Ferafera

Teknik kromatografi gas headspace statis memiliki penerimaan yang besar dalam forensic lapangan,
terutama untuk penentuan etanol dalam sampel biologis ( Macchia et al , 1995 . ;

Tagliaro et al . , 1992) , laboratorium forensik sehingga sebagian besar di dunia memiliki peralatan ini
dan melakukan analisis ini secara rutin , tetapi dalam banyak laboratorium ini, peralatan
secara eksklusif digunakan untuk menentukan etanol , bahkan ketika teknik ini dapat digunakan untuk
menentukan banyak zat lain yang menarik toksikologi , zat volatil , tanpa
perubahan besar pada peralatan ( Seto , 1994) , sehingga kita dapat menyimpulkan bahwa
laboratorium tersebut melakukan tidak memanfaatkan semua kemungkinan teknik ini.
Penentuan zat yang mudah menguap adalah salah satu tes yang paling penting dalam forensik
toksikologi, ( Broussard , 2003) . Zat volatil dapat didefinisikan sebagai mereka yang organik
senyawa yang tekanan uap lebih besar dari atau sama dengan 0,1 mm Hg pada 20 C, sedangkan
ini zat mungkin terlibat dalam kasus forensik sebagai agen beracun dan karena penggunaannya
sebagai penyalahgunaan obat , dalam konteks itu , zat volatil yang paling penting adalah etanol ,
bagaimanapun , ada zat lain yang mudah menguap kepentingan forensik , seperti pelarut organik ,
anestesi ,nitrit alkil , dll ( tabel 1 ) ( Moffat et al . , 2004) .
Penentuan zat volatil dalam sampel forensik telah dilakukan melalui titrasi , spektrofotometri dan
metode kromatografi , serta ( Seto , 1994) . Titrasi dan metode spektrofotometri yang tidak spesifik
dan biasanya tidak cukup sensitivitas , selain tidak mampu menganalisis secara simultan semua zat
volatil . di Sebaliknya, kromatografi gas adalah kualitatif ( dengan menggunakan waktu retensi ) dan
kuantitatif ( dengan menggunakan kekuatan sinyal ) , sehingga mampu menganalisis secara simultan
beberapa volatilzat dengan sensitivitas dan spesifisitas yang diperlukan dalam lingkungan forensic
yang memadai ,
Oleh karena itu , teknik ini digunakan untuk membuat keputusan tersebut . Secara historis , tiga jenis
metode telah digunakan untuk persiapan sampel : ekstraksi pelarut , langsung
injeksi dan injeksi volume yang headspace , akhir-akhir ini , laboratorium forensik lebih memilih yang
terakhir
dibandingkan dengan dua teknik lainnya .
Pelarut Aromatik Hidrokarbon Alkyl Nitrit Anestesi
Etil Alkohol Toluene Amil Nitrit Etil Eter
Metil Alkohol Benzena Isobutyl Nitrit Kloroform
Aseton Xylenes Fluorocarbons
Tabel 1 . Contoh zat-zat volatil kepentingan forensik .
Teknik injeksi headspace memiliki keuntungan besar atas metodologi lain , yaitu
memberikan suntikan bersih , sehingga pengeluaran lebih rendah dari kromatografi gas habis ;
itu sederhana , meminimalkan kemungkinan artefak selama analisis , mengurangi
kemungkinan kontaminasi dan akurat mengkuantifikasi analit .
Makalah ini akan meninjau aspek teoritis dari teknik headspace statis , serta
tambahan pelengkap untuk itu ( Kolb , 1999; . Slack et al , 2003) , zat yang paling signifikan
dari sudut pandang toksikologi forensik yang dapat dianalisis dengan teknik ini sebagai etanol
( Kugelberg & Jones , 2007; Macchia et al , 1994; . . Tagliaro et al , 1992) , congener beralkohol
minuman ( Iffland & Jones , 2003) , inhalan ( Angerer & HORSCH , 1992; Seto , 1994) , anestesi
( Pihlainen & Ojanpera , 1998 ) , karbon monoksida ( Boumba & Vougiouklakis , 2005; Vreman et
al , 1984) dan sianida ( Calafat & Stanfill , 2002; . Felby , 2009) , dalam setiap kasus, analisis
kondisi dan modifikasi yang diperlukan untuk peralatan untuk melakukan analisis masing-masing
akan
terkena , keuntungan dan kerugian dari teknik ini atas prosedur lain yang sudah ada
akan dibahas dan juga, masalah yang berkaitan dengan pengembangan metode untuk teknik ini dan
validasi mereka.
Akhirnya , perkembangan terbaru di daerah akan disebutkan , dan bagaimana mereka telah diganti
injeksi headspace dalam beberapa aplikasi .
2 . static headspace
Jika komponen bunga dalam sampel padat atau cair yang mudah menguap , cara yang baik untuk
menganalisis
mereka adalah untuk menguji konsentrasi analit tersebut dalam fase gas di atas matriks
( headspace ) ketika dalam wadah tertutup , baik dengan mengambil sampel langsung dari gas
fase atau menjebak dan berkonsentrasi gas sebelum analisis . Jenis ekstraksi
Teknik yang dikenal sebagai analisis ruang ( Smith , 2003 ) , analisis dan selanjutnya
pemisahan zat volatil biasanya dilakukan dengan teknik gas
kromatografi , yang merupakan teknologi yang matang , dapat diandalkan dan didukung oleh tubuh
besar
bekerja. Sampel dapat berhubungan dan dalam kesetimbangan dengan gas ekstraktan ( statis atau
ekuilibrium headspace ) , atau senyawa yang mudah menguap dapat diekstraksi oleh aliran lembam
gas ( headspace dinamis ) .
Teknik yang digunakan headspace yang berbeda dapat diklasifikasikan ke dalam prosedur satu
langkah ,
seperti statis headspace , di mana aliquot dari fase uap ditransfer secara tertutup
kontainer langsung ke kromatografi gas , dan dua -langkah prosedur , di mana volatil
analit yang ditransfer dari matriks headspace untuk "perangkap " di mana mereka dilepaskan
www.intechopen.comDetermination dari Volatile Substances dalam Forensik
Sampel oleh Static Headspace Gas Chromatography 199
oleh aksi panas atau oleh aliran gas pembawa , dan dipindahkan ke kromatografi gas ;
headspace dinamis dan microextraction fase padat ( SPME ) termasuk dalam kategori ini .
Terlepas dari jenis headspace digunakan , sampel selalu gas kurang lebih encer
( Kolb , 1999) . Teknik yang Anda pilih tergantung pada beberapa faktor , seperti jenis
sampel yang akan diuji , jika analisis kuantitatif atau kualitatif yang diinginkan , yang diperlukan
sensitivitas , otomatisasi dan anggaran .
Ekstraksi headspace statis, juga dikenal sebagai kesetimbangan ekstraksi headspace , adalah salah satu
teknik yang digunakan untuk analisis kualitatif dan kuantitatif zat volatil dalam
bidang forensik , dalam teknik ini sampel ditempatkan dalam botol tertutup , analit volatil
menyebarkan ke headspace botol ( gambar 1 ) , setelah kesetimbangan tercapai antara
konsentrasi analit dalam headspace dan konsentrasi analit dalam sampel , yang
bagian headspace diambil dan disuntikkan ke dalam kromatografi gas , hal ini bisa dilakukan
manual atau dengan autosampler , proses ini akan biasanya dilakukan pada tekanan dan
suhu di atas kondisi ambien ( Slack et al . , 2003 ) .
Gambar . 1 . Pondasi ekstraksi headspace . G : Gas , L : cairan
Teknik ini sederhana , relatif murah , meminimalkan pembentukan artefak dan
akurat dapat mengukur zat volatil dengan kelarutan yang rendah dalam air, yang hanya
Kerugian yang sensitivitasnya rendah sehubungan dengan teknik headspace dinamis,
meskipun kerugian ini tidak penting di sebagian besar aplikasi untuk toksikologi forensik .
2.1 Instrumentasi untuk ekstraksi headspace statis
Peralatan untuk ekstraksi headspace statis terdiri dari wadah , di mana kesetimbangan
berlangsung , perangkat yang memanaskan wadah pada suhu konstan dan injeksi
perangkat , yang mentransfer sebagian dari gas headspace ke kromatografi gas . itu
container adalah botol kaca antara 5 ml dan 25 ml kapasitas, yang disegel dengan septum
dilapisi dengan politetrafluoroetilena ( PTFE ) dan tutup aluminium , menggunakan halangan . injeksi
www.intechopen.comGas Chromatography dalam Plant Science ,
Teknologi anggur , Toksikologi dan Beberapa Aplikasi Tertentu 200
bisa manual dan otomatis , namun, yang pertama dari teknik ini memiliki miskin
reproduksibilitas dan mungkin ada kontaminasi antara berjalan , sehingga disarankan untuk
melakukan
teknik menggunakan autosampler ( Seto , 1994) .
Autosamplers saat bekerja dengan dua teknik yang berbeda . Yang pertama menggunakan sampel
loop , dalam rangka untuk mengisi loop dengan gas headspace , botol tertutup bertekanan ke
tingkat tekanan di atas hadir dalam vial , ruang atas bertekanan ini kemudian sementara
terhubung ke loop sampel , menyebabkan gas headspace untuk memperluas melalui loop sampel
dan ke atmosfir , satu kali loop sampel penuh, katup berubah dan isinya
ditransfer ke kromatografi kolom . Jenis sampling telah umumnya
digunakan untuk pengambilan sampel gas di daerah lain , seperti industri bensin .
Alih-alih mengisi loop sampel , gas headspace dapat diperluas langsung ke
kromatografi kolom , jenis sampel disebut sampel tekanan keseimbangan , dalam hal ini
teknik , gas pembawa memasuki kromatografi gas melalui katup solenoid V dan
dibagi sebelum kolom . Beberapa gas diarahkan ke kolom dan beberapa ke
sampel jarum suntik dari headspace injector . Ketika jarum suntik memasuki botol dengan
sampel , gas bertekanan , transfer gas dari headspace untuk kromatografi yang
Kolom terjadi ketika katup solenoid V ditutup untuk waktu yang singkat , sehingga menangguhkan
aliran gas pembawa , maka gas headspace mengembang , kali ini langsung ke kolom ,
tanpa kehilangan gas headspace , seperti yang terjadi dengan prosedur yang telah disebutkan
sebelumnya .
Headspace gas menggantikan gas pembawa selama waktu sampling , dan volume headspace
gas dipindahkan ke kolom tergantung pada waktu sampling , karena itu adalah mungkin untuk
menghitungnya dengan akurasi , buku ini dapat diubah hanya dengan mengubah sampling
waktu , tidak seperti teknik sebelumnya , di mana volume gas yang diinjeksikan tergantung pada
loop sampel dan hanya dapat diubah secara manual menginstal lain loop sampel dari
Kapasitas volume yang berbeda ( Kolb , 1999) .
2.2 Preparasi sampel di ekstraksi headspace statis
Salah satu keuntungan utama dari ekstraksi headspace statis betapa mudahnya sampel
persiapan , dalam kasus analisis kualitatif , itu sudah cukup untuk menempatkan sampel dalam botol
dan
menutupnya dengan septum PTFE dan tutup aluminium , namun untuk analisis kuantitatif , maka
diperlukan untuk memahami dan mengoptimalkan efek dari matriks , untuk mendapatkan yang baik
sensitivitas dan , di atas semua , akurasi .
2.2.1 Sampel Padat
Untuk sampel padat , mungkin perlu untuk mengubah keadaan fisik mereka . Hal ini dicapai dengan
menggiling padat menjadi bubuk sehalus mungkin, atau melarutkan atau mendispersikan zat padat ke
dalam
cair. Dalam kasus pertama , volume kontak padat meningkat dalam rangka membangun lebih baik
partisi antara zat yang mudah menguap dan gas headspace , namun lebih disukai untuk
melarutkan padatan dalam cairan , karena kesetimbangan dicapai lebih cepat dengan cara ini, dan juga
lebih
direproduksi , di atas itu , sampel cair lebih mudah untuk bekerja dengan ( Slack , et al , 2003 . ) .
2.2.2 sampel Cair
Sampel cair biasanya hanya dituangkan ke dalam botol dan disegel segera setelah itu, dalam rangka
untuk mencegah kerugian penguapan ( Slack , et al . , 2003) .
2.3 Optimasi ekstraksi headspace statis
Beberapa faktor yang harus dioptimalkan dalam ekstraksi headspace statis dalam rangka untuk
mendapatkan
Metode dengan yang diinginkan ekstraksi sensitivitas , reproduktifitas dan efisiensi . faktor-faktor ini
termasuk volume botol yang digunakan , tingkat suhu dan tekanan , dan bagaimana
sampel harus dipersiapkan .
2.3.1 Sampel
Faktor utama mengendalikan sensitivitas ekstraksi headspace statis analit
Koefisien partisi ( K ) , yang merupakan rasio antara konsentrasi analit dalam cairan
fase dengan konsentrasi dalam fasa gas :
K=CL/CG(1)
Dan rasio fase ( ) , dengan rumus :
A= C G = C / K + ( 2 )
Dimana A adalah luas puncak kromatografi diperoleh untuk analit , CG adalah

