pada
penelitian ini pun, mempunyai potensi
yang tidak kalah hebatnya dibanding
daun lain sebagai antibakteri
Klebsiella penumoniae.
Klebsiella pneumoniae yang
merupakan bakteri Gram negatif
memiliki dinding sel yang lebih rapuh
daripada Gram positif. Kandungan
peptidoglikannya lebih tipis, hanya 1
sampai 2 persen dari berat keringnya.
Pada permukaan membran terluar
bakteri terdapat lapisan
lipopolisakarida. Senyawa – senyawa
lipofilik seperti tanin, saponin, dan
flavonoid kemungkinan bisa
berinteraksi dengan lapisan lipid,
10
lipopolisakarida, pada membran luar
bakteri sehingga merusak integritas
dinding sel bakteri. Ikatan antar asam
amino dalam peptidoglikan bakteri
Gram negatif lebih renggang
dibandingkan dengan bakteri Gram
positif 4.Selain itu, dinding selnya tidak
selektif permeabel. Hal ini diduga
dapat memudahkan penetrasi zat –
zat dari luar ke dalam dinding sel 7.
Berdasarkan hasil penelitian
dan analisis, yang dikhususkan pada
daun binahong, didapatkan bahwa
ekstrak daun binahong mempunyai
efek antimikroba terhadap Klebsiella
pneumoniae secara in vitro. Hal ini
makin diperkuat dengan adanya bukti
– bukti tentang penelitian terkait yang
telah dilakukan sebelumya. Hasil
validitas internal penelitian tinggi
menunjukkan hubungan yang kuat
antar variabel, saat dilakukan uji
statistik.
Dengan melihat fakta hasil
penelitian yakni adanya penurunan
jumlah koloni bakteri Klebsiella
pneumoniae seiring dengan
peningkatan konsentrasi perlakuan
yang diperkuat dengan adanya data
bahwa daun binahong mengandung
bahan aktif yang mampu menghambat
pertumbuhan bakteri Klebsiella
pneumoniae, maka dapat dikatakan
bahwa daun binahong terbukti sensitif
sebagai antimikroba terhadap bakteri
Klebsiella pneumoniae. Hal ini
membuktikan bahwa hipotesa yang
telah disusun sebelumnya adalah
benar.
Keterbatasan penelitian ini
antara lain pada metode pembuatan
ekstrak daun binahong ini bersifat
acak dan kasar, sehingga tidak dapat
diketahui secara pasti bahan aktif
antimikroba apa saja yang terkandung
didalamnya. Selain itu proporsi jumlah
bahan aktif yang terkandung
didalamnya juga tidak diketahui secara
pasti. Mungkin bahan aktif itu bekerja
sendiri atau mungin semua bahan aktif
bekerja bersama dalam menghambat
pertumbuhan bakteri Klebsiella
pneumoniae. Selain itu , juga tidak ada
standarisasi pembuatan ekstrak bahan
alam, sehingga ada kemungkinan
Jurnal Penelitian

apabila dilakukan di laboratorium yang system reproduksi termasuk

berbeda, maka ekstrak yang teratogenitas, uji karsinogen, dan uji
dihasilkan kemungkinan memiliki efek mutagenesis, serta uji fase I sampai
yang berbeda. Kemungkinan yang lain IV. Pada dasarnya uji klinik tersebut
adalah adanya variasi biologis dari bertujuan untuk memastikan efikasi
masing-masing daun binahong yang keamanan, dan gambaran efek
ditanam di daerah X mungkin efeknya samping yang sering timbul pada
tidak sama dengan yang ditanam manusia akibat pemberian suatu obat
5
didaerah Y. Faktor lain yang , dalam hal ini adalah obat yang
mempengaruhi adalah lamanya berasal dari kandungan zat pada daun
penyimpanan. Semakin lama binahong.
disimpan, sensitivitas ekstrak biasanya
akan menurun. Akan tetapi ada juga KESIMPULAN
yang efeknya malah meningkat. Oleh
karena itu, untuk penelitian-penelitian Dari hasil penelitian, maka dapat
selanjutnya perlu adanya standarisasi, disimpulkan bahwa :
baik dari pemilihan bahan yang  Ekstrak daun binahong efektif
digunakan (daun binahong), alat sebagai antimikroba bakteri
ekstraksi serta lamanya masa simpan Klebsiella pneumoniae secara
(jangka waktu ekstrak masih dapat in vitro.
digunakan sebagai antimikroba)  Kadar Hambat Minimal (KHM)
sehingga apabila dilakukan penelitian dari penelitian ini tidak dapat
yang sama di tempat yang berbeda ditentukan karena sebelum
akan didapatkan hasil yang sama. maupun sesudah diinkubasi
Aplikasi klinis yang pertumbuhan bakterinya tetap
memungkinkan dari penelitian ini keruh sehingga tidak dapat
adalah penggunaan ekstrak daun diinterpretasikan KHMnya.
binahong secara oral untuk  Kadar Bunuh Minimal (KBM)
pengobatan pneumonia akibat infeksi ekstrak daun binahong
Klebsiella pneumoniae. Sedangkan (Anredera cordifolia (Ten.)
penggunaan secara sistemik, masih Steenis) yang dapat
memerlukan penelitian lebih lanjut membunuh bakteri Klebsiella
yaitu melalui pengujian pada hewan pneumonia adalah pada
coba maupun pengujian pada manusia konsentrasi 14%.
(uji klinik). Sebelum calon obat baru  Semakin besar ekstrak daun
dicobakan pada manusia, dibutuhkan binahong yang digunakan
waktu untuk meneliti sifat maka jumlah bakteri akan
farmakodinamik, farmakokinetik dan semakin menurun.
efek toksiknya pada hewan coba.
Dalam studi farmakodinamik ini SARAN
tercakup pengembangan teknik
analisis untuk mengukur kadar  Perlu penelitian lebih lanjut untuk
senyawa tersebut dan metabolitnya mengetahui prosentase masing-
dalam cairan biologis. Semuanya masing bahan aktif yang
diperlukan untuk memperkirakan dosis terkandung di dalam ekstrak daun
efektif dan memperkecil resiko binahong (Anredera cordifolia
penelitian pada manusia. Studi (Ten.) Steenis).
toksikologi pada hewan umumnya  Perlu penelitian lebih lanjut untuk
dilakukan 3 tahap yaitu penelitian mengetahui bahan aktif apa yang
toksisitas akut bertujuan mencari dosis paling berperan sebagai
tunggak yang membunuh 50% antimikroba pada ekstrak daun
sekelompok hewan coba (LD 50), binahong (Anredera cordifolia
penelititan toksisitas jangka panjang (Ten.) Steenis).
bertujuan meneliti efek toksisitas
khusus meliputi penelitain terhadap

