Lecture 4

Downstream Process
13 April 2018
Etin Diah Permanasari, Ph.D, Apt.

1
 Downstream Process
a. Definisi proses hilir (recovery)
b. Prinsip teknologi proses hilir
c. Teknologi pemisahan media, biomassa dan produk.
d. Teknologi isolasi dan purifikasi produk
e. Stabilisasi produk.
f. Teknologi formulasi
 Pendahuluan

??
Teknologi Fermentasi
(fermentor, bioreaktor)

Downstream Process

3
 Definisi Downstream Proses (DSP)
• Downstream Process = Product Recovery = Industri hilir :
industri yang mengolah lebih lanjut produk industri antara
menjadi produk setengah jadi dan selanjutnya melalui
pabrikasi dan pengerjaan akhir menjadi produk jadi.
• Including separation, purification, and packaging of the
product
• Adalah rangkaian proses yang dilakukan setelah selesainya
proses fermentasi atau biokonversi, yang mencakup
pemisahan, pemurnian sampai pada pengepakan produk
• Recovery merupakan aspek bioteknologi yang cukup penting,
sebagian besar dari biaya produksi bioteknologi merupakan
biaya untuk proses hilir (± 40%).
• Di dalam dunia industri fermentasi:
1. Upstream Processing (USP) – proses hulu
2. Downstream Processing (DSP) – proses hilir

5
 a. Upstream Processing
• Upstream Processing (USP): semua faktor dari proses awal/
persiapan/ initial stage.
• 3 Aspek penting:
1. Mikroorganisme: strategi awal memperoleh mikroorganisme (strain
yang cocok, pemurnian mikroorganisme, persiapan inokulum yang
cocok, dll)
2. Media fermentasi: sumber karbon, sumber energi yang cocok
3. Semua hal yang berhubungan dengan fermentasi: optimasi, kondisi
terkontrol

6
 b. Downstream Processing
• Downstream processing: semua proses setelah fermentasi
selesai.
• Pemanenan hasil fermentasi, ekstraksi/pemurnian hasil
fermentasi  produk bioteknologi

7
 Alir Proses Fermentasi

Main Process Downstream

- Desain peralatan Process
Upstream Process
- Desain process - Pemanenan
- Organisme
- Optimasi faktor yang - Penanganan hasil
- Medium panen
berpengaruh
- Desain kontrol & - Formulasi
otomatisasi - Pengolahan limbah
 Proses Hilir
• Efisiensi proses fermentasi dapat ditingkatkan dengan
pemilihan strain unggul, medium yang tepat dan desain
bioreaktor yang baik.
• Nilai tambah dari proses recovery menjadi tinggi, bila dapat
meningkatkan efisiensi penanganan dan teknik yang mudah
dan murah.
 Produk fermentasi berupa:
1. Metabolit ekstra seluler, maka penanganannya dengan
segera memisahkan yang padat dari campuran medium
2. Metabolit intraseluler, maka penanganannya dengan
melakukan pelisisan dinding sel untuk memperoleh
metabolit yang terdapat di dalam sel, serta segera
mengimobilisasikannya.
 Prinsip Proses Hilir
1. Seluruh proses harus bertujuan untuk memperoleh produk yang
diinginkan secara maksimal dan produk samping minimal
2. Peralatan yang digunakan harus mudah dan tahan lama
3. Banyaknya tahapan proses harus dibuat seminimum mungkin
4. Proses yang digunakan harus mampu menurunkan volume antara
massa cair fermentasi dengan cairan tahapan akhir dari proses
daur ulang
5. Proses harus bertujuan agar hasil panen mudah ditangani, baik
untuk didaur ulang maupun diolah secara konvensional
6. Proses harus segera dilakukan segera setelah massa cair
fermentasi dikeluarkan dari bioreaktor
7. Proses harus hemat energi dan biaya
 Tahapan Downstream Process
Stage Unit Operations

1. Separation of insolubles filtration, sedimentation,

extraction, adsorption

2. Isolation of Product extraction, adsorption,

ultrafiltration, precipitation

3. Purification chromatography,
crystallization, fractional precipitation

4. Polishing drying, crystallization

 Diagram alir fasilitas DP produk fermentasi

Source: Datar R and Rosen CG. Downstream Process Economics in Separation Processes in Biotechnology, Asenjo J ed., Marcel-
Dekker, Inc., 1990
 Diagram alir fasilitas DP produk fermentasi

Fermentation – upstream
processing

Source: Datar R and Rosen CG. Downstream Process Economics in Separation Processes in Biotechnology, Asenjo J ed., Marcel-
Dekker, Inc., 1990
 Diagram alir fasilitas DP produk fermentasi

Harvest and removal of solids

Source: Datar R and Rosen CG. Downstream Process Economics in Separation Processes in Biotechnology, Asenjo J ed., Marcel-
Dekker, Inc., 1990
 Diagram alir fasilitas DP produk fermentasi