konsentrasi analit dalam headspace , C adalah konsentrasi analit dalam cairan
sampel , K adalah koefisien partisi , dan adalah volume rasio fase . partisi
Koefisien tergantung pada suhu ekstraksi , sedangkan ditentukan oleh relatif
Volume antara dua fase , Dalam ekstraksi headspace statis sensitivitas tergantung pada
kelarutan analit dalam matriks , karena analit dengan koefisien partisi tinggi,
parameter yang paling penting adalah suhu ekstraksi , karena sebagian besar analit dalam
fase cair dan hanya bisa dilalui ke ruang atas dengan memanaskan botol , di sisi lain
tangan , untuk analit dengan koefisien partisi rendah , mereka sudah hadir dalam headspace
bahkan tanpa pemanasan apapun, sehingga dalam kasus ini , parameter yang paling penting adalah
volume
hubungan antara fase . Artinya, meningkatkan suhu ekstraksi hanya efektif
di analit volatil polar , sedangkan sensitivitas analit non - polar dasarnya tetap
tidak berubah dengan peningkatan suhu ekstraksi ( Slack , et al . , 2003) .
Justru sebaliknya , mengubah volume fase rasio memiliki efek minimal pada
sensitivitas analit polar ( koefisien partisi tinggi), tetapi mempengaruhi secara dramatis
sensitivitas analit non-polar ( koefisien partisi rendah) . Cara lain untuk meningkatkan
sensitivitas dari metode ini adalah dengan menambahkan garam , seperti natrium klorida , untuk
sampel .
Akhirnya , jika metode analisis difokuskan pada ketahanan daripada sensitivitas diperlukan,
hubungan antara koefisien partisi dan polaritas dari analit dapat digunakan untuk
mencapainya , dalam rangka untuk melakukannya , matriks dengan afinitas tinggi untuk analit yang
digunakan, sehingga kerugian akibat
untuk sampel penanganan atau analisis kedua dicegah . Jika nilai-nilai K tidak diketahui , salah satu
hanya dapat menganalisis dalam matriks yang dipilih substansi yang akan ditentukan , serta
menentukan daerah terhadap volume sampel ( Slack , et al . , 2003) .
2.3.2 kondisi kromatografi
Ekstraksi headspace adalah semata-mata metode pengambilan sampel dan ada , pada prinsipnya , tidak
ada
keterbatasan untuk kolom kromatografi dan jenis apapun dapat digunakan , sehingga dapat dipilih
menurut tuntutan resolusi sensitivitas dan analisis waktu yang analitis tertentu
masalah . Telah direkomendasikan untuk analisis headpace ( Kolb , 1999) , untuk digunakan dalam
pertama
Misalnya kolom kapiler 0,32 mm diameter ( ID ) dan 30 m panjang .
Namun, jika resolusi tinggi diperlukan , kolom lagi dengan ID yang lebih kecil , misalnya
50mX0.25 mm I.D. kolom kapiler memberikan pemisahan yang lebih baik dengan mengorbankan lagi
waktu analisis, Namun demikian , dalam kasus sampler headspace otomatis analisis yang panjang
waktu kurang menguntungkan , karena sampel yang dianalisis pula tanpa pengawasan semalam. jika
waktu analisis adalah parameter utama, kolom kapiler yang sangat singkat dengan ID 100 m atau
50 m dapat digunakan . ( Kolb , 1999) .
Ketebalan film merupakan parameter penting dalam kromatografi gas karena menyediakan
kapasitas sampel yang lebih tinggi untuk senyawa dalam konsentrasi tinggi untuk menghindari puncak
membelah atau
memperluas oleh kelebihan dan resolusi akibatnya miskin, Namun, ini tidak menjadi masalah
dalam analisis ruang , karena sampel headspace adalah sampel gas diencerkan dan jumlah
analit cukup kecil untuk menghindari pelebaran puncak . Ketebalan film dipilih dalam headspace
analisis untuk memberikan resolusi yang baik dalam waktu yang cukup , kecuali , perangkap
kriogenik digunakan ,
di mana film tebal lebih disukai .
Kapasitas kolom dalam kromatografi gas Headspace memiliki arti dan keprihatinan yang berbeda
volume gas yang dapat diperkenalkan dalam kolom tanpa pita signifikan
memperluas . Untuk menghindari kebingungan kapasitas headspace istilah telah digunakan ( Kolb ,
1999) . Melanjutkan , pelebaran puncak ditentukan oleh waktu injeksi, aliran gas pembawa dan
diameter dari kolom kromatografi . Akibatnya, jika resolusi tinggi tidak
diperlukan , dan detektor spektrometer massa ( MSD ) tidak digunakan , kolom kapiler dengan
I.D. 0,53 mm lebih disukai , untuk menyuntikkan jumlah terbesar gas dari headspace dan untuk
mencapai sensitivitas yang terbaik .
2.3.3 Teknik Pengayaan dalam ekstraksi headspace statis
Ketika analit berada di bawah batas deteksi ( LOD ) dari teknik yang diperlukan untuk menggunakan
teknik pengayaan . Dalam analisis ruang , untuk tujuan ini analit target harus
dipisahkan dari gas headspace baik dengan penyerapan ke dalam cairan atau dengan adsorpsi ke
sebuah
padat adsorben dan juga dengan kondensasi dalam perangkap dingin. ( Kolb , 1999) . Teknik bebas
pelarut
sangat diinginkan dalam kasus analisis jejak untuk menghindari masalah dengan kotoran pelarut .
Akibatnya , perangkap kriogenik adalah pilihan yang disukai untuk batas deteksi ditingkatkan di
analisis ruang statis
Perangkap dingin digunakan untuk dua alasan : tujuan pengayaan dan konsentrasi zat terlarut Band .
Ada dua jenis perangkap kriogenik : dengan kondensasi kriogenik dan kriogenik
fokus .
Dalam kondensasi kriogenik senyawa volatil terjebak hanya dengan kondensasi dalam
perangkap yang biasanya tidak mengandung fase diam atau ketika fase diam telah hilang
sifat sebagai fase kromatografi , zat volatil yang dielusi dari perangkap dengan
pemanasan dan tergantung pada bagaimana perangkap dingin dipanaskan , analit dapat dielusi dalam
band yang sangat sempit yang demikian , analit terfokus .
Dalam fokus yang kriogenik , senyawa volatil terjebak dalam fase cair dari
kromatografi kolom pada suhu rendah yang, bagaimanapun , melestarikan nya
sifat kromatografi , Dengan kata lain kriogenik fokus berbasis di sama
prinsip-prinsip yang fokus yang panas , yang biasa digunakan dalam kromatografi gas dan perbedaan
dalam nomenklatur hanya harus menunjukkan perbedaan suhu diterapkan , dengan
cryogenic fokus dilakukan di bawah dan termal fokus atas suhu ambien ( Kolb ,
1999) .
Umumnya , fokus yang kriogenik lebih disukai daripada kondensasi kriogenik , karena beberapa
alasan ,
teknik pertama perlu suhu yang lebih tinggi , akibatnya operasi lebih sederhana dan yang
lebih mudah otomatis , pemanasan cepat digunakan dalam larutan cryogenic dapat menyebabkan
dekomposisi senyawa labil . Selain itu , kriogenik kondensasi memiliki beberapa melekat
masalah seperti terobosan dengan pembentukan aerosol . , Akibatnya , perangkap mungkin
lengkap dengan pembentukan tetesan , menyebabkan puncak membelah atau puncak terdistorsi , last
but not least,
dalam fokus yang kriogenik , analit terjebak di dalam kolom kapiler, sehingga , Ini lebih
prosedur yang efektif dan lebih sederhana untuk mencapai dari kondensasi cryogenic , karena semua
ini
alasan , pada saat ini saat kriogenik terfokus lebih difavoritkan daripada kondensasi kriogenik
( Kolb , 1999) .
Meringkas , profil awal sampel gas tergantung pada volume sampel dan batin
diameter ketebalan kolom , Film kapiler tidak berpengaruh pada pita lebar tidak menyebabkan
fokus efek dalam kondisi isotermal . Hanya pemrograman suhu membantu untuk mengelusi
profil band yang awalnya luas sebagai puncak yang tajam . Namun, pendekatan ini untuk sangat
volatile
zat membutuhkan suhu awal yang rendah , yang mengarah akhirnya perangkap kriogenik
2.4 Teknik Kuantitatif dalam ekstraksi headspace statis
Keempat pendekatan yang paling umum untuk kromatografi gas headspace statis kuantitatif
kalibrasi standar eksternal , internal standar , penambahan standar dan multiple
headspace ekstraksi ( MHE ) . Pemilihan teknik tergantung pada jenis sampel yang
dianalisis ( Slack et al . , 2003) .
2.4.1 Eksternal kalibrasi standar
Kalibrasi standar eksternal dalam kromatografi gas headspace statis yang terbaik untuk analit dalam
sampel cair dimana analit yang larut dalam matriks dan matriks tidak berpengaruh pada
respon analit . Dalam jenis ini kalibrasi sangat penting agar sesuai dengan standar dan
matriks sampel sedekat mungkin dan untuk menunjukkan kesetaraan dalam respon
antara standar dan sampel . Kesulitan utama dengan standar eksternal
kalibrasi yang tidak mengkompensasi variabilitas karena kromatografi gas
suntikan atau karena variasi dalam matriks analit .
2.4.2 kalibrasi standar internal
Kalibrasi standar internal memungkinkan kompensasi untuk setiap variasi karena efek matriks
dan injeksi gas kromatografi . Sebelum ekstraksi , sebuah analit tambahan dikenal adalah
ditambahkan ke setiap sampel dan standar. Senyawa ini adalah standar internal.
Bagian paling penting dalam standar kalibrasi internal memilih internal yang sesuai
standar untuk metode apapun . Senyawa ini harus tersedia dalam bentuk yang sangat murni dan
tidak harus muncul dalam sampel yang menarik , setidaknya pada konsentrasi analit yang diharapkan ;
tidak dapat mengganggu baik dalam ekstraksi atau kromatografi dari analit . Akhirnya,
harus secara struktural mirip dengan analit , sehingga mengalami ekstraksi yang sama dan
kromatografi , jika kompensasi akan hilang .
2.4.3 Selain kalibrasi Standar
Dalam kalibrasi Selain standar , kuantitas tambahan yang dikenal analit ditambahkan
langsung ke sampel , setelah analisis awal . Selain standar , sampel
dibagi menjadi beberapa bagian yang sama , kemudian menambahkan peningkatan tingkat standar.
Dengan kata lain ,
kurva kalibrasi dipersiapkan dengan sampel demikian , semua titik kurva memiliki
komposisi yang sama , dengan cara ini efek matriks dieliminasi . Jenis kalibrasi tidak
sering digunakan dalam kromatografi gas headspace statis.
2.4.4 ekstraksi headspace Beberapa
Beberapa headspace ekstraksi ( MHE ) menentukan daerah puncak total untuk suatu analit dalam
ekstraksi headspace lengkap, sehingga analis dapat menghitung jumlah analit dalam
sampel .
Keuntungan utama dari MHE adalah bahwa efek matriks dieliminasi karena menentukan
jumlah analit dalam sampel , hal ini dicapai dengan analisis berturut-turut pada yang sama
sampel , dalam botol yang sama , dalam analisis masing-masing , jumlah analit dalam headspace akan
penurunan sampai semua analit benar-benar diekstraksi .
Saat ini , tidak perlu untuk benar-benar mengekstrak analit , biasanya , hanya tiga atau empat
analisis dilakukan , dan kemudian analisis dengan regresi linier dari data yang diperoleh , untuk
matematis menentukan jumlah analit dalam sampel ( Slack , et al . , 2003) .
3 . Aplikasi dalam toksikologi forensik
Pada bagian berikutnya , aplikasi rata-rata kromatografi gas headspace statis akan
dijelaskan , dengan penekanan dalam metode yang bisa dilakukan tanpa ekstensif
modifikasi peralatan yang biasa hadir di laboratorium toksikologi forensik , di
Bagaimanapun , pertimbangan analitis akan dibahas , dari pengambilan sampel , bahan dan reaktan
dibutuhkan , analisis, untuk interpretasi hasil , validasi metode dan pentingnya ini
tes di media hukum , akan ditinjau .
3.1 Etanol
Penentuan etanol merupakan salah satu analisis yang paling penting dalam toksikologi forensik ,
baik dalam sampel dari mayat , atau driver dicurigai mengemudi di bawah pengaruh ; dalam
kasus , tepat dan dapat diandalkan penentuan etanol diperlukan . Teknik pilihan untuk
analisis etanol dalam sampel biologis adalah kromatografi gas dengan ionisasi nyala
detektor ( FID ) , menggunakan teknik injeksi langsung atau ekstraksi headspace ( Kugelberg &
Jones, 2007) . Kromatografi gas memungkinkan kedua analisis kualitatif dengan waktu retensi , dan
analisis kuantitatif dengan menggunakan area di bawah kurva puncak kromatografi , yang
memberikan keuntungan lebih teknik lama ( Seto , 1994) .
Saat ini , teknik ekstraksi headspace lebih disukai karena minim
kontaminasi diproduksi dengan injector dan kolom kromatografi gas ; ini
teknik untuk penentuan etanol telah disempurnakan dari waktu ke waktu , sejauh bahwa itu adalah
sekarang mungkin untuk melakukan tes ini dengan cepat dan akurat ( Kugelberg & Jones , 2007;
Musshoff , 2002) .
Untuk menerapkan kromatografi gas headspace statis untuk penentuan etanol , maka perlu
menghilangkan atau meminimalkan efek matriks , untuk melakukannya , beberapa faktor harus
dioptimalkan ,
di antaranya yang paling penting adalah kalibrasi peralatan . Dalam kasus yang tepat
kromatografi gas , kalibrasi standar internal direkomendasikan : dalam jenis
kalibrasi , suatu zat ( standar internal) dalam konsentrasi yang sama akan ditambahkan ke semua
sampel dan semua titik dari kurva kalibrasi , standar internal adalah substansi
kimia mirip dengan zat yang akan dianalisis tapi itu tidak ada dalam sampel , sehingga
bahwa, dalam segala kromatogram zat ini harus diidentifikasi dengan intensitas yang sama , setiap
perubahan signifikan dalam sinyal ini sehingga akan menunjukkan kesalahan dalam proses, dan
karena fakta
bahwa semua sinyal yang diperoleh dinormalisasi sesuai dengan standar internal sinyal , ini
kesalahan dapat dikoreksi, dalam kasus tertentu penentuan etanol , zat-zat tersebut
sebagai n - propanol , t - butanol , i- propanol , i- butanol , dll telah digunakan sebagai standar
internal . itu
disarankan untuk menggunakan alkohol tersier karena dalam keadaan tertentu jumlah kecil
n - propanol yang dihasilkan selama pembusukan ( Kugelberg & Jones , 2007; Musshoff , 2002 ;
Seto , 1994) . Penentuan etanol dalam Pelayanan Medis Forensik Mexico City adalah
dilakukan dengan kromatografi gas headspace statis dengan isobutanol sebagai standar internal yang
( tabel 2 ) dengan hasil yang baik ( gambar 2 ) .
Faktor lain untuk dipertimbangkan adalah temperatur di mana pertukaran antara cairan dan
fase gas akan dilakukan dan waktu yang dibutuhkan , dalam hal ini seseorang dapat memilih
