KIMIA BAHAN

BAHARI
 Diana Novia
 Diana Nurhamidah
AKTIVITAS ANTIBAKTERI
EKSTRAK ALGA LAUT Caulerpa
racemosa DARI PERAIRAN
PULAU NAIN
Abstrak :Alga atau ganggang laut
(seaweed) adalah bagian terbesar
dari tumbuhan laut, dimana
secara morfologi dapat
dikelompokkan kedalam golongan
tumbuhan tidak berpembuluh
(Thallophyta) karena tidak
memiliki perbedaan susunan
kerangka seperti akar, batang dan
daun. Berdasarkan pengamatan
di lapangan, alga laut banyak
ditemukan di daerah perairan
Pulau Nain.
Aktivitas Antibakteri dan
Antioksidan Alga Hijau
(Halimeda Grasilis ) dari
Kabupaten Kepukauan Seribu
Abstrak : Penelitian ini bertujuan
menentukan aktivitas antibakteri dan
antioksidan alga hijau Halimeda
gracilis. Penelitian dilakukan dengan
beberapa tahapan yaitu pengambilan
dan preparasi sampel, ekstraksi
senyawa aktif, pengujian aktivitas
antibakteri dan antioksidan serta uji
fitokimia.
Ekstraksi dilakukan dengan
metode maserasi menggunakan
pelarut metanol dan dipekatkan
dengan rotary evaporator. Ekstrak
metanol H. gracilis diuji terhadap
bakteri Staphylococcus aureus dan
Escherichia coli.
 Dari perairan ini
selanjutnya dilakukan pengujian
secara laboratories Untuk
memperoleh sediaan farmasi
yang digunakan sebagai bahan
aktif antibakteri.
Penelitian ini dilakukan
dengan tujuan untuk menentukan
aktivitas antibakteri dari alga
Caulerpa racemosa. Hasil
pengujian aktivitas antibakteri
menunjukkan bahwa larutan uji
dari alga C. racemosa memiliki
aktivitas antibakteri pada ke 5
bakteri uji yang diujikan. Ukuran
zona hambat yang terbentuk
relatif lebih kecil, jika
dibandingkan dengan ukuran
zona hambat yang dibentuk oleh
senyawa antibiotika pembanding
Ekstrak metanol H.
gracilis membentuk zona
hambat masing – masins 10
mm dan 6 mm. Setelah
dilakukan partisi cair-cair
(air:etil asetat), zona hambat
hanya terlihat pada fraksi etil
asetat masing-masing sebesar
6 mm pada S.aureus dan
7,50±1,71 mm pada E.coli.
Pengujian antioksidan
pada ekstrak methanol dan
Fraksi Etil Asetat masing-
masing Menunjukkan Nilai IC50
sebesar 290,49ppm dan
375,50 ppm. Uji fitokimia
menunjukkan ekstrak metanol
H. gracilis mengandung fenol
dan steroid.
 PENDAHULUAN
Pemanfaatan alga laut dalam
bidang farmasi selama ini masih
terbatas, sedangkan potensi alga
laut di Indonesia lebih khusus di
Sulawesi Utara sangat besar.
Potensi alga laut (makroalga)
Indonesia sangat besar untuk
dikembangkan sebagaibahan
baku obat. Dalam pengobatan
tradi sionalalga laut telah lama
digunakan untuk keperluan
pengobatan berbagai jenis
penyakit, seperti penurun panas,
eksim, batu empedu, gondok,
gangguan ginjal dan gangguan
perut.
Rumput laut merupakan
salah satu produsen primer di
ekosistem perairan laut
bersama dengan fitoplankton,
lamun, dan mangrove.
Rumput laut secara luas
digunakan sebagai makanan,
bahan penting bagi industri
kosmetik serta penghasil
hidrokoloid (alginat, agar dan
karagenan) yang digunakan
sebagai pengental dan
gelling agents.
 Rumput laut juga digunakan
untuk pengobatan berbagai
penyakit. Penelitian telah banyak
dilakukan untuk mengkaji senyawa
Dari hasil studi Tjaniadi, bioaktif berbagai jenis rumput laut di
et al. (2003) ditemukan antaranya rumput laut hijau sebagai
beberapa bakteri pathogen yang antibakteri (Mishra et al. 2016),
telah resisten terhadap rumput laut merah sebagai
antibiotika ampisilin, antikanker
kotrimoxasol, dan (Duraikannu et al. 2014) dan rumput
laut coklat sebagai antiinflamasi dan
tetrasiklin,sehingga sekarang ini antidiabetes (Ji-Hyun et al. 2016).
banyak penelitian yang
dilakukan untuk mengeksplor
manfaatalga sebagai bahan Komponen bioaktif yang
dasar untuk obat obatan. dihasilkan rumput laut di antaranya
termasuk dalam kelompok
polisakarida, lemak dan asam
lemak, pigmen, serta metabolit
sekunder seperti fenol, alkaloid,
terpen, dan lektin (Perez et al.
2016).
 Beberapa hasil penelitian Spesies H. gracilis dipilih
antibakteri telah dilakukan dalam penelitian ini karena
dengan menggunakan pemanfaatan rumput laut
organisme laut, seperti jenis ini belum banyak
penelitian Sulistijo, et al. dilaporkan. Penelitian ini
(1993) dalam Atmadja (1996), bertujuan menentukan
beberapa alga yang berasal aktivitas antibakteri dan
dari perairan Indonesia antioksidan alga hijau H.
ditemukan memiliki senyawa gracilis.
aktif. yang sifatnya sebagai
antimikroba terhadap bakteri
pathogen, salah satunya
adalah dari genus Caulerpa
 Penelitian oleh
Rianida(2007), menunjukkan
bahwa ekstrak
Caulerparacemosa var.
uvifera (Turner) Weber Va
Bosse mengandung senyawa
antibakteri yang dapat
menghambat pertumbuhan
beberapa bakteri seperti E.
Coli, Staphylococcus aureus
dan Bacillus subtilis.
Berdasarkan hal tersebut,
eksplorasi sumber daya alam
Yangdapat dijadikan sebagai
senyawa antibakteri terus
dilakukan untuk tetap
menjaga ketersediaan
senyawa antibakteri.
 METODE PENELITIAN

