View metadata, citation and similar papers at core.ac.

uk brought to you by CORE

provided by Hasanuddin University Repository

AKTIVITAS UJI ANTIMITOTIK SENYAWA ASAM HEKSADEKANOAT ISOLAT

DARI HYDROID Aglaophenia cupressina Lamoureoux PADA CLEAVAGE
BULU BABI Tripneustes gratilla Linn.

Muh. Mizwar Rusdy.*, Sjafaraenana, Rosana Agusa, Magdalena Litaaya

*Alamat korespondensi e-mail : muh.mizwar.rusdy@gmail.com

*aJurusan Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,

Universitas Hasanuddin, Makassar

ABSTRAK

Studi tentang aktivitas antimitotik senyawa asam heksadekanoat isolat dari hydroid
Aglaopehenia cupressina Lamoureoux pada cleavage bulu babi Tripneustes gratilla Linn.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh senyawa bioaktif asam heksadekanoat
dari hydroid Aglaopehenia cupressina Lamoureoux pada cleavage bulu babi Tripneustes
gratilla Linn. Metode yang digunakan adalah metode uji aktivitas antimitotik senyawa asam
heksadekanoat pada cleavage bulu babi Tripneustes gratilla Linn. pada konsentrasi 1, 10, dan
100 µg/ml dengan kontrol positif vinkristin pada konsentrasi 0.01, 0.1, dan 1 µg/ml setelah
fertilisasi penghambatan tertinggi terjadi pada konsentrasi 100 µg/ml yaitu 66,66 %.
Kemudian setelah dihitung dengan analisis probit, asam heksadekanoat memiliki IC 50 sebesar
22,076 µg/ml yang memiliki kesamaan sifat antimitotik dengan vinkristin yang memiliki IC 50
sebesar 0,219 µg/ml. Sehingga asam heksadekanoat isolat dari hydroid Aglaopehenia
cupressina Lamoureoux berpotensi untuk dijadikan bahan dasar anti kanker.
Kata kunci : Antimitotik, asam heksadekanoat, hydroid, Aglaophenia cupressina
Lamoureoux.

ABSTRACT

The study of antimitotic activity of compounds hexadecanoic acid isolates of hydroids

Aglaopehenia cupressina Lamoureoux on cleavage urchins Tripneustes gratilla Linn. This
study aimed to determine the effect of the bioactive compounds hexadecanoic acid hydroids A.
cupressina Lamoureoux on cleavage sea urchin T. gratilla Linn. method used is the method of
test compounds hexadecanoic acid antimitotic activity against cell zygote urchins Tripneustes
gratilla Linn. at concentrations of 1, 10, and 100 ug / ml with a positive control vincristine at
concentrations of 0.01, 0.1, and 1 mg / ml after fertilization highest inhibition occurred at a
concentration of 100 ug / ml is 66,66%. Then after calculated by probit analysis, hexadecanoic
acid has IC50 of 22,076 ug / ml which has similarities with vincristine antimitotic properties
 that have IC50 of 0,219 ug / ml. So hexadecanoic acid isolates of A. hydroids cupressina
Lamoureoux potential to be used as anti-cancer ingredients.

Key words: antimitotic, hexadecanoic acid, hydroids, Aglaophenia cupressina Lamoureoux.