Primary recovery

Source: Datar R and Rosen CG. Downstream Process Economics in Separation Processes in Biotechnology, Asenjo J ed., Marcel-
Dekker, Inc., 1990
 Diagram alir fasilitas DP produk fermentasi

Secondary recovery and

polishing

Source: Datar R and Rosen CG. Downstream Process Economics in Separation Processes in Biotechnology, Asenjo J ed., Marcel-
Dekker, Inc., 1990
 Proses Hilir pada Fermentasi Cair
1. Penanganan Massa Cair
2. Pemisahan Fasa Cair & Padat
3. Ekstraksi & Isolasi Produk
4. Purifikasi Produk
 1. Penanganan Massa Cair
• Bertujuan:
– memperbaiki sifat penanganan massa cair lebih lanjut
– mempermudah tahap pemisahan padat-cair
– mengontrol seluruh perilaku ekstraksi massa cair
– mengurangi pencemaran
• Teknik:
1. Koagulasi
2. Flokulasi
• Koagulasi
– Forming semisolid lumps in a liquid
– Penambahan koagulan kimiawi
• Flokulasi
– Forming woolly cloudlike aggregations
– Penuaan sel menginduksi flokulasi
– Penambahan flokulan kimiawi (CaCl2 atau polielektrolit)
– Perlakuan panas
– Perlakuan pH
 Koagulasi
• Penggumpalan partikel koloid menjadi partikel kecil (fine
flocs) dengan penambahan bahan kimia yang disebut
Koagulan.
• Penambahan Koagulan yang memiliki muatan berlawanan
akan mengganggu kestabilan lapisan-lapisan luar partikel
koloid. Dengan pengadukan, kedua proses destabilisasi koloid
di atas akhirnya akan membentuk partikel-partikel gumpalan
kecil (fine flocs).
• Namun gumpalan ini terkadang belum cukup besar untuk
dapat mengendap dengan cepat sehingga dibutuhkan
Flokulasi.

Koloid Reaksi Koagulasi Reaksi Flokulasi

 Flokulasi
1. Penggumpalan partikel kecil (fine flocs) menjadi gumpalan
(flocs) yang besar dan mudah untuk mengendap dengan
penambahan bahan kimia.
2. Gumpalan atau flok akan menabrak partikel koloid atau
gumpalan (flocs) lainnya sehingga menghasilkan gumpalan
yang lebih besar dan lebih berat lagi.
3. Bahan kimia yang ditambahkan disebut polimer atau
flokulan. Flokulan yang larut di air memiliki banyak titik aktif
yang dapat menangkap gumpalan partikel kecil (fine floc)
membentuk ikatan yang saling mengikat sehingga terbentuk
gumpalan yang besar
Flokulasi Sel Chlorella sp
 Tipe dan Fungsi coagulant/flocculant
Coagulant / flocculant Fungsi

Tawas Al, PAC Polyvalent cation (Al3+, Fe3+, Fe2+, dll) menetralkan muatan
Ferric chlorida partikel tersuspensi dan metal hidroksida (Al(OH)3, dll)
Ferrous sulfat menyerap partikel2 shg terbentuk flokulasi

Kalsium hidroksida Untuk menaikan pH

(kapur)
Anionic/nonionik Membuat flok besar
polymer flocculant
Cationic polymer Menetralisir muatan SS dan membuat flok besar. Kebanyakan
flocculant digunakan di biological sludge dewatering