1. Penanganan Sampel 1. ekstrasi

Ekstraksi dilakukan dengan
Sampel alga yang digunakan metode maserasi menggunakan pelarut
setelah diambil dari air dimasukan methanol, mengacu pada Singkoh (2011).
dalam kantong plastik kemudian Metanol ditambahkan dengan
diletakan dalam kotak pendingin. perbandingan 1:10 (b/v) ke dalam labu
Erlenmeyer berisi rumput laut kering
Setelah itu dilanjutkan dengan sampai semua bagian terendam
proses maserasi dan ekstrasi. sempurna.
Maserasi dilakukan selama 24 jam
kemudian filtrat disaring menggunakan
. Kemudian filtrat disaring dengan kertas saring Whatman no. 42. Proses
maserasi dilakukan secara berulang
menggunakan kertas whatman. Kemudian hingga tiga kali atau sampai filtrat terlihat
pelarut diuapkan dengan menggunakan bening.
alat rotari evaporator Buchi Rotavapor R- Hasil maserasi selanjutnya
205 dan sisa pelarut yang mungkin tersisa diuapkan menggunakan rotary evaporator
diuapkandengan freeze dry Labconco hingga seluruh methanol menguap dan
Freeze dry System/Freezone® 4.5. Ekstrak diperoleh ekstrak kasar rumput laut.
Ekstrak kasar yang diperoleh
yang diperoleh Ditimbang Dengan dilakukananalisis fitokimia, uji antibakteri
Menggunakan Neraca analitik, sehingga terhadap E. coli dan S. aureus serta uji
diperoleh ekstrak kasar etanol. antioksidan.
 2. Fitokimia

2. Pembuatan Agar Miring Uji fitokimia dilakukan untuk

melihat komponen bioaktif pada
Bahan yang ekstrak kasar meliputi alkaloid,
digunakan dalam
pembuatan agar miring ini fenol, saponin, tanin, steroid,
adalah agar 2 g, nutrien agar flavonoid dan asam amino,
3,2 g, dilarutkan dalam 120 ml merujuk pada Harborne (1987).
akuades di atas penangas
setelah itu media dituangkan Sebanyak 0,05 g sampel
ke Dalam tabung reaksi. direaksikan dengan masing-
Selanjutnya disterilkan dalam masing reagen untuk
autoclave pada suhu 121oC mengetahui kandungan bioaktif
selama 15 menit. Setelah
proses sterilisasi,Media secara kualitatif.
Diangkat dan Dimiringkan
dengan posisi 15o dan
dibiarkan mengeras.Media ini
berfungsi sebagai tempat
untuk peremajaan bakteri.

