Aturan pemilihan tabung positif dan cara perhitungan MPN

Syarat umum yang dipakai dalam pemilihan tabung positif adalah:

1. Pilih pengenceran terendah yang tidak semua tabung menghasilkan tabung
positif
2. Pilih pengenceran tertinggi yang paling tidak/setidaknya memiliki satu tabung
positif
3. Pilih semua pengenceran diantaranya.
4. Kalikan setiap seri tabung yang dipilih dengan pengenceran yang diambil.

Misalnya :
Dari inoculum dengan tingkat pengenceran: 1, 0,1, 0,01, 0,001 dan 0,0001
menghasilkan kombinasi tabung positif 5-4-3-1-0 maka dipilih 5-4-3-1-0 bukan 5-4-3-1-0
atau 5-4-3-1-0 sehingga didapat nilai MPN 33/ml.

Namun tidak semua keadaan menggambarkan kondisi ideal seperti diatas. Untuk kasus
semua seri tabung menghasilkan tabung positif dan tidak semua pengenceran
menghasilkan tabung positif dapat dilihat pada contoh berikut.

Contoh/ Tingkat Pengenceran Kombinasi

Sampel tabung MPN/mL
100 101 102 103 104
positif
(a) 5 5 1 0 0 5-1-0 33
(b) 4 5 1 0 0 5-1-0 33
(c) 5 4 4 1 0 4-4-1 40
(d) 5 4 4 0 1 4-4-1 40
(e) 5 5 5 5 2 5-5-2 (540x10)=540
0
(f) 0 0 1 0 0 0-0-1 0,18
 (g) 4 4 1 1 0 4-4-2 (47:10)=4,7

Contoh/Sampel :
1. (a) 5-5-1-0-0 dan (b) 4-5-1-0-0 ; pilih pengenceran terendah yang tidak
semua tabung menghasilkan seluruh tabung positif (101) dan dua
pengenceran berikutnya.
2. (c) 5-4-4-1-0 ; jika pada tingkat pengenceran yang lebih tinggi (10 3) masih
menghasilkan 1 tabung positif, maka tingkat pengenceran tertinggi yang dipilih.
3. (d) 5-4-4-0-1 ; Jika pada tingkat pengenceran tertentu semua seri tabung negatif
tetapi pada tingkat pengenceran selanjutnya masih terdapat tabung positif, maka
yang dinyatakan tabung positif adalah tingkat pengenceran sebelumnya.
4. (e) 5-5-5-5-2 ; Jika pada tingkat pengenceran tertinggi masih terdapat tabung
positif, maka pilih tingkat pengenceran tersebut dengan tingkat pengenceran
sebelumnya.
5. (f) 0-0-1-0-0 ; jika tingkat pengenceran tertentu menghasilkan tabung positif
maka pilih dua tingkat pengenceran sebelumnya
6. (g) 4-4-1-1-0 dipilih menjadi 4-4-2 ; jika pada pengenceran yang lebih tinggi
masih menghasilkan tabung positif maka tambahkan tabung positif tersebut ke
tingkat pengenceran sebelumnya.
Catatan :
 Pada contoh (e) hasil untuk 5-5-2 dengan inokulum 1, 0,1, 0,01 dan 0,001 ml
adalah 540, tetapi karena data yang diambil dari pengenceran (inoculum) 0,01,
0,001 dan 0,0001 maka nilai harus dikalikan 10 menjadi 5400.
 Begitu pula sebaliknya untuk contoh (g) data yang diambil dari pengenceran
(inokulum) 1, 0,1 dan 0,01 maka nilai 47 harus dibagi 10.
Menghitung angka MPN tanpa table jika hasil uji tidak sesuai Tabel MPN

Nilai MPN ternyata dapat dicari dengan rumus berikut (Thomas formula) :

Contoh 1 :
Untuk hasil (10/10, 10/10, 4/10, 2/10, 0/10) jika digunakan tabel maka dipilih (10/10,
10/10, 4/10, 2/10, 0/10) yaitu kombinasi 10-4-2 = 70/g tetapi dalam perhitungan hanya
gunakan (10/10, 10/10, 4/10, 2/10, 0/10).
Contoh 2 :
Untuk hasil (5/5, 3/5, 1/5, 0/5) pemilihan dipilih (5/5, 3/5, 1/5, 0/5) yaitu kombinasi 5-3-1
= 110/ml tetapi dalam perhitungan hanya gunakan (5/5, 3/5, 1/5, 0/5)
Dengan cara yang sama maka MPN/g
4
=
( 0,024 x 0,055 ) 1 /2
4
=
0,0363
= 110/ml , (sama dengan hasil yang didapatkan dari tabel)