Organic coagulant Menetralisir muatan SS dan membuat bahan anionik yg larut

(decolorant) (mis, zat warna) menjadi tidak larut dan dapat diendapkan
Tipe dan karakteristik organic floculant dan
volume sludge yg dihasilkan
Tipe pH keunggulan kelemahan aplikasi Vol NaOH Vol
effectif netralisir sludge
(g/kg) (g/kg)
Alum sulfat Murah Flok ringan General
Liquid (Al2O3) 8% 5–7 Daya korosif lemah Tak efektif di waste water 190 122
Solid (Al2O3) 16% 5-7 pH>8 treatmen 380 245
PAC 10 – 11% 5-7 Koagulasi > bagus Lebih mahal dr Water
dibanding Alum alum treatment
Butuh NaOH lebih Flok ringan
sedikit Tak efektif di 60 153
Efektif di suhu air yg pH>8
rendah
Feri chlorida 4 - 11 Heavy floc Large volum of Membantu
FeCl3 38% Efectif in alkaline zone netralizer need dewatering 280 250
High sludge pH
corosiveness tinggi
Fero sulfat 8 - 11 Murah Large volum of Colored 290 323
FeSO4.7H2O Heavy flocs netralizer need waste water
Tak efektif di
pH<8
 2. Pemisahan Fasa Cair & Padat
1. Filtrasi
2. Flotasi
3. Pengendapan
4. Sentrifugasi
5. Serat Berlubang
6. Pemisahan elektrokinetis
 1. Filtrasi
• Teknik penyaringan dengan menggunakan filter
sederhana, filter bertekanan dan ultra filtrasi
• Prinsipnya adalah partikel padat tetap tertinggal,
sedangkan filtrat dapat melewati saringan
• Bila padatan banyak menumpuk pada piringan
filter, maka tekanan pompa harus ditingkatkan
untuk mengimbangi menurunnya laju filtrasi
• Kelemahan : kompresibilitas padatan biologis
yang menjadi penghalang filter
 Filtrasi
• Particle Filtration
• Mikrofiltration
• Ultrafiltration
• Nanofiltration
• Reverse Osmosis
 Teknologi Filtrasi
• Mikrofiltrasi
– Proses aliran melewati membran
dengan suatu tekanan rendah.
– Biasanya utk memisahkan partikel
koloidal atau tersuspensi (0.1-1
mikron)
– Mikrofiltrasi digunakan pada
fermentasi, penjernihan broth,
penjernihan biomassa & recovery.
• Nanofiltrasi
 Nano-filtration (0.0001 – 0.001
mikron) dipilih saat RO &
Ultrafiltrasi bukan pilihan tepat.
 Separasi demineralisasi,
penghilangan warna & desalinasi.
 Pada pemisahan alkohol dari
organic solutes, padatan
tersuspensi, bhn organik BM
rendah
• Ultrafiltrasi
– Proses fraksionasi selektif
menggunakan tekanan > 145 psi (10
bar)  0.001- 0.01 mikron
– Banyak digunakan pada fraksionasi
susu & whey and pemisahan protein
– Dapat mengkonsentrasikan SS &
solutes dgn BM > 1,000
• Reverse Osmosis
 Metode penyaringan molekul besar dan ion
ion dari suatu larutan dgn cara memberi
tekanan pada larutan tsb.
 Zat terlarut terendap di lapisan yang dialiri
tekanan, sehingga pelarut murni bisa
melewati saringan
 Dapat mengkonsentrasikan semua bahan
terlarut maupun SS.
 RO banyak digunakan utk desalinasi air laut
Teknologi Filtrasi
Ceramic
Membran
Membran
FilterFilter
Filtration: Equipment
 Normal Flow Filtration
vs. Tangential Flow Filtration

Biasa disebut conventional Aliran air turbulen (aliran air

process. Aliran air mengarah
langsung ke membran dan
partikel padatan akan
terakumulasi di atas permukaan
membran.
dilewatkan menyamping membran
semipermeable) sepanjang membran
untuk mencegah padatan terakumulasi
diatas permukaan membran.
Tangential Flow Filtration
vs. Normal Flow Filtration
 2. Flotasi
• Pengapungan adalah salah satu cara tradisional yang
digunakan dalam industri minuman beralkohol &
pengolahan air limbah
• Flotasi dibantu oleh daya apung sel dan menghasilkan
buih yang kaya akan padatan (termasuk debris sel dan
sel), sehingga produk alkohol menjadi bening
• Penambahan surfaktan atau
agitasi (pengadukan)
Flotation Cell
Flotation Cell Agitator Design
Flotation Cell - Rotors
 3. Pengendapan
• Merupakan cara tradisional dalam
industri fermentasi alkohol dan
pengolahan air limbah
• Dalam proses pengendapan, partikel
dan sel mengendap ke bagian bawah
fermentor akibat gaya gravitasi
 4. Sentrifugasi
• Merupakan pemisahan dengan menerapkan prinsip gaya
sentrifugal
• Menggunakan alat sentrifus atau pemusing (umumnya
dengan kapasitas rendah, skala laboratorium)
• Faktor yang menentukan adalah: kecepatan putar (rpm),
besarnya gaya sentrifugal (G), waktu, perbedaan densitas
yang besar antara partikel dan cairannya
 Centrifuge
Alat pembangkit gaya sentrifugal, umum digunakan utk memisahkan partikel dari larutannya