3. Pembuatan Media Lapisan
Dasar
Media yang digunakan adalah
agar3,5 g dilarutkan dalam 250 ml
akuades diatas penangas.
Selanjutnya disterilkan dalam
autoclave pada suhu 121oC
selama 15 menit. Setelah itu
media dituangkan kedalam cawan
petri sebanyak 15 ml dan
dibiarkan sampaimengeras.
3. Uji Antibakteri
Uji aktivitas antibakteri
ekstrak kasar dilakukan dengan
metode difusi sumur agar (agar well
diffusion), mengacu pada Ergene et
al. (2006).
Bakteri uji yang digunakan
yaitu S. aureus ATCC6538 dan
Escherichia coli ATCC8739. Kedua
bakteri ini dipilih untuk mewakili
kelompok bakteri Gram positif dan
bakteri Gram negatif.

4. Pembuatan Suspensi Bakteri
Bahan pembuatan suspensi
bakteri yang digunakan adalah
Brainheart Infusion(BHI)
sebanyak 6,3 g, dilarutkan dalam
150 ml akuades di atas
penangas. Selanjutnya disterilkan
dalam autoclave pada suhu
121oC selama 15 menit. Setelah
proses sterilisasi, media diangkat
dan didinginkan. Media ini
digunakan untuk memperoleh
konsentrasi bakteri yang sesuai
untuk pengujian di laboratorium..
Bakteri ditumbuhkan dalam
media agar miring nutrient
agar (NA) dan diinkubasi
selama 24 jam pada suhu
370C. Bakteri yang telah
tumbuh disuspensikan pada
media cair nutrient broth (NB)
steril dan diinkubasi kembali
selama 24 jam pada suhu
370C.
Pertumbuhan bakteri
dalam media NB diukur
kepadatannya menggunakan
spektrofotometer untuk
mengetahui nilai optical
density (OD).
5. Pembuatan Media 4. Uji Antioksidan
Pembenihan Uji aktivitas
Pembuatan antioksidan yang dilakukan
media pembenihan menggunakan radikal 1,1-
dengan menggunakan diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH),
mengacu pada Sharma dan Bhat
agar mullerhinton (MHA) (2009).
sebanyak 13 g, agar 3 g,
dilarutkan dalam 300 ml
akuades di atas
penangas.Selanjutnya
disterilkan dalam autoclave
pada suhu 121oC selama
15 menit. Setelah itu
diangkat kemudian
dituangkan di atas lapisan
dasar petridish.
 HASIL DAN PEMBAHASAN
• Komponen Aktif Ekstrak Kasar
H. gracilis
Hasil uji fitokimia
Hasil penelitian Insan dan menunjukkan ekstrak kasar H.
Widyartini(2008)Caulerparacemos gracilis positif mengandung fenol
a diketahui ber-sifat racun dan steroid. Komponen aktif yang
terhadap beberapa organisme diduga berperan sebagai
laut. Hasil dan ekstrak C. antibakteri pada H. gracilis adalah
racemosa dapat diisolasi steroid.
senyawa kimia seperti Dzeha et al. (2003) berhasil
caulerpicin,caulerpin dan mengisolasi senyawa yang memiliki
sterol.Caulerpicin menimbul kan potensi antibakteri dari H.
rasa pedas dan menyebabkan macroloba yaitu clionasterol yang
efek anesthesia yang ringan bila merupakan senyawa golongan
ditempelkan pada mulut sehingga triterpenoid.
aktivitas neurotropik ini Kandungan fenol pada H.
mempunyai nilai klinik. gracilis diduga berperan sebagai
antioksidan, namun pada beberapa
penelitian steroid juga dilaporkan
memiliki aktivitas antioksidan.
 • Aktivitas Antibakteri
Ekstrak H. gracilis
Izati, M (2007) Pengujian aktivitas
berdasarkan hasil penelitian antibakteri menggunakan bakteri
menunjukkan C. racemosa uji S. aureus dan E. coli dengan
nilai OD masing-masing sebesar
memiliki aktivitas antibakteri
0,7 dan 0,8.
terhadap tiga jenis bakteri
pathogen yaitu Pseudomonas
Zona bening yang terbentuk
pavanaceae, Pseudomonas pada uji aktivitas antibakteri
syntata, dan Pseudomonas ekstrak kasarH. gracilis terhadap
tetrolens. kedua bakteri uji (GAMBAR 2).
Ekstrak kasar alga hijau H.
gracilis dalam penelitian ini
mampu menghambat
pertumbuhan S. aureus yang
merupakan bakteri Gram positif
lebih baik dibandingkan
terhadap E. coli yang
merupakan bakteri Gram
negatif.
 Hasil pengujian
aktivitas antibakteri
menunjukkan bahwa
larutan uji dari alga
C.racemosa, memiliki
aktivitas antibakteri pada 3
bakteri dari 5 bakteri uji
yang diuji kan.Ukuran zona
hambat yang terbentuk
relatif lebih kecil, jika
dibandingkan dengan
ukuran zona hambat yang
dibentuk oleh senyawa
antibiotika pembanding.
 Hasil pengukuran Sivakumar dan Vignesh
diameter zona hambat (2014) melaporkan hasil yang
dapat dilihat padaTabel 1. lebih baik, ekstrak H. gracilis
dengan pelarut gabungan
Tabel 1. Diameter rata-rata metanol:kloroform (1:1)
Zona Hambat menggunakan metode difusi
sumur agar dapat menghambat
(satuan mm) pertumbuhan bakteri E. Coli
dengan diameter zona hambat 11
mm.