PENDAHULUAN merupakan indikator yang dapat digunakan

Penelitian dengan menggunakan
metode pengujian terhadap organisme hidup
telah banyak dilakukan. Salah satunya adalah
penelitian untuk mengetahui pengaruh zat-zat
atau senyawa tertentu terhadap aktifitas sel-
sel organisme tersebut, contohnya seperti
ekstrak tumbuhan dan hewan, hasil penelitian
dari ekstrak tersebut telah dimanfaatkan
sebagai bahan baku obat-obatan, pengelolaan
bahan makanan dan bahan kimia lainnya.
Termasuk pula dalam hal ini, penelitian
tentang pengaruh senyawa-senyawa tersebut
dalam menghambat proses pembelahan sel
tubuh organisme (uji antimitotik). Dalam
penelitian tersebut sel zigot bulu babi
merupakan salah satu bahan yang sering
digunakan.
Sel zigot bulu babi mempunyai
sensivitas selektif terhadap
mengalami tahapan pembelahan
halnya sel kanker, sehingga
digunakan dalam penelitian zat anti kanker.
Misalnya, untuk melihat pengaruh suatu
senyawa dalam menghambat laju pembelahan
dan pertumbuhan sel atau yang sering disebut
sebagai sifat antimitotik. Mekanisme ini juga
dalam menemukan senyawa-senyawa yang
dapat dijadikan bahan dalam pembuatan obat
anti kanker. Sebagaimana yang dikemukakan
oleh Jamaluddin (1996) bahwa pada
umumnya kerja dari anti kanker berdasarkan
atas gangguan pada salah satu proses sel yang
esensial. Pada sel kanker maupun sel normal
tidak mengalami perbedaan yang kualitatif,
maka bahan anti kanker bersifat sitotoksik
dan bukan kankerosid atau kankerotoksik
yang selektif.
Sel kanker adalah sel yang mengalami
perubahan bentuk, sifat dan kinetiknya.
Pertumbuhannya menjadi otonom, liar, tidak
terkendali, lepas dari koordinasi pertumbuhan
normal. Perubahan sel itu terjadi karena
mutasi gen yang mengatur pertumbuhan dan
diferensiasi sel yaitu proto-onkogen dan anti-
obat dan onkogen (Siswadono dan Soekarjo, 2000).
seperti Berbagai usaha dilakukan untuk mencegah
banyak dan menyembuhkan penyakit kanker, salah
satu diantaranya adalah pencarian senyawa
dari bahan alam.
Hydroid (filum Coelenterata)
merupakan invertebrate laut yang hidup
menempel pada karang, kaya akan senyawa
kimia seperti: alkaloid, steroid, terpenoid, hydroid A. cupressina Lamoureoux yang
histamine yang dapat dimanfaatkan sebagai berpotensi mempunyai aktivitas anti kanker.
bahan obat-obatan. Hasil isolasi dan Waktu dan Tempat
karakterisasi metabolit sekunder hydroid A. Penelitian ini dilaksanakan pada bulan
cupressina Lamoureoux menunjukkan bahwa April 2013 hingga Juni 2013. Pengambilan
senyawa bioaktif dari golongan asam sampel bulu babi T. gratilla Linn yang
karboksilat, alkaloid dan steroid, berlokasi pada perairan pulau Bonebatang,
menunjukkan toksisitas terhadap Artemia sedangkan pengujian antimitotik dilakukan
salina ( Johannes, 2008). dilaboratorium Fitokimia, Fakultas Farmasi
Penelitian ekstrak hydroid yang telah dan laboratorium Genetika, jurusan biologi,
dilakukan, seperti pemanfaatannnya untuk Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan
pengujian sebagai bahan anti fungi, anti Alam, Universitas Hasanuddin, Makassar.
bakteri, dan obat-obatan lainnya, diperoleh METODE PENELITIAN
hasil yang menunjukkan adanya pengaruh Metode yang digunakan dalam
yang berarti dari ekstrak ini. Berdasarkan penelitian ini adalah metode eksperimental
hasil penelitian tersebut, maka dilakukanlah dengan menguji aktivitas penghambatan
penelitian mengenai aktivitas antimitotik mitosis senyawa asam heksadekanoat isolat