11
Jurnal Penelitian

 Diharapkan dapat dilakukan 4. McKane, Larry, J. Kandel.

penelitain lebih lanjut tentang efek 1986. Microbiology: Essentials
antimikroba daun binahong And Applications. Singapore:
(Anredera cordifolia (Ten.) McGraw-Hill. p. 61-88.
Steenis) pada bakteri lain, fungi
maupun virus. 5. Setiawati, A. Suyatna F.D.,
 Perlu penelitian lebih lanjut untuk Muchtar A., Darmansjah I.,
melihat efektivitas ekstrak daun Estuningtyas A., Syarif A., dkk.
binahong (Anredera cordifolia 2007. Farmakologi dan Terapi
(Ten.) Steenis) secara in vivo ( Edisi 5. Departemen
hewan coba dan uji klinik) Farmakologi dan Terapeutik
sebelum digunakan sebagai Fakultas Kedkteran Universitas
alternatif pengobatan di Indonesia. Jakarta : Penerbit
masyarakat. Gaya Baru Hal 24-25.
 Perlu ada standarisasi dalam 6. Sukadana, I. 2009. Senyawa
pembuatan ekstrak daun Antibakteri Golongan Flavanoid
binahong (Anredera cordifolia Dari Buah Belimbing Manis.
(Ten.) Steenis), maupun dalam
Bali: FMIPA Universitas
pemilihan bahan serta lama masa Udayana.
simpan ekstrak yang masih dapat
digunakan sebagai antimikroba. 7. University of Texas - Houston
 Perlu dilakukan penelitian lebih Medical School. 1995. The
lanjut dengan metode lain, Bacterial Cell Wall. (Online).
misalnya dengan cara dekok (http://DPALM
ataupun perasan untuk Medic/00001438.htm, diakses
mengetahui kemampuan daun 10 Agustus 2010).
binahong (Anredera cordifolia
(Ten.) Steenis) sebagai 8. WHO. 2009. Pneumonia.
antimikroba terhadap Klebsiella http://www.who.int/mediacentre
pneumoniae. /factsheets/fs331/en/.

9. Wongso, A. 2009. Binahong

DAFTAR PUSTAKA (AnrederaCoridfolia (Ten.)
Steenis). (Online).
1. Ayuningtyas, F. 2008. http://wongsukses.blog.friendst
Klebsiella pneumonia. er.com/2008/12/binahong-
http://mikrobia2.files. andredera-cordifolia-ten-
wordpress.com/2008/05/klebsi steenis/. 9-12-2009. 10.30,
ella-pneumoniae.pdf. Diakses diakses tanggal 3 januari 2011
tanggal 5 desember 2009.
10. Yusha’u, M. 2010. Inhibitory
2. Egwim, C. 2002. Efficacy of Activity of Psidium Guajava
Some Nupe Medicinal Plants Extracts of Some Confirmed
Again Salmonela typhi. Journal Extended-Spectrum B-
of Enteropharmacology. Lactamases Producing
Esherecia coli, Klebsiella
3. Mandal P., Sinha S., Man, N.C. pneumonia, and Proteus
2005. Antimicrobial activity of vulgaris isolates. Kano:
saponins from Acacia Department of Biological
auriculiformis. (Online) Sciences.
(http://www.sciencedirect.com/
science, diakses tanggal 1
September 2010).

12