Jumlah seri tabung dan pengenceran yang disarankan

Menurut USDA dan FSIS untuk mengantisipasi jika jumlah mikroorganisme dalam
sampel >10 CFU/g atau ml maka disarankan menanam sampel 10 ml pada 3 seri
tabung, 1 ml pada 3 seri tabung lalu selanjutnya dilakukan pengenceran sampai 10 4
dan tiap pengenceran ditanam 1 ml pada 3 seri tabung seperti skema di bawah ini.
Contoh perhitungan MPN coliform

1. Perhatikan gambar di bawah ini

Hasil uji penegasan coliform menunjukkan hasil positif (keruh) pada seri tabung
 3 seri tabung pertama : 2 keruh = 2 positif
 3 seri tabung kedua : 1 keruh = 1 positif
 3 seri tabung ketiga : 0 keruh = 0 positif
Kombinasi Hasil Uji = 2 1 0.
Hasil 2 1 0 di bandingkan ke tabel MPN 3 seri menunjukkan angka 15
Nilai MPN = Nilai MPN dari tabel x 1/pengenceran tabung tengah
= 15 x 1/10-2
= 15 x 102
= 1500
2. Hasil uji penduga menunjukkan jumlah tabung reaksi positif : 3, 2, 1

Nilai MPN = Nilai MPN dari tabel x 1/pengenceran tabung tengah

= 150 x 1/10-2
= 150 x 100
= 15000
3. Perhatikan hasil pemeriksaan MPN Coliform

Berdasarkan data di atas diperoleh kombinasi tabung positif 5, 3, 1

Nilai MPN tabel seri 5 tabung untuk kombinasi 5, 3, 1 adalah 110
Nilai MPN sampel adalah = 110 x 1/10-3
= 110 x 1000
= 110000

4. Perhatikan hasil uji MPN sampel air sungai

Misal :
 Didapatkan kombinasi jumlah tabung positif : 3 2 1 maka jumlah bakteri coliform
adalah 150 sel/100 ml.
5. Berapakah nilai MPN coliform/100 ml seri 5 tabung? Kombinasi atau jumlah tabung
yang positif adalah 5-3-1.
Berapakah jumlah coliform dalam 100 ml sampel?
Jawab: :
Nilai dalam tabel MPN untuk untuk kombinasi 5-3-1 adalah 110
1
Nilai MPN = Nilai MPN dari tabel x
pengenceran tabungtengah
1
= 110 x
10−3
= 110000
Maka nilai MPN coliform/100 ml adalah 110000 MPN/ml

6. Perhatikan data hasil uji MPN Coliform pada sampel air N.

Jumlah Tabung Positif
NO Indeks
Tahap Pengujian Seri I Seri II Seri III
. MPN
(10 ml) (1 ml) (0,1 ml)
1. Penduga (LB) 5 1 1 -
2. Penegas (BGLB) 0 0 0 0
Hitung nilai MPN dengan Ragam Thomas!
Jawab:
Indeks MPN Air N=…?
Dik :
 Jumlah tabung positif =0
 Jumlah volume sampel = (5 x 10) + (1 x 1) + (1 x 0,1)
= 51,1 ml
 Jumlah vol. Sampel negatif = 51,1 ml
Dit : indeks MPN dan jumlah bakteri ?
Indeks MPN = ∑ Tb ¿ ¿ ¿
0 x 100
=
√51 , 1 x 51 ,1
=0
Jadi, jumlah bakteri dalam 100 ml sampel air N adalah…
= indeks MPN x pengenceran
= 0 x 10
= 0 JPT/100 ml
7. Perhatikan data hasil uji MPN Coliform pada sampel air Keran

Jumlah Tabung Positif

Indeks
NO. Tahap Pengujian Seri I Seri II Seri III
MPN
(10 ml) (1 ml) (0,1 ml)
 1. Penduga (LB) 3 3 3 -
2. Penegas (BGLB) 0 0 0 0

Hitung nilai MPN dengan Rumus Thomas!

Jawab :
Indeks MPN Air Keran
Dik :
 Jumlah tabung positif =0
 Jumlah volume sampel = (3 x 10) + (3 x 1) + (3 x 0,1)
= 33,3 ml
 Jumlah vol. Sampel negatif = 33,3 ml
Dit : indeks MPN dan jumlah bakteri ?
Indeks MPN = ∑ Tb ¿ ¿ ¿
0 x 100
=
√33 , 3 x 33 , 3
=0
Jadi, jumlah bakteri dalam 100 ml sampel air keran adalah
= indeks MPN x pengenceran
= 0 x 10
= 0 JPT/100 ml
Note : JPT=MPN