senyawa asam heksadekanoat isolat dari dari hydroid Aglaophenia cupressina
hydroid A. cupressina Lamoureoux terhadap Lamoureoux pada uji antimitotik (antimitotic
pembelahan sel zigot bulu babi T. gratilla bioassay).
Linn.  Alat
 Tujuan Penelitian Alat-alat yang digunakan pada
Tujuan dari penelitian ini adalah penelitian ini adalah Mkroskop yang
untuk mengetahui pengaruh senyawa bioaktif dilengkapi kamera (Dino), cawan Petri
asam heksadekanoat isolat dari hydroid A. (Pyrex), tabung reaksi (Pyrex), erlenmeyer
cupressina Lamoureoux pada cleavage bulu 250 ml(Pyrex), Erlenmeyer 1000 ml (Pyrex),
babi T. gratilla Linn. gelas piala (Pyrex), gelas ukur 50 ml (Witeg),
 Manfaat Penelitian inkubator (Memmert), neraca analitik
Penelitian ini diharapkan dapat (Sartorius), oven (Memmert), otoklaf
memberikan informasi tentang senyawa (Webeco), jangka sorong (Vernier), tabung
metabolit sekunder asam heksadekanoat dari eppendorf, mikropipet, pisau, blender, cool
box, lemari pendingin, laminary air flow,
Bunsen, pinset, rak tabung, corong pisah,
spoit, rotavapor, batang pengaduk, botol
pengenceran dan sendok tanduk.
 Bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalam
penelitian ini adalah isolat Hydroid
Aglaophenia cupressina Lamoureoux (asam
heksadekanoat), bulu babi Tripneustes
gratilla Linn, methanol, DMSO (dimetil
sulfoksida), KCl 10%, alkohol 70 %, air laut
bebas protozoa, aquades, kertas saring, kertas
label, kapas, kertas tissue, vinkristin dan
acetocarmine.
Metode Kerja
 Sterilisasi Alat
Alat-alat gelas dan alat-alat lain yang
tahan pada pemanasan tinggi disterilkan
dengan oven pada suhu 180oC selama ± 2
jam. Alat-alat yang tidak tahan dengan
pemanasan tinggi disterilkan dengan
menggunakan otoklaf pada suhu 121oC
selama ± 15 menit pada tekanan 2 atm.
 Uji Antimitotik
 Materi sampel
Sampel yang digunakan
penelitian ini adalah bulu babi T. gratilla
Linn. Diambil di sekitar perairan pulau
Bonebatang Makassar, pada kedalaman 1-2
meter dari permukaan air laut.
 Penyiapan Sel Telur dan Sperma
Bulu Babi Tripneustes gratilla Linn.
Bulu babi T. gratilla Linn. jantan dan
betina diinduksi dengan penyuntikan 1 ml
KCl 10 % ke dalam bagian gonad. Sperma
yang berwarna putih susu dan sel telur yang
berwarna kuning keemasan ditampung pada
gelas kimia yang berbeda. Setelah itu
dimasukkan pada lemari pendingin. Fertilisasi
dilakukan dengan cara 1 ml sperma dan 5 ml
sel telur difertilisasikan dalam gelas kimia
yang berisi 50 ml air laut bebas protozoa,
kemudian dibiarkan selama 10-15 menit.
 Persiapan Sampel Uji
Isolat (asam heksadekanoat) hydroid
A. cupressina Lamoureoux ditimbang
sebanyak 1 mg kemudian dilarutkan dengan
DMSO sebanyak 100 µl, diencerkan dengan
air laut bebas protozoa sehingga diperoleh
konsentrasi 1000 µg/ml sebagai stok. Larutan
stok ini dipipet menggunakan mikropipet ke
dalam tabung eppendorf untuk mendapat
konsentrasi 1, 10, dan 100 µg/ml. Kemudian
dibuat kontrol negatif (tanpa senyawa
bioaktif) dengan menggunakan air laut bebas
pada protozoa sebanyak 2 tabung eppendorf.
Sedangkan untuk control positif berupa
senyawa vinkristin dengan jumlah konsentrasi
0,01, 0,1, dan 1 µg/ml.
 Pelaksanaan Uji melalui proses; ekstraksi, maserasi, partisi
 Inhibitory Concentration 50 (IC-50) cair, hingga fraksinasi dengan kromatografi
Tabung eppendorf yang berisi sampel kolom cair vakum. Senyawa tersebut
ditambahkan air laut sesuai perhitungan untuk merupakan senyawa murni hasil dari