antara mendukung sensitivitas metode ( menggunakan suhu tinggi ) terhadap perusahaan
1 I.S. standar internal
Tabel 2 . Kromatografi gas atas tata cara penetapan etanol .
reproduksibilitas , atau sebaliknya , yaitu, untuk mendukung reproduksibilitas dengan menerapkan
suhu rendah , bahkan pada suhu kamar . Penurunan reproduksibilitas
Metode ini berkaitan dengan reaksi oksidasi yang diderita oleh etanol dalam darah pada suhu di atas
40 C. Untuk menghindari fenomena tersebut , dianjurkan untuk menambahkan natrium dithionite ke
larutan atau menerapkan baku internal suhu headspace rendah ( Christmore , et al , 1984 . ;
Musshoff , 2002; Seto , 1994) .
Faktor lain yang dapat menurunkan kemampuan reproduksi dari metode ini adalah perbedaan
antara jumlah protein larut dan ion hadir dalam spesimen yang berbeda dari darah , seperti
itu mengubah partisi darah - udara alkohol , misalnya , etanol dan berbagai volatil
zat yang tidak akan menguap sama dalam sampel darah yang sangat diencerkan , datang
dari seseorang yang menderita pendarahan , daripada dalam sampel darah secara teratur . Untuk
mengatasi itu
Masalahnya , dianjurkan untuk mengencerkan sampel (biasanya dengan solusi internal
standar ) dalam hubungan minimal 1 sampai 5, tetapi sebaiknya 1 sampai 10 ( Kugelberg & Jones ,
2007;
Watts & McDonald , 1987 ) . Akhirnya , jika perlu untuk meningkatkan sensitivitas analisis,
bisa dilakukan dengan menambahkan garam seperti natrium klorida , natrium nitrit , dll ( Christmore ,
et al . ,
1984 ) , atau dengan teknik cryofocusing ( Watanabe - Suzuki , et al . , 1999 ) .
Ada beberapa kolom untuk pemisahan alkohol yang tersedia di pasar , yang dapat digunakan
untuk pemisahan kromatografi , tetapi jika perlu untuk menentukan volatil non-polar
zat , disarankan untuk memilih kolom yang memungkinkan memisahkan semua analit dari
bunga dalam waktu yang wajar , analisis selanjutnya dalam dua atau tiga sistem kromatografi
dapat dilakukan untuk mengkonfirmasi hasil yang diperoleh , masing-masing dengan retensi yang
berbeda
kali untuk etanol dan standar internal, dalam beberapa kasus , bahkan dimungkinkan untuk melakukan
uji konfirmasi dengan standar internal yang berbeda ( Brown & Long , 1988; Jones &
Schuberth , 1989) , akhirnya , FID merupakan detektor kromatografi lebih umum digunakan untuk ini
jenis analisis . Kondisi kromatografi yang paling umum digunakan untuk analisis
etanol dalam sampel biologis diringkas dalam tabel 2 .
Ketepatan dan kemampuan untuk memproduksi analisis yang dilakukan sedemikian rupa tinggi ,
sehingga
dalam koefisien antar - laboratorium variasi ( CV ) dari 3 % sampai 5 % , dan intra - laboratorium CV
kurang
dari 1% , baik dengan sensitivitas yang memadai ( LOD sekitar 1 mg / dl ) dan tinggi spesifisitas
( Jones &
Schuberth , 1989; Jones , et al , 1992; . Penton , 1985) .
3.2 congener
Minuman beralkohol mengandung jumlah jejak berbagai macam zat kimia, yang
dikenal secara kolektif sebagai congeners . Profil congener dari minuman tertentu tergantung pada
bahan baku yang digunakan dalam proses fermentasi , seperti sumber karbohidrat ,
apakah berasal dari buah-buahan, jus anggur , anggur tumbuk , gandum malt atau barley ( McAnalley ,
2004) . Lainnya congener mungkin diperkenalkan atau dihapus selama proses penyulingan ,
penyimpanan penuaan dan akhir dari minuman dalam tong kayu khusus , semua congener ini
membantu
menanamkan bau khusus dan rasa produk akhir ( Iffland & Jones , 2003) .
Analisis kualitatif dan kuantitatif congeners telah menemukan beberapa aplikasi dalam
toksikologi forensik , kehadiran zat tersebut dalam konsentrasi tinggi yang tidak normal di
darah bisa menyarankan maksud kriminal disengaja mungkin dengan penambahan pelarut ini untuk
minuman beralkohol konvensional atau proses penyulingan gagal. Jika tidak , orang tersebut
mungkin telah dikonsumsi sengaja didenaturasi alkohol, yang tidak jarang pada pecandu alkohol
( Jones , et al . , 1989) . Dalam kasus ini analisis bisa dilakukan dengan analisis
kondisi yang serupa dengan yang umum digunakan dalam analisis etanol dalam darah .
Aplikasi lain dari minuman beralkohol congener adalah sebagai penanda alkoholisme ( Musshof ,
2002 ) , zat volatil yang paling terkait dengan penyalahgunaan minuman beralkohol
metanol ( Brinkmann , et al , 2000; . Roine , et al , 1989; . . Suarez , et al , 2009 ) dan jumlah
aseton dan isopropanol ( Iffland , et al . , 1988) . Metabolisme metanol melalui alkohol hati
dehidrogenase ( ADH ) yang kompetitif dihambat oleh kadar etanol melebihi 20 mg / dl .
Hasil minum Akibatnya, berlebihan dan berkepanjangan di tingkat metanol darah tinggi , sehingga
metanol dapat dideteksi dalam darah , napas dan urin untuk lama setelah etanol telah kembali ke nya
konsentrasi endogen ( Iffland & Jones , 2003; Majchrowicz & Mendelson , 1971;
Musshof , 2002) . Atas dasar temuan ini tingkat metanol melebihi 1 mg / dl telah
disarankan sebagai indikator alkoholisme , sedangkan 0,1 mg / dl dapat dianggap sebagai fisiologis
tingkat . Di sisi lain , bergabung dengan konsentrasi aseton dan isopropanol lebih tinggi dari 0,9
mg / dl adalah indikasi dari minum berat , tingkat normal isopropanol kurang dari 0,01 mg / dl
dan 0,1-0,3 mg / dl untuk aseton ( Iffland , et al , 1988; . Iffland & Jones , 2003 ), ini adalah hasil dari
formasi timbal balik mereka melalui sistem deshydrogenase alkohol .
Namun , kekhususan isopropanol dan aseton sebagai penanda alkoholisme rendah dibandingkan
untuk metanol karena kedua zat dapat dibentuk dalam beberapa gangguan metabolisme atau setelah
olahraga berat ( Iffland & Jones , 2003; Musshof , 2002) . Akhirnya , telah mengemukakan bahwa
zat ini dapat berhubungan dengan keparahan mabuk ( Bendtsen , et al , 1998; . Calder ,
1997; Pronko , et al , 1997 ) . .
Sensitivitas kromatografi gas headspace konvensional cukup untuk darah
alkohol penentuan ke 5 mg / dl , tapi untuk mendeteksi congeners sebagai alkoholisme
spidol LOD harus ditingkatkan untuk mencapai setidaknya tingkat fisiologis ini
Zat beberapa strategi dapat digunakan untuk mencapai ini, seperti menambahkan garam ke
meningkatkan penguapan dari congener ( Bendtsen , et al , 1998; . . Suarez , et al , 2009)
dan teknik cryofocusing .
Aplikasi forensik lain yang menarik dari analisis congener adalah untuk mengevaluasi klaim
minum setelah mengemudi , ini semacam pertahanan sering muncul ketika mengemudi dalam keadaan
mabuk
tersangka tidak ditangkap segera setelah insiden kendaraan , terutama setelah memukul dan
menjalankan insiden , dalam situasi ini , profil congener dapat digunakan untuk mengidentifikasi
konsumsi
dari jenis tertentu minuman beralkohol dari sopir ditangkap , membandingkan
hadir profil dalam darah dan urin pengemudi dengan diketahui profil congener dari
minuman beralkohol diduga dikonsumsi setelah mengemudi ( Iffland & Jones , 2003) .
Dasar ilmiah analisis forensik congener tergantung pada fakta bahwa minuman yang mengandung
jumlah yang berbeda dari berbagai congener menghasilkan berbagai molekul alkohol rendah dalam
darah
dan urin . Akibatnya, analisis kualitatif dan kuantitatif congeners dalam darah dan
urin dapat memberikan informasi yang berguna tentang jenis minuman beralkohol yang dikonsumsi
dan juga
waktu asupan relatif terhadap waktu pengambilan sampel darah ( Iffland & Jones , 2003) .
The congener utama kepentingan forensik metanol , n - propanol , isobutanol , 2 - butanol ,
dan metil etil keton metabolit dan n - butanol , sedangkan isopropanol dan aseton yang
zat endogen selalu terdeteksi dalam darah dan urin selama analisis congener oleh
kromatografi gas headspace . Namun, zat ini tidak bahan beralkohol
minuman ( Iffland & Jones , 2003) .
Menafsirkan hasil analisis congener perlu mengetahui profil dari congener
minuman yang dikonsumsi sebelum dan setelah mengemudi serta informasi tentang disposisi dan
nasib zat ini dalam tubuh dan tingkat metabolisme setiap interaksi dengan etanol .
Analisis congener adalah modifikasi dari kromatografi gas headspace konvensional
analisis untuk konsentrasi etanol darah pengukuran : Namun , sensitivitas metode
harus ditingkatkan untuk memungkinkan pengukuran konsentrasi yang lebih rendah ( Iffland & Jones ,
2003)
( Tabel 3 ) .
Konsentrasi Darah congener ( mg / dl )
metanol 0,05-5
n - propanol 0,005-0,3
Isobutanol , n - butanol , 2 - butanol dan
metil etil keton
0,002-0,2
Tabel 3 . Konsentrasi congener dalam darah .
Selain kondisi analisis kromatografi gas , batas deteksi tergantung pada
yang congener tertentu , berat molekul , jumlah matriks organik dalam biologi
material dan tekanan uap air dalam sampel .
Analisis congener perlu ditingkatkan sensibilitas , biasanya dengan penambahan garam ,
biasanya natrium sulfat anhidrat , berbagai cara sampel pretreatment digunakan seperti
ultrasonik disintegrasi ultrafiltrasi sebelumnya, suhu rendah distilasi vakum ,
ultrasentrifugasi , beberapa ekstraksi headspace atau microdestillation . headspace gas
kromatografi dilakukan dengan standar kalibrasi internal biasanya dengan t - butanol
sebagai standar internal dan jika perlu dengan membekukan perangkap nitrogen cair ( cryofocusing )
ke
berkonsentrasi sampel , LOD biasanya dicapai adalah sekitar 0,01 mg / dl untuk metanol dan sekitar
0,001-0,002 mg / dl untuk n - propanol atau isobutanol , Kedua FID dan MSD telah digunakan untuk
deteksi kromatografi gas . Sebuah contoh dari headspace gas kromatografi adalah kondisi
ditampilkan ( Iffland & Jones , 2003 ) ( tabel 4 ) .
aditif 1
suhu
headspace
(C)
waktu
headspace
( Min )
injeksi
headspace
kolom
suhu
oven
(C)
t - butanol ( I.S. ) ,
anhidrat
natrium sulfat
70 12 Automatic
Carbowax 20M
pada Carbopack B ,
2mX 2mm I.D.
60-100
Tabel 4 . Kondisi kromatografi Headpace untuk analisis congener .
Akhirnya , keberhasilan penerapan analisis congener di kerja kasus memerlukan cukup
pengalaman tidak hanya mengenai analisis laboratorium tetapi juga eksperimen minum terkontrol .
Studi semacam ini memberikan informasi yang dibutuhkan tentang farmakokinetik spesifik
congener , interaksi mereka dengan metabolisme etanol dan urin / darah hubungan .
Akibatnya , banyak penelitian dasar yang diperlukan sebelum memulai dalam kerja kasus yang
sebenarnya , ini
keahlian , pada saat ini tersedia di hanya beberapa lembaga kedokteran hukum
Jerman .
3.3 Inhalansia
Inhalansia adalah kelompok beragam zat volatil yang dapat terhirup sengaja atau
sengaja . Inhalansia dapat padatan dan cairan serta gas . Fitur umum mereka adalah
volatilitas , properti menjadi atau mampu dikonversi menjadi bentuk , rentan terhadap
inhalasi . Senyawa yang memiliki properti ini mencakup hidrokarbon alifatik ( butana ,
heksana , propana , dll ) ; hidrokarbon aromatik ( benzena , toluena , dll ) ; hidrokarbon campuran
( bensin , cairan ringan , dll ) ; hidrokarbon terhalogenasi ( kloroform , diklorometana , dll ) ;
chlorofluorcarbons ( Freon 11 , Freon 12 , dll ) dan oksigen mengandung senyawa ( aseton ,
nitrous oxide, dll ) . Gas anestesi akan dipelajari secara rinci pada bagian berikutnya
( Broussard , 2003) .
Inhalansia hadir dalam banyak produk komersial ( pelarut , lem , cairan koreksi mesin tik ,
bensin , cairan ringan , pendingin , propelan untuk aerosol, dll ) , akibatnya , inhalan yang
mudah tersedia dan murah , keadaan ini , telah memberikan kontribusi untuk penggunaannya sebagai
penyalahgunaan obat ,
di atas semua , pada remaja . Penggunaannya telah meningkat dalam beberapa tahun terakhir ( Hansen
& Rose , 1995) , meskipun
undang-undang yang membatasi aksesibilitas dan memanfaatkan mereka dengan remaja ilegal . Di
seluruh dunia ,
inhalansia adalah salah satu kelas yang paling berbahaya dari zat disalahgunakan dan salah satu yang
bertanggung jawab lebih banyak kematian setiap tahunnya , bahwa obat lain penyalahgunaan
( Broussard , 2003) .
Sampel terbaik untuk deteksi inhalansia adalah darah, tetapi urin dapat digunakan untuk mendeteksi
metabolit ,
Koleksi yang tepat melibatkan penggunaan tabung kaca dengan headspace minimal tersisa setelah
koleksi . Senyawa organik volatil menurut definisi sangat evaporasi, dan analit
dapat dengan mudah hilang sedangkan sampel atau standar sedang dimanipulasi atau disimpan , di sisi
lain
tangan, karena , banyak dari zat ini biasanya ditemukan di laboratorium , itu masuk akal
kontaminasi yang mungkin terjadi selama pengumpulan sampel atau analisis ( Ashley , et al . , 1996) .
Spesimen harus disimpan antara -5 sampai 4 C , dianjurkan untuk menambahkan sodium fluoride
sebagai
konservatif , dalam keadaan ini sampel dapat disimpan sampai empat puluh hari ( Ashley ,
et al . , 1996) . Karena toleransi bahwa zat ini diproduksi, tidak ada
korelasi antara inhalansia konsentrasi darah dan gambaran klinis toksisitas
untuk setiap senyawa ini . Tabel 5 daftar konsentrasi inhalansia ditemukan , biasanya , di
kasus postmortem ( Baselt , 2004) .
inhalansia
Konsentrasi Fatal dalam darah
dalam mg / dl ( Baselt , 2004)
Konsentrasi basal dalam darah
di ng / dl ( Ashley , et al . 1996 ) .
Benzene Rata-rata , 3,6 13,0
Toluene Rata-rata , 2,2 52,0
Propana 1.1 dan 110 ---------- -----------Chloroform Rata-rata , 6.4 ---------------------Kresol Rata-rata , 13,3 ---------------------Diklorometana Rata-rata , 29,5 ---------------------Dietil eter Rentang 9-375 ---------- -----------Etil klorida 42,3 ---------------------Nitrous oksida Rata-rata , 10,0 ---------------------Rentang Tetrachloroethylene 0,45-11,5 19,0
Rata-rata trikloroetana , 12,6 34,0
Tabel 5 . Konsentrasi beracun dan latar belakang dari beberapa inhalansia dalam darah
Tabel 6 . Kromatografi gas atas tata cara penetapan inhalansia .

