Kromatografi Kolom

Tujuan :
Memisahkan molekul Hb dari molekul vitamin B12 dengan menggunakan butiran
mikroskopis dekstran sebagai penyaring.

Alat dan Bahan :

1.
2.
3.
4.
5.

Larutan sampel ( campuran Hb dengan vitamin B12 )

Kolom berisi penyaring gel ( dekstran )
Dapar/Buffer (NaCl 0,9%)
Pipet
Rak dan tabung reaksi

Cara Kerja :
1. Menyiapkan 14 tabung reaksi lalu menandainya 1-14 dan menatanya dengan urut,
2. Membuka penutup atas dan bawah kolom penyaring, kemudian dimasukkan ke
tabung reaksi pertama,
3. Setelah dapar mendekati batas gel, larutan sempel diteteskan sebanyak satu tetes ke
dalam kolom penyaring,
4. Menambahkan dapar hingga 1 cm diatas larutan sempel didalam kolom penyaring,
5. Setelah 5 tetes larutan hasil penyaringan berada di tabung satu, kolom penyaring
dipindahkan ke tabung berikutnya,
6. Mempertahankan ketinggian dapar dalam kolom penyaring, agar gel tidak menjadi
kering,
7. Memindahkan kolom penyaring setelah 5 tetes hingga larutan hasil penyaringan
bewarna bening kembali,
8. Menutup penutup atas dan bawah kolom penyaring setelah tabung terakhir terisi
dan bewarna bening,
9. Mengamati dan mencatat hasil penyaringan.

Hasil pengamatan :
Pengamatan

Tabung
1

10

11

12

13 14

Warna

benin
g

beni
ng

merah

merah

merah

merah

merah

merah

merah

mer
ah

mer
ah

mer
ah

be
ni
ng

beni
ng

Intensitas

++

+++
++

+++
+

+++

++

Serapan

Kesimpulan :
Butiran dekstran merupakan polimer glukosa dengan ukuran mikroskopis tertentu,
dimana molekul dengan ukuran lebih kecil dari pori dan larut dalam fase gerak akan
terperangkap dalam butiran, sedangkan molekul dengan ukuran lebih besar dari pori akan
mengalir dengan fase gerak diantara butiran butiran mikroskopis tersebut. Dengan
demikian molekul yang berat molekulnya lebih besar akan mengalir lebih dulu daripada
molekul dengan berat molekul yang lebih ringan. Mengingat cara kerja butiran dekstran
tersebut maka dapat diperoleh kesimpulan bahwa , berat molekul Hb lebih besar daripada
berat molekul vitamin B12.