mencukupkan volume akhir hingga 1 ml. penelitian Johannes (2008). Berdasarkan uji
Kemudian dalam tabung tersebut antimitotik terhadap pembelahan sel zigot
ditambahkan zigot sebanyak 100 µg/ml bulu babi Tripneustes gratilla Linn., dengan
setelah 10 menit terjadi fertilisasi. Dilakukan vinkristin sebagai pembanding (kontrol
pengulangan 3 kali untuk setiap sampel uji positif), diperoleh bahwa senyawa asam
dan kontrol. Selanjutnya disimpan pada suhu heksadekanoat memiliki kesamaan sifat
15 – 20oC dengan diselingi pengocokan. dengan senyawa vinkristin yang bersifat
Pengamatan sel yang membelah dilakukan antimitotik.
setelah 2 jam inkubasi dengan menggunakan Senyawa tersebut diperlakukan
mikroskop yang dilengkapi dengan kamera. dengan uji antimitotik untuk menentukan nilai
 Pengamatan aktivitas antimitotik penghambatan pada cleavage bulu babi T.
Prosedur uji antimitotik dilakukan gratilla Linn. Pengamatan ini dilakukan
serupa dari awal hingga tahapan pencampuran setelah sel zigot yang telah ditambahkan
sel-sel zigot dengan larutan (senyawa) uji. senyawa uji kemudian diinkubasi selama 2
Pengamatan aktivitas antimitotik jam pada suhu 15o-20o C dengan menhitung
(mitosis) dilakukan dibawah mikroskop jumlah sel zigot bulu babi T. gratilla Linn.
berkamera. Setiap sampel uji dipipetkan ke yang membelah dan tidak membelah.
deck glass sebanyak 2-3 tetes dan dilakukan Prosedur fertilisasi yang digunakan pada
pewarnaan sel zigot dengan pewarna pengujian ini dimodifikasi dari Dinnel dkk.
acetocarmine. (1987), dan Ringwood (1992), selain itu
HASIL DAN PEMBAHASAN pengenceran dilakukan pada senyawa uji,
 Penghambatan Pada Cleavage Bulu karena senyawa uji tersebut merupakan
Babi T. gratilla Linn. Senyawa Asam senyawa murni yang akan memberikan
Heksadekanoat dan Vinkristin. pengeruh berlebih pada bahan uji (zigot bulu
Asam heksadekanoat adalah senyawa babi) jika tidak diencerkan. Konsentrasi
murni hasil ekstraksi senyawa bahan alam pengenceran senyawa uji (asam
dari hydroid A. cupressina Lamoureoux heksadekanoat) hydroid A. cupressina
Lamoureuox yang digunakan pada pengujian
ini adalah 1 µg/ml, 10 µg/ml, dan 100 µg/ml,
beberapa tingkatan pengenceran ini
dimaksudkan untuk melihat respon pada
cleavage bulu babi T. gratilla Linn pada
beberapa konsentrasi pengenceran yang
berbeda.
 Hasil Pengamatan Pada Cleavage T.
gratilla Linn. Setelah 2 Jam Perlakuan
Dengan Senyawa Uji Asam
Heksadekanoat
Dari hasil pengamatan 300 sel total
yang mewakili dari sel yang membelah dan
sel yang tidak membelah setelah pengulangan
sebanyak 3 kali, nilai penghambatan rata-rata
dari senyawa asam heksadekanoat pada
konsentrasi 1 μg/ml mencapai nilai 25,66 %
dan pada konsentrasi 10 μg/ml mencapai nilai
37,32 %, yang artinya terjadi penghambatan
pada cleavage T. gratilla Linn. kurang dari
setengahnya dikarenakan rendahnya dosis
yang diberikan sehingga sel yang membelah
lebih banyak dibandingkan sel yang tidak
membelah. Namun pada konsentrasi 100
μg/ml mencapai nilai 66,66 %, yang artinya
penghambatan pada cleavage T. gratilla Linn.
lebih dari setengahnya yang menunjukkan
bahwa senyawa asam heksadekanoat bersifat
antimitotik pada cleavage T. gratilla Linn.
dan semakin tinggi konsentrasi yang
digunakan, maka nilai penghambatannya juga
semakin besar. Hal ini mempunyai kesamaan
sifat pada penelitian Pengaruh Uji Antimitotik
Fraksi N-Heksan Dari Hydroid Aglaophenia
cupressina Lamoureoux terhadap Pembelahan
Awal sel Zigot Bulu Babi Tripneustes gratilla
Linn oleh Khalid (2009), pada penelitian