Analisis inhalansia telah dilakukan untuk diagnosis pelecehan pelarut dan
pemantauan paparan industri; Dalam kasus pertama , penentuan berubah
inhalansia dalam darah lebih disukai , namun dalam beberapa kasus , ( inhalasi trichloroethylene )
metabolit
( trichloroethanol dan asam trikloroasetat ) dapat dicari dalam urin , karena biologi
pemantauan , penentuan inhalansia dalam darah lebih disukai juga, tapi tekad
metabolit dalam urin umumnya dilakukan . Teknik pilihan untuk melakukan inhalansia
analisis kromatografi gas headpace dengan FID , detektor penangkapan elektron ( ECD ) dan
MSD . FID menyediakan deteksi rentang yang baik linear , sementara MSD identifikasi tegas .
ECD hanya direkomendasikan dalam analisis jejak untuk hidrokarbon terhalogenasi . keduanya
dikemas
kolom seperti carbowax dan kolom kapiler seperti DB - 1 telah digunakan untuk memisahkan
dan mengukur volatil . Biasanya , metode kromatografi gas headspace untuk menganalisis
etanol dalam darah dapat dimodifikasi untuk penyaringan awal sebelum lebih khusus dan
Metode yang luas dilakukan ( Sharp & Dautbegovic , 2001; Sharp, 2001) . prosedur ini
memiliki khas LOD sebesar 0,01 mg / dl dan rentang linier yang khas untuk 5 sampai 10 mg / dl
( Broussard ,
2003) . Kondisi analitis dari beberapa prosedur yang diberikan dalam tabel 6 .
3,4 Anestesi
Dalam kelompok inhalansia , inhalan fluorinated menonjol , yaitu karena mereka dapat
berpotensi berbahaya, karena dosis mematikan mereka hanya dua atau empat kali dosis terapi mereka .
Hati-hati dg anestesi selama prosedur bedah telah berhasil mengurangi
morbiditas dan kematian akibat overdosis , dan biasanya kasus kematian bedah
prosedur adalah beberapa alasan lainnya . Namun, analisis zat ini di forensik
lingkungan dibenarkan pada setiap kasus kematian selama operasi , dan karena menggunakan mereka
sebagai
penyalahgunaan obat , ketersediaan anestesi fluorinated terbatas pada petugas rumah sakit atau
mereka yang terlibat dalam manufaktur dan distribusi . Pada klinik , penentuan
anestesi terfluorinasi digunakan untuk memantau pasien di bawah anestesi dan medis
personil, namun dalam keadaan ini konsentrasi terdeteksi berada di bawah mereka yang
menyebabkan keracunan akut ( Pihlainen & Ojanpera , 1998) .
Saat ini, anestesi terfluorinasi paling banyak digunakan adalah halotan , enfluran , isofluran ,
sevoflurane dan desflurane , isoflurane berdiri sebagai yang paling populer pada masa kini .
Zat ini dimetabolisme di hati dan pada tingkat lebih rendah di ginjal dan paru-paru .
Metabolisme lebih tinggi dengan halotan ( 20-46 % ) , diikuti oleh enflurane ( 2,4-8,5 % ) , sevofluran
( 2,5-3,3 % ) , isoflurane ( 0,2 % ) dan desfluran ( 0,02 % ) . Jadi penentuan mereka dimaksudkan
untuk
menemukan obat-obatan, bukan metabolit . Konsentrasi berikut dalam darah telah ditemukan di
kematian yang berhubungan dengan zat-zat tersebut ( Tabel 7 ) .
obat bius
konsentrasi Terdeteksi
( mg / L )
halotan 45-650
enfluran 130-710
sevofluran 26
isoflurane 9,9-48
Tabel 7 . Konsentrasi darah dalam kematian yang berhubungan dengan anestesi fluorinated ( Baselt ,
2004)
Kromatografi gas adalah teknik pilihan untuk analisis zat ini , kolom
seleksi cacat oleh kemungkinan menganalisis gas lain yang digunakan dalam anestesi dengan
itu , di mana kolom halnya dengan adsorben padat yang akan digunakan , jika tidak, kolom kapiler
dengan fase silikon dapat digunakan , detektor seperti FID dilakukan dengan baik untuk senyawa ini ,
tetapi jika perlu untuk mengurangi LOD metode , beberapa lainnya , detektor lebih sensitif
dapat digunakan , seperti ECD ( Pihlainen & Ojanpera , 1998; Uyanik , 1997) , dalam rangka untuk
mendapatkan
identifikasi struktural , detektor MSD atau inframerah ( IRD ) telah digunakan , dan yang paling
Teknik persiapan umum digunakan adalah injeksi headspace statis. ( Pihlainen & Ojanpera ,
1998 ) , karena fakta bahwa senyawa ini mudah ditransfer ke gas headspace ,
menurut darah / gas konstanta partisi . Hubungan fase gas / fasa air
biasanya digunakan dalam botol adalah 5-20 , dan volume sampel biasanya 10 % dari gas
fase , kalibrasi standar internal yang telah digunakan , dengan berbagai zat dan deuterated
standar . Sensitivitas metode ini juga dapat ditingkatkan dengan meningkatkan ekstraksi
suhu, dengan mengurangi fase gas atau melalui teknik penggaraman ( tabel 8 ) . sekarang
penting untuk menghindari kerugian dengan penguapan dan kontaminasi dari sampel seluruh
prosedur analitis secara keseluruhan. Dalam analisis zat ini , kromatografi yang
kondisi yang digunakan sangat mirip dengan yang digunakan untuk penentuan alkohol dan
inhalansia , karena itu, adalah mungkin untuk merancang sebuah metode yang secara bersamaan dapat
menganalisa
zat ( Kovatsi , et al , 2011. ) , laboratorium kami mengidentifikasi adanya sevofluran dengan
metode yang digunakan untuk menentukan alkohol , tanpa mengubah kondisi kromatografi
apapun .
aditif 1
Tempe rature
kepala ruang
(C)
waktu
kepala ruang
( Min )
injeksi
headspace
kolom
Tempe rature
oven
(C)
pembawa
gas
( ml / menit )
deteksi
Angka
Merit 2
referen ces
enfluran ,
( I.S. )
75 30 otomatis
Carbowax
1500 tentang
carbopack
C , 2m
100 ---------- - FID --------Kulhman ,
et al . 1993
CH 2 Cl 2
( I.S. )
Tween
55 15 otomatis
DB1 30m
X0.53mm
I.D.
60
helium ,
15
MSD --------Saito ,
et al . 1995
enfluran ,
( I.S. )
41 120 otomatis
Poraplot Q
27m
X0.25mm
I.D.
40-140
helium ,
1.0
MSD
RSD 3 :
< 8,06% ,
RSD 4 :
< 6,19%
Accorsi ,
et al . 2003
n - propanol ,
( I.S. )
25 60 Pedoman
Carbowax
1500 tentang
carbopack
C , 2m . X
2mm I.D.
100
helium ,
20
FID
CV 3 :
13,7 %
CV 4 :
3,3 %
liang ,
et al . 2004
aceto -
nitrile ,
( I.S. ) , NaCl
60 30 otomatis
Supelcowa
x 10 , 30mX
0.25mm
I.D.
42-100
helium ,
1.2
FID
LOD : 1.7
mg / dl ,
RSD 3 : 1.3 14,6 %
Kovatsi ,
et al . 2011
1 I.S. Internal standar, 2 RSD standar deviasi relatif , 3 interday ; 4 Intraday
Tabel 8 . Headspace prosedur kromatografi gas untuk anestesi inhalasi fluorinated
penentuan
3.5 Karbon monoksida
Gas karbon monoksida tidak berwarna , tidak berbau , hambar , dan diproduksi oleh lengkap
pembakaran bahan organik . Karbon monoksida yang terlibat setiap tahun dalam signifikan
jumlah kematian di seluruh dunia , baik itu disengaja atau sukarela, sumber utama
paparan karbon monoksida adalah knalpot mesin pembakaran internal , rokok
asap , sistem pemanas dalam kondisi miskin dan kebakaran , ada juga dapat endogen
produksi yang berkaitan dengan metabolisme dihalomethane dan heme katabolisme ( Kunsman &
Levine ,
2003) . Karbon monoksida diberikannya efek toksik karena memiliki sekitar 220 kali lebih besar
afinitas hemoglobin daripada oksigen , oleh karena itu, mencegah pengangkutan oksigen ke
jaringan , dan pada saat yang sama mengubah struktur alosterik hemoglobin , meningkatkan nya
afinitas dengan oksigen , dengan cara ini mencegah pertukaran oksigen dalam jaringan ( Walch et
al . , 2010) .
Senyawa dibentuk oleh karbon monoksida dan bentuk tereduksi hemoglobin ,
carboxyhemoglobin , karena itu adalah ukuran dari keracunan karbon monoksida , dan yang
Penentuan dilakukan di semua laboratorium toksikologi forensik di dunia pada rutinitas
dasar . Sementara tingkat kejenuhan carboxyhemoglobin lebih besar dari 50 % adalah indikasi dari
karbon
monoksida keracunan sebagai penyebab kematian , tingkat antara 10 % dan 50 % adalah indikasi dari
paparan ini beracun dan dapat menyebabkan berbagai gejala .
Berbagai metode telah dikembangkan untuk menentukan persentase carboxyhemoglobin
saturasi dalam darah . Metode ini didasarkan pada kolorimetri , spektrofotometri inframerah ,
spektrofotometri ultraviolet dan kromatografi gas ( Boumba & Vougiouklakis ,
2005) . Saat ini , metode yang paling banyak digunakan adalah yang berdasarkan ultraviolet-tampak
spektrofotometri , menggunakan spektrofotometer konvensional , biasanya membuat dua
pembacaan pada dua panjang gelombang yang berbeda ( Maehly , 1962) atau dengan spektrofotometer
khusus :
oximeters ( Mahoney , et al , 1993 . ) ; metode ini cepat dan sederhana , namun, mereka
tidak dapat diandalkan dalam keadaan tertentu , seperti dalam sampel putrefied , dimana pembusukan
yang
Proses menghasilkan zat yang menghasilkan interferensi spektral atau spontan
pembentukan methemoglobin dan sulfhemoglobin , cara ini mencegah penentuan

