KROMATOGRAFI KOLOM

EFISIENSI PEMISAHAN KROMATOGRAFI KOLOM

PARAMETER UNTUK MEMPREDIKSI EFISIENSI PEMISAHAN :

PATOKAN 2 KOMPONEN
 Kuosien Pemisahan
 Faktor pemisah

PATOKAN KESELURUHAN KOMPONEN

• JUMLAH PELAT TEORI
• JUMLAH TAHAP
• KAPASITAS PUNCAK
 KROMATOGRAFI KOLOM
s i e n
Kuo sahan
i
pem
Disebut juga faktor pemisah (α )
 Pemisahan yang bagus jika α besar
(Banyak diterapkan pada ECC)

Untuk kromatografi dapat juga dinyatakan sebagai

ratio volume retensi (volume tambat) :
V’R = volume retensi tambat
B : solut yang teretensi dg kuat
senyawa yang ditahan kuat
sebagai pembilang
 Faktor Pemisah

 Selektifitas kolom memisahkan 1 komponen dengan komponen

lainnya (> 2 komponen)

k’2 V2 - V0 tr2 - tr0

α= = =
k’1 v1 - v0 tr1 - t0
 α makin besar pemisahan paling baik

 Namun α saja tidak cukup efisiensi pemisahan juga

tergantung pada nilai factual kooefisien partisi

o nt oh :
C
Campuran 1 :
Kp A = 2 Kp B = 0,5 α = 4,0
Mana yang
Campuran 2 : terbaik??
Kp X = 20 Kp Y = 5 α = 4,0
 Resolusi (Rs)

Merupakan parameter efisiensi pemisahan yang banyak digunakan

d = jarak 2 puncak maks (makin besar d makin baik)

WA = lebar alas puncak A
WB = lebar alas puncak B
 RS = 1 RS > 1
Pemisahan tidak Pemisahan baik
sempurna
 PATOKAN KESELURUHAN KOMPONEN
R I (N)
L AT TEO
P E
AH
JUML

PROSES KESETIMBANGAN
TERJADI PADA BANYAK PELAT

H = TINGGI PELAT YANG

MAKIN BANYAK PELAT MAKIN SETARA PELAT TEORI
BAIK L = PANJANG KOLOM (CM)
N = JUMLAH PELAT

Makin besar N pemisahan

makin baik
 Jumlah Tahap (JT) Kapasitas Puncak
Jumlah maksimum puncak yang teresolusi
  1 tr yang diberikan oleh system selama periode
TL =
 waktu tertentu

Makin banyak puncak

1 Pemisahan makin baik

 = W
4
Kromatografi Gas

n ≈ 1 + N1/2
tr = waktu retensi
W = lebar puncak Kromatografi Cair

n ≈ 1 + 0,6 N1/2
 FAKTOR KAPASITAS (K’)
 BERHUBUNGAN DENGAN RETENSI KOLOM UNTUK 1 KOMPONEN

Vr - Vm tr2 - tm
K’ = =
vm tm
V1 - V0 tr1 - t0
K’ = =
V0 t0

Vm = V0 = volume pelarut untuk membsahi adsorben di kolom = V tabung

Vr = Volume pelarut untuk mengelusi komponen
Tm = t0 = waktu untuk mengeluasi pelarut
Tr + waktu untuk mengeluasi komponen
 Hubungan K’ dengan nilai Rf TLC

1
Rf =
1 + K’

Contoh soal
 Pemisahan dengan KLT Fase diam silika gel G fase gerak Heksan ethyl asetat
menunjukkan nilai Rf senyawa A = 0,4. Berapakah volume pelarut untuk
mengeluasi komponen A (VrA) jika tinggi kolom 18 cm dan diameter kolom 1,2
cm
CLASSICAL COLUMN
CHROMATOGRAPHY
CLASSICAL COLUMN
CHROMATOGRAPHY

MECHANISM :
 Adsorption
 Desorption
 Elution
 gravitation
 ADSORBENT

 Silica gel

 alumina

 cellulose

 kiselghur
 Size of adsorbent particle

CC
63 – 250 μm

TLC
< 63 μm
 Selection of eluent

 Based on

Literatures

TLC data
 Using the TLC data
Choose eluent for TLC
(2 solvent system : more polar and less polar)
 Choose eluent for TLC that giving Rf 0,2 – 0,3
 Eluent less polar than TLC eluent
Contoh :

Rf >0,5
Apa yang harus dilakukan ?
 Metode penyiapan kolom klasik

Metode Kering
 Memasukkan serbuk adsorben ke dalam kolom, langsung ditambahi eluen

Metode basah
 Memasukkan eluen ke kolom
 Kemudian serbuk adsorben yang telah disuspensi dengan cairan eluen (bubur
silika) dimasukkan ke dalam kolom
Metode kombinasi (kering dan basah)
 Memasukkan eluen ke dalam kolom kemudian serbuk adsorben dimasukkan ke
dalam kolom
 Penyiapan kolom

Tinggi adsorben
 Pemisahan normal :
10 – 100 x diameter θ column

Umumnya : 15 – 20 x diameter θ column

SOAL

 Jika dilaboratorium tersedia kolom dengan diameter 2 cm dan tinggi

30 cm. Berapakah sebaiknya berat ekstrak yang diaplikasikan
(dipisahkan) jika diinginkan pemisahan dengan perbandingan
ekstrak : sorben (1 : 20 ) dengan tinggi kemasan kolom 20 cm jika
bj silika 0,8516 g/ml
 Preparing of sample

 Sample dilarutkan dalam eluen

 Sample dilarutkan dalam pelarut yang kurang polar

 Sampel dibuat serbuk dengan adsorben

perbandingan maks adsorben : sample (1 : 1)
 Berat sample

 Pemisahan normal

Sample : adsorben
1 : 30

Umum
Sample : adsorben
1 : 20
 Pemisahan sulit ?
 ELUTION METHOD

 Isoratic elution
Using 1 eluent
Gradient elution
(umumnya eluen isokratis)
 Gradient elution
Using various of eluent by increasing polarity

Sistem Gradien eluasi

Volume (ml)
N-Hexane 100 90 80 70 60 50 40 … dst 0
Etil asetat 0 10 20 30 40 50 60 … dst 0
Metanol 0 0 0 0 0 0 0 0 100
 Collecting fraction

a se d on
B
 Color

 Volume

 Time
Fraction monitoring

TLC PC

FRACTIONS THAT CONTAIN THE SAME

COMPONENT ARE COMBINED
 DETEKSI
 Selama proses ekstraksi, masing-masing fraksi dapat dianalisis untuk monitoring
kimiawi, baik dengan TLC atau HPLC .
 Metode yang lebih modern menggunakan detector UV atau indeks bias

Deteksi
dengan
KLT
dibawah
sinar UV
366 nm
 Penentuan Kemurnian

 Dengan KLT 3 pengembang berbeda, diamati :

 Noda 1 atau tidak
 Penampak bercak : H2SO4, dipanaskan

KROMATOGRAFI KOLOM
 TUJUAN PREPARATIF
• UNTUK MEMPEROLEH SESUATU
• TIDAK DAPAT UNTUK PENENTUAN MURNI ATAU TIDAK

HPLC  BISA UNTUK MENENTUKAN MURNI ATAU TIDAK