tersebut diperoleh hasil dari salah satu
senyawa N-Heksan yaitu Asam Karboksilat
yang mempunyai nilai penghambatan rata-
rata pada konsentrasi 1 μg/ml mencapai nilai
52 %, pada konsentrasi 10 μg/ml mencapai
nilai 49 %, pada konsentrasi 100 μg/ml
mencapai nilai 59 %, dan pada konsentrasi
1000 μg/ml mencapai nilai 98,93 %.
 Hasil Pengamatan Pada Cleavage T.
gratilla Linn. Setelah 2 Jam Perlakuan
Dengan Kontrol Positif Vinkristin
Vinkristin merupakan senyawa yang
digunakan sebagai pembanding (konntrol
positif) dalam penelitian ini, namun perlakuan
konsentrasi (dosis) yang diberikan lebih
rendah, dikarenakan vinkristin telah menjadi
obat anti tumor maupun kanker sehingga
menjadi pembanding bagi penelitian ini, hal
tersebut bisa dilihat dari hasil pengamatan
kontrol positif vinkristin yang menunjukkan
nilai penghambatan rata-rata pada konsentrasi
0,01 μg/ml mencapai nilai 26,55 %, dan pada
konsentrasi 0,1 μg/ml mencapai nilai 41,33
%, hal ini menunjukkan bahwa penghambatan
sel zigot kurang dari setengahnya. Namun
pada konsentrasi 1 μg/ml mencapai nilai aktivitas antikanker didasarkan pada adanya
59,77 %, yang artinya penghambatan pada efek toksik pada sel (sitotoksik). Salah satu
cleavage T. gratilla Linn. lebih dari uji efek sitotoksik adalah dengan
setengahnya. Dari hasil tersebut menunjukkan menggunakan metode antimitotik yaitu
bahwa senyawa uji asam heksadekanoat penghambatan pembelahan sel zigot bulu
mempunyai kesamaan sifat dengan kontrol babi. Dalam metode ini penghambatan
positif (vinkristin) yang bersifat antimitotik. pembelahan sel dihitung sebagai IC50.
Sedangkan pada kontrol negatif (air laut) Hasil pengamatan ini berdasarkan data
menunjukkan bahwa hampir semua sel zigot yang diolah secara analisis probit
mengalami pembelahan. (Menentukan Lethal Dose 50 / Inhibitory
 Penentuan IC50 (Inhibitory concentration 50) dan diperoleh hasil
Concentration 50%) Senyawa asam heksadekanoat memiliki IC50
Penentuan IC50 (Inhibitory = 22,076 µg/ml, hal ini menunjukkan bahwa
Concentration 50%) dilakukan untuk senyawa uji (asam heksadekanoat)
mengetahui kadar terendah dari senyawa uji merupakan senyawa yang aktif bersifat
(asam heksadekanoat) yang dapat digunakan antimitotik. Jika dilihat dari persamaan sifat
untuk menghambat proses pembelahan dengan kontrol positif (vinkristin) yang
setengah dari sel zigot bulu babi T. gratilla memiliki IC50 = 0,219 µg/ml, maka asam
Linn. yang diujikan, dengan kontrol negatif heksadekanoat memiliki potensi untuk
(air laut) serta kontrol positif (vinkristin). Hal dikembangkan menjadi bahan baku obat
ini sesuai dengan pendapat yang dikemukakan antikanker.
oleh Pratiwi, dkk. (2003) (dalam Khalid, Pengamatan aktivitas antimitotik
2009). bahwa aktivitas sitotoksik ditetapkan
berdasarkan nilai IC50 yaitu kadar yang
dibutuhkan ekstrak untuk menghambat
pertumbuhan sel uji hingga 50 %.
Uji toksisitas biasanya dilakukan
untuk mengetahui tingkat keamanan dan
keberbahayaan zat yang akan diuji. B
A
Berdasarkan ketentuan, suatu senyawa murni
Gambar Pengamatan Aktivitas Antimitotik menggunakan zat
oleh Thomson, dkk. (2001), bahwa uji pewarna Acetocarmine Perbesaran 100 x 10.
Keterangan Gambar : 1. Uji antimitotik senyawa asam
A. Tampak inti sel tidak mengalami heksadekanoat isolat dari hydroid
pembelahan, dinding sel masih utuh, dan Aglaophenia cupressina Lamoureoux
B. Tampak terjadi proses telofase dan menunjukkan adanya penghambatan (efek