carboxyhemoglobin , atau dalam sampel darah dari api kematian , di mana methemoglobin adalah
spontan diproduksi ( Lewis , et al , 2004; . Seto , 1994; . Walch , et al , 1984) . Dalam hal ini ,
kromatografi gas headspace statis tidak terpengaruh oleh keadaan ini , karena hal ini
Teknik memisahkan karbon monoksida dari darah , dan dengan demikian dianggap sangat
spesifik dan sensitif teknik , yang membuatnya teknik referensial untuk menentukan
karbon monoksida ( Boumba & Vougiouklakis , 2005) , namun , gas headspace statis
kromatografi belum biasanya digunakan untuk jenis analisis karena dibutuhkan lebih lama
Selain dibentuk teknik dan membutuhkan tenaga terampil ( Mahoney , et al . , 1993) .
Meskipun demikian , yang merugikan terakhir tidak berlaku untuk lingkungan forensik , di mana hal
ini
Teknik secara luas dikenal .
Karbon monoksida penentuan dengan kromatografi gas headspace statis melibatkan pencampuran
darah dengan zat yang lisis eritrosit dan melepaskan karbon monoksida
darah , baik dengan menambahkan asam ( denatures hemoglobin ) atau kalium ferrocyanide
( mengoksidasi
hemoglobin untuk methemoglobin ) , dalam beberapa kasus , agen mengurangi juga dapat
ditambahkan untuk memastikan
yang methahemoglobin yang mungkin hadir dalam sampel berkurang dengan hemoglobin , yang
penting dalam sampel dari kecelakaan penerbangan ( Lewis , et al , 2004; . Walch , et al , 1984 . ) . itu
gas dilepaskan ke ruang atas yang dianalisa dengan kromatografi gas menggunakan berbeda
detektor . Deteksi telah dilakukan menggunakan FID , setelah pengurangan katalitik
karbon monoksida menjadi metana ( Cardeal , et al , 1993; . Czogala & Goniewicz , 2005; . Walch et
al ,
2010) , detektor konduktif termal ( TCD ) ( Lewis , et al , 2004; . Van Dam & Daenens , 1994) ,
oleh pelepasan uap merkuri yang dihasilkan dari kombinasi karbon monoksida dengan
merkuri oksida ( Vreman , et al . , 1984 ) dan MSD ( Oritani et al . , 2000 ) . Pemisahan ini
biasanya dilakukan melalui kolom saringan molekul .
Dalam rangka untuk menentukan persentase saturasi karboksihemoglobin dalam darah , itu adalah
diperlukan untuk menghitung jumlah total hemoglobin dan kurva kalibrasi harus
disiapkan , untuk melakukannya , perkiraan yang berbeda digunakan . Yang paling umum digunakan ,
bagian dari
sampel darah yang karbon monoksida dilewatkan sampai saturasi karboksihemoglobin
mencapai 100 % , poin lain dari kalibrasi yang diperoleh dengan pengenceran darah ini dalam
sampel darah dengan 0 % carboxyhemoglobin , melewati oksigen untuk itu ( Canfield , dkk . , 1998 ) .
karena
dengan kompleksitas dari prosedur yang disebutkan di atas , bentuk kalibrasi lainnya telah
diimplementasikan , menggunakan standar gas bersertifikat ( Czogala & Goniewicz , 2005) atau
pembebasan stoikiometri karbon monoksida dari reaksi antara asam format dan panas
asam sulfat ( Cardeal , et al . , 1993) . Batas deteksi diperoleh dengan teknik ini kurang
dari 0,1 % dari saturasi karboksihemoglobin dalam darah , yang jauh lebih rendah dari normal
tingkat yang dilaporkan ( Kunsman & Levine , 2003 ) dan kurang dari batas deteksi
teknik spektrofotometri , dilaporkan pada 1 % ( Boumba & Vougiouklakis , 2005) . tabel 9
menjelaskan secara rinci , kondisi kromatografi untuk penentuan karbon monoksida oleh
teknik ini .
Kesimpulannya, penentuan karbon monoksida dengan gas headspace statis
kromatografi adalah metode yang sangat spesifik , karena tidak dipengaruhi oleh kondisi sampel ;
selain itu, ia memiliki akurasi dan sensitivitas yang melampaui lain yang lebih konvensional
teknik . Namun, fakta bahwa itu adalah memakan waktu , mahal, membutuhkan yang berlebihan
penanganan sampel , dan , di atas hal lain , kebutuhan untuk mengukur jumlah hemoglobin dan
standar mempersiapkan ( Canfield , dkk . , 1998) , telah mencegah teknik ini dari yang digunakan
pada
secara rutin di sebagian besar laboratorium toksikologi forensik .
3.6 Sianida
Sianida merupakan ampuh , racun - tindakan cepat , yang efek dengan mereaksikan dengan besi
trivalen dari
oksidase sitokrom , menghambat sistem pernapasan , yang mengakibatkan penurunan cepat
fungsi vital . Konsentrasi darah 2 sampai 3 ug / ml sudah dianggap tidak kompatibel
dengan kehidupan , sementara tingkat basal sianida dalam darah non perokok dari 16 ng / ml telah
terdeteksi ( Baselt , 2004) . Eksposur Sianida relatif umum, hal itu yang dikenal sebagai
dicerna dengan niat bunuh diri atau tujuan pembunuh , tetapi disengaja intoksikasi dalam kebakaran
juga telah dilaporkan , dimana pirolisis mengandung nitrogen bahan sintetis ,
seperti polyurethane dan poliakrilonitril menghasilkan hidrogen sianida , melebihi
Konsentrasi fana dalam beberapa kasus ( Seto , et al , 1993; . Moriya & Hashimoto , 2001) , sehingga
bahkan jika
penyebab paling umum kematian pada kebakaran luka bakar , luka dan karbon monoksida
intoksikasi , hidrogen sianida juga dapat terlibat. Konsentrasi di atas normal
tingkat telah terdeteksi pada perokok , tapi efek racun dari konsentrasi ini belum
sepenuhnya diklarifikasi , sumber paparan sianida adalah glikosida sianogen , hadir dalam
1 I.S. Standar internal; 2 T.A. Ambient temperatur , 3 interday ; 4 Intraday
Tabel 9 . Kromatografi gas atas prosedur untuk penentuan karbon monoksida .
almond untoasted , daun salam , biji apel , dll paparan Sianida juga hasil dari penggunaannya
sebagai fumigan , sebagai metabolit natrium nitroprusside dan dalam industri kimia , di mana
sianida telah menemukan aplikasi dalam metalurgi , minyak , industri fotografi dan plastik
( Kunsman & Levine , 2003) . Karena ini dan adanya tingkat sianida basal , itu
diperlukan untuk menghitung dengan metode kuantitatif untuk menentukan sianida dalam sampel
biologi .
Secara tradisional , penentuan ini dilakukan dengan teknik spektrofotometri , didahului
oleh distilasi atau microdiffusion pretreatment ( Seto , 1994) , teknik gas
kromatografi dengan headspace injeksi memberikan analisis lebih cepat , rentan untuk menjadi
otomatis , dengan sensitivitas yang tinggi , pemulihan yang baik ( sekitar 90 % ) dan deteksi spesifik
yang
Prosedur melibatkan pelepasan sianida dari sampel biologis dalam bentuk
hidrogen sianida dengan penambahan asam , biasanya ke dalam botol yang sebelumnya disegel ,
melalui septum , asam yang berbeda telah digunakan , seperti asam fosfat , asam sulfat ,
asam nitrat atau asam asetat , meskipun yang paling digunakan adalah asam fosfat , karena tidak
membentuk apapun
pembekuan darah , dalam campuran reaksi di dalam botol , asetonitril biasanya ditambahkan bila
intern
kalibrasi standar yang digunakan ( Calafat & Stanfill , 2002; Moriya & Hashimoto , 2001) , dan
askorbat atau asam asetat , dengan tujuan menghindari produksi sianida dalam darah dengan
aksi metabolit , tiosianat , yang dapat mengakibatkan masalah dengan sampel dengan
perokok atau dengan intoksikasi kronik ( Seto , 1996) ; kali pemanasan biasanya lebih panjang dari
setengah
satu jam dan suhu di bawah 63 C yang dianjurkan untuk mencegah pembentukan
sianida dari darah . Mengenai deteksi dengan kromatografi gas , karena kecil
jumlah sianida untuk menentukan dan koefisien partisi yang relatif tinggi , maka perlu
menggunakan detektor yang lebih sensitif , yang berkaitan ini , dua strategi yang umumnya diikuti , di
yang pertama , sianida terdeteksi dalam kromatografi gas menggunakan nitrogen - fosfor
detektor ( NPD ) ( McAuley & Reiver , 1983; Moriya & Hashimoto , 2001; . Seto dkk , 1993) , atau
sianida dapat dideteksi sebagai sianogen klorida setelah derivatisasi dengan chloramin - T
menggunakan
suatu ECD ( Felby , 2009; . Odoul , et al , 1994) tapi MSD dengan isotop sebagai standar internal
memiliki
juga telah digunakan ( Dumas , et al . , 2005) . Akhirnya , penting untuk mempertimbangkan cepat
hilangnya sianida dari darah , yang dihitung sampai dengan 30 % pada hari , di
darah didinginkan pada suhu 4 C ( Calafat & Stanfill , 2002) , sehingga perlu untuk melakukan
analisis ini
sesegera mungkin untuk mendapatkan hasil yang berarti . Tabel 10 paling menggambarkan
parameter kromatografi penting .
3,7 badan Keton
Metabolit volatil endogen adalah normal dengan produk metabolit menengah.
Analisis metabolit ini penting dalam diagnosis kondisi penyakit tertentu. sebuah
contoh analisis kromatografi gas headspace diterapkan untuk metabolit ini adalah
penentuan badan keton ( Seto , 1994) . Badan keton yang hadir dalam biokimia
negara diubah dikenal sebagai diabetic ketoacidosis , berkaitan dengan penderita diabetes dan
ketoasidosis beralkohol ,
konsekuensi dari penyalahgunaan alkohol kronis . Studi ( Iten & Meier , 2000; Pounder , et al , 1998. ;
Thomsen , et al . , 1995) menunjukkan bahwa ketoasidosis alkohol bisa menjadi penyebab kematian di
pecandu alkohol , dalam kasus kematian mendadak dan tak terduga , di mana penentuan alkohol
negatif dan bahwa negara ketoasidosis beralkohol dapat didiagnosis dengan penentuan
badan keton dalam sampel darah postmortem . Badan keton ( aseton , asetoasetat dan hidroksibutirat ) dapat diukur secara terpisah dengan gas kromatografi headspace . aseton
ditentukan pada suhu ruang atas bawah 60 C untuk menghindari decarboxilation dari
1 I.S. Standar internal; 2 T.A. Ambient temperatur , 3 LOQ , batas kuantisasi , RSD standar Relatif
deviasi , 4 interday ; 5 Intraday
Tabel 10 . Kromatografi gas atas prosedur untuk penentuan sianida .
asetoasetat atau di hadapan kalium hidroksida ( Felby & Nielsen , 1994; Seto , 1994) ;
untuk penentuan asetoasetat , suhu headspace diatur pada 100 C untuk mempromosikan
acetoacetate dekarboksilasi ke tingkat aseton dan - hidroksibutirat ditentukan setelah
konversi oksidatif dalam aseton dengan kalium dikromat ( Seto , 1994) atau enzimatik
reduksi ke asetoasetat oleh hydrogenase - hidroksibutirat dan kemudian konversi termal
untuk aseton ( Felby & Nielsen , 1994) . Yang paling digunakan sampel untuk melakukan tes darah ini
, tetapi
ditemukan korelasi yang baik antara darah : cairan tulang belakang dan darah : viteous humor keton
konsentrasi tubuh , akibatnya , cairan tulang belakang dan vitreous humor dapat digunakan sebagai
spesimen alternatif dalam analisis ini ( Felby , et al . , 2007) .
3.8 Aplikasi lain
Akhirnya, ada analisis dalam ilmu forensik , di mana gas headspace statis
kromatografi dapat digunakan sebagai bagian dari analisis yang lebih kompleks , seperti analisis
puing-puing kebakaran
( Ren & Bertsch , 1999; Sandercock , 2008) , di mana analisis ruang statis menyediakan
informasi pelengkap yang disediakan oleh teknik headspace dinamis, untuk
penentuan amfetamin dan metamfetamin dengan penambahan kalium
karbonat untuk mengubah amina dari stimulan dalam unprotonated , bentuk volatile ( Seto ,
1994 ) , dan baru-baru , penelitian terhadap zat yang dihasilkan selama dekomposisi mayat
( Statheropoulos , et al , 2005; . . Swann , et al , 2010) , di mana berbagai jenis pemisahan
teknik yang digunakan untuk mengkarakterisasi senyawa yang dihasilkan dalam dekomposisi dan
menentukan bagaimana mereka diproduksi .
4 . kesimpulan
Kromatografi gas headspace statis adalah teknik matang dan dapat diandalkan , itu dianggap
teknik pilihan untuk analisis etanol dalam sampel biologis , dan karena itu hadir
di sebagian besar laboratorium forensik di seluruh dunia dengan personil yang memenuhi syarat untuk
mengoperasikannya , namun penerapan teknik ini tidak terbatas pada tes ini dan dapat
digunakan untuk analisis berbagai zat dengan sedikit modifikasi , menyediakan tepat
kalibrasi dan penanganan yang tepat dari efek matriks , parameter validasi yang sangat baik , bersama
dengan suntikan bersih. Jadi , dengan teknik ini , berbagai zat dapat dianalisis tanpa
kebutuhan metode tambahan , dan yang akan memungkinkan laboratorium forensik untuk memperluas
jumlah kasus yang mereka bisa mengurus , dengan investasi minimal.
Untuk mencapai itu , perlu untuk mengetahui dasar-dasar teknik ini, berbeda
kimia dan fenomena fisik yang terlibat , dan potensi kejadian dalam analisis
zat tertentu , dalam rangka mengembangkan metode dengan sensitivitas yang diperlukan , spesifisitas
dan reproduktifitas .
Dalam hal ini , metode khusus untuk analisis zat telah dikembangkan ,
seperti penentuan etanol , sianida atau karbon monoksida , tetapi metode lainnya dapat
juga harus dirancang , metode mampu menganalisis sejumlah besar zat yang mudah menguap ( Sharp,
2001) , atau sistem yang dirancang untuk situasi forensik tertentu, seperti analisis gas beracun
dihasilkan selama api ( Felby , 2009) , penentuan etanol dalam driver ( Jones &
Schubert , 1989) , diagnosis ketoasidosis beralkohol ( Felby & Nielsen , 1994) , dll Dalam beberapa
aplikasi nya , kromatografi gas headspace statis menghadapi persaingan dari SPME
( Furton , et al , 2000; . Salju , 2000) , metode yang lebih fleksibel yang sudah mulai menggantikan
metodologi tua dalam beberapa aplikasi . Namun demikian, penerimaan yang luas dari statis