Berdasarkan hasil
pengukuran zona hambat,
larutan uji ekstrak alga, C.
racemosa, B. dapat
menghambat tiga dari lima jenis
bakteri uji. Pengukuran zona
hambat rata-rata ekstrak alga C.
racemose berturut-turut adalah
bakteri E. tarda dengan diameter
zona hambat sebesar 1,3mm.
Bakteri Yersinia enterocolitica
dengan diameter zona hambat
sebesar 1,4 mm dan bakteri
Proteus stuartii dengan diameter
zona hambat sebesar 1,3 mm.
• Aktivitas Antioksidan Ekstrak
H. gracilis
Molyneux (2004)
menyatakan bahwa suatu
senyawa masuk dalam kategori
sangat kuat apabila nilai IC50 <50
ppm, kuat 50-100 ppm, sedang
101-150 ppm, dan lemah >150
ppm. Ekstrak H. gracilis pada
metanol dan fraksi etil asetat
masing-masing memiliki nilai IC50
290,49 ppm dan 375,50 ppm,
sehingga berdasarkan kategori
tersebut aktivitas antioksidan
ekstrak alga hijau H. gracilis
sangat lemah.
 Menurut Subari et al. (1994)
dalam Banteng(2001) antibiotika
ciprofloksasin merupakan
antibiotika dengan kegiatan luas,
yaitu antibiotika yang aktif
terhadapbanyak jenis bakteri,
virus dan protozoa. Akuades
sebagaiLarutan kontrol dari
sampel uji tidak menunjukan
adanya aktivitas antibakteri bila
dibandingkan dengan ekstrak
masingmasing jenis alga.
Pramesti (2013)
melakukan penelitian aktivitas
antioksidan alga hijau Caulerpa
serrulata. Hasil penelitiannya
menunjukkan ekstrak rumput
laut C. serrulata mempunyai
aktivitas antioksidan dengan IC50
sebesar 136,89 ppm. Aktivitas
antioksidan H. gracilis lebih
rendah ditunjukkan dengan nilai
IC50 yang lebih besar.
 KESIMPULAN
Ekstrak alga hijau H.
gracilis memiliki aktivitas
Berdasarkan hasil penelitian antibakteri dan antioksidan.
ujiaktivitas antibakteri pada Fraksiaktif anti bakteri yang
alga laut C.racemosa, maka diperoleh pada fraksinasi
dapat disimpulkan bahwa cenderung bersifat nonpolar.
Fraksinasi cair – cair menurunkan
alga laut ini memiliki senyawa aktivitas antioksidan ekstrak H.
yang mengandung aktivitas gracilis. Ekstrak methanol H.
antibakteri pada Edwardsiela gracilis pada uji fitokimia
tarda, Yersinia enterocolitica terdeteksi mengandung steroid
dan Proteus stuartii. dan fenol. Penelitian lebih lanjut
diperlukan untuk mengetahui
mekanisme senyawa aktifpada
H.gracilis dan H. macroloba
dalam menghambat
pertumbuhan bakteri Gram positif
maupun Gram negatif.