sitokinesis antimitotik) pada cleavage bulu babi
Pengamatan aktivitas antimitotik yang Tripneustes gratilla Linn.
menggunakan zat pewarna (acetocarmine), 2. Hasil nilai rata-rata penghambatan
dalam proses mitosis berdasarkan gambar tertinggi dari senyawa uji (asam
diatas yang diambil menggunakan mikroskop heksadekanoat) isolat dari hydroid
DINO pada perbesaran 100 kali, zat tersebut Aglaophenia cupressina Lamoureoux
memberi warna merah pada zigot yang akan diperoleh pada konsentrasi 100 μg/ml
diamati, dimana inti sel (nucleus) dari sel yaitu 66,66 %.
zigot bulu babi (T. gratilla Linn.) tidak 3. Senyawa uji asam heksadekanoat
mengalami pembelahan, seperti terlihat pada memiliki efek antimitotik berdasarkan
gambar diatas. Tampak pada gambar bahwa dari nilai IC50 yaitu 22,076 µg/ml yang
inti sel tidak mengalami pembelahan memiliki kesamaan sifat dari kontrol
dikarenakan dinding sel masih utuh , positif vinkristin yang memiliki nilai IC50
berdasarkan sifat dari kontrol positif yaitu 0,219 µg/ml.
(vinkristin) kita ketahui bahwa dalam proses 4. Asam heksadekanoat isolat dari hydroid
mitosis, vinkristin bersifat antimitotik Aglaophenia cupressina Lamoureoux
dikarenakan mekanisme kerja dari vinkristin berpotensi untuk dijadikan bahan dasar
yaitu menghambat cara kerja dari benang antikanker.
spindle yang menarik kromosom kedua kutub  Saran
yang berlawanan pada tahap metaphase. Hal Perlu dilakukan penelitian lanjutan
tersebut kita tidak dapat lihat pada gambar untuk pemanfaatan senyawa asam
diatas dikarenakan mikroskop yang tidak heksadekanoat isolat dari hydroid
memadahi dalam penelitian ini. Aglaophenia cupressina Lamoureoux sebagai
KESIMPULAN DAN SARAN bahan dasar obat antikanker.
 Kesimpulan DAFTAR PUSTAKA
Berdasarkan hasil penelitian yang Astuti, P., 2003, Spons Invertebrata Laut
Berpotensi Sebagai Bahan Baku
telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa :
Obat Alam, oktober-Desember
 (Edisi Khusus) Vol. 8, Biologi-
Farmasi, UGM, Yogyakarta.
Barnes, V. W., 1999, Zoologi Umum,
Penerbit Erlangga, Jakarta.
Baryard, H., 1993, Pengantar Biologi Laut,
UI Press, Jakarta.
Berkeley, 2013, General Morphology Of A
Porifera,
http://www.ucmp.berkeley.edu/porifer
a/poriferalh.htm, diakses pada tanggal
18 Januari 2013.
Brock E., Richard, 2008, Reef Community
Structure, Sand Islend, Oahu,
http://www.coris.noaa.gov/metadata/re
cords/html/nodc_0000177_sand_is_re
ef_comunity.html, diakses pada
tanggal 11 Januari 2013.
Brusca, R., Brusca, G. J., 1990,
Invertebrates, Sinauer Associates
Inc, Massachussets.
Campbell A. N., Reece B. J., dan Mitchell G.
L., 2000, Biologi Edisi Kelima Jilid
1, Penerbit Erlangga, Jartaka.
Dinnel, P. A., Link J. M. dan Stober Q. J.,
1987. Improved Methodology For
Sea Urchin Sperm Cell Bioassay For
MarineWaters. Archieves Of
Environmental Contamination and
Toxicology.
Ganiswara, G.S., 1995,Farmakologi Dan
Terapi, Bagian Farmakologii Fakultas
Kedokteran UI, Jakarta.
Grzimek, B.,1986, Grzimek’s Animal Life
Encyclopedia Vol.1 Lowers
Animals, Van Nostrand Reinhold
Company, New York.
Harris, V. A., 1990, Sessile Animals Of Te
Sea Shore, Chapman and Hall,
London.
Harper, M.K., T.S., Bugni, B.R., Coop, R.D.,
James, B.S., Lindsay, A.D.,
Richadson, P.C., Schnabel, D.,
Tasdemir, R.M., Van Wangoner,
S.M., Verbitski dan C.M., 2001,
Product, Marine Chemical Ecology
(James B., McClintock & Bill J.,
Baker Eds.) CRC Press
USA.Jamaluddin, 1996. Uji
Sitotoksik Infus Herba Benalu
Scurrula afropurpurea DANS.