Definisi sederhana
' Headspace ' adalah ruang gas di atas sampel dalam botol kromatografi . Contoh komponen volatil
berdifusi ke dalam fase gas, membentuk gas headspace . Oleh karena itu analisis ruang adalah analisis
komponen yang ada dalam gas itu.
kesesuaian
Kromatografi gas headspace paling cocok untuk analisis volatil sangat ringan dalam sampel yang
dapat efisien dibagi menjadi volume gas headspace dari sampel matriks cair atau padat . Volatil didih
lebih tinggi dan semi - volatil tidak terdeteksi dengan teknik ini karena partisi rendah dalam volume
headspace gas. Partisi ditutupi dengan lebih rinci nanti dalam artikel ini .
Analisa gas headspace juga cocok untuk otomatisasi untuk kontrol kualitas atau penyaringan sampel .
Hal ini dimungkinkan oleh instrumentasi modern, di mana sampel sangat direproduksi dapat dibuat
dengan cara yang efisien dan akurat .
Matriks sampel yang kompleks , yang mungkin sulit untuk menganalisa secara langsung atau tidak
akan membutuhkan ekstraksi sampel atau persiapan , adalah kandidat ideal untuk headspace karena
mereka dapat ditempatkan secara langsung dalam botol dengan sedikit atau tanpa persiapan . Ini
menghemat waktu dan uang .
aplikasi
Headspace GC digunakan untuk analisis organik volatil dan semi -volatile dalam bentuk padat , cair
dan gas sampel . Popularitas teknik ini telah berkembang selama beberapa tahun terakhir dan sekarang
telah memperoleh penerimaan di seluruh dunia untuk analisis alkohol dalam darah dan pelarut residu
dalam produk farmasi .
Aplikasi umum lainnya termasuk analisis industri monomer dalam polimer dan plastik , senyawa rasa
dalam minuman dan produk makanan , dan wewangian di parfum dan kosmetik .
Tinggi throughput Darah Alkohol Analisis Penentuan Menggunakan Headspace Gas Chromatography
Fri, 2012/02/10 - 14:44
Silvia GemmeMassimo Santoro
Dapatkan berita hari ini dan berita utama untuk forensik profesional - Daftar sekarang !
Akurasi dan presisi adalah parameter penting dalam konsentrasi alkohol darah ( BAC ) pengukuran ,
ahli toksikologi forensik menyediakan dengan keyakinan yang optimal dalam hasil analisis dan
memungkinkan mereka untuk sepenuhnya siap untuk menahan pemeriksaan silang yang sulit oleh
pengacara pembela . Ada lima sampel yang berbeda tubuh yang dapat diputar untuk menentukan BAC
seseorang : yaitu urin, air liur , folikel rambut , darah , dan napas . Saat ini , analisis napas dan
skrining darah yang paling sering digunakan metode pengukuran BAC dilaksanakan oleh lembaga
penegak hukum untuk mengumpulkan bukti .
Pengujian alkohol dalam darah adalah salah satu metode yang paling akurat untuk mengukur BAC
seseorang , memungkinkan ahli toksikologi forensik untuk menentukan jumlah alkohol yang ada di
dalam darah pada saat sampel darah diambil . Namun, pengujian alkohol dalam darah adalah salah
satu metode yang paling mengganggu dan dipakai terutama saat tersangka telah menolak tes napas
atau setelah kecelakaan serius .
Modern laboratorium toksikologi forensik membutuhkan produktivitas dan keandalan untuk
mengaktifkan terus menerus 24/7 operasi dan memungkinkan penentuan kuantitatif diandalkan
kandungan alkohol dalam darah . Selain itu, jenis pengujian diatur secara ketat , berpose tantangan
lebih lanjut untuk laboratorium toksikologi forensik yang memerlukan teknologi canggih untuk
mematuhi peraturan industri .
peraturan Outlook
Di AS seluruh 50 negara bagian dan District of Columbia memberlakukan peraturan , menurut yang
adalah kejahatan untuk drive dengan BAC pada atau di atas tingkat tertentu yang saat ini 0,08 g
alkohol per 100 ml darah. Keyakinan untuk alkohol gangguan mengemudi biasanya diikuti dengan
pembekuan izin, sementara lisensi juga dapat diambil sebelum keyakinan ketika sopir gagal atau
menolak untuk mengambil tes kimia. Ini disebut lisensi suspensi administratif dan diberlakukan di 41
negara bagian dan District of Columbia .
Selain itu, lebih dari setengah dari negara memerlukan mengemudi di bawah pengaruh ( DUI ) dan
mengemudi ketika mabuk ( DWI ) pelaku untuk menginstal interlock pengapian pada kendaraan
mereka ke mana mereka harus mengeluarkan napas sebelum diizinkan untuk mengemudi selama
suspensi lisensi. Di 15 negara dan empat kabupaten California , seperti pembatasan diterapkan untuk
semua pelaku , sementara yang lain 16 negara menerapkan pembatasan pada pelaku dengan BAC
tinggi (biasanya 0,15 % atau lebih tinggi ) dan untuk mengulang pelanggar . Akhirnya , enam negara
menerapkan pembatasan hanya untuk mengulang offenders.1
Setiap negara di Uni Eropa memiliki peraturan di tempat untuk membatasi jumlah alkohol
diperbolehkan dalam darah saat berkendara . Mengemudi di bawah pengaruh alkohol adalah kejahatan
dan dapat dihukum dengan larangan halus dan mengemudi untuk jumlah waktu tertentu . BAC rata
diizinkan di sebagian besar negara-negara Eropa , termasuk Spanyol , Italia , dan Irlandia , adalah 0,05
% , dengan beberapa negara seperti Inggris yang memungkinkan 0,08 % .
Berkenaan dengan tes alkohol dalam darah , peraturan yang berbeda diberlakukan di masing-masing
negara bagian AS . Di California , misalnya, Kode California Peraturan untuk Analisis Forensik dan
Alkohol Nafas Alkohol Analysis2 mengamanatkan bahwa setiap laboratorium melakukan analisis
forensik alkohol harus memiliki lisensi yang valid yang dikeluarkan sesuai dengan ketentuan tertentu
dan semua analisis harus dilakukan hanya oleh orang yang memenuhi spesifik kualifikasi . Sampel
darah harus dikumpulkan oleh venipuncture dari individu yang hidup sesegera mungkin setelah
dugaan adanya pelanggaran dan hanya oleh orang yang berwenang . Darah yang cukup harus
dikumpulkan untuk memungkinkan duplikat penentuan . Peraturan tersebut juga menetapkan standar
kinerja tertentu untuk metode yang digunakan untuk analisis alkohol forensik . Menurut standar ini ,
metode harus mampu menganalisis sampel referensi konsentrasi alkohol yang dikenal dalam akurasi
dan presisi batas plus atau minus 5 % dari nilai. Batas ini harus diterapkan pada konsentrasi alkohol
yang 0,10 gram per 100 mililiter atau lebih tinggi .
Pendekatan analitis
Analisis darah dan cairan tubuh lainnya untuk alkohol yang paling sering dilakukan dengan
menggunakan kromatografi gas headspace karena kesederhanaan dan jumlah sampel yang biasanya
beroperasi setiap hari . Kualitas hasil GC tergantung pada banyak faktor , termasuk stabilitas
kromatografi gas , kekasaran dari sistem injeksi , dan sensitivitas detektor . Dalam proses ini ,
persiapan sampel dan pengenalan memberikan dasar untuk pengulangan dan kehandalan yang penting
untuk generasi kualitas data . Ketahanan dan perawatan yang mudah juga penting untuk memastikan
operasi terus-menerus .
Sebuah percobaan dilakukan untuk menunjukkan kemampuan analitis unggul instrumen GC modern
yang digunakan dalam hubungannya dengan autosamplers canggih . Memimpin teknologi autosampler
, seperti yang digunakan dalam penelitian ini , sangat disarankan ketika berhadapan dengan matriks
kotor karena tidak menggunakan sampel loop , yang mungkin perlu dibersihkan , atau garis
pemindahan yang dapat membuat situs aktif untuk senyawa polar . Dalam aplikasi ini , sampel
disuntik dengan otomatis headspace autosampler menggunakan jarum suntik kedap gas dipanaskan .
Untuk menghilangkan carry-over , jarum suntik dipanaskan juga dibersihkan secara otomatis antara
suntikan dengan pembersihan nitrogen .
Untuk mencapai throughput maksimum , dan untuk tujuan konfirmasi , dua kolom bore sempit
digunakan untuk gas kromatografi analisis isotermal dari sampel headspace . Bahkan, setiap sampel
disuntikkan ke dalam GC perpecahan / pisah injektor , yang terhubung ke - kolom pra , dan limbah ini
kemudian dibagi menjadi dua kolom kapiler dengan fasa diam yang berbeda . Efluen dari setiap kolom
terhubung ke detektor ionisasi nyala ( FID ) untuk tujuan kuantifikasi .
Korespondensi analit dan waktu retensi standar internal pada dua kolom dan analit dan rasio luas
puncak standar internal digunakan untuk penentuan kualitatif dan kuantitatif kadar alkohol dalam
darah .
Teknologi autosampler digunakan dalam penelitian ini memungkinkan berjalan terus menerus dan
otomatis analisis alkohol darah karena sistem tingginya jumlah posisi sampel . Sampai dengan 300
sampel dapat diambil dan dijalankan secara berurutan , yang memungkinkan sekitar 20 jam operasi
terus-menerus dalam aplikasi khusus ini .
eksperimental
Sebuah kromatografi gas ( GC TRACE 1310 , Thermo Fisher Scientific ) dilengkapi dengan digital
kontrol aliran elektronik dan Jumlah besar ganda dengan respon yang cepat . The kromatografi gas ,
meskipun ukuran bangku kecil , dilengkapi oven GC mampu menampung beberapa kolom kapiler
untuk analisis konfirmasi dan memberikan analisis cepat alkohol dalam sampel darah dengan injeksi
headspace . Hal ini dikombinasikan dengan autosampler ( TriPlus RSH Autosampler , Thermo Fisher
Scientific ) , menggunakan suhu tinggi teknik injeksi jarum suntik gas ketat tahan untuk injeksi
headspace langsung.
Instrumen Pengaturan Parameter
GC instrumen dikonfigurasi dengan pra kolom ( 0,32 mm lD , 30 cm ) dan dua kolom ( TraceGOLD
TG - ALC1 26074-3390 30m x 0.32mm x 1.80m dan TraceGOLD TG - ALC2 26073-2260 30m x
0.32mm x 1.20m ) untuk analisis konfirmasi ke ganda Jumlah besar ( Gambar 1 ) .
Gambar 1 : Ganda kolom / FID analisis alkohol dalam darah ganda oleh headspace .
Sampel ditempatkan ke dalam botol 20 ml untuk analisis oleh headspace bersama-sama dengan larutan
alkohol n - propil ( digunakan sebagai standar internal) . Kemudian , 1,0 ml headspace telah dihapus
oleh autosampler dari botol dengan jarum suntik gas - ketat dan disuntikkan ke dalam GC
perpecahan / pisah injector dengan 1,2 mm kapal ID . Pengumpulan data dilakukan dengan
menggunakan Kromatografi Data System , ( Chromeleon , Thermo Fisher Scientific ) . Parameter
pengaturan instrumen tercantum di bawah ini .
kondisi GC
Oven suhu : 40 C isotermal ( 3.5min )
SSL injektor : 220 C , split, aliran dibagi 80 ml / menit
Operator : tekanan konstan , 80 kPa
FID : 230 C , H2 aliran = 35 ml / menit ,
udara = 350 ml / menit , make-up = 30 ml / menit
autosampler
Suhu Agitator : 80 C
Suhu jarum suntik : 110 C
Waktu inkubasi 10 menit
Injeksi kecepatan : 60 ml / menit
hasil
Dua kolom kapiler menunjukkan resolusi yang sangat baik untuk semua analit tanpa distorsi bentuk
puncak ( Gambar 2 ) . Para Jumlah besar menunjukkan lebih dari linearitas dan sensitivitas yang
memadai , angka 3 dan 4 menunjukkan hasil kalibrasi pada rentang konsentrasi 0,01-0,10 g / dL untuk
ALC1 dan ALC2 masing-masing. Deteksi batas < 0,005 g / dL yang mudah dicapai dan kosong berlari
setelah g / dL standar 0.3 menunjukkan terdeteksi non carry-over .
Gambar 2 : alkohol kontrol standar resolusi campuran darah .
Gambar 3 : Hasil Kalibrasi pada rentang konsentrasi 0,01-0,10 g / dL .
Gambar 4 : Hasil Kalibrasi pada rentang konsentrasi 0,01-0,10 g / dL .
Tes Reproduktifitas dijalankan pada sampel yang mengandung etanol pada konsentrasi 0,05 g / dL
darah. Hasilnya ditunjukkan di bawah :
Gambar 1 : Hasil tes Reproducibility .
kesimpulan
Menggabungkan instrumen GC dengan headspace autosampel telah terbukti untuk menawarkan alat
yang handal untuk analisis alkohol dalam darah . Analisis konfirmasi dicapai dalam rentang
konsentrasi biasanya diselidiki dengan linearitas yang sangat baik dan reproduktifitas . Tingginya
jumlah sampel yang dapat secara bersamaan dimuat pada baki sampel ( hingga 300 , selama 20 jam
operasi tanpa pengawasan ) dan kromatografi gas ketahanan dan kemudahan penggunaan secara
signifikan diperpanjang throughput laboratorium keseluruhan ketika menjalankan aplikasi ini .
The TOXI-LAB AB System is a unique and rapid thin-layer chromatographic system designed for
broad spectrum drug detection and confirmation. Its procedure consists of simple steps using specially
modified reagents, materials, standards, and procedures. These special products significantly speed up
the analysis and make results far more reproducible. The initial TOXI-LAB AB System comes with
hardware and supplies to perform both TOXI-LAB A (100 tests for organic base and neutral drugs)
and TOXI-LAB B (100 tests for barbiturates and some other acidic/neutral drugs).
The Toxi-LAB AB System adalah sistem kromatografi lapis tipis yang unik dan cepat dirancang untuk
mendeteksi obat spektrum luas dan konfirmasi. Prosedurnya terdiri dari langkah-langkah sederhana
menggunakan reagen dimodifikasi khusus, bahan, standar, dan prosedur. Produk-produk khusus secara
signifikan mempercepat analisis dan membuat hasil yang jauh lebih direproduksi. Awal Toxi-LAB AB
Sistem dilengkapi dengan hardware dan perlengkapan untuk melakukan kedua Toxi-LAB A (100 tes
untuk basa organik dan obat-obatan netral) dan Toxi-LAB B (100 tes untuk barbiturat dan beberapa
obat asam / netral).
TOKSIKOLOGI FORENSIK ADALAH PENERAPAN PRINSIP ILMIAH DARI TOKSIKOLOGI