Control Panel

Protective enclosure
Door

Cut-away view
Rotor

rminimum Centrifugal force

Center of rotation
Drive
shaft
Sedimentation
path of particles
Motor raverage
Pellet
rmaximum
deposited
at an angle
Basic components of a centrifuge
 5. Serat Berlubang
• Merupakan konsep baru yang cepat dan ekonomis
menggunakan hollow fibre untuk memisahkan sel (bakteri,
virus dan bahan organik) dari cairan fermentasi
• Struktur membran yang khas memungkinkan proses
pemisahan berjalan efisien tanpa terjadi penyumbatan pori-
pori, karena adanya membran yang bersifat anisotropis
dengan pori-pori terkecil pada permukaan yang sangat
permeabel.
• Karena penempelan padatan terjadi di permukaan membran,
pembungkus filter tidak mamper, sehingga laju aliran terjaga
• Catridge filter dapat dibersihkan dengan mudah dan dapat
dipakai berulang-ulang
Hollow Fiber
 6. Pemisahan Elektrokinetis
• Metode pemisahan ini dapat menghasilkan endapan dengan
kandungan bahan padat dalam jumlah besar yang menempel
pada elektroda
 3. Ekstraksi & Isolasi Produk
• Penentuan Teknik isolasi produk ditentukan oleh:
– tingkat stabilitas bahan yang akan diisolasi
– kualitas / mutu produk yang diinginkan (crude atau pure) atau (teknis
atau analitis)
– waktu yang tersedia
– ketersediaan alat dan sarana
• Jenis produk :
– Biomassa
– Metabolit intraseluler
– Metabolit ekstraseluler
 Proses Isolasi dibedakan
1. Isolasi Enzim intraseluler
2. Isolasi Enzim ekstraseluler
3. Isolasi Asam Organik
4. Isolasi Asam Amino
5. Isolasi Antibiotik
6. Isolasi Vitamin
 Isolasi produk Intraseluler
• Pemecahan sel (untuk melepas produk intraseluler)
• Tujuan: mengekstraksi atau membebaskan produk intraseluler
• Pemecahan sel dilakukan secara: mekanis, kimiawi, fisika-
kimia, atau pemecahan dinding sel atau membran sitoplasma.
• Pemecahan sel scr mekanis:
– Teknik peremukan cair (liquid shear), yaitu menggunakan
homogenisasi bertekanan tinggi
– Teknik peremukan padat (solid shear)
– Penumbukan (Grinding)
– Penggilingan (Milling)
• Pemecahan sel scr kimiawi (alkali kuat)
• Pemecahan sel scr enzimatis (lysosim)
Sonicator
Penumbukan (Grinding)
Gilingan (Milling)
 Ekstraksi Produk
• Presipitasi
– cara isolasi dan pemurnian produk dengan menggunakan garam organik,
pelarut organik atau polimer dengan BM tinggi
– melalui presipitasi diferensial, produk dapat dipertahankan dalam larutan atau
dikumpulkan sebagai presipitat
• Kromatografi  purifikasi
 Purifikasi Produk
• Bertujuan memisahkan kontaminan dari produk yang dapat
mengurangi nilai produk dari sifat kimiawi ataupun fisik
• Untuk produk crude/ produk mentah tidak perlu purifikasi
• Untuk produk food grade, analytical grade, pharmaceutical
grade, molecular grade  MUTLAK PURIFIKASI
• Teknik :
1. Ultrafiltrasi , Nanofiltrasi, Reverse Osmosis
2. Kromatografi
3. Elektroforesis
4. Distilasi
 Kromatografi
• Kromatografi afinitas
– Termasuk kromatografi adsorpsi dengan matriks kolom yang mengandung
ligand dengan tingkat pengikatan spesifik sangat tinggi terhadap bahan
yang akan diisolasi
– Pengikatan bersifat dapat balik (reversibel)
• Kromatografi pertukaran ion
– Kromatografi menggunakan resin atau selulosa sebagai bahan pertukaran
ion
– Pemisahan ini tergantung pada muatan neto, kerapatan muatan dan
ukuran molekul protein ybs, pH dan kekuatan ion larutan
• Kromatografi Filtrasi membran
– Kromatografi yang didasarkan pada kemampuan untuk menghasilkan gel
yang mempunyai pori dengan ukuran yang dapat diatur
– Pori yang dapat diatur tsb dapat dibuat dari bahan: dekstran, agarosa,
gelas berpori, atau poliakrilamida
 Downstream Processing Equipment
Lab Scale Large Scale
Chromatography System Chromatography System
Elektroforesis
65
 Stabilisasi Produk
Produk fermentasi harus mempunyai stabilitas produk
yang tinggi dalam hal:
1. Kadar air cukup rendah (< 5%) sehingga mempunyai
daya simpan yang lama
2. Tingkat kerusakan yang rendah dalam waktu
simpan lama
3. Mutu yang tetap setelah penyimpanan lama
 Formulasi
• Formulasi Padat
• Formulasi semi Padat
• Formulasi cair
 Drying

• Perlu dilakukan dewatering sampai sekitar 5%

untuk menghindari pembusukan atau perusakan
oleh mikroba kontaminan
• Pengeringan merupakan fungsi waktu dan suhu:
– i. Waktu lama suhu rendah
– ii. Waktu cepat suhu tinggi
• Teknik pengeringan: Pengeringan lapisan
permukaan,freeze dry, Spray drier , Flash drier
Freeze dryer
 Crystallization
• Provide highly purified protein/product

70