Dengan Metode Penghambatan
Pembelahan Sel Telur Bulu Babi
Sebagai Uji Pembelahan Efek Anti
Kanker. F-MIPA UNHAS, Makassar.
Jamaluddin, 1996. Uji Sitotoksik Infus
Herba Benalu Scurulla afropurpurea
DANS. Dengan Metode
Penghambatan Pembelahan Sel
Telur Bulu Babi Sebagai Uji
Pembelahan Efek Anti Kanker.
Skripsi, Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam, Universitas
Hasanuddin, Makassar.
Jasin, M. , 1992. Zoologi Invertebrata,
Penerbit Sinar wijaya, Surabaya.
Jasmanindar, Y., 2011, Emanem Proposal,
http://www.scribd.com/doc/76191876/
Emanem-Proposal, diakses pada
tanggal 10 Januari 2013.
Johannes, E., 2008. Isolasi, Karakterisasi
dan Uji Bioaktivitas Metabolit
Sekunder dari Hydroid Aglaophenia
cupressina Lamoureoux Sebagai
Bahan Dasar Antimikroba, Thesis.
Program PascaSarjana Universitas
Hasanuddin. Makassar.
Johnson, K.E., Alexander, N.L., dan George,
L., 1999, Potent Antioxidant
Actyvity of Hydroid, Departement of
Nutrition and Foodservice System,
School of Human Environmental
Science University of North Carolina
at Chapel Hill, Biochemical
Pharmacology, Vol 58.
Kalbe, 2007, Siklus Sel (Mitosis),
http://www.kalbe.co.id/files/cdk/files/
159_11Regulasisiklusselkuncisuksess
omaticcellnuclear.pdf/159_11Regulasi
siklusselkuncisuksessomaticcellnuclea
r.html (Diakses pada tanggal 19 Juli
2008).
Kasim, M., 2013, Tripneustes gratilla
(Hewan Unik Penghuni Ekosistem
Lamun),
maruf.wordpress.com/?=tripneustes+g
ratilla, diakses pada tanggal 14 Maret
2013.
Khalid, A., 2009, Pengaruh Uji Antimitotik
Fraksi N-Heksan Dari Hydroid
Aglaophenia cupressina
Lamoureoux terhadap Pembelahan
Awal Sel Zigot Bulu Babi
Tripneustes gratilla Linn., Skripsi,
Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam, Universitas
Hasanuddin, Makassar.
Kimball, J.W., 1995, Biologi, Terjemahan
oleh H. Siti Soetarmi Tjitrosoepomo
& Nawangsari Sugiri, Penerbit
Erlangga, Jakarta.
Lawrence, J. M., dan Y., Agatsuma, 2007,
Ecology of Tripneustes in Jhon M,
Lawrence. Edible Sea Urchin :
Biology an Ecology. Elsevier Science.
USA.
Malpezzi, E. L. A., Davino, S. C., Costa,
L.V., Freitas, J.C., Giesbrecht, A.M.
dan Roque, N.F., 1994. Antimitotik
action of extracts of Petiveria
alliacea on sea urchin egg
development.Brazilian Journal of
Medica and Biological Research.Vol
27.
McConnaughey, B.H., dan Zottoli, R., 1983,
Pengantar Biologi Laut, The C.V.
Mosby Company, London.
Mushtofa, J., 2013, Bulu Babi,
http://ulfana.multiply.com/journal/ite
m/7/Bulu-
Babi?&item_id=7&view:replies=rever
se&show_interstitial=1&u=%2Fjourn
al%2Fitem, diakses pada tanggal 7
Januari 2013.
Netsains, 2010, Bulu Babi Obat Medis Dari
Lautan,
http://netsains.net/2010/02/bulu-babi-
obat-medis-dari-lautan/, diakses pada
tanggal 10 Januari 2013.
Olson, J., 2003, Belajar Mudah
Farmakologi, Penerbit Buku
Kedokteran EGC, Jakarta.
Paradise, M. A.Grassi, G. Conti, F. Passareli
dan M. G Curci abu Erra, 2006, Fire
Coral Persistent Cutaneous Reaction,
http://jr.science.wep.muhio,edu/filedcou
rse. Diakses pada tanggal 29 September
2012.
Ralph, D.F., 1998, What Are Sponge?,
Adepted Hooper, JNA, Sporguide, Veri
April 1998, Quesland Museum,
Australia.
Ringwood A. H., 1992, Comparative
Sensitivity of Gametes and Early
Developmental Stages of a Sea urchin
Species (Echinometra mathaei) and A
Bivalve species (Isognomon
 californicum) during metal exposures, Resources, Australia Institute of Marine
Arch. Environ. Contam. Toxicol. Science, Townsville.
UNC Charlotte.