DAN KIMIA ANALISIS UNTUK MASALAH HUKUM . RML MEMBERIKAN ANALITIS
( PENGUJIAN ) LAYANAN , KONSULTASI AHLI , & KESAKSIAN . KAMI MENGGUNAKAN
GC / MS , HPLC / MS / MS , DAN METODE MODERN LAINNYA ANALISIS . KAMI JUGA
PENAWARAN mikroskop INFRARED DAN mikroskop elektron UNTUK IDENTIFIKASI
PARTIKEL KECIL . Obat tertentu yang menarik untuk analisis termasuk fentanyl , LSD , kokain ,
heroin metabolit ( 6 - MAM ) , methamphetamine , THC , opiat , PCP , cyclobenzaprine , dan obatobatan psikoaktif lainnya .
RML disertifikasi , diperiksa , dan / atau dilisensikan oleh Departemen Kesehatan Masyarakat
Colorado dan Lingkungan , Administrasi Keuangan Kesehatan ( Program laboratorium federal ) , dan
FDA . Kami juga berpartisipasi dalam College of Patolog Amerika program uji profisiensi untuk obat
dalam darah dan urin dan darah untuk alkohol .
Modern analitis pengujian instrumentasi , termasuk kromatografi gas dan spektrometri massa , dapat
digunakan untuk membuktikan atau menyangkal ada atau tidak adanya obat-obatan dan racun lain dan
kemungkinan efek dari zat tersebut . Namun, jika teknologi yang baik disalahgunakan oleh pekerja
tidak terampil , hasil yang salah dapat diperoleh . Oleh karena itu, fokus utama dari RML untuk
memberikan pengujian kualitas tertinggi dan interpretasi dengan kemampuan untuk meneliti pekerjaan
laboratorium dan evaluasi dari orang lain . Hanya karena laboratorium telah membeli kromatografi gas
- spektrometer massa , HPLC - spektrometer massa tandem atau instrumentasi modern lainnya tidak
berarti bahwa pengguna memiliki petunjuk mengenai metode yang benar untuk mendapatkan hasil
yang valid . Kami menjaga semua data elektronik.
Dr Sulik , dan Dr Lantz memiliki pengalaman panjang dalam litigasi perdata dan pidana sebagai ahli
ilmiah. Karena kita memiliki teknologi paling modern, dan tahu bagaimana memanfaatkannya secara
optimal , kita sering dapat membantu klien yang mungkin sebaliknya tidak dapat memperoleh hasil
yang adil. Kami bekerja untuk kedua penuntutan dan pertahanan dalam kasus pidana dan kedua
penggugat dan tergugat dalam litigasi sipil. Ini adalah keyakinan kita bahwa " ilmu adalah ilmu " dan
selalu objektif. RML dilisensikan dan diperiksa oleh US Department of Health and Human Services,
US Food and Drug Administration ( FDA ) , dan Departemen Kesehatan Masyarakat Colorado dan
Lingkungan .
Jika kita mungkin bantuan dalam analisis zat yang sah atau terlarang , seperti methamphetamine ,
flunitrazepam ( " roofies " ) , kokain , cotinine , LSD , alkohol , fentanil , GHB , GBL , MDMA
( ekstasi ) , SPICE ( JWH - 018 ) , dan ganja , silahkan hubungi kami . Kami memberikan bantuan
ilmiah ahli dalam kasus yang melibatkan mengemudi di bawah pengaruh alkohol atau obat lain ( DUI
dan DUID ) . Sebagai contoh , kita dapat menduga jumlah THC dalam darah sebagai indikator tingkat
keracunan dari seorang sopir yang telah menggunakan ganja . Hal ini penting , karena merupakan
konsentrasi obat di dalam darah , tidak dalam urin , yang penting dalam setiap penentuan keracunan .
Ada sejumlah besar buruk forensik dan pekerjaan laboratorium dilewatkan seolah-olah itu ilmu
pengetahuan. Ini sering kali berisi interpretasi berlebihan ganja metabolit ( THC - COOH ) konsentrasi
urin .
Cannabis :
Sebuah penyalahgunaan umum dari ganja metabolit ( THC - COOH ) analisis dalam interpretasi
perubahan konsentrasi yang metabolit . Setelah penggunaan jangka panjang dari ganja , lemak tubuh
mengandung sejumlah besar THC . Kemudian perlahan-lahan larut dari lemak , ke dalam darah ,
kemudian ke hati, di mana waktunya akan diubah ke THC - COOH . THC - COOH kemudian
diekskresikan ke dalam urin . Hal ini menyebabkan penurunan konsentrasi THC - COOH dalam urin .
Dalam sebuah studi besar oleh Angkatan Laut Amerika Serikat , ditemukan bahwa ia dapat mengambil
dua bulan setelah terakhir kali menggunakan ganja untuk urin untuk menjadi " negatif " untuk THC COOH . Selama dua minggu terakhir atau lebih , itu cukup masuk akal untuk mengharapkan bahwa
urin akan bergantian antara " positif " dan negatif . " Artinya, bahwa konsentrasi akan sedikit di atas ,
kemudian sedikit di bawah nilai cut-off . Hal ini disebabkan efek metabolisme normal , seperti kondisi
subjek hidrasi dan penurunan berat badan . Hal ini juga karena definisi " positif " dan " negatif. " Jika
sampel urin ditemukan mengandung bahkan 1ng/mL kurang dari tingkat cutoff , itu disebut menjadi
"negatif . " Jika 1ng/mL lebih besar dari tingkat cutoff , itu disebut " positif . " Perhatikan bahwa
dengan instrumentasi modern, seperti HPLC / MS / MS , sangat mungkin untuk mendeteksi kurang
dari 1NG / mL THC - COOH . Oleh karena itu , waktu untuk deteksi setelah penggunaan terakhir
mungkin lebih besar daripada yang ditemukan dalam studi Angkatan Laut , yang menggunakan
konsentrasi yang lebih tinggi untuk tingkat cut-off .
Analisis lain yang kami tawarkan adalah bahwa untuk komponen aktif dalam ganja , THC , dan
metabolit aktif , THC - OH . Ini adalah absen dari urin lebih dari 5-6 jam setelah penggunaan terakhir
dari ganja . Oleh karena itu , ketidakhadiran mereka adalah bukti dari kurangnya penggunaan efektif
terakhir. Kami menawarkan analisis LC / MS / MS dari tiga cannabinoids forensik penting , THC ,
THC - OH , THC - COOH . Batas deteksi untuk tiga cannabinoids kepentingan forensik , THC , THC
- OH , dan THC - COOH kurang dari 500pg/mL .
Sulit untuk membangun hubungan yang baik antara konsentrasi THC dan efek pada subjek ( 1 ) .
kanabinoid buatan
Dalam beberapa tahun terakhir , banyak senyawa THC -seperti menarik telah diciptakan . Ilmu dan
farmakologi dari mereka belum dipahami dengan baik . Kami sekarang menawarkan analisis
LCMSMS untuk mendeteksi penggunaan beberapa dari seri JWH senyawa dan lainnya " cannabinoids
sintetis . "
Sebuah publikasi terbaru ( 2 ) memberikan review yang baik tentang apa yang diketahui tentang
cannabinoid sintetis dan ganja alternatif lainnya .
TOPIK TOKSIKOLOGI LAIN

