PRAKTIKUM I Pemisahan Serum/Plasma Dari Sel Darah, Pencucian Sel Darah Merah Pekat dan Pembuatan Suspensi Sel

Darah Merah (Suspensi Sel Darah Merah : 5%, 10%, dan 40%) I. 1. 2. 3. Tujuan Praktikum Untuk dapat memisahkan serum/plasma dari sel darah merah untuk mendapatkan plasma/serum yang bebas dari sel darah merah. Untuk dapat memperoleh sel darah merah pekat yang dicuci, dan yang bebas dari protein/globulin. Untuk dapat membuat kepekatan sel darah menjadi enceran tertentu guna mengoptimalkan reaksi antigen pada sel darah merah terhadap antibodi. II. Prinsip 1. Pemisahan Serum/Plasma dan Sel Darah Darah beku atau darah dengan antikoagulan dicentrifugasi dengan kecepatan 3000-3400 rpm selama 1,5-2 menit maka akan terjadi pemisahan antara plasma/serum dan sel darah. 2. Pencucian Sel Darah Merah Pekat Dengan penambahan buffer saline (larutan NaCl 0,9%) dan sentrifugasi maka antibodi disekitar sel darah merah akan hilang. 3. Pembuatan Suspensi Sel Darah Merah (Suspensi Sel Darah Merah : 5%, 10%, dan 40%) Sel darah diencerkan dengan penambahan larutan saline dengan perbandingan tertentu hingga terbentuk suspensi sel darah. III. Metode Metode yang digunakan dalam praktikum pemisahan serum/plasma dari sel darah merah dan pencucian sel darah merah pekat adalah metode tube test dengan centrifugasi. Sedangkan metode yang digunakan dalam praktikum pembuatan suspense sel darah merah adalah metode Tube Test.

IV. V.

DASAR TEORI ALAT DAN BAHAN 5.1 ALAT 1. Tabung reaksi 2. Pipet Pasteur 3. Centrifuge 4. Rak tabung reaksi 5. Labu semprot 5.2 BAHAN 1. Darah tanpa anti koagulan/dengan koagulan. 2. NaCl 0,9% 3. Aquadest 4. Label 5. Tisue

VI. Cara Kerja A. Pemisahan Serum/Plasma dan Sel Darah 1. Alat dan bahan disiapkan 2. Darah dimasukkan ke dalam tabung yang telah diberi tanda sesuai dengan sampel 3. Darah disentrifugasi pada kecepatan 3000-3400 rpm selama 90 120 detik 4. Serum/plasma yang jernih dipisahkan dari sel darah merah kedalam tabung lain yang sudah diberi tanda sesuai dengan sampel.

B. Pencucian Sel Darah Merah Pekat 1. Tabung reaksi ukuran 12 x 75 mm disiapkan. 2. Sel darah merah pekat diteteslkan ke dalam tabung sebanyak 8 tetes (atau 1 mL) 3. Larutan saline 0,9% ditambahkan ke dalam tabung sebanyak 4mL 4,5mL (3/4 tabung) 4. Cairan di dalam tabung dikocok-kocok dengan pipet pasteur hingga mtercampur rata 5. Tabung disentrifuge pada kecepatan 3000 rpm selama 1 menit 3 menit.

6. Supernatan dibuang dengan menggunakan pipet pasteur, hingga sel darah merah menjadi pekat (100%). 7. Langkah 1-6 diulangi hingga 3 kali. C. Pembuatan Suspensi Sel Darah Merah (Suspensi Sel Darah Merah :, 5%, 10%, dan 40%) 1. Pembuatan Suspensi Sel Darah Merah 5% a) 1 buah tabung reaksi disiapkan b) NaCl 0,9% diteteskab sebanyak 95 tetes c) Sel darah merah pekat yang sudah dicuci (100%) diteteskan sebanyak 5 tetes d) Cairan di dalam tabung dikocok dengan pipet pasteur 2. Pembuatan Suspensi Sel Darah Merah 10% a) 1 buah tabung reaksi disiapkan b) NaCl 0,9% diteteskab sebanyak 90 tetes c) Sel darah merah pekat yang sudah dicuci (100%) diteteskan sebanyak 10 tetes d) Cairan di dalam tabung dikocok dengan pipet pasteur 3. Pembuatan Suspensi Sel Darah Merah 40% a) 1 buah tabung reaksi disiapkan b) NaCl 0,9% diteteskab sebanyak 60 tetes c) Sel darah merah pekat yang sudah dicuci (100%) diteteskan sebanyak 40 tetes d) Cairan di dalam tabung dikocok dengan pipet pasteur