Ruppert, E. E., dan R. D. Barnes, 1994,

Invertebrate Zoology, Sixth Edition,
Saunders Collage
Publishing.Philadelphia, New York,
Chicago, San Fransisco, Montreal,
Toronto, London, Sidney, Tokyo.

Siswadono dan Soekarjo B., 2000. Kimia

Medisinal. Erlangga University Press,
Surabaya.

Suntoro, S., Handari, 1983, Metode

Pewarnaan, Bhratara Karya Aksara,
Jakarta.

Sumich, J.L. dan Dudle, G.H., 1992,

Laboratory and Field Investigation In
Marine Biologi, Ed.4, W.M.C Brown
Publishers.

Suryo, 2005, Genetika Manusia, Gadjah

Mada University Press, Yogyakarta.

Thomson, W.J., Rahman, A., dan

Ginoudhary, M.I., 2001. Bioassay
Techniques For Drug Development,
Harword academic Publisher, Australia.

Toha, A. A. H., 2007, Keragaman Genetik

Bulu Babi (Echinoidea),
http://isjd.pdii.lipi.go.id/admin/jurnal/
12207131135.pdf, diakses pada
tanggal 7 Januari 2013.

Wikipedia, 2013, Siklus Sel,

http://id.wikipedia.org/wiki/Siklus_sel
, diakses pada tanggal 10 Januari
2013.

Wilkinson, C., dan Baker, V., 1994, Survey

Manual For Tropical Marine