Baru-baru ini , kami telah menemukan beberapa kasus hasil positif palsu dari 6 - MAM , heroin
metabolit , pada orang yang memakai resep Suboxone ( buprenorfin dan nalokson ) . Para
laboratorium lain bingung nalokson dan 6 - MAM , mungkin karena mereka memiliki massa molekul
yang sama . Ini adalah contoh yang sangat baik mengapa semua hasil tes harus dikonfirmasi .
Kami juga menyediakan analisis rambut untuk kehadiran obat . Kami menggunakan enzim
immunoassay ( EIA ) atau radioimmunoassay ( RIA ) untuk tes skrining , dan HPLC / MS / MS dan
GC / MS atau GC / MS / MS untuk pengujian konfirmasi .
ANALISIS KURANG - UMUM DITAWARKAN OLEH ROCKY MOUNTAIN LABORATORIUM

INSTRUMENTAL :
THC dalam darah dan urin ( THC adalah senyawa aktif , bukan metabolit ) dengan HPLC / MS /
MS
THC - OH dalam darah dan urin ( THC - OH adalah metabolit aktif) dengan HPLC / MS / MS
( lihat di atas ) .
Flunitrazepam ( FNP ) dan metabolit dalam darah dan urin ( " roofies " Rohypnol ) dengan HPLC /
MS / MS . Kami telah menemukan bahwa metabolit FNP yang terdeteksi selama beberapa hari setelah
dosis terakhir , meskipun tidak mungkin untuk menemukan molekul FNP induk yang lama setelah
dosis .
GHB dan GBL dalam darah , urin , dan makanan . ( gamma - butryolactone dan gamma - hidroksi
butirat asam ) Obat baru pilihan untuk beberapa " ravers " adalah 1,4- butanadiol , yang juga dapat
dideteksi dan diidentifikasi dengan GC / MS .
Tryptamines terdiri kelas lain dari obat yang cukup populer di antara mereka dalam 16-28 tahun
rentang usia . Mereka adalah , pada dasarnya, LSD generasi ini . Mereka menyebabkan halusinasi dan
kehilangan memori . Kelompok ini mencakup 2 - CE , 2 - CI , dan bahan sejenisnya .
Clonazepam dan benzodiazepin lainnya dan metabolitnya dalam darah dan urin .
Ketamine dalam darah dan urin ( " Special K " ) . Kami telah melihat peningkatan penggunaan
gelap K baru-baru ini . Hal ini dapat dideteksi dalam darah dan urin . Namun, waktu deteksi agak
terbatas , sehingga sampel harus dikumpulkan dari korban secepatnya .
LSD dalam urin dan darah ( konfirmasi spektrometri massa ) . Kisaran kuantitatif kami adalah
20pg/ml untuk 5000pg/mL dalam darah dan urin .
Fentanil dan analog dalam urin dan darah dengan HPLC / MS / MS . Batas deteksi 20pg/mL atau
kurang .
Cotinine dengan HPLC / MS / MS dalam urin . Cotinine adalah metabolit utama nikotin . Metode
ini sangat sensitif , dan berguna dalam diferensiasi pasif dari inhalasi aktif nikotin .
Chantix ( Varenicline ) , agen berhenti merokok , dapat diidentifikasi dan secara kuantitatif dalam
cairan tubuh dan jaringan .
HCG ( Human Chorionic Gonadotrophin ) dapat digunakan oleh tubuh - pembangun . Ini zat yang
dikendalikan , dan dapat diidentifikasi oleh LCMSMS .
Link Berguna : Masyarakat Ahli toksikologi forensik ( LEMBUT ) , NIDA ( National Institute on
Drug Abuse ) DUI - HUKUM , Kim Kruglik ( CA Hukuman Mati pengacara dengan situs web yang
sangat baik) , TopgunDUI ( DUI Informasi ) , DUICenter ( Lawrence Taylor , atty . ) The Lindesmith
Pusat dan link di dalamnya , Pengakuan Pengakuan ( DRE ) organisasi Obat dan link , The Sukarela
Komite pengacara ( VCL ) , DUI pengacara , dan National Association of pengacara Pertahanan
Pidana ( NACDL ) . Halaman rumah kami memiliki banyak situs yang lebih forensik yang menarik .
Asosiasi Ahli biokimia Klinis memiliki situs yang sangat berguna dengan daftar panjang informasi
tentang banyak obat ( ACB ) . The Forensic Science Society memiliki bagian-bagian dari publikasi
baik online mereka . Kerja Kelompok Ilmiah Obat juga memiliki informasi yang berguna .
Lain halaman RML berguna: Serologi Forensik dan Analisis Residu tembak , Analisis Puing
Kebakaran ( residu obat pada adegan api ) , dan RML Home Page. Informasi yang berguna tentang
tanaman beracun dapat ditemukan di situs Universitas Cornell . Juga mempertimbangkan beberapa
link lainnya di bagian kimia halaman rumah kami .

Ferafera

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Ferafera

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Teknik kromatografi gas headspace statis memiliki penerimaan yang besar dalam forensic lapangan,

terutama untuk penentuan etanol dalam sampel biologis ( Macchia et al , 1995 . ;

Dimana A adalah luas puncak kromatografi diperoleh untuk analit , CG adalah

www.intechopen.comGas Chromatography dalam Plant Science ,

pembentukan methemoglobin dan sulfhemoglobin , cara ini mencegah penentuan

TOKSIKOLOGI FORENSIK ADALAH PENERAPAN PRINSIP ILMIAH DARI TOKSIKOLOGI

TOPIK TOKSIKOLOGI LAIN

ANALISIS KURANG - UMUM DITAWARKAN OLEH ROCKY MOUNTAIN LABORATORIUM

Anda mungkin juga menyukai